CN105085588A - 一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法 - Google Patents

一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法 Download PDF

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本发明涉及一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，该方法包括以下步骤：⑴硅胶柱色谱富集：狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离、洗脱，并经薄层色谱检测后减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品；⑵微孔树脂除杂：红景天苷粗品经溶解、微孔树脂柱分离、洗脱、减压干燥，即得红景天苷类组分；⑶反相液相制备色谱精制：红景天苷类组分经溶解、微孔滤膜过滤并采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品。本发明工艺简单、易规模化。

Description

一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法
技术领域
本发明涉及一种化学对照品的制备方法，尤其涉及一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法。
背景技术
狭叶红景天（Rhodiolakirilowii(Regel)Maxim.）系景天科（Crassulaceae）红景天属（RhodiolaL.）植物。《藏药志》中记载：狭叶红景天根入药，可用于清热退烧、解毒、防瘟、治肺炎、腹泻、四肢肿胀等。现代药理研究发现，狭叶红景天具有预防高原反应、活血化瘀、提高耐缺氧能力、辐射保护、改善心血管系统功能等作用。狭叶红景天在青海省分布较广，资源量大，目前还未被规模化使用。因此，从狭叶红景天根中发展高纯度红景天苷的高效制备方法，对狭叶红景天的规模化开发利用及相关新药的研究具有重要意义。
目前，中国专利（CN101974045A）报道采用微波提取、二次醇沉及大孔树脂纯化等步骤从大花红景天药材中得到纯度约为92%的红景天苷，过程较繁琐、耗时且醇沉过程损失量较大，不适合工业化生产，但从狭叶红景天根中制备红景天苷的文献未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易规模化的从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法。
为解决上述问题，本发明所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，包括以下步骤：
⑴硅胶柱色谱富集：
狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离，用5~10倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份200~500mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.5~0.7的馏分；所述Rf值为0.5~0.7的馏分经减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品；
⑵微孔树脂除杂：
所述红景天苷粗品用其质量10~20倍的水溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，并用2~5倍柱体积的体积分数为20~50%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱物；所述洗脱物经减压干燥，即得红景天苷类组分；
⑶反相液相制备色谱精制：
所述红景天苷类组分用其质量10~20倍的水溶液溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B；所述滤液B采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，经检测波长为220nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品。
所述步骤⑴中狭叶红景天根醇提物是指将狭叶红景天根粉碎至50~100目后，按1kg：5~20L的料液比加入体积分数为95%的乙醇或甲醇，在温度为40℃~95℃、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~3h的条件下进行提取，得到提取液，该提取液经过滤得到滤液C；所述滤液C经减压干燥至膏状即得。
所述步骤⑴中氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按9：1：0.1~7：3：0.5体积比混合均匀而得。
所述步骤⑴中硅胶是指100~200目的柱层析硅胶。
所述减压干燥的条件均是指真空度为0.06~0.09MPa，温度为50~70℃。
所述步骤⑵中微孔树脂柱是指HP20SS型树脂柱或MCI型树脂柱。
所述步骤⑶中反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、尺寸20mm，反相液相制备柱固定相为10μm耐纯水C18，流动相为体积分数10~20%的甲醇溶液，进样体积为20mL，流速为60mL/min。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明采用硅胶柱处理，硅胶价格低廉，易于规模化，且硅胶柱可直接去除狭叶红景天根中脂溶性成分及其他酚类成分。
2、本发明采用微孔树脂柱除杂，微孔树脂柱可以再生循环使用，平均价格低廉，同时，微孔树脂具有良好的脱色效果。
3、本发明采用反相高效液相制备，可获取高纯度对照品，且收率较高。
4、本发明原料要求不高，一般种植的或野生的狭叶红景天根醇提物即可，易于批量备料。
5、本发明工艺简单、易于操作，采用本发明方法可快速制备纯度大于98%的红景天苷对照品，制备规模为克级到十克级，非常适宜规模化生产。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明红景天苷的代表性液相色谱制备图谱（220nm）。
图2为本发明红景天苷的代表性高效液相色谱分析图谱（220nm）。
具体实施方式
实施例1一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，包括以下步骤：
⑴硅胶柱色谱富集：
3.0Kg狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离，用5倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份200mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.5~0.7的馏分；Rf值为0.5~0.7的馏分在真空度为0.06MPa、温度为70℃的条件下经减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品1050.8g。
其中：狭叶红景天根醇提物是指将狭叶红景天根粉碎至50目后，按1kg：20L的料液比加入体积分数为95%的乙醇，在温度为40℃、提取次数为3次、每次提取时间为3h的条件下进行提取，得到提取液，该提取液经过滤得到滤液C，滤液C在真空度为0.06MPa、温度为70℃的条件下经减压干燥至膏状即得。
硅胶是指100目的柱层析硅胶。
氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按7：3：0.5体积比（mL/mL）混合均匀而得。
⑵微孔树脂除杂：
红景天苷粗品用其质量10倍的水溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，并用2倍柱体积的体积分数为50%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱物；洗脱物在真空度为0.06MPa、温度为70℃的条件下经减压干燥，即得红景天苷类组分824.9g。
其中：微孔树脂柱是指HP20SS型树脂柱。红景天苷粗品与微孔树脂比例为1g：30mL。
⑶反相液相制备色谱精制：
红景天苷类组分用其质量10倍的水溶液溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B；滤液B采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，经检测波长为220nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分在真空度为0.06MPa、温度为70℃的条件下经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品69.2g（图1、图2）。
其中：反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、尺寸20mm，反相液相制备柱固定相为10μm耐纯水C18，流动相为体积分数15%的甲醇溶液，进样体积为20mL，流速为60mL/min。
实施例2一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，包括以下步骤：
⑴硅胶柱色谱富集：
1.0Kg狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离，用10倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份500mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.5~0.7的馏分；Rf值为0.5~0.7的馏分在真空度为0.09MPa、温度为50℃的条件下经减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品348.3g。
其中：狭叶红景天根醇提物是指将狭叶红景天根粉碎至100目后，按1kg：5L的料液比加入甲醇，在温度为95℃、提取次数为1次、每次提取时间为1h的条件下进行提取，得到提取液，该提取液经过滤得到滤液C，滤液C在真空度为0.09MPa、温度为50℃的条件下经减压干燥至膏状即得。
硅胶是指200目的柱层析硅胶。
氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按9：1：0.1体积比（mL/mL）混合均匀而得。
⑵微孔树脂除杂：
红景天苷粗品用其质量20倍的水溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，并用5倍柱体积的体积分数为20%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱物；洗脱物在真空度为0.09MPa、温度为50℃的条件下经减压干燥，即得红景天苷类组分266.1g。
其中：微孔树脂柱是指MCI型树脂柱。红景天苷粗品与微孔树脂比例为1g：30mL。
⑶反相液相制备色谱精制：
红景天苷类组分用其质量20倍的水溶液溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B；滤液B采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，经检测波长为220nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分在真空度为0.09MPa、温度为50℃的条件下经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品20.6g。
其中：反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、尺寸20mm，反相液相制备柱固定相为10μm耐纯水C18，流动相为体积分数10%的甲醇溶液，进样体积为20mL，流速为60mL/min。
实施例3一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，包括以下步骤：
⑴硅胶柱色谱富集：
0.3Kg狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离，用15倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份300mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.5~0.7的馏分；Rf值为0.5~0.7的馏分在真空度为0.08MPa、温度为60℃的条件下经减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品110.6g。
其中：狭叶红景天根醇提物是指将狭叶红景天根粉碎至60目后，按1kg：10L的料液比加入甲醇，在温度为80℃、提取次数为2次、每次提取时间为2h的条件下进行提取，得到提取液，该提取液经过滤得到滤液C，滤液C在真空度为0.08MPa、温度为60℃的条件下经减压干燥至膏状即得。
硅胶是指150目的柱层析硅胶。
氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按8：2：0.2体积比（mL/mL）混合均匀而得。
⑵微孔树脂除杂：
红景天苷粗品用其质量15倍的水溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，并用3倍柱体积的体积分数为40%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱物；洗脱物在真空度为0.08MPa、温度为60℃的条件下经减压干燥，即得红景天苷类组分72.8g。
其中：微孔树脂柱是指MCI型树脂柱。红景天苷粗品与微孔树脂比例为1g：30mL。
⑶反相液相制备色谱精制：
红景天苷类组分用其质量15倍的水溶液溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B；滤液B采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，经检测波长为220nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分在真空度为0.08MPa、温度为60℃的条件下经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品6.0g。
其中：反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、尺寸20mm，反相液相制备柱固定相为10μm耐纯水C18，流动相为体积分数20%的甲醇溶液，进样体积为20mL，流速为60mL/min。

