CN102558257B

CN102558257B - 新穿心莲内酯的分离纯化方法

Info

Publication number: CN102558257B
Application number: CN201110437216.0A
Authority: CN
Inventors: 韦小兰; 陆兴国
Original assignee: LIUZHOU GREENSKY NATURAL INGREDIENTS CO Ltd
Current assignee: LIUZHOU GREENSKY NATURAL INGREDIENTS CO Ltd
Priority date: 2011-12-23
Filing date: 2011-12-23
Publication date: 2014-06-18
Anticipated expiration: 2031-12-23
Also published as: CN102558257A

Abstract

本发明涉及一种新穿心莲内酯的分离纯化方法。该方法是采用酒精溶解穿心莲提取物，使用活性炭除杂，再用钛棒过滤去除活性炭，收集滤液，将滤液上柱经柱子交换吸附除杂，柱子填充物料为大孔吸附树脂或硅胶，洗脱后收集洗脱液，洗脱液通过两次浓缩结晶得到新穿心莲内酯结晶。本发明能够分离出重量含量95%以上高含量的新穿心莲内酯，可实施性强，可以实现工业化批量生产；本发明在分离新穿心莲内酯的过程中，仅使用食用酒精一种溶剂，未使用任何有毒的溶剂，不仅提高了产品的安全性，使得生产操作更安全，而且不会产生有毒废液，有利于环境保护。

Description

新穿心莲内酯的分离纯化方法

技术领域

本发明涉及一种新穿心莲内酯的分离纯化方法。

背景技术

新穿心莲内酯又名穿心莲丙素，新穿心莲素，穿心莲新甙。是从爵科植物穿心莲叶中分离出的二萜内酯类化合物。现代药理学表明新穿心莲内酯具有清热解毒，消肿止痛之功效。动物实验证明新穿心莲内酯具有抑制和延缓肺炎双球菌和溶血性乙型链球菌引起的体温升高的作用，亦具止咳平喘作用。适用于急性细菌性痢疾，急性胃肠炎，上呼吸道感染，急性扁桃发炎。有研究表明新穿心莲内酯对中暑的预防和防治具有积极的作用。新穿心莲内酯在临床上对细菌性痢疾的疗效较氯霉素与痢特灵为优，且无副作用和毒性。由于穿心莲药材中新穿心莲内酯的含量较少，目前穿心莲的深加工和开发利用主要是针对穿心莲内酯。随着研究的不断深入，高纯度的新穿心莲内酯的分离，必将拓展中药穿心莲在临床的应用。

新穿心莲内酯分子结构：

Figure 2011104372160100002DEST_PATH_IMAGE001

。

穿心莲原料中，主要含有穿心莲内酯，新穿心莲内酯，去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，其中穿心莲内酯含量最高，其次是新穿心莲内酯。新穿心莲内酯由于含量低，难与穿心莲内酯分离，因此研究较少。现有的新穿心莲内酯分离纯化方法大部分只停留在实验阶段，不能够有效分离提纯新穿心莲内酯，所得产物有效成分含量低，不能实现批量化的工业生产。目前公开的专利文献中，中国专利申请号2009101154260，名称为《穿心莲总内酯与新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的生产工艺》发明专利申请，公开了新穿心莲内酯的一种生产工艺，其是先制备穿心莲总内酯，再从穿心莲总内酯中分离得到新穿心莲内酯。这种分离过程中，需要使用到三氯甲烷和丙酮等有毒的有机溶剂，不仅降低了产品的安全性，对生产工人的健康不利，而且产生的废液会污染环境，不利于环境保护。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种能够分离出重量含量95%以上高含量的新穿心莲内酯，可实施性强，可以实现工业化批量生产的新穿心莲内酯的分离纯化方法，该方法在整个分离纯化过程中，仅使用食用酒精一种溶剂，未使用其他任何有毒的溶剂，具有产品安全性高和生产操作更安全等优点，解决了上述现有技术中存在的问题。

解决上述技术问题的技术方案是：一种新穿心莲内酯的分离纯化方法，该方法包括以下步骤：

1）称量：称取穿心莲提取物；

2）酒精溶解：按1g穿心莲提取物加入25～35ml酒精计加入95%（体积）酒精，加热搅拌使穿心莲提取物溶解得到溶解液，加热温度为55～65℃；

3）活性炭除杂：加入穿心莲提取物重量1.5～2.5%的90～100目活性炭对步骤2）得到的溶解液进行吸附脱色除杂，除杂过程不断搅拌，温度控制在55～65℃，除杂时间为1～2小时；

4）过滤活性炭：用钛棒过滤器去除活性炭，收集滤液；

5）滤液上柱：步骤4）得到的滤液经柱子交换吸附除杂，柱子填充物料为大孔吸附树脂或硅胶；

6）洗脱：先用纯净水洗脱大孔吸附树脂或硅胶至流出液清亮为止，再用1.5～2.5倍柱体积的90%（体积）酒精进行洗脱，洗脱过程用硅胶薄层层析与穿心莲内酯、新穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，操作方法：点样于硅胶薄层板上，以氯仿：甲醇体积比为1：2为展开剂，展开，取出晾干后，置碘蒸汽显色，按照硅胶薄层层析的结果收集富含穿心莲内酯和新穿心莲内酯的洗脱液；

