CN101090964A - 磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途 - Google Patents

磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101090964A
CN101090964A CNA2005800272594A CN200580027259A CN101090964A CN 101090964 A CN101090964 A CN 101090964A CN A2005800272594 A CNA2005800272594 A CN A2005800272594A CN 200580027259 A CN200580027259 A CN 200580027259A CN 101090964 A CN101090964 A CN 101090964A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
asp
gly
leu
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2005800272594A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101090964B (zh
Inventor
尤里·I·科兹洛夫
知念秋人
泉井裕
原吉彦
安枝寿
康斯坦廷·V·赖巴克
埃卡特里纳·A·斯利文斯卡亚
乔安娜·Y·凯塔什基纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ajinomoto Co Inc
Original Assignee
Ajinomoto Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Co Inc filed Critical Ajinomoto Co Inc
Priority claimed from PCT/JP2005/014966 external-priority patent/WO2006016705A1/en
Publication of CN101090964A publication Critical patent/CN101090964A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101090964B publication Critical patent/CN101090964B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/24—Proline; Hydroxyproline; Histidine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/12—Methionine; Cysteine; Cystine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/20—Aspartic acid; Asparagine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/02—Aldehyde-lyases (4.1.2)
    • C12Y401/02009—Phosphoketolase (4.1.2.9)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/02—Aldehyde-lyases (4.1.2)
    • C12Y401/02022—Fructose-6-phosphate phosphoketolase (4.1.2.22)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了具有生产有用代谢物的能力的细菌，所述有用代谢物源自乙酰辅酶A，如L－谷氨酸、L－谷氨酰胺、L－脯氨酸、L－精氨酸、L－亮氨酸、L－半胱氨酸、琥珀酸酯和聚羟基丁酸酯，其中所述细菌被修饰从而增强D－木酮糖－5－磷酸磷酸转酮酶和/或果糖－6－磷酸磷酸转酮酶的活性。本发明还提供了使用所述细菌生产有用代谢物的方法。

Description

磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途
发明领域
本发明涉及生产有用的代谢物，特别是源自乙酰辅酶A(乙酰CoA)的那些代谢物的方法。本发明还涉及用于所述生产方法的新的细菌。
相关技术简述
通常，通过一些方法来生产细菌代谢的有用代谢物例如L-氨基酸、它们的中间体和其他化学物质，在所述方法中将分离自天然来源的细菌菌株或其突变体修饰以增强它们的生产力。
在适合于发酵的微生物中糖类是主要的碳源。Embden-Meyerhof和戊糖磷酸(戊糖-P)途径是微生物中中间糖代谢的两个初始途径。第三种途径，Entner-Doudoroff途径也是已知的，作为与羧酸途径的一些联系。在糖酵解期间，葡萄糖被代谢为主要的中间体化合物，例如磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸和乙酰辅酶A，它们在许多细胞化合物例如L-氨基酸、嘌呤和嘧啶、维生素等等的形成中被用作组分。并且，在糖酵解期间出现能量的产生(ATP和NADH)。糖酵解后形成的丙酮酸常常通过由pps基因编码的磷酸烯醇丙酮酸合酶转变回磷酸烯醇丙酮酸(PEP)，或通过由pdh基因等编码的丙酮酸脱氢酶转变回乙酰CoA。上述化合物之一，乙酰辅酶A，通过丙酮酸脱氢酶从丙酮酸形成，并伴有CO2的释放。一个碳原子的损失导致来源于乙酰CoA的有用化合物的生产得率(production yield)降低。
已经报道了双歧途径的两个酶，D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶(也称为“磷酸转酮酶”和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶。D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶(EC 4.1.2.9)催化木酮糖-5-磷酸的消耗磷酸性转化变成甘油醛-3-磷酸和乙酰磷酸，带有一个水分子的相伴性释放。果糖-6-磷酸磷酸转酮酶(EC 4.1.2.22)催化果糖-6-磷酸的耗磷酸性转化变成赤藓糖-4-磷酸和乙酰磷酸，带有一个水分子的相伴性释放。两种酶都形成乙酰CoA的前体-乙酰磷酸，而不经由CO2损失碳。已经在属于醋杆菌属(Acetobacter)(Schramm，M.等，J.Biol.Chem.，233(6)，1283-8(1958))，双歧杆菌属(Bifidobacterium)(Sgorbati，B.等，Antonie VanLeeuwenhoek.42(1-2)，49-57(1976)；Grill，J.P.等Curr Microbiol.，31(1)，49-54(1995))，乳杆菌属(Lactobacillus)(Posthuma，C.C.等，Appl.Environ.Microbiol.，68(2)，831-7(2002))，硫杆菌属(Thiobacillus)(Greenley，D.E.andSmith，D.W.，Arch.Microbiol.，122，257-261(1979))的细菌中，在属于假丝酵母属(Candida)、红酵母属(Rhodotorula)、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、毕赤酵母属(Pichia)、西洋蓍霉(Yarrowia)、汉逊酵母属(Hansenula)、汉逊酵母属、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、酵母属(Saccharomyces)、丝孢酵母属(Trichosporon)、温酵母属(Wingea)的酵母中(Evans，C.T.and Ratledge，C.，Arch.Microbiol.，139，48-52(1984)；Ratledge，C.and Holdsworth，J.E.，Appl.Microbiol.Biotechnol.，22，217-221(1985))报道了D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶(EC 4.1.2.9)。已经在细菌，例如木醋杆菌(Acetobacter xylinum)(Schramm，M.等，J.Biol.Chem.，233(6)，1283-8(1958))，球形双歧杆菌(Bifidobacteriumglobosum)和齿双歧杆菌(Bifidobacterium dentium)(Sgorbath，B.等，AntonieLeeuwenhoek，42，49-57(1976))，双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)(Gavini，F.等，Anaerobe，2，191-193(1996))中，和酵母，例如牧草红酵母(Rhodotorula graminis)、红酵母(Rhodotorulaglutinis)、假丝酵母属菌种(Candida sp.)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、Saccharomyces pastorianus(Whitworth，D.A.and Ratledge，C.，J.Gen.Microbiol.，102，397-401(1977))中报道了果糖-6-磷酸磷酸转酮酶(EC4.1.2.22)。已经报道了在某些生物体中由一种酶表现了两种活性(参见，例如，Schramm，M.等(J.Biol.Chem.，233(6)，1283-8(1958))；Sgorbati，B.等(AntonieVan Leeuwenhoek.42(1-2)，49-57(1976))；Meile，L.等(J.Bacteriol.，183(9)，2929-36(2001))的文章)。
已经克隆了来自两个物种的磷酸转酮酶基因并测定了它们的序列。它们是编码来自乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的xfp基因(Meile，L.等，J.Bacteriol.，183(9)，2929-36(2001))，和编码来自戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的xpkA基因(Posthuma，C.C.等，Appl.Environ.Microbiol.，68(2)，831-7(2002))。对国立生物技术信息中心(National Center forBiotechnology information)提供的微生物基因组数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi？CMD＝&DB＝genome)的搜索揭示了编码推定的磷酸转酮酶的几个基因。
通过导入木糖还原酶、木糖醇脱氢酶和另外的磷酸转酮酶的基因，来改善酵母从木糖生产乙醇的能力的方法是已知的(WO2003078643)。然而，从来没有报道过使用磷酸转酮酶基因用于消除二氧化碳的效果。
发明内容
本发明的目的是通过具有生产代谢物的能力的细菌菌株来增强有用代谢物的产生，以及提供使用这些菌株生产代谢物的方法。
本发明的目的是提供具有生产有用代谢物的能力的细菌，其中所述细菌被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述有用代谢物源自乙酰辅酶A。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述有用代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯(succinate)和聚羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate)构成的组。
本发明的目的是提供具有生产有用代谢物的能力的细菌，其中所述细菌天然不具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性，其中所述细菌已经用编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的DNA片段转化。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述有用代谢物源自乙酰辅酶A。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述有用代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯(succinate)和聚羟基丁酸酯(polyhydroxybutyrate)构成的组。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述细菌选自由肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、棒状杆菌型细菌(Coryneform bacterium)和芽孢杆菌属(Bacillus)细菌构成的组。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的细菌，其中所述细菌属于埃希氏菌属(Escherichia)或泛菌属(Pantoea)。
本发明的进一步的目的是提供生产有用代谢物的方法，包括在培养基中培养所述细菌，并从所述培养基中收集所述有用代谢物。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的方法，其中所述有用代谢物源自乙酰辅酶A。
本发明的进一步的目的是提供如上所述的方法，其中所述有用代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯和聚羟基丁酸酯构成的组。
通过在具有生产有用代谢物，特别是源自乙酰CoA的有用代谢物的能力的细菌中增强D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的能力，实现了这些目的，这使得更有效地利用碳和增加细菌的有用代谢物产量成为可能。由此，完成了本发明。
以下将详细描述本发明。
附图说明
图1显示来自戊糖乳杆菌(L.pentosus)和植物乳杆菌(L.plantarum)的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的比对(同一性98.5％)。
图2显示质粒pBS3的构建方法。
图3显示质粒pBS4S的构建方法。
图4显示质粒pBS5T的构建方法。
图5显示扩增了磷酸转酮酶基因的菌株和对照菌株在含有醋酸盐的基本培养基上的生长曲线。
图6显示扩增了磷酸转酮酶基因的菌株和对照菌株在基本培养基中的生长曲线。
图7(照片)显示含有磷酸转酮酶蛋白的细胞提取物的电泳。
图8显示使用扩增了磷酸转酮酶基因的菌株在生物素充足的条件下生产L-谷氨酸。
图9显示使用扩增了磷酸转酮酶基因的菌株在添加青霉素的情况下生产L-谷氨酸。
图10显示使用其中导入了磷酸转酮酶基因并降低了6-磷酸果糖激酶活性的菌株生产L-谷氨酸。
图11显示使用其中导入了磷酸转酮酶基因并降低了6-磷酸果糖激酶活性的菌株在存在青霉素的情况下生产L-谷氨酸。
图12显示使用扩增了磷酸转酮酶基因的菌株生产L-谷氨酰胺(Gln)。
优选实施方式的说明
本发明的细菌包括具有生产有用代谢物的能力的细菌，其中所述细菌已经被修饰以增加D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性。
本发明的细菌包括天然不具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性的细菌和天然具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性的细菌。通过将编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的基因导入这种细菌，细菌中乙酰CoA的产生力得到增强，引起有用代谢物产量的提高。
在本发明的细菌中，D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性之一或两者可以被增强。
在本发明中，术语“磷酸转酮酶”包括D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶。
在本发明中，用语“D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的活性”是指一种活性，其催化木酮糖-5-磷酸变为甘油醛-3-磷酸和乙酰磷酸的磷酸消耗性转化反应并带有一个水分子的相伴性释放。这种活性可以通过Goldberg，M.等(MethodsEnzymol.，9，515-520(1966)或L.Meile(J.Bacteriol.(2001)183；2929-2936)描述的方法来测量。
在本发明中，用语“果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性”是指一种活性，其催化果糖-6-磷酸变为赤藓糖-4-磷酸和乙酰磷酸的磷酸消耗性转化反应并带有一个水分子的相伴性释放。果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性可以通过Racker，E.(Methods Enzymol.，5，276-280(1962)或L.Meile(J.Bacteriol.(2001)183；2929-2936)描述的方法来测量。
在天然具有磷酸转酮酶活性的细菌中磷酸转酮酶的活性可以被增强超过野生型或未修饰的菌株，优选不少于野生型或未修饰的菌株的1.5倍，更优选不少于2倍，和最优选的不少于3倍。此外，在本发明中，天然不具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性的细菌可以被用作亲本菌株。在天然不具有磷酸转酮酶活性的细菌中磷酸转酮酶的活性可以通过用编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的DNA片段转化所述细菌来增强。无论亲本细菌是否天然具有磷酸转酮酶活性，都可以用如上所述相同的方法来测量。
是否已经导入了磷酸转酮酶活性可以使用丙酮酸脱氢酶(PDH)缺陷菌株来证实。PDH缺陷菌株是醋酸盐(acetate)营养缺陷的。另一方面，如果导入了磷酸转酮酶，PDH缺陷菌株对于醋酸盐将不再是营养缺陷的。因此，根据宿主菌株对于醋酸盐营养缺陷型的补偿可以证实编码磷酸转酮酶的基因的导入。作为PDH缺陷菌株，可以使用实施例中描述的ΔaceE菌株。
“D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶”可以是一种酶，其源自具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶活性的那些细菌，包括乳酸细菌、甲醇同化细菌、甲烷同化细菌、链球菌属(Streptococcus)细菌，特别是属于醋杆菌属、双歧杆菌属、乳杆菌属、硫杆菌属、链球菌属、甲基球菌属(Methylococus)、丁酸杆菌属(Butyrivibrio)、丝状杆菌属(Fibrobacter)的那些细菌和/或属于假丝酵母属、红酵母属、红冬孢酵母属(Rhodosporidium)、毕赤酵母属、西洋蓍霉、汉逊酵母属、克鲁维酵母属、酵母属、丝孢酵母属、温酵母属(Wingea)等的那些酵母。
“果糖-6-磷酸磷酸转酮酶”可以是一种酶，其源自具有果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性、属于醋杆菌属、双歧杆菌属、绿菌属(Chlorobium)、布鲁氏菌属(Brucella)、甲基球菌属(Methylococus)、加德纳氏菌属(Gardnerella)的那些细菌，和/或属于红酵母属、假丝酵母属、酵母属等的酵母。
也可能的是通过一个酶，D-木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶来呈现两种活性，。
编码戊糖乳杆菌MD363的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的xpkA基因的核苷酸序列已经在EMBL/GenBank数据库中以登记号码AJ309011登记(Posthuma，C.C.等，Appl.Environ.Microbiol.，68(2)，831-7(2002))，如SEQ IDNO：1所示。编码植物乳杆菌的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的xpk1基因的核苷酸序列已经在EMBL/GenBank数据库中以登记号码NC_004567 Region：互补物(2362936..2365302)登记(Kleerebezem，M.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100(4)，1990-1995(2003))，如SEQ ID NO：3所示。xpk和xpk同源基因的核苷酸序列在表1和序列表中示出。SEQ ID NO：2和4的氨基酸序列的比对在图1中示出。
表1
基因 微生物 说明 EC No.  SEQID：DNA  SEQID：氨基酸 GenBank登记No
 xpkA 戊糖乳杆菌 磷酸转酮酶 4.1.2.9  1  2 AJ309011
xpk1 植物乳杆菌 磷酸转酮酶 4.1.2.9 3 4 NC_004567互补物(2362936..2365302)
xpk2 植物乳杆菌 磷酸转酮酶 4.1.2.9 62 63 NC_004567互补物(3169067-3171478)
xpk 无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)NEM316 推测的蛋白gbs1840 4.1.2.9 64 65 NP_736274.
ptk 乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactis subsp.lactis)I11403 磷酸转酮酶 4.1.2.9 66 67 NP_267658
xpk 约氏乳杆菌(LactoBacillusjohnsonii)NCC 533 可能的木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶 4.1.2.9 68 69 NC_005362
xpk 嗜酸乳杆菌(LactoBacillusacidophilus)NCFM 木酮糖-5-磷酸-果糖磷酸转酮酶 4.1.2.9 70. 71 YP_193510
编码乳酸双歧杆菌的D-木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的xfp基因的核苷酸序列已经在EMBL/GenBank数据库中以登记号AJ293946登记(Meile，L.等，J.Bacteriol.，183(9)，2929-36(2001))，在SEQ ID NO：5中示出，由xfp基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。xfp和xfp同源基因的核苷酸序列在表2和序列表中示出。
表2
基因 微生物 说明 EC No. SEQ ID：DNA SEQ ID：氨基酸 GenBank登记No
xfp 长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum) 木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶 EC：4.1.2.- 72 73 NP_696135
 xfp Chlorobiumtepidum 推定的磷酸转酮酶 EC：4.1.2- 74  75  NP_662409
 xfp 猪布鲁氏菌(Brucella suis) 木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶 EC：4.1.2- 76  77  NP_699578
 xfp 流产布鲁氏菌(Brucellaabortus) 木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸转酮酶 EC：4.1.2- 78  79  YP_223570
xpkA、xpk1和xfp基因都可以使用根据已知基因的核苷酸序列设计的引物通过PCR(聚合酶链式反应，参考White，T.J.等，Trends Genet.，5，185(1989))获得。可以使用pfam和motif(http://pfam.wustl.edu/，http://www.genome.jp/dbget-bin/www_bget？pfam+XFP)来获得含有磷酸转酮酶的基序的基因。通过使用SEQ ID NO：7和No：8所示的引物可以获得来自乳杆菌属的xpk1基因。通过使用SEQ ID NO：11和No：12所示的引物可以获得来自双歧杆菌属的xfp基因。通过使用SEQ ID NO：19和No：24所示的引物可以获得来自乳杆菌属的xpkA基因。
可通过用编码磷酸转酮酶的DNA转化亲本菌株来增强磷酸转酮酶的活性。通过使用编码如上所述的磷酸转酮酶的DNA的常规方法可以进行用编码磷酸转酮酶的DNA转化细菌。
编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的DNA可以是编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的变体的DNA，根据天然的多样性，其可存在于不同的细菌菌株。编码这种变体的DNA可以通过分离DNA来获得，所述DNA在严格条件下与xpkA基因(例如，SEQ ID NO：1或3)或该基因的部分杂交、并且编码具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶活性的蛋白。本文使用的术语“严格条件”包括这样的条件，在所述条件下形成所谓的特异性杂合体，而不形成非特异性杂合体。例如，严格条件可以包括这样的条件，在这些条件下具有高同源性的DNA，例如相互具有不低于70％的同源性、优选80％或更高、更优选90％或更高、最优选95％或更高同源性的DNA杂交。做为选择，通过一些条件例示了严格条件，其包括Southern杂交中的普通洗涤条件，例如，60℃，1×SSC，0.1％SDS，优选60℃，0.1×SSC，0.1％SDS。洗涤的持续时间取决于用于印迹的膜类型，通常，是由制造商推荐的。例如，HybondTM N+尼龙膜(Amersham)在严格条件下建议的洗涤持续时间是15分钟。对于筛选变体xpkA基因的探针，可以使用表1中公开的核苷酸序列的部分序列。使用基于表1中公开的核苷酸序列的寡核苷酸作为引物，和含有表1中公开的核苷酸序列的DNA片段作为模板，通过PCR可以制备这样的探针。当具有约300 bp长度的DNA片段被用作探针时，杂交后的洗涤可以在以下条件下进行：50℃，2×SSC和0.1％SDS至少两次。
使用表2中公开的核苷酸序列作为探针，通过与以上描述的类似的方法，可以获得编码果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的DNA。
已知的是，在mRNA分子群体内发现的61种氨基酸密码子之中存在着同义密码子的某些分布偏爱，同族tRNA的水平似乎与密码子利用的频率成正比(参见，例如Kane，J.F.，Curr.Opin.Biotechnol.，6(5)，494-500(1995))。根据这个观点，很容易预测含有过多稀有tRNA密码子的大量mRNA种类的翻译问题。在例如大肠杆菌(E.coli)宿主中克隆的异源基因的转录开始之后，这种情况可能出现。新近的研究表明，AGG/AGA、CUA、AUA、CGA或CCC密码子的群集(cluster)可能降低合成的蛋白质的数量和质量。此外，可能的是任何这些密码子的过量，即使没有群集，可能产生翻译困难。所以，当编码目标蛋白质的异源DNA被转移到细菌时，需要用更频繁使用的密码子替换稀有密码子以避免这些翻译困难。在超过11,000种生物体中密码子利用的频率在“密码子利用率数据库”中呈现(http://www.kazusa.or.jp/codon；Nakamura，Y.等，Nucl.Acids Res.，28，292(2000))。
此外，编码本发明的磷酸转酮酶的基因不限于野生型基因，而可以是在表1和2所示核苷酸序列中具有修饰的突变体或人工修饰的基因。编码的蛋白质可以在表1和2所示氨基酸序列中的一个或多个位置包括一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或插入，只要维持了编码的磷酸转酮酶蛋白的功能。尽管本文所指的“几个”氨基酸残基的数目取决于三维结构中的位置或氨基酸残基的类型而不同，但其可以是2到20个，优选2到10个，更优选2到5个。这种氨基酸取代包括功能上中性的(neutral)有义突变，优选为保守性取代。对于芳香族氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的phe、trp和tyr。对于疏水性氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的leu、ile和val。对于极性氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的gln和asn。对于碱性氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的arg、lys和his。对于酸性氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的asp和glu。对于含羟基氨基酸来说，保守性取代包括相互可交换的ser和thr。保守性取代还包括ser或thr对ala的取代，gln、his或lys对arg的取代，glu、gln、lys、his或asp对asn的取代，asn、glu或gln对asp的取代，ser或ala对cys的取代，asn、glu、lys、his、asp或arg对gln的取代，gly、asn、gln、lys或asp对glu的取代，pro对gly的取代，asn、lys、gln、arg或tyr对his的取代，leu、met、val或phe对ile的取代，ile、met、val或phe对leu的取代，asn、glu、gln、his或arg对lys的取代，ile、leu、val或phe对met的取代，trp、tyr、met、ile或leu对phe的取代，thr或ala对ser的取代，ser或ala对于thr的取代，phe或tyr对trp的取代，his、phe或trp对tyr的取代，met、ile或leu对val的取代。如上所述引起取代、缺失或插入一个或几个氨基酸的突变还包括起因于携带磷酸转酮酶基因(突变体或变体)的微生物的个体差异和物种差异的天然存在的突变。通过用MOTIF和Pfam在PKT中搜索保守区域(基序)可以选择要取代的区域。
可以通过例如，定点突变来修饰表1或2中所示的核苷酸序列来获得这样的基因，从而将一个或多个取代、缺失或插入导入到由该基因编码的蛋白质的特定位点上。
此外，这种基因也可以通过常规的诱变处理，例如以下所述的那些来获得。诱变处理的实例包括在体外用羟胺处理具有表1或2中所示的核苷酸序列或SEQ ID NO：1中49至948位核苷酸的核苷酸序列的基因，和用紫外线照射或用于通常的突变处理的诱变试剂例如N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(NTG)或EMS(甲磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate))处理带有该基因的细菌，例如埃希氏菌属(Escherichia)细菌。
可以通过，例如，使用遗传重组技术增加细胞中pkt基因的拷贝数来增强磷酸转酮酶基因(以下称为pkt基因，包括xpk或xfp基因)的表达。例如，可以通过将含有pkt基因的基因片段连接到能在宿主细菌中复制的载体，优选多拷贝载体，并将得到的载体导入到宿主细菌中来制备重组DNA。
当使用动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)的xfp基因时，可以，例如使用根据动物双歧杆菌的xfp基因的核苷酸序列(SEQ ID NO：9或11)设计的引物，例如分别具有SEQ ID NO：13或14的核苷酸序列的引物，并使用动物双歧杆菌的染色体DNA作为模板，通过PCR方法(聚合酶链式反应，参见White，T.J.等.，Trends Genet.，13，1813(1989))来获得。也可以使用来自其他微生物的pkt基因，可以使用根据它们的pkt基因序列或其同源序列设计的寡核苷酸引物通过PCR，或使用根据如表1或2所示的这种序列信息制备的寡核苷酸探针通过杂交，从它们的染色体DNA或染色体DNA文库获得pkt基因。可以通过例如Saito和Miura的方法(参见H.Saito and K.Miura，Biochem.Biophys.Acta，72，619(1963)，Text for Bioengineering Experiments，Edited by the Society forBioscience and Bioengineering，Japan，pp.97-98，Baifukan，1992))从微生物制备作为DNA供体的染色体DNA。
然后，将pkt基因连接到在宿主细菌中可操作的载体DNA来制备重组DNA。优选地，使用在宿主细菌中可自主复制的载体。
能在大肠杆菌(Escherichia coli)中自主复制的载体的实例包括pUC19、pUC18、pHSG299、pHSG399、pHSG398、pACYC184、(pHSG和pACYC可从Takara Bio获得)、RSF1010、pBR322、pMW118和pMW219(pMW可从NipponGene获得)，等等。也可以使用噬菌体载体，例如11059、IBF101、M13mp9。
在棒状杆菌型细菌中可自主复制的载体的实例包括pAM330(EP0077548B)、pHM1519(EP 0078537)、pGA1(EP 10977998)和pYM2(US6,905,819)
此外，也可以使用在大肠杆菌和棒状杆菌型细菌中都可自主复制的所谓穿梭载体，例如pVK9、pVK7(US2003-0175912)、pSFK6(JP2000-262288A)和pHK4(JP5-007491A)。
pVK9是大肠杆菌-棒状杆菌穿梭载体，其通过从pHK4(JP-A-5-007491)切除含有可复制起点的BamHI-KpnI片段并将所述片段导入pHSG299(Takara-Bio的产品)的AvaII位点来获得。
为了通过将pkt基因和任何上述载体连接来制备重组DNA，通常通过使用连接酶，例如T4 DNA连接酶来连接所述载体和含有所述pkt基因的片段。
为了将如上所述制备的重组DNA导入细菌中，可以采用迄今为止报道的任何已知的转化方法。可以采用例如，用氯化钙处理受体细胞以提高DNA的透过性的方法，针对大肠杆菌已经报道了(Mandel，M.and Higa，A.，J.Mol.Biol.，53，159(1970))，和使用从生长细胞制备的感受态细胞来导入DNA的方法，对于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已经报道了(Duncan，C.H.，Wilson，G.A.and Young，F.E.，Gene，1，153(1977))。除这些方法之外，可以采用已经被报道适用于枯草芽孢杆菌、放线菌类和酵母的将重组DNA导入原生质体样或球形体样受体细胞的方法(Chang，S.and Choen，S.N.，Molec.Gen.Genet.，168，111(1979)；Bibb，M.J.，Ward，J.M.and Hopwood，O.A.，Nature，274，398(1978)；Hinnen，A.，Hicks，J.B.and Fink，G.R.，Proc.Natl.Sci.，USA，75，1929(1978))。此外，棒状杆菌型细菌的转化也可以通过电脉冲方法(Sugimoto等，JP2-207791A)进行。
可以通过将单拷贝或多拷贝的基因整合到细菌的染色体DNA中来导入pkt基因。此外，也可以通过将多拷贝的基因整合到细菌的染色体DNA中来增加pkt基因的拷贝数。为了将pkt基因的一个或多个拷贝整合到细菌的染色体DNA上，可以通过靶向以多拷贝存在于染色体DNA上的序列来进行同源重组。转座子末端的重复DNA和反向重复序列(inverted repeats)可被用作以多拷贝存在于染色体DNA上的序列。做为选择，如在JP2-109985A中公开的，也有可能将pkt基因掺入到转座子中，并容许其被转移，从而将所述基因整合到染色体DNA中。此外，通过转座例如Mu整合可以实现基因表达的增强。例如，一轮Mu整合容许向细菌染色体中导入多达3个拷贝的基因。可以使用转座子例如Mu、Tn10和Tn5。可以通过使用具有pkt基因的部分序列的探针进行Southern杂交来确认pkt基因整合到染色体中。
也可以通过用更强的表达调节序列取代染色体DNA或质粒上的表达调节序列，包括pkt基因的启动子，如WO00/18935所述，扩增提高pkt基因表达的调节因子，或缺失或削弱降低pkt基因表达的调节因子，来实现pkt基因表达的增强。此外，还有可能的是向pkt基因的启动子区导入几个核苷酸取代使得所述启动子更强。在Goldstein等(Prokaryotic promoters in biotechnology.Biotechnol.Annu.Rev.，1995，1，105-128)中公开了评估启动子效力的方法和强启动子的实例。此外，由于已知的是，在核糖体结合位点(RBS)和翻译起始密码子之间的间隔区序列，特别是紧靠起始密码子上游的几个核苷酸，对翻译效率有很大的影响，因此可以修饰这个序列。pkt基因的表达调节序列可以使用用于启动子鉴定的载体或基因分析软件例如GENETYX来鉴定。
这种强启动子的实例包括lac启动子、trp启动子、trc启动子、tac启动子、lambda噬菌体的PR启动子和PL启动子、tet启动子、amyE启动子、spac启动子，等等。棒状杆菌属的强启动子的实例包括PS2启动子(Appl Environ Microbiol.2003 Jan；69(1)：358-66；Mol Microbiol.1993 Jul；9(1)：97-109；WO93/03158)、trc启动子、tac启动子、lacUV5启动子、araBAD启动子。启动子强度被定义为RNA合成起始作用的频率。评估启动子强度的方法由例如Deuschle U.，Kammerer W.，Gentz R.，Bujard H.(Promoters in Escherichia coli：a hierarchy ofin vivo strength indicates alternate structures.EMBO J.，5，2987-2994(1986))描述。
通过这样的启动子取代或修饰来增强pkt基因的表达。表达调节序列的取代也可以通过例如使用温度敏感质粒来实现。用于棒状杆菌型细菌的温度敏感质粒的实例包括p48K和pSFKT2(JP2000-262288A)、pHSC4(参考法国专利Laid-open Publication No.2667875，1992和JP5-7491A)，pBS5T等等。在棒状杆菌型细菌中这些质粒至少可以在25℃的温度下自主复制，但在37℃的温度下不能自主复制。表达调节序列的修饰可以与增加pkt基因的拷贝数相组合。
使用对棒状杆菌属是致命的果聚糖蔗糖酶作为同源重组的标记物的方法也是适合的。编码果聚糖蔗糖酶的sacB基因可用于选择在其中载体被有效地从染色体缺失的菌株。(Schafer，A.等Gene 145(1994)69-73)。可以使用如下所述的sacB基因和sacB的同源基因。
枯草芽孢杆菌：sacB GenBank登记号X02730(SEQ ID NO：40)
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliqufaciens)：sacB GenBank登记号X52988
运动发酵单孢菌(Zymomonas mobilis)：sacB GenBank登记号L33402
嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)：surB GenBank登记号U34874
旧金山乳杆菌(Lactobacillus sanfranciscensis)：frfA GenBank登记号AJ508391
木醋杆菌(Acetobacter xylinus)：lsxA GenBank登记号AB034152
Gluconacetobacter diazotrophicus：lsdA GenBank登记号L41732
制备质粒DNA、消化和连接DNA、转化、选择寡核苷酸作为引物等等，可以通过本领域技术人员公知的普通方法来进行。例如，在Sambrook，J.，Fritsch，E.F.，and Maniatis，T.，″Molecular Cloning A Laboratory Manual，SecondEdition″，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)中描述了这些方法。
本发明的细菌不仅包括天然不具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性的细菌，还包括天然具有这些蛋白质的活性、并且被修饰从而所述活性被增强的细菌。前者是优选使用的。
在本发明中使用的细菌的具体实例包括属于肠杆菌科，例如埃希氏菌属(Escherichia)、泛菌属(Pantoea)的细菌，棒状杆菌型细菌例如谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)，芽孢杆菌属细菌例如枯草芽孢杆菌，等等。然而，本发明的细菌不限于这些实例。
肠杆菌科包括属于肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、埃希氏菌属、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、泛菌属、普罗威登斯菌属(Providencia)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、摩根氏菌属(Morganella)等等的细菌。具体地，可以使用根据NCBI(国家生物技术信息中心)数据库中使用的分类系统(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/htbin-post/Taxonomy/wgetorg？mode＝Tree&id＝1236&lvl＝3&keep＝1&srchmode＝1&unlock)分类到肠杆菌科中的那些。属于埃希氏菌属或泛菌属的细菌是优选的。
可以使用在Neidhardt等(Neidhardt，F.C.等，Escherichia coli and SalmonellaTyphimurium，American Society for Microbiology，Washington D.C.，1208，表1)中报道的埃希氏菌属细菌，例如大肠杆菌。大肠杆菌野生型菌株的实例包括，但不限于，K12菌株和其衍生物、MG1655菌株(ATCC No.47076)，和W3110菌株(ATCC No.27325)。这些菌株可从美国典型培养物保藏中心(ATCC，地址：P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，United States of America)获得。
术语“属于泛菌属的细菌”是指根据微生物学领域的技术人员已知的分类法分类为泛菌属的细菌，还包括近来根据16S rRNA等等的核苷酸序列分析重新分类入成团泛菌(Pantoea agglomerans)、Pantoea ananatis、斯氏泛菌(Pantoeastewartii)等等的成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)的某些菌种。
在本发明中，棒状杆菌型细菌包括根据微生物学领域的技术人员已知的分类法被分类为棒状杆菌型细菌的细菌，迄今被分类为短杆菌属(Brevibacterium)、但现在重新分类入棒杆菌属(Corynebacterium)(Int.J.Syst.Bacteriol.，41，255(1991))的细菌，以及属于短杆菌属的细菌，其是棒杆菌属的近亲。这种棒状杆菌型细菌的实例如下所列。
嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophylum)
醋谷棒杆菌(Corynebacterium acetoglutamicum)
烷醇棒杆菌(Corynebacterium alkanolyticum)
美棒杆菌(Corynebacterium callunae)
谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)
百合花棒杆菌(Corynebacterium lilium)
栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)
嗜热产氨棒杆菌(Corynebacterium thermoaminogenes)
力士棒杆菌(Corynebacterium herculis)
二歧短杆菌(Brevibacterium divaricatum)
黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)
Brevibacterium immariophilum
乳发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)
玫瑰色短杆菌(Brevibacterium roseum)
解糖短杆菌(Brevibacterium saccharolyticum)
生硫短杆菌(Brevibacterium thiogenitalis)
产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)
白色短杆菌(Brevibacterium album)
蜡状短杆菌(Brevibacterium cerinum)
嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)
具体地，包括下列菌株：
嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 13870
醋谷棒杆菌ATCC 15806
烷醇棒杆菌ATCC 21511
美棒杆菌ATCC 15991
谷氨酸棒杆菌ATCC 13020，13032，13060
百合花棒杆菌ATCC 15990
栖糖蜜棒杆菌ATCC 17965
Corynebacterium efficiens AJ12340(FERM BP-1539)
力士棒状杆菌ATCC 13868
二歧短杆菌ATCC 14020
黄色短杆菌ATCC 13826，ATCC 14067，AJ12418(FERM BP-2205)
Brevibacterium immariophilum ATCC 14068
乳发酵短杆菌(谷氨酸棒杆菌)ATCC 13869
玫瑰色短杆菌ATCC 13825
解糖短杆菌ATCC 14066
生硫短杆菌ATCC 19240
产氨棒杆菌ATCC 6871，ATCC 6872
白色短杆菌ATCC 15111
蜡状短杆菌ATCC 15112
嗜氨微杆菌ATCC 15354。
这些菌株可从例如美国典型培养物保藏中心(ATCC，地址P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，United States of America)获得。每个菌株被分配了登记号，人们可以根据它的登记号请求提供每种菌株。在美国典型培养物保藏中心的目录中指明了每个菌株的登记号。根据布达佩斯条约的规定，于1987年10月27日将AJ12340菌株保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(the National Institute of Bioscience and Human-Technology，Agency ofIndustrial Science and Technology，Ministry of International Trade and Industry)(目前为，独立行政法人，产业技术综合研究所，特许微生物保藏中心(theindependent administrative agency，National Institute of Advanced IndustrialScience and Technology，International Patent Organism Depositary)(TsukubaCentral 6，1-1，Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，Japan，邮编：305-5466))，收到的登记号是FERM BP-1539。根据根据布达佩斯条约的规定，于1989年1月5日将AJ12418菌株保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所，收到的登记号是FERM BP-2205。
术语“芽孢杆菌属细菌”是指根据微生物学领域的技术人员已知的分类法被分类为芽孢杆菌属的细菌。在本发明中，芽孢杆菌属细菌包括，但不限于，枯草芽孢杆菌168 Marburg菌株(ATCC 6051)、枯草芽孢杆菌PY79菌株(Plasmid，1984，12，1-9)等等，解淀粉芽孢杆菌的实例包括，但不限于，解淀粉芽孢杆菌T菌株(ATCC 23842)、解淀粉芽孢杆菌N菌株(ATCC 23845)等等。
通过将上述DNA(pkt基因)导入到已经具有生产有用代谢物的能力的细菌中，可以获得本发明的细菌。做为选择，通过使已经导入了pkt基因的细菌赋予生产有用代谢物的能力，可以获得本发明的细菌。在后者的情况中，导入pkt基因和赋予生产有用代谢物的能力可以按任何顺序进行。
用语“具有生产有用代谢物的能力的细菌”是指一种细菌，当本发明的细菌在培养基中培养时它具有产生和引起有用代谢物在培养基中积累的能力。通过培育，包括诱变处理和遗传修饰，可以赋予或增强生产代谢物的能力。用语“ 细菌具有生产有用代谢物的能力”是指细菌能够产生和引起代谢物以大于野生型菌株或未突变菌株的量在培养基中积累。在此使用的用语“细菌具有生产有用代谢物的能力”还指一种细菌，其能够产生和引起目标代谢物以不低于0.5g/L、更优选不低于1.0g/L的量在培养基中积累。
用语“有用代谢物”是指初级代谢物，例如L-氨基酸、有机酸、维生素、糖类和/或Embden-Meyerhof、戊糖磷酸(pentose-P)途径、Entner-Doudoroff途径、柠檬酸循环和氨基酸生物合成的中间物。在本发明中要生产的L-氨基酸没有特别的限制，包括L-赖氨酸、L-精氨酸、L-鸟氨酸、L-组氨酸、L-瓜氨酸(L-citrulline)、L-异亮氨酸、L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、和L-甘氨酸、L-苏氨酸、L-丝氨酸、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸和L-色氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-甲硫氨酸、L-鸟氨酸、L-谷氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酰胺和L-天冬酰胺。更优选地，本发明的细菌是具有生产源自乙酰CoA的代谢物的能力的细菌。这种代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯(succinate)和聚羟基丁酸酯构成的组。
以下，将详细描述赋予了生产有用代谢物的能力的菌株的实例和赋予这种能力的方法。
在下文中，将说明给如上所述的亲本菌株赋予生产有用的代谢物能力的方法。
为了赋予生产有用代谢物的能力，可以使用通常用来培育属于埃希氏菌属或棒状杆菌型细菌的生产有用代谢物的细菌的方法。例如，可以使用用于获得具有生产有用代谢物能力的营养缺陷突变菌株、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株的方法，和用于产生具有增强的有用代谢物生物合成酶活性的重组菌株的方法(″Amino Acid Fermentation″，the Japan Scientific SocietiesPress[Gakkai Shuppan Center]，1st Edition，published on May 30，1986，pp.77-100)。当使用这些方法培育生产有用代谢物的细菌时，可以赋予一种或多种性质，包括营养缺陷型、类似物抗性和代谢调节突变。
当产生重组菌株时，可以增强单个或多个有用代谢物生物合成酶的活性。此外，赋予营养缺陷型、类似物抗性和代谢调节突变性质的方法可以与增强有用代谢物生物合成酶活性的方法组合。
具有生产有用代谢物的能力的营养缺陷突变菌株(有用代谢物例如L-氨基酸)、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株，可以通过使亲本或野生型菌株经过通常的诱变处理，例如X射线或紫外线照射、用诱变试剂例如N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(NTG)处理来获得。然后，可以从突变的菌株中挑选具有生产有用代谢物能力的营养缺陷菌株、类似物抗性菌株或代谢调节突变菌株。
为如上所述的细菌赋予生产L-谷氨酸的能力的方法包括，例如，修饰所述细菌使得编码涉及L-谷氨酸生物合成的酶的基因表达增强和/或过量表达。涉及L-谷氨酸生物合成的酶的实例包括谷氨酸脱氢酶(以下也称为“GDH”)、谷氨酰胺合成酶、谷氨酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、乌头酸水合酶、柠檬酸合酶(以下也称为“CS”)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(以下也称为“PEPC”)、丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇丙酮酸合酶、烯醇化酶、磷酸甘油酸变位酶、磷酸甘油酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、果糖二磷酸醛缩酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖磷酸异构酶，等等。在这些酶中，优选CS、PEPC和GDH中一种或多种的活性被增强，更优选的是所有这三种酶的活性被增强。
通过如上所述方法修饰、从而CS基因、PEPC基因和/或GDH基因的表达被增强的细菌的实例包括在US6,197,559、US6,331,419和欧洲专利公开No.0999282和No.1078989中公开的细菌。
修饰细菌来赋予L-谷氨酸生产能力可以通过降低或失活酶的活性来进行，所述酶催化从L-谷氨酸生物合成途径分支的、并产生L-谷氨酸以外的化合物的反应。催化从L-谷氨酸生物合成途径分支的并产生L-谷氨酸以外的化合物的反应的酶的实例包括，2-酮戊二酸脱氢酶、异柠檬酸裂解酶、谷氨酸脱羧酶、1-吡咯啉脱氢酶，等等。在这些酶中，优选的是降低或消除2-酮戊二酸脱氢酶的活性。
为了降低或失活上述酶的活性，可以通过普通的诱变处理或遗传工程来导入降低或失活酶的细胞内活性的突变。诱变处理的实例包括通过X-射线或紫外线照射、用诱变剂例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍处理，等等。降低或消除酶的细胞内活性的方法的实例包括突变或缺失微生物的细胞内编码所述酶的基因，使得与非突变菌株相比细胞内活性被降低或消除。突变或缺失基因的方法的实例包括修饰表达调节序列，例如启动子和Shine-Dalgarno(SD)序列，向开放阅读框中导入错义突变、无义突变、或移码突变，和缺失基因的部分(J Biol Chem.1997 272(13)：8611-7)。可以通过使用同源重组技术或通过使用转座子或IS因子将突变的基因导入到微生物中，在所述同源重组技术中染色体上的野生型基因被取代为所述突变的基因。同源重组技术包括使用线性DNA、温度敏感质粒和非可复制质粒的方法。在Proc Natl Acad Sci USA.2000 Jun 6；97(12)：6640-5、美国专利No.6303383、JP05-007491A等中描述了这些方法。
通过使用获自候选菌株的细胞提取物或其纯化的级分测量酶活性并将它与野生型或未修饰的菌株比较，可以确认目标酶的细胞内活性和活性下降的程度。例如，2-酮戊二酸脱氢酶活性可以通过Reed等的方法(Reed L.J.和Mukherjee B.B.，Methods in Enzymology，13，pp.55-61，1969)来测量。在美国专利5,378,616和5,573,945中描述了在α-酮戊二酸脱氢酶活性上有缺陷或具有降低的α-酮戊二酸脱氢酶活性、属于埃希氏菌属的细菌的实例，和获得它们的方法。具体地，这些菌株包括如下：
大肠杆菌W3110sucA::Kmr
大肠杆菌AJ12624(FERM BP-3853)
大肠杆菌AJ12628(FERM BP-3854)
大肠杆菌AJ12949(FERM BP-4881)
通过破坏大肠杆菌W3110中的α-酮戊二酸脱氢酶基因(以下称为“sucA基因”)获得了大肠杆菌W3110sucA::Kmr。这个菌株是在α-酮戊二酸脱氢酶上完全缺陷的。
在WO95/34672和美国专利5,977,331中详细阐述了在其中使用同源重组破坏了sucA基因的棒状杆菌型细菌。
生产L-谷氨酸的细菌的其他实例包括属于埃希氏菌属并对天冬氨酸抗代谢物具有抗性的那些。这些菌株也可以是在α-酮戊二酸脱氢酶活性中有缺陷的，并包括，例如，菌株AF13199(FERM BP-5807)(美国专利5,908,768)，或菌株FFRM P-12379，其被额外修饰以具有降低的分解L-谷氨酸的能力(美国专利5,393,671)；大肠杆菌菌株AJ13138(FERM BP-5565)(美国专利6,110,714)等等。
属于泛菌属的生产L-谷氨酸的细菌的实例包括在α-酮戊二酸脱氢酶活性中有缺陷的或具有降低的α-酮戊二酸脱氢酶活性的突变菌株，而且可以如上所述获得。这种菌株包括Pantoea ananatis AJ13356或AJ13601(美国专利6,331,419)。Pantoea ananatis AJ13356菌株于1998年2月19日保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(目前为，产业技术综合研究所，特许微生物保藏中心，Central 6，1-1，Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305-8566，日本)，收到的登记号是FERM P-16645。然后它于1999年1月11日根据布达佩斯条约的规定转为国际保藏，接受的登记号是FERM BP-6615。Pantoea ananatis AJ13601于1999年8月18日保藏在通商产业省工业技术院生命工学工业技术研究所(目前为，产业技术综合研究所，特许微生物保藏中心，Central 6，1-1，Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305-8566，日本)，收到的登记号是FERM P-17516。然后它于2000年7月6日根据布达佩斯条约的规定转为国际保藏，接受的登记号是FERM BP-7207。作为破坏编码αKGDH的F1亚基的基因(sucA基因)的结果，Pantoea ananatis AJ13356和AJ13601在α-KGDH活性中是有缺陷的。当分离上述菌株时它们被鉴定为成团肠杆菌，并分别作为成团肠杆菌AJ13356菌株和AJ13601菌株保藏。然而，在16S rRNA的核苷酸测序等的基础上，它们近来被重新分类为Pantoea ananatis。虽然AJ13356、AJ13601和它们的亲本AJ13355(FERM BP-6614)都作为成团肠杆菌在上述保藏单位保藏，为了本说明书的目的它们被描述为Pantoea ananatis。
具有生产L-谷氨酸的能力的棒状杆菌型细菌的其它实例包括有机酸类似物抗性突变体和escletin抗性突变体(JP56-1889A、JP56140895A、JP5702689A、JP88994A)。
类似物抗性的生产L-谷氨酸的棒状杆菌型细菌的实例包括以下菌株：
黄色短杆菌AJ11355(FERM P-5007，JP56-1889A)
谷氨酸短杆菌(Brevibacterium glutamicum)AJ11368(FERM P-P-5020，JP56-1889A)
黄色短杆菌AJ11217(FERM P-4318，JP57-2689A)
黄色短杆菌AJ11218(FERM-P 4319，JP57-2689A)
黄色短杆菌AJ11564(FERM P-5472，JP56-140895A)
黄色短杆菌AJ11439(FERM P-5316，JP56-35981A)
谷氨酸棒杆菌H7684(FERM BP-3004，JP56-151495A)
可以用作亲本菌株来修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-谷氨酰胺的细菌的实例包括，生产L-谷氨酰胺的棒状杆菌型细菌，其被修饰以具有增强的谷氨酸脱氢酶活性、谷氨酰胺合成酶活性(EP 1229121A)，或具有降低的谷氨酰胺酶活性(EP1424397A)。并且，可以使用携带突变谷氨酰胺合成酶、属于埃希氏菌属的细菌，在所述突变谷氨酰胺合成酶中相应于野生型谷氨酰胺合成酶中397位的酪氨酸氨基酸残基被任何氨基酸残基取代。
赋予6-重氮-5-氧-正亮氨酸抗性(JP3-232497A)、嘌呤类似物抗性、甲硫氨酸亚砜抗性(JP 61-202694A)、α-Ketomalinic acid抗性(JP56-151495)的方法可以用于通过培育来赋予或增强生产L-谷氨酰胺的能力。具有生产L-谷氨酰胺的能力的棒状杆菌型细菌的具体实例包括，但不限于：
黄色短杆菌AJ11573(FERM P-5492，JP56-161495A)
黄色短杆菌AJ11576(FERMBP-10381，JP56-161495A)
黄色短杆菌AJ12212(FERM P-8123，JP61-202694A)
用作亲本菌株、被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-脯氨酸的细菌的实例包括属于埃希氏菌属的生产L-脯氨酸的细菌，所述细菌携带在L-脯氨酸的反馈抑制中脱敏的(desensitized)γ-谷氨酰激酶，和/或其中L-脯氨酸降解系统被破坏。通过将编码在L-脯氨酸的反馈抑制中脱敏的γ-谷氨酰激酶的DNA导入细胞中(Dandekar，A.M.，Uratsu，S.L.，J.Bacteriol.，170，12，5943-5(1988))，例示了培育具有在L-脯氨酸的反馈抑制中脱敏的γ-谷氨酰激酶的细菌的方法。通过将突变导入脯氨酸脱氢酶基因中从而不表达活性的脯氨酸脱氢酶，例示了破坏L-脯氨酸降解系统的方法。并且，通过获得在L-脯氨酸同化能力中有缺陷的菌株并且通过使用L-脯氨酸营养缺陷型作为指标选择在细胞外过度生产L-脯氨酸的菌株，可以获得L-脯氨酸降解系统被破坏的细菌。属于埃希氏菌属的生产L-脯氨酸的细菌包括大肠杆菌菌株NRRL B-12403和NRRL B-12404(GB专利2075056)、VKPM B-8012(美国专利Laid-open Publication 2002-0058315)，和DE专利3127361中描述的质粒突变体、Bloom F.R.等描述的质粒突变体(The15th Miami winter symposium，1983，p.34)等等可以用于获得这种菌株。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-精氨酸的细菌的实例包括属于埃希氏菌属的生产L-精氨酸的细菌，例如大肠杆菌菌株237(VKPM B-7925)和具有突变N-乙酰谷氨酸合成酶的它的衍生菌株(美国专利Laid-open Publication2002-0034793)，其中导入了编码N-乙酰谷氨酸合成酶的argA基因的生产精氨酸的菌株(JP57-5693A)等等。