Claims (7)

1.一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，包括以下步骤：
⑴硅胶柱色谱富集：
狭叶红景天根醇提物经硅胶柱色谱分离，用5~10倍柱体积的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，按每份200~500mL收集馏分，并经薄层色谱检测，其中展开剂为氯仿-甲醇-水混合溶剂，显色剂为体积浓度10%的浓硫酸乙醇溶液，合并Rf值为0.5~0.7的馏分；所述Rf值为0.5~0.7的馏分经减压干燥即得棕黄色粉末状的红景天苷粗品；
⑵微孔树脂除杂：
所述红景天苷粗品用其质量10~20倍的水溶液溶解，过滤得到滤液A，该滤液A上微孔树脂柱分离，并用2~5倍柱体积的体积分数为20~50%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱物；所述洗脱物经减压干燥，即得红景天苷类组分；
⑶反相液相制备色谱精制：
所述红景天苷类组分用其质量10~20倍的水溶液溶解，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液B；所述滤液B采用高效反相液相制备色谱柱进行分离，经检测波长为220nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中目标色谱峰馏分，该目标色谱峰馏分经减压干燥即得白色粉末状的红景天苷对照品。
2.如权利要求1所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑴中狭叶红景天根醇提物是指将狭叶红景天根粉碎至50~100目后，按1kg：5~20L的料液比加入体积分数为95%的乙醇或甲醇，在温度为40℃~95℃、提取次数为1~3次、每次提取时间为1~3h的条件下进行提取，得到提取液，该提取液经过滤得到滤液C；所述滤液C经减压干燥至膏状即得。
3.如权利要求1所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑴中氯仿-甲醇-水混合溶剂是指将氯仿、甲醇、水按9：1：0.1~7：3：0.5体积比混合均匀而得。
4.如权利要求1所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑴中硅胶是指100~200目的柱层析硅胶。
5.如权利要求1或2所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述减压干燥的条件均是指真空度为0.06~0.09MPa，温度为50~70℃。
6.如权利要求1所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑵中微孔树脂柱是指HP20SS型树脂柱或MCI型树脂柱。
7.如权利要求1所述的一种从狭叶红景天根中制备红景天苷化学对照品的方法，其特征在于：所述步骤⑶中反相液相制备色谱分离的工作参数是指色谱柱柱长250mm、尺寸20mm，反相液相制备柱固定相为10μm耐纯水C18，流动相为体积分数10~20%的甲醇溶液，进样体积为20mL，流速为60mL/min。
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