CN101671321A - 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法 - Google Patents

一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101671321A
CN101671321A CN200910185164A CN200910185164A CN101671321A CN 101671321 A CN101671321 A CN 101671321A CN 200910185164 A CN200910185164 A CN 200910185164A CN 200910185164 A CN200910185164 A CN 200910185164A CN 101671321 A CN101671321 A CN 101671321A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solvent
deoxydidehydrorographolide
separating
purifying
crystallization
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200910185164A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101671321B (zh
Inventor
张文成
刘玲
张海涛
郑仁娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hefei University of Technology
Original Assignee
Hefei University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hefei University of Technology filed Critical Hefei University of Technology
Priority to CN2009101851645A priority Critical patent/CN101671321B/zh
Publication of CN101671321A publication Critical patent/CN101671321A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101671321B publication Critical patent/CN101671321B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/54—Improvements relating to the production of bulk chemicals using solvents, e.g. supercritical solvents or ionic liquids

Landscapes

  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法，是一种集成溶剂萃取-柱层析-超临界流体抗溶剂结晶的方法对穿心莲浸膏进行加工制备高纯脱水穿心莲内酯。浸膏先用氯仿萃取；柱层析填料(固定相)采用硅胶等，流动相为石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂；超临界流体CO2抗溶剂结晶纯化，条件为：压力≤15MPa，温度≤65℃。产品纯度达99％以上。该分离纯化工艺，方法简便、成本低、易于工业生产应用。

