CN100549015C - 氨基酸螯合物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供通过将金属碳酸盐和氨基酸在水溶液中反应而制备电中性的且没有干扰离子的金属氨基酸螯合物的方法，还提供所述金属氨基酸螯合物的应用。该金属氨基酸螯合物能被添加到医疗用品、食品、饮料、化妆品、饲料等产品中，同时在不同的温度和pH范围内保持该产品的稳定性，并对该产品的性质包括口味和外观没有影响。

Description

氨基酸螯合物的制备方法
发明领域
本发明涉及氨基酸螯合物的制备方法及其应用；及更具体地涉及通过将金属碳酸盐和酸性氨基酸在水溶液中反应来制备电中性且不带有干扰离子的金属氨基酸螯合物的方法，和涉及所述金属氨基酸螯合物的应用。
发明背景
通常，氨基酸螯合物的优点在于下列事实：其可以通过主动运输或其他已知的机制被迅速吸收到吸收性的粘膜细胞或植物细胞内。换句话说，当无机物与作为载体分子的氨基酸一起被吸收时，可以避免由于离子竞争活性位点和特定营养性无机元素被其他营养性无机元素抑制而引起的问题。
氨基酸螯合物通常通过将α氨基酸与金属离子反应形成螯合物中的环状结构而制备，其中金属离子为二价或更多价。在上述反应中，金属离子的正电荷被α氨基酸的自由氨基或自由羧基中和。
这些金属氨基酸螯合物如下式所示：
Figure C20038010509800041
其中M是二价金属离子，R是天然存在的氨基酸或肽的侧链。该金属离子包括，例如，钙、锌、镁、铜、铁、钴、锰、铬等。
通常，“螯合物”定义为金属离子与一个或多个与其键合的配体形成杂环结构的化合物。根据美国饲料管理官方协会(“AAFCO”)的定义，“氨基酸螯合物”是这样的产物，其来自可溶性金属盐的金属离子与氨基酸以两或三摩尔氨基酸对一摩尔金属的摩尔比反应形成配位共价键。通常，水解的氨基酸的平均重量必须为大约150，而产生的螯合物的重量必须不超过800。
氨基酸螯合物的结构、化学性质和生物利用度描述于多种文献中，例如，Ashmead等，螯合的无机营养元素(Chelated MineralNutrition)，(1982)，Chas.C.托马斯出版社，斯普林菲尔德，III.；Ashmead等，金属离子的肠吸收(Intestinal Absorption ofMetal Ions)，(1985)；Ashmead等，用氨基酸螯合物对植物进行叶面施肥(FoliarFeeding of Plants with Amino Acid Chelates)，(1986)；U.S专利4,020,158；U.S专利4,167,564；U.S专利4,216,143；U.S专利4,721,644；U.S专利4,599,152；U.S专利4,774,089；U.S专利4,830,716；U.S专利.4,863,898；U.S专利4,725,427等。
作为参考，应该理解“无机元素”和“金属离子”在此说明书的描述中是可以互用的。
在现有的利用水溶性盐，例如无机氯盐或无机硫酸盐制备氨基酸螯合物的方法中，为更方便进行反应，反应的条件必须是碱性的。这种情况下，副产物通常包含在氨基酸螯合物中，其可能干扰氨基酸螯合物的合成并负面影响其体内吸收。下面的反应方程式作为已知方法的参考。
Figure C20038010509800051
其中M是二价金属离子，R是天然存在的氨基酸或肽的侧链。
尽管上述方法提供电中性的氨基酸螯合物，硫酸解离形成带负电荷的硫酸离子，而该副产物干扰整个反应，无论其是否以碱金属盐的形式存在还是以硫酸离子参与反应，并且其还阻碍螯合物本身的体内吸收。而且，由于硫酸钠是水溶性的，该副产物很难从产物中分离。此外，金属硫酸盐和氨基酸的反应不是进行到100％完全反应，因此反应体系中总有硫酸存在。在使用金属氯盐如MCl2制备氨基酸螯合物时，同样会存在氯离子。
U.S.专利6,407,138和6,458,981采用氢氧化钙和氧化钙代替氢氧化钙，从而提供没有副产物的氨基酸螯合物，但事实上不能说得到的氨基酸螯合物是电中性的。
上述U.S.专利6,407,138的反应机制表示如下：
Ca(OH)2+2H(AA)→Ca(AA)2+2H2O
Ca(AA)2+MSO4→M(AA)2+CaSO4
CaO+2H(AA)→Ca(AA)2+H2O
Ca(AA)2+MSO4→M(AA)2+CaSO4
上述U.S.专利6,458,981的反应机制显示如下：
Ca(OH)2+H(AA)→Ca(AA)+OH-+H2O
Ca(AA)+OH-+MSO4→M(AA)+OH-+CaSO4
CaO+H(AA)→Ca(AA)+OH-
Ca(AA)+OH-+MSO4→M(AA)+OH-+CaSO4
在上述反应式中，“AA”是氨基酸，“M”是金属离子。
参考这些反应机制，其中氨基酸螯合物使用氢氧化钙或氧化钙而制备，获得含有电中性氨基酸螯合物、带正电荷的氨基酸螯合物和带负电荷的羟基的混合物。因此，事实上不能说上述反应获得的氨基酸螯合物是前述的电中性的。
发明概述
因此本发明的目的是解决现有技术遇到的上述问题。
即，本发明的目的是通过将天然产生的或合成的金属碳酸盐与氨基酸在水溶液中反应的新过程，提供制备氨基酸螯合物的方法。根据本方法，能够方便的制备电中性且没有干扰离子的多种氨基酸螯合物，并且不产生副产物。
本发明的另一个目的是提供通过在反应过程中或之后另外使金属硫酸盐反应来制备氨基酸螯合物的方法，其中氨基酸螯合物包括来自金属硫酸盐和同时与金属碳酸盐的金属离子不同的金属离子。
本发明的另一个目的是提供由上述方法获得的多种氨基酸螯合物。
本发明的另一个目的是提供以治疗有效量、营养学有效量或美容有效量含有上述氨基酸螯合物作为活性成分的组合物。这些组合物可根据其应用，用作药物、食品、饮料、化妆品等的配方。
为实现上述的目的和优点，本发明提供一种方法，包括将天然存在的或合成的金属碳酸盐与酸性氨基酸在水溶液中反应产生氨基酸螯合物的步骤。