生产L-精氨酸的细菌的其他实例是具有编码L-精氨酸生物合成酶的扩增的基因的菌株，所述L-精氨酸生物合成酶例如N-乙酰基谷氨酸合酶(argA)、N-乙酰谷氨酰磷酸还原酶(N-acetylglutamyl phosphate reductase)(argC)、鸟氨酸乙酰转移酶(argJ)、N-乙酰谷氨酸激酶(argB)、乙酰鸟氨酸转氨酶(argD)、乙酰鸟氨酸脱乙酰酶(argE)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(argF)、精氨琥珀酸合酶(argG)、精氨琥珀酸裂解酶(argH)和氨甲酰基磷酸酯合酶(carAB)。编码这些酶的基因的名称分别在酶的名字后的括号中给出。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-亮氨酸的细菌的实例包括属于埃希氏菌属的生产L-亮氨酸的细菌，例如对4-氮亮氨酸(4-azaleucine)或5，5，5-三氟亮氨酸有抗性的大肠杆菌菌株H-9068(ATCC 21530)、H-9070(FERM BP-4704)和H-9072(FERM BP-4706)(美国专利5,744,331)，其中L-亮氨酸的异丙基苹果酸合酶反馈抑制被脱敏的大肠杆菌菌株(EP1067191B)、对β-2-噻吩丙氨酸和β-羟基亮氨酸有抗性的大肠杆菌菌株AJ11478(美国专利5,763,231)，大肠杆菌菌株57(VKPM B-7386，俄国专利No.2140450)，等等。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-半胱氨酸的细菌的实例包括属于埃希氏菌属的生产L-半胱氨酸的细菌，例如大肠杆菌菌株JM15，其用编码反馈抗性丝氨酸酰基转移酶的不同cysE等位基因转化(美国专利6,218,168)；大肠杆菌菌株W3110，其过量表达适合于分泌细胞毒性物质的蛋白质的基因(美国专利5,972,663)；具有降低的半胱氨酸脱硫水化酶(cysteine desulfohydrase)活性的大肠杆菌菌株(JP11-155571A2)；对由cysB基因编码的半胱氨酸调节子使用阳性转录调节物活性增加的大肠杆菌菌株W3110(WO01/27307A1)等等。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产琥珀酸酯的细菌的实例包括属于埃希氏菌属和棒状杆菌型细菌的生产琥珀酸的细菌，例如黄色短杆菌MJ233Δ1dh菌株(JP11-206385A)，和黄色短杆菌MJ233/pPCPYC菌株(WO01/27258)。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-赖氨酸的细菌的实例包括乳发酵短杆菌AJ11082的S-(2-氨基乙基)半胱氨酸(以下“AEC”)抗性突变菌株(NRRLB-11470)(在JP56-1914B、JP56-1915B、JP57-14157B、JP57-14158B、JP57-30474B、JP58-10075B、JP59-4993B、JP61-35840B、JP62-24074B、JP62-36673B、JP5-11958B、JP7-112437B和JP7-112438B中描述)，对氨基酸例如L-高丝氨酸有营养缺陷的突变菌株(JP48-28078B和JP56-6499B)，对AEC有抗性和对氨基酸例如L-亮氨酸、L-高丝氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸和L-缬氨酸有营养缺陷的突变菌株(美国专利Nos.3,708,395和3,825,472)，对DL-α-氨基-ε-己内酰胺、α-氨基-月桂基内酰胺(α-amino-lauryllactam)、天冬氨酸类似物、磺胺药(sulfa drug)、醌型化合物(quinoid)、和N-月桂酰亮氨酸有抗性的生产L-赖氨酸的突变菌株，对草酰乙酸酯脱羧酶抑制物或呼吸道酶抑制物有抗性的生产L-赖氨酸的突变菌株(JP50-53588A、JP50-31093A、JP52-102498A、JP53-9394A、JP53-86089A、JP55-9783A、JP55-9759A、JP56-32995A、JP56-39778A、JP53-43591B和JP53-1833B)，对环己六醇或乙酸有营养缺陷的生产L-赖氨酸的突变菌株(JP55-9784A和JP56-8692A)，在34℃或更高温度下对氟丙酮酸(fluoropyruvicacid)敏感的生产L-赖氨酸的突变菌株(JP55-9783A和JP53-86090A)，对乙二醇有抗性的短杆菌属或棒杆菌属细菌的生产L-赖氨酸的突变菌株(美国专利No.4,411,997)，等等。
可以用作亲本菌株被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性的生产L-赖氨酸的细菌的其它实例包括大肠杆菌WC196的S-(2-氨基乙基)半胱氨酸(以下称“AEC”)抗性突变菌株(WO96/17930)。WC196菌株被命名为大肠杆菌AJ13069菌株，于1994年12月6日保藏在独立行政法人，产业技术综合研究所，特许微生物保藏中心(TsukubaCentral 6，1-1，Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，Japan，邮政编码：305-8566))，收到的登记号是FERM P-14690。之后，该保藏于1995年9月29日根据布达佩斯条约的规定转为国际保藏，收到的登记号是FERM BP-5252。
具有生产L-苏氨酸的能力的微生物的实例包括6-二甲基氨基嘌呤-抗性突变体(JP5-304969A)，其中具有增强酶活性的突变的苏氨酸生物合成酶基因用质粒来扩增的菌株(JP1-29559B，JP05-227977A)，其中苏氨酸操纵子用质粒来扩增的菌株(JP2-109985A)，其中扩增了编码丙酮酸羧化酶的基因和编码烟酰胺核苷酸转氢酶(nicotinamide nucleotide transhydrogenase)的基因的菌株(JP2002-51787A)，等等。
大肠杆菌VKPM B-3996菌株(美国专利No.5,175,107)也可以被用作生产L-苏氨酸的菌株。VKPM B-3996于1987年11月19日保藏在俄国国立工业微生物保藏中心(Russian National Collection of Industrial Microorganisms)(VKPM)，GNII Genetika，登记号为VKPM B-3996。VKPM B-3996菌株携带质粒pVIC40(国际专利公开WO90/04636)，该质粒是通过向具有链霉素抗性标记基因的质粒pAYC32中插入苏氨酸操纵子(thrABC)获得的(Chistorerdov，A.Y.，Tsygankov，Y.D.，Plasmid，1986，16，161-167)。由包含在pVIC40中的突变thrA基因编码的天冬氨酸激酶I-高丝氨酸脱氢酶I不受(is released from)L-苏氨酸的反馈抑制。
大肠杆菌VKPM B-5318菌株(EP 0593792B)也可被用作生产L-苏氨酸的菌株。VKPM B-5318于1987年11月19日保藏在俄国国立工业微生物保藏中心(VKPM)，GNII Genetika，登记号为VKPM B-5318。VKPM B-5318菌株对于L-异亮氨酸是营养缺陷的，编码苏氨酸生物合成酶的苏氨酸操纵子位于C1温度敏感阻遏物、PR-启动子和来源于λ噬菌体的Cro蛋白质N末端的下游。此外，这个菌株含有质粒DNA，其被构建使得苏氨酸生物合成基因的表达被来自λ噬菌体的启动子和阻遏物调节。
此外，大肠杆菌MG442菌株(US4,278,765)也可以用作生产L-苏氨酸的菌株。MG442菌株作为CMIMB-1628保藏在俄国国立工业微生物保藏中心(VKPM)。
具有生产L-苯丙氨酸的能力的埃希氏菌属细菌的实例包括其中破坏了tyrA和tyrR基因的大肠杆菌AJ12739(tyrA::Tn10，TyrR；VKPM B-8197)，其中导入突变的pheA的大肠杆菌HW1089(美国专利No.5,354,672)，和其中扩增了yddG和yedA基因的大肠杆菌菌株(WO 03/044192)。具有生产L-苯丙氨酸的能力的棒状杆菌型细菌的实例包括对于酪氨酸是营养缺陷的和对L-苯丙氨酰-L-酪氨酸有抗性的菌株(JP5-49489A)。
具有生产L-色氨酸的能力的细菌可以通过增强L-色氨酸生物合成酶，包括磷酸甘油酸脱氢酶和邻氨基苯甲酸合酶的活性来获得。这些酶可以是对L-色氨酸或L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的。例如，具有这些反馈抗性酶的细菌可以通过将质粒pGH5导入大肠杆菌SV164菌株来获得，所述质粒pGH5含有编码L-色氨酸抗性磷酸甘油酸脱氢酶的突变serA基因，所述大肠杆菌SV164菌株带有编码L-丝氨酸抗性邻氨基苯甲酸合酶的基因(WO94/08031)。
具有生产L-色氨酸的能力的细菌也可以通过增强由色氨酸操纵子编码的L-色氨酸生物合成酶的活性来获得。L-色氨酸操纵子中的这些酶包括色氨酸合酶和邻氨基苯甲酸合酶。这些细菌的实例包括其中导入了色氨酸操纵子的大肠杆菌菌株，所述色氨酸操纵子含有编码L-丝氨酸抗性邻氨基苯甲酸合酶的基因(JP57-71397A、JP62-244382A和美国专利No.4,371,614)。
此外，具有生产L-色氨酸的能力的细菌的实例包括对L-苯丙氨酸和L-酪氨酸是营养缺陷的大肠杆菌AGX17(pGX44)[NRRL B-12263]，和携带含有色氨酸操纵子的质粒pGX50的AGX6(pGX50)aroP[NRRL B-12264)(美国专利No.4,371,614)。
具有生产L-异亮氨酸的能力的埃希氏菌属细菌的实例包括对6-二甲基氨基嘌呤有抗性的突变菌株(JP5-304969A)，对L-异亮氨酸异羟肟酸(L-isoleucinehydroxamate)、硫代异亮氨酸(thiaisoleucine)、DL-乙硫氨酸(ethionine)或精氨酸异羟肟酸(argininehydroxamate)有抗性的突变菌株(JP5-130882A)，和其中编码苏氨酸脱氨酶和乙酰羟酸合酶(acetohydroxylicacid synthase)的基因用质粒扩增了的重组菌株(JP2-458A、JP2-42988A和JP8-47397A)。
具有生产L-缬氨酸的能力的细菌可以通过增强L-缬氨酸生物合成酶的活性来获得，所述L-缬氨酸生物合成酶包括由ilvGMEDA操纵子编码的那些，特别是由ilvG基因编码的乙酰羟酸合酶(acetohydroxylate synthase)(JP02-748418B)。这些酶可以是对L-缬氨酸的反馈抑制有抗性的。
具有生产L-缬氨酸的能力的细菌包括具有减少的乙酰乳酸合酶III基因(ilvIH基因)的表达的那些细菌。
具有生产L-缬氨酸的能力的细菌可以对氨基酸类似物具有抗性。这种细菌的实例包括对L-异亮氨酸和L-甲硫氨酸是营养缺陷的并且对D-核糖、嘌呤核苷或嘧啶核糖核苷有抗性的突变菌株(FERM P-1841，P-5556；JP53-025034A)，和对类聚酮(polyketonoid)有抗性的突变菌株(FERM P-9325；JP04-045314B)。
具有生产L-丙氨酸的能力的细菌的实例包括在H+-ATPase活性方面有缺陷的棒状杆菌型细菌(Appl Microbiol Biotechnol.2001 Nov；57(4)：534-40)，或其中扩增了天冬氨酸β-脱羧酶基因的棒状杆菌型细菌菌株(JP07-163383A)。
此外，优选本发明的细菌被进一步修饰以具有降低的6-磷酸果糖激酶活性。可以通过例如Denise Kotlars和Henri Buc描述的方法(Methods inEnzymology(1982)90：60-70)来测量6-磷酸果糖激酶活性。在本发明的细菌中将6-磷酸果糖激酶的活性降低至低于野生型或未修饰菌株，优选低于野生型或未修饰菌株的90％、更优选低于70％、最优选不低于50％。通过突变或破坏编码这个酶的基因，可以降低6-磷酸果糖激酶的活性，其中所述方法可以类似于用于降低α-酮戊二酸脱氢酶活性的方法。
在本发明中，通过在培养基中培养上述细菌、容许有用代谢物积累到培养基和/或细菌细胞中、并从培养基和/或细菌细胞收集所述有用代谢物，可以生产有用代谢物。
培养、收集和从培养基纯化有用代谢物，可以通过使用细菌生产有用代谢物的常规发酵方法进行。培养基可以是合成的或天然的，只要培养基含有碳源和氮源和矿物质，而且如有必要，含有细菌生长所需的适量营养物。碳源包括各种碳水化物，例如葡萄糖和蔗糖，和各种有机酸。取决于所选细菌的同化方式，可以使用醇，包括乙醇和甘油。对于氮源，可以使用氨，硫酸铵，其他氮化合物例如胺、天然的氮源例如蛋白胨、大豆水解产物和消化的发酵微生物。对于矿物质，可以使用单磷酸钾(potassium monophosphate)、硫酸镁、氯化钠、硫酸亚铁、硫酸锰、氯化钙等等。在本发明中，更可取的是向培养基中添加盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride)(维生素B1)。盐酸硫胺素的浓度是大于10μg/L，优选大于10mg/L，更优选低于100mg/L。
培养优选在有氧条件，例如通气的摇动培养和搅拌培养，在20到42℃、优选37到40℃的温度下进行。培养基的pH值通常在5和9之间，优选在6.5和7.2之间。可以用氨、碳酸钙、各种酸、各种碱和缓冲液来调节培养基的pH值。通常，1到5天的培养足以在液体培养基中积累目标的有用代谢物。
培养之后，可以通过离心或膜过滤从液体培养基除去固体例如细胞，然后可以通过离子交换、浓缩和/或结晶方法等收集和纯化目标的有用代谢物。
实施例
以下将参考以下非限制性实施例更具体地说明本发明。缩写：Pyr-丙酮酸(pyruvate)，PEP-磷酸烯醇丙酮酸，GA-3P-甘油醛-3-磷酸，AceCoA-乙酰CoA。理论重量得率(theoretical weight yield)(Y)计算为Y＝(产物的分子量×摩尔数)/(底物的分子量×摩尔数)。反应式被简化并仅显示碳化合物(carbon compounds)和能量分子。
实施例1.计算具有或不具有磷酸转酮酶活性的细菌的乙酰CoA形成
1.不包含磷酸转酮酶活性的乙酰CoA生物合成途径的反应
其后是糖酵解的PTS系统给出以下反应式：
葡萄糖＝PEP+Pyr+ATP+2 NADH
由ppc基因编码的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶催化以下反应：
PEP+CO2＝草酰乙酸
由pdh基因编码的丙酮酸脱氢酶催化以下反应：
Pyr＝乙酰CoA+CO2+NADH
最终反应式是：
葡萄糖＝乙酰CoA+草酰乙酸+ATP+3NADH    (A)
2.包含磷酸转酮酶活性的乙酰CoA生物合成途径的反应
其后是糖酵解的PTS系统给出以下反应式：
葡萄糖+PEP＝果糖-6-磷酸+Pyr
磷酸烯醇丙酮酸合酶催化以下反应：
Pyr+ATP＝PEP
由ppc基因编码的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶催化以下反应：
PEP+CO2＝草酰乙酸
果糖-6-磷酸磷酸转酮酶：
磷酸+果糖-6-磷酸＝H2O+赤藓糖-4-磷酸+乙酰磷酸
转醛醇酶(transaldolase)和转酮醇酶(transketolase)：
果糖-6-磷酸+赤藓糖-4-磷酸＝2木酮糖-5-磷酸
D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶：
磷酸+木酮糖-5-磷酸＝甘油醛-3-磷酸+乙酰磷酸
糖酵解：
甘油醛-3-磷酸＝PEP+2ATP+2NADH
由pta基因编码的磷酸转乙酰酶
乙酰磷酸＝乙酰CoA
最终反应式是：
2葡萄糖+2CO2＝3乙酰CoA+2草酰乙酸+NADH    (B)
比较反应式(A)和(B)显示，使用磷酸转酮酶的活性容许从1分子葡萄糖产生1.5分子的乙酰CoA并保存1个CO2分子，相比之下，在没有磷酸转酮酶活性的葡萄糖代谢中从1分子葡萄糖获得1分子的乙酰CoA。
实施例2.计算使用具有或不具有磷酸转酮酶活性的细菌时L-谷氨酸生产的理论得率。
1.包括PTS、糖酵解和TCA循环的L-谷氨酸生物合成途径的反应。
PTS+糖酵解：
葡萄糖＝乙酰CoA+草酰乙酸+ATP+3NADH    (A)
TCA循环：
乙酰CoA+草酰乙酸＝2-酮戊二酸+NADPH+CO2
谷氨酸脱氢酶：
2-酮戊二酸+NH3+NADPH＝谷氨酸
最终反应式：
葡萄糖＝谷氨酸+ATP+3NADH+CO2    (C)
L-谷氨酸的理论重量得率是81.7％
2.包括糖酵解、非氧化性PPC和仅D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的L-谷氨酸生物合成途径的反应
糖酵解和非氧化性PPC：
5葡萄糖+5PEP＝5果糖-6-磷酸+5Pyr，其中
果糖-6-磷酸+ATP＝2GA-3P
2果糖-6-磷酸+2GA-3P＝2木酮糖-5-磷酸+2赤藓糖-4-磷酸
2果糖-6-磷酸+2赤藓糖-4-磷酸＝4木酮糖-5-磷酸
总反应式：
5葡萄糖+5PEP+ATP＝6木酮糖-5-磷酸+5Pyr
然后，D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶：
木酮糖-5-磷酸+磷酸＝GA-3P+乙酰磷酸
糖酵解和磷酸转乙酰酶：
GA-3P＝PEP+ATP+NADH
乙酰磷酸＝乙酰CoA
总反应式：
5葡萄糖＝6乙酰CoA+PEP+5ATP+6NADH+5PYR      (1)
磷酸烯醇丙酮酸合酶
PYR+2ATP＝PEP+磷酸
假定NADH＝2ATP
总反应式：
5葡萄糖＝6乙酰CoA+6PEP+7ATP
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)：
PEP+CO2＝草酰乙酸
总反应式：
5葡萄糖+6CO2＝6乙酰CoA+6草酰乙酸+7ATP    (2)
TCA循环：
草酰乙酸+乙酰CoA＝酮戊二酸+CO2+NADPH
总反应式：
5葡萄糖＝6酮戊二酸+6NADPH+7ATP
谷氨酸脱氢酶：
酮戊二酸+NADPH＝谷氨酸
最终反应式：
5葡萄糖＝6谷氨酸+7ATP    (D)
L-谷氨酸的理论重量得率是98％
3.包括糖酵解、非氧化性PPC、两种磷酸转酮酶和乙醛酸支路的L-谷氨酸生物合成途径的反应
PTS+糖酵解：
2葡萄糖+2PEP＝2果糖-6-磷酸+2PYR
果糖-6-磷酸磷酸转酮酶2：
果糖-6-磷酸+磷酸＝赤藓糖-4-磷酸+乙酰磷酸
转醛醇酶和转酮醇酶：
果糖-6-磷酸+赤藓糖-4-磷酸＝2木酮糖-5-磷酸
木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶：
2木酮糖-5-磷酸+2磷酸＝2GA-3P+2乙酰磷酸
总反应式：
2葡萄糖+2PEP＝2GA-3P+3乙酰磷酸+2PYR
糖酵解：
GA-3P＝PEP+ATP+NADH
总反应式：
2葡萄糖＝3乙酰磷酸+2PYR+2ATP+2NADH    (3)
磷酸烯醇丙酮酸合酶
PYR+2ATP＝PEP
磷酸转乙酰酶：
乙酰磷酸＝乙酰CoA
总反应式：
2葡萄糖＝3乙酰CoA+2PEP+NADH
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶：
PEP+CO2＝草酰乙酸
总反应式：
2葡萄糖+2CO2＝3乙酰CoA+2草酰乙酸+NADH    或(4)
6葡萄糖+6CO2＝9乙酰CoA+6草酰乙酸+3NADH
乙醛酸支路：
2乙酰CoA＝琥珀酸+NADH
TCA循环：
琥珀酸＝草酰乙酸+ATP+NADH
总反应式：
6葡萄糖+6CO2＝7乙酰CoA+7草酰乙酸+ATP+5NADH
TCA循环：
乙酰CoA+草酰乙酸＝2-酮戊二酸+NADPH+CO2
谷氨酸脱氢酶：
2-酮戊二酸+NH3+NADPH＝谷氨酸
最终反应式：
6葡萄糖＝7谷氨酸+ATP+5 NADH+CO2
或6葡萄糖＝7谷氨酸+11ATP+CO2    (E)
L-谷氨酸的理论重量得率是95.3％
比较反应式(C)、(D)和(E)显示，使用磷酸转酮酶活性显著地增加了L-谷氨酸生物合成的理论得率，与在没有磷酸转酮酶活性的葡萄糖代谢中从1分子葡萄糖获得1分子L-谷氨酸相比，容许产生比利用的葡萄糖分子多1个分子的L-谷氨酸，并防止了CO2释放。
实施例3.计算使用具有或不具有磷酸转酮酶活性的细菌时琥珀酸生产的理论得率。
1.包括PTS、糖酵解和TCA循环的琥珀酸生物合成途径的反应。
PTS+糖酵解：
葡萄糖＝PEP+PYR+ATP+2NADH
磷酸烯醇丙酮酸羧化酶：
PEP+CO2＝草酰乙酸
丙酮酸脱氢酶：
PYR＝乙酰CoA+CO2+NADH
总反应式：
葡萄糖＝草酰乙酸+乙酰CoA+ATP+3NADH
TCA循环：
草酰乙酸+乙酰CoA＝琥珀酸+NADPH+NADH+ATP+2CO2
最终反应式：
葡萄糖＝琥珀酸+NADPH+4NADH+2ATP+2CO2
或假定NADH＝NADPH＝2ATP
葡萄糖＝琥珀酸+12ATP+2CO2    (F)
琥珀酸的理论重量得率是65％。
2.包括糖酵解、非氧化性PPC和仅D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的琥珀酸生物合成途径的反应
糖酵解、非氧化性PPC、D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶、磷酸转乙酰酶和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶给出总反应式(参见实施例2，反应式2)：
5葡萄糖+6CO2＝6乙酰CoA+6草酰乙酸+7ATP
TCA循环：
草酰乙酸+乙酰CoA＝琥珀酸+NADPH+NADH+ATP+2CO2
最终反应式：
5葡萄糖＝6琥珀酸+6CO2+6NADPH+25ATP
或假定NADH＝NADPH＝2ATP
5葡萄糖＝6琥珀酸+6CO2+37ATP    (G)
琥珀酸的理论重量得率是79％
3.包括糖酵解、非氧化性PPC、两种磷酸转酮酶和乙醛酸支路的琥珀酸生物合成途径的反应
糖酵解、非氧化性PPC、果糖-6-磷酸磷酸转酮酶、D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶、磷酸转乙酰酶和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶给出总反应式(参见实施例2，反应式4)：
2葡萄糖+2CO2＝3乙酰CoA+2草酰乙酸+NADH或
4葡萄糖+4CO2＝6乙酰CoA+4草酰乙酸+2NADH
TCA循环：
草酰乙酸+乙酰CoA＝琥珀酸+NADPH+NADH+ATP+2CO2
总反应式：
4葡萄糖＝4琥珀酸+2乙酰CoA+4CO2+4NADPH+6NADH
乙醛酸支路：
2乙酰CoA＝琥珀酸+NADH
最终反应式：
4葡萄糖＝5琥珀酸+4CO2+4NADPH+7NADH
或假定NADH＝NADPH＝2ATP
4葡萄糖＝5琥珀酸+4CO2+22ATP    (H)
琥珀酸的理论重量得率是Y＝82％
比较反应式(F)、(G)和(H)显示，使用磷酸转酮酶活性显著地提高了琥珀酸生物合成的理论得率，与在没有磷酸转酮酶活性的葡萄糖代谢中从1分子葡萄糖获得1分子琥珀酸相比，容许产生比利用的葡萄糖分子多1个分子的琥珀酸，并防止了CO2释放。
实施例4.计算使用具有或不具有磷酸转酮酶活性的细菌时L-亮氨酸生产的理论得率。
1.包括PTS和糖酵解的L-亮氨酸生物合成途径的反应。
糖酵解：
葡萄糖＝2PYR+2ATP+2NADH
L-亮氨酸生物合成：
2PYR+NADPH＝2-酮-异戊酸+CO2
2-酮-异戊酸+乙酰CoA+L-谷氨酸＝亮氨酸+NADH+2-酮戊二酸+CO2  或
2-酮-异戊酸+乙酰CoA＝亮氨酸+NADH-NADPH+CO2
其中NADPH用于L-谷氨酸的再生
丙酮酸脱氢酶
PYR＝乙酰CoA+NADH+CO2
总反应式：
3PYR＝亮氨酸+2NADH-2NADPH+3CO2
最终反应式：
3葡萄糖＝2亮氨酸+4NADH-4NADPH+6CO2+6ATP+6NADH
或假定NADH＝NADPH＝2ATP
3葡萄糖＝2亮氨酸+18ATP+6CO2    (I)
L-亮氨酸的理论重量得率是Y＝48％
2.包括糖酵解、非氧化性PPC和仅D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶的L-亮氨酸生物合成途径的反应
糖酵解、非氧化性PPC、D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和磷酸转乙酰酶给出总反应式(参见实施例2，反应式1)：
5葡萄糖＝6乙酰CoA+PEP+5ATP+6NADH+5PYR
丙酮酸激酶：
PEP＝PYR+ATP
总反应式：
5葡萄糖＝6乙酰CoA+6PYR+6ATP+6NADH
L-亮氨酸生物合成：
2PYR+乙酰CoA＝亮氨酸+NADH-2NADPH+2CO2
总反应式：
5葡萄糖＝3亮氨酸++3乙酰CoA+6ATP+9NADH-6NADPH+6CO2    (5)
糖酵解的另一个作用给出：
3葡萄糖＝6PYR+18ATP    (6)
将反应式5和6相加：
3葡萄糖＝6PYR+18ATP+
5葡萄糖＝3亮氨酸++3乙酰CoA+6ATP+9NADH-6NADPH+6CO2
8葡萄糖＝3亮氨酸+(6PYR+3Ace-CoA)+9NADH-6NADPH+24ATP+6CO2
最终反应式：
8葡萄糖＝6亮氨酸+24ATP+12NADH-12NADPH+12CO2或假定NADH＝NADPH
8葡萄糖＝6亮氨酸+12CO2+24ATP    (J)
L-亮氨酸的理论重量得率是Y＝55％
3.包括糖酵解、非氧化性PPC、两种磷酸转酮酶的L-亮氨酸生物合成途径的反应。
糖酵解、非氧化性PPC、果糖-6-磷酸磷酸转酮酶、D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶给出总反应式(参见实施例2，反应式3)：
2葡萄糖＝3乙酰磷酸+2PYR+2ATP+2NADH
磷酸转乙酰酶：
乙酰磷酸＝乙酰CoA
总反应式：
2葡萄糖＝3乙酰CoA+2PYR+2ATP+2NADH
L-亮氨酸生物合成：
2PYR+乙酰CoA＝亮氨酸+NADH-2NADPH+2CO2
总反应式：
2葡萄糖＝亮氨酸+2乙酰CoA+2ATP+3NADH+-2NADPH+2CO2    (7)
另一个糖酵解作用给出：
2葡萄糖＝3PYR+12ATP    (8)
将反应式7和8相加：
2葡萄糖＝亮氨酸+2乙酰CoA+2ATP+3NADH+-2NADPH+2CO2
+
2葡萄糖＝4PYR+12ATP
＝
4葡萄糖＝亮氨酸+(4PYR+2乙酰CoA)+14ATP+3NADH+-2NADPH+2CO2
L-亮氨酸生物合成：
4PYR+2乙酰CoA＝2亮氨酸+2NADH-4NADPH+4CO2
最终反应式：
4葡萄糖＝3亮氨酸+14ATP+5NADH+-6NADPH+6CO2
或假定NADH＝NADPH＝2ATP
4葡萄糖＝3亮氨酸+6CO2+12ATP    (K)
L-亮氨酸的理论重量得率是Y＝55％
比较反应式(I)、(J)和(K)显示，使用磷酸转酮酶活性显著地增加了L-亮氨酸生物合成的理论产量。
实施例4.从植物乳杆菌克隆磷酸转酮酶基因(xpk1)并评估xpk1基因扩增对大肠杆菌生产有用代谢物的影响
xpk1基因可以从植物乳杆菌菌株8PA3(VKPM B-7495)的染色体DNA克隆。根据报道的核苷酸序列，可以合成用于扩增xpk1基因的、SEQ ID NO：7(引物1)和No.8(引物2)中描述的引物。引物1含有导入其5’-末端的HindIII识别位点。引物2含有导入其5’-末端的EcoRI识别位点。
植物乳杆菌菌株8PA3的染色体DNA可以用作PCR的模板，可以通过普通方法制备。可以使用“Applied Biosystems GeneAmp PCR系统2400”使用Fermentas Taq聚合酶(Fermentas，Lithuania)在以下条件下进行PCR：在95℃初始DNA变性5min；然后30个循环的95℃变性30sec、55℃退火60sec和72℃延伸120sec；最后在72℃多聚化7min。可以用HindIII和EcoRI处理获得的PCR片段并将其插入到预先用相同酶处理的载体pMW119中，所述PCR片段含有带其自身SD序列且没有启动子序列的xpk1基因。因而，可以获得质粒pMW-xpk1。
用pMW-xpk1质粒转化生产有用代谢物的细菌菌株可以通过普通方法进行，以获得含有扩增的xpk1基因的菌株。
通过大肠杆菌菌株VL334thrC+-pMW-xpk1生产L-谷氨酸。
用pMW-xpk1质粒转化大肠杆菌L-谷氨酸生产菌株VL334thrC+(欧洲专利公开No.1172433)可以通过普通方法进行，以获得菌株VL334thrC+-pMW-xpk1。
两种菌株VL334thrC+和VL334thrC+-pMW-xpk1可以在L-琼脂平板上在37℃生长18-24小时。然后，可以将一环细胞转移到含有2ml发酵培养基的试管中。发酵培养基应含有60g/l葡萄糖、25g/l硫酸铵、2g/l KH2PO4、1g/lMgSO4、0.1mg/ml硫胺素、70μg/ml L-异亮氨酸和25g/l白垩(chalk)(pH7.2)。葡萄糖和白垩应单独地灭菌。培养可以在30℃摇动进行3天。在培养之后，积累的L-谷氨酸的积累量可以通过纸层析(液相组合物：丁醇-乙酸-水＝4∶1∶1)及随后用茚三酮(ninhydrin)(丙酮中1％溶液)染色和进一步在含有0.5％CdCl2的50％乙醇中洗脱化合物来测定。
通过大肠杆菌菌株702ilvA-pMW-xpk1生产L-脯氨酸
用pMW-xpk1质粒转化大肠杆菌L-脯氨酸生产菌株702ilvA(VKPMB-8012，俄国专利申请2000124295，欧洲专利公开NO.1172433)可以通过普通方法进行，以获得菌株702ilvA-pMW-xpk1。
两种菌株702ilvA和702ilvA-pMW-xpk1可以在L-琼脂平板上在37℃生长18-24小时。然后，这些菌株可以在如上所述的相同条件中培养。
通过大肠杆菌菌株57-pMW-xpk1生产L-亮氨酸
用pMW-xpk1质粒转化大肠杆菌L-亮氨酸生产菌株57(VKPM B-7386，美国专利6,124,121)可以通过普通方法进行，以获得菌株57-pMW-xpk1。
两种菌株57和57-pMW-xpk1可以在L-琼脂平板上在37℃生长18-24小时。然后，这些菌株可以在如上所述的相同条件下培养，培养基中不添加异亮氨酸。
通过大肠杆菌菌株JM15(ydeD)-pMW-xpk1生产L-半胱氨酸
用pMW-xpk1质粒转化大肠杆菌L-半胱氨酸生产菌株JM15(ydeD)可以通过普通方法进行，以获得菌株JM15(ydeD)-pMW-xpk1。
大肠杆菌菌株JM15(ydeD)是大肠杆菌菌株JM15(美国专利6,218,168)的衍生物，其可以用具有编码膜蛋白的ydeD基因的DNA转化，所述膜蛋白不涉及任何L-氨基酸的生物合成途径(美国专利5,972,663)。
用于评估L-半胱氨酸生产的发酵条件在美国专利6,218,168的实施例6中详细描述。
通过Pantoea ananatis菌株AJ13356-xpk1生产L-谷氨酸。
用pMW-xpk1质粒转化生产L-谷氨酸的成团肠杆菌AJ13356菌株(美国专利6,331,419)(近来重分类为Pantoea ananatis)可以通过普通方法进行，以获得菌株AJ133556-pMW-xpk1。
可以将每种AJ13356和AJ13356-xpk1菌株接种到500ml体积烧瓶中，其含有20ml培养基，所述培养基包含40g/L葡萄糖、20g/L硫酸铵、0.5g/L七水合硫酸镁、2g/L磷酸二氢钾、0.5g/L氯化钠、0.25g/L七水合氯化钙、0.02g/L七水合硫酸亚铁、0.02g/L四水合硫酸锰、0.72mg/L二水合硫酸锌、0.64mg/L五水合硫酸铜、0.72mg/L六水合氯化钴、0.4mg/L硼酸、1.2mg/L二水合钼酸钠(sodium molybdate dihydrate)、2g/L酵母提取物、30g/L碳酸钙、200mg/L L-赖氨酸一氢氯化物(L-lysine monohydrochloride)、200mg/L L-甲硫氨酸和200mg/L DL-α-ε-二氨基庚二酸(DAP)，可以在37℃摇动培养直到培养基中包含的葡萄糖被完全消耗。在培养完成之后，可如上述测量培养基中积累的L-谷氨酸。
实施例5：使用棒状杆菌型细菌确认磷酸转酮酶基因的生理活性
(5-1)磷酸转酮酶基因的克隆和表达质粒的构建
(1)构建pVK9-xfp
从菌株动物双歧杆菌JCM1190的染色体DNA克隆xfp基因。根据动物双歧杆菌ATCC 27674的xfp基因的报道的核苷酸序列(GenBank登记No.AY518213，SEQ ID NO：9)，可以合成SEQ ID NO：13和No：14中描述的引物并用于xfp基因的扩增。动物双歧杆菌JCM1190可以从日本微生物保藏中心(Japan Collection of Microorganisms，JCM)获得。
来自动物双歧杆菌JCM1190的xfp基因的DNA序列在SEQ ID NO：11中示出。
为了从动物双歧杆菌JCM1190扩增xfp基因(SEQ ID NO：11)并将它克隆到pVK9大肠杆菌-棒状杆菌穿梭载体中，使用Wizard Genomic纯化试剂盒(Promega)提取动物双歧杆菌JCM1190的染色体DNA。pVK9是大肠杆菌-棒状杆菌穿梭载体，是通过用BamHI和KpnI消化pHK4(JP 5-007491A)以获得包括它的可复制起点的区域并将该区域导入pHSG299(Takara Bio Inc.的产品)的AvaII位点而获得的。使用动物双歧杆菌的染色体DNA作为模板并使用SEQ IDNO：13和NO：14所示引物作为引物，通过PCR扩增包含启动子区域的xfp基因片段。通过常规方法进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用Xba I消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用Xba I消化的pVK9。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α(Takara Bio Inc.的产品)的感受态细胞。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/ml Km的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10g NaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离含有xfp基因的目标质粒pVK9-xfp。
(2)构建pVK9-PS2_xfp
根据重叠PCR法(R.M.Horton，H.D.Hunts，S.N.Ho，J.K.Pullen，和L.R.Pease，Gene，77，61-68(1989))获得DNA片段，其中动物双歧杆菌xfp基因的天然启动子区域被PS2启动子取代(Peyret JL，Mol Microbiol.1993Jul；9(1)：97-109，WO93/03158)。以下具体描述该方法。
首先，使用含有PS2启动子的pPSTGl(Y.Kikuchi，M.Date，K.Yokoyama，Y.Umezawa and H.Matsui，Appl.Environ.Microbiol.Appl.Environ.Microbiol69，358-366(2003))作为模板以及SEQ ID NO：15和NO：16的合成DNA作为引物进行PCR，以获得PS2启动子的扩增产物。然后，为了获得xfp基因(编码区)的序列的扩增产物，使用pVK9-xfp作为模板以及SEQ ID NO：17和NO：18的合成DNA作为引物进行PCR。SEQ ID NO：16和NO：18是相互互补的。
然后，为了获得含有PS2启动子和动物双歧杆菌xfp基因的片段，以基本上相等的量混合PS2启动子和动物双歧杆菌xfp基因的上述基因片段，使用这种混合物作为模板以及SEQ ID NO：14和NO：19的合成DNA作为引物进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用Xba I消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用Xba I消化的pVK9。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α(Takara Bio Inc.的产品)的感受态细胞。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/ml Km的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10g NaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离含有PS2启动子和xfp基因的目的质粒pVK9-PS2_xfp。
(3)构建pVK9-tac_xfp
根据重叠PCR法(R.M.Horton，H.D.Hunts，S.N.Ho，J.K.Pullen，和L.R.Pease，Gene，77，61-68(1989))获得DNA片段，其中动物双歧杆菌xfp基因的天然启动子区域被tac启动子取代。以下具体描述该方法。
首先，使用pKK223-3(Pharmacia)作为模板以及SEQ ID NO：20和NO：21的合成DNA作为引物进行PCR来获得tac启动子的扩增产物。然后，为了获得xfp基因(编码区)的序列的扩增产物，使用动物双歧杆菌JCM1190的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：14和NO：22的合成DNA作为引物进行PCR。SEQ ID NO：20和NO：22的核苷酸序列是相互互补的。
然后，为了获得含有tac启动子和动物双歧杆菌xfp基因的片段，以基本上相等的量混合tac启动子和动物双歧杆菌xfp基因的上述基因片段，使用这种混合物作为模板以及SEQ ID NO：14和NO：21的合成DNA作为引物进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用Xba I消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用Xba I消化的pVK9。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/ml Km的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10g NaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离含有xfp基因和tac启动子的目的质粒pVK9-tac_xfp。
(4)构建pVK9-PS2_xpkA
从菌株戊糖乳杆菌JCM1558的染色体DNA克隆xpkA基因。戊糖乳杆菌JCM1558可以从日本微生物保藏中心(Japan Collection of Microorganisms，JCM)获得。为了从戊糖乳杆菌JCM1558扩增编码磷酸转酮酶的xpkA基因(SEQ ID NO：1；AJ309011：gi：16605513)并将它克隆到pVK9穿梭载体中，使用Wizard基因组纯化试剂盒(Promega)提取戊糖乳杆菌JCM1558的染色体DNA。
根据重叠PCR方法通过用PS2启动子取代编码磷酸转酮酶的戊糖乳杆菌xpkA基因的启动子区域获得DNA片段。在此具体描述该方法。
首先，使用含有PS2启动子的pPSTG1(Y.Kikuchi，M.Date，K.Yokoyama，Y.Umezawa and H.Matsui，Appl.Environ.Microbiol.Appl.Environ.Microbiol69，358-366(2003))作为模板以及SEQ ID NO：15和NO：23的合成DNA作为引物进行PCR，来获得PS2启动子的扩增产物。然后，为了获得xpkA基因(编码区)的序列的扩增产物，使用戊糖乳杆菌JCM1558的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：24和NO：25的合成DNA作为引物进行PCR。SEQ ID NO：23和NO：25的核苷酸序列是相互互补的。
然后，为了获得含有PS2启动子和戊糖乳杆菌xpkA基因的片段，以基本上相等的量混合PS2启动子和戊糖乳杆菌xpkA基因的上述基因片段，使用这种混合物作为模板以及SEQ ID NO：19和NO：24的合成DNA作为引物进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用Xba I消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用Xba I消化的pVK9。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/ml Km的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10g NaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离含有PS2启动子和xpkA的目的质粒pVK9-PS2_xpkA。
(5-2)磷酸转酮酶的体内生理活性的确认
(1)构建ATCC13869ΔaceE菌株
PDH缺陷菌株是醋酸盐(acetate)营养缺陷的。另一方面，其中导入了磷酸转酮酶基因的PDH(丙酮酸脱氢酶)缺陷菌株对于醋酸盐不再是营养缺陷的。因此，证实了导入xfp或xpkA基因的影响。
构建基因破坏的载体
(A)构建pBS3
用枯草芽孢杆菌的染色体DNA作为PCR的模板和SEQ ID NO：42和NO：43的合成DNA作为引物，通过PCR获得了sacB基因(SEQ ID NO：40)。通过在维持94℃5分钟1个循环之后，重复25次94℃ 30秒、49℃30秒和72℃2分钟的循环，使用LA taq(TaKaRa Bio)，进行PCR反应。通过普通方法纯化之后，用BglII和BamHI消化PCR产物并平端化。将得到的PCR产物与已经用AvaII消化并平端化的pHSG299连接。所述质粒用于转化大肠杆菌JM109(TakaraBio Inc.)的感受态细胞，然后将转化体悬浮在含有25mg/ml卡那霉素的LB培养基中并培养过夜。挑出菌落并进行单菌落分离，然后获得转化体。从转化体分离含有sacB基因的目标质粒pBS3。
pBS3的构建步骤在图2中说明。
(B)构建pBS4S
通过重叠PCR，通过破坏质粒pBS3中卡那霉素抗性基因的编码区中SmaI位点来获得质粒。首先，使用pBS3作为模板以及SEQ ID NO：44和NO：45的合成DNA作为引物，进行PCR，获得含有卡那霉素抗性基因的N-末端区域的PCR产物。另一方面，为了获得含有卡那霉素抗性基因的C-末端区域的PCR产物，使用pBS3作为模板和SEQ ID NO：46和NO：47的合成DNA作为引物进行PCR。通过在98℃热处理5分钟之后，重复25次98℃10秒、57℃30秒和72℃1分钟的循环，使用Pyrobest DNA聚合酶(Takara Bio Inc.)，可以获得PCR产物。SEQ ID NO：45和NO：46的核苷酸序列是相互部分地互补的。
通过导入不引起氨基酸取代的突变，破坏这个序列的SmaI位点。为了获得其中SmaI位点被破坏的突变卡那霉素抗性基因片段，将卡那霉素抗性基因的基因产物的N-末端区域和基因产物的C-末端区域混合，形成几乎等摩尔的混合物。使用得到的混合物作为PCR的模板以及SEQ ID NO：44和NO：47的合成DNA作为引物，进行PCR。获得在卡那霉素抗性基因中具有突变的PCR产物。通过在98℃热处理5分钟的一个循环之后，重复25次包括98℃10秒、57℃30秒和72℃1.5分钟的循环，使用Pyrobest DNA聚合酶(Takara Bio Inc.)，可以获得目标PCR产物。
在纯化之后用BanII消化PCR产物，并插入到上述的pBS3的BanII位点中。获得的DNA用于转化大肠杆菌JM109(Takara Bio Inc.)的感受态细胞，悬浮在含有25mg/ml卡那霉素的LB培养基中并培养过夜。挑出菌落并进行单菌落分离，获得转化体。从转化体分离目的质粒pBS4S。pBS4S的构建步骤在图3中说明。
(C)构建pBS5T
通过以下步骤构建具有来自棒状杆菌型细菌的温度敏感复制起点的质粒pBS5T。
通过用BamHI和SmaI消化pHSC4(US5616480A)并将消化的片段平端化来获得温度敏感复制的区域，然后将这个区域连接到pBS4S的平末端化的NdeI位点。获得的DNA用于转化大肠杆菌JM109(Takara Bio Inc.的产品)的感受态细胞，将转化体悬浮在含有25mg/ml Km的LB培养基中并培养过夜。挑出菌落并进行单菌落分离，然后获得转化体。从转化体分离含有sacB片段和温度敏感复制起点的目的质粒pBS5T。图4说明了pBS5T的构建方案。
(2)aceE基因破坏的片段的克隆
通过重叠PCR方法，使用根据谷氨酸棒杆菌ATCC13032的aceE基因的报道的核苷酸序列(GenBank数据库登记No.NC 003450；SEQ ID NO：38)的合成DNA作为引物，从ATCC13869获得编码丙酮酸脱氢酶(丙酮酸脱氢酶E1元件)的aceE基因破坏的DNA片段。
首先，使用谷氨酸棒杆菌ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ IDNO：26和NO：27的合成DNA作为引物进行PCR，来获得aceE基因的N-末端侧的扩增产物。然后，为了获得aceE基因的C-末端侧的扩增产物，使用谷氨酸棒杆菌ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：28和NO：29的合成DNA作为引物进行PCR。SEQ ID NO：26和NO：28的序列是相互互补的。
然后，为了获得其中内部序列被缺失的aceE片段，以基本上等摩尔的量混合N-和C-末端的上述基因片段，使用这种混合物作为模板以及SEQ ID NO：30和NO：31的合成DNA作为引物进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用Sma I消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用Sma I消化的上述的pBS5T。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/ml Km的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10g NaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离目的质粒pBS5T-ΔaceE。
(3)构建aceE-破坏的菌株
aceE基因编码丙酮酸脱氢酶E1元件。
首先，通过电脉冲方法用高浓度质粒pBS5T-ΔaceE转化ATCC13869菌株，铺在含有25mg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨(polypeptone)、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/LMgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，pH值7.5(NaOH))上，在25℃培养约60小时，分离出现的菌落作为转化体。然后，转化体在34℃在CM-Dex液体培养基上培养过夜。在合适的稀释后，将培养的转化体悬浮在含有25mg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基中，在34℃培养约30小时。作为质粒上破坏类型的aceE基因(ΔaceE)与染色体上天然aceE基因之间的单交叉同源重组的结果，获得了可以在这个培养基中生长、并且在染色体上兼有卡那霉素抗性基因和源自质粒的sacB基因的ΔaceE菌株。
接下来，将通过单交叉同源重组获得的ΔaceE菌株在31.5℃在CM-Dex液体培养基上培养过夜。在合适的稀释之后，将单交叉同源重组的ΔaceE菌株悬浮在无卡那霉素并含有10％蔗糖的Dex-S10培养基(10g/L蔗糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/LFeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·4H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物、10μg/L生物素和2g/L醋酸钠、用KOH调节到pH7.5)中。在34℃进行培养约30小时。作为第二次交叉同源重组的结果，获得了不具有染色体SacB基因且对蔗糖不敏感的菌株。
以此方式获得的菌株包括具有破坏型的aceE基因的那些菌株和具有野生型aceE基因的那些菌株。通过使用在Dex-S10琼脂培养基上培养获得的细胞直接进行PCR反应，来确认aceE基因是破坏型还是野生型。选出含有破坏型的aceE基因的菌株，命名为“ATCC13869ΔaceE”。
(4)评估ΔaceE菌株中磷酸转酮酶的生理活性
将pVK9(用于对照的质粒)、pVK9-xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒)、pVK9-PS2_xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒，其中它的天然启动子被PS2启动子取代)和pVK9-PS2_xpkA(扩增戊糖乳杆菌的xpkA基因的质粒，其中它的天然启动子被PS2启动子取代)各自导入ATCC13869ΔaceE菌株来获得表达磷酸转酮酶的菌株，并将pVK9导入ATCC13869菌株作为对照。具体地，通过电脉冲方法各自转化ATCC13869ΔaceE菌株和ATCC13869菌株，铺在含有25mg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/LKH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，通过NaOH调节pH值7.5)上，在31.5℃培养约30小时。将出现的菌落分离为转化体，分别称为ATCC13869ΔaceE(pVK9)、ATCC13869ΔaceE(pVK9-xfp)、ATCC13869ΔaceE(pVK9-PS2_xfp)、ATCC13869ΔaceE(pVK9-PS2_xpkA)和ATCC1869(pVK9)。
将这些菌株在微摇动器(“Biophotorecorder TN-1506”，ADVANTEC的产品)中培养，以时间的函数测量OD。在此采用两种培养基，也就是，含有25mg/ml卡那霉素的基本液体培养基(由10g/L葡萄糖、2.5g/L(NH4)2SO4、0.5g/L KH2PO4、0.25g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/LMnSO4·7H2O、2g/L尿素、50μg/L生物素、100mL VB1-HCl、15mg/L原儿茶酸、0.02mg/L CuSO4、10mg/L CaCl2、和40g/L MOPS组成，通过KOH调节pH7.0)，和含有醋酸盐(2g/L醋酸钠)的基本液体培养基。分别在图6和5中说明在基本培养基上培养的结果和在含有醋酸盐的基本培养基上培养的结果。ATCC13869ΔaceE(pVK9)菌株可以在含有醋酸盐的基本培养基上生长，而不能在基本培养基上生长，因而展现了醋酸盐营养缺陷。携带pvK9-xfp、pVK9-PS2_xfp和pVK9-PS2_xpkA的ATCC13869ΔaceE菌株分别可以在基本培养基上生长，说明导入xfp或xpkA产生了对PDH缺陷菌株的醋酸盐营养缺陷的补偿。因此，证实了被导入谷氨酸棒杆菌中的磷酸转酮酶的生理活性。
实施例6.确认磷酸转酮酶的酶活性
棒状杆菌型细菌可以在生物素有限、或培养基中添加青霉素或表面活性剂的情况下生产L-谷氨酸(参见WO95/34672)。另一方面，已知的是，被修饰以降低α-酮戊二酸脱氢酶活性(E1.2.4.2 sucA；2-酮戊二酸脱氢酶)的菌株甚至可以不在这种条件下生产L-谷氨酸(Kimura E.，Adv.Biochem.Eng.Biotechno1.，79，37-57(2003)，“Metabolic engineering of glutamic acid production”)。因此，我们研究了通过使用sucA缺陷菌株谷氨酸棒杆菌ATCC13869导入磷酸转酮酶基因，来改善L-谷氨酸的发酵产量。
(6-1)构建ATCC13869ΔsucA菌株
(1)克隆破坏sucA基因的片段
使用根据谷氨酸棒杆菌ATCC13032的sucA基因核苷酸序列(GenBank数据库登记No.NC_003450；SEQ ID NO：48)设计的合成DNA作为引物，通过重叠PCR法，获得了源自菌株谷氨酸棒杆菌ATCC13869的缺失sucA的片段。
首先，使用谷氨酸棒杆菌ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ IDNO：32和NO：33的合成DNA作为引物进行PCR，来获得sucA基因的N-末端的扩增产物。然后，为了获得sucA基因的C-末端的扩增产物，使用谷氨酸棒杆菌ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：34和NO：35的合成DNA作为引物进行PCR。SEQ ID NO：33和NO：34的序列是相互互补的。
然后，为了获得其中它的内部序列被缺失的sucA片段，以基本上等摩尔的量混合N-和C-末端的上述基因片段，使用这种混合物作为模板以及SEQ IDNO：36和NO：37的合成DNA作为引物进行PCR。
按常规方式纯化得到的PCR产物，并用BamHI消化。通过使用连接试剂盒(Takara Bbamhio Inc的产品)将消化的PCR产物连接到已经用BamHI消化的以上描述的pBS3。连接混合物用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(TakaraBio Inc.的产品)。将细胞铺在含有100μM IPTG、40mg/ml X-Gal和25mg/mlKm的LB培养基(1L中10g细菌用胰蛋白胨、5g细菌用酵母提取物和10gNaCl)上，培养过夜。然后，选择出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从转化体分离目标质粒pBS3ΔsucA。
(2)制备破坏了sucA的菌株
在(A)中制备的pBS3ΔsucA不含有在棒状杆菌型细菌的细胞中可自主复制的区域。因此，如果用这个质粒转化棒状杆菌，通过同源重组将这个质粒整合到其染色体中的菌株将作为转化体出现，虽然它以极低的频率发生。通过电脉冲法用高浓度的质粒pBS3ΔsucA转化谷氨酸棒杆菌ATCC13869，铺在含有25mg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，通过NaOH调节pH值7.5)上，在31.5℃培养约30小时，然后将出现的菌落分离作为转化体。作为在质粒的sucA基因片段和染色体上天然基因之间同源重组的结果，这些转化体具有源自质粒的卡那霉素抗性基因和SacB基因。
接下来，将获得的第一次重组菌株在31.5℃在无卡那霉素的CM-Dex液体培养基上培养过夜。在合适的稀释之后，将培养的转化体铺在含有10％蔗糖的无卡那霉素Dex-S10培养基(10g/L蔗糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/LMnSO4·4H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，通过KOH调节pH值7.5)上，在31.5℃培养约30小时，将出现的菌落分离作为转化体。作为第二次交叉同源重组的结果，获得了染色体丢失了SacB基因并且对蔗糖不敏感的菌株。
照这样获得的菌株包括具有破坏型sucA基因的那些和具有野生型sucA基因的那些。通过使用在Dex-S10琼脂培养基上培养获得的细胞直接进行PCR反应，来确认sucA基因是破坏类还是野生型。选择具有破坏型sucA基因的菌株。
按以下方法评估破坏了sucA的菌株的L-谷氨酸生产。将通过在CM2B平板培养基上培养获得的破坏了sucA的菌株的细胞接种到烧瓶中，所述烧瓶含有1L纯水中80g葡萄糖、1g KH2PO4、0.4g MgSO4、30g(NH4)2SO4、0.01gFeSO4·7H2O、0.01g MnSO4·7H2O、15ml大豆水解产物溶液、200mg盐酸硫胺素、60μg生物素和50g CaCO3(用KOH调节到pH8.0)，在31.5℃摇动培养直到糖类被完全消耗。完成培养之后，测量培养液中积累的L-谷氨酸的量。选择可以比ATCC13869产生更高L-谷氨酸发酵产量的破坏了sucA的菌株，作为ATCC13869的破坏了sucA的菌株，并命名为ATCC13869ΔsucA。
(6-2)在破坏了sucA的ATCC13869菌株中确认磷酸转酮酶基因表达和酶活性
通过使用已经被修饰以增强磷酸转酮酶表达的菌株，研究了磷酸转酮酶基因的表达和它的酶活性。
将pVK9(用于对照的质粒)、pVK9-xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒)、pVK9-tac_xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒，其中它的天然启动子被tac启动子取代)、pVK9-PS2_xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒，其中它的天然启动子被PS2启动子取代)和pVK9-PS2_xpkA(用于扩增戊糖乳杆菌的xpkA基因的质粒，其中它的天然启动子被PS2启动子取代)各自导入以上描述的谷氨酸棒杆菌ATCC13869ΔsucA来获得表达磷酸转酮酶的菌株。具体地，通过电脉冲方法用每种质粒转化ATCC13869ΔsucA菌株，铺在含有25mg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，通过NaOH调节pH7.5)上，在31.5℃培养约30小时。分离出现的菌落作为转化体，分别称为ATCC13869ΔsucA(pVK9)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-xfp)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-tac_xfp)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xfp)和ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xpkA)。
为了获得粗酶溶液，将通过在CM-Dex平板培养基上培养每个菌株获得的上述菌株的细胞接种到烧瓶中，所述烧瓶含有1L纯水中的30g葡萄糖、1gKH2PO4、0.4g MgSO4、15g(NH4)2SO4、0.01g FeSO4·7H2O、0.01g MnSO4·7H2O、13.7ml大豆水解产物溶液、200mg盐酸硫胺素、300μg生物素和50g CaCO3(用KOH调节pH8.0)，在31.5℃摇动培养。如通过“Hitachi分光光度计U-2000A”测量的，当细胞浓度的OD620变成15时终止培养。通过在3000rpm中度离心30秒除去碳酸钙之后，收集细胞。以下步骤在0到4℃进行。将收集的细胞用0.85NNaCl溶液洗涤两次，重悬浮在4ml/g(湿重)缓冲液A(100mM KPO4(pH6.5)、30mM KCl、0.1mM EDTA、1mM MgCl2、0.2mM PMSF、2mM DTT)中。通过超声波细胞破碎机(“Bioruptor”)破坏细胞。通过离心(15,000g，60min))除去未破坏的细胞来获得粗酶溶液。通过使用CBB溶液(蛋白质分析CBB溶液，Nacalai Tesque的产品)用牛血清白蛋白作为标准样品，定量粗酶溶液中的蛋白质浓度。
通过SDS-PAGE，分离粗酶溶液中的蛋白质。接下来将描述分离的具体过程。在浓度调整之后，将粗酶溶液与样品缓冲液(“Laemmli样品缓冲液”，BIORAD的产品)以1∶1混合。在95℃加热2分钟后，将得到的混合物上样到“Ready GelJ 10％”(BIORAD的产品)上，使得上样的蛋白质的量为10μg，随后在200V的恒定电压下在MiniProtean III Cell电泳槽(BIORAD的产品)中电泳40分钟。对于电泳缓冲液，使用tris/甘氨酸/SDS(BIORAD)。对于染色，使用考马斯亮蓝(“Bio Safe Coomassei”，BIORAD)。结果在以下的图7中示出(标记物：BIORAD的产品，精确度加蛋白质标准(precision plus protein standards)(#161-0363))。
图7的泳道1到5分别显示了ATCC13869ΔsucA(pVK9)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-xfp)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-tac_xfp)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xfp)和ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xpkA))。与对照条带(pVK9)相比，相应于磷酸转酮酶基因产物的大约90kD条带，在被修饰以增强磷酸转酮酶活性的菌株中变得浓稠(denser)。这清楚地表明了，在棒状杆菌型细菌中出现了磷酸转酮酶基因的足量的表达。
根据Meile的方法(L.Meile，L.M.Rohr，T.A.Geissmann，M.Herenspergerand M.Teuber，J.Bacteriol.183，2929-2936(2001))，测量磷酸转酮酶基因的酶活性。在与0.075ml粗酶溶液(33.3mM KPO4(pH 6.5)、1.9mM盐酸L-半胱氨酸、23mM氟化钠、8mM碘乙酸钠和27mM D-果糖6-磷酸)在37℃反应30分钟后，添加0.075ml盐酸羟胺(2M，pH6.5)。容许混合物在室温下反应10分钟，然后用0.05ml 15％(wt/vol)三氯乙酸、0.05ml 4M HCl和0.05ml FeCl3·6H2O(0.1m HCl中，5％wt/vol)染色。通过离心分离除去结晶之后，使用酶活性读数器(“Spectra max 190”，Molecular Devices的产品)测量OD505。
结果以下在表3中示出。在对照(pVK9)中没有检测到酶活性，而在磷酸转酮酶活性已经被增强的菌株中检测到酶活性。
表3
  pVK9     xfp   PS2_xfp PS2_xpkA
  ΔABS/mg/hr   痕量     1.00   2.68 2.38
实施例7：评估具有增强的磷酸转酮酶活性的细菌生产L-谷氨酸的能力
(7-1)在含有足够量生物素的条件下评估
通过使用菌株谷氨酸棒杆菌ATCC13869ΔsucA，评估了导入磷酸转酮酶基因对L-谷氨酸的发酵产量的影响。将通过在CM-Dex平板培养基上培养获得的ATCC13869ΔsucA(pVK9)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-xfp)、ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xfp)和ATCC13869ΔsucA(pVK9-PS2_xpkA)菌株的细胞接种到烧瓶中，所述烧瓶含有1L纯水中30g葡萄糖、1g KH2PO4、0.4gMgSO4、15g(NH4)2SO4、0.01g FeSO4·7H2O、0.01g MnSO4·7H2O、13.7ml大豆水解产物溶液、200mg盐酸硫胺素、300μg生物素和50g CaCO3(用KOH调节到pH8.0)，在31.5℃摇动培养直到糖类被完全消耗。完成培养之后，测量培养液中积累的L-谷氨酸的量和OD。结果在图8中示出。结果显示，与对照相比，其中扩增了xfp基因的所有菌株显示了高L-谷氨酸产量。
(7-2)添加青霉素时的评估
为了在补偿的(equalized)最终OD下评估，通过添加青霉素G停止细胞的增殖。当培养开始后OD达到10到14的范围内时在多个生长点处，通过向如上文(1)中描述的培养基中添加青霉素G，使得它的终浓度是4U/ml，来比较L-谷氨酸的产量。结果在图9中示出。这些结果显示，即使在它们的最终细胞计数相等的点上在它们之中比较L-谷氨酸的产量，与对照菌株相比，在xfp基因或xpk基因扩增的菌株中L-谷氨酸产量更高。上述结果显示，导入磷酸转酮酶对于改善L-谷氨酸发酵产量是有效的。
实施例8.动物双歧杆菌的xfp基因的表达对Pantoea ananatis菌株的L-谷氨酸积累的影响
使用Bio-Rad MicroPulser通过电穿孔将表达动物双歧杆菌的xfp基因的pVK9-PS2-xfp质粒和对照pVK9穿梭载体导入NP106/RSFCPG生产L-谷氨酸的菌株。通过将AJ13601菌株铺在不含有氯霉素作为选择标记物的培养基上，来从AJ13601菌株(FERM BP-7207；欧洲专利公开1078989)消除(curing)pSTVCB质粒，从而获得NP106/RSFCPG菌株。
为了用pVK9-PS2-xfp质粒或pVK9载体转化NP106/RSFCPG菌株，在添加四环素(10μg/ml)的LBG-M9培养基(胰蛋白胨(trypton)(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、NaCl(5g/L)、葡萄糖(5g/L)、0.5×M9盐溶液)上过夜培养获得的细胞，用新鲜的LBG-M9培养基1∶100稀释，在34℃通气培育直至OD595＝0.6。通过离心收获来自10ml培养物的细胞，用冰冷的去离子水和用冰冷的10％甘油洗涤三次，重悬浮在10％甘油中。将10ng质粒DNA添加到细胞悬液，施加电脉冲(E＝20kV/em，t＝5msec)。在电穿孔后立即添加1ml LBG-M9培养基。将细胞在34℃通气培育2小时，铺在含40μg/ml卡那霉素的固体LBG-M9培养基上。将平板在34℃下培育48小时。将生长的克隆接种到含有40μg/ml卡那霉素和10μg/ml四环素的2ml LBG-MES培养基(胰蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、NaCl(5g/L)、葡萄糖(5g/L)、MES 0.1M、pH7.0)中，在34℃下通气培育过夜。将含有细菌细胞的80μl过夜培养的培养基接种到测试试管中的2ml发酵培养基(葡萄糖(40g/L)、MgSO4·7H2O(0.5g/L)、(NH4)2SO4(16g/L)、KH2PO4(0.3g/L)、KCl(1.0g/L)、MES(10g/L)、甜菜碱(1.0g/L)、FeSO4·7H2O(10mg/L)、MnSO4·5H2O(10mg/L)、赖氨酸、甲硫氨酸和DAP各100mg/L、胰蛋白胨(1g/L)、酵母提取物(1g/L)、泛酸钙(10mg/L)、CaCO3(30g/L))中，并通气培育26小时。通过TLC方法测定积累的L-谷氨酸的量。4个独立实验的平均数据在表4中示出。
表4.