7）第一次浓缩结晶：将步骤6）得到的富含穿心莲内酯和新穿心莲内酯洗脱液在真空条件下浓缩至洗脱液初始体积的45～55%，真空度控制在0.06～0.08MPa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体A；

8）酒精溶解晶体A：按1g晶体A加入25～35ml酒精计，加入95%（体积）酒精加热溶解晶体A，得到溶解液，加热温度为55～65℃；

9）第二次浓缩结晶：在真空度为0.06～0.08MPa，温度为45～55℃的条件下将步骤8）得到的溶解液浓缩至溶解液初始体积的60～70%，静置，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得柱状结晶，即为新穿心莲内酯结晶。

本发明的进一步技术方案是：步骤7）抽滤得晶体A后，将母液在真空条件下浓缩至母液初始体积的45～55%，真空度控制在0.06～0.08MPa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体B，晶体B为穿心莲内酯结晶。

步骤6）中，用90%（体积）酒精进行洗脱后，再用1.5～2.5倍柱体积70%（体积）酒精进行洗脱，洗脱过程用硅胶薄层层析与脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，操作方法：点样于硅胶薄层板上，以氯仿：甲醇体积比为1：2为展开剂，展开，取出晾干后，置碘蒸汽显色，按照硅胶薄层层析的结果收集富含脱水穿心莲内酯的洗脱液；再将洗脱液在真空条件下浓缩得到浓缩液，真空度控制在0.07～0.08Mpa，温度控制在45～55℃；得到的浓缩液体积与步骤1）称取的穿心莲提取物重量比为：5～6ml：1g；再将浓缩液静置22～26小时，自然冷却析出晶体，待晶体析出完全后，抽滤结晶液所得的晶体即为脱水穿心莲内酯晶体。

步骤1）所述的穿心莲提取物中穿心莲总内酯的重量含量为50%以上。

本发明之新穿心莲内酯的分离纯化方法由于采用上述工艺步骤，具有以下有益效果：

1、本发明能够分离出重量含量95%以上高含量的新穿心莲内酯，且本发明工艺操作简单，可实施性强，可以实现工业化批量生产。

2、本发明在分离新穿心莲内酯的过程中，仅使用食用酒精一种溶剂，未使用其他任何有毒的溶剂（如甲醇、丙酮、氯仿），不仅提高了产品的安全性，使得生产操作更安全，有利于保护生产工人的健康，而且不会产生有毒废液，有利于环境保护。

3、本发明使用钛棒过滤活性炭，钛棒具有强度高，耐压能力强（不易脱落），结构均匀、孔隙率高、过滤阻力小、渗透性好；耐腐蚀能力强（在水和药液中无锈蚀）；使用寿命长（为一般膜滤芯的几倍）；硬度高，反冲洗容易（易实现在线冲洗）的优点。使用钛棒能够过滤掉100％的活性炭，低温过滤还可以过滤一些胶体杂质。

4、本发明不仅能够分离纯化得到重量含量95%以上高含量的新穿心莲内酯，同时可以制备重量含量在98%以上的高含量穿心莲内酯和重量含量在50～70%的脱水穿心莲内酯。

下面，结合附图和实施例对本发明之新穿心莲内酯的分离纯化方法的技术特征作进一步的说明。

附图说明

图1：本发明之新穿心莲内酯的分离纯化方法工艺流程图。

具体实施方式

实施例1：一种新穿心莲内酯的分离纯化方法，包括以下步骤：

1）称量：称取2kg穿心莲提取物。

2）酒精溶解：加入60000ml95%（体积）酒精，加热搅拌使穿心莲提取物溶解得到溶解液，加热温度为55～65℃。

3）活性炭除杂：加入30～50g 100目活性炭对步骤2）得到的溶解液进行吸附脱色除杂，除杂过程不断搅拌，温度控制在60℃，除杂时间为1.5小时。

4）过滤活性炭：用钛棒过滤器过滤去除活性炭，收集滤液。

5）滤液上柱：步骤4）得到的滤液经柱子交换吸附除杂，柱子填充物料为ADS-8大孔吸附树脂，流出液丢弃。

6）洗脱：先用纯净水洗脱树脂至流出液清亮为止，再用分别用2倍柱体积的90%（体积）酒精和2倍柱体积的70%（体积）酒精进行洗脱，90%酒精洗脱液主要含穿心莲内酯和新穿心莲内酯，70%酒精洗脱液主要含脱水穿心莲内酯。洗脱过程用硅胶薄层层析检测穿心莲内酯、新穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的存在，即洗脱过程用硅胶薄层层析与穿心莲内酯、新穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，操作方法：点样于硅胶薄层板上，以氯仿：甲醇体积比为1：2为展开剂，展开，取出晾干后，置碘蒸汽显色，按照硅胶薄层层析的结果收集富含穿心莲内酯和新穿心莲内酯的洗脱液及富含脱水穿心莲内酯的洗脱液。

