CH658072A5 - Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-2, nebramycin-5' und nebramycin-4. - Google Patents

Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-2, nebramycin-5' und nebramycin-4. Download PDF

Info

Publication number
CH658072A5
CH658072A5 CH3108/85A CH310885A CH658072A5 CH 658072 A5 CH658072 A5 CH 658072A5 CH 3108/85 A CH3108/85 A CH 3108/85A CH 310885 A CH310885 A CH 310885A CH 658072 A5 CH658072 A5 CH 658072A5
Authority
CH
Switzerland
Prior art keywords
nebramycin
mng
spores
strain
vegetative mycelium
Prior art date
Application number
CH3108/85A
Other languages
English (en)
Inventor
Istvan Dr Ott
Gabor Dr Ambrus
Tibor Dr Balogh
Miklos Fabian
Valeria Dr Szell
Laszlo Toelgyesi
Imre Moravcsik
Original Assignee
Biogal Gyogyszergyar
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogal Gyogyszergyar filed Critical Biogal Gyogyszergyar
Publication of CH658072A5 publication Critical patent/CH658072A5/de

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/46—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin
    • C12P19/48—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin the cyclohexyl radical being substituted by two or more nitrogen atoms, e.g. destomycin, neamin
    • C12P19/485—Having two saccharide radicals bound through only oxygen to non-adjacent ring carbons of the cyclohexyl radical, e.g. gentamycin, kanamycin, sisomycin, verdamycin, mutamycin, tobramycin, nebramycin, antibiotics 66-40B, 66-40D, XK-62-2, 66-40, G-418, G-52
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/46—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin
    • C12P19/48—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin the cyclohexyl radical being substituted by two or more nitrogen atoms, e.g. destomycin, neamin
    • C12P19/50—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical bound to a cyclohexyl radical, e.g. kasugamycin the cyclohexyl radical being substituted by two or more nitrogen atoms, e.g. destomycin, neamin having two saccharide radicals bound through only oxygen to adjacent ring carbon atoms of the cyclohexyl radical, e.g. ambutyrosin, ribostamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Kulturbrühen, die ein Gemisch von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' mit in voraus festgesetztem, beliebigem Komponentenverhältnis und Nebramycin-4 enthalten.
Es ist bekannt, dass Streptomyces tenebrarius ein aus mehreren Komponenten bestehendes, als Nebramycin bezeichnetes Antibiotikumgemisch produziert (Stark, Hoehn und Knox, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1967, S. 314; GB-PS Nr. 1 178 489 und US-PS 3 691 279). Das Antibiotikumgemisch enthält neben Minorkomponenten die Komponenten Nebramycin-2 (Apramycin), Nebramycin-4 (6"-0-Carbamoyl-kanamycin B) und Nebramycin-5' (6"-0-Carbamoyltobramycin) (Koch, Davis und Rhoades, J. of Antibiotics 26,745 [1973]). In der US-PS Nr. 3 853 709 ist ein ausschliesslich Nebramycin-2 und Nebramycin-7 produzierender Mikroorganismus beschrieben. In der US-PS 4 032 404 beschreiben japanische Autoren die Herstellung von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' durch Züchtung des Stammes Streptoalloteiçhus hindustanus. Gemäss dem Verfahren der HU-PS Nr. 176 103 können durch die belüftete, submerse Fermentation der Streptomyces tenebrarius MNG 169 und MNG 170 Stämme Fermentbriihen, die entweder Nebramycin-2, Nebramycin-5' und Nebramycin-4, oder Nebramycin-2 und Nebramycin-5' enthalten, gewonnen werden. Die Antibiotika können daraus nach der HU-PS Nr. 174 315 isoliert werden.
