CN101686701A - 精制绿茶提取物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种改善苦味和后味的精制绿茶提取物。该精制绿茶提取物的特征在于：(1)(A)杨梅黄酮、(B)槲皮黄素和(C)山奈黄素的总含量与(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量之比((A)+(B)+(C))/((D)+(E))＝0.0000001～0.010；(2)非聚合型儿茶素类中的(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量((D)+(E))为0.01～29质量％；(3)非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为0.01～49质量％。

Description

精制绿茶提取物
技术领域
本发明涉及绿茶提取物的精制物及配合该精制绿茶提取物的饮食。
背景技术
作为儿茶素的效果，已经报道有α-淀粉酶活性阻碍作用等(例如，参考专利文献1)。为表现儿茶素的这些生理效果，必须方便地摄取大量儿茶素，因此，期待在饮食品中配合高浓度儿茶素的技术。
作为该方法之一，采取利用绿茶提取物的浓缩物等的茶提取物而将儿茶素添加到饮料等的饮食品当中的方法。然而，根据配合高浓度儿茶素的饮食品的种类的不同，例如，在红茶提取液或碳酸饮料中添加儿茶素等情况下，咖啡因和来自绿茶的苦涩味的残留对饮料的商品价值造成了很大损害。
作为从茶提取物中除去咖啡因等杂物的方法，已知的有吸附法(专利文献2～4)、提取法(专利文献5～6)等。另一方面，作为最新的技术，公开有通过减少绿茶提取物中本来存在的类黄酮(flavonoid)和黄酮醇苷元(flavonol aglycone)改善风味的技术等。例如，使绿茶提取物中含有表没食子儿茶素没食子酸酯和没食子儿茶素没食子酸酯，并控制非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为50质量％以上，且控制类黄酮类相对于表没食子儿茶素没食子酸酯和没食子儿茶素没食子酸酯的总合为0.0025以下，从而改善苦味的强度和美味的方法(专利文献7)。通过控制非聚合型儿茶素类中没食子酸酯体的比率为50质量％以上的同时，使黄酮醇苷元相对于非聚合型儿茶素类的含量小于0.002来减轻不愉快的苦味和涩味的方法(专利文献8)。然而，虽然在这些方法中苦味得到了改善，但是还无法改善摄取后的后味。
专利文献1：日本特开平3-133928号公报
专利文献2：日本特开平5-153910号公报
专利文献3：日本特开平8-109178号公报
专利文献4：日本特开2002-335911号公报
专利文献5：日本特开平1-289447号公报
专利文献6：日本特开昭59-219384号公报
专利文献7：日本特开2006-129757号公报
专利文献8：日本特开2007-1893号公报
发明内容
本发明提供一种精制绿茶提取物，其特征在于：
含有表没食子儿茶素没食子酸酯和/或其异构体、表儿茶素没食子酸酯和/或其异构体；
(1)(A)杨梅黄酮(myricetin)、(B)槲皮黄素(quercetin)和(C)山奈黄素(Kaempferol)的总含量，与(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量之比((A)+(B)+(C))/((D)+(E))＝0.0000001～0.010；
(2)非聚合型儿茶素类中的(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量((D)+(E))为0.01～29质量％；
(3)非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为0.01～49质量％。
并且，本发明提供配合了上述精制绿茶提取物的饮食品。
具体实施方式
本发明提供苦味和后味得到改善的精制绿茶提取物，以及含有该精制绿茶提取物的饮食品。
本发明者基于绿茶提取物的苦味改善和摄取后的后味的改善对于高浓度地含有儿茶素的茶提取物的持续摄取性非常重要这一看法，进行了研究。研究结果发现，减少黄酮醇类的同时减少非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率对于改善精制绿茶提取物的苦味和后味非常重要。本发明者经进一步详细研究发现，这样的精制绿茶提取物同时还能抑制着色。
根据本发明可以提供一种苦味和后味得到改善的同时着色得到抑制的精制绿茶提取物。因此，可以通过将该精制绿茶提取物配合到饮食品中来扩大其用途。
本发明中的非聚合型儿茶素类是指，儿茶素、没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯和没食子儿茶素没食子酸酯等非表型儿茶素类和，表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和表没食子儿茶素没食子酸酯等表型儿茶素类的总称。
本发明中的非聚合型儿茶素类没食子酸酯体是指，没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素和表没食子儿茶素没食子酸酯的总称。本发明的精制绿茶提取物优选含有表没食子儿茶素没食子酸酯和/或其异构体和、表儿茶素没食子酸酯和/或其异构体。
此外，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是指，以上述4种的总质量相对于8种非聚合型儿茶素类的总质量的百分率表示的数值。而且，本发明的表没食子儿茶素没食子酸酯的异构体是指没食子儿茶素没食子酸酯，表儿茶素没食子酸酯的异构体是指儿茶素没食子酸酯。