菌株     OD540     Glu，g/L     收率，％
NP106 RSFCPG/pVK9     21.8     9.8     24.4
 NP106 RSFCPG/pVK9-PS2-xfp     20.7     12.4     30.9
可以从表4中看出，携带pVK9-PS2-xfp质粒的菌株显示L-谷氨酸积累比用载体pVK9转化的对照菌株高大约2.6g/L，其对应于至少6％的收率增加。
实施例8.通过将磷酸转酮酶活性的增强和6-磷酸果糖激酶(PFK)活性的降低进行组合来改善L-谷氨酸的发酵产量
8-1.制备sucA和PFK双破坏的菌株
(1)构建用于破坏pfk基因的质粒
使用根据谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的相应基因的核苷酸序列(GenBank数据库登记No.NC_003450；SEQ ID NO：61)设计的合成DNA作为引物，通过重叠PCR法获得了缺乏源自菌株ATCC13869的pfk的ORF的基因片段。具体地，使用谷氨酸棒杆菌菌株ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ IDNO：50和NO：51的合成DNA作为引物，通过常规PCR方法获得了pfk基因的N-末端区域的扩增产物。另一方面，为了获得pfk基因的C-末端区域的扩增产物，使用菌株ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：52和NO：53的合成DNA作为引物进行常规PCR。SEQ ID NO：51和NO：53的序列是相互互补的。
然后，为了获得其中它的内部序列被缺失的pfk基因片段，以基本上等摩尔的量混合pfk的N-末端和C-末端区域的上述扩增产物，使用这种混合物作为模板以及SEQ ID NO：54和NO：55的合成DNA作为引物通过常规PCR获得基因扩增产物。按普通方法纯化PCR产物，然后用BamH I消化，并插入到上述pBS5T的BamH I位点。这个DNA用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)，将细胞铺在补充有100μM IPTG、40μg/ml X-Gal和25μg/ml卡那霉素的LB培养基上并培养过夜。然后，挑选出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从获得的转化体分离质粒，选择具有插入目标PCR产物的质粒，并命名为pBS5T-Δpfk。
(2)制备破坏的菌株
首先通过电脉冲法用高浓度的质粒pBS5T-Δpfk转化上述菌株ATCC13869ΔsucA，铺在补充有25μg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/LMgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素、用NaOH调节pH7.5)上，在25℃培养约60小时。得到的转化体在34℃摇动培养过夜，然后适当地稀释，平铺在补充有25μg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基上并培养30小时。作为所述质粒上的pfk基因片段和位于菌株ATCC13869的染色体上的相同基因之间同源重组的结果，可以在这种培养基上生长的菌株是在其中卡那霉素抗性基因和来自所述质粒的SacB基因被整合到其染色体中的菌株。
然后，将第一重组体在31.5℃在无卡那霉素的液体CM-Dex培养基中培养过夜，在合适的稀释之后，将它们铺在无卡那霉素、含10％蔗糖的Dex-S10培养基(10g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/LKH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/LMnSO4·4H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物、10μg/L生物素和2g/L醋酸钠、用KOH调节pH7.5)上，在34℃培养约30小时。结果，获得了菌株，其由于第二次同源重组看起来丧失了SacB基因并对蔗糖不敏感。
获得的菌株包括具有源自pBS5T-Δpfk的破坏型的pfk基因的那些，和具有野生型pfk基因的那些。为了证实pfk基因是破坏型还是野生型，使用在Dex-10琼脂培养基上培养的细菌细胞进行直接PCR分析。选择仅具有破坏型pfk的菌株，命名为ATCC13869ΔsucAΔpfk。
8-2获取编码具有降低活性的PFK的突变pfk基因
(1)具有降低活性的突变PFK
对于具有降低的活性的PFK，获得了PFK*1(SEQ ID NO：57)和PFK*2(SEQ ID NO：59)。PFK*1是通过在野生型PFK(SEQ ID NO：61)的位置171处用赖氨酸取代谷氨酸产生的。PFK*2是通过在野生型PFK(SEQ ID NO：61)的位置171处用精氨酸取代谷氨酸产生的。使用野生型pfk基因作为模板以及用于导入所述突变的合成DNA作为引物通过交叉PCR可以获得这些序列。
(2)构建突变pfk基因和磷酸转酮酶基因的表达载体
为了构建PFK表达载体，使用谷氨酸棒杆菌菌株ATCC13869的染色体DNA作为模板以及SEQ ID NO：54和NO：55的合成DNA作为引物进行常规PCR。按普通方法纯化PCR产物，然后用Xba I和Kpn I消化，将含有pfk基因的基因片段插入到上述pVK9的Xba I-Kpn I位点。这个DNA用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)，将细胞铺在补充有100μM IPTG、40μg/ml X-Gal和25μg/ml Km的LB培养基上并培养过夜。然后，挑选出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从获得的转化体分离质粒，选择具有目标基因的插入的质粒，命名为pVK9-PFK。
然后，为了构建同时表达突变PFK和磷酸转酮酶的质粒，用Xba I消化上述pVK9-PS2_xfp，然后纯化含有PS2_xfp的基因片段并插入到pVK9-PFK的Xba I位点中。这个DNA用于转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞(Takara Bio Inc.的产品)，将细胞铺在补充有100μM IPTG、40μg/ml X-Gal和25μg/ml Km的LB培养基上并培养过夜。然后，挑选出现的白色菌落，分成单个菌落来获得转化体。从获得的转化体分离质粒，选择具有PS2_xfp和pfk的插入的质粒，命名为pVK9-PS2_xfp_PFK。
为了构建同时表达突变pfk基因和磷酸转酮酶基因的质粒，根据与pVK9-PS2_xfp_PFK的构建中采用的相同方法，产生pVK9-PS2_xfp_PFK*1和pVK9-PS2_xfp_PFK*。
(3)分析活性
PFK和磷酸转酮酶的上述表达质粒(pVK9-PS2_xfp_PFK，pVK9-PS2_xfp_PFK*1和pVK9-PS2_xfp_PFK*2)用于转化上述菌株ATCC13869ΔsucAΔpfk来检查PFK的酶活性。通过电脉冲法进行转化，通过将细菌细胞铺在补充有25μg/ml卡那霉素的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/LFeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物和10μg/L生物素，用NaOH调节pH7.5)上，并在31.5℃培养约30小时，来获得转化体。
按以下方式获得粗酶溶液。收集对数生长期中的细菌细胞，用100mM Kpi缓冲液(pH8.2)洗涤，然后溶于相同的缓冲液中，随后超声破碎。通过超速离心(60000rpm，30min)分离可溶组分来获得粗酶溶液。以下显示在粗酶溶液中定量蛋白质浓度的方法。将粗酶溶液和已知浓度用于产生标准曲线的BSA溶液各自与CBB溶液(蛋白质分析CBB溶液，Nacalai Tesque)反应来显色，随后使用spectra max 190(Molecular Divices)测量OD595nm。
然后，根据常规方法(Denise Kotlars和Henri Buc，Methods inEnzymology(1982)90：60-70)测量PFK活性。具体方法显示如下。将粗酶溶液添加到100mM Tris-HCl(pH8.2)、10mM MgCl2、1mM ATP、1U/ml甘油-3-磷酸脱氢酶、1U/ml磷酸丙糖异构酶、1U/ml醛缩酶、0.2mM NADH和10mM果糖-6-磷酸，随后使用spectra max 190(Molecular Divices)测量OD340nm中的时间-过程变化，从而测定酶活性。当野生型PFK的活性被设为1时，降低的PFK的相对活性在以下的表5中示出。
表5.
pVK9-PS2_xfp_PFK pVK9-PS2_xfp_PFK*1  pVK9-PS2_xfp_PFK*2
相对PFK活性 1 0.33  0.41
8-3通过降低PFK活性增加L-谷氨酸的产量
(1)在含有足量生物素的条件下评估
通过使用菌株谷氨酸棒杆菌ATCC13869ΔsucAΔpfk，评估了PFK活性降低对L-谷氨酸发酵产量的影响。将通过在CM-Dex平板上培养菌株获得的每个菌株的细胞接种到培养基中，所述培养基在1L纯水中含有30g葡萄糖、1gKH2PO4、0.4g MgSO4、15g(NH4)2SO4、0.01g FeSO4·7H2O、0.01gMnSO4·7H2O、13.7ml大豆水解产物溶液、200μg盐酸硫胺素、300μg生物素和50g CaCO3(用KOH调节pH8.0)，并在31.5℃培养。完成培养之后，测量培养液中积累的L-谷氨酸的量和细菌细胞浓度(OD)。结果在图10中示出。结果显示，与表达野生型pfk基因的菌株相比，表达突变pfk基因的菌株显示了更高的L-谷氨酸产量。
(2)添加青霉素时的评估
当培养开始后OD达到10到14的范围内时在多个生长点处，通过向上述培养基中添加青霉素G到4U/ml的终浓度，以停止细胞生长来获得均等的最终细菌量，来比较L-谷氨酸的产量。结果在图11中示出。上述结果显示，在导入磷酸转酮酶的菌株中PFK活性的降低对于改善L-谷氨酸的发酵产量是有效的。
实施例9：使用其中磷酸转酮酶活性被增强的细菌评估L-谷氨酰胺生产
使用菌株黄色短杆菌AJ11576(JP56-16479A)，评估了导入磷酸转酮酶基因对于改善L-谷氨酰胺发酵产量的影响。
AJ11576菌株对具有维生素P活性的化合物有抗性。这个菌株于1980年5月6日保藏在产业技术综合研究所，特许微生物保藏中心(Central 6，1-1，Higashi 1-Chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305-8566，Japan)，收到的登记号是FERM P-05502。然后它根据布达佩斯条约的规定转为国际保藏，接受的登记号是FERM BP-10381。
将pVK9(用于对照的质粒)和pVK9-PS2_xfp(用于扩增动物双歧杆菌的xfp基因的质粒，其中天然启动子被PS2启动子取代)各自导入上述菌株黄色短杆菌AJ11576来获得表达磷酸转酮酶的菌株。具体地，通过电脉冲法用每种质粒转化菌株，铺在含有25mg/ml卡那霉素的CM2G培养基(5g/L葡萄糖、10g/L多蛋白胨、10g/L酵母提取物、5g/L NaCl、用KOH调节pH7.0)上，在31.5℃培养约30小时。分离出现的菌株作为转化体，分别称为AJ11576(pVK9)和AJ11576(pVK9-PS2_xfp)。
将通过在CM2G平板培养基上培养获得的AJ11576(pVK9)和AJ11576(pVK9-PS2_xfp)菌株的细胞接种到烧瓶培养基中，所述培养基在1L纯水中含有100g葡萄糖、2.5g KH2PO4、0.4g MgSO4、60g(NH4)2SO4、0.01gFeSO4·7H2O、5.7ml大豆水解产物溶液、2mg盐酸硫胺素、4μg生物素、0.02ml GD-113和50g CaCO3(用NaOH调节到pH6.8)，在31.5℃摇动培养直到糖类被完全消耗。完成培养之后，测量培养液中积累的L-谷氨酰胺的量和OD。结果在图12中示出。显示了与对照菌株相比，所有扩增了xfp基因的菌株都显示了高的L-谷氨酰胺产量。
虽然已经参考本发明的优选的实施方案详细地描述了本发明，但是对于本领域技术人员显而易见的是可以进行各种变化和采用同等物，而不背离本发明的范围。所有在此引用的参考文件，包括优先权文件、RU 2004124226和US 60/644,562，都并入为本申请的部分以作参考。
序列表
<110>味之素株式会社(Ajinomoto Co.，Inc.)
<120>磷酸转酮酶用于生产有用代谢产物的用途
<130>C272-C5130
<150>RU2004124226
<151>2004-08-10
<150>US 60/644562
<151>2005-01-19
<160>81
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2367
<212>DNA
<213>戊糖乳杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2367)
<223>
<400>1
atg tct aca gat tac tca tca cca gca tat ttg caa aaa gtt gat aag     48
Met Ser Thr Asp Tyr Ser Ser Pro Ala Tyr Leu Gln Lys Val Asp Lys
1               5                   10                  15
tac tgg cgt gct gcc aac tat tta tca gtt ggt caa ctt tat tta aaa     96
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Lys
            20                  25                  30
gat aat cct tta tta caa cgg cca tta aag gct ag tgac gtt aag gtt    144
Asp Asn Pro Leu Leu Gln Arg Pro Leu Lys Ala Ser Asp Val Lys Val
        35                  40                  45
cac cca atc ggt cac tgg ggc acg att gcc ggc caa aac ttc atc tat    192
His Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
gcg cat ctt aac cgg gtc atc aac aag tac ggt ttg aag atg ttc tac    240
Ala His Leu Asn Arg Val Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Lys Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
gtt gaa ggt cca ggt cat ggt ggc caa gtg atg gtc tcc aac tca tac    288
Val Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
ctt gat ggg act tac acg gat att tat cct gaa att acg cag gat gtt    336
Leu Asp Gly Thr Tyr Thr Asp Ile Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Val
            100                 105                 110
gaa ggg atg caa aaa ctc ttc aag caa ttc tca ttc cca ggt ggc gtg    384
Glu Gly Met Gln Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
gct tcc cat gct gct cct gaa aca cca ggc tca atc cac gaa ggt ggc    432
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
gaa ctt ggt tac tca att tca cac ggt gtt ggg gca atc ctt gac aac    480
Glu Leu Gly Tyr Ser Ile Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
cct gat gaa atc gcc gca gtc gtt gtt ggt gat ggg gaa tcc gaa acc    528
Pro Asp Glu Ile Ala Ala Val Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                 175
ggc cca tta gca act tca tgg caa tca acg aag ttc atc aac cca atc    576
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Gln Ser Thr Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
aac gat ggg gca gtg tta cca atc ttg aac ctt aac ggc ttt aag att    624
Asn Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
tct aac cca acg att ttt ggt cgg act tct gat gaa aag atc aag caa    672
Ser Asn Pro Thr Ile Phe Gly Arg Thr Ser Asp Glu Lys Ile Lys Gln
    210                 215                 220
tac ttc gaa agc atg aac tgg gaa cca atc ttt gtt gaa ggt gac gat    720
Tyr Phe Glu Ser Met Asn Trp Glu Pro Ile Phe Val Glu Gly Asp Asp
225                 230                 235                 240
cct gaa aag gtt cac cca gct tta gct aag gcc atg gat gaa gcc gtc    768
Pro Glu Lys Val His Pro Ala Leu Ala Lys Ala Met Asp Glu Ala Val
                245                 250                 255
gaa aag atc aaa gcc att caa aag aac gct cgt gaa aac gat gac gct    816
Glu Lys Ile Lys Ala Ile Gln Lys Asn Ala Arg Glu Asn Asp Asp Ala
            260                 265                 270
act tta cca gta tgg ccg atg atc gtc ttc cgc gca cct aag ggc tgg    864
Thr Leu Pro Val Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
act ggt cct aag tca tgg gat ggc gac aag atc gaa ggt tca ttc cga    912
Thr Gly Pro Lys Ser Trp Asp Gly Asp Lys Ile Glu Gly Ser Phe Arg
    290                 295                 300
gct cac caa att cca att cct gtt gac caa acc gac atg gaa cat gcc    960
Ala His Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Gln Thr Asp Met Glu His Ala
305                 310                 315                 320
gat gcg tta gtt gac tgg ttg gaa tca tat caa cca aag gaa ctc ttc   1008
Asp Ala Leu Val Asp Trp Leu Glu Ser Tyr Gln Pro Lys Glu Leu Phe
                325                 330                 335
aat gaa gat ggt tct ttg aag gat gat atc aaa gaa att atc cca act   1056
Asn Glu Asp Gly SerLeu Lys Asp Asp Ile Lys Glu Ile Ile ProThr
            340                345                 350
ggc gat gca cgg atg gcc gct aac cca atc act aat ggt ggg gtt gat   1104
Gly Asp Ala Arg Met Ala Ala Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Val Asp
        355                 360                 365
cca aag gcc ttg aac tta cct aac ttc cgt gat tac gcc gtt gat acg   1152
Pro Lys Ala Leu Asn Leu Pro Asn Phe Arg Asp Tyr Ala Val Asp Thr
    370                 375                 380
tct aag cat ggt gcc aac gtt aag caa gat atg atc gtt tgg tca gac   1200
Ser Lys His Gly Ala Asn Val Lys Gln Asp Met Ile Val Trp Ser Asp
385                 390                 395                 400
tac ttg cgt gat gtt atc aag aag aac cca gat aac ttc cgg tta ttt   1248
Tyr Leu Arg Asp Val Ile Lys Lys Asn Pro Asp Asn Phe Arg Leu Phe
                405                 410                 415
ggc cct gat gaa acc atg tca aac cgg tta tat ggt gtc ttt gaa acc   1296
Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Phe Glu Thr
            420                 425                 430
act aac cgt caa tgg atg gaa gat att cac cca gat agt gac caa tac   1344
Thr Asn Arg Gln Trp Met Glu Asp Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Tyr
        435                 440                 445
gaa gca cct gct ggc cgg gtc ttg gat gct caa tta tct gaa cac caa   1392
Glu Ala Pro Ala Gly Arg Val Leu Asp Ala Gln Leu Ser Glu His Gln
    450                 455                 460
gct gaa ggt tgg tta gaa ggt tac gtc tta act ggt cgt cat ggc ttg   1440
Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Leu
465                 470                 475                 480
ttt gca agt tac gaa gcc ttc tta cgg gtt gtc gac tca atg ttg acg    1488
Phe Ala Ser Tyr Glu Ala Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
                485                 490                 495
caa cac ttc aag tgg tta cgt aag gcc aac gaa ctt gac tgg cgg aag    1536
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ala Asn Glu Leu Asp Trp Arg Lys
            500                 505                 510
aag tac ccg tca ctc aac att atc gcg gct tca act gtg ttc caa caa    1584
Lys Tyr Pro Ser Leu Asn Ile Ile Ala Ala Ser Thr Val Phe Gln Gln
        515                 520                 525
gac cat aat ggg tac acc cac caa gat cca ggt gcc ttg act cat ttg    1632
Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly Ala Leu Thr His Leu
    530                 535                 540
gct gaa aag aag cct gaa tat atc cgc gaa tat tta cca gcc gac gcc    1680
Ala Glu Lys Lys Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Ala
545                 550                 555                 560
aac tcc ttg tta gct gtt ggg gac gtc atc ttc cgt agc caa gaa aag    1728
Asn Ser Leu Leu Ala Val Gly Asp Val Ile Phe Arg Ser Gln Glu Lys
                565                 570                 575
atc aac tac gtg gtt acg tcg aag cac cca cgt caa caa tgg ttc agc    1776
Ile Asn Tyr Val Val Thr Ser Lys His Pro Arg Gln Gln Trp Phe Ser
            580                 585                 590
att gaa gaa gct aag caa tta gtt gac aac ggt ctt ggt atc att gac    1824
Ile Glu Glu Ala Lys Gln Leu Val Asp Asn Gly Leu Gly Ile Ile Asp
        595                 600                 605
tgg gca agc acg gac caa ggt agc gaa cca gat atc gtg ttt gct gct    1872
Trp Ala Ser Thr Asp Gln Gly Ser Glu Pro Asp lle Val Phe Ala Ala
    610                 615                 620
gcc gga acg gaa cca acg ctt gaa acg ttg gct gca atc caa ttg ctc    1920
Ala Gly Thr Glu Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Ile Gln Leu Leu
625                 630                 635                 640
cat gat agc ttc cca gac atg aag att cgt ttc gtg aac gtg gtc gac    1968
His Asp Ser Phe Pro Asp Met Lys Ile Arg Phe Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
atc ttg aag tta cgt agc cct gaa aag gac cct cgt ggc ttg tca gat    2016
Ile Leu Lys Leu Arg Ser Pro Glu Lys Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp
            660                 665                 670
gct gaa ttt gac cat tac ttc act aag gac aaa cca gtt gtc ttc gcc    2064
Ala Glu Phe Asp His Tyr Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Val Phe Ala
        675                 680                 685
ttc cat ggt tac gaa gac ctg gtt cgt gac atc ttc ttt gat cgt cac    2112
Phe His Gly Tyr Glu Asp Leu Val Arg Asp Ile Phe Phe Asp Arg His
    690                 695                 700
aac cac aac tta cac gtg cat ggc tac cgt gaa aat ggt gac att acg    2160
Asn His Asn Leu His Val His Gly Tyr Arg Glu Asn Gly Asp Ile Thr
705                 710                 715                 720
aca cca ttc gat gtc cgg gtc atg aac caa atg gac cgt ttc gac tta    2208
Thr Pro Phe Asp Val Arg Val Met Asn Gln Met Asp Arg Phe Asp Leu
                725                 730                 735
gca aaa tct gca att gcg gcg caa cca gca atg gaa aac acc ggt gca    2256
Ala Lys Ser Ala Ile Ala Ala Gln Pro Ala Met Glu Asn Thr Gly Ala
            740                 745                 750
gcc ttt gtt caa gac atg gat aac atg ctt gca aaa cac aac gca tac    2304
Ala Phe Val Gln Asp Met Asp Asn Met Leu Ala Lys His Asn Ala Tyr
        755                 760                 765
atc cgt gac gcc gga acc gac ttg cca gaa gtt aac gac tgg caa tgg    2352
Ile Arg Asp Ala Gly Thr Asp Leu Pro Glu Val Asn Asp Trp Gln Trp
    770                     775                 780
aaa ggt ttg aaa taa                                              2367
Lys Gly Leu Lys
785
<210>2
<211>788
<212>PRT
<213>戊糖乳杆菌
<400>2
Met Ser Thr Asp Tyr Ser Ser Pro Ala Tyr Leu Gln Lys Val Asp Lys
1               5                   10                  15
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Lys
            20                 25                  30
Asp Asn Pro Leu Leu Gln Arg Pro Leu Lys Ala Ser Asp Val Lys Val
        35                  40                  45
His Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
Ala His Leu Asn Arg Val Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Lys Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Val Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
Leu Asp Gly Thr Tyr Thr Asp Ile Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Val
            100                 105                 110
Glu Gly Met Gln Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
Glu Leu Gly Tyr Ser Ile Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
Pro Asp Glu Ile Ala Ala Val Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                  75
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Gln Ser Thr Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
Asn Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
Ser Asn Pro Thr Ile Phe Gly Arg Thr Ser Asp Glu Lys Ile Lys Gln
    210                 215                 220
Tyr Phe Glu Ser Met Asn Trp Glu Pro Ile Phe Val Glu Gly Asp Asp
225                 230                 235                 240
Pro Glu Lys Val His Pro Ala Leu Ala Lys Ala Met Asp Glu Ala Val
                245                 250                 255
Glu Lys Ile Lys Ala Ile Gln Lys Asn Ala Arg Glu Asn Asp Asp Ala
            260                 265                 270
Thr Leu Pro Val Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
Thr Gly Pro Lys Ser Trp Asp Gly Asp Lys Ile Glu Gly Ser Phe Arg
    290                 295                 300
Ala His Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Gln Thr Asp Met Glu His Ala
305                 310                 315                 320
Asp Ala Leu Val Asp Trp Leu Glu Ser Tyr Gln Pro Lys Glu Leu Phe
                325                 330                 335
Asn Glu Asp Gly Ser Leu Lys Asp Asp Ile Lys Glu Ile Ile Pro Thr
            340                 345                 350
Gly Asp Ala Arg Met Ala Ala Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Val Asp
        355                 360                 365
Pro Lys Ala Leu Asn Leu Pro Asn Phe Arg Asp Tyr Ala Val Asp Thr
    370                 375                 380
Ser Lys His Gly Ala Asn Val Lys Gln Asp Met Ile Val Trp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Tyr Leu Arg Asp Val Ile Lys Lys Asn Pro Asp Asn Phe Arg Leu Phe
                405                 4l0                 415
Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Phe Glu Thr
            420                 425                 430
Thr Asn Arg Gln Trp Met Glu Asp Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Tyr
        435                 440                 445
Glu Ala Pro Ala Gly Arg Val Leu Asp Ala Gln Leu Ser Glu His Gln
    450                 455                 460
Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Leu
465                 470                 475                 480
Phe Ala Ser Tyr Glu Ala Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
                485                 490                 495
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ala Asn Glu Leu Asp Trp Arg Lys
            500                 505                 5l0
Lys Tyr Pro Ser Leu Asn Ile Ile Ala Ala Ser Thr Val Phe Gln Gln
        515                 520                 525
Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly Ala Leu Thr His Leu
    530                 535                 540
Ala Glu Lys Lys Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Ala
545                 550                 555                 560
Asn Ser Leu Leu Ala Val Gly Asp Val Ile Phe Arg Ser Gln Glu Lys
                565                 570                 575
Ile Asn Tyr Val Val Thr Ser Lys His Pro Arg Gln Gln Trp Phe Ser
            580                 585                 590
Ile Glu Glu Ala Lys Gln Leu Val Asp Asn Gly Leu Gly Ile Ile Asp
        595                 600                 605
Trp Ala Ser Thr Asp Gln Gly Ser Glu Pro Asp Ile Val Phe Ala Ala
    610                 615                 620
Ala Gly Thr Glu Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Ile Gln Leu Leu
625                 630                 635                 640
His Asp Ser Phe Pro Asp Met Lys Ile Arg Phe Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
Ile Leu Lys Leu Arg Ser Pro Glu Lys Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp
            660                 665                 670
Ala Glu Phe Asp His Tyr Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Val Phe Ala
        675                 680                 685
Phe His Gly Tyr Glu Asp Leu Val Arg Asp Ile Phe Phe Asp Arg His
    690                 695                 700
Asn His Asn Leu His Val His Gly Tyr Arg Glu Asn Gly Asp Ile Thr
705                 710                 715                 720
Thr Pro Phe Asp Val Arg Val Met Asn Gln Met Asp Arg Phe Asp Leu
                725                 730                 735
Ala Lys Ser Ala Ile Ala Ala Gln Pro Ala Met Glu Asn Thr Gly Ala
            740                 745                 750
Ala Phe Val Gln Asp Met Asp Asn Met Leu Ala Lys His Asn Ala Tyr
        755                 760                 765
Ile Arg Asp Ala Gly Thr Asp Leu Pro Glu Val Asn Asp Trp Gln Trp
    770                 775                 780
Lys Gly Leu Lys
785
<210>3
<211>2367
<212>DNA
<213>植物乳杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2367)
<223>
<400>1
atg aca aca gat tac tca tca cca gca tat ttg caa aaa gtt gat aag     48
Met Thr Thr Asp Tyr Ser Ser Pro Ala Tyr Leu Gln Lys Val Asp Lys
1               5                   10                  15
tac tgg cgt gct gcc aac tac tta tca gtt ggt caa ctt tat tta aaa     96
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Lys
            20                  25                  30
gat aat cca cta tta caa cgg cca ttg aag gcc agt gac gtt aag gtt    144
Asp Asn Pro Leu Leu Gln Arg Pro Leu Lys Ala Ser Asp Val Lys Val
        35                  40                  45
cat cca att ggt cac tgg ggg acg att gcc ggt caa aac ttt atc tat    192
His Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
gct cat ctt aac cgg gtc atc aac aag tac ggt ttg aag atg ttc tac    240
Ala His Leu Asn Arg Val Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Lys Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
gtt gaa ggt cca ggt cat ggt ggt caa gtg atg gtt tca aac tct tac    288
Val Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
ctt gac ggt act tac acc gat att tat cca gaa att acg cag gat gtt    336
Leu Asp Gly Thr Tyr Thr Asp Ile Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Val
            100                 105                 110
gaa ggg atg caa aag ctc ttc aag caa ttc tca ttc cca ggt ggg gtt    384
Glu Gly Met Gln Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
gct tcc cat gcg gca cct gaa aca ccc ggt tca atc cac gaa ggt ggc    432
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
gaa ctt ggt tac tca att tea cac ggg gtt ggg gca att ctt gac aat    480
Glu Leu Gly Tyr Ser Ile Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
cct gac gaa atc gcc gcg gtt gtt gtt ggt gat ggg gaa tcc gaa acg    528
Pro Asp Glu Ile Ala Ala Val Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                 175
ggt cca tta gca act tca tgg caa tca acg aag ttc att aac cca atc    576
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Gln Ser Thr Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
aac gac ggg gct gtt tta cca atc ttg aac tta aat ggt ttt aag att    624
Asn Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
tct aat cca acg att ttt ggt cgg act tct gat gct aag att aag gaa    672
Ser Asn Pro Thr Ile Phe Gly Arg Thr Ser Asp Ala Lys Ile Lys Glu
    210                 215                 220
tac ttc gaa agc atg aat tgg gaa cca atc ttc gtt gaa ggt gac gat    720
Tyr Phe Glu Ser Met Asn Trp Glu Pro Ile Phe Val Glu Gly Asp Asp
225                 230                 235                 240
cct gaa aag gtt cac cca gcc tta gct aag gcc atg gat gaa gcc gtt    768
Pro Glu Lys Val His Pro Ala Leu Ala Lys Ala Met Asp Glu Ala Val
                245                 250                 255
gaa aag atc aag gca atc cag aag cat gct cgc gaa aat aac gat gca     816
Glu Lys Ile Lys Ala Ile Gln Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Ala
            260                 265                  270
aca ttg cca gta tgg cca atg atc gtc ttc cgc gca cct aag ggc tgg     864
Thr Leu Pro Val Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
act ggt ccg aag tca tgg gac ggt gat aag atc gaa ggt tca ttc cgt     912
Thr Gly Pro Lys Ser Trp Asp Gly Asp Lys Ile Glu Gly Ser Phe Arg
    290                 295                 300
gct cat caa att ccg att cct gtt gat caa aat gac atg gaa cat gcg     960
Ala His Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Gln Asn Asp Met Glu His Ala
305                 310                 315                 320
gat gct tta gtt  gat tgg ctc gaa tca tat caa cca aaa gaa ctc ttc   1008
Asp Ala Leu Val Asp Trp Leu Glu Ser Tyr Gln Pro Lys Glu Leu Phe
                325                 330                 335
aat gaa gat ggc tct ttg aag gat gat att aaa gaa att att cct act    1056
Asn Glu Asp Gly Ser Leu Lys Asp Asp Ile Lys Glu Ile Ile Pro Thr
            340                 345                 350
ggg gac agt cgg atg gct gct aac cca atc acc aat ggt ggg gtc gat    1104
Gly Asp Ser Arg Met Ala Ala Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Val Asp
        355                 360                 365
ccg aaa gcc ttg aac tta cca aac ttc cgt gat tat gcg gtc gat acg    1152
Pro Lys Ala Leu Asn Leu Pro Asn Phe Arg Asp Tyr Ala Val Asp Thr
    370                 375                 380
tcc aaa gaa ggc gcg aat gtt aag caa gat atg atc gtt tgg tca gac    1200
Ser Lys Glu Gly Ala Asn Val Lys Gln Asp Met Ile Val Trp Ser Asp
385                 390                 395                 400
tat ttg cgg gat gtc atc aag aaa aat cct gat aac ttc cgg ttg ttc    1248
Tyr Leu Arg Asp Val Ile Lys Lys Asn Pro Asp Asn Phe Arg Leu Phe
                405                 410                 415
gga cct gat gaa acc atg tct aac cgt tta tat ggt gtc ttc gaa acc    1296
Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Phe Glu Thr
            420                 425                 430
act aat cgt caa tgg atg gaa gac att cat cca gat agt gac caa tat    1344
Thr Asn Arg Gln Trp Met Glu Asp Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Tyr
        435                 440                 445
gaa gca cca gct ggc cgg gtc tta gat gct cag tta tct gaa cac caa    1392
Glu Ala Pro Ala Gly Arg Val Leu Asp Ala Gln Leu Ser Glu His Gln
    450                 455                 460
gct gaa ggt tgg tta gaa ggt tac gtc tta act gga cgt cat ggg tta    1440
Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Leu
465                 470                 475                 480
ttt gcc agt tat gaa gcc ttc cta cgc gtt gtg gac tca atg ttg acg    1488
Phe Ala Ser Tyr Glu Ala Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
                485                 490                 495
caa cac ttc aag tgg tta cgt aaa gcc aat gaa ctt gat tgg cgt aaa    1536
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ala Asn Glu Leu Asp Trp Arg Lys
            500                 505                 510
aag tac cca tca ctt aac att atc gcg gct tca act gta ttc caa caa    1584
Lys Tyr Pro Ser Leu Asn Ile Ile Ala Ala Ser Thr Val Phe Gln Gln
        515                 520                 525
gac cat aat ggt tat acc cac caa gat cca ggt gca tta act cat ttg    1632
Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly Ala Leu Thr His Leu
    530                 535                 540
gcc gaa aag aaa cca gaa tac att cgt gaa tat tta cca gcc gat gcc    1680
Ala Glu Lys Lys Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Ala
545                 550                 555                 560
aac acg tta tta gct gtc ggt gac gtc att ttc cgg agc caa gaa aag    1728
Asn Thr Leu Leu Ala Val Gly Asp Val Ile Phe Arg Ser Gln Glu Lys
                565                 570                 575
atc aac tac gtg gtt acg tca aaa cac cca cgt caa caa tgg ttc agc    1776
Ile Asn Tyr Val Val Thr Ser Lys His Pro Arg Gln Gln Trp Phe Ser
            580                 585                 590
att gaa gaa gct aag caa tta gtt gac aat ggt ctt ggt atc att gat    1824
Ile Glu Glu Ala Lys Gln Leu Val Asp Asn Gly Leu Gly Ile Ile Asp
        595                 600                 605
tgg gca agt acg gac caa ggt agc gaa cca gac att gtc ttt gca gct    1872
Trp Ala Ser Thr Asp Gln Gly Ser Glu Pro Asp Ile Val Phe Ala Ala
    610                 615                 620
gct ggg acg gaa cca acg ctt gaa acg ttg gct gcc atc caa tta cta    1920
Ala Gly Thr Glu Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Ile Gln Leu Leu
625                 630                 635                 640
cac gac agt ttc cca gag atg aag att cgt ttc gtg aac gtg gtc gac    1968
His Asp Ser Phe Pro Glu Met Lys Ile Arg Phe Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
atc ttg aag tta cgt agt cct gaa aag gat ccg cgg ggc ttg tca gat    2016
Ile Leu Lys Leu Arg Ser Pro Glu Lys Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp
            660                 665                 670
gct gag ttt gac cat tac ttt act aag gac aaa cca gtg gtc ttt gct    2064
Ala Glu Phe Asp His Tyr Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Val Phe Ala
        675                 680                 685
ttc cac ggt tac gaa gac tta gtt cgt gac atc ttc ttt gat cgt cac    2112
Phe His Gly Tyr Glu Asp Leu Val Arg Asp Ile Phe Phe Asp Arg His
    690                 695                 700
aac cat aac tta tac gtc cac ggt tac cgt gaa aat ggt gat att acc    2160
Asn His Asn Leu Tyr Val His Gly Tyr Arg Glu Asn Gly Asp Ile Thr
705                 710                 715                 720
aca cca ttc gac gta cgg gtc atg aac cag atg gac cgc ttc gac tta    2208
Thr Pro Phe Asp Val Arg Val Met Asn Gln Met Asp Arg Phe Asp Leu
                725                 730                 735
gct aag tcg gca att gcg gcg caa cca gca atg gaa aac act ggt gcg    2256
Ala Lys Ser Ala Ile Ala Ala Gln Pro Ala Met Glu Asn Thr Gly Ala
            740                 745                 750
gcc ttc gtt caa tcc atg gat aat atg ctt gct aaa cac aat gcc tat    2304
Ala Phe Val Gln Ser Met Asp Asn Met Leu Ala Lys His Asn Ala Tyr
        755                 760                 765
atc cgg gat gcc gga act gac ttg cca gaa gtt aat gat tgg caa tgg    2352
Ile Arg Asp Ala Gly Thr Asp Leu Pro Glu Val Asn Asp Trp Gln Trp
    770                 775                 780
aag ggt tta aaa taa                                                2367
Lys Gly Leu Lys
785
<210>4
<211>788
<212>PRT
<213>植物乳杆菌
<400>4
Met Thr Thr Asp Tyr Ser Ser Pro Ala Tyr Leu Gln Lys Val Asp Lys
1               5                   10                  15
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Lys
            20                  25                  30
Asp Asn Pro Leu Leu Gln Arg Pro Leu Lys Ala Ser Asp Val Lys Val
        35                  40                  45
His Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
Ala His Leu Asn Arg Val Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Lys Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Val Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
Leu Asp Gly Thr Tyr Thr Asp Ile Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Val
            100                 105                 110
Glu Gly Met Gln Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
Glu Leu Gly Tyr Ser Ile Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
Pro Asp Glu Ile Ala Ala Val Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                 175
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Gln Ser Thr Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
Asn Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
Ser Asn Pro Thr Ile Phe Gly Arg Thr Ser Asp Ala Lys Ile Lys Glu
    210                 215                 220
Tyr Phe Glu Ser Met Asn Trp Glu Pro Ile Phe Val Glu Gly Asp Asp
225                 230                 235                 240
Pro Glu Lys Val His Pro Ala Leu Ala Lys Ala Met Asp Glu Ala Val
                245                 250                 255
Glu Lys Ile Lys Ala Ile Gln Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Ala
            260                 265                 270
Thr Leu Pro Val Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
Thr Gly Pro Lys Ser Trp Asp Gly Asp Lys Ile Glu Gly Ser Phe Arg
   290                 295                 300
Ala His Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Gln Asn Asp Met Glu His Ala
305                 310                 315                 320
Asp Ala Leu Val Asp Trp Leu Glu Ser Tyr Gln Pro Lys Glu Leu Phe
                325                 330                 335
Asn Glu Asp Gly Ser Leu Lys Asp Asp Ile Lys Glu Ile Ile Pro Thr
            340                 345                 350
Gly Asp Ser Arg Met Ala Ala Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Val Asp
        355                 360                 365
Pro Lys Ala Leu Asn Leu Pro Asn Phe Arg Asp Tyr Ala Val Asp Thr
    370                 375                 380
Ser Lys Glu Gly Ala Asn Val Lys Gln Asp Met Ile Val Trp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Tyr Leu Arg Asp Val Ile Lys Lys Asn Pro Asp Asn Phe Arg Leu Phe
                405                 410                 415
Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Phe Glu Thr
            420                 425                 430
Thr Asn Arg Gln Trp Met Glu Asp Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Tyr
        435                 440                 445
Glu Ala Pro Ala Gly Arg Val Leu Asp Ala Gln Leu Ser Glu His Gln
    450                 455                 460
Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Leu
465                 470                 475                 480
Phe Ala Ser Tyr Glu Ala Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
                485                 490                 495
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ala Asn Glu Leu Asp Trp Arg Lys
            500                 505                 510
Lys Tyr Pro Ser Leu Asn Ile Ile Ala Ala Ser Thr Val Phe Gln Gln
        515                 520                 525
Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly Ala Leu Thr His Leu
    530                 535                 540
Ala Glu Lys Lys Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Ala
545                 550                 555                 560
Asn Thr Leu Leu Ala Val Gly Asp Val Ile Phe Arg Ser Gln Glu Lys
                565                 570                 575
Ile Asn Tyr Val Val Thr Ser Lys His Pro Arg Gln Gln Trp Phe Ser
            580                 585                 590
Ile Glu Glu Ala Lys Gln Leu Val Asp Asn Gly Leu Gly Ile Ile Asp
        595                 600                 605
Trp Ala Ser Thr Asp Gln Gly Ser Glu Pro Asp Ile Val Phe Ala Ala
    610                 615                 620
Ala Gly Thr Glu Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Ile Gln Leu Leu
625                 630                 635                 640
His Asp Ser Phe Pro Glu Met Lys Ile Arg Phe Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
Ile Leu Lys Leu Arg Ser Pro Glu Lys Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp
            660                 665                 670
Ala Glu Phe Asp His Tyr Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Val Phe Ala
        675                  680                  685
Phe His Gly Tyr Glu Asp Leu Val Arg Asp Ile Phe Phe Asp Arg His
    690                 695                 700
Asn His Asn Leu Tyr Val His Gly Tyr Arg Glu Asn Gly Asp Ile Thr
705                 710                 715                 720
Thr Pro Phe Asp Val Arg Val Met Asn Gln Met Asp Arg Phe Asp Leu
                725                 730                 735
Ala Lys Ser Ala Ile Ala Ala Gln Pro Ala Met Glu Asn Thr Gly Ala
            740                 745                 750
Ala Phe Val Gln Ser Met Asp Asn Met Leu Ala Lys His Asn Ala Tyr
        755                 760                 765
Ile Arg Asp Ala Gly Thr Asp Leu Pro Glu Val Asn Asp Trp Gln Trp
    770                 775                 780
Lys Gly Leu Lys
785
<210>5
<211>2660
<212>DNA
<213>乳酸双歧杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(128)..(2605)
<223>
<400>5
aggtcagcgt attcgcgtaa cataatcagc gatcgggcac ggagaccggc ctgcaggaca     60
gcgccgaagc ccgtgcccaa cggaataaac aaatcgcaca tttatgtgca ggagtacagg    120
agcacacatg act aat cct gtt att ggt acc cca tgg cag aag ctg gat       169
           Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln Lys Leu Asp
           1               5                   10
cgt ecg gtt tcc gaa gag gcc atc gaa ggc atg gac aag tac tgg cgc      217
Arg Pro Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys Tyr Trp Arg
15                  20                  25                  30
gtc gcc aac tac atg tct atc ggc cag atc tac ctg cgt agc aac ccg    265
Val Ala Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro
                35                  40                  45
ctg atg aag gag ccc ttc acc cgc gat gac gtg aag cac cgt ctg gtc    313
Leu Met Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His Arg Leu Val
            50                  55                  60
ggc cac tgg ggc acc acc ccg ggc ctg aac ttc ctt ctc gcc cac atc    361
Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu Ala His Ile
        65                  70                  75
aac cgc ctg atc gcc gat cac cag cag aac acc gtg ttc atc atg ggt    409
Asn Arg Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe Ile Met Gly
    80                  85                  90
cct ggc cac ggc ggc cct gca ggt acc gct cag tcc tac atc gac ggc    457
Pro Gly His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr Ile Asp Gly
95                  100                 105                 110
acc tac acc gag tac tac ccg aac atc acc aag gac gaa gct ggc ctg    505
Thr Tyr Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu
                115                 120                 125
cag aag ttc ttc cgc cag ttc tcc tac ccg ggt ggc att cct tcc cac    553
Gln Lys Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His
            130                 135                 140
ttc gct ccg gag acg ccg ggc tcc atc cac gaa ggc ggc gag ctg ggc    601
Phe Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly
        145                 150                 155
tac gcc ctg tcg cac gcc tac ggc gcg atc atg gac aac ccg agc ctc    649
Tyr Ala Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn Pro Ser Leu
    160                 165                 170
ttc gtc ccg tgc atc atc ggt gac ggc gaa gcc gag acc ggc cct ctg    697
Phe Val Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu
175                 180                 185                 190
gcc acc ggc tgg cag tcc aac aag ctc gtc aac ccg cgc acc gac ggc    745
Ala Thr Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly
                195                 200                 205
atc gtc ctg ccg atc ctg cac ctc aac ggc tac aag atc gcc aac ccg    793
Ile Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro
            210                 215                 220
acg atc ctc gcc cgc atc tcc gac gag gag ctg cac gac ttc ttc cgc    841
Thr Ile Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp Phe Phe Arg
        225                 230                 235
ggc atg ggt tac cac ccg tac gag ttc gtc gcc ggc ttc gac aac gag    889
Gly Met Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asn Glu
    240                 245                 250
gat cac ctg tcg atc cac cgt cgc ttc gcc gag ctc ttc gag acc atc    937
Asp His Leu Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Phe Glu Thr Ile
255                 260                 265                 270
ttc gac gag atc tgc gat atc aag gct gcg gct cag acc gac gac atg    985
Phe Asp Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Ala Ala Gln Thr Asp Asp Met
                275                 280                 285
acc cgt ccg ttc tac ccg atg ctc atc ttc cgc acc ccg aag ggc tgg   1033
Thr Arg Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp
            290                 295                 300
acc tgc ccg aag ttc atc gac ggc aag aag acc gaa ggc tcc tgg cgt   1081
Thr Cys Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg
        305                 310                 315
gca cac cag gtc ccg ctg gct tcc gcc cgc gac acc gag gcc cac ttc   1129
Ala His Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe
    320                 325                 330
gaa gtc ctc aag ggc tgg atg gaa tcc tac aag ccg gag gag ctc ttc    1177
Glu Val Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe
335                 340                 345                 350
aac gcc gac ggc tcc atc aag gag gac gtc acc gca ttc atg cct aag    1225
Asn Ala Asp Gly Ser Ile Lys Glu Asp Val Thr Ala Phe Met Pro Lys
                355                 360                 365
ggc gaa ctg cgc atc ggc gcc aac ccg aat gcc aac ggc ggc cgc atc    1273
Gly Glu Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Arg Ile
            370                 375                 380
cgc gag gat ctg aag ctc cct gag ctc gat cag tac gag atc acc ggc    1321
Arg Glu Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu Ile Thr Gly
        385                 390                 395
gtc aag gaa tac ggc cac ggt tgg ggc cag gtc gag gct ccg cgt tcc    1369
Val Lys Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala Pro Arg Ser
    400                 405                 410
ctc ggc gcg tac tgc cgc gac atc atc aag aac aac ccg gat tcg ttc    1417
Leu Gly Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Asp Ser Phe
415                 420                 425                 430
cgc gtc ttc gga cct gac gag acc gcg tcc aac cgt ctg aac gcg acc    1465
Arg Val Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Asn Ala Thr
                435                 440                 445
tac gag gtc acc aag aag cag tgg gac aac gga tac ctc tcg gct ctc    1513
Tyr Glu Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu Ser Ala Leu
            450                 455                 460
gtc gac gag aac atg gcc gtc acc ggc cag gtt gtc gag cag ctc tcc    1561
Val Asp Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser
        465                 470                 475
gag cat cag tgc gaa ggc ttc ctc gag gcc tac ctg ctc acc ggc cgt    1609
Glu His Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg
    480                 485                 490
cac ggc atc tgg agc tcc tac gag tcc ttc gtg cac gtg atc gac tcc    1657
His Gly Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val Ile Asp Ser
495                 500                 505                 510
atg ctg aac cag cat gcg aag tgg ctc gag gcc acc gtc cgc gag atc    1705
Met Leu Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile
                515                 520                 525
ccg tgg cgt aag ccg atc tcc tcg gtg aac ctc ctg gtc tcc tcg cac    1753
Pro Trp Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val Ser Ser His
            530                 535                 540
gtg tgg cgt cag gat cac aac ggc ttc tcg cac cag gat ccg ggt gtg    1801
Val Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val
        545                 550                 555
acc tcc gtc ctg ctg aac aag acg ttc aac aac gac cac gtg acg aac    1849
Thr Ser Val Leu Leu Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His Val Thr Asn
    560                 565                 570
atc tac ttc gcg acc gat gcc aac atg ctg ctg gcc atc gcc gag aag    1897
Ile Tyr Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys
575                 580                 585                 590
tgc ttc aag tcc acc aac aag atc aac gca atc ttc gcc ggc aag cag    1945
Cys Phe Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ala Gly Lys Gln
                595                 600                 605
ccg gcc gcg acg tgg atc acc ctc gac gag gta cgc gcc gag ctc gag    1993
Pro Ala Ala Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Val Arg Ala Glu Leu Glu
            610                 615                 620
gct ggt gcc gcc gag tgg aag tgg gct tcc aac gcc aag agc aac gac    2041
Ala Gly Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys Ser Asn Asp
        625                 630                 635
gag gtc cag gtt gtc ctc gcc gcc gcc ggc gac gtc ccg acc cag gag    2089
Glu Val Gln Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu
    640                 645                 650
atc atg gcc gct tcc gat gcc crc aac aag atg ggc atc aag ttc aag    2137
Ile Met Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys MetGly Ile Lys Phe Lys
655                 660                 665                 670
gtc gtc aac gtc gtg gac ctc atc aag ctg cag tcc tcg aag gag aac    2185
Val Val Asn Val Val Asp Leu Ile Lys Leu Gln Ser Ser Lys Glu Asn
                675                 680                 685
gac gag gcc atg tct gac gag gac ttc gcc gac ctg ttc acc gcg gac    2233
Asp Glu Ala Met Ser Asp Glu Asp Phe Ala Asp Leu Phe Thr Ala Asp
            690                 695                 700
aag ccg gtc ctc ttc gcc tac cac tcc tat gcc cag gac gtt cgt ggc    2281
Lys Pro Val Leu Phe Ala Tyr His Set Tyr Ala Gln Asp Val Arg Gly
        705                 710                 715
ctc atc tac gac cgc ccg aac cac gac aac ttc acc gtt gtc gga tac    2329
Leu Ile Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Thr Val Val Gly Tyr
    720                 725                 730
aag gag cag ggc tcc acg acg acg ccg ttc gac atg gtg cgt gtc aac    2377
Lys Glu Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val Arg Val Asn
735                 740                 745                 750
gac atg gat cgc tac gcc ctt cag gcc aag gcc ctc gag ctc atc gac    2425
Asp Met Asp Arg Tyr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Leu Glu Leu Ile Asp
                755                 760                 765
gcc gac aag tat gcc gac aag atc aac gag ctc aac gag ttc cgc aag    2473
Ala Asp Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asn Glu Leu Asn Glu Phe Arg Lys
            770                 775                 780
acc gcg ttc cag ttc gcc gtc gac aat ggc tat gac att cct gag ttc    2521
Thr Ala Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Pro Glu Phe
        785                 790                 795
acc gat tgg gtg tac ccg gat gtc aag gtc gac gag acc tcc atg ctc    2569
Thr Asp Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr Ser Met Leu
    800                 805                 810
tcc gcc acc gcc gcg acc gcc ggc gac aac gag tga gcatagtctc         2615
Ser Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
815                 820                 825
atcgcttagc cgatgaaagg cccgggtgtc cgcacccggg ccttt                  2660
<210>6
<211>825
<212>PRT
<213>乳酸双歧杆菌
<400>6
Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln Lys Leu Asp Arg Pro
1               5                   10                  15
Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys Tyr Trp Arg Val Ala
            20                  25                  30
Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro Leu Met
        35                  40                  45
Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His Arg Leu Val Gly His
    50                  55                  60
Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu Ala His Ile Asn Arg
65                  70                  75                  80
Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe Ile Met Gly Pro Gly
                85                  90                  95
His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr Ile Asp Gly Thr Tyr
            100                 105                 110
Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu Gln Lys
        115                 120                 125
Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Phe Ala
    130                 135                 140
Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn Pro Ser Leu Phe Val
                165                 170                 175
Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr
            180                 185                 190
Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly Ile Val
        195                 200                 205
Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Ile
    210                 215                 220
Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp Phe Phe Arg Gly Met
225                 230                 235                 240
Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asn Glu Asp His
                245                 250                 255
Leu Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Phe Glu Thr Ile Phe Asp
            260                 265                 270
Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Ala Ala Gln Thr Asp Asp Met Thr Arg
        275                 280                 285
Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp Thr Cys
    290                 295                 300
Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg Ala His
305                 310                 315                 320
Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe Glu Val
                325                 330                 335
Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asn Ala
            340                 345                 350
Asp Gly Ser Ile Lys Glu Asp Val Thr Ala Phe Met Pro Lys Gly Glu
        355                 360                 365
Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Arg Ile Arg Glu
    370                 375                 380
Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu Ile Thr Gly Val Lys
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala Pro Arg Ser Leu Gly
                405                 410                 415
Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Asp Ser Phe Arg Val
            420                 425                 430
Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Asn Ala Thr Tyr Glu
        435                 440                 445
Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu Ser Ala Leu Val Asp
    450                 455                 460
Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser Glu His
465                 470                 475                 480
Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly
                485                 490                 495
Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val Ile Asp Ser Met Leu
            500                 505                 510
Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile Pro Trp
        515                 520                 525
Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val Ser Ser His Val Trp
    530                 535                 540
Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val Thr Ser
545                 550                 555                 560
Val Leu Leu Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His Val Thr Asn Ile Tyr
                565                 570                 575
Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys Cys Phe
            580                 585                 590
Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ala Gly Lys Gln Pro Ala
        595                 600                 605
Ala Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Val Arg Ala Glu Leu Glu Ala Gly
    610                 615                 620
Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys Ser Asn Asp Glu Val
625                 630                 635                 640
Gln Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu Ile Met
                645                 650                 655
Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys Met Gly Ile Lys Phe Lys Val Val
            660                 665                 670
Asn Val Val Asp Leu Ile Lys Leu Gln Ser Ser Lys Glu Asn Asp Glu
        675                 680                 685
Ala Met Ser Asp Glu Asp Phe Ala Asp Leu Phe Thr Ala Asp Lys Pro
    690                 695                 700
Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala Gln Asp Val Arg Gly Leu Ile
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Thr Val Val Gly Tyr Lys Glu
                725                 730                 735
Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val Arg Val Asn Asp Met
            740                 745                 750
Asp Arg Tyr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Leu Glu Leu Ile Asp Ala Asp
        755                 760                 765
Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asn Glu Leu Asn Glu Phe Arg Lys Thr Ala
    770                 775                 780
Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Pro Glu Phe Thr Asp
785                 790                 795                 800
Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr Ser Met Leu Ser Ala
                805                 810                 815
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            820                 825
<210>7
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列：引物
<400>7
ctgaagcttg tgaaaagcaa attaaggagt g                            31
<210>8
<211>31
<212>DNA
<213>人工序列：引物
<400>8
tcagaattct tattttaaac ccttccattg c                            31
<210>9
<211>2841
<212>DNA
<213>动物双歧杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(320)..(2797)
<223>
<400>9
ttttcaacac gccgcgcaat atcctcacaa accgcacgcg acaacgacgg cgaaaacgct     60
tgcattcgtt ggtatttcaa cgtttctcgc ctttattcac tgattttcca ttttcacaaa    120
tcgcccgagc aatctcccaa attcgcaaat tatgcgcaca gattcgctca cactgtttca    180
aaaactgcaa aaaggtcagc gtattcgcgt aacataatca gcgatcgggc acggagaccg    240
gcctgcagga cagcgccgaa gcccgtgccc aacggaataa acaaatcgca catttatgtg    300
caggagtaca ggagcacac atg act aat cct gtt att ggt acc cca tgg cag     352
                     Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln
                     1               5                   10
aag ctg gat cgt ccg gtt tcc gaa gag gcc atc gaa ggc atg gac aag      400
Lys Leu Asp Arg Pro Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys
            15                  20                  25
tac tgg cgc gtc gcc aac tac atg tct atc ggc cag atc tac ctg cgt      448
Tyr Trp Arg Val Ala Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg
        30                  35                  40
agc aac ccg ctg atg aag gag ccc ttc acc cgc gat gac gtg aag cac      496
Ser Asn Pro Leu Met Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His
    45                  50                  55
cgt ctg gtc ggc cac tgg ggc acc acc ccg ggc ctg aac ttc ctt ctc      544
Arg Leu Val Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu
60                  65                  70                  75
gcc cac atc aac cgc ctg atc gcc gat cac cag cag aac acc gtg ttc      592
Ala His Ile Asn Arg Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe
                80                  85                  90
atc atg ggt cct ggc cac ggc ggc cct gca ggt acc gct cag tcc tac      640
Ile Met Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr
            95                  100                 105
atc gac ggc acc tac acc gag tac tac ccg aac atc acc aag gac gaa      688
Ile Asp Gly Thr Tyr Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu
        110                 115                 120
gct ggc ctg cag aag ttc ttc cgc cag ttc tcc tac ccg ggt ggc att      736
Ala Gly Leu Gln Lys Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile
    125                 130                 135
cct tcc cac ttc gct ccg gag acg ccg ggc tcc atc cac gaa ggc ggc      784
Pro Ser His Phe Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
140                 145                 150                 155
gag ctg ggc tac gcc ctg tcg cac gcc tac ggc gcg atc atg gac aac      832
Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn
                160                 165                 170
ccg agc ctc ttc gtc ccg tgc atc atc ggt gac ggc gaa gcc gag acc      880
Pro Ser Leu Phe Val Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr
            175                 180                 185
ggc cct ctg gcc acc ggc tgg cag tcc aac aag ctc gtc aac ccg cgc      928
Gly Pro Leu Ala Thr Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg
        190                 195                 200
acc gac ggc atc gtc ctg ccg atc ctg cac ctc aac ggc tac aag atc      976
Thr Asp Gly Ile Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile
    205                 210                 215
gcc aac ccg acg atc ctc gcc cgc atc tcc gac gag gag ctg cac gac     1024
Ala Asn Pro Thr Ile Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp
220                 225                 230                 235
ttc ttc cgc ggc atg ggt tac cac ccg tac gag ttc gtc gcc ggc ttc     1072
Phe Phe Arg Gly Met Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe
                240                 245                 250
gac aac gag gat cac ctg tcg atc cac cgt cgc ttc gcc gag ctc ttc    1120
Asp Asn Glu Asp His Leu Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Phe
            255                 260                 265
gag acc atc ttc gac gag atc tgc gat atc aag gct gcg gct cag acc    1168
Glu Thr Ile Phe Asp Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Ala Ala Gln Thr
        270                 275                 280
gac gac atg acc cgt ccg ttc tac ccg atg ctc atc ttc cgc acc ccg    1216
Asp Asp Met Thr Arg Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro
    285                 290                 295
aag ggc tgg acc tgc ccg aag ttc atc gac ggc aag aag acc gaa ggc    1264
Lys Gly Trp Thr Cys Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly
300                 305                 310                 315
tcc tgg cgt gca cac cag gtc ccg ctg gct tcc gcc cgc gac acc gag    1312
Ser Trp Arg Ala His Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu
                320                 325                 330
gcc cac ttc gaa gtc ctc aag ggc tgg atg gaa tcc tac aag ccg gag    1360
Ala His Phe Glu Val Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu
            335                 340                 345
gag ctc ttc aac gcc gac ggc tcc atc aag gag gac gtc acc gca ttc    1408
Glu Leu Phe Asn Ala Asp Gly Ser Ile Lys Glu Asp Val Thr Ala Phe
        350                 355                 360
atg cct aag ggc gaa ctg cgc atc ggc gcc aac ccg aat gcc aac ggc    1456
Met Pro Lys Gly Glu Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly
    365                 370                 375
ggc cgc atc cgc gag gat ctg aag ctc cct gag ctc gat cag tac gag    1504
Gly Arg Ile Arg Glu Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu
380                 385                 390                 395
atc acc ggc gtc aag gaa tac ggc cac ggt tgg ggc cag gtc gag gct    1552
Ile Thr Gly Val Lys Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala
                400                 405                 410
ccg cgt tcc ctc ggc gcg tac tgc cgc gac atc atc aag aac aac ccg    1600
Pro Arg Ser Leu Gly Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro
            415                 420                 425
gat tcg ttc cgc gtc ttc gga cct gac gag acc gcg tcc aac cgt ctg    1648
Asp Ser Phe Arg Val Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu
        430                 435                 440
aac gcg acc tac gag gtc acc aag aag cag tgg gac aac gga tac ctc    1696
Asn Ala Thr Tyr Glu Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu
    445                 450                 455
tcg gct ctc gtc gac gag aac atg gcc gtc acc ggc cag gtt gtc gag    1744
Ser Ala Leu Val Asp Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu
460                 465                 470                 475
cag ctc tcc gag cat cag tgc gaa ggc ttc ctc gag gcc tac ctg ctc    1792
Gln Leu Ser Glu His Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu
                480                 485                 490
acc ggc cgt cac ggc atc tgg agc tcc tac gag tcc ttc gtg cac gtg    1840
Thr Gly Arg His Gly Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val
            495                 500                 505
atc gac tcc atg ctg aac cag cat gcg aag tgg ctc gag gcc acc gtc    1888
Ile Asp Ser Met Leu Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val
        510                 515                 520
cgc gag atc ccg tgg cgt aag ccg atc tcc tcg gtg aac ctc ctg gtc    1936
Arg Glu Ile Pro Trp Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val
    525                 530                 535
tcc tcg cac gtg tgg cgt cag gat cac aac ggc ttc tcg cac cag gat    1984
Ser Ser His Val Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp
540                 545                 550                 555
ccg ggt gtg acc tcc gtc ctg ctg aac aag acg ttc aac aac gac cac    2032
Pro Gly Val Thr Ser Val Leu Leu Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His
                560                 565                 570
gtg acg aac atc tac ttc gcg acc gat gcc aac atg ctg ctg gcc atc    2080
Val Thr Asn Ile Tyr Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile
            575                 580                 585
gcc gag aag tgc ttc aag tcc acc aac aag atc aac gca atc ttc gcc    2128
Ala Glu Lys Cys Phe Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ala
        590                 595                 600
ggc aag cag ccg gcc gcg acg tgg atc acc ctc gac gag gca cgc gcc    2176
Gly Lys Gln Pro Ala Ala Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala
    605                 610                 615
gag ctc gag gct ggt gcc gcc gag tgg aag tgg gct tcc aac gcc aag    2224
Glu Leu Glu Ala Gly Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys
620                 625                 630                 635
agc aac gac gag gtc cag gtt gtc ctc gcc gcc gcc ggc gac gtc ccg    2272
Ser Asn Asp Glu Val Gln Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro
                640                 645                 650
acc cag gag atc atg gcc gct tcc gat gcc ctc aac aag atg ggc atc    2320
Thr Gln Glu Ile Met Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys Met Gly Ile
            655                 660                 665
aag ttc aag gtc gtc aac gtc gtg gac ctc atc aag ctg cag tcc tcg    2368
Lys Phe Lys Val Val Asn Val Val Asp Leu Ile Lys Leu Gln Ser Ser
        670                 675                 680
aag gag aac gac gag gcc atg tct gac gag gac ttc gcc gac ctg ttc    2416
Lys Glu Asn Asp Glu Ala Met Ser Asp Glu Asp Phc Ala Asp Leu Phe
    685                 690                 695
acc gcg gac aag ccg gtc ctc ttc gcc tac cac tcc tat gcc cag gac    2464
Thr Ala Asp Lys Pro Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala Gln Asp
700                 705                 710                 715
gtt cgt ggc ctc atc tac gac cgc ccg aac cac gac aac ttc acc gtt    2512
Val Arg Gly Leu Ile Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Thr Val
                720                 725                 730
gtc gga tac aag gag cag ggc tcc acg acg acg ccg ttc gac atg gtg    2560
Val Gly Tyr Lys Glu Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val
            735                 740                 745
cgt gtc aac gac atg gat cgc tac gcc ctt cag gcc aag gcc ctc gag    2608
Arg Val Asn Asp Met Asp Arg Tyr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Leu Glu
        750                 755                 760
ctc atc gac gcc gac aag tat gcc gac aag atc aac gag ctc aac gag    2656
Leu Ile Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asn Glu Leu Asn Glu
    765                 770                 775
ttc cgc aag acc gcg ttc cag ttc gcc gtc gac aat ggc tat gac att    2704
Phe Arg Lys Thr Ala Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile
780                 785                 790                 795
cct gag ttc acc gat tgg gtg tac ccg gat gtc aag gtc gac gag acc    2752
Pro Glu Phe Thr Asp Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr
                800                 805                 810
tcc atg ctc tcc gcc acc gcc gcg acc gcc ggc gac aac gag tga        2797
Ser Met Leu Ser Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            815                 820                 825
gcatagtctc atcgcttagc cgatgaaagg ccaagggcga attc                   2841
<210>10
<211>825
<212>PRT
<213>动物双歧杆菌
<400>10
Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln Lys Leu Asp Arg Pro
1               5                   10                  15
Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys Tyr Trp Arg Val Ala
            20                  25                  30
Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro Leu Met
        35                  40                  45
Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His Arg Leu Val Gly His
    50                  55                  60
Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu Ala His Ile Asn Arg
65                  70                  75                  80
Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe Ile Met Gly Pro Gly
                85                  90                  95
His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr Ile Asp Gly Thr Tyr
            100                 105                 110
Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu Gln Lys
        115                 120                 125
Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Phe Ala
    130                 135                 140
Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn Pro Ser Leu Phe Val
                165                 170                 175
Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr
            180                 185                 190
Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly Ile Val
        195                 200                 205
Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Ile
    210                 215                 220
Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp Phe Phe Arg Gly Met
225                 230                 235                 240
Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asn Glu Asp His
                245                 250                 255
Leu Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Phe Glu Thr Ile Phe Asp
            260                 265                 270
Glu Ile Cys Asp lle Lys Ala Ala Ala Gln Thr Asp Asp Met Thr Arg
        275                 280                 285
Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp Thr Cys
    290                 295                 300
Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg Ala His
305                 310                 315                 320
Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe Glu Val
                325                 330                 335
Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asn Ala
            340                 345                 350
Asp Gly Ser Ile Lys Glu Asp Val Thr Ala Phe Met Pro Lys Gly Glu
        355                 360                 365
Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Arg Ile Arg Glu
    370                 375                 380
Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu Ile Thr Gly Val Lys
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala Pro Arg Ser Leu Gly
                405                 410                 415
Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Asp Ser Phe Arg Val
            420                 425                 430
Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Asn Ala Thr Tyr Glu
        435                 440                 445
Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu Ser Ala Leu Val Asp
    450                 455                 460
Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser Glu His
465                 470                 475                 480
Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly
                485                 490                 495
Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val Ile Asp Ser Met Leu
            500                 505                 510
Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile Pro Trp
        515                 520                 525
Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val Ser Ser His Val Trp
    530                 535                 540
Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val Thr Ser
545                 550                 555                 560
Val Leu Leu Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His Val Thr Asn Ile Tyr
                565                 570                 575
Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys Cys Phe
            580                 585                 590
Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ala Gly Lys Gln Pro Ala
        595                 600                 605
Ala Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala Glu Leu Glu Ala Gly
    610                 615                 620
Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys Ser Asn Asp Glu Val
625                 630                 635                 640
Gln Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu Ile Met
                645                 650                 655
Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys Met Gly Ile Lys Phe Lys Val Val
            660                 665                 670
Asn Val Val Asp Leu Ile Lys Leu Gln Ser Ser Lys Glu Asn Asp Glu
        675                 680                 685
Ala Met Ser Asp Glu Asp Phe Ala Asp Leu Phe Thr Ala Asp Lys Pro
    690                 695                 700
Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala Gln Asp Val Arg Gly Leu Ile
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Thr Val Val Gly Tyr Lys Glu
                725                 730                 735
Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val Arg Val Asn Asp Met
            740                 745                 750
Asp Arg Tyr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Leu Glu Leu Ile Asp Ala Asp
        755                 760                 765
Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asn Glu Leu Asn Glu Phe Arg Lys Thr Ala
    770                 775                 780
Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Pro Glu Phe Thr Asp
785                 790                 795                 800
Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr Ser Met Leu Ser Ala
                805                 810                 815
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            820                 825
<210>11
<211>2841
<212>DNA
<213>动物双歧杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(320)..(2797)
<223>
<400>11
ttttcaacac gccgcgcaat atcctcacaa accgcacgcg acaacgacgg cgaaaatgct     60
tgcattcgtt ggaatctcaa cgtttctcgc ctttattcac tgattttcca ttttcacaaa    120
tcgctcgagc aatcgcccaa attcgcaaat tatgcgcaca gattcgccca cactgtttca    180
aaaactgcaa aaaggtcagc gtattcgcgt aacataatca gcgatcggac acggaaaccg    240
gcctgcagga cagcaccgaa gcccgtgtcc aatggaataa acaaatcgca catttatgtg    300
caggagtaca ggagcacac atg act aat cct gtt att ggt acc cca tgg cag     352
                     Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln
                     1               5                   10
aag ctg gac cgt ccg gtt tcc gaa gag gcc atc gaa ggc atg gac aag      400
Lys Leu Asp Arg Pro Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys
            15                  20                  25
tac tgg cgc gtc gcc aac tac atg tcc atc ggc cag atc tac ctg cgt      448
Tyr Trp Arg Val Ala Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg
        30                  35                  40
agc aac ccg ctg atg aag gag ccc ttc acc cgc gat gac gtg aag cac      496
Ser Asn Pro Leu Met Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His
    45                  50                  55
cgt ctg gtc ggc cac tgg ggc acc acc ccg ggc ctg aac ttc ctt ctc      544
Arg Leu Val Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu
60                  65                  70                  75
gcc cat atc aac cgc ctg atc gcc gat cac cag cag aac acc gtg ttc      592
Ala His Ile Asn Arg Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe
                80                  85                  90
atc atg ggt cct ggc cac ggc ggc cct gca ggt acc gct cag tcc tac      640
Ile Met Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr
            95                  100                 105
atc gac ggc acc tac acc gag tac tac ccg aac atc acc aag gac gag      688
Ile Asp Gly Thr Tyr Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu
        110                 115                 120
gct ggc ctg cag aag ttc ttc cgc cag ttc tcc tac ccg ggt ggc att      736
Ala Gly Leu Gln Lys Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile
    125                 130                 135
cct tcc cac ttc gct ccg gag acg cca ggc tcc atc cac gaa ggc ggc      784
Pro Ser His Phe Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
140                 145                 150                 155
gag ctg ggc tac gcc ctg tcg cac gcc tac ggc gcg atc atg aac aac      832
Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asn Asn
                160                 165                 170
ccg agc ctc ttc gtc ccg tgc atc atc ggt gac ggc gaa gcc gag acc      880
Pro Ser Leu Phe Val Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr
            175                 180                 185
ggc cct ctg gcc acc ggc tgg cag tcc aac aag ctc gtc aac ccg cgc      928
Gly Pro Leu Ala Thr Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg
        190                 195                 200
acc gac ggc atc gtg ctg ccg atc ctg cac ctc aac ggc tac aag atc      976
Thr Asp Gly Ile Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile
    205                 210                 215
gcc aac ccg acg ctc ctc gcc cgc atc tcc gac gag gag ctg cac gac     1024
Ala Asn Pro Thr Leu Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp
220                 225                 230                 235
ttc ttc cgc ggt atg ggt tac cac ccg tac gag ttc gtc gcc ggc ttc     1072
Phe Phe Arg Gly Met Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe
                240                 245                 250
gac aac gag gat cac ctg tcg atc cac cgt cgc ttc gcc gag ctc ttc     1120
Asp Asn Glu Asp His Leu Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Phe
            255                 260                 265
gag acc atc ttc gac gag atc tgc gat atc aag gct gcg gct cag acc    1168
Glu Thr Ile Phe Asp Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Ala Ala Gln Thr
        270                 275                 280
gac gac atg acc cgt ccg ttc tac ccg atg ctc atc ttc cgc acc ccg    1216
Asp Asp Met Thr Arg Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro
    285                 290                 295
aag ggc tgg acc tgc ccg aag ttc atc gac ggc aag aag acc gaa ggc    1264
Lys Gly Trp Thr Cys Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly
300                 305                 310                 315
tcc tgg cgt gca cac cag gtc ccg ctg gct tcc gcc cgc gac acc gag    1312
Ser Trp Arg Ala His Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu
                320                 325                 330
gcc cac ttc gaa gtc ctc aag ggc tgg atg gaa tcc tac aag ccg gag    1360
Ala His Phe Glu Val Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu
            335                 340                 345
gag ctc ttc aac gcc gac ggc tcc atc aag gac gac gtc acc gca ttc    1408
Glu Leu Phe Asn Ala Asp Gly Ser Ile Lys Asp Asp Val Thr Ala Phe
        350                 355                 360
atg cct aag ggc gaa ctg cgc atc ggc gcc aac ccg aac gcc aac ggt    1456
Met Pro Lys Gly Glu Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly
    365                 370                 375
ggc cgc atc cgc gag gat ctg aag ctc cct gag ctc gat cag tac gag    1504
Gly Arg Ile Arg Glu Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu
380                 385                 390                 395
atc acc ggc gtc aag gaa tac ggc cat ggc tgg ggc cag gtc gag gct    1552
Ile Thr Gly Val Lys Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala
                400                 405                 410
ccg cgc tcc ctc ggc gcg tac tgc cgc gac atc atc aag aac aac ccg    1600
Pro Arg Ser Leu Gly Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro
            415                 420                 425
gat tcg ttc cgc atc ttc gga cct gat gag acc gca tcc aac cgt ctg    1648
Asp Ser Phe Arg Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu
        430                 435                 440
aac gcg acc tac gag gtc acc aag aag cag tgg gac aac ggc tat ctc    1696
Asn Ala Thr Tyr Glu Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu
    445                 450                 455
tcg gct ctc gtc gac gag aac atg gct gtc acc ggc cag gtt gtc gag    1744
Ser Ala Leu Val Asp Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu
460                 465                 470                 475
cag ctc tcc gag cat cag tgc gaa ggc ttc ctc gag gcc tac ctg ctc    1792
Gln Leu Ser Glu His Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu
                480                 485                 490
acg ggc cgc cac ggc atg tgg agc acc tat gag tcc ttc gcc cac gtg    1840
Thr Gly Arg His Gly Met Trp Ser Thr Tyr Glu Ser Phe Ala His Val
            495                 500                 505
atc gac tcg atg ctc aac cag cat gcg aag tgg ctc gag gcg acc gtc    1888
Ile Asp Ser Met Leu Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val
        510                 515                 520
cgc gag atc ccg tgg cgc aag ccg atc tcc tcg gtc aac ctc ctc gtc    1936
Arg Glu Ile Pro Trp Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val
    525                 530                 535
tcc tcg cac gtg tgg cgt cag gac cac aac ggc ttc tcg cat cag gac    1984
Ser Ser His Val Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp
540                 545                 550                 555
ccg ggt gtc acc tcc gtc ctg atc aac aag acg ttc aac aac gac cac    2032
Pro Gly Val Thr Ser Val Leu Ile Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His
                560                 565                 570
gtg acg aac atc tac ttc gcg acc gac gcc aac atg ctg ctc gcg atc    2080
Val Thr Asn Ile Tyr Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile
            575                 580                 585
gcc gag aag tgc ttc aag tcc acc aac aag atc aac gcg atc ttc tcc    2128
Ala Glu Lys Cys Phe Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ser
        590                 595                 600
ggc aag cag ccg gct ccg acc tgg att acc ctc gac gag gct cgt gcc    2176
Gly Lys Gln Pro Ala Pro Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala
    605                 610                 615
gag ctc gag gcc ggc gcc gcc gag tgg aag tgg gct tcc aac gcc aag    2224
Glu Leu Glu Ala Gly Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys
620                 625                 630                 635
agc aac gac gag gtc cag att gtc ctc gcc gcc gca ggc gat gtc ccg    2272
Ser Asn Asp Glu Val Gln Ile Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro
                640                 645                 650
acc cag gag atc atg gcc gct tcc gat gcc ctg aac aag gat ggc atc    2320
Thr Gln Glu Ile Met Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys Asp Gly Ile
            655                 660                 665
aag ttc aag gtc gtc aac gtt gtt gac ctc ctg aag ctg cag tcc ccg    2368
Lys Phe Lys Val Val Asn Val Val Asp Leu Leu Lys Leu Gln Ser Pro
        670                 675                 680
gag aac aac gac gag gcc atg tcg aac gaa gac ttc acc gag ctc ttc    2416
Glu Asn Asn Asp Glu Ala Met Ser Asn Glu Asp Phe Thr Glu Leu Phe
    685                 690                 695
acc gcc gac aaa ccg gtt ctg ttc gcc tac cac tcc tat gcc cag gac    2464
Thr Ala Asp Lys Pro Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala Gln Asp
700                 705                 710                 715
gtt cgt ggt ctt atc tac gac cgc ccg aac cac gac aac ttc aac gtt    2512
Val Arg Gly Leu Ile Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Asn Val
                720                 725                 730
gtc ggc tac aag gag cag ggc tcc acg acc acg ccg ttc gac atg gtc    2560
Val Gly Tyr Lys Glu Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val
            735                 740                 745
cgc gtc aac gac atg gat cgc tac gcg ctc gaa gct cag gct ctc gag    2608
Arg Val Asn Asp Met Asp Arg Tyr Ala Leu Glu Ala Gln Ala Leu Glu
        750                 755                 760
ctg atc gac gcc gac aag tat gcc gac aag atc gac gag ctc aac gcg    2656
Leu Ile Asp Ala Asp Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asp Glu Leu Asn Ala
    765                 770                 775
ttc cgc aag acc gcg ttc cag ttc gcc gtc gac aac ggc tac gac atc    2704
Phe Arg Lys Thr Ala Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile
780                 785                 790                 795
ccg gag ttc acc gac tgg gtg tac ccg gac gtc aag gtc gac gag acg    2752
Pro Glu Phe Thr Asp Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr
                800                 805                 810
cag atg ctc tcc gcg acc gcg gcg acc gct ggc gac aac gag tga        2797
Gln Met Leu Ser Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            815                 820                 825
gcatagtctc atcgcttagc cgatgaaagg ccaagggcga attc                   2841
210>12
<211>825
<212>PRT
<213>动物双歧杆菌
<400>12
Met Thr Asn Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Gln Lys Leu Asp Arg Pro
1               5                   10                  15
Val Ser Glu Glu Ala Ile Glu Gly Met Asp Lys Tyr Trp Arg Val Ala
            20                  25                  30
Asn Tyr Met Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro Leu Met
        35                  40                  45
Lys Glu Pro Phe Thr Arg Asp Asp Val Lys His Arg Leu Val Gly His
    50                  55                  60
Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Leu Ala His Ile Asn Arg
65                  70                  75                  80
Leu Ile Ala Asp His Gln Gln Asn Thr Val Phe Ile Met Gly Pro Gly
                85                  90                  95
His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ala Gln Ser Tyr Ile Asp Gly Thr Tyr
            100                 105                 110
Thr Glu Tyr Tyr Pro Asn Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu Gln Lys
        115                 120                 125
Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Phe Ala
    130                 135                 140
Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Leu Ser His Ala Tyr Glv Ala Ile Met Asn Asn Pro Ser Leu Phe Val
                165                 170                 175
Pro Cys Ile Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr
            180                 185                 190
Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly Ile Val
        195                 200                 205
Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Leu
    210                 215                 220
Leu Ala Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Asp Phe Phe Arg Gly Met
225                 230                 235                 240
Gly Tyr His Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asn Glu Asp His
                245                 250                 255
Leu Ser Ile His Arg Arg phc Ala Glu Leu Phe Glu Thr Ile Phe Asp
            260                 265                 270
Glu lle Cys Asp Ile Lys Ala Ala Ala Gln Thr Asp Asp Met Thr Arg
        275                 280                 285
Pro Phc Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp Thr Cys
    290                 295                 300
Pro Lys Phe Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg Ala His
305                 310                 315                 320
Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe Glu Val
                325                 330                 335
Leu Lys Gly Trp Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asn Ala
            340                 345                 350
Asp Gly Ser Ile Lys Asp Asp Val Thr Ala Phc Met Pro Lys Gly Glu
        355                 360                 365
Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Arg Ile Arg Glu
    370                 375                 380
Asp Leu Lys Leu Pro Glu Leu Asp Gln Tyr Glu Ile Thr Gly Val Lys
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Val Glu Ala Pro Arg Ser Leu Gly
                405                 410                 415
Ala Tyr Cys Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Asp Ser Phe Arg Ile
            420                 425                 430
Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Asn Ala Thr Tyr Glu
        435                 440                 445
Val Thr Lys Lys Gln Trp Asp Asn Gly Tyr Leu Ser Ala Leu Val Asp
    450                 455                 460
Glu Asn Met Ala Val Thr Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser Glu His
465                 470                 475                 480
Gln Cys Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly
                485                 490                 495
Met Trp Ser Thr Tyr Glu Ser Phe Ala His Val Ile Asp Ser Met Leu
            500                 505                 510
Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile Pro Trp
        515                 520                 525
Arg Lys Pro Ile Ser Ser Val Asn Leu Leu Val Ser Ser His Val Trp
    530                 535                 540
Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val Thr Ser
545                 550                 555                 560
Val Leu Ile Asn Lys Thr Phe Asn Asn Asp His Val Thr Asn Ile Tyr
                565                 570                 575
Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys Cys Phe
            580                 585                 590
Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Phe Ser Gly Lys Gln Pro Ala
        595                 600                 605
Pro Thr Trp Ile Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala Glu Leu Glu Ala Gly
    610                 615                 620
Ala Ala Glu Trp Lys Trp Ala Ser Asn Ala Lys Ser Asn Asp Glu Val
625                 630                 635                 640
Gln Ile Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu Ile Met
                645                 650                 655
Ala Ala Ser Asp Ala Leu Asn Lys Asp Gly Ile Lys Phe Lys Val Val
            660                 665                 670
Asn Val Val Asp Leu Leu Lys Leu Gln Ser Pro Glu Asn Asn Asp Glu
        675                 680                 685
Ala Met Ser Asn Glu Asp Phe Thr Glu Leu Phe Thr Ala Asp Lys Pro
    690                 695                 700
Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala Gln Asp Val Arg Gly Leu Ile
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Asn Val Val Gly Tyr Lys Glu
                725                 730                 735
Gln Gly Ser Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Val Arg Val Asn Asp Met
            740                 745                 750
Asp Arg Tyr Ala Leu Glu Ala Gln Ala Leu Glu Leu Ile Asp Ala Asp
        755                 760                 765
Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asp Glu Leu Asn Ala Phe Arg Lys Thr Ala
    770                 775                 780
Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp Ile Pro Glu Phe Thr Asp
785                 790                 795                 800
Trp Val Tyr Pro Asp Val Lys Val Asp Glu Thr Gln Met Leu Ser Ala
                805                 810                 815
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            820                 825
<210>13
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>13
ctagtctaga ttttcaacac gccgcgcaat atcc                            34
<210>14
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>14
ctagtctaga gaattcgccc ttggcctttc atcggctaag c                         41
<210>15
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>15
aaattcctgt gaattagctg attt                                                24
<210>16
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>16
ggtaccaata acaggattag tcatagaggc gaaggctcct tgaatagg                  48
<210>17
<211>34
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>引物
<400>17
ctagtctaga gaattcgccc ttggcctttc atcg                                  34
<210>18
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>18
cctattcaag gagccttcgc ctctatgact aatcctgtta ttggtacc                  48
<210>19
<211>44
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>19
ctattctaga aaattcctgt gaattagctg atttagtact tttc                       44
<210>20
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>20
ggtaccaata acaggattag tcataattct gtttcctgtg tgaaattg                  48
<210>21
<211>34
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>21
cggttctaga ggatccggag cttatcgact gcac                                  34
<210>22
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>22
caatttcaca caggaaacag aattatgact aatcctgtta ttggtacc                   48
<210>23
<211>49
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>23
ctggtgatga gtaatctgta gacatagagg cgaaggctcc ttgaatagg                  49
<210>24
<211>34
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>24
ctagtctaga ttatttcaaa cctttccatt gcca                                  34
<210>25
<211>49
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>25
cctattcaag gagccttcgc ctctatgtct acagattact catcaccag                  49
<210>26
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>26
ttatctgtcc cttgaggtga tttattccac acctcctgtt ggaatgtt                  48
<210>27
<211>23
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>27
caaggtacaa cgcaacgatg cag                                                23
<210>28
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>28
aacattccaa caggaggtgt ggaataaatc acctcaaggg acagataa                   48
<210>29
<211>24
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>29
gatggtttgc tcgcaggtat tttg                                               24
<210>30
<211>34
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>30
cgcacccggg cagagaagcc ttggaggtga tctg                                  34
<210>31
<211>32
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>31
aggtcccggg accatgattg cgttgtggtc gg                                    32
<210>32
<211>20
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>32
ccaggcactc gtcctcggtt                                                    20
<210>33
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>33
aggctagtgc aggactataa agaccagttc tcctaaaaat aacgtgtc                   48
<210>34
<211>48
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>34
gacacgttat ttttaggaga actggtcttt atagtcctgc actagcct                  48
<210>35
<211>20
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>23
tccatcgtgg ccaccgatcc                                                     20
<210>36
<211>25
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>36
cgggatcccc accggcgtac tcgtg                                             25
<210>37
<211>28
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>37
ccacggatcc ttccaatgct attggttg                                           28
<210>38
<211>2769
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2769)
<223>aceE
<400>38
atg gcc gat caa gca aaa ctt ggt ggc aag ccc tcg gat gac tct aac     48
Met Ala Asp Gln Ala Lys Leu Gly Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ser Asn
1               5                   10                  15
ttc gcg atg atc cgc gat ggc gtg gca tct tat ttg aac gac tca gat     96
Phe Ala Met Ile Arg Asp Gly Val Ala Ser Tyr Leu Asn Asp Ser Asp
            20                  25                  30
ccg gag gag acc aac gag tgg atg gat tca ctc gac gga tta ctc cag    144
Pro Glu Glu Thr Asn Glu Trp Met Asp Ser Leu Asp Gly Leu Leu Gln
        35                  40                  45
gag tct tct cca gaa cgt gct cgt tac ctc atg ctt cgt ttg ctt gag    192
Glu Ser Ser Pro Glu Arg Ala Arg Tyr Leu Met Leu Arg Leu Leu Glu
    50                  55                  60
cgt gca tct gca aag cgc gta tct ctt ccc cca atg acg tca acc gac    240
Arg Ala Ser Ala Lys Arg Val Ser Leu Pro Pro Met Thr Ser Thr Asp
65                  70                  75                  80
tac gtc aac acc att cca acc tct atg gaa cct gaa ttc cca ggc gat    288
Tyr Val Asn Thr Ile Pro Thr Ser Met Glu Pro Glu Phe Pro Gly Asp
                85                  90                  95
gag gaa atg gag aag cgt tac cgt cgt tgg att cgc tgg aac gca gcc    336
Glu Glu Met Glu Lys Arg Tyr Arg Arg Trp Ile Arg Trp Asn Ala Ala
            100                 105                 110
atc atg gtt cac cgc gct cag cga cca ggc atc ggc gtc ggc gga cac    384
Ile Met Val His Arg Ala Gln Arg Pro Gly Ile Gly Val Gly Gly His
        115                 120                 125
att tcc act tac gca ggc gca gcc cct ctg tac gaa gtt ggc ttc aac    432
Ile Ser Thr Tyr Ala Gly Ala Ala Pro Leu Tyr Glu Val Gly Phe Asn
    130                 135                 140
cac ttc ttc cgc ggc aag gat cac cca ggc ggc ggc gac cag atc ttc    480
His Phe Phe Arg Gly Lys Asp His Pro Gly Gly Gly Asp Gln Ile Phe
145                 150                 155                 160
ttc cag ggc cac gca tca cca ggt atg tac gca cgt gca ttc atg gag    528
Phe Gln Gly His Ala Ser Pro Gly Met Tyr Ala Arg Ala Phe Met Glu
                165                 170                 175
ggt cgc ctt tct gaa gac gat ctc gat ggc ttc cgt cag gaa gt ttcc    576
Gly Arg Leu Ser Glu Asp Asp Leu Asp Gly Phe Arg Gln Glu Val Ser
            180                 185                 190
cgt gag cag ggt ggc att ccg tcc tac cct cac cca cac ggt atg aag    624
Arg Glu Gln Gly Gly Ile Pro Ser Tyr Pro His Pro His Gly Met Lys
        195                 200                 205
gac ttc tgg gag ttc cca act gtg tcc atg ggt ctt ggc cca atg gat    672
Asp Phe Trp Glu Phe Pro Thr Val Ser Met Gly Leu Gly Pro Met Asp
    210                 215                 220
gcc att tac cag gca cgt ttc aac cgc tac ctc gaa aac cgt ggc atc    720
Ala Ile Tyr Gln Ala Arg Phe Asn Arg Tyr Leu Glu Asn Arg Gly Ile
225                 230                 235                 240
aag gac acc tct gac cag cac gtc tgg gcc ttc ctt ggc gac ggc gaa    768
Lys Asp Thr Ser Asp Gln His Val Trp Ala Phe Leu Gly Asp Gly Glu
                245                 250                 255
atg gac gag cca gaa tca cgt ggt ctc atc cag cag gct gca ctg aac    816
Met Asp Glu Pro Glu Ser Arg Gly Leu Ile Gln Gln Ala Ala Leu Asn
            260                 265                 270
aac ctg gac aac ctg acc ttc gtg gtt aac tgc aac ctg cag cgt ctc    864
Asn Leu Asp Asn Leu Thr Phe Val Val Asn Cys Asn Leu Gln Arg Leu
        275                 280                 285
gac gga cct gtc cgc ggt aac acc aag atc atc cag gaa ctc gag tcc    912
Asp Gly Pro Val Arg Gly Asn Thr Lys Ile Ile Gln Glu Leu Glu Ser
    290                 295                 300
ttc ttc cgt ggc gca ggc tgg tct gtg atc aag gtt gtt tgg ggt cgc    960
Phe Phe Arg Gly Ala Gly Trp Ser Val Ile Lys Val Val Trp Gly Arg
305                 310                 315                 320
gag tgg gat gaa ctt ctg gag aag gac cag gat ggt gca ctt gtt gag   1008
Glu Trp Asp Glu Leu Leu Glu Lys Asp Gln Asp Gly Ala Leu Val Glu
                325                 330                 335
atc atg aac aac acc tcc gat ggt gac tac cag acc ttc aag gct aac   1056
Ile Met Asn Asn Thr Ser Asp Gly Asp Tyr Gln Thr Phe Lys Ala Asn
            340                 345                 350
gac ggc gca tat gtt cgt gag cac ttc ttc gga cgt gac cca cgc acc   1104
Asp Gly Ala Tyr Val Arg Glu His Phe Phe Gly Arg Asp Pro Arg Thr
        355                 360                 365
gca aag ctc gtt gag aac atg acc gac gaa gaa atc tgg aag ctt cca   1152
Ala Lys Leu Val Glu Asn Met Thr Asp Glu Glu Ile Trp Lys Leu Pro
    370                 375                 380
cgt ggc ggc cac gat tac cgc aag gtt tac gca gcc tac aag cga gct   1200
Arg Gly Gly His Asp Tyr Arg Lys Val Tyr Ala Ala Tyr Lys Arg Ala
385                 390                 395                 400
ctt gag acc aag gat cgc cca acc gtc atc ctt gct cac acc att aag   1248
Leu Glu Thr Lys Asp Arg Pro Thr Val Ile Leu Ala His Thr Ile Lys
                405                 410                 415
ggc tac gga ctc ggc cac aac ttc gaa ggc cgt aac gca acc cac cag   1296
Gly Tyr Gly Leu Gly His Asn Phe Glu Gly Arg Asn Ala Thr His Gln
            420                 425                 430
atg aag aag ctg acg ctt gat gat ctg aag ttg ttc cgc gac aag cag   1344
Met Lys Lys Leu Thr Leu Asp Asp Leu Lys Leu Phe Arg Asp Lys Gln
        435                 440                 445
ggc atc cca atc acc gat gag cag ctg gag aag gat cct tac ctt cct   1392
Gly Ile Pro Ile Thr Asp Glu Gln Leu Glu Lys Asp Pro Tyr Leu Pro
    450                 455                 460
cct tac tac cac cca ggt gaa gac gct cct gaa atc aag tac atg aag   1440
Pro Tyr Tyr His Pro Gly Glu Asp Ala Pro Glu Ile Lys Tyr Met Lys
465                 470                 475                 480
gaa cgt cgc gca gcg ctc ggt ggc tac ctg cca gag cgt cgt gag aac   1488
Glu Arg Arg Ala Ala Leu Gly Gly Tyr Leu Pro Glu Arg Arg Glu Asn
                485                 490                 495
tac gat cca att cag gtt cca cca ctg gat aag ctt cgc tct gtc cgt   1536
Tyr Asp Pro Ile Gln Val Pro Pro Leu Asp Lys Leu Arg Ser Val Arg
            500                 505                 510
aag ggc tcc ggc aag cag cag atc gct acc acc atg gcg act gtt cgt   1584
Lys Gly Ser Gly Lys Gln Gln Ile Ala Thr Thr Met Ala Thr Val Arg
        515                 520                 525
acc ttc aag gaa ctg atg cgc gat aag ggc ttg gct gat cgc ctt gtc   1632
Thr Phe Lys Glu Leu Met Arg Asp Lys Gly Leu Ala Asp Arg Leu Val
    530                 535                 540
cca atc att cct gat gag gca cgt acc ttc ggt ctt gac tct tgg ttc    1680
Pro Ile Ile Pro Asp Glu Ala Arg Thr Phe Gly Leu Asp Ser Trp Phe
545                 550                 555                 560
cca acc ttg aag atc tac aac ccg cac ggt cag aac tac gtg cct gtt    1728
Pro Thr Leu Lys Ile Tyr Asn Pro His Gly Gln Asn Tyr Val Pro Val
                565                 570                 575
gac cac gac ctg atg ctc tcc tac cgt gag gca cct gaa gga cag atc    1776
Asp His Asp Leu Met Leu Ser Tyr Arg Glu Ala Pro Glu Gly Gln Ile
            580                 585                 590
ctg cac gaa ggc atc aac gag gct ggt tcc gtg gca tcg ttc atc gct    1824
Leu His Glu Gly Ile Asn Glu Ala Gly Ser Val Ala Ser Phe Ile Ala
        595                 600                 605
gcg ggt acc tcc tac gcc acc cac ggc aag gcc atg att ccg ctg tac    1872
Ala Gly Thr Ser Tyr Ala Thr His Gly Lys Ala Met Ile Pro Leu Tyr
    610                 615                 620
atc ttc tac tcg atg ttc gga ttc cag cgc acc ggt gac tcc atc tgg    1920
Ile Phe Tyr Ser Met Phe Gly Phe Gln Arg Thr Gly Asp Ser Ile Trp
625                 630                 635                 640
gca gca gcc gat cag atg gca cgt ggc ttc ctc ttg ggc gct acc gca    1968
Ala Ala Ala Asp Gln Met Ala Arg Gly Phe Leu Leu Gly Ala Thr Ala
                645                 650                 655
ggt cgc acc acc ctg acc ggt gaa ggc ctc cag cac atg gat gga cac    2016
Gly Arg Thr Thr Leu Thr Gly Glu Gly Leu Gln His Met Asp Gly His
            660                 665                 670
tcc cct gtc ttg gct tcc acc aac gag ggt gtc gag acc tac gac cca    2064
Ser Pro Val Leu Ala Ser Thr Asn Glu Gly Val Glu Thr Tyr Asp Pro
        675                 680                 685
tcc ttt gcg tac gag atc gca cac ctg gtt cac cgt ggc atc gac cgc    2112
Ser Phe Ala Tyr Glu Ile Ala His Leu Val His Arg Gly Ile Asp Arg
    690                 695                 700
atg tac ggc cca ggc aag ggt gaa gat gtt atc tac tac atc acc atc    2160
Met Tyr Gly Pro Gly Lys Gly Glu Asp Val Ile Tyr Tyr Ile Thr Ile
705                 710                 715                 720
tac aac gag cca acc cca cag cca gct gag cca gaa gga ctg gac gta    2208
Tyr Asn Glu Pro Thr Pro Gln Pro Ala Glu Pro Glu Gly Leu Asp Val
                725                 730                 735
gaa ggc ctg cac aag ggc atc tac ctc tac tcc cgc ggt gaa ggc acc    2256
Glu Gly Leu His Lys Gly Ile Tyr Leu Tyr Ser Arg Gly Glu Gly Thr
            740                 745                 750
ggc cat gag gca aac atc ttg gct tcc ggt gtt ggt atg cag tgg gct    2304
Gly His Glu Ala Asn Ile Leu Ala Ser Gly Val Gly Met Gln Trp Ala
        755                 760                 765
ctc aag gct gca tcc atc ctt gag gct gac tac gga gtt cgt gcc aac    2352
Leu Lys Ala Ala Ser Ile Leu Glu Ala Asp Tyr Gly Val Arg Ala Asn
    770                 775                 780
att tac tcc gct act tct tgg gtt aac ttg gct cgc gat ggc gct gct    2400
Ile Tyr Ser Ala Thr Ser Trp Val Asn Leu Ala Arg Asp Gly Ala Ala
785                 790                 795                 800
cgt aac aag gca cag ctg cgc aac cca ggt gca gat gct ggc gag gca    2448
Arg Asn Lys Ala Gln Leu Arg Asn Pro Gly Ala Asp Ala Gly Glu Ala
                805                 810                 815
ttc gta acc acc cag ctg aag cag acc tcc ggc cca tac gtt gca gtg    2496
Phe Val Thr Thr Gln Leu Lys Gln Thr Ser Gly Pro Tyr Val Ala Val
            820                 825                 830
tct gac ttc tcc act gat ctg cca aac cag atc cgt gaa tgg gtc cca    2544
Ser Asp Phe Ser Thr Asp Leu Pro Asn Gln lle Arg Glu Trp Val Pro
        835                 840                 845
ggc gac tac acc gtt ctc ggt gca gat ggc ttc ggt ttc tct gat acc    2592
Gly Asp Tyr Thr Val Leu Gly Ala Asp Gly Phe Gly Phe Ser Asp Thr
    850                 855                 860
cgc cca gct gct cgt cgc ttc ttc aac atc gac gct gag tcc att gtt    2640
Arg Pro Ala Ala Arg Arg Phe Phe Asn Ile Asp Ala Glu Ser Ile Val
865                 870                 875                 880
gtt gca gtg ctg aac tcc ctg gca cgc gaa ggc aag atc gac gtc tcc    2688
Val Ala Val Leu Asn Ser Leu Ala Arg Glu Gly Lys Ile Asp Val Ser
                885                 890                 895
gtt gct gct cag gct gct gag aag ttc aag ttg gat gat cct acg agt    2736
Val Ala Ala Gln Ala Ala Glu Lys Phe Lys Leu Asp Asp Pro Thr Ser
            900                 905                 910
gtt tcc gta gat cca aac gct cct gag gaa taa                        2769
Val Ser Val Asp Pro Asn Ala Pro Glu Glu
        915                 920
<210>39
<211>922
<212>PRT
<213>谷氨酸棒杆菌
<400>39
Met Ala Asp Gln Ala Lys Leu Gly Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ser Asn
1               5                   10                  15
Phe Ala Met Ile Arg Asp Gly Val Ala Ser Tyr Leu Asn Asp Ser Asp
            20                  25                  30
Pro Glu Glu Thr Asn Glu Trp Met Asp Ser Leu Asp Gly Leu Leu Gln
        35                  40                  45
Glu Ser Ser Pro Glu Arg Ala Arg Tyr Leu Met Leu Arg Leu Leu Glu
    50                  55                  60
Arg Ala Ser Ala Lys Arg Val Ser Leu Pro Pro Met Thr Ser Thr Asp
65                  70                  75                  80
Tyr Val Asn Thr Ile Pro Thr Ser Met Glu Pro Glu Phe Pro Gly Asp
                85                  90                  95
Glu Glu Met Glu Lys Arg Tyr Arg Arg Trp Ile Arg Trp Asn Ala Ala
            100                 105                 110
Ile Met Val His Arg Ala Gln Arg Pro Gly Ile Gly Val Gly Gly His
        115                 120                 125
Ile Ser Thr Tyr Ala Gly Ala Ala Pro Leu Tyr Glu Val Gly Phe Asn
    130                 135                 140
His Phe Phe Arg Gly Lys Asp His Pro Gly Gly Gly Asp Gln lle Phe
145                 150                 155                 160
Phe Gln Gly His Ala Ser Pro Gly Met Tyr Ala Arg Ala Phe Met Glu
                165                 170                 175
Gly Arg Leu Ser Glu Asp Asp Leu Asp Gly Phe Arg Gln Glu Val Ser
            180                 185                 190
Arg Glu Gln Gly Gly Ile Pro Ser Tyr Pro His Pro His Gly Met Lys
        195                 200                 205
Asp Phe Trp Glu Phe Pro Thr Val Ser Met Gly Leu Gly Pro Met Asp
    210                 215                 220
Ala Ile Tyr Gln Ala Arg Phe Asn Arg Tyr Leu Glu Asn Arg Gly Ile
225                 230                 235                 240
Lys Asp Thr Ser Asp Gln His Val Trp Ala Phe Leu Gly Asp Gly Glu
                245                 250                 255
Met Asp Glu Pro Glu Ser Arg Gly Leu Ile Gln Gln Ala Ala Leu Asn
            260                 265                 270
Asn Leu Asp Asn Leu Thr Phe Val Val Asn Cys Asn Leu Gln Arg Leu
        275                 280                 285
Asp Gly Pro Val Arg Gly Asn Thr Lys Ile Ile Gln Glu Leu Glu Ser
    290                 295                 300
Phe Phe Arg Gly Ala Gly Trp Ser Val Ile Lys Val Val Trp Gly Arg
305                 310                 315                 320
Glu Trp Asp Glu Leu Leu Glu Lys Asp Gln Asp Gly Ala Leu Val Glu
                325                 330                 335
Ile Met Asn Asn Thr Ser Asp Gly Asp Tyr Gln Thr Phe Lys Ala Asn
            340                 345                 350
Asp Gly Ala Tyr Val Arg Glu His Phe Phe Gly Arg Asp Pro Arg Thr
        355                 360                 365
Ala Lys Leu Val Glu Asn Met Thr Asp Glu Glu Ile Trp Lys Leu Pro
    370                 375                 380
Arg Gly Gly His Asp Tyr Arg Lys Val Tyr Ala Ala Tyr Lys Arg Ala
385                 390                 395                 400
Leu Glu Thr Lys Asp Arg Pro Thr Val Ile Leu Ala His Thr Ile Lys
                405                 410                 415
Gly Tyr Gly Leu Gly His Asn Phe Glu Gly Arg Asn Ala Thr His Gln
            420                 425                 430
Met Lys Lys Leu Thr Leu Asp Asp Leu Lys Leu Phe Arg Asp Lys Gln
        435                 440                 445
Gly Ile Pro Ile Thr Asp Glu Gln Leu Glu Lys Asp Pro Tyr Leu Pro
    450                 455                 460
Pro Tyr Tyr His Pro Gly Glu Asp Ala Pro Glu Ile Lys Tyr Met Lys
465                 470                 475                 480
Glu Arg Arg Ala Ala Leu Gly Gly Tyr Leu Pro Glu Arg Arg Glu Asn
                485                 490                 495
Tyr Asp Pro Ile Gln Val Pro Pro Leu Asp Lys Leu Arg Ser Val Arg
            500                 505                 510
Lys Gly Ser Gly Lys Gln Gln Ile Ala Thr Thr Met Ala Thr Val Arg
        515                 520                 525
Thr Phe Lys Glu Leu Met Arg Asp Lys Gly Leu Ala Asp Arg Leu Val
    530                 535                 540
Pro Ile Ile Pro Asp Glu Ala Arg Thr Phe Gly Leu Asp Ser Trp Phe
545                 550                 555                 560
Pro Thr Leu Lys Ile Tyr Asn Pro His Gly Gln Asn Tyr Val Pro Val
                565                 570                 575
Asp His Asp Leu Met Leu Ser Tyr Arg Glu Ala Pro Glu Gly Gln Ile
            580                 585                 590
Leu His Glu Gly Ile Asn Glu Ala Gly Ser Val Ala Ser Phe Ile Ala
        595                 600                 605
Ala Gly Thr Ser Tyr Ala Thr His Gly Lys Ala Met Ile Pro Leu Tyr
    610                 615                 620
Ile Phe Tyr Ser Met Phe Gly Phe Gln Arg Thr Gly Asp Ser Ile Trp
625                 630                 635                 640
Ala Ala Ala Asp Gln Met Ala Arg Gly Phe Leu Leu Gly Ala Thr Ala
                645                 650                 655
Gly Arg Thr Thr Leu Thr Gly Glu Gly Leu Gln His Met Asp Gly His
            660                 665                 670
Ser Pro Val Leu Ala Ser Thr Asn Glu Gly Val Glu Thr Tyr Asp Pro
        675                 680                 685
Ser Phe Ala Tyr Glu Ile Ala His Leu Val His Arg Gly Ile Asp Arg
    690                 695                 700
Met Tyr Gly Pro Gly Lys Gly Glu Asp Val Ile Tyr Tyr Ile Thr Ile
705                 710                 715                 720
Tyr Asn Glu Pro Thr Pro Gln Pro Ala Glu Pro Glu Gly Leu Asp Val
                725                 730                 735
Glu Gly Leu His Lys Gly Ile Tyr Leu Tyr Ser Arg Gly Glu Gly Thr
            740                 745                 750
Gly His Glu Ala Asn Ile Leu Ala Ser Gly Val Gly Met Gln Trp Ala
        755                 760                 765
Leu Lys Ala Ala Ser Ile Leu Glu Ala Asp Tyr Gly Val Arg Ala Asn
    770                 775                 780
Ile Tyr Ser Ala Thr Ser Trp Val Asn Leu Ala Arg Asp Gly Ala Ala
785                 790                 795                 800
Arg Asn Lys Ala Gln Leu Arg Asn Pro Gly Ala Asp Ala Gly Glu Ala
                805                 810                 815
Phe Val Thr Thr Gln Leu Lys Gln Thr Ser Gly Pro Tyr Val Ala Val
            820                 825                 830
Ser Asp Phe Ser Thr Asp Leu Pro Asn Gln Ile Arg Glu Trp Val Pro
        835                 840                 845
Gly Asp Tyr Thr Val Leu Gly Ala Asp Gly Phe Gly Phe Ser Asp Thr
    850                 855                 860
Arg Pro Ala Ala Arg Arg Phe Phe Asn Ile Asp Ala Glu Ser Ile Val
865                 870                 875                 880
Val Ala Val Leu Asn Ser Leu Ala Arg Glu Gly Lys Ile Asp Val Ser
                885                 890                 895
Val Ala Ala Gln Ala Ala Glu Lys Phe Lys Leu Asp Asp Pro Thr Ser
            900                 905                 910
Val Ser Val Asp Pro Asn Ala Pro Glu Glu
        915                 920
<210>40
<211>2014
<212>DNA
<213>枯草芽孢杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(464)..(1885)
<223>sacB
<400>40
gatccttttt aacccatcac atatacctgc cgttcactat tatttagtga aatgagatat     60
tatgatattt tctgaattgt gattaaaaag gcaactttat gcccatgcaa cagaaactat    120
aaaaaataca gagaatgaaa agaaacagat agatttttta gttctttagg cccgtagtct    180
gcaaatcctt ttatgatttt ctatcaaaca aaagaggaaa atagaccagt tgcaatccaa    240
acgagagtct aatagaatga ggtcgaaaag taaatcgcgc gggtttgtta ctgataaagc    300
aggcaagacc taaaatgtgt aaagggcaaa gtgtatactt tggcgtcacc ccttacatat    360
tttaggtctt tttttattgt gcgtaactaa cttgccatct tcaaacagga gggctggaag    420
aagcagaccg ctaacacagt acataaaaaa ggagacat ga acg atg aac atc aaa     475
                                                 Met Asn Ile Lys
                                                 1
aag ttt gca aaa caa gca aca gta tta acc ttt act acc gca ct g ctg     523
Lys Phe Ala Lys Gln Ala Thr Val Leu Thr Phe Thr Thr Ala Leu Leu
5               10                   15                  20
gca gga ggc gca act caa gcg ttt gcg aaa gaa acg aac caa aag cca      571
Ala Gly Gly Ala Thr Gln Ala Phe Ala Lys Glu Thr Asn Gln Lys Pro
            25                  30                  35
tat aag gaa aca tac ggc att tcc cat att aca cgc cat gat atg ctg      619
Tyr Lys Glu Thr Tyr Gly Ile Ser His Ile Thr Arg His Asp Met Leu
        40                  45                  50
caa atc cct gaa cag caa aaa aat gaa aaa tat caa gtt cct gaa ttc      667
Gln Ile Pro Glu Gln Gln Lys Asn Glu Lys Tyr Gln Val Pro Glu Phe
        55                  60                  65
gat tcg tcc aca att aaa aat atc tct tct gca aaa ggc ctg gac gtt    715
Asp Ser Ser Thr Ile Lys Asn Ile Ser Ser Ala Lys Gly Leu Asp Val
    70                  75                  80
tgg gac agc tgg cca tta caa aac gct gac ggc act gtc gca aac tat    763
Trp Asp Ser Trp Pro Leu Gln Asn Ala Asp Gly Thr Val Ala Asn Tyr
85                  90                  95                  100
cac ggc tac cac atc gtc ttt gca tta gcc gga gat cct aaa aat gcg    811
His Gly Tyr His Ile Val Phe Ala Leu Ala Gly Asp Pro Lys Asn Ala
                105                 110                 115
gat gac aca tcg att tac atg ttc tat caa aaa gtc ggc gaa act tct    859
Asp Asp Thr Ser Ile Tyr Met Phe Tyr Gln Lys Val Gly Glu Thr Ser
            120                 125                 130
att gac agc tgg aaa aac gct ggc cgc gtc ttt aaa gac agc gac aaa    907
Ile Asp Ser Trp Lys Asn Ala Gly Arg Val Phe Lys Asp Ser Asp Lys
        135                 140                 145
ttc gat gca aat gat tct atc cta aaa gac caa aca caa gaa tgg tca    955
Phe Asp Ala Asn Asp Ser Ile Leu Lys Asp Gln Thr Gln Glu Trp Ser
    150                 155                 160
ggt tca gcc aca ttt aca tct gac gga aaa atc cgt tta ttc tac act   1003
Gly Ser Ala Thr Phe Thr Ser Asp Gly Lys Ile Arg Leu Phe Tyr Thr
165                 170                 175                 180
gat ttc tcc ggt aaa cat tac ggc aaa caa aca ctg aca act gca caa   1051
Asp Phe Ser Gly Lys His Tyr Gly Lys Gln Thr Leu Thr Thr Ala Gln
                185                 190                 195
gtt aac gta tca gca tca gac agc tct ttg aac atc aac ggt gta gag   1099
Val Asn Val Ser Ala Ser Asp Ser Ser Leu Asn Ile Asn Gly Val Glu
            200                 205                 210
gat tat aaa tca atc ttt gac ggt gac gga aaa acg tat caa aat gta   1147
Asp Tyr Lys Ser Ile Phe Asp Gly Asp Gly Lys Thr Tyr Gln Asn Val
        215                 220                 225
cag cag ttc atc gat gaa ggc aac tac agc tca ggc gac aac cat acg   1195
Gln Gln Phe Ile Asp Glu Gly Asn Tyr Ser Ser Gly Asp Asn His Thr
    230                 235                 240
ctg aga gat cct cac tac gta gaa gat aaa ggc cac aaa tac tta gta   1243
Leu Arg Asp Pro His Tyr Val Glu Asp Lys Gly His Lys Tyr Leu Val
245                 250                 255                 260
ttt gaa gca aac act gga act gaa gat ggc tac caa ggc gaa gaa tct   1291
Phe Glu Ala Asn Thr Gly Thr Glu Asp Gly Tyr Gln Gly Glu Glu Ser
                265                 270                 275
tta ttt aac aaa gca tac tat ggc aaa agc aca tca ttc ttc cgt caa   1339
Leu Phe Asn Lys Ala Tyr Tyr Gly Lys Ser Thr Ser Phe Phe Arg Gln
            280                 285                 290
gaa agt caa aaa ctt ctg caa agc gat aaa aaa cgc acg gct gag tta   1387
Glu Ser Gln Lys Leu Leu Gln Ser Asp Lys Lys Arg Thr Ala Glu Leu
        295                 300                 305
gca aac ggc gct ctc ggt atg att gag cta aac gat gat tac aca ctg   1435
Ala Asn Gly Ala Leu Gly Met Ile Glu Leu Asn Asp Asp Tyr Thr Leu
    310                 315                 320
aaa aaa gtg atg aaa ccg ctg att gca tct aac aca gta aca gat gaa   1483
Lys Lys Val Met Lys Pro Leu Ile Ala Ser Asn Thr Val Thr Asp Glu
325                 330                 335                 340
att gaa cgc gcg aac gtc ttt aaa atg aac ggc aaa tgg tac ctg ttc   1531
Ile Glu Arg Ala Asn Val Phe Lys Met Asn Gly Lys Trp Tyr Leu Phe
                345                 350                 355
act gac tcc cgc gga tca aaa atg acg att gac ggc att acg tct aac   1579
Thr Asp Ser Arg Gly Ser Lys Met Thr Ile Asp Gly Ile Thr Ser Asn
            360                 365                 370
gat att tac atg ctt ggt tat gtt tct aat tct tta act ggc cca tac    1627
Asp Ile Tyr Met Leu Gly Tyr Val Ser Asn Ser Leu Thr Gly Pro Tyr
        375                 380                 385
aag ccg ctg aac aaa act ggc ctt gtg tta aaa atg gat ctt gat cct    1675
Lys Pro Leu Asn Lys Thr Gly Leu Val Leu Lys Met Asp Leu Asp Pro
    390                 395                 400
aac gat gta acc ttt act tac tca cac ttc gct gta cct caa gcg aaa    1723
Ash Asp Val Thr Phe Thr Tyr Ser His Phe Ala Val Pro Gln Ala Lys
405                 410                 415                 420
gga aac aat gtc gtg att aca agc tat atg aca aac aga gga ttc tac    1771
Gly Asn Asn Val Val Ile Thr Ser Tyr Met Thr Asn Arg Gly Phe Tyr
                425                 430                 435
gca gac aaa caa tca acg ttt gcg cca agc ttc ctg ctg aac atc aaa    1819
Ala Asp Lys Gln Ser Thr Phe Ala Pro Ser Phe Leu Leu Asn Ile Lys
            440                 445                 450
ggc aag aaa aca tct gtt gtc aaa gac agc atc ctt gaa caa gga caa    1867
Gly Lys Lys Thr Ser Val Val Lys Asp Ser Ile Leu Glu Gln Gly Gln
        455                 460                 465
tta aca gtt aac aaa taa aaacgcaaaa gaaaatgccg atatcctatt           1915
Leu Thr Val Asn Lys
    470
ggcattttct tttatttctt atcaacataa aggtgaatcc catatgaact atataaaagc  1975
aggcaaatgg ctaaccgtat tcctaacctt ttgaagatc                         2014
<210>41
<211>473
<212>PRT
<213>枯草芽孢杆菌
<400>41
Met Asn Ile Lys Lys Phe Ala Lys Gln Ala Thr Val Leu Thr Phe Thr
1               5                   10                  15
Thr Ala Leu Leu Ala Gly Gly Ala Thr Gln Ala Phe Ala Lys Glu Thr
            20                  25                  30
Asn Gln Lys Pro Tyr Lys Glu Thr Tyr Gly Ile Ser His Ile Thr Arg
        35                  40                  45
His Asp Met Leu Gln Ile Pro Glu Gln Gln Lys Asn Glu Lys Tyr Gln
    50                  55                  60
Val Pro Glu Phe Asp Ser Ser Thr Ile Lys Asn Ile Ser Ser Ala Lys
65                  70                  75                  80
Gly Leu Asp Val Trp Asp Ser Trp Pro Leu Gln Asn Ala Asp Gly Thr
                85                  90                  95
Val Ala Asn Tyr His Gly Tyr His Ile Val Phe Ala Leu Ala Gly Asp
            100                 105                 110
Pro Lys Asn Ala Asp Asp Thr Ser Ile Tyr Met Phe Tyr Gln Lys Val
        115                 120                 125
Gly Glu Thr Ser Ile Asp Ser Trp Lys Asn Ala Gly Arg Val Phe Lys
    130                 135                 140
Asp Ser Asp Lys Phe Asp Ala Asn Asp Ser Ile Leu Lys Asp Gln Thr
145                 150                 155                 160
Gln Glu Trp Ser Gly Ser Ala Thr Phe Thr Ser Asp Gly Lys Ile Arg
                165                 170                 175
Leu Phe Tyr Thr Asp Phe Ser Gly Lys His Tyr Gly Lys Gln Thr Leu
            180                 185                 190
Thr Thr Ala Gln Val Asn Val Ser Ala Ser Asp Ser Ser Leu Asn Ile
        195                 200                 205
Asn Gly Val Glu Asp Tyr Lys Ser Ile Phe Asp Gly Asp Gly Lys Thr
    210                 215                 220
Tyr Gln Asn Val Gln Gln Phe Ile Asp Glu Gly Asn Tyr Ser Ser Gly
225                 230                 235                 240
Asp Asn His Thr Leu Arg Asp Pro His Tyr Val Glu Asp Lys Gly His
                245                 250                 255
Lys Tyr Leu Val Phe Glu Ala Asn Thr Gly Thr Glu Asp Gly Tyr Gln
            260                 265                 270
Gly Glu Glu Ser Leu Phe Asn Lys Ala Tyr Tyr Gly Lys Ser Thr Ser
        275                 280                 285
Phe Phe Arg Gln Glu Ser Gln Lys Leu Leu Gln Ser Asp Lys Lys Arg
    290                 295                 300
Thr Ala Glu Leu Ala Asn Gly Ala Leu Gly Met Ile Glu Leu Asn Asp
305                 310                 315                 320
Asp Tyr Thr Leu Lys Lys Val Met Lys Pro Leu Ile Ala Ser Asn Thr
                325                 330                 335
Val Thr Asp Glu Ile Glu Arg Ala Asn Val Phe Lys Met Asn Gly Lys
            340                 345                 350
Trp Tyr Leu Phe Thr Asp Ser Arg Gly Ser Lys Met Thr Ile Asp Gly
        355                 360                 365
Ile Thr Ser Asn Asp Ile Tyr Met Leu Gly Tyr Val Ser Asn Ser Leu
    370                 375                 380
Thr Gly Pro Tyr Lys Pro Leu Asn Lys Thr Gly Leu Val Leu Lys Met
385                 390                 395                 400
Asp Leu Asp Pro Asn Asp Val Thr Phe Thr Tyr Ser His Phe Ala Val
                405                 410                 415
Pro Gln Ala Lys Gly Asn Asn Val Val Ile Thr Ser Tyr Met Thr Asn
            420                 425                 430
Arg Gly Phe Tyr Ala Asp Lys Gln Ser Thr Phe Ala Pro Ser Phe Leu
        435                 440                 445
Leu Asn lle Lys Gly Lys Lys Thr Ser Val Val Lys Asp Ser Ile Leu
    450                 455                 460
Glu Gln Gly Gln Leu Thr Val Asn Lys
465                 470
<210>42
<211>24
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>42
cgggatcctt tttaacccat caca                                          24
<210>43
<211>29
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>43
gaagatcttc aaaaggttag gaatacggt                                     29
<210>44
<211>23
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>44
ccttttgaag atcgaccagt tgg                                23
<210>45
<211>44
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>45
tacctggaat gctgttttcc cagggatcgc agtggtgagt aacc         44
<210>46
<211>28
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>46
cctgggaaaa cagcattcca ggtattag                           28
<210>47
<211>23
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物
<400>47
tgcaggtcga ctctagagga tcc                                23
<210>48
<211>3774
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌
<220>
<221>CPS
<222>(1)..(3774)
<223>sucA
<400>48
atg cta caa ctg ggg ctt agg cat aat cag cca acg acc aac gtt aca      48
Met Leu Gln Leu Gly Leu Arg His Asn Gln Pro Thr Thr Asn Val Thr
1               5                   10                  15
gtg gat aaa aca aag ctc aat aaa ccc tca aga agc aag gaa aag agg      96
Val Asp Lys Thr Lys Leu Asn Lys Pro Ser Arg Ser Lys Glu Lys Arg
            20                  25                  30
cga gta cct gcc gtg agc agc gct agt act ttc ggc cag aat gcg tgg     144
Arg Val Pro Ala Val Ser Ser Ala Ser Thr Phe Gly Gln Asn Ala Trp
        35                  40                  45
ctg gta gac gag atg ttc cag cag ttc cag aag gac ccc aag tcc gtg     192
Leu Val Asp Glu Met Phe Gln Gln Phe Gln Lys Asp Pro Lys Ser Val
    50                  55                  60
gac aag gaa tgg aga gaa ctc ttt gag gcg cag ggg gga cca aat act     240
Asp Lys Glu Trp Arg Glu Leu Phe Glu Ala Gln Gly Gly Pro Asn Thr
65                  70                  75                  80
acc ccc gct aca aca gaa gca cag cct tca gcg ccc aag gag tct gcg     288
Thr Pro Ala Thr Thr Glu Ala Gln Pro Ser Ala Pro Lys Glu Ser Ala
                85                  90                  95
aaa cca gca cca aag gct gcc cct gca gcc aag gca gca ccg cgc gta     336
Lys Pro Ala Pro Lys Ala Ala Pro Ala Ala Lys Ala Ala Pro Arg Val
            100                 105                 110
gaa acc aag ccg gcc gac aag acc gcc cct aag gcc aag gag tcc tca     384
Glu Thr Lys Pro Ala Asp Lys Thr Ala Pro Lys Ala Lys Glu Ser Ser
        115                 120                 125
gtg cca cag caa cct aag ctt ccg gag cca gga caa acc cca atc agg     432
Val Pro Gln Gln Pro Lys Leu Pro Glu Pro Gly Gln Thr Pro Ile Arg
    130                 135                 140
ggt att ttc aag tcc atc gcg aag aac atg gat atc tcc ctg gaa atc     480
Gly Ile Phe Lys Ser Ile Ala Lys Asn Met Asp Ile Ser Leu Glu Ile
145                 150                 155                 160
cca acc gca acc tcg gtt cgc gat atg cca gct cgc ctc atg ttc gaa     528
Pro Thr Ala Thr Ser Val Arg Asp Met Pro Ala Arg Leu Met Phe Glu
                165                 170                 175
aac cgc gcg atg gtc aac gat cag ctc aag cgc acc cgc ggt ggc aag     576
Asn Arg Ala Met Val Asn Asp Gln Leu Lys Arg Thr Arg Gly Gly Lys
            180                 185                 190
atc tcc ttc acc cac atc att ggc tac gcc atg gtg aag gca gtc atg     624
Ile Ser Phe Thr His Ile Ile Gly Tyr Ala Met Val Lys Ala Val Met
        195                 200                 205
gct cac ccg gac atg aac aac tcc tac gac gtc atc gac ggc aag cca     672
Ala His Pro Asp Met Asn Asn Ser Tyr Asp Val Ile Asp Gly Lys Pro
    210                 215                 220
acc ctg atc gtg cct gag cac atc aac ctg ggc ctt gct atc gac ctt     720
Thr Leu Ile Val Pro Glu His Ile Asn Leu Gly Leu Ala Ile Asp Leu
225                 230                 235                 240
cct cag aag gac ggc tcc cgc gca ctt gtc gta gca gcc atc aag gaa     768
Pro Gln Lys Asp Gly Ser Arg Ala Leu Val Val Ala Ala lle Lys Glu
                245                 250                 255
acc gag aag atg aac ttc tcc gag ttc ctc gca gcc tac gaa gac atc     816
Thr Glu Lys Met Asn Phe Ser Glu Phe Leu Ala Ala Tyr Glu Asp Ile
            260                 265                 270
gtg gca cgc tcc cgc aag ggc aag ctc acc atg gat gac tac cag ggc     864
Val Ala Arg Ser Arg Lys Gly Lys Leu Thr Met Asp Asp Tyr Gln Gly
        275                 280                 285
gtt acc gtt tcc ttg acc aac cca ggt ggc atc ggt acc cgc cac tct     912
Val Thr Val Ser Leu Thr Asn Pro Gly Gly Ile Gly Thr Arg His Ser
    290                 295                 300
gtt cca cgt cta acc aag ggc cag ggc acc atc atc ggt gtc ggt tcc     960
Val Pro Arg Leu Thr Lys Gly Gln Gly Thr Ile Ile Gly Val Gly Ser
305                 310                 315                 320
atg gat tac cca gca gag ttc cag ggc gct tca gaa gac cgc ctt gca    1008
Met Asp Tyr Pro Ala Glu Phe Gln Gly Ala Ser Glu Asp Arg Leu Ala
                325                 330                 335
gag ctc ggc gtt ggc aaa ctt gtc acc atc acc tcc acc tac gat cac    1056
Glu Leu Gly Val Gly Lys Leu Val Thr Ile Thr Ser Thr Tyr Asp His
            340                 345                 350
cgc gtg atc cag ggt gct gtg tcc ggt gaa ttc ctg cgc acc atg tct    1104
Arg Val Ile Gln Gly Ala Val Ser Gly Glu Phe Leu Arg Thr Met Ser
        355                 360                 365
cgc ctg ctc acc gat gat tcc ttc tgg gat gag atc ttc gac gca atg    1152
Arg Leu Leu Thr Asp Asp Ser Phe Trp Asp Glu Ile Phe Asp Ala Met
    370                 375                 380
aac gtt cct tac acc cca atg cgt tgg gca cag gac gtt cca aac acc    1200
Asn Val Pro Tyr Thr Pro Met Arg Trp Ala Gln Asp Val Pro Asn Thr
385                 390                 395                 400
ggt gtt gat aag aac acc cgc gtc atg cag ctc att gag gca tac cgc    1248
Gly Val Asp Lys Asn Thr Arg Val Met Gln Leu Ile Glu Ala Tyr Arg
                405                 410                 415
tcc cgt gga cac ctc atc gct gac acc aac cca ctt tca tgg gtt cag    1296
Ser Arg Gly His Leu Ile Ala Asp Thr Asn Pro Leu Ser Trp Val Gln
            420                 425                  430
cct ggc atg cca gtt cca gac cac cgc gac ctc gac atc gag acc cac    1344
Pro Gly Met Pro Val Pro Asp His Arg Asp Leu Asp Ile Glu Thr His
        435                 440                 445
aac ctg acc atc tgg gat ctg gac cgt acc ttc aac gtc ggt ggc ttc    1392
Asn Leu Thr Ile Trp Asp Leu Asp Arg Thr Phe Asn Val Gly Gly Phe
    450                 455                 460
ggc ggc aag gag acc atg acc ctg cgc gag gta ctg tcc cgc ctc cgc    1440
Gly Gly Lys Glu Thr Met Thr Leu Arg Glu Val Leu Ser Arg Leu Arg
465                 470                 475                 480
gct gcg tac acc ctc aag gtc ggc tcc gaa tac acc cac atc ctg gac    1488
Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Val Gly Ser Glu Tyr Thr His Ile Leu Asp
                485                 490                 495
cgc gac gag cgc acc tgg ctg cag gac cgc ctc gag gcc gga atg cca    1536
Arg Asp Glu Arg Thr Trp Leu Gln Asp Arg Leu Glu Ala Gly Met Pro
            500                 505                 510
aag cca acc cag gca gag cag aag tac atc ctg cag aag ctg aac gcc    1584
Lys Pro Thr Gln Ala Glu Gln Lys Tyr Ile Leu Gln Lys Leu Asn Ala
        515                 520                 525
gcg gag gct ttc gag aac ttc ctg cag acc aag tac gtc ggc cag aag    1632
Ala Glu Ala Phe Glu Asn Phe Leu Gln Thr Lys Tyr Val Gly Gln Lys
    530                 535                 540
cgc ttc tcc ctc gaa ggt gca gaa gca ctt atc cca ctg atg gac tcc    1680
Arg Phe Ser Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Ile Pro Leu Met Asp Ser
545                 550                 555                 560
gcc atc gac acc gcc gca ggc caa ggc ctc gac gaa gtt gtc atc ggt    1728
Ala Ile Asp Thr Ala Ala Gly Gln Gly Leu Asp Glu Val Val Ile Gly
                565                 570                 575
atg cca cac cgt ggt cgc ctc aac gtg ctg ttc aac atc gtg ggc aag    1776
Met Pro His Arg Gly Arg Leu Asn Val Leu Phe Asn Ile Val Gly Lys
            580                 585                 590
cca ctg gca tcc atc ttc aac gag ttt gaa ggc caa atg gag cag ggc   1824
Pro Leu Ala Ser Ile Phe Asn Glu Phe Glu Gly Gln Met Glu Gln Gly
        595                 600                 605
cag atc ggt ggc tcc ggt gac gtg aag tac cac ctc ggt tcc gaa ggc    1872
Gln Ile Gly Gly Ser Gly Asp Val Lys Tyr His Leu Gly Ser Glu Gly
    610                 615                 620
cag cac ctg cag atg ttc ggc gac ggc gag atc aag gtc tcc ctg act    1920
Gln His Leu Gln Met Phe Gly Asp Gly Glu Ile Lys Val Ser Leu Thr
625                 630                 635                 640
gct aac ccg tcc cac ctg gaa gct gtt aac cca gtg atg gaa ggt atc    1968
Ala Asn Pro Ser His Leu Glu Ala Val Asn Pro Val Met Glu Gly Ile
                645                 650                 655
gtc cgc gca aag cag gac tac ctg gac aag ggc gta gac ggc aag act    2016
Val Arg Ala Lys Gln Asp Tyr Leu Asp Lys Gly Val Asp Gly Lys Thr
            660                 665                 670
gtt gtg cca ctg ctg ctc cac ggt gac gct gca ttc gca ggc ctg ggc    2064
Val Val Pro Leu Leu Leu His Gly Asp Ala Ala Phe Ala Gly Leu Gly
        675                 680                 685
atc gtg cca gaa acc atc aac ctg gct aag ctg cgt ggc tac gac gtc    2112
Ile Val Pro Glu Thr Ile Asn Leu Ala Lys Leu Arg Gly Tyr Asp Val
    690                 695                 700
ggc ggc acc atc cac atc gtg gtg aac aac cag atc ggc ttc acc acc    2160
Gly Gly Thr Ile His Ile Val Val Asn Asn Gln Ile Gly Phe Thr Thr
705                 710                 715                 720
acc cca gac tcc agc cgc tcc atg cac tac gca acc gac tac gcc aag    2208
Thr Pro Asp Ser Ser Arg Ser Met His Tyr Ala Thr Asp Tyr Ala Lys
                725                 730                 735
gca ttc ggc tgc cca gtc ttc cac gtc aac ggc gac gac cca gag gca    2256
Ala Phe Gly Cys Pro Val Phe His Val Asn Gly Asp Asp Pro Glu Ala
            740                 745                 750
gtt gtc tgg gtt ggc cag ctg gcc acc gag tac cgt cgt cgc ttc ggc    2304
Val Val Trp Val Gly Gln Leu Ala Thr Glu Tyr Arg Arg Arg Phe Gly
        755                 760                 765
aag gac gtc ttc atc gac ctc gtc tgc tac cgc ctc cgc ggc cac aac    2352
Lys Asp Val Phe Ile Asp Leu Val Cys Tyr Arg Leu Arg Gly His Asn
    770                 775                 780
gaa gct gat gat cct tcc atg acc cag cca aag atg tat gag ctc atc    2400
Glu Ala Asp Asp Pro Ser Met Thr Gln Pro Lys Met Tyr Glu Leu Ile
785                 790                 795                 800
acc ggc cgc gag acc gtt cgt gct cag tac acc gaa gac ctg ctc gga    2448
Thr Gly Arg Glu Thr Val Arg Ala Gln Tyr Thr Glu Asp Leu Leu Gly
                805                 810                 815
cgt gga gac ctc tcc aac gaa gat gca gaa gca gtc gtc cgc gac ttc    2496
Arg Gly Asp Leu Ser Asn Glu Asp Ala Glu Ala Val Val Arg Asp Phe
            820                 825                 830
cac gac cag atg gaa tct gtg ttc aac gaa gtc aag gaa ggc ggc aag    2544
His Asp Gln Met Glu Ser Val Phe Asn Glu Val Lys Glu Gly Gly Lys
        835                 840                 845
aag cag gct gag gca cag acc ggc atc acc ggc tcc cag aag ctt cca    2592
Lys Gln Ala Glu Ala Gln Thr Gly Ile Thr Gly Ser Gln Lys Leu Pro
    850                 855                 860
cac ggc ctt gag acc aac atc tcc cgt gaa gag ctc ctg gaa ctg gga    2640
His Gly Leu Glu Thr Asn Ile Ser Arg Glu Glu Leu Leu Glu Leu Gly
865                 870                 875                 880
cag gct ttc gcc aac acc cca gaa ggc ttc aac tac cac cca cgt gtg    2688
Gln Ala Phe Ala Asn Thr Pro Glu Gly Phe Asn Tyr His Pro Arg Val
                885                 890                 895
gct ccc gtt gct aag aag cgc gtc tcc tct gtc acc gaa ggt ggc atc    2736
Ala Pro Val Ala Lys Lys Arg Val Ser Ser Val Thr Glu Gly Gly Ile
            900                 905                 910
gac tgg gca tgg ggc gag ctc ctc gcc ttc ggt tcc ctg gct aac tcc    2784
Asp Trp Ala Trp Gly Glu Leu Leu Ala Phe Gly Ser Leu Ala Asn Ser
        915                 920                 925
ggc cgc ttg gtt cgc ctt gca ggt gaa gat tcc cgc cgc ggt acc ttc    2832
Gly Arg Leu Val Arg Leu Ala Gly Glu Asp Ser Arg Arg Gly Thr Phe
    930                 935                 940
acc cag cgc cac gca gtt gcc atc gac cca gcg acc gct gaa gag ttc    2880
Thr Gln Arg His Ala Val Ala Ile Asp Pro Ala Thr Ala Glu Glu Phe
945                 950                 955                 960
aac cca ctc cac gag ctt gca cag tcc aag ggc aac aac ggt aag ttc    2928
Asn Pro Leu His Glu Leu Ala Gln Ser Lys Gly Asn Asn Gly Lys Phe
                965                 970                 975
ctg gtc tac aac tcc gca ctg acc gag tac gca ggc atg ggc ttc gag    2976
Leu Val Tyr Asn Ser Ala Leu Thr Glu Tyr Ala Gly Met Gly Phe Glu
            980                 985                 990
tac ggc tac tcc gta gga aac gaa gac tcc atc gtt gca tgg gaa gca    3024
Tyr Gly Tyr Ser Val Gly Asn Glu Asp Ser Ile Val Ala Trp Glu Ala
        995                 1000                1005
cag ttc ggc gac ttc gcc aac ggc gct cag acc atc atc gat gag        3069
Gln Phe Gly Asp Phe Ala Asn Gly Ala Gln Thr Ile Ile Asp Glu
        1010                1015                1020
tac gtc tcc tca ggc gaa gct aag tgg ggc cag acc tcc aag ctg        3114
Tyr Val Ser Ser Gly Glu Ala Lys Trp Gly Gln Thr Ser Lys Leu
        1025                1030                1035
atc ctt ctg ctg cct cac ggc tac gaa ggc cag ggc cca gac cac        3159
Ile Leu Leu Leu Pro His Gly Tyr Glu Gly Gln Gly Pro Asp His
        1040                1045                1050
tct tcc gca cgt atc gag cgc ttc ctg cag ctg tgc gct gag ggt        3204
Ser Ser Ala Arg Ile Glu Arg Phe Leu Gln Leu Cys Ala Glu Gly
        1055                1060                1065
tcc atg act gtt gct cag cca tcc acc cca gca aac cac ttc cac        3249
Ser Met Thr Val Ala Gln Pro Ser Thr Pro Ala Asn His Phe His
        1070                1075                1080
cta ctg cgt cgt cac gct ctg tcc gac ctg aag cgt cca ctg gtt        3294
Leu Leu Arg Arg His Ala Leu Ser Asp Leu Lys Arg Pro Leu Val
        l085                1090                1095
atc ttc acc ccg aag tcc atg ctg cgt aac aag gct gct gcc tcc        3339
Ile Phe Thr Pro Lys Ser Met Leu Arg Asn Lys Ala Ala Ala Ser
        1100                1105                1110
gca cca gaa gac ttc act gag gtc acc aag ttc cag tcc gtg atc        3384
Ala Pro Glu Asp Phe Thr Glu Val Thr Lys Phe Gln Ser Val Ile
        1115                1120                1125
aac gat cca aac gtt gca gat gca gcc aag gtg aag aag gtc atg        3429
Asn Asp Pro Asn Val Ala Asp Ala Ala Lys Val Lys Lys Val Met
        1130                1135                1140
ctg gtc tcc ggc aag ctg tac tac gaa ttg gca aag cgc aag gag        3474
Leu Val Ser Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Leu Ala Lys Arg Lys Glu
        1145                1150                1155
aag gac gga cgc gac gac atc gcg atc gtt cgt atc gaa atg ctc        3519
Lys Asp Gly Arg Asp Asp Ile Ala Ile Val Arg Ile Glu Met Leu
        1160                1165                1170
cac cca att ccg ttc aac cgc atc tcc gag gct ctt gcc ggc tac        3564
His Pro Ile Pro Phe Asn Arg Ile Ser Glu Ala Leu Ala Gly Tyr
        1175                1180                1185
cct aac gct gag gaa gtc ctc ttc gtt cag gat gag cca gca aac        3609
Pro Asn Ala Glu Glu Val Leu Phe Val Gln Asp Glu Pro Ala Asn
        1190                1195                1200
cag ggc cca tgg ccg ttc tac cag gag cac ctc cca gag ctg atc        3654
Gln Gly Pro Trp Pro Phe Tyr Gln Glu His Leu Pro Glu Leu Ile
    1205                1210                1215
ccg aac atg cca aag atg cgc cgc gtt tcc cgc cgc gct cag tcc    3699
Pro Asn Met Pro Lys Met Arg Arg Val Ser Arg Arg Ala Gln Ser
    1220                1225                1230
tcc acc gca act ggt gtt gcc aag gtg cac cag ctg gag gag aag    3744
Ser Thr Ala Thr Gly Val Ala Lys Val His Gln Leu Glu Glu Lys
    1235                1240                1245
cag ctt atc gac gag gct ttc gag gct taa                        3774
Gln Leu Ile Asp Glu Ala Phe Glu Ala
    1250                1255
<210>49
<211>1257
<212>PRT
<213>谷氨酸棒杆菌
<400>49
Met Leu Gln Leu Gly Leu Arg Hi  Asn Gln ProThr Thr Asn Val Thr
1               5                   10                  15
Val Asp Lys Thr Lys Leu Asn Lys Pro Ser Arg Ser Lys Glu Lys Arg
            20                  25                  30
Arg Val Pro Ala Val Ser Ser Ala Ser Thr Phe Gly Gln Asn Ala Trp
        35                  40                  45
Leu Val Asp Glu Met Phe Gln Gln Phe Gln Lys Asp Pro Lys Ser Val
    50                  55                  60
Asp Lys Glu Trp Arg Glu Leu Phe Glu Ala Gln Gly Gly Pro Asn Thr
65                  70                  75                  80
Thr Pro Ala Thr Thr Glu Ala Gln Pro Ser Ala Pro Lys Glu Ser Ala
                85                  90                  95
Lys Pro Ala Pro Lys Ala Ala Pro Ala Ala Lys Ala Ala Pro Arg Val
            100                 105                 110
Glu Thr Lys Pro Ala Asp Lys Thr Ala Pro Lys Ala Lys Glu Ser Ser
        115                 120                 125
Val Pro Gln Gln Pro Lys Leu Pro Glu Pro Gly Gln Thr Pro Ile Arg
    130                 135                 140
Gly Ile Phe Lys Ser Ile Ala Lys Asn Met Asp Ile Ser Leu Glu Ile
145                 150                 155                 160
Pro Thr Ala Thr Ser Val Arg Asp Met Pro Ala Arg Leu Met Phe Glu
                165                 170                 175
Asn Arg Ala Met Val Asn Asp Gln Leu Lys Arg Thr Arg Gly Gly Lys
            180                 185                 190
Ile Ser Phe Thr His Ile Ile Gly Tyr Ala Met Val Lys Ala Val Met
        195                 200                 205
Ala His Pro Asp Met Asn Asn Ser Tyr Asp Val Ile Asp Gly Lys Pro
    210                 215                 220
Thr Leu Ile Val Pro Glu His Ile Asn Leu Gly Leu Ala Ile Asp Leu
225                 230                 235                 240
Pro Gln Lys Asp Gly Ser Arg Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Lys Glu
                245                 250                 255
Thr Glu Lys Met Asn Phe Ser Glu Phe Leu Ala Ala Tyr Glu Asp Ile
            260                 265                 270
Val Ala Arg Ser Arg Lys Gly Lys Leu Thr Met Asp Asp Tyr Gln Gly
        275                 280                 285
Val Thr Val Ser Leu Thr Asn Pro Gly Gly Ile Gly Thr Arg His Ser
    290                 295                 300
Val Pro Arg Leu Thr Lys Gly Gln Gly Thr Ile Ile Gly Val Gly Ser
305                 310                 315                 320
Met Asp Tyr Pro Ala Glu Phe Gln Gly Ala Ser Glu Asp Arg Leu Ala
                325                 330                 335
Glu Leu Gly Val Gly Lys Leu Val Thr Ile Thr Ser Thr Tyr Asp His
            340                 345                 350
Arg Val Ile Gln Gly Ala Val Ser Gly Glu Phe Leu Arg Thr Met Ser
        355                 360                 365
Arg Leu Leu Thr Asp Asp Ser Phe Trp Asp Glu Ile Phe Asp Ala Met
    370                 375                 380
Asn Val Pro Tyr Thr Pro Met Arg Trp Ala Gln Asp Val Pro Asn Thr
385                 390                 395                 400
Gly Val Asp Lys Asn Thr Arg Val Met Gln Leu Ile Glu Ala Tyr Arg
                405                 410                 415
Ser Arg Gly His Leu Ile Ala Asp Thr Asn Pro Leu Ser Trp Val Gln
            420                 425                 430
Pro Gly Met Pro Val Pro Asp His Arg Asp Leu Asp Ile Glu Thr His
        435                 440                 445
Asn Leu Thr Ile Trp Asp Leu Asp Arg Thr Phc Asn Val Gly Gly Phe
    450                 455                 460
Gly Gly Lys Glu Thr Met Thr Leu Arg Glu Val Leu Ser Arg Leu Arg
465                 470                 475                 480
Ala Ala Tyr Thr Leu Lys Val Gly Ser Glu Tyr Thr His Ile Leu Asp
                485                 490                 495
Arg Asp Glu Arg Thr Trp Leu Gln Asp Arg Leu Glu Ala Gly Met Pro
            500                 505                 510
Lys Pro Thr Gln Ala Glu Gln Lys Tyr Ile Leu Gln Lys Leu Asn Ala
        515                 520                 525
Ala Glu Ala Phe Glu Asn Phe Leu Gln Thr Lys Tyr Val Gly Gln Lys
    530                 535                 540
Arg Phe Ser Leu Glu Gly Ala Glu Ala Leu Ile Pro Leu Met Asp Ser
545                 550                 555                 560
Ala lle Asp Thr Ala Ala Gly Gln Gly Leu Asp Glu Val Val Ile Gly
                565                 570                 575
Met Pro His Arg Gly Arg Leu Asn Val Leu Phe Asn Ile Val Gly Lys
            580                 585                 590
Pro Leu Ala Ser Ile Phe Asn Glu Phe Glu Gly Gln Met Glu Gln Gly
        595                 600                 605
Gln Ile Gly Gly Ser Gly Asp Val Lys Tyr His Leu Gly Ser Glu Gly
    610                 615                 620
Gln His Leu Gln Met Phe Gly Asp Gly Glu Ile Lys Val Ser Leu Thr
625                 630                 635                 640
Ala Asn Pro Ser His Leu Glu Ala Val Asn Pro Val Met Glu Gly Ile
                645                 650                 655
Val Arg Ala Lys Gln Asp Tyr Leu Asp Lys Gly Val Asp Gly Lys Thr
            660                 665                 670
Val Val Pro Leu Leu Leu His Gly Asp Ala Ala Phe Ala Gly Leu Gly
        675                 680                 685
Ile Val Pro Glu Thr Ile Asn Leu Ala Lys Leu Arg Gly Tyr Asp Val
    690                 695                 700
Gly Gly Thr Ile His Ile Val Val Asn Asn Gln Ile Gly Phe Thr Thr
705                 710                 715                 720
Thr Pro Asp Ser Ser Arg Ser Met His Tyr Ala Thr Asp Tyr Ala Lys
               725                 730                 735
Ala Phe Gly Cys Pro Val Phe His Val Asn Gly Asp Asp Pro Glu Ala
            740                 745                 750
Val Val Trp Val Gly Gln Leu Ala Thr Glu Tyr Arg Arg Arg Phe Gly
        755                 760                 765
Lys Asp Val Phe Ile Asp Leu Val Cys Tyr Arg Leu Arg Gly His Asn
    770                 775                 780
Glu Ala Asp Asp Pro Ser Met Thr Gln Pro Lys Met Tyr Glu Leu Ile
785                 790                 795                 800
Thr Gly Arg Glu Thr Val Arg Ala Gln Tyr Thr Glu Asp Leu Leu Gly
                805                 810                 815
Arg Gly Asp Leu Ser Asn Glu Asp Ala Glu Ala Val Val Arg Asp Phe
            820                 825                 830
His Asp Gln Met Glu Ser Val Phe Asn Glu Val Lys Glu Gly Gly Lys
        835                 840                 845
Lys Gln Ala Glu Ala Gln Thr Gly Ile Thr Gly Ser Gln Lys Leu Pro
    850                 855                 860
His Gly Leu Glu Thr Asn Ile Ser Arg Glu Glu Leu Leu Glu Leu Gly
865                 870                 875                 880
Gln Ala Phe Ala Asn Thr Pro Glu Gly Phe Asn Tyr His Pro Arg Val
                885                 890                 895
Ala Pro Val Ala Lys Lys Arg Val Ser Ser Val Thr Glu Gly Gly Ile
            900                 905                 910
Asp Trp Ala Trp Gly Glu Leu Leu Ala Phe Gly Ser Leu Ala Asn Ser
        915                 920                 925
Gly Arg Leu Val Arg Leu Ala Gly Glu Asp Ser Arg Arg Gly Thr Phe
    930                 935                 940
Thr Gln Arg His Ala Val Ala Ile Asp Pro Ala Thr Ala Glu Glu Phe
945                 950                 955                 960
Asn Pro Leu His Glu Leu Ala Gln Ser Lys Gly Asn Asn Gly Lys Phe
                965                 970                 975
Leu Val Tyr Asn Ser Ala Leu Thr Glu Tyr Ala Gly Met Gly Phe Glu
            980                 985                 990
Tyr Gly Tyr Ser Val Gly Asn Glu Asp Ser Ile Val Ala Trp Glu Ala
        995                 1000                1005
Gln Phe Gly Asp Phe Ala Asn Gly Ala Gln Thr Ile Ile Asp Glu
        1010                1015                1020
Tyr Val Ser Ser Gly Glu Ala Lys Trp Gly Gln Thr Ser Lys Leu
        1025                1030                1035
Ile Leu Leu Leu Pro His Gly Tyr Glu Gly Gln Gly Pro Asp His
        1040                1045                1050
Ser Ser Ala Arg Ile Glu Arg Phe Leu Gln Leu Cys Ala Glu Gly
        1055                1060                1065
Ser Met Thr Val Ala Gln Pro Ser Thr Pro Ala Asn His Phe His
        1070                1075                1080
Leu Leu Arg Arg His Ala Leu Ser Asp Leu Lys Arg Pro Leu Val
        1085                1090                1095
Ile Phe Thr Pro Lys Ser Met Leu Arg Asn Lys Ala Ala Ala Ser
        1100                1105                1110
Ala Pro Glu Asp Phe Thr Glu Val Thr Lys Phe Gln Ser Val Ile
        1115                1120                1125
Asn Asp Pro Asn Val Ala Asp Ala Ala Lys Val Lys Lys Val Met
        1130                1135                1140
Leu Val Ser Gly Lys Leu Tyr Tyr Glu Leu Ala Lys Arg Lys Glu
        1145                1150                1155
Lys Asp Gly Arg Asp Asp Ile Ala Ile Val Arg Ile Glu Met Leu
        1160                1165                1170
His Pro Ile Pro Phe Asn Arg Ile Ser Glu Ala Leu Ala Gly Tyr
        1175                1180                1185
Pro Asn Ala Glu Glu Val Leu Phe Val Gln Asp Glu Pro Ala Asn
        1190                1195                1200
Gln Gly Pro Trp Pro Phe Tyr Gln Glu His Leu Pro Glu Leu Ile
        1205                1210                1215
Pro Asn Met Pro Lys Met Arg Arg Val Ser Arg Arg Ala Gln Ser
        1220                1225                1230
Ser Thr Ala Thr Gly Val Ala Lys Val His Gln Leu Glu Glu Lys
    1235                1240                1245
Gln Leu Ile Asp Glu Ala Phe Glu Ala
1255
<210>50
<211>30
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk50
<400>50
acccgcaatt ttcgcagcct tagaacacct                                30
<210>51
<211>49
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk51
<400>51
ctgttgataa aagcccgaaa aactaattaa acccatcaca acacccgcg           49
<210>52
<211>32
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk52
<400>52
agcttctgca gaatctcaaa cgcacgctta cc                             32
<210>53
<211>49
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk53
<400>53
 cgcgggtgtt gtgatgggtt taattagttt ttcgggcttt tatcaacag          49
<210>54
<211>40
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk54
<400>54
gcaaggatcc agggcaaggg gttctagaaa gaccaacgga                      40
<210>55
<211>44
<212>DNA
<213>人工DNA
<220>
<223>引物pfk55
<400>55
ttctggatcc tctcaaacgc acgcttaccg atctcttgta cgtg                   44
<210>56
<211>1041
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1041)
<223>pfk*1
<400>56
atg gaa gac atg cga att gct act ctc acg tca ggc ggc gac tgc ccc    48
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
gga cta aat gcc gtc atc cga gga atc gtc cgc aca gcc agc aat gaa    96
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
ttt ggc tcc acc gtc gtt ggt tat caa gac ggt tgg gaa gga ctg tta   144
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
gcc gat cgt cgc gta cag ctg tat gac gat gaa gat att gac cga atc   192
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
ctc ctt cga ggc ggc acc att ttg ggc act ggt cgc ctc cat ccg gac   240
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
aag ttt aag gcc gga att gat cag att aag gcc aac tta gaa gac gcc   288
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
ggc atc gat gcc ctt atc cca atc ggt ggc gaa gga acc ctg aag ggt   336
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
gcc aag tgg ctg tct gat aac ggt atc cct gtt gtc ggt gtc cca aag   384
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
acc att gac aat gac gtg aat ggc act gac ttc acc ttc ggt ttc gat   432
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
act gct gtg gca gtg gct acc gac gct gtt gac cgc ctg cac acc acc   480
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
gct gaa tct cac aac cgt gtg atg atc gtg aag gtc atg ggc cgc cac     528
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Lys Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
gtg ggt tgg att gct ctg cac gca ggt atg gcg ggc ggt gct cac tac     576
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
acc gtt att cca gaa gta cct ttc gat att gca gag atc tgc aag gcg     624
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
atg gaa cgt cgc ttc cag atg ggc gag aag tac ggc att atc gtc gtt     672
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
gcg gaa ggt gcg ttg cca cgc gaa ggc acc atg gag ctt cgt gaa ggc     720
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
cac att gac cag ttc ggt cac aag acc ttc acg gga att gga cag cag     768
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
atc gct gat gag atc cac gtg cgc ctc ggc cac gat gtt cgt acg acc     816
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
gtt ctt ggc cac att caa cgt ggt gga acc cca act gct ttc gac cgt     864
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
gtt ctg gcc act cgt tat ggt gtt cgt gca gct cgt gcg tgc cat gag     912
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
gga agc ttt gac aag gtt gtt gct ttg aag ggt gag agc att gag atg     960
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
tc acc ttt gaa gaa gcc gtc gga acc ttg aag gaa gtc cca ttc gaa     1008
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
cgc tgg gtt act gcc cag gca atg ttt gga tag                        1041
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
            340                 345
<210>57
<211>346
<212>PRT
<213>谷氨酸棒杆菌
<400>57
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Lys Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
            340                 345
<210>58
<211>1041
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1041)
<223>pfk*2
<400>58
atg gaa gac atg cga att gct act ctc acg tca ggc ggc gac tgc ccc     48
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
gga cta aat gcc gtc atc cga gga ate gtc cgc aca gcc agc aat gaa     96
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
ttt ggc tcc acc gtc gtt ggt tat caa gac ggt tgg gaa gga ctg tta    144
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
gcc gat cgt cgc gta cag ctg tat gac gat gaa gat att gac cga atc    192
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
ctc ctt cga ggc ggc acc att ttg ggc act ggt cgc ctc cat ccg gac    240
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
aag ttt aag gcc gga att gat cag att aag gcc aac tta gaa gac gcc    288
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
ggc atc gat gcc ctt atc cca atc ggt ggc gaa gga acc ctg aag ggt     336
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
gcc aag tgg ctg tct gat aac ggt atc cct gtt gtc ggt gtc cca aag     384
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
acc att gac aat gac gtg aat ggc act gac ttc acc ttc ggt ttc gat     432
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
act gct gtg gca gtg gct acc gac gct gtt gac cgc ctg cac acc acc     480
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
gct gaa tct cac aac cgt gtg atg atc gtg agg gtc atg ggc cgc cac     528
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Arg Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
gtg ggt tgg att gct ctg cac gca ggt atg gcg ggc ggt gct cac tac     576
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
acc gtt att cca gaa gta cct ttc gat att gca gag atc tgc aag gcg     624
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
atg gaa cgt cgc ttc cag atg ggc gag aag tac ggc att atc gtc gtt     672
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
gcg gaa ggt gcg ttg cca cgc gaa ggc acc atg gag ctt cgt gaa ggc     720
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
cac att gac cag ttc ggt cac aag acc ttc acg gga att gga cag cag     768
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
atc gct gat gag atc cac gtg cgc ctc ggc cac gat gtt cgt acg acc     816
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
gtt ctt ggc cac att caa cgt ggt gga acc cca act gct ttc gac cgt     864
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
gtt ctg gcc act cgt tat ggt gtt cgt gca gct cgt gcg tgc cat gag     912
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
gga agc ttt gac aag gtt gtt gct ttg aag ggt gag agc att gag atg     960
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
atc acc ttt gaa gaa gcc gtc gga acc ttg aag gaa gtc cca ttc gaa    1008
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
cgc tgg gtt act gcc cag gca atg ttt gga tag                        1041
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
            340                 345
<210>59
<211>346
<212>PRT
<213>谷氨酸棒杆菌
<400>59
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Arg Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
            340                 345
<210>60
<211>1041
<212>DNA
<213>谷氨酸棒杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(1041)
<223>pfk
<400>60
atg gaa gac atg cga att gct act ctc acg tca ggc ggc gac tgc ccc   48
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
gga cta aat gcc gtc atc cga gga atc gtc cgc aca gcc agc aat gaa      96
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
ttt ggc tcc acc gtc gtt ggt tat caa gac ggt tgg gaa gga ctg tta     144
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
gcc gat cgt cgc gta cag ctg tat gac gat gaa gat att gac cga atc     192
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
ctc ctt cga ggc ggc acc att ttg ggc act ggt cgc ctc cat ccg gac     240
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
aag ttt aag gcc gga att gat cag att aag gcc aac tta gaa gac gcc     288
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
ggc atc gat gcc ctt atc cca atc ggt ggc gaa gga acc ctg aag ggt     336
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
gcc aag tgg ctg tct gat aac ggt atc cct gtt gtc ggt gtc cca aag     384
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
acc att gac aat gac gtg aat ggc act gac ttc acc ttc ggt ttc gat     432
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
act gct gtg gca gtg gct acc gac gct gtt gac cgc ctg cac acc acc     480
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
gct gaa tct cac aac cgt gtg atg atc gtg gag gtc atg ggc cgc cac     528
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Glu Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
gtg ggt tgg att gct ctg cac gca ggt atg gcg ggc ggt gct cac tac     576
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
acc gtt att cca gaa gta cct ttc gat att gca gag atc tgc aag gcg     624
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
atg gaa cgt cgc ttc cag atg ggc gag aag tac ggc att atc gtc gtt     672
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
gcg gaa ggt gcg ttg cca cgc gaa ggc acc atg gag ctt cgt gaa ggc     720
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
cac att gac cag ttc ggt cac aag acc ttc acg gga att gga cag cag     768
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
atc gct gat gag atc cac gtg cgc ctc ggc cac gat gtt cgt acg acc     816
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
gtt ctt ggc cac att caa cgt ggt gga acc cca act gct ttc gac cgt     864
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
gtt ctg gcc act cgt tat ggt gtt cgt gca gct cgt gcg tgc cat gag     912
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
gga agc ttt gac aag gtt gtt gct ttg aag ggt gag agc att gag atg     960
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
atc acc ttt gaa gaa gcc gtc gga acc ttg aag gaa gtc cca ttc gaa    1008
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
cgc tgg gtt act gcc cag gca atg ttt gga tag                        1041
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
            340                 345
<210>61
<211>346
<212>PRT
<213>谷氨酸棒杆菌
<400>61
Met Glu Asp Met Arg Ile Ala Thr Leu Thr Ser Gly Gly Asp Cys Pro
1               5                   10                  15
Gly Leu Asn Ala Val Ile Arg Gly Ile Val Arg Thr Ala Ser Asn Glu
            20                  25                  30
Phe Gly Ser Thr Val Val Gly Tyr Gln Asp Gly Trp Glu Gly Leu Leu
        35                  40                  45
Ala Asp Arg Arg Val Gln Leu Tyr Asp Asp Glu Asp Ile Asp Arg Ile
    50                  55                  60
Leu Leu Arg Gly Gly Thr Ile Leu Gly Thr Gly Arg Leu His Pro Asp
65                  70                  75                  80
Lys Phe Lys Ala Gly Ile Asp Gln Ile Lys Ala Asn Leu Glu Asp Ala
                85                  90                  95
Gly Ile Asp Ala Leu Ile Pro Ile Gly Gly Glu Gly Thr Leu Lys Gly
            100                 105                 110
Ala Lys Trp Leu Ser Asp Asn Gly Ile Pro Val Val Gly Val Pro Lys
        115                 120                 125
Thr Ile Asp Asn Asp Val Asn Gly Thr Asp Phe Thr Phe Gly Phe Asp
    130                 135                 140
Thr Ala Val Ala Val Ala Thr Asp Ala Val Asp Arg Leu His Thr Thr
145                 150                 155                 160
Ala Glu Ser His Asn Arg Val Met Ile Val Glu Val Met Gly Arg His
                165                 170                 175
Val Gly Trp Ile Ala Leu His Ala Gly Met Ala Gly Gly Ala His Tyr
            180                 185                 190
Thr Val Ile Pro Glu Val Pro Phe Asp Ile Ala Glu Ile Cys Lys Ala
        195                 200                 205
Met Glu Arg Arg Phe Gln Met Gly Glu Lys Tyr Gly Ile Ile Val Val
    210                 215                 220
Ala Glu Gly Ala Leu Pro Arg Glu Gly Thr Met Glu Leu Arg Glu Gly
225                 230                 235                 240
His Ile Asp Gln Phe Gly His Lys Thr Phe Thr Gly Ile Gly Gln Gln
                245                 250                 255
Ile Ala Asp Glu Ile His Val Arg Leu Gly His Asp Val Arg Thr Thr
            260                 265                 270
Val Leu Gly His Ile Gln Arg Gly Gly Thr Pro Thr Ala Phe Asp Arg
        275                 280                 285
Val Leu Ala Thr Arg Tyr Gly Val Arg Ala Ala Arg Ala Cys His Glu
    290                 295                 300
Gly Ser Phe Asp Lys Val Val Ala Leu Lys Gly Glu Ser Ile Glu Met
305                 310                 315                 320
Ile Thr Phe Glu Glu Ala Val Gly Thr Leu Lys Glu Val Pro Phe Glu
                325                 330                 335
Arg Trp Val Thr Ala Gln Ala Met Phe Gly
345
<210>62
<211>2412
<212>DNA
<213>植物乳杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2412)
<223>xpk
<400>50
ttg caa agg agt tgc aaa ata atg agt gaa gca att aaa tcc aaa aca      48
Leu Gln Arg Ser Cys Lys Ile Met Ser Glu Ala Ile Lys Ser Lys Thr
1               5                   10                  15
gtt gat tac tct tct gat gaa tat cta aaa cgc gtt gat gaa tat tgg      96
Val Asp Tyr Ser Ser Asp Glu Tyr Leu Lys Arg Val Asp Glu Tyr Trp
            20                  25                  30
cgt gct gct aac tac atc tca gtt ggt caa ctc tat cta cta aat aac     144
Arg Ala Ala Asn Tyr Ile Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Leu Asn Asn
        35                  40                  45
ccg tta ctt cgg gaa cca cta aag gcg acc gac gtg aaa gtt cat cca     192
Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Lys Ala Thr Asp Val Lys Val His Pro
    50                  55                  60
atc ggc cat tgg ggc acg att gct ggt caa aac ttt att tat gcc cat     240
Tle Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr Ala His
65                  70                  75                  80
tta aac cgg gca atc aat aag tat ggc ttg aac atg ttc tac att gaa     288
Leu Asn Arg Ala Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Asn Met Phe Tyr Ile Glu
                85                  90                  95
ggc cct ggt cat ggt ggt caa gta atg gtt tct aac tcc tac tta gat     336
Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr Leu Asp
            100                 105                 110
ggc acc tat acg gaa acg tat cct aaa atc acc caa gac aaa gct ggg     384
Gly Thr Tyr Thr Glu Thr Tyr Pro Lys Ile Thr Gln Asp Lys Ala Gly
        115                 120                 125
atg aaa cgc tta ttc aag caa ttc tca ttc cca ggc ggg gtt gct tcc     432
Met Lys Arg Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val Ala Ser
    130                 135                 140
cat gcc gat cot aag acg cct ggt tcg atc cat gaa ggt ggc gaa ctt     480
His Ala Asp Pro Lys Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu
145                 150                 155                 160
ggc tac tca atc ctg cat ggt gct ggt gca gta tta gat aat cca ggt     528
Gly Tyr Ser Ile Leu His Gly Ala Gly Ala Val Leu Asp Asn Pro Gly
                165                 170                 175
tta att gcc gct acc gtt gtt ggt gat ggt gaa tct gaa act ggg cca     576
Leu Ile Ala Ala Thr Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr Gly Pro
            180                 185                 190
ttg gca act tct tgg caa gtt aac aag ttc ctt aac cca att aca gac     624
Leu Ala Thr Ser Trp Gln Val Asn Lys Phe Leu Asn Pro Ile Thr Asp
        195                 200                 205
ggg aca gtc ttg cca atc ttg aac tta aac ggc ttc aag att tct aat     672
Gly Thr Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile Ser Asn
    210                 215                 220
cca aca gtt ctt tca cgt gaa tca cat gaa gaa ctt gaa gac tac ttt     720
Pro Thr Val Leu Ser Arg Glu Ser His Glu Glu Leu Glu Asp Tyr Phe
225                 230                 235                 240
aaa ggt cta ggc tgg gat cca cac ttt gtt gaa ggt aca gac cct gcc     768
Lys Gly Leu Gly Trp Asp Pro His Phe Val Glu Gly Thr Asp Pro Ala
                245                 250                 255
aag atg cac aaa att atg gct gaa gaa ttg gat aaa gtc att gaa gaa     816
Lys Met His Lys Ile Met Ala Glu Glu Leu Asp Lys Val Ile Glu Glu
            260                 265                 270
atc cac gca att cgt aag aac gcc aag gat aac aat gat gaa tct cgt     864
Ile His Ala Ile Arg Lys Asn Ala Lys Asp Asn Asn Asp Glu Ser Arg
        275                 280                 285
cct aag tgg cca atg att gtt ttc cgg gca cct aag ggc tgg acc ggt     912
Pro Lys Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp Thr Gly
    290                 295                 300
cct aag agt tgg gac ggc gaa cca att gaa ggt tca ttc cgg gct cac     960
Pro Lys Ser Trp Asp Gly Glu Pro Ile Glu Gly Ser Phe Arg Ala His
305                 310                 315                 320
caa att cca att cct gtc gat cgc aat cac atg gaa cac gcc gac aaa    1008
Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Arg Asn His Met Glu His Ala Asp Lys
                325                 330                 335
tta gtt gac tgg ctc aaa tca tac aaa cca gaa gaa tta ttt gat gaa    1056
Leu Val Asp Trp Leu Lys Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Glu
            340                 345                 350
aat ggt act tta aaa cca gaa att gcc gca atc atc cct gaa ggc caa    1104
Asn Gly Thr Leu Lys Pro Glu Ile Ala Ala Ile Ile Pro Glu Gly Gln
        355                 360                 365
gct cgt atg gct gct aac ccc gtt act aac ggc ggt aag tta act aaa    1152
Ala Arg Met Ala Ala Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Lys Leu Thr Lys
    370                 375                 380
gac tta att aca cca aat atc gat gat tat gct ttg gac aac aag agt    1200
Asp Leu Ile Thr Pro Asn Ile Asp Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Lys Ser
385                 390                 395                 400
cac ggt aag gaa gac ggt tca gac atg act gaa ctt ggt aag tat atc    1248
His Gly Lys Glu Asp Gly Ser Asp Met Thr Glu Leu Gly Lys Tyr Ile
                405                 410                 415
cgt gat tta att gag ttg aac aaa gac aac aag aac ttc cgt ggc tgg    1296
Arg Asp Leu Ile Glu Leu Asn Lys Asp Asn Lys Asn Phe Arg Gly Trp
            420                 425                 430
ggt cct gac gaa acc tta tct aac aaa cta ggc gct gct ttt gaa gat    1344
Gly Pro Asp Glu Thr Leu Ser Asn Lys Leu Gly Ala Ala Phe Glu Asp
        435                 440                 445
acc aaa cgt cag tgg atg gaa cca atc cac gaa cct aat gat gct ttg    1392
Thr Lys Arg Gln Trp Met Glu Pro Ile His Glu Pro Asn Asp Ala Leu
    450                 455                 460
tta gca cct caa ggc cgg att att gac tcc atg ttg tca gaa cac atg    1440
Leu Ala Pro Gln Gly Arg Ile Ile Asp Ser Met Leu Ser Glu His Met
465                 470                 475                 480
gat gaa ggg atg ttg gaa gct tac aat tta acc gga cgt tac ggt ttc    1488
Asp Glu Gly Met Leu Glu Ala Tyr Asn Leu Thr Gly Arg Tyr Gly Phe
                485                 490                 495
ttc gca agt tat gaa tca ttc ctg cgc gtt gtg gat tca atg tta acc    1536
Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
            500                 505                 510
caa cac ttc aag tgg tta cgg aat tct cac gaa gaa acc cct tgg cgg    1584
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Asn Ser His Glu Glu Thr Pro Trp Arg
        515                 520                 525
gct gat gta cct tca ctg aat gtg att gca tca tca aca gcc ttc caa    1632
Ala Asp Val Pro Ser Leu Asn Val Ile Ala Ser Ser Thr Ala Phe Gln
    530                 535                 540
caa gat cac aat ggt tac tct cac caa gat cca ggt atc att tca cac    1680
Gln Asp His Asn Gly Tyr Ser His Gln Asp Pro Gly Ile Ile Ser His
545                 550                 555                 560
ttg gct gaa aag aag acc gaa tac gtt cgt gcc tat ctt cca ggt gat    1728
Leu Ala Glu Lys Lys Thr Glu Tyr Val Arg Ala Tyr Leu Pro Gly Asp
                565                 570                 575
gcc aat act ttg att gca acc ttt gat aag gct atc caa agc aaa caa    1776
Ala Asn Thr Leu Ile Ala Thr Phe Asp Lys Ala Ile Gln Ser Lys Gln
            580                 585                 590
ttg att aat tta atc att gcc agc aag cac cct cgt cca caa tgg ttc    1824
Leu Ile Ash Leu Ile Ile Ala Ser Lys His Pro Arg Pro Gln Trp Phe
        595                 600                 605
aca atg gac gaa gct aag cgc tta gtt cgt gat ggc ctt ggt gtt gtt    1872
Thr Met Asp Glu Ala Lys Arg Leu Val Arg Asp Gly Leu Gly Val Val
    610                 615                 620
gat tgg gca agc act gat cat ggt gaa gaa ccc gac gtt gtc ttc gca    1920
Asp Trp Ala Ser Thr Asp His Gly Glu Glu Pro Asp Val Val Phe Ala
625                 630                 635                 640
act gcc ggc tct gaa cca acg act gaa agc tta gct gcc gta tca atc    1968
Thr Ala Gly Ser Glu Pro Thr Thr Glu Ser Leu Ala Ala Val Ser Ile
                645                 650                 655
ttg cat gca cgc ttc cct gaa atg aag att cgc ttc att aac gtt gtt    2016
Leu His Ala Arg Phe Pro Glu Met Lys Ile Arg Phe Ile Asn Val Val
            660                 665                 670
gat ctt ctg aag ctg aag aaa gac gac cct cgt ggt tta tca gat gct    2064
Asp Leu Leu Lys Leu Lys Lys Asp Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp Ala
        675                 680                 685
gaa ttt gat gct ttc ttc act aag gac aaa cca gtt atc ttt gct tat    2112
Glu Phe Asp Ala Phe Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Ile Phe Ala Tyr
    690                 695                 700
cat gca tac gac gac tta gta aag acc atc ttc ttc gat cgc cat aac    2160
His Ala Tyr Asp Asp Leu Val Lys Thr Ile Phe Phe Asp Arg his Asn
705                 710                 715                 720
cat aac tta cac gtt cat ggt tac cgc gaa gaa ggc gac att aca acg    2208
His Asn Leu His Val His Gly Tyr Arg Glu Glu Gly Asp Ile Thr Thr
                725                 730                 735
cca ttc gac atg cgt gtt cgc aac gaa ctc gat cgt ttc cac tta gtc    2256
Pro Phe Asp Met Arg Val Arg Asn Glu Leu Asp Arg Phe His Leu Val
            740                745                 750
aaa gct gcc tta tta gca acg cca gct tat gcc gaa aaa ggt gcc cat    2304
Lys Ala Ala Leu Leu Ala Thr Pro Ala Tyr Ala Glu Lys Gly Ala His
        755                 760                 765
gtc att caa gag atg aac agc att tta gac aag cat cat gac tat atc    2352
Val Ile Gln Glu Met Asn Ser Ile Leu Asp Lys His His Asp Tyr Ile
    770                 775                 780
cgt gct gaa ggt acc gat att cca gaa gtt gaa aac tgg aaa tgg act    2400
Arg Ala Glu Gly Thr Asp Ile Pro Glu Val Glu Asn Trp Lys Trp Thr
785                 790                 795                 800
gca ttg aag tag                                                    2412
Ala Leu Lys
<210>63
<211>803
<212>PRT
<213>植物乳杆菌
<400>63
Leu Gln Arg Ser Cys Lys Ile Met Ser Glu Ala Ile Lys Ser Lys Thr
1               5                   10                  15
Val Asp Tyr Ser Ser Asp Glu Tyr Leu Lys Arg Val Asp Glu Tyr Trp
            20                  25                  30
Arg Ala Ala Asn Tyr Ile Ser Val Gly Gln Leu Tyr Leu Leu Asn Asn
        35                  40                  45
Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Lys Ala Thr Asp Val Lys Val His Pro
    50                  55                  60
Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Gly Gln Asn Phe Ile Tyr Ala His
65                  70                  75                  80
Leu Asn Arg Ala Ile Asn Lys Tyr Gly Leu Asn Met Phe Tyr Ile Glu
                85                  90                  95
Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr Leu Asp
            100                 105                 110
Gly Thr Tyr Thr Glu Thr Tyr Pro Lys Ile Thr Gln Asp Lys Ala Gly
        115                 120                 125
Met Lys Arg Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val Ala Ser
    130                 135                 140
His Ala Asp Pro Lys Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu
145                 150                 155                 160
Gly Tyr Ser Ile Leu His Gly Ala Gly Ala Val Leu Asp Asn Pro Gly
                165                 170                 175
Leu Ile Ala Ala Thr Val Val Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr Gly Pro
            180                 185                 190
Leu Ala Thr Ser Trp Gln Val Asn Lys Phe Leu Asn Pro Ile Thr Asp
        195                 200                 205
Gly Thr Val Leu Pro Ile Leu Asn Leu Asn Gly Phe Lys Ile Ser Asn
    210                 215                 220
Pro Thr Val Leu Ser Arg Glu Ser His Glu Glu Leu Glu Asp Tyr Phe
225                 230                 235                 240
Lys Gly Leu Gly Trp Asp Pro His Phe Val Glu Gly Thr Asp Pro Ala
                245                 250                 255
Lys Met His Lys Ile Met Ala Glu Glu Leu Asp Lys Val Ile Glu Glu
            260                 265                 270
Ile His Ala Ile Arg Lys Asn Ala Lys Asp Asn Asn Asp Glu Ser Arg
        275                 280                 285
Pro Lys Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ala Pro Lys Gly Trp Thr Gly
    290                 295                 300
Pro Lys Ser Trp Asp Gly Glu Pro Ile Glu Gly Ser Phe Arg Ala His
305                 310                 315                 320
Gln Ile Pro Ile Pro Val Asp Arg Asn His Met Glu His Ala Asp Lys
                325                 330                 335
Leu Val Asp Trp Leu Lys Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Glu
            340                 345                 350
Asn Gly Thr Leu Lys Pro Glu Ile Ala Ala Ile Ile Pro Glu Gly Gln
        355                 360                 365
Ala Arg Met Ala Ala Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Lys Leu Thr Lys
    370                 375                 380
Asp Leu Ile Thr Pro Asn Ile Asp Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Lys Ser
385                 390                 395                 400
His Gly Lys Glu Asp Gly Ser Asp Met Thr Glu Leu Gly Lys Tyr Ile
                405                 410                 415
Arg Asp Leu Ile Glu Leu Asn Lys Asp Asn Lys Asn Phe Arg Gly Trp
            420                 425                 430
Gly Pro Asp Glu Thr Leu Ser Asn Lys Leu Gly Ala Ala Phe Glu Asp
        435                 440                 445
Thr Lys Arg Gln Trp Met Glu Pro Ile His Glu Pro Asn Asp Ala Leu
    450                 455                 460
Leu Ala Pro Gln Gly Arg Ile Ile Asp Ser Met Leu Ser Glu His Met
465                 470                 475                 480
Asp Glu Gly Met Leu Glu Ala Tyr Asn Leu Thr Gly Arg Tyr Gly Phe
                485                 490                 495
Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr
            500                 505                 510
Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Asn Ser His Glu Glu Thr Pro Trp Arg
        515                 520                 525
Ala Asp Val Pro Ser Leu Asn Val Ile Ala Ser Ser Thr Ala Phe Gln
    530                 535                 540
Gln Asp His Asn Gly Tyr Ser His Gln Asp Pro Gly Ile Ile Ser His
545                 550                 555                 560
Leu Ala Glu Lys Lys Thr Glu Tyr Val Arg Ala Tyr Leu Pro Gly Asp
            565                 570                 575
Ala Asn Thr Leu Ile Ala Thr Phe Asp Lys Ala Ile Gln Ser Lys Gln
            580                 585                 590
Leu Ile Asn Leu Ile Ile Ala Ser Lys His Pro Arg Pro Gln Trp Phe
        595                 600                 605
Thr Met Asp Glu Ala Lys Arg Leu Val Arg Asp Gly Leu Gly Val Val
    610                 615                 620
Asp Trp Ala Ser Thr Asp His Gly Glu Glu Pro Asp Val Val Phe Ala
625                 630                 635                 640
Thr Ala Gly Ser Glu Pro Thr Thr Glu Ser Leu Ala Ala Val Ser Ile
                645                 650                 655
Leu His Ala Arg Phe Pro Glu Met Lys Ile Arg Phe Ile Asn Val Val
            660                 665                 670
Asp Leu Leu Lys Leu Lys Lys Asp Asp Pro Arg Gly Leu Ser Asp Ala
        675                 680                 685
Glu Phe Asp Ala Phe Phe Thr Lys Asp Lys Pro Val Ile Phe Ala Tyr
    690                 695                 700
His Ala Tyr Asp Asp Leu Val Lys Thr Ile Phe Phe Asp Arg His Asn
705                 710                 715                 720
His Asn Leu His Val His Gly Tyr Arg Glu Glu Gly Asp Ile Thr Thr
                725                 730                 735
Pro Phe Asp Met Arg Val Arg Asn Glu Leu Asp Arg Phe His Leu Val
            740                 745                 750
Lys Ala Ala Leu Leu Ala Thr Pro Ala Tyr Ala Glu Lys Gly Ala His
        755                 760                 765
Val Ile Gln Glu Met Asn Ser Ile Leu Asp Lys His His Asp Tyr Ile
    770                 775                 780
Arg Ala Glu Gly Thr Asp Ile Pro Glu Val Glu Asn Trp Lys Trp Thr
785                 790                 795                 800
Ala Leu Lys
<210>64
<211>2379
<212>DNA
<213>无乳链球菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2379)
<223>xpk
<400>64
atg tca gaa ttt gat aca aaa tca tat tta gaa aaa ctt gat gca tgg    48
Met Ser Glu Phe Asp Thr Lys Ser Tyr Leu Glu Lys Leu Asp Ala Trp
1               5                   10                  15
tgg aga gca gct aat tat att tct gca gca caa atg tat cta aag gat    96
Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Ile Ser Ala Ala Gln Met Tyr Leu Lys Asp
            20                  25                  30
aat cct ctc ttg aga cga gag cta gtt gaa aac gac tta aag gtt cat     144
Asn Pro Leu Leu Arg Arg Glu Leu Val Glu Asn Asp Leu Lys Val His
        35                  40                  45
cca att ggt cac tgg ggc act gta cct gga caa aac ttt atc tat gct     192
Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Val Pro Gly Gln Asn Phe Ile Tyr Ala
    50                  55                  60
cac tta aat cgc gct att aat aaa tac gat tta gac atg ttc tat att     240
His Leu Asn Arg Ala Ile Asn Lys Tyr Asp Leu Asp Met Phe Tyr Ile
65                  70                  75                  80
gaa ggt cca ggt cat ggt ggt caa gtt atg gta tct aat tca tat tta     288
Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr Leu
                85                  90                  95
gat ggt tca tat act gaa tta aac cca aat att gag caa aca gag gat     336
Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Leu Asn Pro Asn Ile Glu Gln Thr Glu Asp
            100                 l05                 110
ggc ttt aag cag tta tgt aaa atc ttc tct ttc cca ggt gga att gca     384
Gly Phe Lys Gln Leu Cys Lys Ile Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Ala
        115                 120                 125
tcc cat gca gca cca gaa aca cca ggg tca att cat gaa ggt ggt gaa     432
Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu
    130                 135                 140
ctt ggt tac gca ctt tct cat gcg aca ggt gcc atc cta gac aat cca     480
Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Ala Thr Gly Ala Ile Leu Asp Asn Pro
145                 150                 155                 160
gat gtt att gct gcg act gtt att ggt gat ggt gaa ggt gaa aca gga     528
Asp Val Ile Ala Ala Thr Val Ile Gly Asp Gly Glu Gly Glu Thr Gly
                165                 170                 175
cca ctt atg gct ggt tgg cta tct aat acc ttt atc aat cca gta aat     576
Pro Leu Met Ala Gly Trp Leu Ser Asn Thr Phe Ile Asn Pro Val Asn
            180                 185                 190
gat ggt gct gtt cta cca atc ttc tat tta aat ggt ggt aaa atc cat     624
Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Phe Tyr Leu Asn Gly Gly Lys Ile His
        195                 200                 205
aac cca act atc ttt gaa cgt aag aca gat gaa gaa tta tct cag ttt     672
Asn Pro Thr Ile Phe Glu Arg Lys Thr Asp Glu Glu Leu Ser Gln Phe
    210                 215                 220
ttt gaa gga tta ggt tgg aaa cct att ttt gca gat gtt gtt gaa ctc     720
Phe Glu Gly Leu Gly Trp Lys Pro Ile Phe Ala Asp Val Val Glu Leu
225                 230                 235                 240
tct gag gat cat gcg gct gct cat gct ttg ttt gca gaa aaa tta gat     768
Ser Glu Asp His Ala Ala Ala His Ala Leu Phe Ala Glu Lys Leu Asp
                245                 250                 255
caa gct att caa gag att aaa acc att caa tca gaa gca cga caa aaa     816
Gln Ala Ile Gln Glu Ile Lys Thr Ile Gln Ser Glu Ala Arg Gln Lys
            260                 265                 270
cca gca gaa gaa gct atc caa gca aaa ttc cct gtc ttg gtt gca cgt     864
Pro Ala Glu Glu Ala Ile Gln Ala Lys Phe Pro Val Leu Val Ala Arg
        275                 280                 285
att cct aag ggg tgg act ggt cca aaa gct tgg gaa gga aca cca att     912
Ile Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Ala Trp Glu Gly Thr Pro Ile
    290                 295                 300
gaa ggt ggc ttc cgc gct cac caa gta cca att cca gta gat gcc cac     960
Glu Gly Gly Phe Arg Ala His Gln Val Pro Ile Pro Val Asp Ala His
305                 310                 315                 320
cat atg gaa cat gtc gat tct ctt ttg tca tgg ctt caa tca tac cgt    1008
His Met Glu His Val Asp Ser Leu Leu Ser Trp Leu Gln Ser Tyr Arg
                325                 330                 335
cca gaa gaa tta ttt gat gaa agt ggt aaa atc gtt gat gag att gct    1056
Pro Glu Glu Leu Phe Asp Glu Ser Gly Lys Ile Val Asp Glu Ile Ala
            340                 345                 350
gct att tca cca aaa ggt gat cgt cgc atg tcc atg aat cca ata acc    1104
Ala Ile Ser Pro Lys Gly Asp Arg Arg Met Ser Met Asn Pro Ile Thr
        355                 360                 365
aat gct ggt att gtt aaa gca atg gat aca gca gat tgg aag aaa ttt    1152
Asn Ala Gly Ile Val Lys Ala Met Asp Thr Ala Asp Trp Lys Lys Phe
    370                 375                 380
gct ctt gat att aat gtt cca ggt caa att atg gca caa gat atg att    1200
Ala Leu Asp Ile Asn Val Pro Gly Gln Ile Met Ala Gln Asp Met Ile
385                 390                 395                 400
gaa ttt gga aaa tat gca gca gat ttg gta gat gct aat cca gat aat    1248
Glu Phe Gly Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Val Asp Ala Asn Pro Asp Asn
                405                 410                 415
ttc cgt att ttt ggt cca gat gaa acg aaa tca aat cgt ctt caa gaa    1296
Phe Arg Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Lys Ser Asn Arg Leu Gln Glu
            420                 425                 430
gtg ttt aca cgt act agc cgt caa tgg ctt ggt cgt cgt aaa cca gat    1344
Val Phe Thr Arg Thr Ser Arg Gln Trp Leu Gly Arg Arg Lys Pro Asp
        435                 440                 445
tat gac gaa gct tta agt cca gct gga cgt gtt att gat tcc caa ttg    1392
Tyr Asp Glu Ala Leu Ser Pro Ala Gly Arg Val Ile Asp Ser Gln Leu
    450                 455                 460
tct gaa cat caa gca gaa ggt ttc tta gaa ggt tat gtt tta act ggt    1440
Ser Glu His Gln Ala Glu Gly Phe Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly
465                 470                 475                 480
cgt cac ggc ttc ttt gct tca tac gaa tca ttc ctt cgc gtt gta gat    1488
Arg His Gly Phe Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu Arg Val Val Asp
                485                 490                 495
tca atg gta aca caa cat ttc aaa tgg tta cgt aaa tca aaa aca cac    1536
Ser Met Val Thr Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ser Lys Thr His
            500                 505                 510
aca aca tgg cgt aaa aat tat cca gcg ctt aac tta att gca gct tca    1584
Thr Thr Trp Arg Lys Asn Tyr Pro Ala Leu Asn Leu Ile Ala Ala Ser
        515                 520                 525
act gtt ttc caa caa gat cat aat ggt tac act cac caa gat cca ggt    1632
Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly
    530                 535                 540
atc tta act cac tta gct gaa aaa aca cct gaa tac att cgt gaa tat    1680
Ile Leu Thr His Leu Ala Glu Lys Thr Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr
545                 550                 555                 560
tta cca gca gat act aac tca ctt cta gct gtt atg gat aaa gcg ttt    1728
Leu Pro Ala Asp Thr Asn Ser Leu Leu Ala Val Met Asp Lys Ala Phe
                565                 570                 575
aaa gct gaa gat aaa att aat tta att gtg aca tct aag cac cct cgt    1776
Lys Ala Glu Asp Lys Ile Asn Leu Ile Val Thr Ser Lys His Pro Arg
            580                 585                 590
cca caa ttt tac tct att gct gaa gca gaa gag tta gtg gca gaa gga    1824
Pro Gln Phe Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Gly
        595                 600                 605
tat aag gtg att gac tgg gct tca aat gtg tcg ctt aat caa gag cca    1872
Tyr Lys Val Ile Asp Trp Ala Ser Asn Val Ser Leu Asn Gln Glu Pro
    610                 615                 620
gat gtt gtc ttt gct gcg gcg gga aca gaa cct aac tta gaa gct ttg    1920
Asp Val Val Phe Ala Ala Ala Gly Thr Glu Pro Asn Leu Glu Ala Leu
625                 630                 635                 640
gca gct att agt att ctt cat aag gct ttc cca gaa ctt aag att aga    1968
Ala Ala Ile Ser Ile Leu His Lys Ala Phe Pro Glu Leu Lys Ile Arg
                645                 650                 655
ttt gtt aat gta tta gac atc cta aaa ctt cgt cat cct tca caa gat    2016
Phe Val Asn Val Leu Asp Ile Leu Lys Leu Arg His Pro Ser Gln Asp
            660                 665                 670
gct cgc ggt tta tca gat gaa gag ttt gac aaa gtc ttt acc aca gat    2064
Ala Arg Gly Leu Ser Asp Glu Glu Phe Asp Lys Val Phe Thr Thr Asp
        675                 680                 685
aaa cct gtt att ttt get ttc cat agt tat gaa gat atg att cga gat    2112
Lys Pro Val Ile Phe Ala Phe His Ser Tyr Glu Asp Met Ile Arg Asp
    690                 695                 700
att ttc ttt agt cgt cac aat cat aat ttg cat acg cat ggt tac cgt    2160
Ile Phe Phe Ser Arg His Asn His Asn Leu His Thr His Gly Tyr Arg
705                 710                 715                 720
gaa aat ggt gat atc aca aca cca ttt gat atg cgc gtg atg tca gaa    2208
Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe Asp Met Arg Val Met Ser Glu
                725                 730                 735
ttg gac cga ttc cat ctg gca cag gat gca gct ctt gct tct tta gga    2256
Leu Asp Arg Phe His Leu Ala Gln Asp Ala Ala Leu Ala Ser Leu Gly
            740                 745                 750
aat gaa gca caa gcc ttc agt gat gaa atg aat caa atg gtt gct tat    2304
Asn Glu Ala Gln Ala Phe Set Asp Glu Met Asn Gln Met Val Ala Tyr
        755                 760                 765
cac aaa gac tat att cgt gaa cac gga gac gat att cca gaa gtg caa    2352
His Lys Asp Tyr Ile Arg Glu His Gly Asp Asp Ile Pro Glu Val Gln
    770                 775                 780
aat tgg aaa tgg gaa aat atc aag tag                                2379
Asn Trp Lys Trp Glu Asn Ile Lys
785                 790
<210>65
<211>792
<212>PRT
<213>无乳链球菌
<400>65
Met Ser Glu Phe Asp Thr Lys Ser Tyr Leu Glu Lys Leu Asp Ala Trp
1               5                   10                  15
Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Ile Ser Ala Ala Gln MetTyr Leu Lys Asp
            20                  25                  30
Asn Pro Leu Leu Arg Arg Glu Leu Val Glu Asn Asp Leu Lys Val His
        35                  40                  45
Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Val Pro Gly Gln Asn Phe Ile Tyr Ala
    50                  55                  60
His Leu Asn Arg Ala Ile Asn Lys Tyr Asp Leu Asp Met Phe Tyr Ile
65                  70                  75                  80
Glu Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr Leu
                85                  90                  95
Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Leu Asn Pro Asn Ile Glu Gln Thr Glu Asp
            100                 105                 110
Gly Phe Lys Gln Leu Cys Lys Ile Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Ala
        115                 120                 125
Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu
    130                 135                 140
Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Ala Thr Gly Ala Ile Leu Asp Asn Pro
145                 150                 155                 160
Asp Val Ile Ala Ala Thr Val Ile Gly Asp Gly Glu Gly Glu Thr Gly
                165                 170                 175
Pro Leu Met Ala Gly Trp Leu Ser Asn Thr Phe Ile Asn Pro Val Asn
            180                 185                 190
Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Phe Tyr Leu Asn Gly Gly Lys Ile His
        195                 200                 205
Asn Pro Thr Ile Phe Glu Arg Lys Thr Asp Glu Glu Leu Ser Gln Phe
    210                 215                 220
Phe Glu Gly Leu Gly Trp Lys Pro Ile Phe Ala Asp Val Val Glu Leu
225                 230                 235                 240
Ser Glu Asp His Ala Ala Ala His Ala Leu Phe Ala Glu Lys Leu Asp
                245                 250                 255
Gln Ala Ile Gln Glu Ile Lys Thr Ile Gln Ser Glu Ala Arg Gln Lys
             260                 265                 270
Pro Ala Glu Glu Ala Ile Gln Ala Lys Phe Pro Val Leu Val Ala Arg
        275                 280                 285
Ile Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Ala Trp Glu Gly Thr Pro Ile
    290                 295                 300
Glu Gly Gly Phe Arg Ala His Gln Val Pro Ile Pro Val Asp Ala His
305                 310                 315                 320
His Met Glu His Val Asp Ser Leu Leu Ser Trp Leu Gln Ser Tyr Arg
                325                 330                 335
Pro Glu Glu Leu Phe Asp Glu Ser Gly Lys Ile Val Asp Glu Ile Ala
            340                 345                 350
Ala Ile Ser Pro Lys Gly Asp Arg Arg Met Ser Met Asn Pro Ile Thr
        355                 360                 365
Asn Ala Gly Ile Val Lys Ala Met Asp Thr Ala Asp Trp Lys Lys Phe
    370                 375                 380
Ala Leu Asp Ile Asn Val Pro Gly Gln Ile Met Ala Gln Asp Met Ile
385                 390                 395                 400
Glu Phc Gly Lys Tyr Ala Ala Asp Leu Val Asp Ala Asn Pro Asp Asn
                405                 410                 415
Phe Arg Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Lys Ser Asn Arg Leu Gln Glu
            420                 425                 430
Val Phe Thr Arg Thr Ser Arg Gln Trp Leu Gly Arg Arg Lys Pro Asp
        435                 440                 445
Tyr Asp Glu Ala Leu Ser Pro Ala Gly Arg Val Ile Asp Ser Gln Leu
    450                 455                 460
Ser Glu His Gln Ala Glu Gly Phe Leu Glu Gly Tyr Val Leu Thr Gly
465                 470                 475                 480
Arg His Gly Phe Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu Arg Val Val Asp
                485                 490                 495
Ser Met Val Thr Gln His Phe Lys Trp Leu Arg Lys Ser Lys Thr His
            500                 505                 510
Thr Thr Trp Arg Lys Asn Tyr Pro Ala Leu Asn Leu Ile Ala Ala Ser
        515                 520                 525
Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln Asp Pro Gly
    530                 535                 540
Ile Leu Thr His Leu Ala Glu Lys Thr Pro Glu Tyr Ile Arg Glu Tyr
545                 550                 555                 560
Leu Pro Ala Asp Thr Asn Ser Leu Leu Ala Val Met Asp Lys Ala Phe
                565                 570                 575
Lys Ala Glu Asp Lys Ile Asn Leu Ile Val Thr Ser Lys His Pro Arg
            580                 585                 590
Pro Gln Phe Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Gly
        595                 600                 605
Tyr Lys Val Ile Asp Trp Ala Ser Asn Val Ser Leu Asn Gln Glu Pro
    610                 615                 620
Asp Val Val Phe Ala Ala Ala Gly Thr Glu Pro Asn Leu Glu Ala Leu
625                 630                 635                 640
Ala Ala Ile Ser Ile Leu His Lys Ala Phe Pro Glu Leu Lys Ile Arg
                645                 650                 655
Phe Val Ash Val Leu Asp Ile Leu Lys Leu Arg His Pro Ser Gln Asp
            660                 665                 670
Ala Arg Gly Leu Ser Asp Glu Glu Phe Asp Lys Val Phe Thr Thr Asp
        675                 680                 685
Lys Pro Val Ile Phe Ala Phc His Ser Tyr Glu Asp Met Ile Arg Asp
    690                 695                 700
Ile Phe Phe Ser Arg His Asn His Asn Leu His Thr His Gly Tyr Arg
705                 710                 715                 720
Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe Asp Met Arg Val Met Ser Glu
                725                 730                 735
Leu Asp Arg Phe His Leu Ala Gln Asp Ala Ala Leu Ala Ser Leu Gly
            740                 745                 750
Asn Glu Ala Gln Ala Phe Ser Asp Glu Met Asn Gln Met Val Ala Tyr
        755                 760                 765
His Lys Asp Tyr Ile Arg Glu His Gly Asp Asp Ile Pro Glu Val Gln
    770                 775                 780
Asn Trp Lys Trp Glu Asn Ile Lys
785                 790
<210>66
<211>2469
<212>DNA
<213>乳酸乳球菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2469)
<223>xpk
<400>66
atg aca gaa tat aat tca gaa gct tat ttg aaa aag ctt gat aaa tgg     48
Met Thr Glu Tyr Asn Ser Glu Ala Tyr Leu Lys Lys Leu Asp Lys Trp
1               5                   10                  15
tgg cga gca gca act tat ctt gga gca gga atg atc ttc ttg aaa gaa     96
Trp Arg Ala Ala Thr Tyr Leu Gly Ala Gly Met Ile Phe Leu Lys Glu
            20                  25                  30
aat cca ttg ttc tct gtg aca ggt act cca att aaa gcg gaa aac ctt    144
Asn Pro Leu Phe Ser Val Thr Gly Thr Pro Ile Lys Ala Glu Asn Leu
        35                  40                  45
aaa gcc aat cct att ggg cac tgg ggg acg gtt tca gga caa act ttc    192
Lys Ala Asn Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Val Ser Gly Gln Thr Phe
    50                  55                  60
ctc tat gct cat gct aat cgt cta atc aat aaa tat gat caa aag atg    240
Leu Tyr Ala His Ala Asn Arg Leu Ile Asn Lys Tyr Asp Gln Lys Met
65                  70                  75                  80
ttt tac atg ggt ggc ccc gga cat ggt gga caa gct atg gtt gtt cct    255
Phe Tyr Met Gly Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Ala Met Val Val Pro
                85                  90                  95
tct tat ctt gat ggc tca tat aca gaa gct tat cca gag att acc caa    336
Ser Tyr Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Ala Tyr Pro Glu Ile Thr Gln
            100                 105                 110
gat ttg gaa gga atg tca cgt ttg ttt aaa cgt ttc tca ttt cct gga    384
Asp Leu Glu Gly Met Ser Arg Leu Phe Lys Arg Phe Ser Phe Pro Gly
        115                 120                 125
gga ata ggg tcg cat atg aca gca caa acc cct ggt tca ctt cat gaa    432
Gly Ile Gly Ser His Met Thr Ala Gln Thr Pro Gly Ser Leu His Glu
    130                 135                 140
gga ggt gag ttg ggt tat gtg cta tca cat gca aca ggg gct att ctt     480
Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Val Leu Ser His Ala Thr Gly Ala Ile Leu
145                 150                 155                 160
gat caa cct gaa cag att gct ttt gct gtt gtt ggg gat gga gaa gct     528
Asp Gln Pro Glu Gln Ile Ala Phe Ala Val Val Gly Asp Gly Glu Ala
                165                 170                 175
gaa act gga ccg ttg atg aca agt tgg cac tct att aaa ttc att aat     576
Glu Thr Gly Pro Leu Met Thr Ser Trp His Ser Ile Lys Phe Ile Asn
            180                 185                 190
cct aag aat gat ggg gcg att tta cca att ctt gat tta aat ggt ttt     624
Pro Lys Asn Asp Gly Ala Ile Leu Pro Ile Leu Asp Leu Asn Gly Phe
        195                 200                 205
aaa att tca aat cct act ttg ttc gct cga act tca gat gtt gat att     672
Lys Ile Ser Asn Pro Thr Leu Phe Ala Arg Thr Ser Asp Val Asp Ile
    210                 215                 220
cgt aaa ttc ttt gaa gga ctg ggt tac tca cct cgt tat att gaa aat     720
Arg Lys Phe Phe Glu Gly Leu Gly Tyr Ser Pro Arg Tyr Ile Glu Asn
225                 230                 235                 240
gat gat att cat gat tac atg gct tat cat aaa tta gca gct gaa gtt     768
Asp Asp Ile His Asp Tyr Met Ala Tyr His Lys Leu Ala Ala Glu Val
                245                 250                 255
ttt gat aaa gcg att gaa gac att cat caa att cag aaa gat gcg cgt     816
Phe Asp Lys Ala Ile Glu Asp Ile His Gln Ile Gln Lys Asp Ala Arg
            260                 265                 270
gaa gat aat cgt tat caa aat gga gag att cca gct tgg cca att gtt     864
Glu Asp Asn Arg Tyr Gln Asn Gly Glu Ile Pro Ala Trp Pro Ile Val
        275                 280                 285
atc gca cgt tta cca aaa ggt tgg ggt ggt cca cgt tat aat gat tgg     912
Ile Ala Arg Leu Pro Lys Gly Trp Gly Gly Pro Arg Tyr Asn Asp Trp
    290                 295                 300
tca ggt cct aaa ttt gac ggt aag gga atg cca att gaa cat agt ttc     960
Ser Gly Pro Lys Phe Asp Gly Lys Gly Met Pro Ile Glu His Ser Phe
305                 310                 315                 320
cgt gcg cat caa gtt cca ctt ccg tta tct tct aaa aat atg gga act    1008
Arg Ala His Gln Val Pro Leu Pro Leu Ser Ser Lys Asn Met Gly Thr
                325                 330                 335
tta cca gaa ttt gta aaa tgg atg act tct tac caa cca gaa act tta    1056
Leu Pro Glu Phe Val Lys Trp Met Thr Ser Tyr Gln Pro Glu Thr Leu
            340                 345                 350
ttt aat gct gat gga agt ttg aaa gaa gag ttg cgt gat ttt gca cca    1104
Phe Asn Ala Asp Gly Ser Leu Lys Glu Glu Leu Arg Asp Phe Ala Pro
        355                 360                 365
aaa ggt gag atg cga atg gct tca aac cct gta aca aat ggg gga gtt    1152
Lys Gly Glu Met Arg Met Ala Ser Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Val
    370                 375                 380
gat tct tct aat ttg gtt tta cca gat tgg caa gaa ttt gca aat cca    1200
Asp Ser Ser Asn Leu Val Leu Pro Asp Trp Gln Glu Phe Ala Asn Pro
385                 390                 395                 400
att  tctgaa aat aat cga ggg aaa tta ctc cct gat aca aat gac aat    1248
Ile Ser Glu Asn Asn Arg Gly Lys Leu Leu Pro Asp Thr Asn Asp Asn
                405                 410                 415
atg gat atg aat gtt ttg tca aaa tat ttt gct gaa ata gtc aaa ctt    1296
Met Asp Met Asn Val Leu Ser Lys Tyr Phe Ala Glu Ile Val Lys Leu
            420                 425                 430
aat cct acg cgt ttc cgt ttg ttt ggt cct gat gaa acc atg tct aat    1344
Asn Pro Thr Arg Phe Arg Leu Phe Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn
        435                 440                 445
cgt ttt tgg gaa atg ttt aag gtg acg aat cgt cag tgg atg caa gtc    1392
Arg Phe Trp Glu Met Phe Lys Val Thr Asn Arg Gln Trp Met Gln Val
    450                 455                 460
ata aaa aat cca aat gat gaa ttt atc tca cct gag ggt cgc att att    1440
Ile Lys Asn Pro Asn Asp Glu Phe Ile Ser Pro Glu Gly Arg Ile Ile
465                 470                 475                 480
gat tct caa tta tca gaa cac caa gca gaa ggt tgg ctt gaa ggt tat    1488
Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr
                485                 490                 495
act tta acc gga cgc aca gga gca ttt gca agt tat gaa tca ttc ttg    1536
Thr Leu Thr Gly Arg Thr Gly Ala Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu
            500                 505                 510
cga gtc gta gat tca atg tta act caa cat ttc aaa tgg att cgt caa    1584
Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Phe Lys Trp Ile Arg Gln
        515                 520                 525
gct gca gac caa aaa tgg cgc cat gat tat cct tcg ctt aat gtt att    1632
Ala Ala Asp Gln Lys Trp Arg His Asp Tyr Pro Ser Leu Asn Val Ile
    530                 535                 540
tcg acc tca acc gtt ttc caa caa gac cat aat ggt tat act cac caa    1680
Ser Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln
545                 550                 555                 560
gat cct gga atg ttg act cat ttg gct gaa aag aaa tct gat ttt atc    1728
Asp Pro Gly Met Leu Thr His Leu Ala Glu Lys Lys Ser Asp Phe Ile
                565                 570                 575
aga caa tac ttg ccg gct gat ggg aat act ttg ctt gcc gta ttt gac    1776
Arg Gln Tyr Leu Pro Ala Asp Gly Asn Thr Leu Leu Ala Val Phe Asp
            580                 585                 590
cgt gct ttt caa gat aga agt aaa att aat cat att gta gcc tct aaa    1824
Arg Ala Phe Gln Asp Arg Ser Lys Ile Asn His Ile Val Ala Ser Lys
        595                 600                 605
caa cct cgt caa caa tgg ttt act aaa gaa gaa gct gaa aaa ttg gcg    1872
Gln Pro Arg Gln Gln Trp Phe Thr Lys Glu Glu Ala Glu Lys Leu Ala
    610                 615                 620
act gac gga att gca aca att gat tgg gct tca acg gct aaa gat gga    1920
Thr Asp Gly Ile Ala Thr Ile Asp Trp Ala Ser Thr Ala Lys Asp Gly
625                 630                 635                 640
gaa gca gta gat tta gtt ttt gcc tca gca gga gct gag cct aca att    1968
Glu Ala Val Asp Leu Val Phe Ala Ser Ala Gly Ala Glu Pro Thr Ile
                645                 650                 655
gaa aca ctg gca gct tta cat ctt gta aac gaa gtt ttc cca cag gca    2016
Glu Thr Leu Ala Ala Leu His Leu Val Asn Glu Val Phe Pro Gln Ala
            660                 665                 670
aaa ttc cgt tat gtg aac gtg gtt gaa ttg ggt cgg ttg caa aag aaa    2064
Lys Phe Arg Tyr Val Asn Val Val Glu Leu Gly Arg Leu Gln Lys Lys
        675                 680                 685
aag gga gca ctc aat caa gaa cgt gaa ctc tca gat gaa gaa ttt gaa    2112
Lys Gly Ala Leu Asn Gln Glu Arg Glu Leu Ser Asp Glu Glu Phe Glu
    690                 695                 700
aaa tac ttt ggc cct tca ggc act cca gta att ttt gga ttc cat gga    2160
Lys Tyr Phe Gly Pro Ser Gly Thr Pro Val Ile Phe Gly Phe His Gly
705                 710                 715                 720
tat gaa gat tta atc gaa tcc att ttc tat caa aga gga cat gat ggt    2208
Tyr Glu Asp Leu Ile Glu Ser Ile Phe Tyr Gln Arg Gly His Asp Gly
                725                 730                 735
ttg att gtt cat ggt tac cgt gaa gat ggt gac atc acg acg act tat    2256
Leu Ile Val His Gly Tyr Arg Glu Asp Gly Asp Ile Thr Thr Thr Tyr
            740                 745                 750
gat atg cgg gtt tac tct gag ctt gac cgt ttc cac caa gcg att gat    2304
Asp Met Arg Val Tyr Ser Glu Leu Asp Arg Phe His Gln Ala Ile Asp
        755                 760                 765
gcc atg caa gtt cta tat gtc aac cga aaa gtt aat caa ggt cta gcg    2352
Ala Met Gln Val Leu Tyr Val Asn Arg Lys Val Asn Gln Gly Leu Ala
    770                 775                 780
aaa gct ttc att gac cga atg aaa cgg aca cta gtt aaa cac ttt gaa    2400
Lys Ala Phe Ile Asp Arg Met Lys Arg Thr Leu Val Lys His Phe Glu
785                 790                 795                 800
gtg aca aga aat gaa gga gtt gat att cct gat ttt act gaa tgg gtt    2448
Val Thr Arg Asn Glu Gly Val Asp Ile Pro Asp Phe Thr Glu Trp Val
                805                 810                 815
tgg tcg gat tta aag aaa tag                                        2469
Trp Ser Asp Leu Lys Lys
            820
<210>67
<211>822
<212>PRT
<213>乳酸乳球菌
<400>67
Met Thr Glu Tyr Asn Ser Glu Ala Tyr Leu Lys Lys Leu Asp Lys Trp
1               5                   10                  15
Trp Arg Ala Ala Thr Tyr Leu Gly Ala Gly Met Ile Phe Leu Lys Glu
            20                  25                  30
Asn Pro Leu Phe Ser Val Thr Gly Thr Pro Ile Lys Ala Glu Asn Leu
        35                  40                  45
Lys Ala Asn Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Val Ser Gly Gln Thr Phe
    50                  55                  60
Leu Tyr Ala His Ala Asn Arg Leu Ile Asn Lys Tyr Asp Gln Lys Met
65                  70                  75                  80
Phe Tyr Met Gly Gly Pro Gly His Gly Gly Gln Ala Met Val Val Pro
                85                  90                  95
Ser Tyr Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Ala Tyr Pro Glu Ile Thr Gln
            100                 105                 110
Asp Leu Glu Gly Met Ser Arg Leu Phe Lys Arg Phe Ser Phe Pro Gly
        115                 120                 125
Gly Ile Gly Ser His Met Thr Ala Gln Thr Pro Gly Ser Leu His Glu
    130                 135                 140
Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Val Leu Ser His Ala Thr Gly Ala Ile Leu
145                 150                 155                 160
Asp Gln Pro Glu Gln Ile Ala Phe Ala Val Val Gly Asp Gly Glu Ala
                165                 170                 175
Glu Thr Gly Pro Leu Met Thr Ser Trp His Ser Ile Lys Phe Ile Asn
            180                 185                 190
Pro Lys Asn Asp Gly Ala Ile Leu Pro Ile Leu Asp Leu Asn Gly Phe
        195                 200                 205
Lys Ile Ser Asn Pro Thr Leu Phe Ala Arg Thr Ser Asp Val Asp Ile
    210                 215                 220
Arg Lys Phe Phe Glu Gly Leu Gly Tyr Ser Pro Arg Tyr Ile Glu Asn
225                 230                 235                 240
Asp Asp Ile His Asp Tyr Met Ala Tyr His Lys Leu Ala Ala Glu Val
                245                 250                 255
Phe Asp Lys Ala Ile Glu Asp Ile His Gln Ile Gln Lys Asp Ala Arg
            260                 265                 270
Glu Asp Asn Arg Tyr Gln Asn Gly Glu Ile Pro Ala Trp Pro Ile Val
        275                 280                 285
Ile Ala Arg Leu Pro Lys Gly Trp Gly Gly Pro Arg Tyr Asn Asp Trp
    290                 295                 300
Ser Gly Pro Lys Phe Asp Gly Lys Gly Met Pro Ile Glu His Ser Phe
305                 310                 315                 320
Arg Ala His Gln Val Pro Leu Pro Leu Ser Ser Lys Asn Met Gly Thr
                325                 330                 335
Leu Pro Glu Phe Val Lys Trp Met Thr Ser Tyr Gln Pro Glu Thr Leu
            340                 345                 350
Phe Asn Ala Asp Gly Ser Leu Lys Glu Glu Leu Arg Asp Phe Ala Pro
        355                 360                 365
Lys Gly Glu Met Arg Met Ala Ser Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Val
    370                 375                 380
Asp Ser  Ser Asn Leu Val Leu Pro Asp Trp Gln Glu Phe Ala Asn Pro
385                 390                 395                 400
Ile Ser Glu Asn Asn Arg Gly Lys Leu Leu Pro Asp Thr Asn Asp Asn
                405                 410                 415
Met Asp Met Asn Val Leu Ser Lys Tyr Phe Ala Glu Ile Val Lys Leu
            420                 425                 430
Asn Pro Thr Arg Phe Arg Leu Phe Gly Pro Asp Glu Thr Met Ser Asn
        435                 440                 445
Arg Phe Trp Glu Met Phe Lys Val Thr Asn Arg Gln Trp Met Gln Val
      450                 455                 460
Ile Lys Asn Pro Asn Asp Glu Phe Ile Ser Pro Glu Gly Arg Ile Ile
465                 470                 475                 480
Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Ala Glu Gly Trp Leu Glu Gly Tyr
                485                 490                 495
Thr Leu Thr Gly Arg Thr Gly Ala Phe Ala Ser Tyr Glu Ser Phe Leu
            500                 505                 510
Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Phe Lys Trp Ile Arg Gln
        515                 520                 525
Ala Ala Asp Gln Lys Trp Arg His Asp Tyr Pro Ser Leu Asn Val Ile
    530                 535                 540
Ser Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr His Gln
545                 550                 555                 560
Asp Pro Gly Met Leu Thr His Leu Ala Glu Lys Lys Ser Asp Phe Ile
                565                 570                 575
Arg Gln Tyr Leu Pro Ala Asp Gly Asn Thr Leu Leu Ala Val Phe Asp
            580                 585                 590
Arg Ala Phe Gln Asp Arg Ser Lys Ile Asn His Ile Val Ala Ser Lys
        595                 600                 605
Gln Pro Arg Gln Gln Trp Phe Thr Lys Glu Glu Ala Glu Lys Leu Ala
    610                 615                 620
Thr Asp Gly Ile Ala Thr Ile Asp Trp Ala Ser Thr Ala Lys Asp Gly
625                 630                 635                 640
Glu Ala Val Asp Leu Val Phe Ala Ser Ala Gly Ala Glu Pro Thr Ile
                645                 650                 655
Glu Thr Leu Ala Ala Leu His Leu Val Asn Glu Val Phe Pro Gln Ala
            660                 665                 670
Lys Phe Arg Tyr Val Asn Val Val Glu Leu Gly Arg Leu Gln Lys Lys
        675                 680                 685
Lys Gly Ala Leu Asn Gln Glu Arg Glu Leu Ser Asp Glu Glu Phe Glu
    690                 695                 700
Lys Tyr Phe Gly Pro Ser Gly Thr Pro Val Ile Phe Gly Phe His Gly
705                 710                 715                 720
Tyr Glu Asp Leu Ile Glu Ser Ile Phe Tyr Gln Arg Gly His Asp Gly
                725                 730                 735
Leu Ile Val His Gly Tyr Arg Glu Asp Gly Asp Ile Thr Thr Thr Tyr
            740                 745                 750
Asp Met Arg Val Tyr Ser Glu Leu Asp Arg Phe His Gln Ala Ile Asp
        755                 760                 765
Ala Met Gln Val Leu Tyr Val Asn Arg Lys Val Asn Gln Gly Leu Ala
    770                 775                 780
Lys Ala Phe Ile Asp Arg Met Lys Arg Thr Leu Val Lys His Phe Glu
785                 790                 795                 800
Val Thr Arg Asn Glu Gly Val Asp Ile Pro Asp Phe Thr Glu Trp Val
                805                 810                 815
Trp Ser Asp Leu Lys Lys
            820
<210>68
<211>2406
<212>DNA
<213>约氏乳杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2406)
<223>xpk
<400>68
atg gca gta aat tac gat tct caa gaa tac tta aag agt gtt gac gca     48
Met Ala Val Asn Tyr Asp Ser Gln Glu Tyr Leu Lys Ser Val Asp Ala
1               5                   10                  15
tac tgg cgt gca get aac tac tta tca gtg gga caa tta ttt tta atg     96
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Phe Leu Met
            20                  25                  30
aat aat cct tta ctt aaa aga gaa tta aag gca gaa gat gta aaa cct    144
Asn Asn Pro Leu Leu Lys Arg Glu Leu Lys Ala Glu Asp Val Lys Pro
        35                  40                  45
aag cca att ggt cac tgg ggt aca att gtg ccg caa aac ttt att tat    192
Lys Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Val Pro Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
gga cat tta aat cgt gca att aag aaa tat gat tta aac atg ttc tac    240
Gly His Leu Asn Arg Ala Ile Lys Lys Tyr Asp Leu Asn Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
att gaa ggt tct ggt cac ggt ggt caa gta atg gta tcg aac tca tat    288
Ile Glu Gly Ser Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
tta gat ggt tct tat act gaa cgc tac cca gaa att act caa gat gaa    336
Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Arg Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Glu
            100                 105                 110
aag gga atg gct aag tta ttt aag caa ttt agt ttt cca ggt gga gtt    384
Lys Gly Met Ala Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
gcg tct cat gct gct cca gaa act cct gga tca atc cat gaa ggt gga    432
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
gaa tta ggc tac tca cta tct cat ggt gtt ggt gca att tta gac aat    480
Glu Leu Gly Tyr Ser Leu Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
cca gat gta att gct gca gtt gaa att ggt gac ggt gaa tca gag act    528
Pro Asp Val Ile Ala Ala Val Glu Ile Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                 175
ggt cca ctt get act tct tgg ttt tca agt aag ttc att aat cca att    576
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Phe Ser Ser Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
aaa gat ggt gca gtt att cct atc ttg caa atc aat ggc ttt aag att     624
Lys Asp Gly Ala Val Ile Pro Ile Leu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
tct aac cca act atc gtt tct aga atg agt gac gaa gac tta act aag     672
Ser Asn Pro Thr Ile Val Ser Arg Met Ser Asp Glu Asp Leu Thr Lys
    210                 215                 220
tac ttt gaa gga atg ggt tgg aag cca tac ttt gtt tct gca tat aaa     720
Tyr Phe Glu Gly Met Gly Trp Lys Pro Tyr Phe Val Ser Ala Tyr Lys
225                 230                 235                 240
gac ggt gaa ttt aat ggg tat aaa gac cac atg gaa gtt cac caa gaa     768
Asp Gly Glu Phe Asn Gly Tyr Lys Asp His Met Glu Val His Gln Glu
                245                 250                 255
atg gca aag aca atg gac gaa gtt gtt gaa gaa att aaa gct att caa     816
Met Ala Lys Thr Met Asp Glu Val Val Glu Glu Ile Lys Ala Ile Gln
            260                 265                 270
aag cat gcg cgt gaa aac aat gat gat tcc tta gtg aag tgg cca atg     864
Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Asp Ser Leu Val Lys Trp Pro Met
        275                 280                 285
att gtc ttt aga gta cct aag ggt tgg acg ggt cca aaa ttt gat cta     912
Ile Val Phe Arg Val Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Phe Asp Leu
    290                 295                 300
gat ggc aat cca att gaa aat agt ttc cgt gct cac caa att cca att     960
Asp Gly Asn Pro Ile Glu Asn Ser Phe Arg Ala His Gln Ile Pro Ile
305                 310                 315                 320
cct gtt gct caa gat gac atg aat cat aaa gaa atg ctt act gat tgg    1008
Pro Val Ala Gln Asp Asp Met Asn His Lys Glu Met Leu Thr Asp Trp
                325                 330                 335
atg gaa agt tat aag cca gaa gaa tta ttc aat gaa gat ggc tca cca    1056
Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asn Glu Asp Gly Ser Pro
            340                 345                 350
aaa gat atc gtt aaa gaa aat acc tta tca ggc gac caa aga atg gct    1104
Lys Asp Ile Val Lys Glu Asn Thr Leu Ser Gly Asp Gln Arg Met Ala
        355                 360                 365
atg aat cca gta act aat ggt ggg att gat cca aaa gtc tta aat atg    1152
Met Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Ile Asp Pro Lys Val Leu Asn Met
    370                 375                 380
cct gac tat cgc gac ttt gca att aaa ttt gat aag cct gga tct gtt    1200
Pro Asp Tyr Arg Asp Phe Ala Ile Lys Phe Asp Lys Pro Gly Ser Val
385                 390                 395                 400
gaa aaa caa gat atg gcc gaa tgg gca aaa tat tta gac aag atg tct    1248
Glu Lys Gln Asp Met Ala Glu Trp Ala Lys Tyr Leu Asp Lys Met Ser
                405                 410                 415
gaa ttg aac cca act aat ttc cgt ggt ttt ggt cct gat gaa act aaa    1296
Glu Leu Asn Pro Thr Asn Phe Arg Gly Phe Gly Pro Asp Glu Thr Lys
            420                 425                 430
tct aat cgt tta ttc caa ctt tta gat aat caa aaa cgt caa tgg atg    1344
Ser Asn Arg Leu Phe Gln Leu Leu Asp Asn Gln Lys Arg Gln Trp Met
        435                 440                 445
gaa agt att cat act cca aac gat gaa aac ttg gct cac gaa ggt cgt    1392
Glu Ser Ile His Thr Pro Asn Asp Glu Asn Leu Ala His Glu Gly Arg
    450                 455                 460
gta att gac tca caa ttg tca gaa cac caa gat gaa ggt tgg ctt gaa    1440
Val Ile Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Asp Glu Gly Trp Leu Glu
465                 470                 475                 480
gga tat gta tta act ggt cgt cac gga ttc ttt gct act tat gaa gca    1488
Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ala Thr Tyr Glu Ala
                485                 490                 495
ttt ggt cgt gta gtt gat tca atg ctt acg caa cat atg aaa tgg ttg    1536
Phe Gly Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Met Lys Trp Leu
            500                 505                 510
aga aaa gct aaa gag caa gct tgg aga cat gat tat cca gcc tta aac    1584
Arg Lys Ala Lys Glu Gln Ala Trp Arg His Asp Tyr Pro Ala Leu Asn
        515                 520                 525
tta gtt gat act tca act gtt ttc cag caa gat cac aat ggt tat act    1632
Leu Val Asp Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr
    530                 535                 540
cac caa gat cca ggt atg tta act cat ttg tat gaa aag aat cgt cca    1680
His Gln Asp Pro Gly Met Leu Thr His Leu Tyr Glu Lys Asn Arg Pro
545                 550                 555                 560
gat tta att cac gaa tac tta cca gca gat act aat tca ctt ctt gct    1728
Asp Leu Ile His Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Thr Asn Ser Leu Leu Ala
                565                 570                 575
gta tct gat aag gca ttt aga gat cgc gaa tgc atc aat gtt tta gta    1776
Val Ser Asp Lys Ala Phe Arg Asp Arg Glu Cys Ile Asn Val Leu Val
            580                 585                 590
act tct aaa caa cct cgt cct cag tgg ttc tca att gaa gaa gct aaa    1824
Thr Ser Lys Gln Pro Arg Pro Gln Trp Phe Ser Ile Glu Glu Ala Lys
        595                 600                 605
aaa ttg gtt gat aag ggt ctt ggt tat gtt gac tgg gca tca act gat    1872
Lys Leu Val Asp Lys Gly Leu Gly Tyr Val Asp Trp Ala Ser Thr Asp
    610                 615                 620
aag ggc gct aag cca gat gtt gtt ttt gct tca act ggt act gaa cca    1920
Lys Gly Ala Lys Pro Asp Val Val Phe Ala Ser Thr Gly Thr Glu Pro
625                 630                 635                 640
aca att gaa tct tta gct gcc att gac tta ctt cat aag aaa ttc cca    1968
Thr Ile Glu Ser Leu Ala Ala Ile Asp Leu Leu His Lys Lys Phe Pro
                645                 650                 655
gac tta aag att cgc tat att aat gta att gat gtt atg aag tta atg    2016
Asp Leu Lys Ile Arg Tyr Ile Asn Val Ile Asp Val Met Lys Leu Met
            660                 665                 670
tcc cca gaa aag aat cca aat gca atc agt aat gaa gaa ttc aac cgt    2064
Ser Pro Glu Lys Asn Pro Asn Ala Ile Ser Asn Glu Glu Phe Asn Arg
        675                 680                 685
ctt ttc cct aaa ggt aca cca gtt atc ttt gca tgg cat gga ttt aag    2112
Leu Phe Pro Lys Gly Thr Pro Val Ile Phe Ala Trp His Gly Phe Lys
    690                 695                 700
cca atg atg gaa tca att tgg ttt gat cgc ggc cgt ggt aaa gat gat    2160
Pro Met Met Glu Ser Ile Trp Phe Asp Arg Gly Arg Gly Lys Asp Asp
705                 710                 715                 720
gtt cat att cat ggc tat gaa gaa aat ggt gac att act act cct ttt    2208
Val His Ile His Gly Tyr Glu Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe
                725                 730                 735
gat atg cgt gtc tta aac cac atg gat cgc tat gac tta gca aaa gat    2256
Asp Met Arg Val Leu Asn His Met Asp Arg Tyr Asp Leu Ala Lys Asp
            740                 745                 750
gta gta gaa agt att cct gag cta aat gaa aag aat gcg gat ttc att    2304
Val Val Glu Ser Ile Pro Glu Leu Asn Glu Lys Asn Ala Asp Phe Ile
        755                 760                 765
gat gag atg gat agc ttg ctt gct aaa cac cat caa tat atc cgt gat    2352
Asp Glu Met Asp Ser Leu Leu Ala Lys His His Gln Tyr Ile Arg Asp
    770                 775                 780
aac ggt aaa gat atg cct gaa gtt act gaa tgg caa tgg aat ggt tta    2400
Asn Gly Lys Asp Met Pro Glu Val Thr Glu Trp Gln Trp Asn Gly Leu
785                 790                 795                 800
aaa taa                                                            2406
Lys
<210>69
<211>801
<212>PRT
<213>约氏乳杆菌
<400>69
Met Ala Val Asn Tyr Asp Ser Gln Glu Tyr Leu Lys Ser Val Asp Ala
1               5                   10                  15
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Phe Leu Met
            20                  25                  30
Asn Asn Pro Leu Leu Lys Arg Glu Leu Lys Ala Glu Asp Val Lys Pro
        35                  40                  45
Lys Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Val Pro Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
Gly His Leu Asn Arg Ala Ile Lys Lys Tyr Asp Leu Asn Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Ile Glu Gly Ser Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Arg Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Glu
            100                 105                 110
Lys Gly Met Ala Lys Leu Phe Lys Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
    115                 120                 125
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
Glu Leu Gly Tyr Ser Leu Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
Pro Asp Val Ile Ala Ala Val Glu Ile Gly Asp Gly Glu Ser Glu Thr
                165                 170                 175
Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp Phe Ser Ser Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
Lys Asp Gly Ala Val Ile Pro Ile Leu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
Ser Asn Pro Thr Ile Val Ser Arg Met Ser Asp Glu Asp Leu Thr Lys
    210                 215                 220
Tyr Phe Glu Gly Met Gly Trp Lys Pro Tyr Phe Val Ser Ala Tyr Lys
225                 230                 235                 240
Asp Gly Glu Phe Asn Gly Tyr Lys Asp His Met Glu Val His Gln Glu
                245                 250                 255
Met Ala Lys Thr Met Asp Glu Val Val Glu Glu Ile Lys Ala Ile Gln
            260                 265                 270
Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Asp Ser Leu Val Lys Trp Pro Met
        275                 280                 285
Ile Val Phe Arg Val Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Phe Asp Leu
    290                 295                 300
Asp Gly Asn Pro Ile Glu Asn Ser Phe Arg Ala His Gln Ile Pro Ile
305                 310                 315                 320
Pro Val Ala Gln Asp Asp Met Asn His Lys Glu Met Leu Thr Asp Trp
                325                 330                 335
Met Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asn Glu Asp Gly Ser Pro
            340                 345                 350
Lys Asp Ile Val Lys Glu Asn Thr Leu Ser Gly Asp Gln Arg Met Ala
        355                 360                 365
Met Asn Pro Val Thr Asn Gly Gly Ile Asp Pro Lys Val Leu Asn Met
    370                 375                 380
Pro Asp Tyr Arg Asp Phe Ala Ile Lys Phe Asp Lys Pro Gly Ser Val
385                 390                 395                 400
Glu Lys Gln Asp Met Ala Glu Trp Ala Lys Tyr Leu Asp Lys Met Ser
                405                 410                 415
Glu Leu Asn Pro Thr Asn Phe Arg Gly Phe Gly Pro Asp Glu Thr Lys
            420                 425                 430
Ser Asn Arg Leu Phe Gln Leu Leu Asp Asn Gln Lys Arg Gln Trp Met
        435                 440                 445
Glu Ser Ile His Thr Pro Asn Asp Glu Asn Leu Ala His Glu Gly Arg
    450                 455                 460
Val Ile Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Asp Glu Gly Trp Leu Glu
465                 470                 475                 480
Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ala Thr Tyr Glu Ala
                485                 490                 495
Phe Gly Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Met Lys Trp Leu
            500                 505                 510
Arg Lys Ala Lys Glu Gln Ala Trp Arg His Asp Tyr Pro Ala Leu Asn
        515                 520                 525
Leu Val Asp Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr
    530                 535                 540
His Gln Asp Pro Gly Met Leu Thr His Leu Tyr Glu Lys Asn Arg Pro
545                 550                 555                 560
Asp Leu Ile His Glu Tyr Leu Pro Ala Asp Thr Asn Ser Leu Leu Ala
                565                 570                 575
Val Ser Asp Lys Ala Phe Arg Asp Arg Glu Cys Ile Asn Val Leu Val
            580                 585                 590
Thr Ser Lys Gln Pro Arg Pro Gln Trp Phe Ser Ile Glu Glu Ala Lys
        595                 600                 605
Lys Leu Val Asp Lys Gly Leu Gly Tyr Val Asp Trp Ala Ser Thr Asp
    610                 615                 620
Lys Gly Ala Lys Pro Asp Val Val Phe Ala Ser Thr Gly Thr Glu Pro
625                 630                 635                 640
Thr Ile Glu Ser Leu Ala Ala Ile Asp Leu Leu His Lys Lys Phe Pro
                645                 650                 655
Asp Leu Lys Ile Arg Tyr Ile Asn Val Ile Asp Val Met Lys Leu Met
            660                 665                 670
Ser Pro Glu Lys Asn Pro Asn Ala Ile Ser Asn Glu Glu Phe Asn Arg
        675                 680                 685
Leu Phe Pro Lys Gly Thr Pro Val Ile Phe Ala Trp His Gly Phe Lys
    690                 695                 700
Pro Met Met Glu Ser Ile Trp Phe Asp Arg Gly Arg Gly Lys Asp Asp
705                 710                 715                 720
Val His Ile His Gly Tyr Glu Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe
                725                 730                 735
Asp Met Arg Val Leu Asn His Met Asp Arg Tyr Asp Leu Ala Lys Asp
            740                 745                 750
Val Val Glu Ser Ile Pro Glu Leu Asn Glu Lys Asn Ala Asp Phe Ile
        755                 760                 765
Asp Glu Met Asp Ser Leu Leu Ala Lys His His Gln Tyr Ile Arg Asp
    770                 775                 780
Asn Gly Lys Asp Met Pro Glu Val Thr Glu Trp Gln Trp Asn Gly Leu
785                 790                 795                 800
Lys
<210>70
<211>2400
<212>DNA
<213>嗜酸乳杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2400)
<223>
<400>70
atg aca gtt aat tac gat tcc aaa gat tac tta aag agc gtt gac gca     48
Met Thr Val Asn Tyr Asp Ser Lys Asp Tyr Leu Lys Ser Val Asp Ala
1               5                   10                  15
tat tgg cgt gca gct aat tat ttg tca gtt gga caa tta ttt tta atg     96
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Phe Leu Met
            20                  25                  30
aaa aat ccg ttg tta aag aaa cct tta aca gct gaa gat gta aaa cct    144
Lys Asn Pro Leu Leu Lys Lys Pro Leu Thr Ala Glu Asp Val Lys Pro
        35                  40                  45
aag cca atc ggt cac tgg ggt act att gct cca caa aac ttt att tat    192
Lys Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Pro Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
gct cac tta aat cgt gcg ctt aaa aaa tat gac ttg gat atg ttc tat    240
Ala His Leu Asn Arg Ala Leu Lys Lys Tyr Asp Leu Asp Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
att gaa ggt tca ggt cac ggt ggc caa gtg atg gtt tca aat tca tat    288
Ile Glu Gly Ser Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
ctt gat ggt tca tat act gaa cgt tat cca gaa att acc caa gat gaa    336
Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Arg Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Glu
            100                 105                 110
aag ggt atg gct aaa ttg ttt aag cgc ttt agt ttc cca ggt ggt gta    384
Lys Gly Met Ala Lys Leu Phe Lys Arg Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
gct tct cac gct gct cct gaa act cca ggt tct att cat gaa ggt ggg    432
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
gaa tta gga tac gca ctt tca cat ggg gta ggt gct att tta gac aat    480
Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
cca gat gta att gct gcc gtt gaa att ggt gat ggt gaa gca gaa act    528
Pro Asp Val Ile Ala Ala Val Glu Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr
                165                 170                 175
ggt cca ctt gca gct agc tgg ttc agt gac aag ttt att aat cca att    576
Gly Pro Leu Ala Ala Ser Trp Phe Ser Asp Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
aag gat ggt gca gtt tta cca att ctt caa att aat ggt ttc aag att    624
Lys Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
tct aac cca act atc gtt tca aga atg agc gat gaa gaa tta act gaa    672
Ser Asn Pro Thr Ile Val Ser Arg Met Ser Asp Glu Glu Leu Thr Glu
    210                 215                 220
tac ttc cgt ggc atg ggt tgg gat ccg cac ttt gtt tca gta ttt aag    720
Tyr Phe Arg Gly Met Gly Trp Asp Pro His Phe Val Ser Val Phe Lys
225                 230                 235                 240
ggt ggc cgc ttt gac ggt gaa aag gat cca atg caa gtc cac gaa gaa    768
Gly Gly Arg Phe Asp Gly Glu Lys Asp Pro Met Gln Val His Glu Glu
                245                 250                 255
atg gct aaa acc atg gac gaa gta att gaa gaa att aag gct att caa    816
Met Ala Lys Thr Met Asp Glu Val Ile Glu Glu Ile Lys Ala Ile Gln
            260                 265                 270
aag cat gct cgt gaa aat aat gat gct act ttg cca cat tgg cca ttg     864
Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Ala Thr Leu Pro His Trp Pro Leu
        275                 280                 285
att atc ttc caa tgt cca aag ggc tgg acc ggt cca aag aag gat ctt     912
Ile Ile Phe Gln Cys Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Lys Asp Leu
    290                 295                 300
gac ggc aat cca att gaa aac tca ttt aga gca cac caa att cca att     960
Asp Gly Asn Pro Ile Glu Asn Ser Phe Arg Ala His Gln Ile Pro Ile
305                 310                 315                 320
cct gtc tca caa tac gat atg aaa cat gtt gat atg ttg act gat tgg    1008
Pro Val Ser Gln Tyr Asp Met Lys His Val Asp Met Leu Thr Asp Trp
                325                 330                 335
ctt gaa agt tat aag cca aac gaa tta ttc aac gaa gat ggt tca cca    1056
Leu Glu Ser Tyr Lys Pro Asn Glu Leu Phe Asn Glu Asp Gly Ser Pro
            340                 345                 350
aag gaa att gtt act gaa aac act gct aag ggt gat caa cgt atg gca    1104
Lys Glu Ile Val Thr Glu Asn Thr Ala Lys Gly Asp Gln Arg Met Ala
        355                 360                 365
atg aat ccg atc act aat ggt ggt aag gat cct aaa cga ttg aac cta    1l52
Met Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Lys Asp Pro Lys Arg Leu Asn Leu
    370                 375                 380
cca gat tat cgc aac ttt gca ctt aag ttt gac aag cca ggt tca gtt    1200
Pro Asp Tyr Arg Asn Phe Ala Leu Lys Phe Asp Lys Pro Gly Ser Val
385                 390                 395                 400
gaa gca caa gac atg gtt gaa tgg gct aaa tat tta aac gaa gtt gct    1248
Glu Ala Gln Asp Met Val Glu Trp Ala Lys Tyr Leu Asn Glu Val Ala