Nebramycin-2 wird erfolgreich zur Behandlung von Krankheiten an Tieren und Pflanzen eingesetzt (US-PS Nr. 3 691 279, Nr. 3 853 709 und Nr. 3 876 767), das durch Hydrolyse des Nebramycin-4 hergestellte Kanamycin 3 und das durch Hydrolyse des Nebramycin-5' hergestellte Tobramycin (Brulamycin) sind in der Humanmedizin angewandte Antibiotika mit breitem Wirkungsspektrum, die in erster Linie zur Bekämpfung von durch polyresistente Pseudomonas Stämme verursachten Infektionen Bedeutung haben (Preston und Wiek, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1970, 5 S. 322).
Mit dem Verfahren der HU-PS Nr. 176 173 wird ein Antibiotikumgemisch folgender Zusammensetzung gewonnen (Tabelle 1):
Tabelle 1
Stamm
Nebramycin-2
Nebramycin-4
%
Nebramycin-5'
MNG 169* MNG 170*
77 91
2
Spuren
21 9
* Stamm MNG 169 wurde am 28. Dezember 1977 und Stamm MNG 170 am 5. April 1978 in der Nationalen Stammsammlung des ungarischen Landesinstitutes für Gesundheitswesen 2o (Orszâgos Kôzegészségûgyi Intézet) unter der Bezeichnung MNG 169 und MNG 170 deponiert. Beide Stämme sind seit dem 28. Februar 1980 für jedermann zugänglich.
Offensichtlich biosynthetisierten die Stämme hauptsäch-25 lieh Nebramycin-2. Um Nebramycin-5' von den in Übergewicht anwesenden anderen Komponenten zu trennen, benötigt man komplizierte und kostspielige Methoden. Die Zusammensetzung eines biosynthetisierten Antibiotikumgemisches wird an erster Stelle durch den genetischen Informa-3o tionsbestand der Mikroorganismus-Zelle, und erst zu geringem Mass durch Fermentationsbedingungen bestimmt.
Fermentbrühen mit einem im voraus festgesetzten, jeweils durch Marktverhältnisse bedingten Komponentverhältnis können mit den gegenwärtig bekannten Verfahren nicht her-35 gestellt werden. Ferner muss bei der Nebramycin-5'-Produk-tion dieses Antibiotikum von dem im Übergewicht anwesenden Nebramycin-2 durch kostspielige Prozeduren getrennt werden. Stammveredelungsversuche für die Erhöhung der Produktionsfähigkeit sind in diesen Multikomponenten-40 Systemen äusserst arbeitsaufwendig und zeitraubend. Die Menge der einzelnen Komponenten muss nach dünnschicht-chromatografischer Trennung individuell, biologisch bestimmt werden. Es wäre überaus günstig, die Stammveredelungsversuche in einem einfache Bestimmung ermöglichen-45 den Einkomponentensystem durchzuführen. Andererseits scheint es wahrscheinlicher, die Produktionsfähigkeit eines solchen Stammes erhöhen zu können, der ein einziges Antibiotikum produziert, da in diesem Fall die ganze biosynthetische Kapazität für die Bildung einer einzigen Verbindung ein-50 gesetzt wird.
Ziel der Erfindung ist die Entwicklung eines neuen, einfachen Fermentationsverfahrens, womit Fermentbrühen, die ein Gemisch von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' mit im voraus festgesetztem, beliebigem Komponentenverhältnis und 55 Nebramycin-4 enthalten, gewonnen werden können.
In unseren Versuchen wurde überraschenderweise gefunden, dass der mit Äthidiumbromid (2,7-Diamino-10-äthyl-phenyl-phenanthridinium-bromid) vorbehandelte Streptomyces tenebrarius MNG 169 Stamm überhaupt kein Nebramy-60 cin-2, nur Spuren von Nebramycin-4, und Nebramycin-5' als Hauptkomponenten biosynthetisiert. Dieser Befund ist unerwartet und um so überraschender, als Äthidiumbromid bis jetzt noch nie als mutagene Verbindung eingesetzt wurde.
Für die Gewinnung eines Stammes, der ein Antibiotikum-65 gemisch mit verändertem Komponentverhältnis biosynthetisiert, wurden die Sporen von Streptomyces tenebrarius MNG 169 in einem flüssigen Nährmedium gezüchtet. Die ausgewachsene Kultur wurde in fünf Teile geteilt und 0,0,05,0,5,5 und 50 jig/ml Äthidiumbromid zugefügt. Die Züchtung
3
658 072
wurde für 24 Stunden fortgesetzt, dann wurde ein Teil der verdünnten Kultur auf Agarplatten geschichtet, der andere Teil dagegen mit einer gleichen Menge von Äthidiumbromid versetzt und für weitere 24 Stunden gezüchtet. Diese Prozedur wurde wiederholt, die erhaltenen, neuen, flüssigen Kulturen wurden nach 24 Stunden auf Agarplatten geschichtet, einige alleinstehende Kolonien isoliert und ihre Produktivität mit einem, in den Beispielen zusammengefassten Verfahren geprüft.
Zwischen den mehreren Hunderten von Stämmen, die aus Streptomyces tenebrarius MNG 169 isoliert wurden, gab es zwei Mutante, die kein Nebramycin-2, aber wenig Nebramy-cin-5' und Spuren von Nebramycin-4 produzierten. Um die Produktivität dieser Nebramycin-5' produzierenden Stämmen zu steigern, wurden Stamm-Selektionsarbeiten und Nährmedium-Optimierungsversuche durchgeführt. Während dieser Arbeiten ging einer der Stämme verloren, die Produktionsfähigkeit des anderen dagegen konnte auf das fünffache erhöht werden. Dieser Stamm wurde am 2. September 1981 in der Nationalen Stammsammlung des ungarischen Landesinstitutes für Gesundheitswesen (Orszägos Kôzegészségûgyi Intézet) unter der Bezeichnung MNG 204 deponiert.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Fermentbrühen, die ein Gemisch von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' in einem im voraus festgesetzten, beliebigen Verhältnis und Nebramycin-4 enthalten, wobei nach einer bevorzugten Ausführungsform Sporen oder das vegetative Mycel des ursprünglichen Streptomyces tenebrarius MNG 169 Stammes und diejenige des neuen, Nebramycin-2 nicht produzierenden Streptomyces tenebrarius MNG 204 Stammes in einem gewünschten Verhältnis vermischt und nachfolgend zusammen gezüchtet werden.
Überraschenderweise biosynthetisieren während dieser gemischten Fermentation beide Stämme eine höhere Konzentration des Antibiotikums, als in Fermentationen, die mit einem einzigen Stamm durchgeführt werden.
Aufgrund dieser Beobachtungen betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von Fermentationsbrühen, die ein Gemisch von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' in einem beliebigen, im voraus festgesetzten Verhältnis und Nebramycin-4 enthalten. In diesem erfindungsgemässen Verfahren werden die Sporen oder das vegetative Mycel eines beliebigen, Nebramycin-Komplex produzierenden Streptomyces tenebrarius Stammes, vorzugsweise jene des MNG 169 Stammes, und die Sporen oder das vegetative Mycel eines ausschliesslich Nebramycin-5' produzierenden Streptomyces tenebrarius Stammes, vorzugsweise jene des MNG 204 Stammes, in einem gewünschten Verhältnis vermischt, und in einem Nährmedium, das organische Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, anorganische Salze, Spurenelemente, tierische und/oder pflanzliche Öle und/oder Fette enthält, in submer-ser, belüfteter Fermentationskultur, bei Temperaturen von 33 bis 40 °C, vorzugsweise bei einer Temperatur von 37 °C, gezüchtet.
Nach einer vorteilhaften Ausführungsform des erfindungsgemässen Verfahrens zur Herstellung von Fermentbrü-hen, die neben Nebramycin-4 auch Nebramycin-2 und Nebramycin-5' in einem beliebigen, im voraus festgesetzten Verhältnis enthalten, werden die Sporen oder das vegetative Mycel von Streptomyces tenebrarius MNG 169 und jene von Streptomyces tenebrarius MNG 204 in dem gewünschten Verhältnis vermischt und in einer Mischkultur gezüchtet. Die gebildeten Antibiotika werden mittels an sich bekannten Methoden, vorzugsweise gemäss HU-PS Nr. 174 315, isoliert. Das Verhältnis von Nebramycin-2 und Nebramycin-5' ist beinahe proportional zu der Zellzahl der Streptomyces tenebrarius MNG 169 und MNG 204 Stämme.
Für jeden, im Thema kundigen Fachmann ist es offensichtlich, dass die Obigen nur in einem solchen Fermentationssystem gültig sind, wo die gemischten Zellen mit gleicher Geschwindigkeit proliferieren, ferner wo die Fermentationsparameter für die Biosynthese beider Komponenten gleich günstig sind, sonst kann das Komponentenverhältnis leicht 5 verschoben werden.'Die Festsetzung des jeweils günstigen Mischverhältnisses kann für einen Experten kein Problem bedeuten.
Erfindungsgemäss werden die Mikroorganismen in einem Nährmedium, das organische Kohlenstoffquellen, z.B. Stärke, io Glyzerin, Fruktose und ähnliches Verbindungen, vorzugsweise Glucose, organische Stickstoffquellen, z.B. Erdnuss-mehl, Maisbrei, Pepton, Hefeextrakt oder ähnliche Präparate, vorzugsweise Sojamehl, Kasein, Aminosäuren, insbesondere Glutaminsäure, vorzugsweise anorganische Stickstoffquellen, 15 insbesondere Ammoniumchlorid, Ammoniumnitrat und Ammoniumsulfat, anorganische Salze, vorzugsweise Magnesiumsulfat, Zinksulfat, Kobaltnitrat und Kalciumkarbonat, tierische und/oder pflanzliche Fette und/oder Öle, z.B. Palmöl, Leinöl, Sonnenblumenöl, Rapsöl, Schweinefett oder 20 andere Fette, vorzugsweise Palmöl und Leinöl im Gewichtsverhältnis von 1:1 sowie für die Züchtung essentielle Spurenelemente enthält, in submerser, belüfteter Kultur, in einem die Züchtung des Mikroorganismus fördernder Temperaturbereich zwischen 33 und 40 °C so lange gezüchtet, bis sich in 25 der Kulturbrühe signifikante Mengen des Antibiotikums anreichern. Die Antibiotika werden mit an sich bekannten Methoden isoliert.
Die Spurenelemente sind in den Bestandteilen des Nährmediums meistens als Verunreinigungen enthalten, können 30 aber auch separat zugefügt werden.
Die Menge der zur Züchtung zugeführten Luft wird der Zusammensetzung des Nährmediums und den technischen Daten des Fermentors entsprechend gewählt. Im allgemeinen ist es günstig, die Sauerstoffversorgung der Zellen so zu 35 gestalten, dass im austretenden Gasgemisch die C02-Konzen-tration 1,0% nicht überschreitet, ferner, dass der reduzierende Zuckergehalt des Nährmediums zwischen der 96. und 110. Stunde der Fermentation verbraucht wird.
Die Nährböden werden 30 bis 60 Minuten lang bei 121 bis -to 123 °C mit Dampf sterilisiert. Vor dem Sterilisieren wird ihr pH-Wert zweckmässig auf 7.2 bis 7.4 eingestellt.
Bei der Fermentation sind keine Zusätze zur Unterdrük-kung der Schaumbildung erforderlich, da das Nährmedium als Nährstoffquelle pflanzliche und/oder tierische Fette und/ 45 oder Öle enthält, die gleichzeitig auch die Schaumbildung hemmen.
Die Züchtung kann sowohl in Schüttelkolben wie in Laboratoriums-, Kleinbetriebs- und Grossbetriebsfermento-ren durchgeführt werden.
so Die Antibiotikumkomponente-Zusammensetzung der Kulturen wird durch Dünnschichtchromatogr^phie und anschliessende Bioautographie bestimmt. Auf Silicagel (Merck, Darmstadt) Dünnschichtplatten werden 0,1 bis 0,5 [Xg/ml des Antibiotikumkomplexes aufgetragen und die Plat-55 ten im System Ätanol-Methyläthylketon-25% Ammoniumhydroxid 1:1:1 entwickelt. Nach vollständigem Trocknen wird ein mit Bacillus subtilis ATCC 6633 beimpfter Nährboden auf die Platte geschichet, und bei 37 °C 16 Stunden lang bebrütet. Die Grösse der entstandenen Hemmungszonen wird so mit denen des Standards verglichen. Diese Bestimmung ist sowohl für qualitative wie auch für quantitative Wertung geeignet, Genauigkeit ± 10%.
Erfindungsgemäss können durch die Vermischung der Zellen der zwei unterschiedlichen Stämme und ihre nachfol-65 gende Züchtung in Mischkultur, Kulturbrühen, die Nebramycin-2 und Nebramycin-5' in einém beliebigen, den aktuellen wirtschaftlichen Marktansprüchen angepassten, im voraus festgesetztem Verhältnis enthalten, hergestellt werden. Es ist besonders vorteilhaft, dass im Laufe dieser Mischfermenta
658 072
4
tion keiner der Stämme einen wesentlichen Teil seiner Produktionsfähigkeit verliert, so werden insgesamt grössere Antibiotikummengen biosynthetisiert. Die Erfindung wird an Hand des nachstehenden Beispiels näher erläutert, ohne den Schutzumfang auf dieses Beispiel einzuschränken.
Beispiel
Herstellung von Kulturbrühen, die Nebramycin-2 und Nebramycin-5' in einem im voraus festgesetzten Verhältnis enthalten
Inokulum Nährmedien der folgenden Zusammensetzung
Sojamehl
2,0%
Kasein-hydrolysat (10%ig)*
3,0%
Ammoniumnitrat
0,1%
Ammoniumchlorid
0,3%
Kalciumkarbonat
0,3%
Magnesiumsulfat-heptahydrat
0,5%
Gemisch von Palmöl und Leinöl
im Gewichtsverhältnis von 1:1
3,0%
Glucose
(als 50%ige Lösung getrennt sterilisiert)
2,0%
* enzymatisch hydrolysiert werden hergestellt. Der pH-Wert des Nährmediums wird mit einer Natriumhydroxid-Lösung auf 7,2 eingestellt, dann wird es 20 Minuten lang bei 121 °C in einem Autoklaven sterilisiert. 10 x 100 ml Inokulum-Nährmedien werden mit der Sporensuspension von Streptomyces tenebrarius MNG 204 und weitere 10 x 100 ml Inokulum-Nährmedien mit denen von Streptomyces tenebrarius MNG 169 beimpft. Die Züchtung wird auf einem Schütteltisch mit einer Frequenz von 280
Minuten-1 und einer Amplitude von 2,4 cm 14 bis 18 Stunden lang bei 37 °C vorgenommen. Weiterhin werden 100 ml im 500 ml Erlenmeyer Kolben und 5 1 im 101 Fermentar sterilisierten Hauptfermentationsmedien folgender Zusammenset-5 zung
Sojamehl
3,0%
Kasein-hydrolysat (10%ig)*
5,0%
Ammoniumnitrat
0,1%
Ammoniumchlorid
0,5%
L-Glutaminsäure
0,8%
Kalciumkarbonat
0,5%
Magnesiumsulfat-heptahydrat
0,5%
Kobaltdinitrat-hexahydrat
0.001%
Gemisch von Palmöl und Leinöl
im Gewichts Verhältnis 1:1
3,0%
Glucose (als 50%ige Lösung
getrennt sterilisiert)
4,2%
,20 * enzymatisch hydrolysiert separat mit beiden Stämmen bzw. mit ihrer nachfolgend festgesetzten vermischten Kultur beimpft. Der pH-Wert des Nährmediums wird vor dem Sterilisieren mit wässrigem 25 Ammoniumhydroxid auf 7,2 eingestellt.
Die Fermentation selbst wird bei 37 °C, bei einer Rührdrehzahl von 360/Minute und steriler Luftzufuhr von 3 1/ Minute durchgeführt. Die Züchtung wird 144 Stunden lang fortgesetzt und der Antibiotikum-Komponentengehalt der 30 Kulturbrühe mit Dünnschichtchromatographie, anschliessender Autobiographie und Vergleichen mit dem Standard bestimmt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 zusammenge-fasst.
Tabelle 2
Züchtungs- Mikroorganis- Mikroorganis- Nebramycin-
bedingun- mus 1 mus 2 Komponente gen ml ml Hg/ml
2 4 5'
Schüttelkolben
1
MNG 169 5 ml
5040
180
1310
2
MNG 204 5 ml
0
80
2150
' 3
MNG 169 4,5 ml
MNG 204 0,5 ml
5640
175
1280
4
4,0 ml
1,0 ml
5140
195
1370
5
3,5 ml
1,5 ml
4740
180
1610
6
3,0 ml
2,5 ml
3140
240
1690
7
2,5 ml
2,5 ml
2850
170
1840
8
2,0 ml
3,0 ml
2310
190
1880
9
1,5 ml
3,5 ml
1320
240
2430
10
1,0 ml
4,0 ml
470
120
2340
11
0,5 ml
4,5 ml
150
95
2340
Fermentar i
I
MNG 169 200 ml
3900
210
870
II
MNG 204 200 ml
0
90
2300
III
MNG 169 175 ml
MNG 204 25 ml
4380
240
1130
IV
150 ml
50 ml
3050
340
1530
V
125 ml
75 ml
2450
220
1640
VI
100 ml
100 ml
2320
420
2150
VII
75 ml
125 ml
1420
300
2470
VIII
50 ml
150 ml
980
160
2540
IX
25 ml
175 ml
280
140
2310
Aus der Tabelle geht hervor, dass bei der Anwendung von Streptomyces tenebrarius MNG 204 und MNG 169 Kulturbrühen, die Nebramycin-5' und Nebramycin-2 in einem beliebigen, im voraus festgesetzten Verhältnis enthalten, hergestellt werden können. Das Antibiotikum kann aus der Kultur nach der HU-PS Nr. 174 315 isoliert werden.
Das bioautographische Bild von Kulturen I bis IX ist in Abbildung 1 dargestellt.
G
1 Blatt Zeichnungen

Claims (5)

658 072 PATENTANSPRÜCHE
1. Verfahren zur mikrobiologischen Herstellung von Kulturbrühen, die ein Gemisch von Nebramycin-2 und Nebramy-cin-5' in einem beliebigen, im voraus festgesetzten Verhältnis und Nebramycin-4 enthalten, dadurch gekennzeichnet, dass man die Sporen oder das vegetative Mycel eines beliebigen, Nebramycin-Komplex produzierenden Streptomyces tenebra-rius Stammes und die Sporen oder das vegetative Mycel eines ausschliesslich Nebramycin-5' produzierenden Streptomyces tenebrarius Stammes in einem gewünschten Verhältnis vermischt und in einem Nährmedium, das organische Kohlenstoffquellen und Stickstoffquellen, anorganische Salze, Spurenelemente, tierische und/oder pflanzliche Öle und/oder Fette enthält, in submerser, belüfteter Fermentationskultur bei Temperaturen von 33 bis 40 °C gezüchtet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Sporen oder das vegetative Mycel des Nebramycin-Komplex produzierenden Streptomyces tenebrarius Stammes MNG 169 verwendet.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Sporen oder das vegetative Mycel des ausschliesslich Nebramycin-5' produzierenden Streptomyces tenebrarius Stammes MNG 204 verwendet.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass im Nährmedium als organische Kohlenstoffquelle Stärke, Glyzerin, Fruktose, vorzugsweise Glucose, und als organische Stickstoffquelle Erdnussmehl, Maisbrei, Pepton, Hefeextrakt, vorzugsweise Sojamehl oder Kasein, Aminosäuren, insbesondere Glutaminsäure, eingesetzt werden.
' 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Züchtung der Mikroorganismen bei einer Temperatur von 37 °C durchgeführt wird.
CH3108/85A 1981-12-28 1982-12-27 Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-2, nebramycin-5' und nebramycin-4. CH658072A5 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU813954A HU190680B (en) 1981-12-28 1981-12-28 Process for preparing 6''-0-carbamoyl-tobramycin microbiologically

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CH658072A5 true CH658072A5 (de) 1986-10-15

Family

ID=10966213

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CH3108/85A CH658072A5 (de) 1981-12-28 1982-12-27 Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-2, nebramycin-5' und nebramycin-4.
CH7558/82A CH657374A5 (de) 1981-12-28 1982-12-27 Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-5'.

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CH7558/82A CH657374A5 (de) 1981-12-28 1982-12-27 Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-5'.

Country Status (9)

Country Link
AT (1) AT379171B (de)
BE (1) BE895455A (de)
CH (2) CH658072A5 (de)
DE (1) DE3248420A1 (de)
FI (1) FI74995C (de)
FR (1) FR2519023B1 (de)
GB (1) GB2114978B (de)
HU (1) HU190680B (de)
NL (1) NL8205011A (de)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3691279A (en) * 1970-04-15 1972-09-12 Lilly Co Eli Antibiotic nebramycin and preparation thereof
US3853709A (en) * 1970-10-26 1974-12-10 Lilly Co Eli Process for preparing nebramycin factors ii and vii
US4032404A (en) * 1976-07-14 1977-06-28 Bristol-Myers Company Fermentation process for producing apramycin and nebramycin factor V'

Also Published As

Publication number Publication date
NL8205011A (nl) 1983-07-18
GB2114978A (en) 1983-09-01
FI824483A0 (fi) 1982-12-28
DE3248420C2 (de) 1990-11-08
CH657374A5 (de) 1986-08-29
FR2519023B1 (fr) 1985-10-25
FR2519023A1 (fr) 1983-07-01
AT379171B (de) 1985-11-25
HU190680B (en) 1986-10-28
FI74995C (fi) 1988-04-11
FI824483L (fi) 1983-06-29
GB2114978B (en) 1985-09-11
ATA470482A (de) 1985-04-15
BE895455A (fr) 1983-06-23
DE3248420A1 (de) 1983-07-21
FI74995B (fi) 1987-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2161164A1 (de) Verfahren zur mikrobiologischen Her stellung von Protein sowie Verwendung des Verfahrensproduktes
DE3841152A1 (de) Verwendung von bakterienlysierendem enzymprodukt als zusatzstoff zur verbesserung der futterverwertung in der tierproduktion
DE3018767A1 (de) Verfahren zur herstellung von isopenicillin n unter verwendung eines zellfreien pilzkultur-extraktes
DE2843702A1 (de) Neue antibiotische substanz und ihre herstellung durch zuechtung eines streptomyces
DE60305476T2 (de) Wachstumsmedium für mikroorganismen umfassend die biomasse von methanotrophen und heterotrophen bakterien
CH662582A5 (de) Verfahren zur erhoehung der antibiotikum-produktion durch in vivo genetische rekombination.
DE2166462A1 (de) 7 beta -(d-5-amino-5-carboxyvaleramido)3-(alpha-methoxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsaeure-verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und solche verbindungen enthaltende arzneimittel
DE2428957C2 (de) Verfahren zur Herstellung von Desacetoxycephalosporin C
CH658072A5 (de) Verfahren zur mikrobiologischen herstellung von nebramycin-2, nebramycin-5' und nebramycin-4.
EP0236894B1 (de) Efomycin G, seine Herstellung und seine Verwendung als Leistungsförderer bei Tieren
DE1767183C3 (de) Verfahren zur Herstellung von mikrobiellem Labferment
DE1949719A1 (de) Verfahren zur Herstellung von Dextranase
DE2509653C2 (de) Gegen Kokzidien wirksame Substanz und deren Herstellung durch Kultur eines Streptomyces
DE2318650C2 (de) Fermentative Herstellung von Deacetylcephalosporin C
DE3706838C2 (de) Neue, physiologisch aktive Substanz, die einen Aldose-Reduktaseinhibitor darstellt, und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE2508914A1 (de) Neue gegen kokzidien wirksame substanz und deren herstellung durch kultur eines streptomyces
DE3018584A1 (de) Verfahren zur herstellung von d- alpha -aminosaeuren
DE2735456A1 (de) Neues antibiotikum
DE1517850C3 (de) 08.07.65 Frankreich 23961 Verfahren zur Herstellung von beta-Carotin durch aerobe Fermentation einer Kultur der Formen + und - von Blakeslea trispora
EP0248238B1 (de) Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Isoleucin aus D,L-alpha-Hydroxybutyrat
DE69307148T2 (de) Verfahren zur selektiven verbesserten herstellung des antibiotikum ge 2270 faktor a
CH648846A5 (de) Verfahren zur herstellung von mutterkornalkaloiden, insbesondere ergokornin und beta-ergokryptin.
DE940422C (de) Verfahren zur Herstellung von Vitaminsubstanzen
DE1617951C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Kasugamycin
DE2921022C2 (de)

Legal Events

Date Code Title Description
PL Patent ceased