CN106581017A - 番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备方法以及具有增强机体免疫力的功能，本发明以番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物为研究对象，根据中华人民共和国卫生部《免疫‑保健食品检验与评价技术规范》的药理方法，研究番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠体液免疫、非特异性免疫和免疫脏器指数的影响。结果表明，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物能显著提高小鼠的胸腺指数、促进血清溶血素的生成以及增强腹腔巨噬细胞吞噬功能。表明番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物具有增强机体免疫的功能。
Description
技术领域
本发明涉及番木瓜的新用途，具体涉及番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备方法以及具有增强免疫力的新用途。
背景技术
番木瓜(Carica papaya L)又名万寿果，为番木瓜科植物的果实，在我国广东、广西、海南、云南、福建等省广泛种植。研究表明，番木瓜果实含有番木瓜碱、木瓜蛋白酶、凝乳酶、胡萝卜素等，同时还含有17种以上氨基酸及多种营养元素，具有护肝、抗炎抑菌、降低血脂等功效。人们食用的是番木瓜果肉，种子通常是废弃物，番木瓜中含有丰富的苄基硫代葡萄糖苷(benzyl glucosinolate，苄基硫代葡萄糖苷)，尤其番木瓜籽中含量最高，此物质在硫苷酶或者肠道菌的作用下水解成具芳香烷侧链的异硫氰酸酯—异硫氰酸苄酯(benzylisothiocyanate，BITC)。已有研究表明，BITC对肝癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、肺癌、胰腺癌和卵巢癌等肿瘤细胞均具有较好的抗肿瘤作用。目前暂未发现免疫活性方面报道。
发明内容
发明目的：本发明的目的是在番木瓜现有药理活性基础上，开发其新的药理活性，提供一种具有很好提高免疫力作用，安全可靠的番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物制成的保健品或药品。
技术方案：为了实现以上目的，本发明所采取的技术方案为：
番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用。
番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用。
如权利要求1所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入乙醇，提取两次，减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层减压浓缩，加入乙醇，抽滤，滤液浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，用超纯水进行洗脱，收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为65-85％乙醇，提取两次，40-60℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至3/10番木瓜籽重量的浸膏，加入其1-3倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为75％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其2倍量体积比为75％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入乙醇，提取两次，减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层减压浓缩，加入乙醇，抽滤，滤液浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，用超纯水进行洗脱，收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为65-85％乙醇，提取两次，40-60℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至3/10番木瓜籽重量的浸膏，加入其1-3倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍体积比为75％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其2倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
本发明以番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物为研究对象，根据卫生部《免疫-保健食品检验与评价技术规范》的药理方法，研究其对小鼠体液免疫、非特异性免疫和免疫脏器指数的影响。结果表明，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物能显著提高小鼠的胸腺指数、促进血清溶血素的生成以及增强腹腔巨噬细胞吞噬功能，对体液免疫和非特异性免疫有很好的增强作用，表明番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物具有增强机体免疫的功能，对进一步开发番木瓜有一定的参考价值。
具体实施方式
实施例1：番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为的75％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其2倍量体积比为的75％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味。将其上MCI柱(5cm×45cm)用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液。采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后，-45℃冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物，经HPLC分析，计算其纯度。
实施例2：番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为的65％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其1倍量体积比为的85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味。将其上MCI柱(5cm×45cm)用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液。采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后，-45℃冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物，经HPLC分析，计算其纯度。
实施例3：番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为的85％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其3倍量体积比为的65％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味。将其上MCI柱(5cm×45cm)用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液。采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后，-45℃冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物，经HPLC分析，计算其纯度。
实施例4：番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的免疫活性研究
1.实验材料
1.1材料与试剂
番木瓜籽，从水果市场搜集所得，放入烘箱，于110℃灭酶活1h，水洗后40℃烘干，粉碎，过筛，放入密封袋储藏备用。
苄基硫代葡萄糖苷(BG)对照品(批号：12030606，购买于ITW Company)；抗凝羊血(鸿泉生物)，豚鼠血清(自制)，SA缓冲液(biohao)，都氏试剂(美国Sigma公司)，Giemsa染液(上海源叶生物科技有限公司)，鸡红细胞(自制)，生理盐水(山东鲁抗辰欣)，水为超纯水；甲酸、乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
1.2仪器与设备
UV-2401PC(日本岛津)，HW-3型恒温水浴(天津天大天发)，DT5-2型低速台式离心机(北京时代北利离心机有限公司)，3k18型高速冷冻离心机(美国Sigma公司)，50i尼康光电显微镜，AUW220D型分析天平(日本岛津)，UltiMate 3000 UHPLC(Thermo Fisher)；HC-150T2型粉碎机(永康市绿可食品机械有限公司)；GZX-9240ME型数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司)；SY-180型超声仪(上海宁商超声仪器有限公司)；SHZ-D(III)型循环水式真空泵(河南省予华仪器有限公司)；AL104型电子天平(梅特勒-托利多仪器公司)；RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；KDM型调温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)，ALPHA1-2LDplus型冷冻干燥机。
1.3动物
SPF级昆明种小鼠，单一性别，体重18-22g，由海南省药物研究所提供，许可证号：SCXK(琼)2015-0007；豚鼠：健康豚鼠；鸡：健康家鸡。
2实验方法
以番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物为研究对象，根据卫生部《免疫-保健食品检验与评价技术规范》的药理方法，研究其对小鼠体液免疫和非特异性免疫的影响考察免疫活性。
2.1番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的制备：按照上述实施例1方法制备番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
2.2小鼠分组及给药
SPF级昆明种小鼠80只，18-22g，单一性别。每个实验随机分为4组(空白对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组)，每组10只，实验前，将所有小鼠适应性饲养2天，自由饮水和取食。参照第2章的给药剂量，低剂量组，中剂量组，高剂量组分别给予番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物11.10、22.19、33.29mg/kg(含有苄基硫代葡萄糖苷量为8、16、24mg/kg)，空白对照组给予超纯水，每日1次，按小鼠体重给药，连续灌胃30天。
2.3番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠体液免疫的影响
采集5只豚鼠血，分离出血清，将1mL压积SRBC加入到5mL豚鼠血清中，放4℃冰箱30min，经常震荡，离心取上清，制备补体，用时以SA液按1:8稀释。按照2.2项下分组、给药，制备2％的SRBC细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫。4天后，摘除眼球取血、离心，用SA缓冲液稀释200倍。将稀释后的血清1mL置试管内，依次加入10％(v/v)SRBC 0.5mL，补体1mL。另设不加血清的对照管。置37℃恒温水浴中保温20min后，冰浴终止反应，离心。取上清液1mL，加都氏试剂3mL，同时取10％(v/v)SRBC 0.25mL加都氏试剂至4mL，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。血清溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式公式计算：
2.4番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠非特异性免疫的影响
2.4.1吞噬功能测定
按照2.2项下分组、给药，制备20％的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射该悬液1mL。间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移至37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，以1:1丙酮甲醇溶液固定，用瑞氏染液染色1min，再用蒸馏水漂洗晾干。
用显微镜计数巨噬细胞，每张片计数100个，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。
2.4.2脏器指数测定
解剖取脾脏、胸腺称重，计算脏器指数。
脏器指数＝脏器重量(mg)/小鼠体重(g)。
2.5数据处理
采用spss19.0软件进行数据处理、统计和分析，分析结果以表示，组与组间比较采用方差分析和t检验。
3实验结果
3.1番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的纯度：番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的纯度为72.09％。
3.2番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠体液免疫的影响
表1番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠血清溶血功能的影响(n＝10，)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 半数溶血值(HC50) |
| 空白对照组 | — | 98.78±8.55 |
| 低剂量组 | 11.10 | 120.28±9.29* |
| 中剂量组 | 22.19 | 138.90±4.95** |
| 高剂量组 | 33.29 | 140.31±8.56** |
注：与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.001。
由表1可知，与空白对照组比较，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物的低剂量组有显著性差异(P<0.05)，中、高剂量组有极显著性差异(P<0.001)，表明番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物具有促进小鼠血清溶血素的形成，能显著增强小鼠的体液免疫功能。
3.3番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠非特异性免疫的影响
表2番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠吞噬率和吞噬指数的影响(n＝10，)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 吞噬率(％) | 吞噬指数 |
| 空白对照组 | — | 43.92±5.28 | 0.77±0.16 |
| 低剂量组 | 11.10 | 54.13±7.08* | 1.08±0.22* |
| 中剂量组 | 22.19 | 65.00±5.00** | 1.54±0.28** |
| 高剂量组 | 33.29 | 65.93±7.93** | 1.58±0.23** |
注：与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.001。
由表2可知，与空白对照组比较，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物低剂量的吞噬率和吞噬指数有显著性差异(P<0.05)，中、高剂量组有极显著性差异(P<0.001)，表明，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物能明显提高小鼠吞噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数，显著增强机体的非特异性免疫。
3.4番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠免疫器官指数的影响
表3番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物对小鼠体重和免疫器官指数的影响(n＝10，)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 体重(g) | 脾脏指数(mg/g) | 胸腺指数(mg/g) |
| 空白对照组 | — | 31.51±3.94 | 3.21±1.52 | 1.19±0.25 |
| 低剂量组 | 11.10 | 31.15±4.32 | 3.65±1.82 | 2.21±0.52* |
| 中剂量组 | 22.19 | 31.20±4.97 | 3.50±0.60 | 3.28±0.80** |
| 高剂量组 | 33.29 | 31.00±3.88 | 3.76±0.69 | 3.30±0.65** |
注：与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.001。
由表3可知，与空白对照组相比较，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物低、中、高剂量组的体重和脾脏指数无显著性差异。但是，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物低剂量组的胸腺指数有显著性差异(P<0.05)，中、高剂量组有极显著性差异(P<0.001)，表明，番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物能显著提高胸腺指数，这可能与增强机体免疫力相关。
Claims (8)
1.番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用。
2.番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用。
3.如权利要求1所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入乙醇，提取两次，减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层减压浓缩，加入乙醇，抽滤，滤液浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，用超纯水进行洗脱，收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
4.如权利要求3所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为65-85％乙醇，提取两次，40-60℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至3/10番木瓜籽重量的浸膏，加入其1-3倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
5.如权利要求4所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为75％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其2倍量体积比为75％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
6.如权利要求2所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入乙醇，提取两次，减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层减压浓缩，加入乙醇，抽滤，滤液浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，用超纯水进行洗脱，收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
7.如权利要求6所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽，加入9倍番木瓜籽重量的体积比为65-85％乙醇，提取两次，40-60℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至3/10番木瓜籽重量的浸膏，加入其1-3倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
8.如权利要求7所述番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物作为唯一提取物在制备提高免疫力的保健品或药品的应用，其特征在于番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物是通过以下方法制备得到：称取粉碎的番木瓜籽1kg，加入9倍体积比为75％乙醇，提取两次，50℃减压浓缩，浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，最后水层50℃减压浓缩至300mL，加入其2倍量体积比为65-85％的乙醇，抽滤，滤液50℃浓缩至无醇味得水部位，将其上小孔树脂MCI柱，填料规格为5cm×45cm，用超纯水进行洗脱，流速8mL/min，200mL/瓶收集洗脱液，采用HPLC检测，根据色谱图结果，将其合并，50℃减压浓缩后冷冻干燥为淡黄色粉末，得番木瓜籽苄基硫代葡萄糖苷提取物。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170426 |
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