                405                 410                 415
aaa ctt aac cca act act ttc cgt ggc ttt ggt cct gat gaa tct aaa    1296
Lys Leu Asn Pro Thr Thr Phe Arg Gly Phe Gly Pro Asp Glu Ser Lys
            420                 425                 430
tca aac cgt tta ttt aaa ctt tta gat gat caa aag cgt caa tgg gaa    1344
Ser Asn Arg Leu Phe Lys Leu Leu Asp Asp Gln Lys Arg Gln Trp Glu
        435                 440                 445
cct gaa gtt cat gaa cca aat gat gaa aac ttg gca cca agt ggc cgc    1392
Pro Glu Val His Glu Pro Asn Asp Glu Asn Leu Ala Pro Ser Gly Arg
    450                 455                 460
gtt atc gat tca caa tta tca gaa cac caa gac gaa ggc ttc ctt gaa    1440
Val Ile Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Asp Glu Gly Phe Leu Glu
465                 470                 475                 480
ggc tac gtt tta act ggt cgt cac ggc ttc ttt gca acc tac gaa gca    1488
Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ala Thr Tyr Glu Ala
                485                 490                 495
ttt ggt cgt gta gta gat tcg atg ctt act caa cat atg aag tgg ctt    1536
Phe Gly Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Met Lys Trp Leu
            500                 505                 510
aga aaa gct aaa gaa caa tat tgg cgt cat gat tat cca tca ctt aac    1584
Arg Lys Ala Lys Glu Gln Tyr Trp Arg His Asp Tyr Pro Ser Leu Asn
        515                 520                 525
ttt gtt gct act tca aca gta ttc caa caa gat cac aat ggt tac act    1632
Phe Val Ala Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr
    530                 535                 540
cac caa gat cca ggc att tta act cac tta tat gaa aag aat cgt cca    1680
His Gln Asp Pro Gly Ile Leu Thr His Leu Tyr Glu Lys Asn Arg Pro
545                 550                 555                 560
gat tta gtt cat gaa tac ttg cca tca gat act aat act tta ctt gct    1728
Asp Leu Val His Glu Tyr Leu Pro Ser Asp Thr Asn Thr Leu Leu Ala
                565                 570                 575
gta ggt aac aag gca ttt act gat cgt gaa tgt att aat gtt tta gta    1776
Val Gly Asn Lys Ala Phe Thr Asp Arg Glu Cys Ile Asn Val Leu Val
            580                 585                 590
act tca aag caa cct cgt cca caa tgg ttc tca att gag gaa gca caa    1824
Thr Ser Lys Gln Pro Arg Pro Gln Trp Phe Ser Ile Glu Glu Ala Gln
        595                 600                 605
aag tta gtt gat aaa ggt tta agt tac att gat tgg gct tca act gat    1872
Lys Leu Val Asp Lys Gly Leu Ser Tyr Ile Asp Trp Ala Ser Thr Asp
    610                 615                 620
aaa ggt gta aaa cca gat att gtc ttt gct tca aca gaa act gaa cca    1920
Lys Gly Val Lys Pro Asp Ile Val Phe Ala Ser Thr Glu Thr Glu Pro
625                 630                 635                 640
aca att gaa act ttg gca gca att gat att ttg cat gac aag ttc cca    1968
Thr Ile Glu Thr Leu Ala Ala Ile Asp Ile Leu His Asp Lys Phe Pro
                645                 650                 655
gat ctt aag att cgc tac att aac gta att gat gtg atg aaa tta atg    2016
Asp Leu Lys Ile Arg Tyr Ile Asn Val Ile Asp Val Met Lys Leu Met
            660                 665                 670
tca cca aag gac aat aag aat ggt att tct gat gaa gaa ttt gat cgc    2064
Ser Pro Lys Asp Asn Lys Asn Gly Ile Ser Asp Glu Glu Phe Asp Arg
        675                 680                 685
tta ttc cca aag gac gtt cct gta ate ttt gca tgg cac ggc tac aag    2112
Leu Phe Pro Lys Asp Val Pro Val Ile Phe Ala Trp His Gly Tyr Lys
    690                 695                 700
agt atg atg gaa tca att tgg ttt gca cgt aac cgt cat aat gta cat    2160
Ser Met Met Glu Ser Ile Trp Phe Ala Arg Asn Arg His Asn Val His
705                 710                 715                 720
att cac tgc tac gaa gaa aac ggt gat att act acc cca ttt gat atg    2208
Ile His Cys Tyr Glu Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe Asp Met
                725                 730                 735
cgt gtt ttg aac cac ctt gac aga ttt gat ctt gcc aaa gat gct gtt    2256
Arg Val Leu Asn His Leu Asp Arg Phe Asp Leu Ala Lys Asp Ala Val
            740                 745                 750
gaa agt gtt gat aaa ttg aag ggc aag aac gct gac ttt ate agt cat    2304
Glu Ser Val Asp Lys Leu Lys Gly Lys Asn Ala Asp Phe Ile Ser His
        755                 760                 765
atg gat gac ttg ctt gaa aag cac cac caa tac att cgt gat aat ggt    2352
Met Asp Asp Leu Leu Glu Lys His His Gln Tyr Ile Arg Asp Asn Gly
    770                 775                 780
aaa gat atg cca gaa gtt act gaa tgg aag tgg aag ggc ttg aag taa    2400
Lys Asp Met Pro Glu Val Thr Glu Trp Lys Trp Lys Gly Leu Lys
785                 790                 795
<210>71
<211>799
<212>PRT
<213>嗜酸乳杆菌
<400>71
Met Thr Val Asn Tyr Asp Ser Lys Asp Tyr Leu Lys Ser Val Asp Ala
1               5                   10                  15
Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Leu Phe Leu Met
            20                  25                  30
Lys Asn Pro Leu Leu Lys Lys Pro Leu Thr Ala Glu Asp Val Lys Pro
        35                  40                  45
Lys Pro Ile Gly His Trp Gly Thr Ile Ala Pro Gln Asn Phe Ile Tyr
    50                  55                  60
Ala His Leu Asn Arg Ala Leu Lys Lys Tyr Asp Leu Asp Met Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Ile Glu Gly Ser Gly His Gly Gly Gln Val Met Val Ser Asn Ser Tyr
                85                  90                  95
Leu Asp Gly Ser Tyr Thr Glu Arg Tyr Pro Glu Ile Thr Gln Asp Glu
            100                  105                  110
Lys Gly Met Ala Lys Leu Phe Lys Arg Phe Ser Phe Pro Gly Gly Val
        115                 120                 125
Ala Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly
    130                 135                 140
Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Ser His Gly Val Gly Ala Ile Leu Asp Asn
145                 150                 155                 160
Pro Asp Val Ile Ala Ala Val Glu Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr
                165                 170                 175
Gly Pro Leu Ala Ala Ser Trp Phe Ser Asp Lys Phe Ile Asn Pro Ile
            180                 185                 190
Lys Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu Gln Ile Asn Gly Phe Lys Ile
        195                 200                 205
Ser Asn Pro Thr Ile Val Ser Arg Met Ser Asp Glu Glu Leu Thr Glu
    210                 215                 220
Tyr Phe Arg Gly Met Gly Trp Asp Pro His Phe Val Ser Val Phe Lys
225                 230                 235                 240
Gly Gly Arg Phe Asp Gly Glu Lys Asp Pro Met Gln Val His Glu Glu
                245                 250                 255
Met Ala Lys Thr Met Asp Glu Val Ile Glu Glu Ile Lys Ala Ile Gln
            260                 265                 270
Lys His Ala Arg Glu Asn Asn Asp Ala Thr Leu Pro His Trp Pro Leu
        275                 280                 285
Ile Ile Phe Gln Cys Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Lys Asp Leu
    290                 295                 300
Asp Gly Asn Pro Ile Glu Asn Ser Phe Arg Ala His Gln Ile Pro Ile
305                 310                 315                 320
Pro Val Ser Gln Tyr Asp Met Lys His Val Asp Met Leu Thr Asp Trp
                325                 330                 335
Leu Glu Ser Tyr Lys Pro Asn Glu Leu Phe Asn Glu Asp Gly Ser Pro
            340                 345                 350
Lys Glu Ile Val Thr Glu Asn Thr Ala Lys Gly Asp Gln Arg Met Ala
        355                 360                 365
Met Asn Pro Ile Thr Asn Gly Gly Lys Asp Pro Lys Arg Leu Asn Leu
    370                 375                 380
Pro Asp Tyr Arg Asn Phe Ala Leu Lys Phe Asp Lys Pro Gly Ser Val
385                 390                 395                 400
Glu Ala Gln Asp Met Val Glu Trp Ala Lys Tyr Leu Asn Glu Val Ala
                405                 410                 415
Lys Leu Asn Pro Thr Thr Phe Arg Gly Phe Gly Pro Asp Glu Ser Lys
            420                 425                 430
Ser Asn Arg Leu Phe Lys Leu Leu Asp Asp Gln Lys Arg Gln Trp Glu
        435                 440                 445
Pro Glu Val His Glu Pro Asn Asp Glu Asn Leu Ala Pro Ser Gly Arg
    450                 455                 460
Val Ile Asp Ser Gln Leu Ser Glu His Gln Asp Glu Gly Phe Leu Glu
465                 470                 475                 480
Gly Tyr Val Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ala Thr Tyr Glu Ala
                485                 490                 495
Phe Gly Arg Val Val Asp Ser Met Leu Thr Gln His Met Lys Trp Leu
            500                 505                 510
Arg Lys Ala Lys Glu Gln Tyr Trp Arg His Asp Tyr Pro Ser Leu Asn
        515                 520                 525
Phe Val Ala Thr Ser Thr Val Phe Gln Gln Asp His Asn Gly Tyr Thr
    530                 535                 540
His Gln Asp Pro Gly Ile Leu Thr His Leu Tyr Glu Lys Asn Arg Pro
545                 550                 555                 560
Asp Leu Val His Glu Tyr Leu Pro Ser Asp Thr Asn Thr Leu Leu Ala
                565                 570                 575
Val Gly Asn Lys Ala Phe Thr Asp Arg Glu Cys Ile Asn Val Leu Val
            580                 585                 590
Thr Ser Lys Gln Pro Arg Pro Gln Trp Phe Ser Ile Glu Glu Ala Gln
        595                 600                 605
Lys Leu Val Asp Lys Gly Leu Ser Tyr Ile Asp Trp Ala Ser Thr Asp
    610                 615                 620
Lys Gly Val Lys Pro Asp Ile Val Phe Ala Ser Thr Glu Thr Glu Pro
625                 630                 635                 640
Thr Ile Glu Thr Leu Ala Ala Ile Asp Ile Leu His Asp Lys Phe Pro
                645                 650                 655
Asp Leu Lys Ile Arg Tyr Ile Asn Val Ile Asp Val Met Lys Leu Met
            660                 665                 670
Ser Pro Lys Asp Asn Lys Asn Gly Ile Ser Asp Glu Glu Phe Asp Arg
        675                 680                 685
Leu Phe Pro Lys Asp Val Pro Val Ile Phe Ala Trp His Gly Tyr Lys
    690                 695                 700
Ser Met Met Glu Ser Ile Trp Phe Ala Arg Asn Arg His Asn Val His
705                 710                 715                 720
Ile His Cys Tyr Glu Glu Asn Gly Asp Ile Thr Thr Pro Phe Asp Met
                725                 730                 735
Arg Val Leu Asn His Leu Asp Arg Phe Asp Leu Ala Lys Asp Ala Val
            740                 745                 750
Glu Ser Val Asp Lys Leu Lys Gly Lys Asn Ala Asp Phe Ile Ser His
        755                 760                 765
Met Asp Asp Leu Leu Glu Lys His His Gln Tyr Ile Arg Asp Asn Gly
    770                 775                 780
Lys Asp Met Pro Glu Val Thr Glu Trp Lys Trp Lys Gly Leu Lys
785                 790                 795
<210>72
<211>2478
<212>DNA
<213>长双歧杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2478)
<223>
<400>72
atg acg agt cct gtt att ggc acc cct tgg aag aag ctc aac gct ccg     48
Met Thr Ser Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Lys Lys Leu Ash Ala Pro
1               5                   10                  15
gtt tcc gag gaa gcc ctc gaa ggc gtt gac aag tac tgg cgc gtt gcc     96
Val Ser Glu Glu Ala Leu Glu Gly Val Asp Lys Tyr Trp Arg Val Ala
            20                  25                  30
aac tac ctt tcc atc ggc cag att tat ctg cgt tcc aac ccg ctg atg    144
Asn Tyr Leu Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro Leu Met
        35                  40                  45
aag gag ccc ttc acc cgc gaa gat gtg aag cac cgt ctg gtg ggc cac    192
Lys Glu Pro Phe Thr Arg Glu Asp Val Lys His Arg Leu Val Gly His
    50                  55                  60
tgg ggc act acc cct ggc ctg aac ttc ctc atc ggc cac atc aac cgt     240
Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Ile Gly His Ile Asn Arg
65                  70                  75                  80
ttc att gct gac cac ggc cag aac acc gtg atc atc atg ggc ccg ggc     288
Phe Ile Ala Asp His Gly Gln Asn Thr Val Ile Ile Met Gly Pro Gly
                85                  90                  95
cac ggt ggc ccg gcc ggt acc tcc cag tcc tac ctg gac ggc acc tac     336
His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ser Gln Ser Tyr Leu Asp Gly Thr Tyr
            100                 105                  110
acc gag acc ttc ccg aag atc acc aag gac gaa gct ggt ctg cag aag     384
Thr Glu Thr Phe Pro Lys Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu Gln Lys
        115                 120                 125
ttc ttc cgt cag ttc tct tac ccg ggc ggc att ccg tcc cac ttc gct     432
Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Phe Ala
    130                 135                 140
ccg gag acc ccg ggc tcc atc cac gag ggt ggt gag ctg ggt tac gct     480
Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala
145                 150                 155                 160
ctg tcc cac gct tac ggc gcc atc atg gac aac ccg agc ctg ttt gtc     528
Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn Pro Ser Leu Phe Val
                165                 170                 175
ccg gcc atc gtc ggc gac ggc gag gct gag acc ggc ccg ctg gct acc     576
Pro Ala Ile Val Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr
            180                 185                 190
ggc tgg cag tcc aac aag ctc gtg aac ccg cgc acc gac ggt atc gtg     624
Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly Ile Val
        195                 200                 205
ctg ccg atc ctg cac ctc aac ggc tac aag atc gcc aac ccg acc atc     672
Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Ile
    210                 215                 220
ctg tcc cgc atc tcc gac gaa gag ctc cac gag ttc ttc cac ggc atg     720
Leu Ser Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Glu Phe Phe His Gly Met
225                 230                 235                 240
ggt tac gag ccc tac gag ttc gtc gct ggc ttc gat gat gag gac cac     768
Gly Tyr Glu Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asp Glu Asp His
                245                 250                 255
atg tcc atc cac cgt cgc ttc gcc gag ctg tgg gag acc atc tgg gac     816
Met Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Trp Glu Thr Ile Trp Asp
            260                 265                 270
gag atc tgc gac atc aag gcc acc gct cag acc gac aac gtg cac cgt     864
Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Thr Ala Gln Thr Asp Asn Val His Arg
        275                 280                 285
ccg ttc tac ccg atg ctg atc ttc cgc acc ccg aag ggc tgg acc tgc     912
Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp Thr Cys
    290                 295                 300
ccg aag tac atc gac ggc aag aag acc gag ggc tcc tgg cgt tcc cac     960
Pro Lys Tyr Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg Ser His
305                 310                 315                 320
cag gtg ccg ctg gct tcc gcc cgc gac acc gag gcc cac ttc gag gtt    1008
Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe Glu Val
                325                 330                 335
ctc aag aac tgg ctc gag tcc tac aag ccg gaa gag ctg ttc gac gcc    1056
Leu Lys Asn Trp Leu Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Ala
            340                 345                 350
aac ggt gct gtc aag gac gac gtc ctt gcc ttc atg ccg aag ggc gag    1104
Asn Gly Ala Val Lys Asp Asp Val Leu Ala Phe Met Pro Lys Gly Glu
        355                 360                 365
ctg cgt atc ggt gcc aac ccg aac gcc aac ggt ggt gtg atc cgc aac    1152
Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Val Ile Arg Asn
    370                 375                 380
gac ctg aag ctg ccg aac ctc gag gac tac gag gtc aag gaa gtg gct    1200
Asp Leu Lys Leu Pro Asn Leu Glu Asp Tyr Glu Val Lys Glu Val Ala
385                 390                 395                 400
gag tac ggc cac ggc tgg ggc cag ctc gag gcc acc cgt acc ctg ggt    1248
Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Leu Glu Ala Thr Arg Thr Leu Gly
                405                 410                 415
gcc tac act cgc gac atc atc aag aac aac ccg cgc gac ttc cgc atc    1296
Ala Tyr Thr Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Arg Asp Phe Arg Ile
            420                 425                 430
ttc gga ccg gat gag acc gct tcc aac cgt ctg cag gct tcc tac gaa    1344
Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gln Ala Ser Tyr Glu
        435                 440                 445
gtc acc aac aag cag tgg gat gcc ggc tac atc tcc gac gag gtc gac    1392
Val Thr Asn Lys Gln Trp Asp Ala Gly Tyr Ile Ser Asp Glu Val Asp
    450                 455                 460
gag cac atg cac gtc tcc ggc cag gtc gtt gag cag ctg tcc gag cac    1440
Glu His Met His Val Ser Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser Glu His
465                 470                 475                 480
cag atg gaa ggc ttc ctc gag gct tac ctg ctg acc ggt cgt cac ggc    1488
Gln Met Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly
                485                 490                 495
atc tgg agc tcc tac gag tcc ttc gtc cac gtg atc gac tcc atg ctg    1536
Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val Ile Asp Ser Met Leu
            500                 505                 510
aac cag cac gcc aag tgg ctt gag gct acc gtc cgc gag att ccg tgg    1584
Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile Pro Trp
        515                 520                 525
cgc aag ccg att gcc tcc atg aac ctg ctg gtc tcc tcc cac gtt tgg    1632
Arg Lys Pro Ile Ala Ser Met Asn Leu Leu Val Ser Ser His Val Trp
    530                 535                 540
cgt cag gac cac aac ggc ttc tcc cac cag gat ccg ggt gtc acc tcc    1680
Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val Thr Ser
545                 550                 555                 560
gtc ctg ctg aac aag tgc ttc cac aac gac cac gtc atc ggc atc tac    1728
Val Leu Leu Asn Lys Cys Phe His Asn Asp His Val Ile Gly Ile Tyr
                565                 570                 575
ttc gcc acc gat gcg aac atg ctg ctg gcc atc gcc gag aag tgc tac    1776
Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys Cys Tyr
            580                 585                 590
aag tcc acc aac aag atc aac gcc atc atc gct ggt aag cag cct gct    1824
Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Ile Ala Gly Lys Gln Pro Ala
        595                 600                 605
gcc acc tgg ctg acc ctg gac gag gct cgt gcc gag ctc gag aag ggt    1872
Ala Thr Trp Leu Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala Glu Leu Glu Lys Gly
    610                 615                 620
gcc gcc gct tgg gat tgg gct tcc acc gcc aag aac aac gat gag gcc    1920
Ala Ala Ala Trp Asp Trp Ala Ser Thr Ala Lys Asn Asn Asp Glu Ala
625                 630                 635                 640
gag gtc gtg ctt gcc gcc gcc ggc gat gtc ccg act cag gag atc atg    1968
Glu Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu Ile Met
                645                 650                 655
gct gct tcc gac aag ctg aag gaa ctg ggc atc aag ttc aag gtt gtg    2016
Ala Ala Ser Asp Lys Leu Lys Glu Leu Gly Ile Lys Phe Lys Val Val
            660                 665                 670
aac gtt gcc gac ctg ctc tcc ctg cag tcc gcc aag gag aac gac gag    2064
Asn Val Ala Asp Leu Leu Ser Leu Gln Ser Ala Lys Glu Asn Asp Glu
        675                 680                 685
gct ctg acc gac gag gag ttc gcc gac atc ttc acc gcc gac aag ccg    2112
Ala Leu Thr Asp Glu Glu Phe Ala Asp Ile Phe Thr Ala Asp Lys Pro
    690                 695                 700
gtg ctg ttc gcg tac cac tcc tac gct cac gac gtg cgt ggc ctg atc    2160
Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala His Asp Val Arg Gly Leu Ile
705                 710                 715                 720
tac gac cgt ccg aac cac gac aac ttc aac gtc cac ggc tac gag gag    2208
Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Asn Val His Gly Tyr Glu Glu
                725                 730                 735
gag ggc tcc acc acc acc ccg tac gac atg gtt cgt gtc aac cgc atc    2256
Glu Gly Ser Thr Thr Thr Pro Tyr Asp Met Val Arg Val Asn Arg Ile
            740                 745                 750
gac cgc tac gag ctg acc gct gag gct ctg cgc atg atc gac gcc gac    2304
Asp Arg Tyr Glu Leu Thr Ala Glu Ala Leu Arg Met Ile Asp Ala Asp
        755                 760                 765
aag tac gcc gac aag atc gac gag ctc gag aag ttc cgt gat gag gcc    2352
Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asp Glu Leu Glu Lys Phe Arg Asp Glu Ala
    770                 775                 780
ttc cag ttc gcc gtc gac aac ggc tac gat cac ccg gac tac acc gac    2400
Pho Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp His Pro Asp Tyr Thr Asp
785                 790                 795                 800
tgg gtg tac tcc ggc gtg aac acc gac aag aag ggt gcc gtc acc gct    2448
Trp Val Tyr Ser Gly Val Asn Thr Asp Lys Lys Gly Ala Val Thr Ala
                805                 810                 815
acc gcc gct acc gct ggc gac aac gag tga                            2478
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            820                 825
<210>73
<211>825
<212>PRT
<213>长双歧杆菌
<400>73
Met Thr Ser Pro Val Ile Gly Thr Pro Trp Lys Lys Leu Asn Ala Pro
1               5                   10                  15
Val Ser Glu Glu Ala Leu Glu Gly Val Asp Lys Tyr Trp Arg Val Ala
            20                  25                  30
Asn Tyr Leu Ser Ile Gly Gln Ile Tyr Leu Arg Ser Asn Pro Leu Met
        35                  40                  45
Lys Glu Pro Phe Thr Arg Glu Asp Val Lys His Arg Leu Val Gly His
    50                  55                  60
Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Ile Gly His Ile Asn Arg
65                  70                  75                  80
Phe Ile Ala Asp His Gly Gln Asn Thr Val Ile Ile Met Gly Pro Gly
                85                  90                  95
His Gly Gly Pro Ala Gly Thr Ser Gln Ser Tyr Leu Asp Gly Thr Tyr
            100                 105                 110
Thr Glu Thr Phe Pro Lys Ile Thr Lys Asp Glu Ala Gly Leu Gln Lys
        115                 120                 125
Phe Phe Arg Gln Phe Ser Tyr Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Phe Ala
    130                 135                 140
Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Ile Met Asp Asn Pro Ser Leu Phe Val
                165                 170                 175
Pro Ala Ile Val Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr
            180                 185                 190
Gly Trp Gln Ser Asn Lys Leu Val Asn Pro Arg Thr Asp Gly Ile Val
        195                 200                 205
Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Ile
    210                 215                 220
Leu Ser Arg Ile Ser Asp Glu Glu Leu His Glu Phe Phe His Gly Met
225                 230                 235                 240
Gly Tyr Glu Pro Tyr Glu Phe Val Ala Gly Phe Asp Asp Glu Asp His
                245                 250                 255
Met Ser Ile His Arg Arg Phe Ala Glu Leu Trp Glu Thr Ile Trp Asp
            260                 265                 270
Glu Ile Cys Asp Ile Lys Ala Thr Ala Gln Thr Asp Asn Val His Arg
        275                 280                 285
Pro Phe Tyr Pro Met Leu Ile Phe Arg Thr Pro Lys Gly Trp Thr Cys
    290                 295                 300
Pro Lys Tyr Ile Asp Gly Lys Lys Thr Glu Gly Ser Trp Arg Ser His
305                 310                 315                 320
Gln Val Pro Leu Ala Ser Ala Arg Asp Thr Glu Ala His Phe Glu Val
                325                 330                 335
Leu Lys Asn Trp Leu Glu Ser Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Ala
            340                 345                 350
Asn Gly Ala Val Lys Asp Asp Val Leu Ala Phe Met Pro Lys Gly Glu
        355                 360                 365
Leu Arg Ile Gly Ala Asn Pro Asn Ala Asn Gly Gly Val Ile Arg Asn
    370                 375                 380
Asp Leu Lys Leu Pro Asn Leu Glu Asp Tyr Glu Val Lys Glu Val Ala
385                 390                 395                 400
Glu Tyr Gly His Gly Trp Gly Gln Leu Glu Ala Thr Arg Thr Leu Gly
                405                 410                 415
Ala Tyr Thr Arg Asp Ile Ile Lys Asn Asn Pro Arg Asp Phe Arg Ile
            420                 425                 430
Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gln Ala Ser Tyr Glu
        435                 440                 445
Val Thr Asn Lys Gln Trp Asp Ala Gly Tyr Ile Ser Asp Glu Val Asp
    450                 455                 460
Glu His Met His Val Ser Gly Gln Val Val Glu Gln Leu Ser Glu His
465                 470                 475                 480
Gln Met Glu Gly Phe Leu Glu Ala Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly
                485                 490                 495
Ile Trp Ser Ser Tyr Glu Ser Phe Val His Val Ile Asp Ser Met Leu
            500                 505                 510
Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Glu Ala Thr Val Arg Glu Ile Pro Trp
        515                 520                 525
Arg Lys Pro Ile Ala Ser Met Asn Leu Leu Val Ser Ser His Val Trp
    530                 535                 540
Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Val Thr Ser
545                 550                 555                 560
Val Leu Leu Asn Lys Cys Phe His Asn Asp His Val Ile Gly Ile Tyr
                565                 570                 575
Phe Ala Thr Asp Ala Asn Met Leu Leu Ala Ile Ala Glu Lys Cys Tyr
            580                 585                 590
Lys Ser Thr Asn Lys Ile Asn Ala Ile Ile Ala Gly Lys Gln Pro Ala
        595                 600                 605
Ala Thr Trp Leu Thr Leu Asp Glu Ala Arg Ala Glu Leu Glu Lys Gly
    610                 615                 620
Ala Ala Ala Trp Asp Trp Ala Ser Thr Ala Lys Asn Asn Asp Glu Ala
625                 630                 635                 640
Glu Val Val Leu Ala Ala Ala Gly Asp Val Pro Thr Gln Glu Ile Met
                645                 650                 655
Ala Ala Ser Asp Lys Leu Lys Glu Leu Gly Ile Lys Phe Lys Val Val
            660                 665                 670
Asn Val Ala Asp Leu Leu Ser Leu Gln Ser Ala Lys Glu Asn Asp Glu
        675                 680                 685
Ala Leu Thr Asp Glu Glu Phe Ala Asp Ile Phe Thr Ala Asp Lys Pro
    690                 695                 700
Val Leu Phe Ala Tyr His Ser Tyr Ala His Asp Val Arg Gly Leu Ile
705                 710                 715                 720
Tyr Asp Arg Pro Asn His Asp Asn Phe Asn Val His Gly Tyr Glu Glu
                725                 730                 735
Glu Gly Ser Thr Thr Thr Pro Tyr Asp Met Val Arg Val Asn Arg Ile
            740                 745                 750
Asp Arg Tyr Glu Leu Thr Ala Glu Ala Leu Arg Met Ile Asp Ala Asp
        755                 760                 765
Lys Tyr Ala Asp Lys Ile Asp Glu Leu Glu Lys Phe Arg Asp Glu Ala
    770                 775                 780
Phe Gln Phe Ala Val Asp Asn Gly Tyr Asp His Pro Asp Tyr Thr Asp
785                 790                 795                 800
Trp Val Tyr Ser Gly Val Asn Thr Asp Lys Lys Gly Ala Val Thr Ala
                805                 810                 815
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Asp Asn Glu
            820                 825
<210>74
<211>2454
<212>DNA
<213>Chlorobium tepidum
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2454)
<223>
<400>74
ttg att gta aga tcg gaa aat aga gtt ccg gat gaa ctc cgg act cag     48
Leu Ile Val Arg Ser Glu Asn Arg Val Pro Asp Glu Leu Arg Thr Gln
1               5                   10                  15
cat aca aca act atc aaa tca aca ata ctg atg act gaa atg acg act     96
His Thr Thr Thr Ile Lys Ser Thr Ile Leu Met Thr Glu Met Thr Thr
            20                  25                  30
ccg ctt tcc cct cgc gaa ctc gat ctg atg aac gct tac tgg cga gcg    144
Pro Leu Ser Pro Arg Glu Leu Asp Leu Met Asn Ala Tyr Trp Arg Ala
        35                  40                  45
gcg aac tac ctt tcc gtc ggc cag att tat ctg atg gac aat cca ctc    192
Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Ile Tyr Leu Met Asp Asn Pro Leu
    50                  55                  60
ctg aaa gag ccg ctc tcc aaa gaa cat atc aag ccc cgc ctg ctc ggc    240
Leu Lys Glu Pro Leu Ser Lys Glu His Ile Lys Pro Arg Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
cac tgg ggc acc act ccc ggt ctc aat ttc ctt tac gtg cac ctg aac    288
His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Tyr Val His Leu Asn
                85                  90                  95
cgc atc atc cgc aac cgc gat ctt gac att atc tat atc gcc ggg ccg    336
Arg Ile Ile Arg Asn Arg Asp Leu Asp Ile Ile Tyr Ile Ala Gly Pro
            100                 105                 110
gga cat ggc ggg cct gcg ctg gtg gcg aac gta tgg ctg gag ggt acc     384
Gly His Gly Gly Pro Ala Leu Val Ala Asn Val Trp Leu Glu Gly Thr
        115                 120                 125
tac agt gag tac tat ccc gat gtg tcg ttc gac gag gcg ggc atg aag     432
Tyr Ser Glu Tyr Tyr Pro Asp Val Ser Phe Asp Glu Ala Gly Met Lys
    130                 135                 140
cgg ctg ttc cgg cag ttc tcg ttt ccg ggc ggt att ccg agc cac gtg     480
Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Val
145                 150                 155                 160
gct ccc gca acg ccg gga tcg atc cat gag ggc gga gag ctg ggc tat     528
Ala Pro Ala Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr
                165                 170                 175
gcg ttg tcg cac gct tac ggc gcg gtg ttc gac aat ccc gat ctt gtc     576
Ala Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Val Phe Asp Asn Pro Asp Leu Val
            180                 185                 190
gca gcc tgt gtc atc ggc gat ggc gag gca gag acg ggg cca ctg gcg     624
Ala Ala Cys Val Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala
        195                 200                 205
acg gcg tgg cac agc aac aag ttc ctg aac ccg aag cgc gac ggg gcg     672
Thr Ala Trp His Ser Asn Lys Phe Leu Asn Pro Lys Arg Asp Gly Ala
    210                 215                 220
gtg ctg ccg gtt ctg cac ctg aac ggc tac aag atc gcc aac cca acg     720
Val Leu Pro Val Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr
225                 230                 235                 240
gtg ctg gcg cgc att tcg cac gag gag ctg gag cag ctc atg att ggc     768
Val Leu Ala Arg Ile Ser His Glu Glu Leu Glu Gln Leu Met Ile Gly
                245                 250                 255
tac ggc tac aaa ccg tac ttc gtt gag ggg gat gac ccg gcg acg atg     816
Tyr Gly Tyr Lys Pro Tyr Phe Val Glu Gly Asp Asp Pro Ala Thr Met
            260                 265                 270
cac cag atg atg gcg gcg acg atg gac cgc tgc ttc gat gag atc gcc     864
His Gln Met Met Ala Ala Thr Met Asp Arg Cys Phe Asp Glu Ile Ala
        275                 280                 285
gaa atc cag cgc cgg gcg agg gtc gat ggc gtg acc gag cga ccg atg     912
Glu Ile Gln Arg Arg Ala Arg Val Asp Gly Val Thr Glu Arg Pro Met
    290                 295                 300
tgg ccg atg atc gtg ttt cgc tct ccg aaa ggg tgg acg ggg ccg aag     960
Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ser Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys
305                 310                 315                 320
gtg gtt gac ggc aaa ccc gcc gag ggg agc tgg cgt tca cac cag gtg    1008
Val Val Asp Gly Lys Pro Ala Glu Gly Ser Trp Arg Ser His Gln Val
                325                 330                 335
ccg ttc agc acg gtg cga gac aat ccg gag cac atg gcg ctg ctc gaa    1056
Pro Phe Ser Thr Val Arg Asp Asn Pro Glu His Met Ala Leu Leu Glu
            340                 345                 350
acg tgg ctg aaa agc tac cgt gcc gaa gag ctg ttc aca gcg gat ggc    1104
Thr Trp Leu Lys Ser Tyr Arg Ala Glu Glu Leu Phe Thr Ala Asp Gly
        355                 360                 365
gtt ctt ctt cct gag ttg cag gag ctg gct ccg cgt ggc aag aag cgc    1152
Val Leu Leu Pro Glu Leu Gln Glu Leu Ala Pro Arg Gly Lys Lys Arg
    370                 375                 380
atg ggc gat att cca cac gcc aac ggc ggc ctg ttg ctc aag gag ttg    1200
Met Gly Asp Ile Pro His Ala Asn Gly Gly Leu Leu Leu Lys Glu Leu
385                 390                 395                 400
cgg atg ccg gac ttt cgg gaa tat gga atc gat gta ccg aag ccc gga    1248
Arg Met Pro Asp Phe Arg Glu Tyr Gly Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly
                405                 410                 415
tcg gtg gag gcc gaa gcg cct aag ccg atg gcc cgc ttt ctg cgc gac    1296
Ser Val Glu Ala Glu Ala Pro Lys Pro Met Ala Arg Phe Leu Arg Asp
            420                 425                 430
atc atg aag atg aac gag aag gcg gcc aac ttc cgc gtt ttc ggg ccg    1344
Ile Met Lys Met Asn Glu Lys Ala Ala Asn Phe Arg Val Phe Gly Pro
        435                 440                 445
gac gag acc gca tca aac cgc ctt ggc gag ctg ttc gaa gag acc gac    1392
Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly Glu Leu Phe Glu Glu Thr Asp
    450                 455                 460
cgc acg tgg atg gcc ggg atg ctg ccg acc gac gat cat ctg tcg cgc    1440
Arg Thr Trp Met Ala Gly Met Leu Pro Thr Asp Asp Hi5 Leu Ser Arg
465                 470                 475                 480
gat ggc cgc gtg atg gaa att ctc tcg gag cac acc tgc cag ggg tgg    1488
Asp Gly Arg Val Met Glu Ile Leu Ser Glu His Thr Cys Gln Gly Trp
                485                 490                 495
ctt gaa gga tac ctt ttg acc gga cgc cac ggc ttc ttc tca tgc tac    1536
Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ser Cys Tyr
            500                 505                 510
gag gcg ttc atc cac atc atc gac tcg atg ttc aac cag cac gcc aag    1584
Glu Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser Met Phe Asn Gln His Ala Lys
        515                 520                 525
tgg ctg aag gtg act ggt gcc gaa att ccc tgg cgc cgg ccc atc gct    1632
Trp Leu Lys Val Thr Gly Ala Glu Ile Pro Trp Arg Arg Pro Ile Ala
    530                 535                 540
tcg ctg aac tat ttc ctg act tcg cac gtg tgg cgg cag gat cac aac    1680
Ser Leu Asn Tyr Phe Leu Thr Ser His Val Trp Arg Gln Asp His Asn
545                 550                 555                 560
ggc ttt tcg cat cag gat ccc ggt ttt att gac cat gtg gtc aac aag    1728
Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Ile Asp His Val Val Asn Lys
                565                 570                 575
aag tcg agc gtg att cgt gtt tat ctg ccg cca gac gcc aat tcg ctg    1776
Lys Ser Ser Val Ile Arg Val Tyr Leu Pro Pro Asp Ala Asn Ser Leu
            580                 585                 590
ctg tcg gtc aca aac cat tgc ctg cgc tcc cgc aat tac atc aat gtg    1824
Leu Ser Val Thr Asn His Cys Leu Arg Ser Arg Asn Tyr Ile Asn Val
        595                 600                 605
att gtg gcg ggt aaa cag cca gcg tgg cag tgg ctt gac atg gag tcc    1872
Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Ala Trp Gln Trp Leu Asp Met Glu Ser
    610                 615                 620
gcc gtg cgg cac tgt acc agc ggc atc ggc atc tgg gag tgg gcc tcg    1920
Ala Val Arg His Cys Thr Ser Gly Ile Gly Ile Trp Glu Trp Ala Ser
625                 630                 635                 640
aat gac gcg aat gag ggc gag ccg gac gtg gtg atg gct tgt gcg ggc    1968
Asn Asp Ala Asn Glu Gly Glu Pro Asp Val Val Met Ala Cys Ala Gly
                645                 650                 655
gac gtg ccg acg ctt gaa acg ctg gcc gcc gtc aag att ctg cgc aaa    2016
Asp Val Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Val Lys Ile Leu Arg Lys
            660                 665                 670
ctc gcg ccg gag ttg aag atc agg gtg gtc aac gtg gtc gat ctc atg    2064
Leu Ala Pro Glu Leu Lys Ile Arg Val Val Asn Val Val Asp Leu Met
        675                 680                 685
act ctc cag ccg aaa gag gag cac ccg cac ggc ctt gcc gat cgc gat    2112
Thr Leu Gln Pro Lys Glu Glu His Pro His Gly Leu Ala Asp Arg Asp
    690                 695                 700
ttc gac gac atg ttt act aca gac aag ccg atc atc ttc gcc tat cac    2160
Phe Asp Asp Met Phe Thr Thr Asp Lys Pro Ile Ile Phe Ala Tyr His
705                 710                 715                 720
ggt tac ccg tgg ctg atc cac cgg ctg acc tac cgc cgc acg aac cac    2208
Gly Tyr Pro Trp Leu Ile His Arg Leu Thr Tyr Arg Arg Thr Asn His
                725                 730                 735
cac aac ctg cac gtg cgt ggc tac aag gag gag ggc acc acg acg acg    2256
His Asn Leu His Val Arg Gly Tyr Lys Glu Glu Gly Thr Thr Thr Thr
            740                 745                 750
ccg ttc gac atg gtg gtg atg aac gag ctc gac cgc ttc cac ctg gta    2304
Pro Phe Asp Met Val Val Met Asn Glu Leu Asp Arg Phe His Leu Val
        755                 760                 765
gcc gac gta gcc aac cgc gtg gag agc ctc agg cca caa gct gcc tac    2352
Ala Asp Val Ala Asn Arg Val Glu Ser Leu Arg Pro Gln Ala Ala Tyr
    770                 775                 780
atc aaa caa tac gtc cgc gac cgc ctg atc gag cac aag gag tac atc    2400
Ile Lys Gln Tyr Val Arg Asp Arg Leu Ile Glu His Lys Glu Tyr Ile
785                 790                 795                 800
acg aaa tat ggc gag gat atg ccg gaa gtg agg gat tgg cgc tgg gag    2448
Thr Lys Tyr Gly Glu Asp MPt Pro Glu Val Arg Asp Trp Arg Trp Glu
                805                 810                 815
gat tga                                                            2454
Asp
<210>75
<211>817
<212>PRT
<213>Chlorobium tepidum
<400>61
Leu Ile Val Arg Ser Glu Asn Arg Val Pro Asp Glu Leu Arg Thr Gln
1               5                   10                  15
His Thr Thr Thr Ile Lys Ser Thr Ile Leu Met Thr Glu Met Thr Thr
            20                  25                  30
Pro Leu Ser Pro Arg Glu Leu Asp Leu Met Asn Ala Tyr Trp Arg Ala
        35                  40                  45
Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Ile Tyr Leu Met Asp Asn Pro Leu
    50                  55                  60
Leu Lys Glu Pro Leu Ser Lys Glu His Ile Lys Pro Arg Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Leu Tyr Val His Leu Asn
                85                  90                  95
Arg Ile Ile Arg Asn Arg Asp Leu Asp Ile Ile Tyr Ile Ala Gly Pro
            100                 105                 110
Gly His Gly Gly Pro Ala Leu Val Ala Asn Val Trp Leu Glu Gly Thr
        115                 120                 125
Tyr Ser Glu Tyr Tyr Pro Asp yal Ser Phe Asp Glu Ala Gly Met Lys
    130                 135                 140
Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Val
145                 150                 155                 160
Ala Pro Ala Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr
                165                 170                 175
Ala Leu Ser His Ala Tyr Gly Ala Val Phe Asp Asn Pro Asp Leu Val
            180                 185                 190
Ala Ala Cys Val Ile Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala
        195                 200                 205
Thr Ala Trp His Ser Asn Lys Phe Leu Asn Pro Lys Arg Asp Gly Ala
    210                 215                 220
Val Leu Pro Val Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr
225                 230                 235                 240
Val Leu Ala Arg Ile Ser His Glu Glu Leu Glu Gln Leu Met Ile Gly
                245                 250                 255
Tyr Gly Tyr Lys Pro Tyr Phe Val Glu Gly Asp Asp Pro Ala Thr Met
            260                 265                 270
His Gln Met Met Ala Ala Thr Met Asp Arg Cys Phe Asp Glu Ile Ala
        275                 280                 285
Glu Ile Gln Arg Arg Ala Arg Val Asp Gly Val Thr Glu Arg Pro Met
    290                 295                 300
Trp Pro Met Ile Val Phe Arg Ser Pro Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys
305                 310                 315                 320
Val Val Asp Gly Lys Pro Ala Glu Gly Ser Trp Arg Ser His Gln Val
                325                 330                 335
Pro Phe Ser Thr Val Arg Asp Asn Pro Glu His Met Ala Leu Leu Glu
            340                 345                 350
Thr Trp Leu Lys Ser Tyr Arg Ala Glu Glu Leu Phe Thr Ala Asp Gly
        355                 360                 365
Val Leu Leu Pro Glu Leu Gln Glu Leu Ala Pro Arg Gly Lys Lys Arg
    370                 375                 380
Met Gly Asp Ile Pro Hi s Ala Asn Gly Gly Leu Leu Leu Lys Glu Leu
385                 390                 395                 400
Arg Met Pro Asp Phe Arg Glu Tyr Gly Ile Asp Val Pro Lys Pro Gly
                405                 410                 415
Ser Val Glu Ala Glu Ala Pro Lys Pro Met Ala Arg Phe Leu Arg Asp
            420                 425                 430
Ile Met Lys Met Asn Glu Lys Ala Ala Asn Phe Arg Val Phe Gly Pro
        435                 440                 445
Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly Glu Leu Phe Glu Glu Thr Asp
    450                 455                 460
Arg Thr Trp Met Ala Gly Met Leu Pro Thr Asp Asp His Leu Ser Arg
465                 470                 475                 480
Asp Gly Arg Val Met Glu Ile Leu Ser Glu His Thr Cys Gln Gly Trp
                485                 490                 495
Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Phe Ser Cys Tyr
            500                 505                 510
Gll Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser Met Phe Asn Gln His Ala Lys
        515                 520                 525
Trp Leu Lys Val Thr Gly Ala Glu Ile Pro Trp Arg Arg Pro Ile Ala
    530                 535                 540
Ser Leu Asn Tyr Phe Leu Thr Ser His Val Trp Arg Gln Asp His Asn
545                 550                 555                 560
Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Ile Asp His Val Val Asn Lys
                565                 570                 575
Lys Ser Ser Val Ile Arg Val Tyr Leu Pro Pro Asp Ala Asn Ser Leu
            580                 585                 590
Leu Ser Val Thr Asn His Cys Leu Arg Ser Arg Asn Tyr Ile Asn Val
        595                 600                 605
Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Ala Trp Gln Trp Leu Asp Met Glu Ser
    610                 615                 620
Ala Val Arg His Cys Thr Ser Gly Ile Gly Ile Trp Glu Trp Ala Ser
625                 630                 635                 640
Asn Asp Ala Asn Glu Gly Glu Pro Asp Val Val Met Ala Cys Ala Gly
                645                 650                 655
Asp Val Pro Thr Leu Glu Thr Leu Ala Ala Val Lys Ile Leu Arg Lys
            660                 665                 670
Leu Ala Pro Glu Leu Lys Ile Arg Val Val Asn Val Val Asp Leu Met
        675                 680                 685
Thr Leu Gln Pro Lys Glu Glu His Pro His Gly Leu Ala Asp Arg Asp
    690                 695                 700
Phe Asp Asp Met Phe Thr Thr Asp Lys Pro Ile Ile Phe Ala Tyr His
705                 710                 715                 720
Gly Tyr Pro Trp Leu Ile His Arg Leu Thr Tyr Arg Arg Thr Asn His
                725                 730                 735
His Asn Leu His Val Arg Gly Tyr Lys Glu Glu Gly Thr Thr Thr Thr
            740                 745                     750
Pro Phe Asp Met Val Val Met Asn Glu Leu Asp Arg Phe His Leu Val
        755                 760                 765
Ala Asp Val Ala Asn Arg Val Glu Ser Leu Arg Pro Gln Ala Ala Tyr
    770                 775                 780
Ile Lys Gln Tyr Val Arg Asp Arg Leu Ile Glu His Lys Glu Tyr Ile
785                 790                 795                 800
Thr Lys Tyr Gly Glu Asp Met Pro Glu Val Arg Asp Trp Arg Trp Glu
                805                 810                 815
Asp
<210>76
<211>2370
<212>DNA
<213>猪布鲁氏菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2370)
<223>
<400>76
gtg cca gca aaa ggg cct ctc aca ccg cag cag crt tca ctc atc aac     48
Val Pro Ala Lys Gly Pro Leu Thr Pro Gln Gln Leu Ser Leu Ile Asn
1               5                   10                  15
cgt tac tgg cgc gcg gcg aat tat ctt tcc gtc ggc cag att tat ctg     96
Arg Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Ile Tyr Leu
            20                  25                  30
atg aaa aat ccc ctg ttg cgc gaa ccg ctc cag cct gag cac atc aag    144
Met Lys Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Gln Pro Glu His Ile Lys
        35                  40                  45
ccg cgg ctt ctc ggc cat tgg ggc acg aca ccc ggc ctc aat ttc atc    192
Pro Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Ile
    50                  55                  60
tat gcg cat ctc aac cgc att att cag cag cgc aac gcc aat gtg ate    240
Tyr Ala His Leu Asn Arg Ile Ile Gln Gln Arg Asn Ala Asn Val Ile
65                  70                  75                  80
tat att tgc ggc ccc ggc cat ggc ggg ecg ggc atg gtg gcc aac acc    288
Tyr Ile Cys Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Gly Met Val Ala Asn Thr
                85                  90                  95
tat ctg gag ggc acc tat tcc gaa atc tat ccc gca atc agc gaa gat    336
Tyr Leu Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Ile Tyr Pro Ala Ile Ser Glu Asp
            100                 105                 1l0
gaa gcg ggc atg gaa agg ctc ttc cgc cag ttt tcc ttc ccc ggc gga    384
Glu Ala Gly Met Glu Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly
        115                 120                 125
ata cca agc cat gcc gcg ccg gaa aca ccg ggc tct arc cac gaa ggg    432
Ile Pro Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly
    130                 135                 140
ggc gaa ctg ggt tat gcg ctc gtc cac gcc tat ggt gcg gcc ttc gac    480
Gly Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Val His Ala Tyr Gly Ala Ala Phe Asp
145                 150                 155                 160
aat ccc gat ctg gtg gtg gcc tgc gtc gtg ggc gac gga gaa gcg gaa     528
Asn Pro Asp Leu Val Val Ala Cys Val Val Gly Asp Gly Glu Ala Glu
                165                 170                 175
acc ggc gcg ctt gca act tcg tgg cac tcc aac aaa ttc ctc aat ccg     576
Thr Gly Ala Leu Ala Thr Ser Trp His Ser Asn Lys Phe Leu Asn Pro
            180                 185                 190
gcg cgc gat ggt gcg gtt ctg ccg atc ctg cat ctc aat ggc tac aag     624
Ala Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys
        195                 200                 205
atc gcc aac ccc acc gtg ctg gcc cgc ctt tcg gat gat gat ctg gac     672
Ile Ala Asn Pro Thr Val Leu Ala Arg Leu Ser Asp Asp Asp Leu Asp
    210                 215                 220
aat ctt ttc cgt ggc tac ggt tat gag cct ttc ttt gtt gaa ggc agc     720
Asn Leu Phe Arg Gly Tyr Gly Tyr Glu Pro Phe Phe Val Glu Gly Ser
225                 230                 235                 240
gag cct gcc gac atg cac cag aag atg gcc gca aca ctg gac acg att     768
Glu Pro Ala Asp Met His Gln Lys Met Ala Ala Thr Leu Asp Thr Ile
                245                 250                 255
ttc cag cgc att cag gac atc aag aaa aat gcc gat gtg cac tcg ccc     816
Phe Gln Arg Ile Gln Asp Ile Lys Lys Asn Ala Asp Val His Ser Pro
            260                 265                 270
gag cgc ccg cgc tgg ccg atg att att ctc aga agc ccg aag ggc tgg     864
Glu Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Ile Leu Arg Ser Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
acc ggc cca aaa acc gtg gac ggt ctg gtt gtt gaa aac tat tgg cgc     912
Thr Gly Pro Lys Thr Val Asp Gly Leu Val Val Glu Asn Tyr Trp Arg
    290                 295                 300
gcc cat cag gtg ccg gtt gcc aat tgc cgc gaa aac gat gcc cat cgc     960
Ala His Gln Val Pro Val Ala Asn Cys Arg Glu Asn Asp Ala His Arg
305                 310                 315                 320
aaa atc ctc gaa gac tgg atg aag agt tac gac ccg tcc gat ctg ttc    1008
Lys Ile Leu Glu Asp Trp Met Lys Ser Tyr Asp Pro Ser Asp Leu Phe
                325                 330                 335
gac gaa aaa ggg gcg ctg aag cct gaa ttg cgg gcg ctg gcg cca aag    1056
Asp Glu Lys Gly Ala Leu Lys Pro Glu Leu Arg Ala Leu Ala Pro Lys
            340                 345                 350
ggt gaa gcg cgc ata ggg gcc aat ccg cat gcc aat ggc ggg ctc ttg    1104
Gly Glu Ala Arg Ile Gly Ala Asn Pro His Ala Asn Gly Gly Leu Leu
        355                 360                 365
cgt aaa gag ctt cac atg ccg gat ttc cgc caa tat gcg gtc aat gtc    1152
Arg Lys Glu Leu His Met Pro Asp Phe Arg Gln Tyr Ala Val Asn Val
    370                 375                 380
acc gaa ccg gga gcg ata gaa gcg caa tca acc aaa ata ttg ggc gat    1200
Thr Glu Pro Gly Ala Ile Glu Ala Gln Ser Thr Lys Ile Leu Gly Asp
385                 390                 395                 400
ttt ctg cgc gat gtg atg aaa ctg aac gag acg gaa aag aac ttc cgc    1248
Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Leu Asn Glu Thr Glu Lys Asn Phe Arg
                405                 410                 415
atc ttc ggc ccc gac gaa acc gcc tcc aac agg ctc ggc agc gta tta    1296
Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly Ser Val Leu
            420                 425                 430
gag gcg acg aac cgg gtc tgg atg gcc gaa acg ctg gac atg gat gac    1344
Glu Ala Thr Asn Arg Val Trp Met Ala Glu Thr Leu Asp Met Asp Asp
        435                 440                 445
cac ctc gcc gcc gac ggg cgt gta atg gag gtt ctc agc gaa cat ctc    1392
His Leu Ala Ala Asp Gly Arg Val Met Glu Val Leu Ser Glu His Leu
    450                 455                 460
tgc cag ggc tgg ctt gaa ggc tat ctt ctc agt ggc cgg cac ggc ttc    1440
Cys Gln Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Ser Gly Arg His Gly Phe
465                 470                 475                 480
ttt tcc tgc tac gaa gcc ttc atc cac att atc gat tcc atg ttc aac    1488
Phe Ser Cys Tyr Glu Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser Met Phe Asn
                485                 490                 495
caa cat gcc aaa tgg ttg cag gtt gcg cgc gaa ctg gaa tgg cgc aag    1536
Gln His Ala Lys Trp Leu Gln Val Ala Arg Glu Leu Glu Trp Arg Lys
            500                 505                 510
ccc atc tca tcg ctc aat tat ctg ctg acc tcc cat gtc tgg cgg cag    1584
Pro Ile Ser Ser Leu Asn Tyr Leu Leu Thr Ser His Val Trp Arg Gln
        515                 520                 525
gac cat aac ggc ttc tcc cat cag gat ccc ggc ttc gtc gat ctc gtc    1632
Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Val Asp Leu Val
    530                 535                 540
gcc aac aaa agc gcc gat atc gtg cgt gtc tat ttc ccg ccg gat gcc    1680
Ala Asn Lys Ser Ala Asp Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Pro Asp Ala
545                 550                 555                 560
aac acc ctt ttg tgg gtg gga gat cac tgc ctg aaa acc tgg aac cgc    1728
Asn Thr Leu Leu Trp Val Gly Asp His Cys Leu Lys Thr Trp Asn Arg
                565                 570                 575
gtg aat gtc atc gtg gcg ggc aag cag ccg gaa ccg caa tgg ctg acc    1776
Val Asn Val Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Glu Pro Gln Trp Leu Thr
            580                 585                 590
atg gcg gag gct gag aaa cat tgc gaa gca ggt ctc ggc ata tgg gaa    1824
Met Ala Glu Ala Glu Lys His Cys Glu Ala Gly Leu Gly Ile Trp Glu
        595                 600                 605
tgg gcg ggc acg gaa gac ggg ctg gag ccg gat atc gtc atg gcc tgc    1872
Trp Ala Gly Thr Glu Asp Gly Leu Glu Pro Asp Ile Val Met Ala Cys
    610                 615                 620
gcg ggc gat gtg ccg acc atg gaa acg ctt gcc gcg gtt gat ctt ctg    1920
Ala Gly Asp Val Pro Thr Met Glu Thr Leu Ala Ala Val Asp Leu Leu
625                 630                 635                 640
cgc cag tcc ctg ccg cat ctg cgc att cgc gtg gtg aat gtg gtt gac    1968
Arg Gln Ser Leu Pro His Leu Arg Ile Arg Val Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
ctc atg gtg ctg caa tcg ccg cat cag cac ccg cat ggc att tcc gat    2016
Leu Met Val Leu Gln Ser Pro His Gln His Pro His Gly Ile Ser Asp
            660                 665                 670
gag gaa ttc gac cgg atg ttc acc acc aac agg ccc gtc atc ttc gcc    2064
Glu Glu Phe Asp Arg Met Phe Thr Thr Asn Arg Pro Val Ile Phe Ala
        675                 680                 685
tat cac ggc tat cct tat ctc atc cat cga ctg gtc tat aag cgc acc    2112
Tyr His Gly Tyr Pro Tyr Leu Ile His Arg Leu Val Tyr Lys Arg Thr
    690                 695                 700
aac cac tcc aat ttc cac gtt cgt ggt ttt atc gag cag gga acg acc    2160
Asn His Ser Asn Phe His Val Arg Gly Phe Ile Glu Gln Gly Thr Thr
705                 710                 715                 720
aca acg cct ttc gac atg acc gtg ctg aac gag ctg gat cgt ttc cac    2208
Thr Thr Pro Phe Asp Met Thr Val Leu Asn Glu Leu Asp Arg Phe His
                725                 730                 735
ctc gcg atg gaa gcc gtc gag cgc ctg ccg ctg ggc gaa agc gtt gcc    2256
Leu Ala Met Glu Ala Val Glu Arg Leu Pro Leu Gly Glu Ser Val Ala
            740                 745                 750
aaa ccc ctg atc gac aat ttc acg gag aaa ctt gcg ctg cat aag gac    2304
Lys Pro Leu Ile Asp Asn Phe Thr Glu Lys Leu Ala Leu His Lys Asp
        755                 760                 765
tat atc cga cag cat ggt gag gac atg ccg gaa atc cgc gac tgg aaa    2352
Tyr Ile Arg Gln His Gly Glu Asp Met Pro Glu Ile Arg Asp Trp Lys
    770                 775                 780
tgg aca tgg ccg cga taa                                           2370
Trp Thr Trp Pro Arg
785
<210>77
<211>789
<212>PRT
<213>猪布鲁氏菌
<400>77
Val Pro Ala Lys Gly Pro Leu Thr Pro Gln Gln Leu Ser Leu Ile Asn
1               5                   10                  15
Arg Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln Ile Tyr Leu
            20                  25                  30
Met Lys Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Gln Pro Glu His Ile Lys
        35                  40                  45
Pro Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu Asn Phe Ile
    50                  55                  60
Tyr Ala His Leu Asn Arg Ile Ile Gln Gln Arg Asn Ala Asn Val Ile
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Gly Met Val Ala Asn Thr
                85                  90                  95
Tyr Leu Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Ile Tyr Pro Ala Ile Ser Glu Asp
            100                 105                 110
Glu Ala Gly Met Glu Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe Pro Gly Gly
        115                 120                 125
Ile Pro Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile His Glu Gly
    130                 135                 140
Gly Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Val His Ala Tyr Gly Ala Ala Phe Asp
145                 150                 155                 160
Asn Pro Asp Leu Val Val Ala Cys Val Val Gly Asp Gly Glu Ala Glu
                165                 170                 175
Thr Gly Ala Leu Ala Thr Ser Trp His Ser Asn Lys Phe Leu Asn Pro
            180                 185                 190
Ala Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn Gly Tyr Lys
        195                 200                 205
Ile Ala Asn Pro Thr Val Leu Ala Arg Leu Ser Asp Asp Asp Leu Asp
    210                 215                 220
Asn Leu Phe Arg Gly Tyr Gly Tyr Glu Pro Phe Phe Val Glu Gly Ser
225                 230                 235                 240
Glu Pro Ala Asp Met His Gln Lys Met Ala Ala Thr Leu Asp Thr Ile
                245                 250                 255
Phe Gln Arg Ile Gln Asp Ile Lys Lys Asn Ala Asp Val His Ser Pro
            260                 265                 270
Glu Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Ile Leu Arg Ser Pro Lys Gly Trp
        275                 280                 285
Thr Gly Pro Lys Thr Val Asp Gly Leu Val Val Glu Asn Tyr Trp Arg
    290                 295                 300
Ala His Gln Val Pro Val Ala Asn Cys Arg Glu Asn Asp Ala His Arg
305                 310                 315                 320
Lys Ile Leu Glu Asp Trp Met Lys Ser Tyr Asp Pro Ser Asp Leu Phe
                325                 330                 335
Asp Glu Lys Gly Ala Leu Lys Pro Glu Leu Arg Ala Leu Ala Pro Lys
            340                 345                 350
Gly Glu Ala Arg Ile Gly Ala Asn Pro His Ala Asn Gly Gly Leu Leu
        355                 360                 365
Arg Lys Glu Leu His Met Pro Asp Phe Arg Gln Tyr Ala Val Asn Val
    370                 375                 380
Thr Glu Pro Gly Ala Ile Glu Ala Gln Ser Thr Lys Ile Leu Gly Asp