7）第一次浓缩结晶：将步骤6）得到的60000ml富含穿心莲内酯和新穿心莲内酯洗脱液在真空条件下浓缩至30000ml，浓缩过程真空度控制在0.06～0.08Mpa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体A，晶体A中新穿心莲内酯重量含量在50%以上；将29000ml母液在真空条件下浓缩至15000ml，浓缩过程真空度控制在0.06～0.08Mpa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体B，晶体B为穿心莲内酯结晶，穿心莲内酯的重量含量在98%以上。

8）酒精溶解晶体A：用6000ml95%（体积）酒精加热溶解晶体A200g，加热温度为60℃，得到溶解液。

9）第二次浓缩结晶：在真空度为0.06～0.08Mpa，温度为45～55℃的条件下将步骤8）得到的6000ml溶解液浓缩至4000 ml，静置，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得柱状结晶，即为新穿心莲内酯结晶，新穿心莲内酯重量含量在95%以上。

10）浓缩结晶制备脱水穿心莲内酯：将步骤6）得到的富含脱水穿心莲内酯的洗脱液在真空条件下浓缩至10000ml，真空度控制在0.07～0.08Mpa，温度控制在45～55℃；再将浓缩液静置24小时，自然冷却析出晶体，待晶体析出完全后，抽滤结晶液所得的晶体即为脱水穿心莲内酯晶体，脱水穿心莲内酯的重量含量为50～70%。

本发明所述的穿心莲提取物可以直接从市场上购买，所述的穿心莲提取物中一般要求穿心莲总内酯的重量含量达到50%以上。本发明所述的酒精浓度均是指酒精的体积比浓度。

作为本实施例的一种变换，所述的步骤5）滤液上柱中，所述的柱子填充物料除了采用ADS-8大孔吸附树脂外，还可以采用其他类型的大孔吸附树脂或硅胶。

本发明制备得到的新穿心莲内酯含量采用以下方法测定：

仪器：SSI高效液相色谱仪，seriesIII输送泵，model201+紫外-可见检测器。

试剂：分析色谱纯甲醇，纯净水。

色谱柱：大连伊利特色谱柱（250×4.6mm，5um）。

流动相：甲醇－水75：25，检测波长220nm，流速1.0ml/min。

对照品：新穿心莲内酯对照品。

对照品的制备：精密称取约10mg的新穿心莲内酯对照品于25ml的容量瓶中，用分析纯甲醇定溶至刻度，超声溶解后吸取5ml于25ml的容量瓶中，定溶至刻度。用0.45um过滤头过滤，分别吸取滤液2，4，6，8，10ul进样，记录峰面积，绘制标准曲线。

样品溶液的制备：精密称取约10mg的新穿心莲内酯样品于25ml的容量瓶中，用分析纯甲醇定溶至刻度，超声溶解后吸取5ml于25ml的容量瓶中，定溶至刻度。

本发明实施例1得到的新穿心莲内酯重复检测试验测定结果如下：

检测次数	1	2	3
				重量含量（%）	97.6	97.8	98.5

Claims

1.一种新穿心莲内酯的分离纯化方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

1）称量：称取穿心莲提取物；

4）过滤活性炭：用钛棒过滤器去除活性炭，收集滤液；

7）第一次浓缩结晶：将步骤6）得到的富含穿心莲内酯和新穿心莲内酯洗脱液在真空条件下浓缩至洗脱液初始体积的45～55%，真空度控制在0.06～0.08MPa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体A；抽滤得晶体A后，将母液在真空条件下浓缩至母液初始体积的45～55%，真空度控制在0.06～0.08MPa，温度控制在45～55℃；静置浓缩液，自然冷却结晶，待有晶体析出后抽滤得晶体B，晶体B为穿心莲内酯结晶；

2.根据权利要求1所述的新穿心莲内酯的分离纯化方法，其特征在于：步骤6）中，用90%（体积）酒精进行洗脱后，再用1.5～2.5倍柱体积70%（体积）酒精进行洗脱，洗脱过程用硅胶薄层层析与脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，操作方法：点样于硅胶薄层板上，以氯仿：甲醇体积比为1：2为展开剂，展开，取出晾干后，置碘蒸汽显色，按照硅胶薄层层析的结果收集富含脱水穿心莲内酯的洗脱液；再将洗脱液在真空条件下浓缩得到浓缩液，真空度控制在0.07～0.08Mpa，温度控制在45～55℃；得到的浓缩液体积与步骤1）称取的穿心莲提取物重量比为：5～6ml：1g；再将浓缩液静置22～26小时，自然冷却析出晶体，待晶体析出完全后，抽滤结晶液所得的晶体即为脱水穿心莲内酯晶体。

3.根据权利要求1或2所述的新穿心莲内酯的分离纯化方法，其特征在于：步骤1）所述的穿心莲提取物中穿心莲总内酯的重量含量为50%以上。