本发明中的黄酮醇类是指杨梅黄酮、槲皮黄素和山奈黄素，黄酮醇类的含量为上述3种黄酮醇类的总质量。这些黄酮醇类的含量能够通过HPLC的分离分析按各成分分别定量。
本发明中的总多酚类是指，将其含量按照酒石酸铁法使用没食子酸乙酯作为标准液，作为没食子酸的换算量求出的物质。而且，本发明中的咖啡因的含量能够通过HPLC的分离分析进行定量。
本发明中的黄酮醇类((A)杨梅黄酮、(B)槲皮黄素和(C)山奈黄素)的总含量与(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量之比((A)+(B)+(C))/((D)+(E))＝0.0000001～0.010，优选为0.00001～0.009，更优选为0.0001～0.0085，特别优选为0.0001～0.007。
另一方面，本发明中的非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为0.01～49质量％，优选为0.1～44质量％，更优选为1～39质量％，特别优选为5～29质量％。
并且，本发明的非聚合型儿茶素类中的(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量((D)+(E))为0.01～29质量％，优选为0.01～27质量％，更优选为0.1～25质量％，特别优选为1～23质量％。
由于本发明的精制绿茶提取物中的黄酮醇类、没食子酸酯体以及表没食子儿茶素没食子酸酯及其异构体满足上述三个条件，所以能够改善精制绿茶提取物的摄取时的苦味和后味的同时，能够抑制着色。
并且，为了将((A)+(B)+(C))/((D)+(E))调节为上述范围，有必要减少食品中的黄酮醇类的绝对量，或是考虑与儿茶素的没食子酸酯体的关系而相对地减少饮食品中包含的黄酮醇类。例如，在饮食品中加入各成分使得上述关系成立的方法，除此以外，还可以举出如下方法：在只有乙醇或者含有乙醇的氛围下如后所述那样对绿茶提取物施以吸附剂处理的方法；将绿茶提取物分散或溶解在水或者有机溶剂和水的混合液中之后，如后所述那样用活性炭和、酸性白土或活性白土进行接触处理的方法；或是上述这些方法的组合等。
本发明中的(F)咖啡因/(G)非聚合型儿茶素类的含量比优选为0.0001～0.25，更优选为0.001～0.15，进一步优选为0.001～0.1，特别优选为0.001～0.08。如果在该范围内，则在摄取非聚合型儿茶素类时不会摄取过多咖啡因，在苦味、后味的方面也优选。
本发明中的(G)非聚合型儿茶素类/(H)总多酚类的质量含量比优选为0.80～1.2，更优选为0.85～1.15，进一步优选为0.9～1.1。如果在该范围内，则可以降低精制绿茶提取物中存在的除非聚合型儿茶素类以外的其它成分的存在比，所以优选。
从方便地摄取大量儿茶素的目的出发，本发明的精制绿茶提取物的固形物中，非聚合型儿茶素类的含量优选为25～95质量％，更优选为40～95质量％，进一步优选为50～90质量％，特别优选为55～80质量％。
作为本发明中所用的绿茶提取物，可以举出由绿茶叶得到的提取液。作为使用的茶叶，更具体地说，可以举出由Camellia属，例如由C.sinensis、C.assamica以及薮北种或它们的杂交种的茶叶制成的茶叶。制成的茶叶中，包括煎茶、粗茶、玉露、碾茶和炒青等绿茶类。也可以使用实施了超临界状态的二氧化碳接触处理后的茶叶。
关于提取茶的方法，按照搅拌提取、柱提取、滴落式提取等现有方法进行。也可以在提取时预先在水中添加抗坏血酸钠等的有机酸或有机酸盐类。也可以通过沸腾脱气或通入氮气等的惰性气体来除去溶解氧，也可以并用在所谓非氧化的氛围下进行提取的方法。通过这些方法得到的提取液可以直接使用于本发明的精制绿茶提取物的制作，也可以经干燥、浓缩后用于本发明的精制绿茶提取物的制作。作为茶提取物的形态，可以举出液状、浆状、半固体状、固体状。
在本发明中使用的绿茶提取物中，作为从茶叶提取的提取液的替代，也可以将绿茶提取物的浓缩物溶解或稀释在水或有机溶剂中后使用，也可以并用来自茶叶的提取液和绿茶提取物的浓缩物。
在此，绿茶提取物的浓缩物是指，对用热水或水溶性有机溶剂从茶叶中提取的提取物进行浓缩后得到的产物，例如，按照日本特开昭59-219384号公报、日本特开平4-20589号公报、日本特开平5-260907号公报、日本特开平5-306279号公报等中记载的方法调制的产物。具体而言，作为绿茶提取物，可以使用市售的Tokyo Food Techno Co.Ltd.，的“Polyphenon”、伊藤园株式会社的“TEAFURAN”、太阳化学株式会社的“Sunphenon”等粗儿茶素制剂作为固体的绿茶提取物。
在本发明中，从苦味和后味的改善、着色抑制的观点出发，作为精制绿茶提取物的原料的绿茶提取物，优选使用的绿茶提取物的((A)+(B)+(C))/((D)+(E))的质量比为0.0035～0.01(优选为0.004～0.0095，更优选为0.0045～0.009)，非聚合型儿茶素类浓度为20～50质量％(优选为25～45质量％，更优选为30～40质量％)，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为5～53质量％(优选为10～52质量％，更优选为15～49质量％)，咖啡因/非聚合型儿茶素类的质量含量比为0.01～0.25(优选为0.01～0.22，更优选为0.01～0.20)。
在本发明中，在将绿茶提取物直接、或是将绿茶提取物分散或溶解在水或有机溶剂水溶液中的状态下，使其与活性炭、酸性白土和/或活性白土(以下，也称为“酸性白土等”)接触，从而精制绿茶提取物。