Description

一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法
一、技术领域
本发明涉及中药有效成分分离纯化方法，确切地说是一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法。
二、背景技术
穿心莲[Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees]为爵床科植物穿心莲的全草或叶。别名：春莲秋柳(《岭南采药录》)、一见喜(《泉州本草》)、榄核莲、苦胆草、斩蛇剑、日行千里、印度草(广东)，苦草(福建)等。原产于印度，我国主产于华南、西南等长江以南温暖、湿润地区。其气味苦、性寒、归大肠、心、肺、膀胱经，具有清热解毒、凉血、消肿。用于感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮，顿咳劳嗽，泄泻痢疾，热淋涩痛，痈肿疮疡，毒蛇咬伤。
穿心莲内酯类化合物主要活性成分有穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯等。还含穿心莲烷，穿心莲酮，穿心莲甾醇，β-谷甾醇-D-葡萄糖甙等。
脱水穿心莲内酯(deoxyandrographolide)，别名：穿心莲丁素、14-deoxy-11，12-didehydroandrographolide，为萜类化合物；易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于苯，几乎不溶于水；无色针状结晶(30％或50％乙醇)；熔点：204℃；分子式：C20H28O4；分子量：332.42。有以下化学结构式：
Figure G2009101851645D00011
脱水穿心莲内酯具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。抗肿瘤，利胆保肝，抗蛇毒及毒蕈碱样作用；并有终止妊娠等作用。
鉴于脱水穿心莲内酯有上述专属性功效，有必要进行分离纯化，为中药新药开发提供优质原料。而国内对穿心莲内酯类化合物提取分离研究比较早，也比较多。早期主要以水浸提、乙醇提取、碱水提取为主，得到的产品为粗提物(穿心莲总内酯含量在30％左右)。
关于脱水穿心莲内酯提取分离方法的申请发明专利有2件：
(1)CN1962650A(申请号200610032546.0，《一种高纯度脱水穿心莲内酯的制备方法》)：该发明是一穿心莲全草为原料，采用乙醇进行热浸提，再上大孔树脂进行吸附分离，用不同浓度乙醇溶液梯度洗脱，再上硅胶柱色谱分离，采用氯仿与甲醇的混合液进行洗脱，收集目标物质，再采用乙醇进行重结晶。该方法涉及两次不同的层析分离，存在脱除产品中树脂残留物和有害溶剂的难题。
(2)CN101168537A(申请号200710142800.7，《同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法》)：该发明是一穿心莲全草为原料，采用醇溶剂进行提取，再上大孔树脂进行吸附分离，用不同浓度乙醇溶液梯度洗脱，分别获得较高纯度的目标物质，再进行溶剂重结晶，可获得97％的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯。
目前制备高纯度萜类化合物大都采用有机溶剂反复重结晶方法，其耗时长、得率低，且纯度也难于达到98％以上。
三、发明内容
要发明旨在为开发I类中药新药提供高纯度的原料药脱水穿心莲内酯，所要解决的技术问题是对现有的纯化方法进行改进。
本发明的技术方案是以穿心莲浸膏(穿心莲总内酯含量≥30％)为起始原料，浸膏先经过氯仿进行萃取，脱溶后得到浅黄色的粗晶体，再上色谱柱，接收含量70％以上的脱水穿心莲内酯单体组分，浓缩为饱和溶液后，再进行超临界流体抗溶剂结晶。
所谓的超临界流体抗溶剂结晶，就是以超临界流体为逆溶剂，其与溶质、溶剂形成的溶液相混合，快速带走溶剂和部分杂质使溶液在较短的时间内形成较高的过饱和度，溶质结晶析出，得到纯度高，粒径分布均匀的微粒。一般选CO2为超临界流体。
具体技术方案是：
将穿心莲浸膏溶解于温水中，用氯仿进行萃取，萃取液脱溶后上色谱柱，并用混合溶剂洗脱，接收含量90％以上的脱水穿心莲内酯组分，再进行超临界CO2结晶，通过控制压力、温度、时间进行抗溶剂结晶，经2次抗溶剂结晶后，可制得99％上的脱水穿心莲内酯高纯品。
具体操作步骤是：
(1)首先将穿心莲浸膏溶解到10-20倍体积的30～50℃的温水中，选择氯仿进行溶剂萃取至少2次；
(2)将萃取液合并、脱溶后，进行色谱柱层析分离，分离介质(固定相)选自硅胶等，流动相选自石油醚与乙酸乙酯的混合液，进行分段收集流份，主要收集含量90％以上的目标物质流份；
(3)将上述收集到的流分浓缩成饱和溶液后，进行超临界CO2抗溶剂结晶，控制在压力8～15MPa，温度在40～65℃，时间在45～90min；
(4)停机后收集首次抗溶剂结晶产物，产品纯度达97％左右；
(5)上述结晶产物再配成饱和丙酮溶液，抗溶剂结晶1次，可制得纯度99％以上脱水穿心莲内酯。
本发明为相关企业提供一种集成溶剂萃取-柱层析分离-超临界流体(CO2)抗溶剂结晶纯化的方法，制备纯度达99％以上的脱水穿心莲内酯。超临界CO2抗溶剂结晶不但具有传统的细化微粒的效果，同时具有脱除溶剂和萃取微量杂质等功能，从而达到结晶纯化效果；结晶析出脱水穿心莲内酯的结晶条件要求低，一般压力小于15MPa，温度65℃以下，所析晶体纯度高，可达到99％以上，适合高纯物质的制备。本法工艺简单，无需冷冻干燥或喷雾干燥等复杂耗能工艺。同时其得率也较传统工艺高，脱水穿心莲内酯纯度超过99％，收率≥30％(以浸膏中脱水穿心莲内酯计)，适合批量生产。穿心莲浸膏产品目前市场饱和，价格便宜，运输方便。既可提高分离纯化生产效率，又可降低层析柱的污染。
四、具体实施方式
实施例1：
(1)称取1kg穿心莲浸膏(脱水穿心莲内酯含量10％以上)，按1∶20(W/V)的固液比溶于30℃温水中，再用氯仿萃取2次；
(2)将氯仿萃取溶液合并、真空脱溶得到固体粉末，将粉末转移到硅胶色谱柱中，用石油醚与乙酸乙酯(30％∶70％～60％∶40％，V/V)流动相洗脱，以紫外检测器在线检测定位，收集90％以上的脱水穿心莲内酯流份；
(3)将上述流份合并、浓缩成饱和溶液(至有微量晶体析出)，冷却到40～50℃左右，再放置于超临界CO2结晶釜中，结晶压力控制在9MPa，温度在60℃，进行超临界CO2抗溶剂结晶；
(4)在超临界状态下结晶70min，停机后取出结晶产物，进行含量检测，产品纯度在97％以上；
(5)将上述结晶产物用45℃左右丙酮溶剂配成饱和溶液，再进行超临界状态下抗溶剂结晶；
(6)试验结束后，取样检测，可得到99％以上高纯脱水穿心莲内酯30.3g。
实施例2：
(1)称取1kg穿心莲浸膏(脱水穿心莲内酯含量10％以上)，按1∶15(W/V)的固液比溶于40℃温水中，再用氯仿萃取2次；
(2)将氯仿萃取溶液合并、真空脱溶得到固体粉末，将粉末转移到硅胶色谱柱中，用石油醚与乙酸乙酯(30％∶70％～60％∶40％，V/V)流动相洗脱，以紫外检测器在线检测定位，收集90％以上的脱水穿心莲内酯流份；
(3)将上述流份合并、浓缩成饱和溶液(至有微量晶体析出)，冷却到45℃左右，再放置于超临界CO2结晶釜中，结晶压力控制在15MPa，温度在45℃，进行超临界CO2抗溶剂结晶；
(4)在超临界状态下结晶60min，停机后取出结晶产物，进行含量检测，产品纯度在97％以上；
(5)将上述结晶产物用45℃左右丙酮溶剂配成饱和溶液，再进行超临界状态下抗溶剂结晶；
(6)试验结束后，取样检测，可得到99％以上高纯脱水穿心莲内酯31.1g。
实施例3：
(1)称取1kg穿心莲浸膏(脱水穿心莲内酯含量10％以上)，按1∶10(W/V)的固液比溶于50℃温水中，再用氯仿萃取2次；
(2)将氯仿萃取溶液合并、真空脱溶得到固体粉末，将粉末转移到硅胶色谱柱中，用石油醚与乙酸乙酯(30％∶70％～60％∶40％，V/V)流动相洗脱，以紫外检测器在线检测定位，收集90％以上的脱水穿心莲内酯流份；
(3)将上述流分合并、浓缩成饱和溶液(至有微量晶体析出)，冷却到45℃左右，再放置于超临界CO2结晶釜中，结晶压力控制在12MPa，温度在50℃，进行超临界CO2抗溶剂结晶；
(4)在超临界状态下结晶50min，停机后取出结晶产物，进行含量检测，产品纯度在97％以上；
(5)将上述结晶产物用45℃左右丙酮溶剂配成饱和溶液，再进行超临界状态下抗溶剂结晶；
(6)试验结束后，取样检测，可得到99％以上高纯脱水穿心莲内酯32.0g。