本发明的制备方法中有用的金属碳酸盐不是特别限定的，包括二价或更多价的金属的碳酸盐，所述金属如钙、铜、锌、铁、铬、钴、锰、镁等。示例的金属碳酸盐包括碳酸钙、碳酸铜、碳酸锌、碳酸亚铁、碳酸钴、碳酸铬、碳酸镁、碳酸锰等。在一些实施方案中，可以使用两种或更多种上述金属碳酸盐的组合。
本发明中使用的金属碳酸盐可以是天然存在的金属碳酸盐、合成的金属碳酸盐或其组合。具体地，由于其含有多种无机元素，更优选天然存在的金属碳酸盐。
在下文中简要讨论碳酸钙，其是一种用于本发明的制备方法的金属碳酸盐。
目前，天然存在或合成的碳酸钙被广泛应用，其代表性的应用是作为含钙食品的添加剂，如牛奶、饮料、饼干、点心等。钙以碳酸钙形式分散于水中，但不能完全溶解，因此其不能用于制备透明的食物如饮料中。此外，其经过一段时间会沉淀，因此水分散形式在很多食品的应用中受到限制。
虽然天然存在的碳酸钙具有上述的含有多种无机元素的优点，然而同时由于其无机物的性质，又具有低溶解度和体内低吸收性的缺点。
天然存在的碳酸钙包含在，例如，蛋壳钙、墨鱼骨钙、贝壳钙(来自蛤、牡蛎等的贝壳)、海藻钙等。其中，海藻钙是从钙化的海藻(石灰藻，叫作“lithothamnion”)获得的钙源，包含碳酸钙和碳酸镁作为主要的组分。海藻钙和乳清钙的组分分别列于下表1，其中乳清钙存在于牛奶中，包括磷酸钙但不包括碳酸钙。
表1
  海藻钙   乳清钙
  钙   34％   26.4％
  镁   3.2％   1.26％
  硫   0.3％   -
  钠   0.2％   2.6％
  磷   0.06％   14.6％
  铁   0.08％   0.00815％
  钾   0.04％   0.165％
  锰   70ppm   -
  硼   25ppm   -
  碘   20ppm   -
  锌   22ppm   -
  硒   1ppm   -
参见上述表1，海藻钙含有比例为约1∶10(镁∶钙)的镁和钙和少量的磷。不同于通常的含有合成的碳酸钙的钙原料，海藻钙含有多种能促进钙的生理功能的无机元素。然而，即使使用这些天然存在的碳酸钙作为钙源，还是不能解决前面所述的不溶性的问题，因此限制了其应用的扩展。此时，当其中包含的碳酸钙被转化为本发明相似的金属氨基酸螯合物，则因为螯合物本身的可溶性，可实现体内高吸收率，这通过下面将阐述的实施例得到证明。
本发明的制备方法中有用的酸性氨基酸不是特别限定的，包括，例如，谷氨酸、天冬氨酸等。在一些实施方案中，可以采用两种或多种氨基酸的组合。
反应中使用的金属碳酸盐和酸性氨基酸的量由多种不同的参数来决定，如金属的价数，盐的反应性、氨基酸的反应性等，并优选在摩尔比1∶1～1∶4(金属碳酸盐∶酸性氨基酸)的范围内。
使用二价金属离子作为金属碳酸盐合成氨基酸螯合物的反应通过如下的反应式1表示：
反应式1
XCO3+2H(AA)→X(AA)2+CO2+H2O
其中X是二价金属离子，AA是氨基酸。
使用三价金属离子作为金属碳酸盐合成氨基酸螯合物的反应通过如下的反应式2表示：
反应式2
X’2(CO3)3+6H(AA)→2X’(AA)3+3CO2+3H2O
其中X是三价金属离子，AA是氨基酸。
从这些反应式可以看到，根据本发明的制备方法，没有产生作为反应抑制剂的硫酸，由于产生的副产物是挥发性的二氧化碳和水，不影响需要的产物和反应过程，且所需的产物能方便地分离，得到的产物是电中性的。
在本发明的制备方法中，金属碳酸盐和酸性氨基酸的反应在水溶液中进行，其中水被理想地用作水溶液的介质，但并不限制于此，只要反应介质不影响反应机制并且能与产物容易地分开。此外，其他已知的用于提高反应速率和效率的材料可以添加到水或其他反应介质中。
反应的温度优选在0～100℃的范围，如果温度特别低反应性会变得很低，而如果温度非常高，会产生能量浪费和一些氨基酸的破坏。
反应的pH优选调整为4～7以保证反应的顺利进行并保持中性，更优选为4.5～6.5。
在一些实施方案中，金属硫酸盐可以在反应开始、反应过程中或反应结束后，添加到上述金属碳酸盐与酸性氨基酸在水溶液反应的反应体系中。为防止金属硫酸盐与氨基酸直接反应，优选在反应中加入金属硫酸盐，更优选在反应结束后加入。
本发明的制备方法中有用的金属硫酸盐包括，例如，但不限于硫酸钙、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铬、硫酸钴等
另外添加到反应中的金属硫酸盐的量理想地为摩尔比1∶1～1∶4(金属硫酸盐∶从金属碳酸盐产生的氨基酸螯合物)。
金属硫酸盐附加反应的温度和pH与前面描述的金属碳酸盐的反应是非常相似的。
附加反应如下面的反应式3所示，其中金属碳酸盐中的金属离子(X)与反应式1中一样为二价并且使用含有除金属离子(X)之外的二价金属离子(M)的金属硫酸盐。
反应式3
XCO3+2H(AA)+MSO4→M(AA)2+CO2+H2O+XSO4
其中X是二价金属离子，M是X之外的二价金属离子，AA是氨基酸。
使用了三价金属离子(M’)的金属硫酸盐，该附加反应如下面的反应式4所示。
反应式4
3XCO3+6H(AA)+M’2(SO4)3→2(M’(AA)3)+3CO2+3H2O+3XSO4
其中X是二价金属离子，M是三价金属离子，AA是氨基酸。
金属碳酸盐和金属硫酸盐随后反应，换句话说，金属碳酸盐首先与酸性氨基酸反应，然后金属硫酸盐与得到的产物反应，基于金属碳酸盐的氨基酸螯合物转化为基于金属硫酸盐的氨基酸螯合物。
这样的随后反应如下面的反应式5所示。
反应式5
XCO3+2H(AA)→X(AA)2+CO2+H2O------(1)
X(AA)2+MSO4→M(AA)2+XSO4-------------(2)
其中X是二价金属离子，M是X之外的二价金属离子，AA是氨基酸。
优选地，金属碳酸盐是碳酸钙，金属硫酸盐是除钙离子外的二价金属离子的金属硫酸盐。因此，当金属碳酸盐为碳酸钙，并且金属硫酸盐含有二价金属离子，钙氨基酸螯合物随后与金属硫酸盐反应，反应如下面的反应式6所示。
反应式6
CaCO3+2H(AA)→Ca(AA)2+CO2+H2O------(1)
Ca(AA)2+MSO4→M(AA)2+CaSO4↓---------(2)
其中M是钙离子之外的二价金属离子，AA是氨基酸。
此外，当碳酸钙和二价金属硫酸盐同时与氨基酸反应，该反应
如下面的反应式7所示。
反应式7
3CaCO3+6H(AA)+M’2(SO4)3→2(M′(AA)3)+3CO2+3H2O+3CaSO4↓
其中M’是三价金属离子，AA是氨基酸。
在上述的反应式中，硫酸钙能与含有其他金属硫酸盐的反应混合物容易地分开。
从以上的描述可知，含有钙以外的金属(M)的氨基酸螯合物能通过将金属(M)的碳酸盐与氨基酸反应的直接方法，或通过合成钙氨基酸螯合物，然后将其与金属(M)的硫酸盐反应的间接方法来制备，考虑到反应性、副产物的方便分离等，后者即间接方法是更理想的，尽管其是过程相对更复杂。
本发明还提供如下的通式1和2分别代表的氨基酸螯合物，其通过上述的方法制备得到。
通式1
M(AA)2
其中M是二价金属离子，AA是氨基酸。
通式2
M’(AA)3
其中M’是三价金属离子，AA是氨基酸。
能根据本发明的方法制备的氨基酸无机元素螯合物包括，例如，但不限于谷氨酸/天冬氨酸钙，双谷氨酸钙、双天冬氨酸钙、谷氨酸/天冬氨酸铜、双谷氨酸铜、双天冬氨酸铜、谷氨酸/天冬氨酸锌、双谷氨酸锌、双天冬氨酸锌、谷氨酸/天冬氨酸铁、双谷氨酸铁、双天冬氨酸铁、双谷氨酸/天冬氨酸铁，谷氨酸/双天冬氨酸铁，谷氨酸/天冬氨酸铬、双谷氨酸铬、双天冬氨酸铬、双谷氨酸/天冬氨酸铬，谷氨酸/双天冬氨酸铬，谷氨酸/天冬氨酸钴、双谷氨酸钴、双天冬氨酸钴、谷氨酸/天冬氨酸镁、双谷氨酸镁、双天冬氨酸镁、谷氨酸/天冬氨酸锰、双谷氨酸锰、双天冬氨酸锰或这些物质中两者或多者的混合物。
本发明还提供含有治疗有效量、营养学有效量、美容有效量的通式1和/或2的氨基酸螯合物作为活性成分的组合物。
通式1和2的氨基酸螯合物能根据其预计的应用，配制不同剂量形式的药物组合物。更具体地，在根据本发明制备药物组合物时，作为活性成分的通式1和/或2的氨基酸螯合物能根据所需的剂型与药物可接受的载体混合，包括稀释剂、赋形剂等。例如根据本发明的药物组合物能配制成口服或注射给药的药物。
通式1和2的氨基酸螯合物作为活性成分能通过现有技术使用药物可接受的赋形剂被配制成单剂量单位或多剂量单位。药物可以在油或水介质中以溶液、悬液或乳液形式制备，且可以包括常规的悬浮剂、乳化剂或稳定剂。此外，药物可以以干粉的形式制备，其在使用前溶于无热源的无菌水中。通式1和2的氨基酸螯合物还可以用常规的栓用试剂如可可脂或甘油酯，配制成栓剂。口服的固体药物能以胶囊、片剂、丸剂、粉剂等形式制备，其中片剂和丸剂是特别有用的。固体药物能通过将通式1和/或2的氨基酸螯合物与一种或多种无活性的稀释剂如蔗糖、乳糖、淀粉等，润滑剂如硬脂酸镁，其他载体如崩解剂或偶联剂等混合而制备。
如果需要，通式1和/或2的氨基酸螯合物或含有它们作为活性成分的组合物可以与其他药物一起给药。
此处使用的“治疗有效量”指被给药后能一定程度地预防、减轻或改善在治疾病的一种或多种症状的化合物的量。治疗有效量能通过使用与被治疗的疾病相关的体内或体外模型而经验性地决定。
在单剂量单位的配方中，作为活性成分的通式1和/或2的氨基酸螯合物优选含量在每剂量为0.1～1000mg。药物的给药量由医生考虑病人的体重、年龄、疾病状态等来决定。对成人进行治疗的必须的给药量根据给药的频率和强度，通常为每天约1～1000mg。在肌肉注射或静脉注射给药的情况下，对于普通的成年男性大约每天1～500mg是足够的，但某些病人则需要更大的量。
此处使用的“营养学有效量”指有效改善病人的代谢功能且不产生任何副作用的活性成分的量。
此处使用的“美容有效量”指能有效改善美容相关的状况如皮肤状况、头发状况等，且不产生任何副作用的活性成分的量。
营养学有效量和美容有效量能通过多种参数决定，所述参数如组合物的应用和性质，因此它们不是特别限定的。
结果，根据本发明的组合物可以应用于多种用途包括，例如，含有活性成分和药物可接受载体的药物组合物；含有活性成分和营养学可接受载体的食品或饮料组合物；含有活性成分和美容可接受载体的美容组合物，其中活性成分分别为通式1和/或2的化合物。
优选实施方案
下文中，本发明将通过实施例更详细地描述本发明，但本发明的范围不限于此。
实施例1：海藻钙-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。在反应的起始阶段产生气泡但一段时间后消失。得到的反应溶液经离心除去不溶物，分离澄清的上清液。上清液被冻干获得大约75g海藻钙-谷氨酸螯合物(钙含量：7％)
如此获得的海藻钙-谷氨酸螯合物的组分通过ICP分析，结果如下表2所示。
表2
  组分   含量
  钙   7％
  镁   1％
  钾   2.1％
  钠   1％
  铝   25ppm
  锰   25ppm
  铁   20ppm
  锌   10ppm
  钡   4ppm
  镉、铬、钼、钴 ＜5ppm
实施例2：锌-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入36g硫酸锌(锌含量：35％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约70g可溶性锌-谷氨酸螯合物。
实施例3：锰-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入30g硫酸锰(锰含量：27％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约68g可溶性锌-谷氨酸螯合物。
实施例4：铜-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向上述获得的螯合物反应中搅拌加入30g硫酸铜(铜含量：25％)进行反应，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约65g可溶性铜-谷氨酸螯合物。
实施例5：铁-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入30g硫酸亚铁(亚铁含量：20％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约62g可溶性铁-谷氨酸螯合物。
实施例6：镁-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入30g硫酸镁(镁含量：9.86％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约61g可溶性镁-谷氨酸螯合物。
实施例7：铬-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向上述获得的螯合物反应中搅拌加入30g硫酸铬(铬含量：19％)以进行反应，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约64g可溶性铬-谷氨酸螯合物。
实施例8：无机复合因子-谷氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中搅拌加入10g硫酸锌(锌含量：19％)，2g硫酸锰，2g硫酸铜和2g硫酸亚铁，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约65g可溶性无机复合因子-谷氨酸螯合物。
实施例9：海藻钙-天冬氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和天冬氨酸完全溶解。反应起始阶段产生气泡但一段时间后消失。得到的反应溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约72g海藻钙-天冬氨酸螯合物。
实施例10：锌-天冬氨酸螯合物的制备
20g海藻钙(钙含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g天冬氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到海藻钙和天冬氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入30g硫酸锌(锌含量：35％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约67g可溶性锌-天冬氨酸螯合物。
实施例11：钙-谷氨酸螯合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和谷氨酸完全溶解。在反应起始阶段产生气泡，但气泡经过一段时间后消失。得到的反应溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约78g钙-天冬氨酸螯合物。
实施例12：镁-谷氨酸螯合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和谷氨酸完全溶解。然后向反应混合物加入30g硫酸镁(镁含量：9.86％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，得到的溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约61g可溶性镁-谷氨酸螯合物。
实施例13：钙-天冬氨酸螯合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g天冬氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和天冬氨酸完全溶解。在反应起始阶段产生气泡，但气泡经过一段时间后消失。得到的反应溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约78g钙-天冬氨酸螯合物。
实施例14：锌-天冬氨酸螯合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g天冬氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和天冬氨酸完全溶解。然后向反应混合物加入30g硫酸锌(锌含量：35％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，得到的溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约67g可溶性锌-天冬氨酸螯合物。
实施例15：锌-谷氨酸螯合物的制备
20g碳酸锌(锌含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和谷氨酸完全溶解。在反应起始阶段产生气泡，但气泡经过一段时间后消失。得到的反应溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约70g锌-谷氨酸螯合物(锌含量：6.5％)。
实施例16：锌-天冬氨酸整合物的制备
20g碳酸锌(锌含量：32％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g天冬氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和天冬氨酸完全溶解。在反应起始阶段产生气泡，但气泡经过一段时间后消失。得到的反应溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约72g锌-天冬氨酸螯合物。
实施例17：铁-天冬氨酸整合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g天冬氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和天冬氨酸完全溶解。然后向反应混合物加入30g硫酸亚铁(铁含量：20％)，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，得到的溶液经离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约62g可溶性铁-天冬氨酸螯合物。
实施例18：无机复合因子-谷氨酸螯合物的制备
20g碳酸钙(钙含量：38％)分散于500ml水中，搅拌溶解，向其中加入60g谷氨酸进行反应，然后该溶液被持续搅拌直到碳酸钙和谷氨酸完全溶解。接着向反应混合物中加入10g硫酸锌，1.5g硫酸锰，2g硫酸铜和2.2g硫酸亚铁，形成白色硫酸钙沉淀。在反应孵育30分钟后，将反应溶液离心去除不溶物，分离澄清的上清液。上清液经冷冻干燥得到大约65g可溶性无机复合因子-谷氨酸螯合物。
实施例19：氨基酸螯合物稳定性实验
进行下面的实验以确定实施例1中获得的氨基酸螯合物化合物在水溶液储藏很长时间的稳定性。
样品制备：
1)将上述氨基酸螯合物化合物添加到pH分别调整为3，5，7和9的蒸馏水中，制备样品。
2)将上述氨基酸螯合物化合物添加到利用缓冲液把pH分别调整为3，5，7和9的溶液中，制备样品。
3)将上述氨基酸螯合物化合物分别添加到选择的商业可获得的饮料(
Figure C20038010509800211
(Hyundai Pharm.，韩国)，
Figure C20038010509800212
(DongaPharm.，韩国)和橙汁(HaeTae Beverage公司，韩国))中，制备样品。
4)将上述氨基酸螯合物化合物分别添加到选择的商业可获得的化妆品(ISA
Figure C20038010509800213
(LG Chemical公司，韩国)，
Figure C20038010509800214
(AmorePacific公司，韩国))中，制备样品。
5)将上述氨基酸螯合物化合物作为植物生长加速剂添加到(GG Tech.有限公司，韩国)中，制备样品。
上述的样品分别储存于4，25和50℃，然后检测任何沉淀或pH的变化。
即使在上述条件下保持3个月后，仍然没有沉淀或pH显著变化出现。因此，根据本发明的方法制备的氨基酸螯合物显示在不同pH和温度条件下在不同的水溶液中是非常稳定的化合物。
实施例20：性质检验
将实施例1获得的氨基酸螯合物化合物添加到商业可获得的
Figure C20038010509800216
饮料(Hyundai Pharm.，韩国)中以检测氨基酸螯合物对饮料的性质包括口味和外观的影响。为检测以1％重量比加入到
Figure C20038010509800217
中的氨基酸螯合物的影响，10位专家检测得到的样品的口味和外观并要求提供其总体的等级评定。待检测的口味类别为谷氨酸盐口味和酸味，其中各种口味评价尺度为1(非常弱)，2(弱)，3(中等)，4(强)和5(非常强)。外观也通过检测样品的颜色和澄清度按照1(很差)，2(差)，3(中等)，4(好)和5(非常好)来评价。下面表3的结果是由十位专家检测得到的总值。记号“+”，“++”，“+++”和“++++”表示总值的范围，即10-19，20-29，30-39和大于40，其也分别代表“差(弱)”、“中等”、“好(强)”、和“非常好(非常强)”。
表3
Figure C20038010509800221
如上面的表3所示，可以确定根据本发明的氨基酸螯合物化合物对添加有螯合物化合物的饮料的性质(口味、外观等)没有负面影响。
实施例21：氨基酸螯合物作为调味品粉末的应用
0.5％重量比的五-核苷酸与99.5％重量比的实施例1获得的氨基酸螯合物化合物混和形成调味品粉末。品尝粉末状的调味品，可确定其与现有的调味品粉末谷氨酸钠的口味相同。因此本发明的氨基酸螯合物化合物可以用作调味品粉末。
实施例22：氨基酸螯合物作为液体调味品的应用
制备并品尝具有下面表4组成的液体混合物。确定液体混合物的口味与现有的调味品中谷氨酸钠的口味相同。因此，本发明的螯合物化合物可以用作液体调味品。
表4
  组分   含量
  水解植物蛋白(氮含量：3％)   10％
  浓缩金枪鱼酱   4％
  液体果糖   6％
  纯水   50％
  纯盐   8％
  实施例1的螯合物化合物   10％
  食糖   5％
  黄原胶   0.3％
  五-核苷酸   0.5％
  浓缩洋葱汁   2％
  浓缩蒜汁   1％
  浓缩牛肉汁   1％
  纯牛油   1％
  酒精   0.7％
  可溶性胡椒提取物   0.5％
实施例23：氨基酸螯合物在牛奶中的应用
实施例9获得的氨基酸螯合物化合物与橙汁以下面表5的组成混和，并保存很长时间，然而，没有发现形成沉淀和口味的改变。
表5
  组分   含量
  液体果糖   5％
  聚右旋糖   1％
  柠檬酸   5％
  维生素C   0.02％
  实施例9的螯合物化合物   2％
  浓缩橙汁   25％
  水   67％
实施例25：氨基酸螯合物在化妆品中的应用-1
制备组成为如下表6的润肤液化妆品，其含有实施例8中获得的氨基酸螯合物化合物，然后将其保持很长时间，然而，得到的乳液没有变色且在用于皮肤上时没有任何副作用。
表6
  组分   含量
  1，3-丁二醇   5％
  丙三醇   5％
  EDTA-二钠   0.02％
  三甲基氨基乙酸   2.0％
  十六烷醇   1.0％
  甘油基单硬脂酸酯乳化剂   1.0％
  聚山梨醇酯60   1.2％
  山梨聚糖倍半油酸酯   0.3％
  十六烷基2-乙基-己酸酯   4.0％
  异三十烷   5.0％
  二甲聚硅氧烷   0.3％
  甘油基硬脂酸酯   0.5％
  卡波姆   0.15％
  三乙醇胺   0.5％
  咪唑烷基脲   0.2％
  实施例8的螯合物化合物   2.0％
  纯水   71.8％
实施例26：氨基酸螯合物在化妆品中的应用-2
制备组成为下面表7的液体型化妆品，其含有实施例8获得的氨基酸螯合物化合物，然后保存很长时间，然而，得到的化妆品没有变色且在应用到皮肤上时也没有任何副作用。
表6
  组分   含量
  1，3-丁二醇   4.0％
  二丙(撑)二醇   5.0％
  EDTA-二钠   0.02％
  Octyldodeceth-16   0.3％
  PEG60氢化蓖麻油   0.2％
  实施例8的螯合物化合物   0.5％
  纯水   90％
实施例27：氨基酸螯合物在大鼠体内吸收程度的检测
1.实验描述
三周龄Sprague-Dawley雄性大鼠(Daehan Biolink Co.，Ltd.，韩国)在调整为基础饮食后用于本实验。这些大鼠分成正常组和实验组。正常组的饮食(“正常饮食”)根据AIN-76饮食配方制备，而实验组的饮食(“无钙饮食”或“实验饮食”)通过用缺少钙的无机混合物代替正常饮食组成中的无机混合物而制备。在喂饲各自的饮食24天后，实验组分成(1)喂饲无钙饮食的无钙对照组(2)喂饲碳酸钙作为补钙试剂的CaCO3对照组(3)喂饲海藻钙作为补钙试剂的SW-Ca对照组和(4)喂饲实施例13中获得的钙-天冬氨酸螯合物作为补钙试剂的Asp-Ca组。这些补钙试剂随同无钙饮食一起通过口服给药到各组，并且在大鼠处死之前持续给药一周。
口服给药的补钙试剂的浓度是AIN-76无机混合物中钙浓度的1/3，相当于雄性成年大鼠推荐量的10倍。3X蒸馏水用于制备实验饮食并且喂饲大鼠维持生命。分别给药到正常组和实验组的饮食组成描述于下面的表8。
表8.饮食组成(克/千克饮食)
Figure C20038010509800251
1)正常组：AIN-76无机混合物；实验组：缺钙无机混合物
乙醚麻醉下切开大鼠腹部，收集腹主动脉的血液并在取出腓骨后取出主要器官如肝脏、肾脏、脾等。血液在3000rpm离心10分钟以分离血清。各器官和骨用生理盐水平衡和洗涤，并除去其表面的水分以测量其重量和长度。
2.钙的测量
通过钙试剂Arsenazo III试剂盒(Sigma公司.，美国)测量血清和尿液中的钙含量。为测量粪便中的钙含量，将粪便(样品)置于Pyrex烧杯中，测量重量到0.1mg单位，然后加入5ml HNO3和2ml H2O2，将烧杯不加盖放于热的板上。在加热后冷却酸消化的样品，并向其中加入2ml H2O2。然后充分挥发该酸使HNO3的浓度为1-5％，接着用ICP-AES(感应耦合等离子体原子发射光谱仪)分析。分析条件如下：
-型号：Jobin Yvon 138Ultrace
-来源：氩等离子体(6000K)
-光谱范围：160-800nm
-分辨率：0.005nm(UV)
-检测范围：1x ppb～100x ppb
-分析波长：393.366nm
3.对主要器官重量的影响
下面的表9显示给钙饥饿的大鼠施用各补钙试剂对主要器官的重量方面的影响。无钙对照组的肝脏的重量比正常组要低，而Asp-Ca组的肝脏重量与正常组的几乎一样。肾脏和脾的重量各组没有不同。
表9.肝脏、肾脏和脾的重量
  肝脏(mg/BW)   肾脏(mg/BW)   脾(mg/BW)
  正常组   44.75±1.89   8.50±0.29   3.50±0.50
  无钙对照组   40.67±1.41   8.83±0.31   3.00±0.00
  CaCO<sub>3</sub>对照组   37.40±1.63   8.60±0.40   3.00±0.00
  Asp-Ca组   44.17±1.68   8.40±0.26   3.00±0.00
  SW-Ca对照组   36.00±0.63   8.20±0.20   3.00±0.32
4.对腓骨重量和长度的影响
如下的表10显示补钙试剂对钙饥饿的大鼠腓骨的重量和长度的影响。无钙对照组腓骨的重量比正常组少大约32.5％，当给药补钙试剂(在CaCO3对照组和Asp-Ca组的情况下)，腓骨的重量比无钙组高，但达不到正常组的水平。无钙对照组腓骨的长度比正常组的要低，而CaCO3对照组和Asp-Ca对照组腓骨长度比无钙对照组要高，在CaCO3对照组和Asp-Ca对照组之间没有显著差异。之前已有显示，如果钙摄入不足或海绵骨不含有足够钙，优先发生钙从其他骨向盆骨和椎骨转移，并且随着钙摄入的增加，海绵骨的大小增加。该现象表明本实验的结果，显示虽然由于缺钙腓骨的重量和长度降低，但它们能通过给药补钙试剂而增加。
表10.腓骨的重量和长度
  腓骨重量(g)   腓骨长度(mm)
  正常组   0.403±0.015   32.28±0.44
  无钙对照组   0.272±0.032   29.01±1.06
  CaCO<sub>3</sub>对照组   0.332±0.033   30.03±1.10
  Asp-Ca组   0.327±0.031   30.88±1.87
  SW-Ca对照组   0.292±0.043   28.83±1.49
5.血清、尿液和粪便中的钙浓度
下面的表11和12显示补钙试剂对钙饥饿的大鼠血清、尿液和粪便中的钙浓度的影响。当血液中钙浓度降低，副甲状腺激素的作用使钙从骨中流失，因此，血液中钙浓度对维持正常的骨代谢和骨重量是非常重要的生理因素。本实验的结果表明无钙对照组血液中钙的浓度比正常组显著降低，但在给药补钙试剂的组中比正常组高。尤其，Asp-Ca组和SW-Ca对照组的血液钙浓度大约等于正常组。相似的，无钙对照组中尿液钙浓度比正常组的低大约45％，但在给药补钙试剂组中与正常组差不多相等。
表11.血清和尿液中的钙浓度
  血清(mg/dl)   尿液(mg/dl)
  正常组   10.68±0.18   0.20±0.03
  无钙对照组   8.12±0.52   0.11±0.03
  CaCO<sub>3</sub>对照组   9.13±0.21   0.22±0.01
  Asp-Ca组   10.63±0.21   0.22±0.04
  SW-Ca对照组   10.44±0.07   0.32±0.02
表12.从眼球收集的血液中血清钙的浓度
  血清(mg/dl)
  正常组   12.19±0.38
  无钙对照组   8.60±0.51
  CaCO<sub>3</sub>对照组   8.52±0.27
  Asp-Ca组   11.24±0.85
6.钙的吸收
测量大鼠粪便中的钙含量，即排泄的钙量，分别为CaCO3对照组中最高，SW-Ca对照组次高，而Asp-Ca组最低。就相对吸收而言，CaCO3对照组未显示任何阳性吸收(0％)，SW-Ca对照组显示为28.8％。同时，Asp-Ca组显示65.9％，其比SW-Ca对照组的两倍还高。
表13.钙的相对吸收
  钙摄入(mg/3天)   粪便中的钙排泄(mg/3天)   相对吸收(％)
  无钙对照组   0   2.69   -
  CaCO<sub>3</sub>对照组   96   98.68   0
  Asp-Ca组   96   35.39   65.9
  SW-Ca对照组   96   71.05   28.8
实施例27氨基酸铁螯合物对Fe饥饿的大鼠吸收Fe的影响
1.实验描述
三周龄Sprague-Dawley雄性大鼠(Daehan Biolink Co.，Ltd.，韩国)在使用基础饮食一周后用于本实验。这些大鼠分成正常组和实验组。正常组的饮食(“正常饮食”)根据AIN-76饮食配方制备，而实验组的饮食(“无铁饮食”或“实验饮食”)通过用缺铁的无机混合物代替正常饮食组成中的无机混合物而制备。在给正常组和实验组喂饲分别喂饲正常饮食和无铁饮食24天后，实验组分成(1)铁饥饿对照组(2)喂饲亚铁血红素铁作为补铁试剂的亚铁血红素对照组，和(3)喂饲实施例17获得的铁-天冬氨酸螯合物作为补铁试剂的Fe-Asp对照组。这些补铁试剂随同实验饮食一起通过口服给药于大鼠，并且在大鼠处死之前持续给药一周。
口服给药的补铁试剂的浓度是雄性成年大鼠推荐量的10倍。3X蒸馏水用于制备实验饮食并且喂饲大鼠维持生命。分别给药到正常组和实验组的饮食组成描述于下面的表14。
表14.饮食组成(克/千克饮食)
Figure C20038010509800291
1)正常组：AIN-76无机混合物；实验组：缺铁无机混合物在实验前将大鼠在笼中适应一周，并在最后三天收集其粪便。在最后一天，在乙醚麻醉下切开大鼠腹部，从腹主动脉收集血液，取出主要器官如肝脏、肾脏、脾等。收集的血液一半置于含7.5％EDTAK3以防止凝集的真空试管中，剩余的血液以3000rpm离心10分钟分离血清。各器官用生理盐水进行平衡和洗涤，然后除去其表面的水分以测量重量和长度。
2.测量
从抗凝血测量CBC(全血计数：红细胞，RBC；白细胞，WBC；血细胞比容，HCT；血红蛋白，Hb)，并从血清测量铁和TIBC(总铁结合能力)。CBC用自动分析仪(ADVIA 120，Bayer，美国)测量。Isoton III(Beckman Coulter，美国)，Coulter clenz(Beckman Coulter)，Lyse S III(Beckman Coulter)，4％次氯酸钠溶液(Beckman Coulter)和4C-plus(Beckman Coulter)，Scatter Pak(Beckman Coulter)用作试剂。利用Nitrose-PSAP直接法通过自动生化分析仪(HITACHI 71501，日本)测量铁，并且SICDIA Fe-750REAGENT(YongYeon Chemical公司，韩国)用作试剂。TIBC通过生化分析仪(HITACHI 7150，韩国)使用Kit-TIBC试剂(RM 176-
Figure C20038010509800301
Eiken，日本)测量。
3.统计分析
本实验获得的所有数据使用SAS程序以平均标准差表示。在各组中利用Duncan氏多重比较检测在P＜0.05的范围内进行T检测。
4.主要器官重量的测量
表15显示给铁饥饿的大鼠施用各补铁试剂对主要器官重量的影响。无铁对照组肝脏的重量与正常组没有显著差异。类似地，在肾脏和脾的重量方面各组间没有显著差异。然而，给药Fe-Asp作为补铁试剂的Fe-Asp组显示最接近正常组的数值。
表15.大鼠肝脏、肾脏和脾的重量
  肝脏(mg/BW)   肾脏(mg/BW)   脾(mg/BW)
  正常组   39.25±0.85   7.50±0.29   3.00±0.41
  无铁对照组   39.90±0.90   7.30±0.21   2.70±0.15
  亚铁血红素对照组   36.90±1.06   7.20±0.13   2.78±0.15
  Fe-Asp组   40.60±1.00   7.50±0.22   3.00±0.15
5.血清中铁和TIBC的含量
定期向铁饥饿的大鼠给药补钙试剂，一定天数后，测量血液中铁和TIBC。如下面的表16所示，正常组铁的含量最高，而无铁对照组中含量非常低。亚铁血红素对照组和Fe-Asp组的值比正常组的低，但比无铁对照组显著高。考虑到TIBC值，即总铁结合能力，无铁对照组具有比正常组显著高的TIBC，亚铁血红素对照组的TIBC值与无铁对照组的相似。Fe-Asp组的TIBC值与正常组不接近，但比无铁对照组低。此外，还测量TS(转铁蛋白饱和度)；无铁对照组TS的值比正常组显著低，而在给药补铁试剂的组该值要高。Fe-Asp组的TS值比亚铁血红素对照组高。
表16.血清中铁和TIBC的浓度
  铁(μg/dl)   TIB C(μg/dl)   TS(％)
  正常组   224.50±33.65   662.75±17.02   33.87
  无铁对照组   96.13±10.27   841.90±13.90   11.42
  亚铁血红素对照组   140.8±25.55   824.63±11.60   17.07
  Fe-Asp组   175.2±24.61   735.44±9.30   23.82
6.血红蛋白和血细胞比容浓度的改变
下面的表17显示给铁饥饿的大鼠施用补铁试剂对RBC(红细胞)，WBC(白细胞)，Hb(血红蛋白)，HCT(血细胞比容)等浓度的影响。首先，无铁对照组Hb的浓度比正常组显著低。亚铁血红素对照组Hb的浓度与无铁对照组相似。Fe-Asp组Hb的浓度不接近正常组，但比无铁对照组明显高。这些结果表明给药Fe-Asp作为补铁试剂能帮助缺铁状态恢复。其次，亚铁血红素对照组和Fe-Asp组的HCT比无铁对照组高，其中Fe-Asp组的HCT接近正常组水平。该结果显示Fe-Asp是有效使缺铁状态恢复的补铁试剂。进一步，本实验给药补铁试剂7天，因此，如果给药时间延长，上述效果可能更为显著。
表17.RBC，WBC，Hb和HCT的浓度
  RBC(×10<sup>6</sup>/mm<sup>3</sup>)   WBC(×10<sup>3</sup>/mm<sup>3</sup>)   Hb(克/分升)   HCT(％)
  正常组   7.47±0.16   6.13±0.50   13.96±0.42   44.20±1.43
  无铁对照组   6.90±0.20   7.55±0.36   11.18±0.38   35.40±1.28
  亚铁血红素对照组   7.01±0.16   6.12±0.37   11.17±0.28   36.11±0.89
  Fe-Asp组   7.32±0.35   6.02±0.46   12.71±0.49   39.33±1.86
7.铁的吸收程度
测量大鼠粪便中的铁含量，排泄的铁含量在亚铁血红素对照组比Fe-Asp组显著高。考虑铁的相对吸收，亚铁血红素对照组显示吸收为21.3％，而Fe-Asp组显示吸收为50.2％，其是亚铁血红素对照组的两倍还多。
表18.铁相对吸收
  Fe摄入(μg/3天)  粪便排泄的Fe(μg/3天)   相对吸收(％)
  无铁对照组   0   247.4   -
  亚铁血红素对照组   1500   1427.4   21.3
  Fe-Asp组   1500   1000.6   50.2
工业实用性
如上所述，根据本发明的方法，可以容易地制备电中性和不带有干扰离子的金属氨基酸螯合物。此外，当加入到产品如医疗用品、食品、饮料、化妆品、饲料等中，这些氨基酸螯合物在广泛的温度和pH范围内是稳定的，并对产品的性质包括口味和外观没有影响。
本发明可以在不违背其实质和基本特征的条件下以多种形式实施，还应该理解的是，上述的实施例不受上述细节的限制，除有特别说明，其应当为在权利要求书的实质和范围内作广义的理解，因此，所有落在权利要求描述范围内的修改和修饰，或等同于这些范围的也应认为包括在权利要求书之内。

Claims (11)

1.一种制备氨基酸螯合物的方法，包括将天然存在的或合成的金属碳酸盐与酸性氨基酸在水溶液中反应的步骤，其中金属碳酸盐是一种或多种选自下列的二价或更高价碳酸盐：碳酸钙、碳酸铜、碳酸锌、碳酸亚铁、碳酸钴、碳酸铬、碳酸镁和碳酸锰，以及酸性氨基酸是谷氨酸、天冬氨酸或其组合。
2.权利要求1的方法，其中金属碳酸盐是天然存在的金属碳酸盐。
3.权利要求1的方法，其中金属碳酸盐是碳酸钙。
4.权利要求3的方法，其中碳酸钙来自天然存在的来源。
5.权利要求1的方法，其中反应中所用的金属碳酸盐和酸性氨基酸的量的摩尔比为1∶1～1∶4，反应温度在0～100℃的范围，以及反应pH在反应结束时调整为4～7。
6.权利要求5的方法，其中pH调整为4.5～6.5。
7.权利要求1的方法，其中在碳酸盐-氨基酸反应起始的同时、或反应进行中、或反应结束后，再加入金属硫酸盐，从而进行附加反应。
8.权利要求7的方法，其中金属硫酸盐在碳酸盐-氨基酸反应进行中或反应结束后加入，从而进行附加反应。
9.权利要求7的方法，其中金属硫酸盐是一种或多种选择下列的硫酸盐：硫酸钙、硫酸镁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸铬和硫酸钴，并含有与金属碳酸盐的金属离子不同的金属离子。
10.权利要求7的方法，其中用于附加反应的金属硫酸盐和碳酸盐-氨基酸螯合物的量的摩尔比为1∶1～1∶4，其中碳酸盐-氨基酸螯合物从金属碳酸盐与酸性氨基酸的反应得到。
11.权利要求4的方法，其中天然存在的来源为海藻钙、蛋壳钙、贝壳钙、墨鱼骨。
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