对于绿茶提取物与活性炭和酸性白土等的接触顺序没有特别限定，例如，可以举出：(1)将绿茶提取物分散或溶解在水或有机溶剂水溶液中之后，与活性炭、酸性白土等进行接触的方法；(2)将活性炭和酸性白土等分散在水或有机溶剂水溶液中之后，与绿茶提取物进行接触处理的方法；(3)在酸性白土等的存在条件下，使绿茶提取物先与水或有机溶剂水溶液接触，然后与活性炭接触的方法。其中，优选(1)和(3)的方法。可以在(1)～(3)的方法中的各工序间插入过滤工序，过滤后再进行后面的工序。
为了得到高效地提取非聚合型儿茶素类的精制绿茶提取物，在进行接触处理的时候，优选将pH调节在4～6范围后进行。为了调节pH，可以添加柠檬酸、乳酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸等的有机酸，并且使有机酸和非聚合型儿茶素类的质量比率(有机酸/非聚合型儿茶素类)在0.01～0.20范围内。
接触处理可以按照间歇式、洗脱柱连续处理等任意方法进行。例如，绿茶提取物和活性炭的接触方法，可以按照利用活性炭柱的连续处理等方法进行。通常采用的方法是：添加粉末状的活性炭等，搅拌，选择性地吸附咖啡因后，由过滤操作除去咖啡因，从而得到过滤液的方法；或者是，使用填充有颗粒状的活性炭等的洗脱柱进行连续处理，从而选择性地吸附咖啡因的方法等。
作为绿茶提取物的精制中使用的有机溶剂，优选水溶性有机溶剂，例如，可以举出甲醇、乙醇等醇类，丙酮等酮类，醋酸乙酯等酯类，特别是如果考虑在饮食品中的使用，优选乙醇。作为水，可以举出离子交换水、自来水、天然水等，特别从味道方面考虑优选离子交换水。
有机溶剂和水的混合质量比优选为60/40～97/3，更优选为60/40～75/25，特别优选为85/15～95/5，从非聚合型儿茶素类的提取效率和绿茶提取物的精制效率等方面考虑而优选。
至于绿茶提取物和水或有机溶剂水溶液的比例，相对于混合液100质量份，优选添加10～40质量份绿茶提取液(干燥质量换算)，更优选添加10～30质量份，特别优选添加15～30质量份进行处理，此时能够高效地处理绿茶提取物而特别优选。
在接触处理时，优选设置10～180分钟左右的成熟时间，这些处理可以在10～60℃条件下进行，特别优选在10～50℃，更优选在10～40℃条件下进行。
作为接触处理中所用的活性炭，如果是通常工业级的活性炭则没有特别限制，例如，可以采用ZN-50(北越碳素会社制造)，KURARAYCOAL GLC，KURARAY COAL PK-D，KURARAY COAL PW-D(KURARAY CHEMICAL会社制造)，SHIRASAGI AW50、SHIRASAGIA、SHIRASAGI M、SHIRASAGI C(武田药品工业会社制造)等市售品。
活性炭的细孔体积优选为0.01～0.8mL/g，特别优选为0.1～0.8mL/g。并且，比表面积优选为800～1600m2/g，特别优选为900～1500m2/g的范围。另外，这些物性值是按照氮吸附法测定的值。
从咖啡因除除效率、过滤工序中滤饼阻力小的方面考虑，相对于水或有机溶剂水溶液100质量份，活性炭的添加量优选为0.5～8质量份，特别优选0.5～3质量份。
接触处理中所用的酸性白土或活性白土都含有SiO2、Al2O、Fe2O3、CaO、MgO等一般化学成分，优选SiO2/Al2O3比为3～12，特别优选为4～9。并且，优选酸性白土或活性白土的组成中Fe2O3的含有量为2～5质量％、CaO的含有量为0～1.5质量％、MgO的含有量为1～7质量％。
活性白土是用硫酸等矿酸处理天然产的酸性白土(蒙脱石系粘土)而得到的产物，是具有大的比表面积和吸附能力的多孔质构造的化合物。已知通过进一步对酸性白土进行酸处理可改变比表面积，并且使脱色能力得到改善、使物性发生改变。
酸性白土或活性白土的比表面积根据酸处理的程度等而不同，优选为50～350m2/g，pH(5质量％的悬浮液)优选为2.5～8，特别优选为3.6～7。例如，作为酸性白土，可以使用MIZUKA-ACE#600(水泽化学工业公司制造)等的市售品。
而且，相对于活性炭1质量份，酸性白土等的比例(按质量比)优选为1～10，优选活性炭∶酸性白土或活性白土＝1∶1～1∶6。
相对于水或对有机溶剂水溶液100质量份，优选添加酸性白土等2.5～25质量份，特别优选添加2.5～15质量份。如果酸性白土等的添加量太少，则具有咖啡因除去效率降低的倾向，而如果酸性白土等的添加量太多的话，则过滤工序中的滤饼的阻力具有变大的倾向。
由水或有机溶剂水溶液分离活性炭等时的温度优选为-15～78℃，更优选为-5～40℃。如果在这个温度范围以外，则会出现分离性变差、溶液的性状发生改变等的情况。
分离方法可以使用公知的技术，例如，除了所谓的过滤器分离和离心分离等方法以外，也可以通过装填有活性炭等粒状物质的洗脱柱进行分离等。
而且，在本发明中，在对绿茶提取物进行精制的时候可以使用合成吸附剂。合成吸附剂通常是不溶性的三维交联结构聚合物，其实质上不具有离子交换基那样的官能基。优选可以使用离子交换能力小于1meq/g的合成吸附剂。作为本发明中使用的合成吸附剂，可以使用其母体是苯乙烯类的产品，例如AMBERLITE XAD4、AMBERLITEXAD16HP、AMBERLITE XAD1180、AMBERLITE XAD2000(供应商：美国罗门哈斯公司)，DIAION HP20、DIAION HP21(三菱化学会社制造)，SEPABEADS SP850、SEPABEADS SP825、SEPABEADS SP700、SEPABEADS SP70(三菱化学会社制造)，VPOC 1062(拜尔公司制造)；亲核取代溴原子从而增强吸附力的化学修饰苯乙烯类，例如SEPABEADS SP205、SEPABEADS SP206、SEPABEADS SP207(三菱化学会社制造)；甲基丙烯酸系，例如DIAION HP1MG、DIAIONHP2MG(三菱化学会社制造)；苯酚类，例如AMBERLITE XAD761(罗门哈斯公司制造)；丙烯酸系，例如AMBERLITE XAD7HP(罗门哈斯公司制造)；聚乙烯类，例如TOYOPEARL，HW-40C(东曹会社制造)；葡聚糖类，例如SEPHADEX，LH-20(Pharmacia公司制造)等。
作为合成吸附剂，优选其母体是苯乙烯类、甲基丙烯酸类、丙烯酸类、聚乙烯类，从儿茶素和咖啡因的分离性的观点出发特别优选苯乙烯类。
作为在本发明中使绿茶提取物吸附在合成吸附剂上的手段，采用如下方法：间歇方法，即，在绿茶提取物中添加合成吸附剂，搅拌吸附后，由过滤操作回收合成吸附剂；或者，洗脱柱方法，使用填充有合成吸附剂的洗脱柱以连续处理方式进行吸附处理。从生产率的观点出发，优选使用洗脱柱的连续处理方法。从非聚合型儿茶素类的吸附效率等的观点出发，合成吸附剂的使用量相对于绿茶提取物优选为10体积％，更优选为15体积％，特别优选为20体积％。
对于填充有合成吸附剂的洗脱柱，优选预先在SV(空间速度)＝0.5～10[h-1]、相对于合成吸附剂的通液倍数为2～10[v/v]的通液条件下用95体积％乙醇水溶液进行洗涤，从而除去合成吸附剂的原料单体和其他的杂质等。然后，在SV＝0.5～10[h-1]、相对于合成吸附剂的通液倍数为1～60[v/v]的通液条件下进行水洗，从而除去乙醇，并将合成吸附剂所含液体置换为水体系，通过该方法能够提高非聚合型儿茶素类的吸附能力。
作为在洗脱柱中通入绿茶提取物时的条件，在使其吸附在合成吸附剂上的情况下，从对树脂的吸附效率的观点出发，绿茶提取物中的非聚合型儿茶素类的浓度优选为0.1～22质量％，更优选为0.1～15质量％，进一步优选为0.5～10质量％，特别优选为0.5～3质量％。
作为将绿茶提取物通入填充有合成吸附剂的洗脱柱中的条件，优选在通液速度SV(空间速度)＝0.5～10[h-1]、相对于合成吸附剂的通液倍数为0.5～20[v/v]的条件下进行通液。如果是10[h-1]以下的通液速度和20[v/v]以下的通液量，则能够充分吸附非聚合型儿茶素类。
优选在吸附绿茶提取物后，用水或有机溶剂水溶液洗涤合成吸附剂。作为洗涤合成吸附剂时所用的水溶液，从非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，优选pH7以下的水，也可以使用水与水溶性有机溶剂的混合溶液。作为水溶性有机溶剂，可以举出丙酮、甲醇、乙醇等，从用于饮食品的观点出发，优选乙醇。从非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，含有的有机溶剂的浓度优选为0～20质量％，更优选为0～10质量％，进一步优选为0～5质量％。
在该洗涤工序中，优选以通液速度SV(空间速度)＝0.5～10[h-1]、相对于合成吸附剂的通液倍数1～10[v/v]来除去合成吸附剂上吸附的杂质。进一步，从杂质的除去效果和非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，更优选以通液速度SV＝0.5～5[h-1]、通液倍数1～5[v/v]进行洗涤。
接着，用有机溶剂水溶液或碱性水溶液洗脱非聚合型儿茶素类。
作为有机溶剂水溶液，使用水溶性有机溶剂和水的混合溶液。作为水溶性有机溶剂，可以举出丙酮、甲醇、乙醇等。其中，从用于饮食品的观点出发，优选为乙醇。从非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，水溶性有机溶剂的浓度优选为20～70质量％，更优选为30～60质量％，进一步优选为30～50质量％。
作为在非聚合型儿茶素类的洗脱中所使用的碱性水溶液，适合使用碱金属盐和碱土金属类的碱性水溶液，优选钠系的碱性水溶液，例如氢氧化钠水溶液、碳酸钠水溶液等。并且，优选碱性水溶液的pH在7～14范围。从非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，pH优选为9～14.0，特别优选为10～13.5。作为pH 7～14的钠系水溶液，可以举出4％以下的氢氧化钠水溶液、1N-碳酸钠水溶液等。可以在碱性水溶液中混合水溶性有机溶剂。从咖啡因和儿茶素的分离性的观点出发，有机溶剂的浓度优选为0～90质量％的范围，更优选为0～50质量％，进一步优选为0～20质量％。
在洗脱工序中，作为洗脱时所使用的碱性水溶液可以使用pH相互不同的2种以上的碱性水溶液，按照pH降低的顺序使这些碱性水溶液与合成吸附剂接触。在不同的pH区间，脱附不同的非聚合型儿茶素类和其他的成分。
优选在通液速度SV(空间速度)＝2～10[h-1]、相对于合成吸附剂的通液倍数为1～30[v/v]的条件下洗脱非聚合型儿茶素类。从生产率和非聚合型儿茶素类的回收率的观点出发，更优选在通液速度SV＝3～7[h-1]、通液倍数为3～15[v/v]的条件下进行洗脱。
在进行精制处理后，本发明中使用过的合成吸附剂可以通过指定的方法而能够再予以使用。具体而言，通过通入乙醇等的有机溶剂使合成吸附剂上面吸附的咖啡因等的不需要的成分脱附。或者是，通过通入氢氧化钠等的碱性水溶液进行洗涤，使合成吸附剂上残留的水溶性成分全部脱附。进一步，可以再组合进行水蒸气洗涤。
用碱性水溶液洗脱的非聚合型儿茶素类的洗脱液是碱性，从非聚合儿茶素类的稳定性的观点出发，通常将洗脱液的pH调节为7以下，优选为1～6，更优选为1～5，特别优选为2～4。具体而言，可以利用酸进行中和、用电渗析除去碱金属离子，或用离子交换树脂除去碱金属离子。作为离子交换树脂特别优选H型的阳离子交换树脂。从工序的简便性出发，优选用离子交换树脂进行pH调节。作为阳离子交换树脂，具体而言，可以使用AMBERLITE 200CT、AMBERLITE IR120B、AMBERLITE IR124、AMBERLITE IR118(供应商：美国罗门哈斯公司)，DIAION SK1B、DIAION SK1BH、DIAION SK102、DIAIONPK208、DIAION PK212(三菱化学会社制造)等。
从呈味和提高产品稳定性的观点出发，优选对非聚合型儿茶素类的洗脱液进行浓缩并通过固液分离来除去沉淀物。浓缩处理可以通过减压蒸馏、薄膜蒸馏、膜浓缩等方法进行。从呈味和沉淀物的分离性的观点出发，浓缩倍率优选为2～500倍，更优选为2～250倍，特别优选为2～125倍。从呈味和沉淀物的分离性的观点出发，浓缩后的非聚合型儿茶素类的浓度优选为0.1～70质量％，更优选为0.2～50质量％，特别优选为0.5～25质量％。作为固液分离的具体操作方式，可以举出过滤和/或离心分离处理等。从饮料的呈味和稳定性的观点出发，对绿茶提取物水溶液进行固液分离而得到的水溶性部分的绿茶提取物水溶液的浊度优选为0.1～100NTU，更优选为0.5～70NTU，进一步优选为1～50NTU。
作为固液分离的方法，可以采用食品工业中能使用的方法。例如，作为采用膜过滤方式进行固液分离时的膜过滤条件，温度优选为5～70℃，更优选为10～40℃。从达到指定的浊度的观点出发，膜孔径优选为0.1～10μm，更优选为0.1～5μm，从过滤所需的时间和悬浊成分的分离性的观点出发膜孔径特别优选为0.1～2μm。作为膜孔径的测定方法，可以举出压汞法、起泡点测试方法、细菌过滤法等通常的测定方法，优选采用起泡点测试方法求出的值。作为膜过滤中使用的膜的材质，可以使用高分子膜、陶瓷膜、不锈钢膜等。
而且，作为离心分离器，优选分离板型、圆筒型、倾析器型等通常的设备。作为离心分离条件，温度优选为5～70℃，更优选为10～40℃，并且，优选将转速和时间调节成达到指定浊度的条件。例如在分离板型的情况下，转速优选为3000～10000rpm，更优选为5000～10000rpm，特别优选为6000～10000rpm，时间优选为0.2～30分钟，更优选为0.2～20分钟，特别优选为0.2～15分钟。
而且，从饮料的色调稳定的观点出发，优选对非聚合型儿茶素类的洗脱液进行脱色。作为具体的脱色操作，可以通过使精制绿茶提取物直接与选自活性炭、活性白土和酸性白土中的至少1种接触而进行脱色；或者是，通过将精制绿茶提取物分散或溶解在水或有机溶剂水溶液中之后，再与选自活性炭、活性白土和酸性白土中的至少1种接触，从而进行脱色。此外，至于接触处理方法，可以采用与上述同样的方法。
如果希望进一步降低绿茶提取物的苦味，则可以用具有鞣酸酶活性的酶进行处理。从呈味的观点出发，优选在吸附于合成吸附剂上之前进行酶处理。其中优选鞣酸酶。例如，可以举出培养曲霉属、青霉属、根霉属的鞣酸酶生产菌而得到的鞣酸酶。其中优选来自米曲霉的鞣酸酶。
具体而言，作为具有鞣酸酶活性的酶的市售品，可以利用PectinasePL天野(天野酶制品株式会社制造)，Hemi cellulase 90(天野酶制品株式会社制造)，Tannase KTFH(龟甲万株式会社制造)等。在本发明中用具有鞣酸酶活性的酶进行的处理，即酶反应，优选用tannin acylhydrolase，EC 3.1.1.20等进行反应。作为市售品，可以举出龟甲万株式会社制造的商品名为“Tannase”的鞣酸酶和三共株式会社制造的鞣酸酶“三共”等。
本发明中使用的具有鞣酸酶活性的酶，优选具有500～100,000U/g的酶活性，如果酶活性在500U/g以下的话，则为了在工业上限定的时间内进行处理而需要大量的酶，如果酶活性在100,000U/g以上的话，则由于酶反应速度太快而变得难以控制反应体系。在此，1Unit表示在30℃水中水解丹宁酸中包含的1微摩尔酯键的酶量。在此，具有鞣酸酶活性是指，具有分解丹宁的活性，可以使用具有该活性的任意的酶。
用具有鞣酸酶活性的酶进行处理时，非聚合型儿茶素类的浓度优选为0.1～22质量％，更优选为0.1～15质量％，特别优选为0.5～10质量％，最优选为0.5～3质量％。
相对于绿茶提取物中的非聚合型儿茶素类，所添加的具有鞣酸酶活性的酶优选成为1～300Unit/g-非聚合型儿茶素类，更优选为3～200Unit/g-非聚合型儿茶素类，特别优选为5～150Unit/g-非聚合型儿茶素类。
酶处理的温度优选是能够得到最佳酶活性的0～70℃，更优选为0～60℃，特别优选为5～50℃。
为了结束酶反应，使酶活性失活。酶失活的温度优选为70～100℃，同时，该失活温度的保持时间优选为10秒至20分钟。如果失活温度太低的话，则难以在短时间内充分失活，所以将会继续发生酶反应，从而无法在非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率达到所希望的范围内的值的时候停止酶反应。而如果在到达失活温度之后保持时间太短的话，则难以使酶活性充分失活，所以将会继续发生酶反应。而如果保持时间太长的话，则会发生非聚合型儿茶素类的非差向异构化反应而不优选。
至于酶反应的失活方法，可以采用间歇式、或板式热交换器那样的通过以连续式进行加热而使其停止的方法。并且，在鞣酸酶处理的失活结束后，可以通过离心分离等操作净化茶提取物。
按照上述方法得到的精制绿茶提取物满足如下特性，即，将该精制绿茶提取物调整为非聚合型儿茶素类的浓度达到0.2质量％，并采用分光光度计测定在480nm处的吸光度(OD480)时候的值为0.06以下，优选为0.05以下，更优选为0.04以下。
因此，本发明的精制绿茶提取物不仅其苦味和后味得到了改善，着色也得到了抑制，所以能够扩大用途。例如，可以将本发明的精制绿茶提取物直接配合在食品或饮料中使用。在这种情况下，可以通过减压浓缩、薄膜浓缩等方法除去溶剂。此外，当期望精制绿茶提取物的产品形态为粉体的情况下，可以通过喷雾干燥或冻结干燥等方法进行粉体化。根据本发明得到的精制绿茶提取物，由于其苦味和后味得到降低，所以不仅能够配合在饮料中，还可以作为原料配合在各种食品中。其中，特别优选制成容器装饮料。
如果将使用了本发明的精制绿茶提取物的食品或容器装饮料中的非聚合型儿茶素类的浓度调整为0.05～0.5质量％，优选为0.06～0.5质量％，更优选为0.08～0.5质量％，进一步优选为0.092～0.4质量％，更进一步优选为0.11～0.3质量％，特别优选为0.12～0.3质量％，则能够得到醇厚、无杂味、风味良好的食品或容器装饮料，所以从这方面考虑是优选的。
本发明的容器装饮料中优选配合苦涩味抑制剂使得容易饮用。作为所使用的苦涩味抑制剂优选环糊精。作为环糊精，可以使用α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精和支链α-环糊精、支链β-环糊精、支链γ-环糊精。本发明的容器装饮料中还可以单独配合或者同时配合抗氧化剂、香料、各种酯类、有机酸类、有机酸盐类、无机酸类、无机酸盐类、无机盐类、色素类、乳化剂、防腐剂、调味料、甜味剂、酸味剂、胶类、油、维生素、氨基酸、果汁提取物类、蔬菜提取物类、花蜜提取物类、pH调节剂、品质稳定剂等添加剂。
从呈味和非聚合型儿茶素类的稳定性的方面考虑，本发明的容器装饮料的pH在25℃下为2～7，优选为2～6.5。
对于本发明的容器装饮料而言，从确保每日必须的摄取量以获得非聚合型儿茶素类的生理效果的意图出发，每1瓶(350～500mL)本发明容器装饮料中的非聚合型儿茶素类的配合量为300mg以上，优选为450mg以上，更优选为500mg以上。
作为用于本发明的容器装饮料的容器，可以提供以聚对苯二甲酸乙二醇酯为主要成分的成型容器(所谓PET瓶)、金属罐、与金属箔或塑料膜复合的纸容器、瓶等的通常形态的容器。
而且，例如，将上述的容器装饮料灌入金属容器等容器中后，可以加热杀菌时，按食品卫生法中规定的杀菌条件进行制造。当PET瓶或纸容器等容器不适合蒸馏杀菌时，可以采用如下方法：预先在与上述同等的杀菌条件下，例如用板式热交换器等经高温短时间杀菌后，待冷却至一定温度后再灌入容器中等。此外，也可以在无菌条件下向已灌入饮料的容器中搭配其他成分。
实施例
(1)非聚合型儿茶素类及咖啡因的测定
用过滤器(0.45μm)过滤试料溶液，然后用岛津制作所制造的高速液相色谱(型号SCL-10AVP)，安装导入十八烷基的液相色谱充填柱L-columnTM ODS(4.6mm×250mm；财团法人化学物质评价研究机构制造)，在柱温35℃下运用梯度法进行测定。流动相A液为含有0.1mol/L醋酸的蒸馏水溶液，流动相B液为含有0.1mol/L醋酸的乙腈溶液，流速为1mL/分钟，试样注入量为10μL，UV检测器波长为280nm，在此条件下进行测定。此外，梯度条件如下所示。
时间(分钟)    A液浓度(体积％)     B液浓度
0             97％                3％
5             97％                3％
37            80％                20％
43            80％                20％
43.5          0％                 100％
48.5          0％                 100％
49            97％                3％
60            97％                3％
(2)杨梅黄酮、槲皮黄素和山奈黄素(黄酮醇类)的测定
用过滤器(0.45μm)过滤试料溶液，然后用WATERS公司制造的高速液相色谱(型号Waters2695)，色谱柱中装入Shimpach VP ODS(150×4.6mmI.D.)，在柱温40℃下运用梯度法进行测定。流动相A液为含有0.05％磷酸的蒸馏水溶液，流动相B液为甲醇溶液，流速为1mL/L，试样注入量为10μL，UV检测器波长为368nm，在此条件下进行测定。此外，梯度条件如下所示。
时间(分钟)    A液浓度(体积％)     B液浓度
0             95％                5％
20            80％                20％
40            30％                70％
41            0％                 100％
46            0％                 100％
47            95％                5％
60            95％                5％
(3)总多酚类的测定
总多酚类的测定根据酒石酸铁法进行，用没食子酸乙酯作为标准液，作为没食子酸的换算量求出(参考文献：“绿茶多酚”饮食品用功能性素材有效利用技术系列No.10)。以酒石酸铁标准溶液5mL使试料5mL发色，用磷酸缓冲液定容至25mL，在540nm处测定吸光度，从没食子酸乙酯的标准曲线求出总多酚类。酒石酸铁标准液的制作：用蒸馏水溶解100mg硫酸亚铁·7水合物、500mg酒石酸钠·钾(罗谢尔盐)制成100mL。磷酸缓冲液的制作：混合1/15M磷酸氢二钠溶液和1/15M磷酸二氢钠溶液调节至pH7.5。
(4)固形物含量的测定
称量试料约1g，在105℃下干燥3小时以上，再称量。然后根据下列计算式算出。
固形物含量＝干燥后的重量/干燥前的重量×100
(5)OD480的测定
用日立公司制造的U2810型分光光度计测定将非聚合型儿茶素类的浓度调整到0.2质量％的试料溶液在480nm处的吸光度。
(6)根据硫酸奎宁法(等价浓度试验法)评价苦味和后味
将硫酸奎宁2水合物调整到对应于表中记载的苦味强度的浓度。试饮评价样品之后，判断其苦味强度与标准苦味溶液中哪个样品相等。由评价小组5名成员确认苦味强度及后味。(参考文献：新版感官检验手册，日本科学技术联盟感官检验委员会p448-449，感知和心理物理学，5，1696，347-351)
[表1]
苦味标准溶液浓度
  苦味強度   硫酸奎宁2水合物(g/100mL aq.)
  1   0.00023
  2   0.00050
  3   0.00094
  4   0.00157
  5   0.00241
  6   0.00388
  7   0.00608
  8   0.00985
  9   0.01572
  10   0.02568
制造例1：“绿茶提取物1”
在3kg绿茶叶(肯尼亚产，大叶种)中添加88℃的热水45kg，搅拌60分钟间歇提取。接着，用100目金属丝网粗过滤后，进行离心分离操作从而除去提取液中的细粉末，得到36.8kg“绿茶提取液”(pH5.3)(绿茶提取液中的非聚合型儿茶素类浓度＝0.88质量％、非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率＝51.6质量％、咖啡因＝0.17质量％)。冻结干燥绿茶提取液的一部分，得到“绿茶提取物1”。“绿茶提取物1”中的非聚合型儿茶素类浓度＝32.8质量％、非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率＝51.6质量％、咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.193。
制造例2：“绿茶抽出物2”
在3kg绿茶叶(肯尼亚产，大叶种)中添加88℃的热水45kg，搅拌60分钟间歇提取。接着，用100目金属丝网粗过滤后，进行离心分离操作从而除去提取液中的细粉末，得到36.8kg“绿茶提取液”(pH5.3)(绿茶提取液中的非聚合型儿茶素类浓度＝0.88质量％、非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率＝51.6质量％、咖啡因＝0.17质量％)。将该绿茶提取液的温度保持在15℃，添加鞣酸酶(龟甲万公司制造的Tannase KTFH，500U/g)使其相对绿茶提取液的浓度为430ppm，保持55分钟，加热溶液至90℃，保持2分钟使酶失活，停止反应(pH5.2)。然后，在70℃、6.7kpa的条件下，以减压浓缩进行浓缩处理至Brix浓度达到20％，再进行喷雾干燥，得到鞣酸酶处理后的1.0kg粉末状的“绿茶提取物2”。得到的“绿茶提取物2”的非聚合型儿茶素类浓度＝30.5质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率＝31.6质量％，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.183。
实施例1
在25℃、250rpm的搅拌条件下将100g酸性白土(MIZUKA-ACE#600，水泽化学工业公司制造)分散在800g的92质量％乙醇水溶液中，搅拌约10分钟之后，投入120g“绿茶提取物1”、80g“绿茶提取物2”的混合物，直接在室温下继续搅拌约3小时(pH4.1)。然后，用2号滤纸过滤酸性白土和生成的沉淀。在得到的滤液中添加417g离子交换水，在15℃、100rpm搅拌条件下搅拌约5分钟。再用小型冷却离心分离器分离该混合溶液(日立工机会社制造)，在操作温度15℃下分离析出的悬浊成分(6000rpm，5分钟)。使分离的溶液与30g活性炭(KURARAY COAL GLC，KURARAY CHEMICAL会社制造)接触，继续用0.2μm的膜过滤器进行过滤。然后，经冻结干燥得到“精制绿茶提取物1”。
“精制绿茶提取物1”中包含非聚合型儿茶素类59.5质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是44.1质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.061，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.928，非聚合型儿茶素类中的表没食子儿茶素没食子酸酯及没食子儿茶素没食子酸酯(EGCg+GCg)＝21.8质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00128。
进行风味评价的结果，苦味为6.0，后味为6.5。
实施例2
在25℃下，用8415g离子交换水搅拌溶解85g“绿茶提取物2”30分钟(鞣酸酶处理液)。在不锈钢柱1(内径110mm×高度230mm，容量2185mL)中填充合成吸附剂SP-70(三菱化学株式会社制造)2048mL。接着，以SV＝1(h-1)的速度在柱1中通入该鞣酸酶处理液(相对于合成吸附剂4倍容量)，舍弃流出液。接着，以SV＝1(h-1)的速度用2048mL(相对于合成吸附剂1倍容量)进行水洗。水洗后，以SV＝1(h-1)的速度通入4096mL(相对于合成吸附剂2倍容量)50质量％乙醇水溶液，得到4014g“树脂处理品1”(pH4.58)。该提取物中包含非聚合型儿茶素类1.89质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率36.2质量％。而且，咖啡因含量为0.281质量％。茶提取物的固形物中非聚合型儿茶素类为60.1质量％。
接着，在不锈钢柱2(内径22mm×高度145mm，容量55.1mL)中填充8.5g粒状活性炭“太阁”SGP(FUTAMURA CHEMICAL株式会社制造)。以SV＝1(h-1)的速度将1000g“树脂处理品1”通入柱2中(活性炭的量相对于鞣酸酶处理过的绿茶提取物为0.4)。进一步冻结干燥得到“树脂处理品2”，将其作为“精制绿茶提取物2”。
该“精制绿茶提取物2”中包含非聚合型儿茶素类77.6质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是26.1质量％。而且，咖啡因是0.02质量％。咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.003，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝1.072，EGCg+GCg＝18.1质量％，黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00017。
进行风味评价的结果，苦味为5.0，后味为5.3。
实施例3
在25℃、250rpm搅拌条件下，将100g绿茶提取物(POLYPHENONHG，三井农林会社制造)分散在100g的70质量％乙醇水溶液中，投入25g活性炭KURARAY COAL GLC(KURARAY CHEMICAL会社制造)和30g酸性白土MIZUKA-ACE#600(水泽化学工业公司制造)后，继续搅拌约10分钟。接着，经30分钟滴入800g的95质量％乙醇水溶液后，直接在室温下继续搅拌30分钟。然后，再用2号滤纸过滤，继续用0.2μm膜过滤器进行再过滤。最后在过滤液中添加200g离子交换水，在40℃、0.0272kg/cm2条件下除去乙醇，喷雾干燥之后，得到粉末。将该粉末溶解在离子交换水中使浓度达到50质量％，在5℃、30分钟、3000rpm的条件下实施离心分离处理。采取这样得到的水溶液的上清液，进一步冻结干燥得到“精制绿茶提取物3”。
“精制绿茶提取物3”中包含非聚合型儿茶素类44.6质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是46.2质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.070，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.944，EGCg+GCg＝16.4质量％，黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00311。
进行风味评价的结果，苦味为6.5，后味为7.0。
比较例1
混合120g“绿茶提取物1”和80g“绿茶提取物2”。在该混合物中包含非聚合型儿茶素类32.3质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为43.6质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.181，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.806，EGCg+GCg＝11.1质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.01057。
进行风味评价的结果，苦味为6.2，后味为7.3。
比较例2
在“绿茶提取物1”中，非聚合型儿茶素类的浓度＝32.8质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率＝51.6质量％，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.193，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.809，EGCg+GCg＝13.1质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00786。
进行风味评价的结果，苦味为7.0，后味为8.0。
比较例3
在三井农林会社制造的POLYPHENON HG中，包含非聚合型儿茶素类31.9质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是54.6质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.189，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.820，EGCg+GCg＝13.4质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00340。
进行风味评价的结果，苦味为5.5，后味为8.5。
比较例4
在三井农林会社制造的POLYPHENON 70S中，包含非聚合型儿茶素类81.8质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是62.3质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.002，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.935，EGCg+GCg＝39.9质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00040。
进行风味评价的结果，苦味为8.2，后味为8.7。
比较例5
将6g水升温到50℃，加入3g绿茶提取物(商品名“PF-TP80”，Pharmafoods研究所制造)和0.075g活性白土(商品名“GALLEONEARTH”，水泽化学工业公司制造)，搅拌混合30分钟。再加入0.067g硅藻土(商品名“ラジオライト”，昭和化学工业制造)，过滤除去硅藻土和活性白土、不溶物。然后，加入0.45g活性炭(商品名“CARBORAFFIN”，Japan EnviroChemicals制造)，在50℃下搅拌混合30分钟。再加入0.132g粉末纤维素(商品名“KC Flock”，日本制纸化学公司制造)，吸滤除去活性炭和粉末纤维素。用蒸发器浓缩得到的水溶液，从而得到1.31g“精制绿茶提取物4”。
在“精制绿茶提取物4”中，包含非聚合型儿茶素类76.2质量％，非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率是74.6质量％。而且，咖啡因/非聚合型儿茶素类的比例＝0.085，非聚合型儿茶素类/总多酚类的比例＝0.881，EGCg+GCg＝46.1质量％、黄酮醇类/(EGCg+GCg)＝0.00016。
进行风味评价的结果，苦味为8.6，后味为9.0。
Figure G2008800170908D00211
实施例4
使用实施例1及实施例2的精制绿茶提取物调制表3记载的容器装饮料。基于食品卫生法进行杀菌处理和热包装填充制成容器装饮料。
[表3]
原材料名  配合比例(质量％)
  糖类   1.50
  盐类   0.33
  甜味剂   0.01
  维生素C   0.05
  果汁   0.10
  香料   0.20
  儿茶素制剂(实施例1或2)   2.11
  离子交换水   余量
  合计   100.00
从表2的各实施例和各比较例的比较可知，通过将精制绿茶提取物中的黄酮醇类与(EGCg+GCg)的质量比设为0.010以下，并将精制绿茶提取物中的(EGCg+GCg)的含量设为0.01～29质量％、且非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率设为0.01～49质量％，能够得到满足苦味和后味两方面的风味的同时着色得到抑制的精制绿茶提取物。尤其从实施例2可知，通过将非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率减少到26质量％以下，特别能够改善苦味和后味。

Claims (6)

1.一种精制绿茶提取物，其特征在于，
(1)(A)杨梅黄酮、(B)槲皮黄素和(C)山奈黄素的总含量与(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量之比((A)+(B)+(C))/((D)+(E))＝0.0000001～0.010；
(2)非聚合型儿茶素类中的(D)表没食子儿茶素没食子酸酯和(E)没食子儿茶素没食子酸酯的总含量((D)+(E))为0.01～29质量％；
(3)非聚合型儿茶素类中的没食子酸酯体的比率为0.01～49质量％。
2.根据权利要求1所述的精制绿茶提取物，其特征在于，
(F)咖啡因和(G)非聚合型儿茶素类的含量比(F)/(G)为0.0001～0.25。
3.根据权利要求1或2所述的精制绿茶提取物，其特征在于，
(G)非聚合型儿茶素类和(H)总多酚类的含量比(G)/(H)为0.8～1.2。
4.一种食品，其特征在于，
其中配合了权利要求1～3中任意一项所述的精制绿茶提取物。
5.一种饮料，其特征在于，
其中配合了权利要求1～3中任意一项所述的精制绿茶提取物。
6.根据权利要求5所述的饮料，其特征在于，
该饮料是容器装饮料。
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