CN100528892C

CN100528892C - 从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷的方法

Info

Publication number: CN100528892C
Application number: CNB2007100699603A
Authority: CN
Inventors: 杜琪珍; 王科; 沈莲清
Original assignee: Zhejiang Gongshang University
Current assignee: Zhejiang Gongshang University
Priority date: 2007-07-09
Filing date: 2007-07-09
Publication date: 2009-08-19
Anticipated expiration: 2027-07-09
Also published as: CN101100476A

Abstract

本发明公开了一种从萝卜籽中分离制备4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。采用沸腾甲醇浸提萝卜籽中的硫代葡萄糖苷；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化萝卜籽粗提物中的GRE，其溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、5%硫酸铵溶液组成，正丁醇、乙腈、5%硫酸铵溶液的比例为10∶3～6∶5。本发明方法经济实用，成本较低，分离所得的GRE纯度在87%以上。

Description

从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷的方法

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，涉及萝卜籽深加工技术，特别是从萝卜籽中分离制备4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。

技术背景

萝卜是我国的传统的食用蔬菜，具有很高的营养保健价值，含有丰富的营养物质和活性物质，硫代葡萄糖苷类化合物是其中主要的一类活性成分。萝卜籽中的硫代葡萄糖苷主要成分为4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)。国内外研究表明GRE的降解产物具有抗过敏、抗癌、抗菌等生物活性。

现有关于硫代葡萄糖苷的分离主要采用制备型高效液相色谱，其局限性是分离量少。其次，高效液相色谱柱价格昂贵、再生使用相对困难，分离得到硫代葡萄糖苷成本较高，难以发展成为制备量大的分离技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本较低、经济适用的从萝卜籽中分离制备4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：采用沸腾甲醇浸提萝卜籽中的硫代葡萄糖苷；以逆流色谱仪为分离设备分离纯化萝卜籽粗提物中的GRE，其溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液组成，正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液的比例为10∶3～6∶5。上相做流动相，下相做固定相。

以上方案按步骤叙述如下：

1、采用沸腾甲醇浸提萝卜籽中的GRE，GRE提取液真空浓缩至含固形物80％左右；

2、在上述浓缩液中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取两次脱脂；

3、将脱脂后的溶液真空干燥，获萝卜籽GRE粗提物；

4、采用逆流色谱方法分离纯化GRE粗提物；

5、收集逆流色谱分离的GRE组分进行真空浓缩至干，得到含硫酸铵的GRE分离物；

6、用无水甲醇提取上述GRE分离物，并将甲醇提取物真空浓缩至干，即得到脱盐的GRE产品。

步骤(1)、步骤(3)、步骤(5)和步骤(6)所述真空浓缩和真空干燥的真空度低于0.09Mpa，温度为35～40℃。

步骤(4)所述逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液组成，正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液的体积比为10～20∶5～10∶1～5，上相做流动相，下相做固定相；用泵将上述溶剂系统的下相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶剂系统的部分上相溶解萝卜籽粗提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；用紫外-可见检测器检测逆流色谱流出液，根据所得的色谱图收集GRE组分。

步骤(5)所述逆流色谱方法中的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪(HSCCC)或低速逆流色谱仪(SRCCC)。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

图2为实施例1的HSCCC分离图谱。

图3为实施例1分离所得的GRE的HPLC图谱。

图4为实施例2的SRCCC分离图谱。

图5为实施例3的SRCCC分离图谱。

具体实施方式

实施例1

本实施例的溶剂系统采用正丁醇-乙腈-5％硫酸铵溶液(10∶5∶4)；逆流色谱仪为HSCCC-D1000高速逆流色谱仪(柱容量1L)，GRE粗提物中GRE约占15％。

量取正丁醇2000ml、乙腈1000ml、5％硫酸铵溶液的800ml，置于5L分液漏斗，充分摇匀，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将下相以10ml/min的流速注入高速逆流色谱的色谱柱。称取GRE粗提物2.0g溶于50ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至800转/min，然后以1.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以2.0ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用紫外可见检测器在235nm下检测逆流色谱流出液，根据检测器采集的图谱收集GRE组分。分离得到GRE组分浓缩干燥得到含盐分离物，含盐分离物经甲醇提取脱盐后得到286mg GRE产品，纯度达91％以上。

实施例2

本实施例的溶剂系统采用正丁醇-乙腈-5％硫酸铵溶液(10∶3∶4)；逆流色谱仪为RSCCC-D3500低速逆流色谱仪(柱容量3.5L)，GRE粗提物中GRE约占15％。

量取正丁醇8L、乙腈2.7L、5％硫酸铵溶液的3.2L，置于20L分液瓶中，充分混合，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将下相以20ml/min的流速注入低速逆流色谱仪的色谱柱，至色谱柱完全填满。称取GRE粗提物30.0g溶于500ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至50转/min，然后以2.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以5.0ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用紫外可见检测器在235nm下检测逆流色谱流出液，根据检测器采集的图谱收集GRE组分。分离得到GRE组分浓缩干燥得到含盐分离物，含盐分离物经甲醇提取脱盐后得到49g GRE产品，纯度达87％以上。

实施例3

本实施例的溶剂系统采用正丁醇-乙腈-5％硫酸铵溶液(10∶6∶4)；逆流色谱仪为RSCCC-D40000低速逆流色谱仪(柱容量40L)，GRE粗提物中GRE约占15％。

量取正丁醇80L、乙腈48L、5％硫酸铵溶液的32L，置于200L分液罐中，充分混合，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将下相以200ml/min的流速注入低速逆流色谱仪的色谱柱，至色谱柱完全填满。称取GRE粗提物300.0g溶于5000ml上相中制备逆流色谱样品溶液，开启逆流色谱仪至50转/min，然后以10.0ml/min的流速输入样品溶液，待进样结束后，再以20.0ml/min的流速输入流动相以洗脱柱内的组分，用紫外可见检测器在235nm下检测逆流色谱流出液，根据检测器采集的图谱收集GRE组分。分离得到GRE组分浓缩干燥得到含盐分离物，含盐分离物经甲醇提取脱盐后得到48.5g GRE产品，纯度达87％以上。

Claims

1、从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法，其特征在于以下步骤：

(1)、采用沸腾甲醇浸提萝卜籽中的GRE，GRE提取液浓缩至含固形物80％左右；

(2)、在上述浓缩液中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取两次脱脂；

(3)、将脱脂后的溶液真空干燥，获萝卜籽GRE粗提物；

(4)、采用逆流色谱方法分离纯化GRE粗提物；

(5)、收集逆流色谱分离的GRE组分进行真空浓缩至干，得到含硫酸铵的GRE分离物；

(6)、用无水甲醇提取上述GRE分离物，并将甲醇提取物真空浓缩至干，即得到脱盐的GRE产品。

2、根据权利要求1所述从萝卜籽中分离4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法，其特征在于步骤(4)和(5)所述逆流色谱方法为：采用逆流色谱仪为分离设备，溶剂系统由常温常压下处于液态的正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液组成，正丁醇、乙腈、5％硫酸铵溶液的体积比为10-20∶5-10∶1-5，上相做流动相，下相做固定相；用泵将上述溶剂系统的下相注入逆流色谱仪的色谱柱，并取上述溶剂系统的部分上相溶解萝卜籽粗提物制备逆流色谱样品溶液；开启逆流色谱仪和流动相输液泵，将样品溶液和流动相输入逆流色谱分离柱；用紫外-可见检测器检测逆流色谱流出液，根据所得的色谱图收集GRE组分溶液，GRE组分溶液减压浓缩、干燥，然后用无水甲醇提取GRE以脱去硫酸铵盐。

3、根据权利要求1所述从萝卜籽中分离制备4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(GRE)的方法，其特征在于步骤(4)和(5)所述逆流色谱方法所用的逆流色谱仪为高速逆流色谱仪(HSCCC)或低速逆流色谱仪(SRCCC)。