Claims (3)

1、一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法，以10％左右脱水穿心莲内酯的浸膏为起始原料，包括萃取分离、柱层析分离和结晶纯化，其特征在于：所述的萃取是穿心莲浸膏溶于30～50℃温水中用氯仿萃取至少两次，萃取液脱溶得到固体粉末，然后用色谱柱层析分离，混合溶剂洗脱，收集含量≥90％脱水穿心莲内酯流份，真空浓缩成饱和溶液，最后用超临界CO2抗溶剂结晶纯化，压力8～15MPa、温度40～65℃。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：层析色谱柱固定相选自硅胶。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：层析色谱柱流动相为石油醚与乙酸乙酯混合溶剂，石油醚与乙酸乙酯的体积比3∶7～6∶4。
CN2009101851645A 2009-09-30 2009-09-30 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法 Expired - Fee Related CN101671321B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009101851645A CN101671321B (zh) 2009-09-30 2009-09-30 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009101851645A CN101671321B (zh) 2009-09-30 2009-09-30 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101671321A true CN101671321A (zh) 2010-03-17
CN101671321B CN101671321B (zh) 2012-02-29

Family

ID=42018765

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009101851645A Expired - Fee Related CN101671321B (zh) 2009-09-30 2009-09-30 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101671321B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558257A (zh) * 2011-12-23 2012-07-11 柳州市绿翔生物技术有限公司 新穿心莲内酯的分离纯化方法
CN104311515A (zh) * 2014-09-04 2015-01-28 桂林甙元生物科技有限公司 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的分离提取工艺
CN107475321A (zh) * 2017-10-17 2017-12-15 南京续航生物材料科技有限公司 一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558257A (zh) * 2011-12-23 2012-07-11 柳州市绿翔生物技术有限公司 新穿心莲内酯的分离纯化方法
CN102558257B (zh) * 2011-12-23 2014-06-18 柳州市绿翔生物技术有限公司 新穿心莲内酯的分离纯化方法
CN104311515A (zh) * 2014-09-04 2015-01-28 桂林甙元生物科技有限公司 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的分离提取工艺
CN104311515B (zh) * 2014-09-04 2017-01-25 桂林甙元生物科技有限公司 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的分离提取工艺
CN107475321A (zh) * 2017-10-17 2017-12-15 南京续航生物材料科技有限公司 一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法
CN107475321B (zh) * 2017-10-17 2018-11-20 正大联合动物制药科技（江苏）有限公司 一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101671321B (zh) 2012-02-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101671322B (zh) 一种穿心莲内酯分离纯化方法
CN102976909B (zh) 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法
CN101830849B (zh) 一种草乌甲素的制备方法
CN101812100A (zh) 一种制备淫羊藿苷的方法
CN104327127A (zh) 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备安哥拉苷c、桃叶珊瑚苷和哈巴苷的方法
CN101671321B (zh) 一种脱水穿心莲内酯分离纯化方法
CN105362311A (zh) 一种提取分离黄蜀葵花挥发油、黄酮及多糖的方法
CN102070683B (zh) 同时制备parishin、parishin B、parishin C化学对照品的方法
CN101401843B (zh) 一种中药丹参有效成分的提取方法
CN102503996B (zh) 一种从川西獐芽菜植物中提取有效成分的方法
CN104628731A (zh) 一种微波辅助提取骆驼蓬生物碱的方法
CN101671320B (zh) 一种去氧穿心莲内酯分离纯化方法
CN103450286A (zh) 独一味中四种环烯醚萜苷类单体化合物的分离制备方法
CN102649784A (zh) 一种从荜茇中提取荜茇宁的方法
CN104341379A (zh) 一种高良姜素的提取方法
CN103242390B (zh) 一种提取去乙酰车叶草苷酸甲酯和鸡矢藤次苷甲酯的方法
CN107722080A (zh) 一种从岩白菜叶中提取熊果苷的方法
CN102391328B (zh) 同时制备magnoloside A和magnoloside B化学对照品的方法
CN102093210A (zh) 6种银杏酸单体的纯化制备方法
CN104888021A (zh) 一种维c银翘片
CN102702216A (zh) 一种高纯度次野鸢尾黄素的分离制备工艺
CN103242161B (zh) 一种制备丹酚酸a的方法
CN102887925A (zh) 从河套大黄中提取土大黄苷的方法
CN102911240A (zh) 一种制备高纯度贝萼皂苷元的方法
CN102399186B (zh) 一种去甲异波尔定单体的分离纯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20120229

Termination date: 20160930

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee