CN105326880A - 油菜花粉水溶性提取物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种油菜花粉水溶性提取物及其制备方法和应用，该制备方法包括：1)直接将油菜花粉与水混合，常温搅拌，制得混合物水溶液；2)将所得混合物水溶液进行抽滤或离心，分别得滤液或上清液和沉淀物；3)所得滤液或上清液经浓缩，得浓缩液；4)将浓缩液干燥，得油菜花粉提取物。本发明方法操作简单，降低成本。按照本发明方法制得的水溶性提取物富含利于人体吸收的活性成分，能够用于制备多种药品、保健品或食品，具有调节免疫、降血脂、抗衰老等功效。

Description

油菜花粉水溶性提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及生物医药保健品和食品领域，尤其涉及一种油菜花粉水溶性提取物及其制备方法与应用，所述水溶性提取物可用作制备调节免疫力、降血脂、抗衰老的药物或保健品或食品的原料。

背景技术

油菜(BrassicacamPestrisL.)为十字花科芸苔属植物。油菜花粉是由蜜蜂采集油菜的花粉，并加入蜜蜂的唾液等腺体分泌物以及蜂蜜混合组成。该花粉除了含有蛋白质、活性多肽、氨基酸、维生素、黄酮、植物甾体、脂肪酸及其衍生物、多酚类(黄酮类)、含氮类等代谢产物成分外，还含有多糖等活性成分，具有增强人体免疫功能、抗氧化、延缓衰老、改善消化道功能、抗疲劳、调节血脂、抑制前列腺增生等作用，是一种天然营养保健食品。

由于以上所述油菜花粉的特性，使得油菜花在医药保健品和食品领域存在广泛需求。我国油菜花种植广泛，油菜花粉资源丰富，目前针对油菜花粉的提取方法多是通过先将花粉破壁、再采用水提取或、碱提取或酶解提取获得产物。以上方法中，1)水洗或碱洗之后的上清液往往丢弃，造成资源的巨大浪费；2)上述提取法所采用的酸碱环境或高温加热步骤，对提取物中多种有效成分活性有所影响，例如会破环多糖成分的立体结构和活性，从而降低油菜花粉水溶性提取物在调节免疫、降血脂、抗衰老等方面的有效作用；3)上述提取方法均需要对油菜花粉进行破壁处理后再提取，步骤较为复杂、操作难度较高，成本也较高。

发明内容

为解决以上现有技术存在的问题，本发明主要提供一种油菜花粉水溶性提取物及其制备方法与应用，该制备方法直接针对未破壁的油菜花粉通过常温水洗进行提取，制得的水溶性提取物富含利于人体吸收的活性成分，能够满足调节免疫、降血脂以及抗衰老药物、保健品以及食品开发方面的需求。

本发明的第一个目的是提供一种油菜花粉水溶性提取物的制备方法，包括如下步骤：

1)直接将油菜花粉(BrassicacamPestrisL.Pollen)与适量的水混合，常温搅拌，制得混合物水溶液；

2)将所得混合物水溶液进行抽滤或离心，分别得滤液或上清液和沉淀物；

3)将所得滤液或上清液进行浓缩，得浓缩液；

4)将所述浓缩液干燥，得油菜花粉提取物；

其中，优选地，步骤1)所述的油菜花粉与蒸馏水以1:1～1:15(w/w)的比例混合，所述搅拌的时间为2～6小时，更优选地，搅拌时间为4小时。

其中，优选地，步骤2)所述的抽滤为真空抽滤。

其中，优选地，步骤2)所述的离心为3000～6000r/min离心10-30min，更优选地，所述离心为6000r/min离心10min。

其中，优选地，步骤3)所述的浓缩为减压浓缩。

其中，优选地，步骤4)所述的干燥为鼓风干燥、板式真空干燥、带式真空干燥、微波真空干燥等干燥方法。

此外，对于本发明上述步骤2)所述的沉淀物(也即油菜花粉药渣)，可以采用超临界提取法(例如专利申请公开号CN103893236A所述的提取方法)制得油菜花粉脂溶性提取物，用于前列腺治疗等研究。

通过上述方法，将目前油菜花粉提取技术中废弃的上清液或滤液进行有效的回收利用，提高了油菜花粉提取方法的利用率，避免了资源浪费；同时采用室温条件下水浸提，最大限度地保持了油菜花粉提取物中多糖等水溶性有效成分的活性，使其能够更有效地发挥调节免疫力、抗血脂、抗衰老等作用。

本发明的第二个目的是提供一种根据上述方法制得的油菜花粉水溶性提取物。该水溶性提取物主要含有多糖类物质，该多糖类物质的单糖组成为甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖及鼠李糖等糖类成分及其它水溶性成分。经苯酚-硫酸法测定该水溶性提取物，本发明发现其总多糖含量高达70％～80％。

本发明的第三个目的是提供一种油菜花粉水溶性提取物药物制剂，其以油菜花粉水溶性提取物为原料，加入药学上可接受的药用辅料赋形剂，制成临床上可接受的任一种剂型的制剂，包括但不限于胶囊、颗粒剂、片剂、膏剂或丸剂等。

本发明的第四个目的是提供一种油菜花粉水溶性提取物保健食品，其以油菜花粉水溶性提取物为原料或添加剂，加上适宜的食用辅料，制成软糖、糖浆、饮料等具有保健功能的食品。

本发明的第五个目的是提供所述的油菜花粉水溶性提取物在制备调节免疫、降血脂、抗衰老的药物、保健品或食品中的应用。

本发明采用直接对未破壁的油菜花粉在室温下进行水浸提，抽滤获得滤液或离心上清液，制得油菜花粉水溶性提取物。与现有技术相比，1)本发明将目前油菜花粉提取技术中废弃的上清液或滤液进行有效的回收利用，避免了资源浪费；2)本发明方法采用饮用水在室温下进行浸提，最大限度保持了提取物活性成分的效力，可以用于制备多种药品、保健品或食品，具有调节免疫力、降血脂、抗衰老等功效；3)本发明方法减少了现有提取法中的破壁步骤，简化了操作步骤，降低了成本，适合工业化生产。以上所述的优势使得本发明方法具有实际的社会和经济效益。

附图说明

图1为实施例5中苯酚硫酸法多糖检测的葡萄糖标准曲线。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。下述实施例涉及的方法如无特别说明，均为常规方法，材料如无特别说明，均商业市售可获得。

本发明所述方法对未破壁的油菜花粉在室温下进行水浸提，制得油菜花粉水溶性提取物，用该水溶性提取物制备的制剂和保健品具有调节免疫力、降血脂、抗衰老等功效。以下实施例给出具体相关做法。

油菜花粉水溶性提取物的制备

实施例1

取油菜花粉(市售可获得)以1:1(w/w)的比例与饮用水混合，常温搅拌2h，真空抽滤，取滤液，减压浓缩，鼓风干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽滤所得沉淀物可采用CO₂超临界提取法制备脂溶性提取物。

实施例2

取油菜花粉(市售可获得)以1:6(w/w)的比例与饮用水混合，常温搅拌4h，3000r/m离心30min，收集上清液，减压浓缩进行回收，板式真空干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽滤沉淀物用于脂溶性提取物的制备。

实施例3

取油菜花粉(市售可获得)以1:8(w/w)的比例与水混合，常温搅拌4h，6000r/m离心10min，收集上清液，减压浓缩进行回收，带式真空干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽滤沉淀物用于脂溶性提取物的制备。

实施例4

取油菜花粉(市售可获得)以1:15(w/w)的比例与水混合，常温搅拌6h，6000r/m离心10min，收集上清液，减压浓缩进行回收，微波真空干燥，即得油菜花粉水溶性提取物。抽滤沉淀物用于脂溶性提取物的制备。

油菜花粉水溶性提取物的总多糖的含量检测

实施例5

1.苯酚-硫酸法多糖检测的实验原理

可溶性糖在浓硫酸作用下，可以生成糠醛或羟甲基糠醛，其可与苯酚缩合生成橙红色化合物，在一定范围内其颜色深浅与可溶性糖的含量成线性关系，并且在485nm左右波长处具有最大吸收峰，故可用比色法测定其含量。

2.显色剂的配制

苯酚先在60℃水浴锅中加热溶解，溶解后，精确吸取6g，置于100mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至刻度，得6％的苯酚溶液。

3.对照品溶液的配制

精确称取葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110833-201205)20mg，置100mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至刻度，即得0.2mg/mL葡萄糖标准溶液。

4.标准曲线的绘制

精确量取上述配置的葡萄糖标准液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL置于10mL容量瓶中，分别加蒸馏水至2mL摇匀，再加入1mL6％的苯酚溶液摇匀，加入5mL浓硫酸并摇匀。静止显色20分钟。同样的方法取2mL蒸馏水，作为空白对照。在490nm波长条件下测定吸光度，用所得数据绘制标准曲线。以葡萄糖的含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制的标准工作曲线如图1所示。由图1可知：在实验范围内，葡萄糖的含量与其吸光值成正比，得回归方程：y＝0.0143X+0.0209，R²＝0.9976。

5.多糖含量的测定

油菜蜂花粉水溶性提取物经干燥后，精确称取样品20mg，置100mL容量瓶中，加少量蒸馏水溶解，定容至刻度，得浓度为0.2mg/mL的样品溶液。精确吸取样品溶液0.6mL、0.8mL、1.0mL置于10mL容量瓶中，按标准曲线的制作方法进行相同操作，每个浓度平行测量3次。根据标准曲线和吸光度的测量结果计算样品中多糖的含量(如表1所示)。

表1多糖含量测定结果

由表1可知样品中多糖的含量为：72.47％，由此可知水提醇沉物中主要含有多糖类物质。

油菜花粉水溶性提取物颗粒剂的制备

实施例6

取按照实施例1-4的技术方案制备的油菜花粉水溶性提取物500g，粉碎过120目筛，加入400g可溶性淀粉和100g微粉硅胶，混合均匀，喷适量95％(体积比)乙醇，混合，制粒，干燥，整粒即得。

油菜花粉水溶性提取物硬胶囊的制备

实施例7

取按照实施例1-4的技术方案制备的油菜花粉水溶性提取物适量，粉碎过120目筛，称取60g细粉，加入30g可溶性淀粉和10g微粉硅胶，混匀，喷适量95％(体积比)乙醇，混合，制粒，干燥，整粒，灌装至0号胶囊，即得硬胶囊。

油菜花粉水溶性提取物保健饮料的制备

实施例8

取按照实施例1-4的技术方案制备的油菜花粉水溶性提取物500g，加入120g木糖醇及适量的柠檬酸，再加入0.4g山梨酸钾，然后加水至1000g，混匀，滤过，灌装，封口，杀菌，包装即得保健饮品。

油菜花粉水溶性提取物保健糖浆的制备

实施例9

取按照实施例1-4的方法制备的油菜花粉水溶性提取物500g，加2000ml饮用水，在70℃条件下加热浸提2小时，离心，取上清液，加入适量的乳酸钙及VC、VE，混匀即得保健糖浆。

油菜花粉水溶性提取物提高免疫力，抗衰老实验研究

实施例10

1.材料与方法

1.1试剂

按照实施例1-4的技术方案制备油菜花粉水溶性提取物(YCH)，给药前在提取物中加蒸馏水配制成浓度分别为2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL的低、中、高浓度药液。

丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒、过氧化氢酶试剂盒(CAT)：南京建成生物工程研究所；香菇多糖注射液：江苏康缘药业股份有限公司；

1.2分组、造模及给药

昆明种小鼠60支，体重28～32g，雌雄各半。小鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白组、模型组、香菇菌多糖组(阳性组)和油菜花粉水提物低、中、高剂量组。除空白组外其他组的小鼠均颈背部皮下注射D-半乳糖120mg/kg，连续60天，同时各组分别灌胃给予相应的药物，空白和模型组给予等体积蒸馏水，阳性药组给予香菇菌多糖100mg/kg，油菜花粉水提物低、中、高剂量组分别给予提取物50、100、200mg/kg，给药体积为20mL/kg·d。

1.3指标测定

1.3.1小鼠胸腺和脾脏指数的测定

末次给药24h后，称小鼠体重，眼眶取血后处死小鼠，取胸腺、脾脏、肝脏和脑组织并称重。以脏器湿重(mg)/体重(g)、计算胸腺指数和脾脏指数。

1.3.2小鼠血MDA含量及SOD活力测定

将小鼠血液立即离心取血清，按MDA试剂盒、SOD试剂盒说明书操作。分别测定血清中MDA、SOD含量。

1.3.3小鼠肝组织GSH-Px活力测定

取小鼠肝脏，加预冷的生理盐水制备成10％的组织匀浆。冷冻离心(2℃～4℃)，取上清液，用谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定谷胱甘肽过氧化物酶活力。

1.3.4小鼠脑组织CAT活力测定

取小鼠脑组织，加预冷的生理盐水进行匀浆制备成10％的组织匀浆。冷冻离心，取上清液，用过氧化氢酶试剂盒测定过氧化氢酶活力。

2.结果

2.1油菜花粉提取物对衰老小鼠胸腺和脾脏指数的影响

与空白组相比，模型组胸腺指数和脾脏指数均有显著性降低(P<0.05)；与模型组相比，香菇菌多糖组及油菜花粉水提物低、中、高剂量组胸腺指数和脾脏指数均有显著性升高(P<0.05，P<0.01)，见表2。

表2油菜花粉水提物对衰老小鼠胸腺和脾脏指数的影响(n＝10)

注：与空白组相比，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组相比，P<0.05，P<0.01。

2.2油菜花粉水提物对衰老小鼠MDA含量和SOD、GSH-Px、CAT活力的影响

与空白组相比，模型组MDA含量有显著性升高(P<0.05)，SOD、GSH-Px、CAT活力明显降低(P<0.05)；与模型组相比，香菇菌多糖组及油菜花粉水提物低、中、高剂量组MDA含量有显著性降低(P<0.05)，SOD和GSH-Px活力均明显提高(P<0.01)，香菇菌多糖组及油菜花粉水提物中、高剂量组CAT活力显著提高(P<0.01)，见表3。

表3油菜花水提物对衰老小鼠MDA含量和SOD、GSH-Px、CAT活力的影响(n＝10)

注：与空白组相比，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组相比，P<0.05，P<0.01。

3.结论

油菜花粉水提物能显著提高衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数，明显降低MDA含量；显著提高SOD、GSH-Px、CAT活性。提示油菜花粉水提物可通过增强机体免疫功能、提高机体抗氧化能力和直接清除自由基等发挥其延缓衰老的作用。

油菜花粉水溶性提取物降血脂实验研究

实施例11

1.材料与方法

1.1试剂

取按照实施例1-4的技术方案制备的油菜花粉水溶性提取物，给药前加蒸馏水配制成浓度为3.5mg/mL、7mg/mL、14mg/mL的低、中、高浓度药液。阿伐他汀，北京嘉林药业股份有限公司。

1.2分组、造模及给药

Wistar大鼠48只，体重180g～200g，雄性。随机分成6组，每组8只，即空白组、模型组、阿伐他汀组，油菜花粉水提物低剂量组、油菜花粉水提物中剂量组、油菜花粉水提物高剂量组。除空白组饲以正常饲料外，其他各组均给予饲喂高脂饲料(1％胆固醇、0.5％胆酸钠，10％猪油、10％鸡蛋黄粉、78.5％基础饲料)15天造模。同时各组分别灌胃给予相应的药物，空白和模型组给予等体积蒸馏水，阳性药组给予阿伐他汀3mg/kg，油菜花粉水提物低、中、高剂量组分别给予提取物35、70、140mg/kg，给药体积为10mL/kg·d。

各组大鼠自由摄食与饮水，每天记录摄食及饮水量。15d后禁食过夜(12h)，次日称重后，断头取血，取血清待测。

1.3指标测定

总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)直接用全自动血液生化分析仪测定。

2.结果

2.1油菜花粉水提物对高脂血症大鼠体重的影响

实验中各组大鼠生长良好，体重均表现出逐渐增长的趋势。模型组大鼠体重显著高于空白组，而模型组与三个剂量组之间体重无显著差异，说明油菜花粉水提物对大鼠体重无异常影响。

2.2油菜花粉水提物对高脂血症大鼠血脂水平的影响

结果见表4，模型组大鼠血清的TC、TG、LDL-C水平显著高于空白组大鼠(P<0.01)，而HDL-C明显下降(P<0.05)，表明实验大鼠的高脂模型复制成功。油菜花粉水提物高、中剂量能显著降低高脂血症的TC、LDL-C水平(P<0.05)，三个剂量组能明显降低高血脂症大鼠的TG水平(P<0.01，P<0.05)，增加HDL-C水平(P<0.01，P<0.05)。

表4油菜花粉水提物对高脂血症大鼠血脂水平的影响(n＝8)

注：与空白组相比，^#P<0.05，^##P<0.01；与模型组相比，^*P<0.05，^**P<0.01。

3结论

油菜花粉水提物能够降低高脂血症大鼠的TG、TC、LDL-C水平，同时增加高脂血症大鼠HDL-C水平，有望开发成降脂药物。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。

Claims (11)

1.制备油菜花粉水溶性提取物的方法，包括以下步骤：

1)直接将油菜花粉与水混合，常温搅拌，制得混合物水溶液；

2)将所得混合物水溶液进行抽滤或离心，分别得滤液或上清液和沉淀物；

3)将所得滤液或上清液经浓缩，得浓缩液；

4)将浓缩液干燥，得油菜花粉提取物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的油菜花粉与水以1:1～1:15的体积比混合，所述搅拌的时间为2～6小时，优选的搅拌的时间为4小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的抽滤为真空抽滤，所述的离心为3000～6000r/min离心10～30min；优选的，所述的离心为6000r/min离心10min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的浓缩为减压浓缩。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)所述的干燥为鼓风干燥、板式真空干燥、带式真空干燥或微波真空干燥。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法制备的油菜花粉水溶性提取物，其特征在于所述水溶性提取物含有多糖类物质，所述多糖类物质的单糖组成为甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖及鼠李糖。

7.一种制剂，其含有权利要求6所述的油菜花粉水溶性提取物和药学可接受的赋形剂。

8.根据权利要求7所述的制剂，其包括但不仅限于胶囊、颗粒剂、片剂、膏剂或丸剂。

9.一种保健食品，其含有权利要求6所述的油菜花粉水溶性提取物和食用辅料。

10.根据权利要求9所述的保健食品，其包含但不仅限于软糖、糖浆或饮料。

11.根据权利要求6所述的油菜花粉水溶性提取物在制备调节免疫、降血脂、抗衰老的药物、保健品或食品中的应用。