385                 390                 395                 400
Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Leu Asn Glu Thr Glu Lys Asn Phe Arg
                405                 410                 415
Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly Ser Val Leu
            420                 425                 430
Glu Ala Thr Asn Arg Val Trp Met Ala Glu Thr Leu Asp Met Asp Asp
        435                 440                 445
His Leu Ala Ala Asp Gly Arg Val Met Glu Val Leu Ser Glu His Leu
    450                 455                 460
Cys Gln Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Ser Gly Arg His Gly Phe
465                 470                 475                 480
Phe Ser Cys Tyr Glu Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser Met Phe Asn
                485                 490                 495
Gln His Ala Lys Trp Leu Gln Val Ala Arg Glu Leu Glu Trp Arg Lys
            500                 505                 510
Pro Ile Ser Ser Leu Asn Tyr Leu Leu Thr Ser His Val Trp Arg Gln
        515                 520                 525
Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Val Asp Leu Val
    530                 535                 540
Ala Asn Lys Ser Ala Asp Ile Val Arg Val Tyr Phe Pro Pro Asp Ala
545                 550                 555                 560
Asn Thr Leu Leu Trp Val Gly Asp His Cys Leu Lys Thr Trp Asn Arg
                565                 570                 575
Val Asn Val Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Glu Pro Gln Trp Leu Thr
            580                 585                 590
Met Ala Glu Ala Glu Lys His Cys Glu Ala Gly Leu Gly Ile Trp Glu
        595                 600                 605
Trp Ala Gly Thr Glu Asp Gly Leu Glu Pro Asp Ile Val Met Ala Cys
    610                 615                 620
Ala Gly Asp Val Pro Thr Met Glu Thr Leu Ala Ala Val Asp Leu Leu
625                 630                 635                 640
Arg Gln Ser Leu Pro His Leu Arg Ile Arg Val Val Asn Val Val Asp
                645                 650                 655
Leu Met Val Leu Gln Ser Pro His Gln His Pro His Gly Ile Ser Asp
            660                 665                 670
Glu Glu Phe Asp Arg Met Phe Thr Thr Asn Arg Pro Val Ile Phe Ala
        675                 680                 685
Tyr His Gly Tyr Pro Tyr Leu Ile His Arg Leu Val Tyr Lys Arg Thr
    690                 695                 700
Asn His Ser Asn Phe His Val Arg Gly Phe Ile Glu Gln Gly Thr Thr
705                 710                 715                 720
Thr Thr Pro Phe Asp Met Thr Val Leu Asn Glu Leu Asp Arg Phe His
                725                 730                 735
Leu Ala Met Glu Ala Val Glu Arg Leu Pro Leu Gly Glu Ser Val Ala
            740                 745                 750
Lys Pro Leu Ile Asp Asn Phe Thr Glu Lys Leu Ala Leu His Lys Asp
        755                 760                 765
Tyr Ile Arg Gln His Gly Glu Asp Met Pro Glu Ile Arg Asp Trp Lys
    770                 775                 780
Trp Thr Trp Pro Arg
785
<210>78
<211>2379
<212>DNA
<213>流产布鲁氏菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2379)
<223>
<400>78
atg agc act gtg cca gca aaa ggg cct ctc aca ccg cag cag ctt tca     48
Met Ser Thr Val Pro Ala Lys Gly Pro Leu Thr Pro Gln Gln Leu Ser
1               5                   10                  15
ctc atc aac cgt tac tgg cgc gcg gcg aat tat ctt tcc gtc ggc cag     96
Leu Ile Asn Arg Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln
            20                  25                  30
att tat ctg atg aaa aat ccc ctg ttg cgc gaa ccg ctc cag cct gag    144
Ile Tyr Leu Met Lys Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Gln Pro Glu
        35                  40                  45
cac atc aag ccg cgg ctt ctc ggc cat tgg ggc acg aca ccc ggc ctc    192
His Ile Lys Pro Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Thr Thr Pro Gly Leu
    50                  55                  60
aat ttc atc tat gcg cat ctc aac cgc attatt cag cag cgc aac gcc     240
Asn Phe Ile Tyr Ala His Leu Asn Arg Ile Ile Gln Gln Arg Asn Ala
65                  70                  75                  80
aat gtg atc tat att tgc ggc ccc ggc cat ggc ggg ccg ggc atg gtg    288
Asn Val Ile Tyr Ile Cys Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Gly Met Val
                85                  90                  95
gcc aac acc tat ctg gag ggc acc tat tcc gaa atc tat ccc gca atc    336
Ala Asn Thr Tyr Leu Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Ile Tyr Pro Ala Ile
            100                 105                 110
agc gaa gat gaa gcg ggc atg gaa agg ctc ttc cgc cag ttt tcc ttc    384
Ser Glu Asp Glu Ala Gly Met Glu Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe
        115                 120                 125
ccc ggc gga ata cca agc cat gcc gcg ccg gaa aca ccg ggc tct atc    432
Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile
    130                 135                 140
cac gaa ggg ggc gaa ctg ggt tat gcg ctc gtc cac gcc tat ggt gcg    480
His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Val His Ala Tyr Gly Ala
145                 150                 155                 160
gcc ttc gac aat ccc gat ctg gtg gtg gcc tgc gtc gtg ggc gac gga    528
Ala Phe Asp Asn Pro Asp Leu Val Mal Ala Cys Val Val Gly Asp Gly
                165                 170                 175
gaa gcg gaa acc ggc gcg ctt gca act tcg tgg cac tcc aac aaa ttc    576
Glu Ala Glu Thr Gly Ala Leu Ala Thr Ser Trp His Ser Asn Lys Phe
            180                 185                 190
ctc aat ccg gcg cgc gat ggt gcg gtt ctg ccg atc ctg cat ctc aat    624
Leu Asn Pro Ala Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn
        195                 200                 205
ggc tac aag atc gcc aac ccc acc gtg ctg gcc cgc ctt tcg gat gat    672
Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Val Leu Ala Arg Leu Ser Asp Asp
    210                 215                 220
gat ctg gac aat ctt ttc cgt ggc tac ggt tat gag cct ttc ttt gtt    720
Asp Leu Asp Asn Leu Phe Arg Gly Tyr Gly Tyr Glu Pro Phe Phe Val
225                 230                 235                 240
gaa ggc agc gag cct gcc gac atg cac cag aag atg gcc gca aca ctg    768
Glu Gly Ser Glu Pro Ala Asp Met His Gln Lys Met Ala Ala Thr Leu
                245                 250                 255
gac acg att ttc cag cgc att cag gac atc aag aaa aat gcc gat gtg    816
Asp Thr Ile Phe Gln Arg Ile Gln Asp Ile Lys Lys Asn Ala Asp Val
            260                 265                 270
cac tcg ccc gag cgc ccg cgc tgg ccg atg att att ctc aga agc ccg     864
His Ser Pro Glu Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Ile Leu Arg Ser Pro
        275                 280                 285
aag ggc tgg acc ggc cca aaa acc gtg gac ggt ctg gtt gtt gaa aac     912
Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Thr Val Asp Gly Leu Val Val Glu Asn
    290                 295                 300
tat tgg cgc gcc cat gag gtg ccg gtt gcc aat tgc cgc gaa aac gat     960
Tyr Trp Arg Ala His Glu Val Pro Val Ala Asn Cys Arg Glu Asn Asp
305                 310                 315                 320
gcc cat cgc aaa atc ctc gaa gac tgg atg aag agt tac gac ccg tcc    1008
Ala His Arg Lys Ile Leu Glu Asp Trp Met Lys Ser Tyr Asp Pro Ser
                325                 330                 335
gat ctg ttc gac gaa aaa ggg gcg ctg aag cct gaa ttg cgg gcg ctg    1056
Asp Leu Phe Asp Glu Lys Gly Ala Leu Lys Pro Glu Leu Arg Ala Leu
            340                 345                 350
gcg cca aag ggt gaa gcg cgc ata ggg gcc aat ccg cat gcc aat ggc    1104
Ala Pro Lys Gly Glu Ala Arg Ile Gly Ala Asn Pro His Ala Asn Gly
        355                 360                 365
ggg ctc ttg cgt aaa gag ctt cac atg ccg gat ttc cgc caa tat gcg    1152
Gly Leu Leu Arg Lys Glu Leu His Met Pro Asp Phe Arg Gln Tyr Ala
    370                 375                 380
gtc aat gtc acc gaa ccg gga gcg ata gaa gcg caa tca acc aaa ata    1200
Val Asn Val Thr Glu Pro Gly Ala Ile Glu Ala Gln Ser Thr Lys Ile
385                 390                 395                 400
ttg ggc gat ttt ctg cgc gat gtg atg aaa ctg aac gag acg gaa aag    1248
Leu Gly Asp Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Leu Asn Glu Thr Glu Lys
                405                 410                 415
aac ttc cgc atc ttc ggc ccc gac gaa acc gcc tcc aac agg ctc ggc    1296
Asn Phe Arg Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly
            420                 425                 430
agc gta tta gag gcg acg aac cgg gtc tgg atg gcc gaa acg ctg gac    1344
Ser Val Leu Glu Ala Thr Asn Arg Val Trp Met Ala Glu Thr Leu Asp
        435                 440                 445
atg gat gac cac ctc gcc gcc gac ggg cgt gta atg gag gtt ctc agc    1392
Met Asp Asp His Leu Ala Ala Asp Gly Arg Val Met Glu Val Leu Ser
    450                 455                 460
gaa cat ctc tgc cag ggc tgg ctt gaa ggc tat ctt ctc agt ggc cgg    1440
Glu His Leu Cys Gln Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Ser Gly Arg
465                 470                 475                 480
cac ggc ttc ttt tcc tgc tac gaa gcc ttc atc cac att atc gat tcc    1488
His Gly Phe Phe Ser Cys Tyr Glu Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser
                485                 490                 495
atg ttc aac caa cat gcc aaa tgg ttg cag gtt gcg cgc gaa ctg gaa    1536
Met Phe Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Gln Val Ala Arg Glu Leu Glu
            500                 505                 510
tgg cgc aag ccc atc tca tcg ctc aat tat ctg ctg acc tcc cat gtc    1584
Trp Arg Lys Pro Ile Ser Ser Leu Asn Tyr Leu Leu Thr Ser His Val
        515                 520                 525
tgg cgg cag gac cat aac ggc ttc tcc cat cag gat ccc ggc ttc gtc    l632
Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Val
    530                 535                 540
gat ctc gtc gcc aac aaa agc gcc gat atc gcg cgt gtc tat ttc ccg    1680
Asp Leu Val Ala Asn Lys Ser Ala Asp Ile Ala Arg Val Tyr Phe Pro
545                 550                 555                 560
ccg gat gcc aac acc ctt ttg tgg gtg gga gat cac tgc ctg aaa acc    1728
Pro Asp Ala Asn Thr Leu Leu Trp Val Gly Asp His Cys Leu Lys Thr
                565                 570                 575
tgg aac cgc gtg aat gtc atc gtg gcg ggc aag cag ccg gaa ccg caa    1776
Trp Asn Arg Val Asn Val Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Glu Pro Gln
            580                 585                 590
tgg ctg acc atg gcg gag gct gag aaa cat tgc gaa gca ggt ctc ggc    1824
Trp Leu Thr Met Ala Glu Ala Glu Lys His Cys Glu Ala Gly Leu Gly
        595                 600                 605
ata tgg gaa tgg gcg ggt acg gaa gac ggg ctg gag ccg gat atc gtc    1872
Ile Trp Glu Trp Ala Gly Thr Glu Asp Gly Leu Glu Pro Asp Ile Val
    610                 615                 620
atg gcc tgc gcg ggc gat gtg ccg acc atg gaa acg ctt gcc gcg gtt    1920
Met Ala Cys Ala Gly Asp Val Pro Thr Met Glu Thr Leu Ala Ala Val
625                 630                 635                 640
gat ctt ctg cgc cag tcc ctg ccg cat ctg cgc att cgc gtg gtg aat    1968
Asp Leu Leu Arg Gln Ser Leu Pro His Leu Arg Ile Arg Val Val Asn
                645                 650                 655
gtg gtt gac ctc atg gtg ctg caa tcg ccg cat cag cac ccg cat ggc    2016
Val Val Asp Leu Met Val Leu Gln Ser Pro His Gln His Pro His Gly
            660                 665                 670
att tcc gat gag gaa ttc gac cgg atg ttc acc acc aac agg ccc gtc    2064
Ile Ser Asp Glu Glu Phe Asp Arg Met Phe Thr Thr Asn Arg Pro Val
        675                 680                 685
atc ttc gcc tat cac ggc tat cct tat ctc atc cat cga ctg gtc tat    2112
Ile Phe Ala Tyr His Gly Tyr Pro Tyr Leu Ile His Arg Leu Val Tyr
    690                 695                 700
aag cgc acc aac cac tcc aat ttc cac gtt cgt ggt ttt atc gag cag    2160
Lys Arg Thr Asn His Ser Asn Phe His Val Arg Gly Phe Ile Glu Gln
705                 710                 715                 720
gga acg acc aca acg cct ttc gac atg acc gtg ctg aac gag ctg gat    2208
Gly Thr Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Thr Val Leu Asn Glu Leu Asp
                725                 730                 735
cgt ttc cac ctc gcg atg gaa gcc gtc gag cgc ctg ccg ctg ggc gaa    2256
Arg Phe His Leu Ala Met Glu Ala Val Glu Arg Leu Pro Leu Gly Glu
            740                 745                 750
agc gtt gcc aaa ccc ctg atc gac aat ttc acg gag aaa ctt gcg ctg    2304
Ser Val Ala Lys Pro Leu Ile Asp Asn Phe Thr Glu Lys Leu Ala Leu
        755                 760                 765
cat aag gac tat atc cga cag cat ggt gag gac atg ccg gaa atc cgc    2352
His Lys Asp Tyr Ile Arg Gln His Gly Glu Asp Met Pro Glu Ile Arg
    770                 775                 780
gac tgg aaa tgg aca tgg ccg cga taa                                2379
Asp Trp Lys Trp Thr Trp Pro Arg
785                 790
<210>79
<211>792
<212>PRT
<213>流产布鲁氏菌
<400>79
Met Ser Thr Val Pro Ala Lys Gly Pro Leu Thr Pro Gln Gln Leu Ser
1               5                   10                  15
Leu Ile Asn Arg Tyr Trp Arg Ala Ala Asn Tyr Leu Ser Val Gly Gln
            20                  25                  30
Ile Tyr Leu Met Lys Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu Gln Pro Glu
        35                  40                  45
His Ile Lys Pro Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Trr Thr Pro Gly Leu
    50                  55                  60
Asn Phe Ile Tyr Ala His Leu Asn Arg Ile Ile Gln Gln Arg Asn Ala
65                  70                  75                  80
Asn Val Ile Tyr Ile Cys Gly Pro Gly His Gly Gly Pro Gly Met Val
                85                  90                  95
Ala Asn Thr Tyr Leu Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Ile Tyr Pro Ala Ile
            100                 105                 110
Ser Glu Asp Glu Ala Gly Met Glu Arg Leu Phe Arg Gln Phe Ser Phe
        115                 120                 125
Pro Gly Gly Ile Pro Ser His Ala Ala Pro Glu Thr Pro Gly Ser Ile
    130                 135                 140
His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Ala Leu Val His Ala Tyr Gly Ala
145                 150                 155                 160
Ala Phe Asp Asn Pro Asp Leu Val Val Ala Cys Val Val Gly Asp Gly
                165                 170                 175
Glu Ala Glu Thr Gly Ala Leu Ala Thr Ser Trp His Ser Asn Lys Phe
            180                 185                 190
Leu Asn Pro Ala Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu His Leu Asn
        195                 200                 205
Gly Tyr Lys Ile Ala Asn Pro Thr Val Leu Ala Arg Leu Ser Asp Asp
    210                 215                 220
Asp Leu Asp Asn Leu Phe Arg Gly Tyr Gly Tyr Glu Pro Phe Phe Val
225                 230                 235                 240
Glu Gly Ser Glu Pro Ala Asp Met His Gln Lys Met Ala Ala Thr Leu
                245                 250                 255
Asp Thr Ile Phe Gln Arg Ile Gln Asp Ile Lys Lys Asn Ala Asp Val
            260                 265                 270
His Ser Pro Glu Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Ile Leu Arg Ser Pro
        275                 280                 285
Lys Gly Trp Thr Gly Pro Lys Thr Val Asp Gly Leu Val Val Glu Asn
    290                 295                 300
Tyr Trp Arg Ala His Glu Val Pro Val Ala Asn Cys Arg Glu Asn Asp
305                 310                 315                 320
Ala His Arg Lys Ile Leu Glu Asp Trp Met Lys Ser Tyr Asp Pro Ser
                325                 330                 335
Asp Leu Phe Asp Glu Lys Gly Ala Leu Lys Pro Glu Leu Arg Ala Leu
            340                 345                 350
Ala Pro Lys Gly Glu Ala Arg Ile Gly Ala Asn Pro His Ala Asn Gly
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Arg Lys Glu Leu His Met Pro Asp Phe Arg Gln Tyr Ala
    370                 375                 380
Val Asn Val Thr Glu Pro Gly Ala Ile Glu Ala Gln Ser Thr Lys Ile
385                 390                 395                 400
Leu Gly Asp Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Leu Asn Glu Thr Glu Lys
                405                 410                 415
Asn Phe Arg Ile Phe Gly Pro Asp Glu Thr Ala Ser Asn Arg Leu Gly
            420                 425                 430
Ser Val Leu Glu Ala Thr Asn Arg Val Trp Met Ala Glu Thr Leu Asp
        435                 440                 445
Met Asp Asp His Leu Ala Ala Asp Gly Arg Val Met Glu Val Leu Ser
    450                 455                 460
Glu His Leu Cys Gln Gly Trp Leu Glu Gly Tyr Leu Leu Ser Gly Arg
465                 470                 475                 480
His Gly Phe Phe Ser Cys Tyr Glu Ala Phe Ile His Ile Ile Asp Ser
                485                 490                 495
Met Phe Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Gln Val Ala Arg Glu Leu Glu
            500                 505                 510
Trp Arg Lys Pro Ile Ser Ser Leu Asn Tyr Leu Leu Thr Ser His Val
        515                 520                 525
Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Ser His Gln Asp Pro Gly Phe Val
    530                 535                 540
Asp Leu Val Ala Asn Lys Ser Ala Asp Ile Ala Arg Val Tyr Phe Pro
545                 550                 555                 560
Pro Asp Ala Asn Thr Leu Leu Trp Val Gly Asp His Cys Leu Lys Thr
                565                 570                 575
Trp Asn Arg Val Asn Val Ile Val Ala Gly Lys Gln Pro Glu Pro Gln
            580                 585                 590
Trp Leu Thr Met Ala Glu Ala Glu Lys His Cys Glu Ala Gly Leu Gly
        595                 600                 605
Ile Trp Glu Trp Ala Gly Thr Glu Asp Gly Leu Glu Pro Asp Ile Val
    610                 615                 620
Met Ala Cys Ala Gly Asp Val Pro Thr Met Glu Thr Leu Ala Ala Val
625                 630                 635                 640
Asp Leu Leu Arg Gln Ser Leu Pro His Leu Arg Ile Arg Val Val Asn
                645                 650                 655
Val Val Asp Leu Met Val Leu Gln Ser Pro His Gln His Pro His Gly
            660                 665                 670
Ile Ser Asp Glu Glu Phe Asp Arg Met Phe Thr Thr Asn Arg Pro Val
        675                 680                 685
Ile Phe Ala Tyr His Gly Tyr Pro Tyr Leu Ile His Arg Leu Val Tyr
    690                 695                 700
Lys Arg Thr Asn His Ser Asn Phe His Val Arg Gly Phe Ile Glu Gln
705                 710                 715                 720
Gly Thr Thr Thr Thr Pro Phe Asp Met Thr Val Leu Asn Glu Leu Asp
                725                 730                 735
Arg Phe His Leu Ala Met Glu Ala Val Glu Arg Leu Pro Leu Gly Glu
            740                 745                 750
Ser Val Ala Lys Pro Leu Ile Asp Asn Phe Thr Glu Lys Leu Ala Leu
        755                 760                 765
His Lys Asp Tyr Ile Arg Gln His Gly Glu Asp Met Pro Glu Ile Arg
    770                 775                 780
Asp Trp Lys Trp Thr Trp Pro Arg
785                 790
<210>80
<211>2436
<212>DNA
<213>荚膜甲基球菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2436)
<223>
<400>80
atg gca acc caa ttc ccc ctg tcc tcc gaa ttc gaa cgg ctc acc gtc     48
Met Ala Thr Gln Phe Pro Leu Ser Ser Glu Phe Glu Arg Leu Thr Val
1               5                   10                 15
tac ggg ccg acc cgc gcc act gtc agc gga aca ccg ctg gat gcc gaa     96
Tyr Gly Pro Thr Arg Ala Thr Val Ser Gly Thr Pro Leu Asp Ala Glu
            20                  25                  30
gaa gtc cgc aaa atc cat gcg ttc tgg cga gcc tgc aat tac ctg gcg    144
Glu Val Arg Lys Ile His Ala Phe Trp Arg Ala Cys Asn Tyr Leu Ala
        35                  40                  45
ctg ggc atg atc tac ctg cgg ggg aat ccg ctg ctg cgt gaa ccg ctc    192
Leu Gly Met Ile Tyr Leu Arg Gly Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu
    50                  55                  60
aaa ccc gag cac atc aag cac cgt ctg ctc ggc cat tgg ggc tcc agc     240
Lys Pro Glu His Ile Lys His Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Ser Ser
65                  70                  75                  80
ccc aac ctt gcg ttc gtc tac acc cat ctg aac cgg gcc atc cgg aaa     288
Pro Asn Leu Ala Phe Val Tyr Thr His Leu Asn Arg Ala Ile Arg Lys
                85                  90                  95
cac gac ctc gac atg atc ttc atg gcc ggc ccc ggc cac ggc gcc ccc     336
His Asp Leu Asp Met Ile Phe Met Ala Gly Pro Gly His Gly Ala Pro
            100                 105                 110
ggc gtg ctg ggc ccg ctc tac ctg gaa ggc agc tac tcc gaa atc tac     384
Gly Val Leu Gly Pro Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Tyr Ser Glu Ile Tyr
        115                 120                 125
ccc gac aag gac ctg agc gaa gaa ggc ctg ctg aac ttc ttc aag cag     432
Pro Asp Lys Asp Leu Ser Glu Glu Gly Leu Leu Asn Phe Phe Lys Gln
    130                 135                 140
ttc tcc ttc ccc ggc gga atc ggc agc cat tgc acc ccc gag aca ccg     480
Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Gly Ser His Cys Thr Pro Glu Thr Pro
145                 150                 155                 160
ggc tcg atc cac gag ggc ggc gag ctg ggc tac gtg ctg tcg cac gcc     528
Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Val Leu Ser His Ala
                165                 170                 175
tgc ggc gca gcc ttc gac aac ccg gac ctg atc gtg gcc gcc gtg gtc     576
Cys Gly Ala Ala Phe Asp Asn Pro Asp Leu Ile Val Ala Ala Val Val
            180                 185                 190
ggc gac ggc gag gcg gaa acc ggc ccc ctg gcc act tcc tgg cac atc     624
Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp His Ile
        195                 200                 205
aac aaa ttt ctc aac ccg atc cgc gac ggc gcg gtg ctg ccg atc ctc     672
Asn Lys Phe Leu Asn Pro Ile Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu
    210                 215                 220
aac ctc aac ggc tac aag atc aac aac ccc acc ctg ctg gcg cgc atc     720
Asn Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Asn Asn Pro Thr Leu Leu Ala Arg Ile
225                 230                 235                 240
agc cac gaa gaa ttg gaa aat ctg ctc agg ggt tac ggc tac acg cct     768
Ser His Glu Glu Leu Glu Asn Leu Leu Arg Gly Tyr Gly Tyr Thr Pro
                245                 250                 255
tat ttc gtg gag ggc tcg gaa ccg gaa agc atg cac cag gcg atg gcc     816
Tyr Phe Val Glu Gly Ser Glu Pro Glu Ser Met His Gln Ala Met Ala
            260                 265                 270
gcg acg gtg gac cgc agc atc gaa gac atc cgc gcc gcc cag acc gag     864
Ala Thr Val Asp Arg Ser Ile Glu Asp Ile Arg Ala Ala Gln Thr Glu
        275                 280                 285
gcc cgc gcc agc ggc atc gcc cga cgg ccg cgc tgg ccg atg atc gtg     912
Ala Arg Ala Ser Gly Ile Ala Arg Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Val
    290                 295                 300
ctg cgc tcg ccc aag ggc tgg acc gcg cca cgc cag atc gac ggc cac     960
Leu Arg Ser Pro Lys Gly Trp Thr Ala Pro Arg Gln Ile Asp Gly His
305                 310                 315                 320
aac gtc gag ggc ttc tgg cgc gct cat cag gtg ccg gta gcc gac gtc    1008
Asn Val Glu Gly Phe Trp Arg Ala His Gln Val Pro Val Ala Asp Val
                325                 330                 335
gcg aaa aat ccc gaa cac ctg aag ctg ctg gaa ggc tgg atg cgc agc    1056
Ala Lys Asn Pro Glu His Leu Lys Leu Leu Glu Gly Trp Met Arg Ser
            340                 345                 350
tac aag ccg gaa gaa ctg ttc gac gcc gaa ggc tgc ccc gtc gcc gaa    1104
Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Ala Glu Gly Cys Pro Val Ala Glu
        355                 360                 365
atc cgg gaa atg gcg ccg gcc ggt ctc cgc cgc atg ggt ctc aac ccc    1152
Ile Arg Glu Met Ala Pro Ala Gly Leu Arg Arg Met Gly Leu Asn Pro
    370                 375                 380
cac gcc aac ggc ggc cat ctg aaa aag gcc ctg cgc atc cct aat ttc    1200
His Ala Asn Gly Gly His Leu Lys Lys Ala Leu Arg Ile Pro Asn Phe
385                 390                 395                 400
cgc aac tac ggc atc gaa gtc gcc aaa ccg ggc cag atc gaa gcg ccg    1248
Arg Asn Tyr Gly Ile Glu Val Ala Lys Pro Gly Gln lle Glu Ala Pro
                405                 410                 415
aac acc cag ccg ctg ggc gtg ttc ctg cgc gac gtg atg aag gag aac    1296
Asn Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Glu Asn
            420                 425                 430
gcg cac aac ttc cgg ctg ttc ggc cct gac gag aat acc tcc aac aag    1344
Ala His Asn Phe Arg Leu Phe Gly Pro Asp Glu Asn Thr Ser Asn Lys
        435                 440                 445
ctg gac gcc gtc tac gcc gct gcc aag aaa ttc tgg atc gcc gag tat    1392
Leu Asp Ala Val Tyr Ala Ala Ala Lys Lys Phe Trp Ile Ala Glu Tyr
    450                 455                 460
ttc ccc gaa gac cag gat ggc ggc gaa ctg gcc ccc gac ggc cgg gtc    1440
Phe Pro Glu Asp Gln Asp Gly Gly Glu Leu Ala Pro Asp Gly Arg Val
465                 470                 475                 480
atg gaa atg ctc agc gag cat acc ctg gaa ggc atg ctg gaa ggc tac    1488
Met Glu Met Leu Ser Glu His Thr Leu Glu Gly Met Leu Glu Gly Tyr
                485                 490                 495
ctt ctg acc ggg cgc cac ggc ttc ctc tcg acc tac gaa gcc ttc gtc    1536
Leu Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Leu Ser Thr Tyr Glu Ala Phe Val
            500                 505                 510
cac gtc atc gat tcg atg ttc aac cag cac gcc aag tgg ctg tcc atc    1584
His Val Ile Asp Ser Met Phe Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Ser Ile
        515                 520                 525
tgc aac cag ctg tcc tgg cgc cag gac gtg gcc tcg ctc aac ctg ctc    1632
Cys Asn Gln Leu Ser Trp Arg Gln Asp Val Ala Ser Leu Asn Leu Leu
    530                 535                 540
atc act tcg acg gtc tgg cga cag gac cac aac ggc ttc acc cac cag    1680
Ile Thr Ser Thr Val Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Thr His Gln
545                 550                 555                 560
gac ccc ggt ttc ctg gac gtc gtc gtg aac aag agc gcc gac gtc acc    1728
Asp Pro Gly Phe Leu Asp Val Val Val Asn Lys Ser Ala Asp Val Thr
                565                 570                 575
cgc atc tac ctg ccg ccc gac gtc aac agc ctg ctg tcg gtc gcc gac    1776
Arg Ile Tyr Leu Pro Pro Asp Val Asn Ser Leu Leu Ser Val Ala Asp
            580                 585                 590
cac tgc ctg cgc agc cag aac tac atc aac gtg atc gtg tcg gac aaa    1824
His Cys Leu Arg Ser Gln Asn Tyr Ile Asn Val Ile Val Ser Asp Lys
        595                 600                 605
cag ttg cat ctg cag ttc atg gac atg gac gcc gcg atc gcc cat tgc    1872
Gln Leu His Leu Gln Phe Met Asp Met Asp Ala Ala Ile Ala His Cys
    610                 615                 620
acg gag ggc ttg ggc atc tgg gaa tgg gcc agc aac gac gag ggc cag    1920
Thr Glu Gly Leu Gly Ile Trp Glu Trp Ala Ser Asn Asp Glu Gly Gln
625                 630                 635                 640
gag ccc gac gtg gtc atg gcc tgc gcc ggc gac atc ccg acc ctg gaa    1968
Glu Pro Asp Val Val Met Ala Cys Ala Gly Asp Ile Pro Thr Leu Glu
                645                 650                 655
gcc ctg gcc gcc acc gcc ctg ctg cgc gag gag ttc ccg gaa ctg aag    2016
Ala Leu Ala Ala Thr Ala Leu Leu Arg Glu Glu Phe Pro Glu Leu Lys
            660                 665                 670
atc cgc ttc atc aac gtg gtg gat ctg ttc aag ctg cag ccc gag tcc    2064
Ile Arg Phe Ile Asn Val Val Asp Leu Phe Lys Leu Gln Pro Glu Ser
        675                 680                 685
gag cat ccg cac ggt ctc agc gac aag gat ttc gac agc ctg ttc acc    2112
Glu His Pro His Gly Leu Ser Asp Lys Asp Phe Asp Ser Leu Phe Thr
    690                 695                 700
agg gac aag ccg gtc atc ttc aac ttc cac ggc tat ccc tgg ctg atc    2160
Arg Asp Lys Pro Val Ile Phe Asn Phe His Gly Tyr Pro Trp Leu Ile
705                 710                 715                 720
cac cgc ctc gcc tac cgg cgc acc aac cac gcc aac atg cac gtg cgc    2208
His Arg Leu Ala Tyr Arg Arg Thr Asn His Ala Asn Met His Val Arg
                725                 730                 735
ggc tac aag gag aaa ggc aac atc aac acc ccg ctg gaa ctg gcg atc    2256
Gly Tyr Lys Glu Lys Gly Asn Ile Asn Thr Pro Leu Glu Leu Ala Ile
            740                 745                 750
aac aac cag atc gac cgc ttc agc ctg gcc atc gac gtc atc gac cgg    2304
Asn Asn Gln Ile Asp Arg Phe Ser Leu Ala Ile Asp Val Ile Asp Arg
        755                 760                 765
att ccg gag atc gcg gtc tcc ggc gcc cac gcc aag gcc cgg ttc cgc    2352
Ile Pro Glu Ile Ala Val Ser Gly Ala His Ala Lys Ala Arg Phe Arg
    770                 775                 780
aaa cag cag atc gcc tgc cgc cag tat gcc tac gag cac ggc gtc gac    2400
Lys Gln Gln Ile Ala Cys Arg Gln Tyr Ala Tyr Glu His Gly Val Asp
785                 790                 795                 800
atg ccg gag gtc gcg ggc tgg cgc tgg ccg ggc tga                    2436
Met Pro Glu Val Ala Gly Trp Arg Trp Pro Gly
                805                 810
<210>81
<211>811
<212>PRT
<213>荚膜甲基球菌
<400>81
Met Ala Tht Gln Phe Pro Leu Ser Ser Glu Phe Glu Arg Leu Thr Val
1               5                   10                  15
Tyr Gly Pro Thr Arg Ala Thr Val Ser Gly Thr Pro Leu Asp Ala Glu
            20                  25                  30
Glu Val Arg Lys Ile His Ala Phe Trp Arg Ala Cys Asn Tyr Leu Ala
        35                  40                  45
Leu Gly Met Ile Tyr Leu Arg Gly Asn Pro Leu Leu Arg Glu Pro Leu
    50                  55                  60
Lys Pro Glu His Ile Lys His Arg Leu Leu Gly His Trp Gly Ser Ser
65                  70                  75                  80
Pro Asn Leu Ala Phe Val Tyr Thr His Leu Asn Arg Ala Ile Arg Lys
                85                  90                  95
His Asp Leu Asp Met Ile Phe Met Ala Gly Pro Gly His Gly Ala Pro
            100                 105                 110
Gly Val Leu Gly Pro Leu Tyr Leu Glu Gly Ser Tyr Ser Glu Ile Tyr
        115                 120                 125
Pro Asp Lys Asp Leu Ser Glu Glu Gly Leu Leu Asn Phe Phe Lys Gln
    130                 135                 140
Phe Ser Phe Pro Gly Gly Ile Gly Ser His Cys Thr Pro Glu Thr Pro
145                 150                 155                 160
Gly Ser Ile His Glu Gly Gly Glu Leu Gly Tyr Val Leu Ser His Ala
                165                 170                 175
Cys Gly Ala Ala Phe Asp Asn Pro Asp Leu Ile Val Ala Ala Val Val
            180                 185                 190
Gly Asp Gly Glu Ala Glu Thr Gly Pro Leu Ala Thr Ser Trp His Ile
        195                 200                 205
Asn Lys Phe Leu Asn Pro Ile Arg Asp Gly Ala Val Leu Pro Ile Leu
    210                 215                 220
Asn Leu Asn Gly Tyr Lys Ile Asn Asn Pro Thr Leu Leu Ala Arg Ile
225                 230                 235                 240
Ser His Glu Glu Leu Glu Asn Leu Leu Arg Gly Tyr Gly Tyr Thr Pro
                245                 250                 255
Tyr Phe Val Glu Gly Ser Glu Pro Glu Ser Met His Gln Ala Met Ala
            260                 265                 270
Ala Thr Val Asp Arg Ser Ile Glu Asp Ile Arg Ala Ala Gln Thr Glu
        275                 280                 285
Ala Arg Ala Ser Gly Ile Ala Arg Arg Pro Arg Trp Pro Met Ile Val
    290                 295                 300
Leu Arg Ser Pro Lys Gly Trp Thr Ala Pro Arg Gln Ile Asp Gly His
305                 310                 315                 320
Asn Val Glu Gly Phe Trp Arg Ala His Gln Val Pro Val Ala Asp Val
                325                 330                 335
Ala Lys Asn Pro Glu His Leu Lys Leu Leu Glu Gly Trp Met Arg Ser
            340                 345                 350
Tyr Lys Pro Glu Glu Leu Phe Asp Ala Glu Gly Cys Pro Val Ala Glu
        355                 360                 365
Ile Arg Glu Met Ala Pro Ala Gly Leu Arg Arg Met Gly Leu Asn Pro
    370                 375                 380
His Ala Asn Gly Gly His Leu Lys Lys Ala Leu Arg Ile Pro Asn Phe
385                 390                 395                 400
Arg Asn Tyr Gly Ile Glu Val Ala Lys Pro Gly Gln Ile Glu Ala Pro
                405                 410                 415
Asn Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Arg Asp Val Met Lys Glu Asn
            420                 425                 430
Ala His Asn Phe Arg Leu Phe Gly Pro Asp Glu Asn Thr Ser Asn Lys
        435                 440                 445
Leu Asp Ala Val Tyr Ala Ala Ala Lys Lys Phe Trp Ile Ala Glu Tyr
    450                 455                 460
Phe Pro Glu Asp Gln Asp Gly Gly Glu Leu Ala Pro Asp Gly Arg Val
465                 470                 475                 480
Met Glu Met Leu Ser Glu His Thr Leu Glu Gly Met Leu Glu Gly Tyr
                485                 490                 495
Leu Leu Thr Gly Arg His Gly Phe Leu Ser Thr Tyr Glu Ala Phe Val
            500                 505                 510
His Val Ile Asp Ser Met Phe Asn Gln His Ala Lys Trp Leu Ser Ile
        515                 520                 525
Cys Asn Gln Leu Ser Trp Arg Gln Asp Val Ala Ser Leu Asn Leu Leu
    530                 535                 540
Ile Thr Ser Thr Val Trp Arg Gln Asp His Asn Gly Phe Thr His Gln
545                 550                 555                 560
Asp Pro Gly Phe Leu Asp Val Val Val Asn Lys Ser Ala Asp Val Thr
                565                 570                 575
Arg Ile Tyr Leu Pro Pro Asp Val Asn Ser Leu Leu Ser Val Ala Asp
            580                 585                 590
His Cys Leu Arg Ser Gln Asn Tyr Ile Asn Val Ile Val Ser Asp Lys
        595                 600                 605
Gln Leu His Leu Gln Phe Met Asp Met Asp Ala Ala Ile Ala His Cys
    610                 615                 620
Thr Glu Gly Leu Gly Ile Trp Glu Trp Ala Ser Asn Asp Glu Gly Gln
625                 630                 635                 640
Glu Pro Asp Val Val Met Ala Cys Ala Gly Asp Ile Pro Thr Leu Glu
                645                 650                 655
Ala Leu Ala Ala Thr Ala Leu Leu Arg Glu Glu Phe Pro Glu Leu Lys
            660                 665                 670
Ile Arg Phe Ile Asn Val Val Asp Leu Phe Lys Leu Gln Pro Glu Ser
        675                 680                 685
Glu His Pro His Gly Leu Ser Asp Lys Asp Phe Asp Ser Leu Phe Thr
    690                 695                 700
Arg Asp Lys Pro Val Ile Phe Asn Phe His Gly Tyr Pro Trp Leu Ile
705                 710                 715                 720
His Arg Leu Ala Tyr Arg Arg Thr Asn His Ala Asn Met His Val Arg
                725                 730                 735
Gly Tyr Lys Glu Lys Gly Asn Ile Asn Thr Pro Leu Glu Leu Ala Ile
            740                 745                 750
Asn Asn Gln Ile Asp Arg Phe Ser Leu Ala Ile Asp Val Ile Asp Arg
        755                 760                 765
Ile Pro Glu Ile Ala Val Ser Gly Ala His Ala Lys Ala Arg Phe Arg
    770                 775                 780
Lys Gln Gln Ile Ala Cys Arg Gln Tyr Ala Tyr Glu His Gly Val Asp
785                 790                 795                 800
Met Pro Glu Val Ala Gly Trp Arg Trp Pro Gly
                805                 810

Claims (10)

1.具有生产有用代谢物的能力的细菌，其中所述细菌被修饰以具有增加的D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶活性。
2.根据权利要求1的细菌，其中所述有用代谢物源自乙酰辅酶A。
3.根据权利要求1的细菌，其中所述有用代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯和聚羟基丁酸酯构成的组。
4.根据权利要求1的细菌，其中所述细菌天然不具有D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的活性，并且其中所述细菌用编码D-木酮糖-5-磷酸磷酸转酮酶和/或果糖-6-磷酸磷酸转酮酶的DNA片段转化。
5.根据权利要求1的细菌，其中所述细菌被进一步修饰以具有减少的6-磷酸果糖激酶的活性。
6.根据权利要求1的细菌，其中所述细菌选自由肠杆菌科、棒状杆菌型细菌和芽孢杆菌属细菌构成的组。
7.根据权利要求1的细菌，其中所述细菌属于埃希氏菌属或泛菌属。
8.生产有用代谢物的方法，包括在培养基中培养根据权利要求1至7中任一项的细菌，并从所述培养基和/或所述细菌收集所述有用代谢物。
9.根据权利要求8的方法，其中所述有用代谢物源自乙酰辅酶A。
10.根据权利要求9的方法，其中所述有用代谢物选自由L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-脯氨酸、L-精氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、琥珀酸酯和聚羟基丁酸酯构成的组。
CN2005800272594A 2004-08-10 2005-08-10 磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途 Active CN101090964B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004124226/13A RU2004124226A (ru) 2004-08-10 2004-08-10 Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов
RU2004124226 2004-08-10
US64456205P 2005-01-19 2005-01-19
US60/644,562 2005-01-19
PCT/JP2005/014966 WO2006016705A1 (en) 2004-08-10 2005-08-10 The use of phosphoketolase for producing useful metabolites

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101090964A true CN101090964A (zh) 2007-12-19
CN101090964B CN101090964B (zh) 2012-05-16

Family

ID=36047466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2005800272594A Active CN101090964B (zh) 2004-08-10 2005-08-10 磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途

Country Status (5)

Country Link
US (4) US7785858B2 (zh)
CN (1) CN101090964B (zh)
MY (1) MY148960A (zh)
PE (1) PE20060422A1 (zh)
RU (1) RU2004124226A (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103140584A (zh) * 2010-06-18 2013-06-05 布特马斯先进生物燃料有限责任公司 包含磷酸酮醇酶的重组宿主细胞
CN103328631A (zh) * 2011-01-20 2013-09-25 丰田自动车株式会社 重组酵母和使用该重组酵母的物质生产方法
CN103703123A (zh) * 2011-07-12 2014-04-02 财富科学家股份有限公司 用于产生有用代谢物的重组微生物
CN103703122A (zh) * 2011-07-29 2014-04-02 三井化学株式会社 导入了二氧化碳的固定途径的微生物
CN104718292A (zh) * 2013-01-24 2015-06-17 三井化学株式会社 导入了二氧化碳固定循环的微生物
CN105555952A (zh) * 2013-04-10 2016-05-04 丹尼斯科美国公司 用于乙酰辅酶a-衍生代谢物、异戊二烯、类异戊二烯前体和类异戊二烯的改善生产的磷酸解酮酶
CN108026549A (zh) * 2015-09-10 2018-05-11 财富科学家股份有限公司 从2-羟基醛经酶促产生酰基磷酸
CN110218710A (zh) * 2019-04-30 2019-09-10 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用

Families Citing this family (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4427878B2 (ja) 1999-08-20 2010-03-10 味の素株式会社 析出を伴う発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
DE60219969T2 (de) * 2001-02-13 2008-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Methode zur Production von L-Aminosäuren mittels Bakterien der Gattung Escherichia
JP4599726B2 (ja) 2001-02-20 2010-12-15 味の素株式会社 Ｌ−グルタミン酸の製造法
EP1266966B1 (en) * 2001-06-12 2009-04-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-lysine or L-arginine by using methanol assimilating bacterium
RU2276687C2 (ru) * 2003-07-16 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина
US20050176033A1 (en) 2003-11-10 2005-08-11 Klyachko Elena V. Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine
US7344874B2 (en) * 2004-03-04 2008-03-18 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid
JP4760711B2 (ja) * 2004-03-31 2011-08-31 味の素株式会社 バチルス属又はエシェリヒア属に属する細菌を使用した発酵によるプリンヌクレオシド及びヌクレオチドの製造方法
RU2004124226A (ru) 2004-08-10 2006-01-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов
US7915018B2 (en) * 2004-10-22 2011-03-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family
US7422880B2 (en) * 2005-01-19 2008-09-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having a pathway of glycogen biosynthesis disrupted
US20070212764A1 (en) * 2005-01-19 2007-09-13 Ptitsyn Leonid R Method for producing l-amino acids using bacterium of the enterobacteriaceae family
ATE417119T1 (de) 2005-02-18 2008-12-15 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung einer nichtaromatischen l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae mit abgeschwächter expression des csra-gens
ATE438731T1 (de) 2005-02-18 2009-08-15 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung einer l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae
EP1848810A1 (en) * 2005-02-18 2007-10-31 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having expression of the bola gene attenuated
US7501282B2 (en) * 2005-02-25 2009-03-10 Ajinomoto Co., Inc. Plasmid autonomously replicable in Enterobacteriaceae family
EP1907529A1 (en) * 2005-07-25 2008-04-09 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE cpxR GENE
WO2007018310A1 (en) * 2005-08-09 2007-02-15 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE ybiV GENE
BRPI0707229B8 (pt) 2006-01-27 2017-06-27 Ajinomoto Kk método para produzir um l-aminoácido
JP2009089603A (ja) * 2006-02-02 2009-04-30 Ajinomoto Co Inc メタノール資化性細菌を用いたｌ−リジンの製造法
EP2184348B1 (en) 2006-03-23 2013-11-27 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA
EP2054500B1 (en) 2006-08-18 2016-11-23 Ajinomoto Co., Inc. An l-glutamic acid producing bacterium and a method for producing l-glutamic acid
EP2066799B1 (en) * 2006-09-28 2013-12-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing 4-hydroxy-l-isoleucine
JP2010041920A (ja) * 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006145712A (ru) * 2006-12-22 2008-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
WO2008090770A1 (ja) * 2007-01-22 2008-07-31 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
JP2010088301A (ja) * 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010130899A (ja) 2007-03-14 2010-06-17 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
JP5218400B2 (ja) 2007-04-17 2013-06-26 味の素株式会社 カルボキシル基を有する酸性物質の製造法
WO2010027045A1 (ja) * 2008-09-08 2010-03-11 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
CN103443271A (zh) 2010-10-27 2013-12-11 丹尼斯科美国公司 用于增加异戊二烯产量的异戊二烯合酶变体
AU2012249320A1 (en) 2011-04-29 2013-11-14 Danisco Us Inc. Recombinant microorganisms for enhanced production of mevalonate, isoprene, and isoprenoids
EP2702139A1 (en) 2011-04-29 2014-03-05 Danisco US Inc. Production of mevalonate, isoprene, and isoprenoids using genes encoding polypeptides having thiolase, hmg-coa synthase and hmg-coa reductase enzymatic activities
SG2014007991A (en) 2011-08-04 2014-03-28 Danisco Us Inc Production of isoprene, isoprenoid precursors, and isoprenoids using acetoacetyl-coa synthase
BR112014008278A2 (pt) * 2011-10-07 2017-04-18 Danisco Us Inc utilização de fosfocetolase na produção de mevalonato, precursores isoprenoides e isopreno
US8415136B1 (en) 2011-11-09 2013-04-09 Amyris, Inc. Production of acetyl-coenzyme a derived isoprenoids
EP2778228B1 (en) 2011-11-11 2017-05-17 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing 2-ketoglutaric acid and derivatives thereof by using a bacterium from the genus pantoea or the genus corynebacterium
EP2794863A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 Danisco US Inc. Enhanced production of isoprene using host cells having decreased ispa activity
EP2794876A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 Danisco US Inc. Production of isoprene under reduced oxygen inlet levels
US9315831B2 (en) 2012-03-30 2016-04-19 Danisco Us Inc. Direct starch to fermentable sugar as feedstock for the production of isoprene, isoprenoid precursor molecules, and/or isoprenoids
US9163263B2 (en) 2012-05-02 2015-10-20 The Goodyear Tire & Rubber Company Identification of isoprene synthase variants with improved properties for the production of isoprene
US8895277B2 (en) 2012-05-02 2014-11-25 Danisco Us Inc. Legume isoprene synthase for production of isoprene
WO2014100726A2 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Danisco Us Inc. Production of isoprene, isoprenoid, and isoprenoid precursors using an alternative lower mevalonate pathway
EP2948539B1 (en) 2013-01-24 2017-10-18 Mitsui Chemicals, Inc. Microorganism for production of chemicals derived from acetyl-coa
US20140273164A1 (en) * 2013-03-14 2014-09-18 The Regents Of The University Of California Non-co2 evolving metabolic pathway for chemical production
US9518278B2 (en) * 2013-03-14 2016-12-13 The Regents Of The University Of California Recombinant microorganisms having a methanol elongation cycle (MEC)
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
BR112016008830B1 (pt) 2013-10-23 2023-02-23 Ajinomoto Co., Inc Método para produzir uma substância alvo
US20160376600A1 (en) 2013-11-25 2016-12-29 Genomatica, Inc. Methods for enhancing microbial production of specific length fatty alcohols in the presence of methanol
PL3077501T3 (pl) 2013-12-03 2022-01-31 Genomatica, Inc. Mikroorganizmy i sposoby poprawy wydajności produktu na metanolu z użyciem syntezy acetylo-coa
JP6744819B2 (ja) 2014-02-20 2020-08-19 ダニスコ・ユーエス・インク メバロン酸、イソプレン、イソプレノイド前駆体、イソプレノイド、およびアセチルＣｏＡ由来産物の生産向上のための組換え微生物
CN106255759B (zh) 2014-03-26 2023-12-01 财富科学家股份有限公司 从甲醛经酶促产生乙酰磷酸
CN106687576B (zh) 2014-03-28 2021-10-29 丹尼斯科美国公司 用于提高乙醇生产的改变的宿主细胞途径
WO2015181074A1 (en) 2014-05-26 2015-12-03 Scientist Of Fortune S.A. Method for the enzymatic production of d-erythrose and acetyl phosphate
EP3741865B1 (en) 2014-09-18 2024-03-13 Genomatica, Inc. Non-natural microbial organisms with improved energetic efficiency
JP2017216881A (ja) 2014-12-26 2017-12-14 味の素株式会社 ジカルボン酸の製造方法
JP6623690B2 (ja) * 2015-10-30 2019-12-25 味の素株式会社 グルタミン酸系ｌ−アミノ酸の製造法
KR20180056929A (ko) * 2016-11-21 2018-05-30 삼성전자주식회사 증가된 셀룰로스 생산능을 갖는 코마가타이박터 속 미생물, 그를 이용하여 셀룰로스를 생산하는 방법 및 상기 미생물을 생산하는 방법
CN109810975B (zh) * 2017-11-22 2022-03-01 沈阳药科大学 一种基于代谢途径改造的生产2-酮基-l-古龙酸的方法
AU2019228730A1 (en) * 2018-03-01 2020-08-27 Totalenergies Onetech Metabolic pathways with increased carbon yield
WO2020021051A1 (en) 2018-07-27 2020-01-30 Global Bioenergies Method for producing fructose-6-phosphate from dihydroxyacetone phosphate and glyceraldehyde-3-phosphate
CN109929883A (zh) * 2019-04-02 2019-06-25 烟台华康荣赞生物科技有限公司 重组酵母、构建方法和其在制备酪醇及衍生物中的应用
WO2021063958A1 (en) 2019-09-30 2021-04-08 Global Bioenergies Improved means and methods for increasing the yield of acetyl-coa from glucose
AU2021336423A1 (en) * 2020-09-05 2023-03-09 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Phosphonate products and methods
WO2022217064A2 (en) * 2021-04-09 2022-10-13 Genomatica, Inc. Phosphoketolase variants and methods of use
CN117165504A (zh) * 2023-08-03 2023-12-05 天津世纪伟康生物科技有限公司 一种发酵法高效生产γ-氨基丁酸的工程菌及其应用

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5976843A (en) 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
JPH09285294A (ja) * 1996-04-23 1997-11-04 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法
JP4197754B2 (ja) 1997-10-09 2008-12-17 三菱化学株式会社 乳酸又はコハク酸の製造方法
RU2250266C2 (ru) 1999-04-09 2005-04-20 Адзиномото Ко., Инк. Способ получения l-аминокислоты
JP4841093B2 (ja) * 1999-07-23 2011-12-21 アーカー−ダニエルズ−ミッドランド カンパニー 細胞性ｎａｄｐｈの増加によるｌ−アミノ酸の生成方法
JP2001046067A (ja) 1999-08-04 2001-02-20 Ajinomoto Co Inc 好熱性バチルス属細菌由来のｌ−リジン生合成系遺伝子
JP2001120292A (ja) * 1999-08-17 2001-05-08 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
RU2212447C2 (ru) 2000-04-26 2003-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Штамм escherichia coli - продуцент аминокислоты (варианты) и способ получения аминокислот (варианты)
DE60219969T2 (de) 2001-02-13 2008-01-17 Ajinomoto Co., Inc. Methode zur Production von L-Aminosäuren mittels Bakterien der Gattung Escherichia
EP1266966B1 (en) 2001-06-12 2009-04-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-lysine or L-arginine by using methanol assimilating bacterium
US20030038380A1 (en) * 2001-08-27 2003-02-27 Tzu Johnson C.H. Apparatus for packing semiconductor die
US20050176121A1 (en) * 2001-09-06 2005-08-11 Ryo Takeshita Method for producing alcohol by using microorganism
AU2003209014C1 (en) 2002-02-08 2009-01-08 Genencor International, Inc. Methods for producing end-products from carbon substrates
RU2244007C2 (ru) * 2002-02-27 2005-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-треонина, штамм escherichia coli - продуцент треонина (варианты)
SE0200857D0 (sv) * 2002-03-19 2002-03-19 Forskarpatent I Syd Ab Metabolic engineering for improved xylose utilisation of saccharomyces cerevisiae
JP3932945B2 (ja) * 2002-03-27 2007-06-20 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
US6911332B2 (en) * 2002-06-12 2005-06-28 Ajinomoto Co., Inc. Isolated polynucleotides encoding d-arabino-3-hexulose-6-phosphate synthases from Methylophilus methylotrophus
RU2245919C2 (ru) * 2002-09-06 2005-02-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислоты, штамм escherichia coli tdh7δ mlc::cat/pprt614-продуцент l-треонина
JP2004166595A (ja) * 2002-11-20 2004-06-17 Ajinomoto Co Inc メチロトローフを用いたｌ−アミノ酸の製造法
JP2004166592A (ja) * 2002-11-20 2004-06-17 Ajinomoto Co Inc メチロトローフを用いたｌ−アミノ酸の製造法
JP4120364B2 (ja) * 2002-11-20 2008-07-16 味の素株式会社 メタノール資化性菌を用いたｌ−リジンまたはｌ−アルギニンの製造法
US20040171134A1 (en) * 2003-01-08 2004-09-02 Takayuki Asahara Method for producing recombinant of methanol-assimilating bacterium
DE102004001674B4 (de) * 2003-01-29 2019-01-24 Ajinomoto Co., Inc. Verfahren zur Herstellung von L-Lysin unter Einsatz von Methanol verwertenden Bakterien
JP2004236637A (ja) * 2003-02-10 2004-08-26 Ajinomoto Co Inc 多糖類生成に関与する遺伝子及びその利用
JP2004254544A (ja) * 2003-02-25 2004-09-16 Ajinomoto Co Inc 新規リジンデカルボキシラーゼ遺伝子及びｌ−リジンの製造法
RU2273666C2 (ru) * 2003-02-26 2006-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот методом ферментации смеси глюкозы и пентоз
US7026149B2 (en) * 2003-02-28 2006-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Polynucleotides encoding polypeptides involved in the stress response to environmental changes in Methylophilus methylotrophus
US7029893B2 (en) * 2003-02-28 2006-04-18 Ajinomoto Co., Inc. Polynucleotides encoding polypeptides involved in amino acid biosynthesis in methylophilus methylotrophus
US7060475B2 (en) * 2003-02-28 2006-06-13 Ajinomoto Co., Inc. Polynucleotides encoding polypeptides involved in intermediates metabolism of central metabolic pathway in methylophilus methylotrophus
JP2004261150A (ja) * 2003-03-04 2004-09-24 Ajinomoto Co Inc 目的物質の製造法
JP4821606B2 (ja) 2003-03-12 2011-11-24 味の素株式会社 効率的にＬ−グルタミン酸を生産するためのプロモーター変異による細菌のｓｕｃＡＢ発現の最適化
RU2276687C2 (ru) * 2003-07-16 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина
RU2276688C2 (ru) * 2003-08-29 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" БАКТЕРИЯ, ПРИНАДЛЕЖАЩАЯ К РОДУ Escherichia,- ПРОДУЦЕНТ L-ГИСТИДИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА
FR2862068B1 (fr) 2003-11-06 2007-10-12 Metabolic Explorer Sa Souches de microorganismes optimisees pour des voies de biosyntheses consommatrices de nadph
US20050176033A1 (en) * 2003-11-10 2005-08-11 Klyachko Elena V. Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine
RU2275424C2 (ru) * 2003-12-05 2006-04-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-треонина с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia
US20050191684A1 (en) 2004-02-25 2005-09-01 Zimenkov Danila V. Method for producing L-amino acids
US7344874B2 (en) 2004-03-04 2008-03-18 Ajinomoto Co., Inc. L-glutamic acid-producing microorganism and a method for producing L-glutamic acid
US8003367B2 (en) 2004-03-16 2011-08-23 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes
US20050214913A1 (en) * 2004-03-16 2005-09-29 Marchenko Aleksey N Method for producing L-amino acids by fermentation using bacteria having enhanced expression of xylose utilization genes
JP4760711B2 (ja) 2004-03-31 2011-08-31 味の素株式会社 バチルス属又はエシェリヒア属に属する細菌を使用した発酵によるプリンヌクレオシド及びヌクレオチドの製造方法
RU2306338C2 (ru) 2004-06-24 2007-09-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Mob'-ПРОИЗВОДНАЯ ПЛАЗМИДА RSF1010, НЕ СОДЕРЖАЩАЯ ГЕНЫ УСТОЙЧИВОСТИ К АНТИБИОТИКАМ, БАКТЕРИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННУЮ ПЛАЗМИДУ, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ
RU2004124226A (ru) 2004-08-10 2006-01-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Использование фосфокетолазы для продукции полезных метаболитов
US7915018B2 (en) 2004-10-22 2011-03-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family
RU2004137198A (ru) 2004-12-21 2006-06-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yafA
RU2004137719A (ru) 2004-12-23 2006-06-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
US20070212764A1 (en) 2005-01-19 2007-09-13 Ptitsyn Leonid R Method for producing l-amino acids using bacterium of the enterobacteriaceae family
US7422880B2 (en) 2005-01-19 2008-09-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family having a pathway of glycogen biosynthesis disrupted
ATE417119T1 (de) 2005-02-18 2008-12-15 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung einer nichtaromatischen l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae mit abgeschwächter expression des csra-gens
ATE438731T1 (de) 2005-02-18 2009-08-15 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung einer l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae
US7501282B2 (en) 2005-02-25 2009-03-10 Ajinomoto Co., Inc. Plasmid autonomously replicable in Enterobacteriaceae family
DE602006013796D1 (de) 2005-03-10 2010-06-02 Ajinomoto Kk Verfahren zur herstellung einer l-aminosäure unter verwendung eines bakteriums der familie enterobacteriaceae mit abgeschwächter leuo-expression
EP1899452B1 (en) 2005-06-17 2010-10-20 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family with enhanced expression of the fucpikur operon
EP1907529A1 (en) 2005-07-25 2008-04-09 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE cpxR GENE
WO2007018310A1 (en) 2005-08-09 2007-02-15 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE ybiV GENE
BRPI0707229B8 (pt) 2006-01-27 2017-06-27 Ajinomoto Kk método para produzir um l-aminoácido
JP2009089603A (ja) 2006-02-02 2009-04-30 Ajinomoto Co Inc メタノール資化性細菌を用いたｌ−リジンの製造法
EP2184348B1 (en) 2006-03-23 2013-11-27 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA
EP2021458A1 (en) 2006-05-23 2009-02-11 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family
EP2046949B1 (en) 2006-07-19 2014-01-15 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family
EP2054500B1 (en) 2006-08-18 2016-11-23 Ajinomoto Co., Inc. An l-glutamic acid producing bacterium and a method for producing l-glutamic acid
EP2066799B1 (en) 2006-09-28 2013-12-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing 4-hydroxy-l-isoleucine
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2006145712A (ru) 2006-12-22 2008-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина
WO2008090770A1 (ja) 2007-01-22 2008-07-31 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ－アミノ酸を生産する微生物及びｌ－アミノ酸の製造法
JP2010088301A (ja) 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
JP2010130899A (ja) 2007-03-14 2010-06-17 Ajinomoto Co Inc Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法

Cited By (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103140584A (zh) * 2010-06-18 2013-06-05 布特马斯先进生物燃料有限责任公司 包含磷酸酮醇酶的重组宿主细胞
US9546356B2 (en) 2011-01-20 2017-01-17 Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha Recombinant yeast and substance production method using the same
CN103328631A (zh) * 2011-01-20 2013-09-25 丰田自动车株式会社 重组酵母和使用该重组酵母的物质生产方法
CN103328631B (zh) * 2011-01-20 2017-04-26 丰田自动车株式会社 重组酵母和使用该重组酵母的物质生产方法
US9340793B2 (en) 2011-01-20 2016-05-17 Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha Recombinant yeast and substance production method using the same
CN103703123A (zh) * 2011-07-12 2014-04-02 财富科学家股份有限公司 用于产生有用代谢物的重组微生物
CN103703123B (zh) * 2011-07-12 2016-08-17 财富科学家股份有限公司 用于产生有用代谢物的重组微生物
CN103703122A (zh) * 2011-07-29 2014-04-02 三井化学株式会社 导入了二氧化碳的固定途径的微生物
CN104718292A (zh) * 2013-01-24 2015-06-17 三井化学株式会社 导入了二氧化碳固定循环的微生物
CN104718292B (zh) * 2013-01-24 2019-09-10 三井化学株式会社 导入了二氧化碳固定循环的微生物
CN105555952A (zh) * 2013-04-10 2016-05-04 丹尼斯科美国公司 用于乙酰辅酶a-衍生代谢物、异戊二烯、类异戊二烯前体和类异戊二烯的改善生产的磷酸解酮酶
CN108026549A (zh) * 2015-09-10 2018-05-11 财富科学家股份有限公司 从2-羟基醛经酶促产生酰基磷酸
CN108026549B (zh) * 2015-09-10 2021-12-14 财富科学家股份有限公司 从2-羟基醛经酶促产生酰基磷酸
CN110218710A (zh) * 2019-04-30 2019-09-10 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用
CN110218710B (zh) * 2019-04-30 2020-06-23 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用
CN111334486A (zh) * 2019-04-30 2020-06-26 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用
WO2020220432A1 (zh) * 2019-04-30 2020-11-05 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用
CN111334486B (zh) * 2019-04-30 2021-10-08 中国科学院天津工业生物技术研究所 活性提高的磷酸转酮酶及在生产代谢物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20130157321A1 (en) 2013-06-20
US8404474B2 (en) 2013-03-26
US20140242643A1 (en) 2014-08-28
MY148960A (en) 2013-06-14
US8753849B2 (en) 2014-06-17
US7785858B2 (en) 2010-08-31
US20060040365A1 (en) 2006-02-23
US20100267094A1 (en) 2010-10-21
PE20060422A1 (es) 2006-06-19
US8969048B2 (en) 2015-03-03
RU2004124226A (ru) 2006-01-27
CN101090964B (zh) 2012-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101090964B (zh) 磷酸转酮酶用于生产有用的代谢物的用途
KR100892577B1 (ko) 유용한 대사산물을 생산하기 위한 포스포케톨라제의 용도
CN101374953B (zh) 用于产生l-氨基酸的方法
EP1814987B1 (en) L-amino acid-producing bacterium and a method for producing l-amino acid
US9045789B2 (en) Method for producing a target substance by fermentation
AU2015331160B2 (en) A Microorganism Of Genus Corynebacterium Having An Ability To Produce L-Arginine And A Method For Producing L-Arginine Using The Same
US8354255B2 (en) L-amino acid-producing bacterium and a method for producing L-amino acids
EP2471943B1 (en) Process for production of l-amino acid
CN101631849A (zh) L-谷氨酸类氨基酸生产微生物以及氨基酸的生产方法
JP5157180B2 (ja) Ｌ−アミノ酸の製造法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant