CH646982A5 - Derives de tallysomycine, leur procede de production et medicament les contenant. - Google Patents

Description

La présente invention concerne une nouvelle série de dérivés semi-biosynthétiques de tallysomycine, qui sont doués de propriétés antimicrobiennes et antitumorales avantageuses.

Bien qu'on ait découvert un certain nombre d'antibiotiques gly-copeptidiques, certains d'entre eux ont également la propriété d'inhiber efficacement le développement de tumeurs chez des mammifères. Il subsiste le besoin de trouver d'autres agents antimicrobiens et antitumoraux. Il est nécessaire, en particulier, de trouver des agents antitumoraux qui exercent une activité accrue et/ou présentent un spectre élargi par rapport aux agents actuellement disponibles ou qui exercent moins d'effets secondaires indésirables. On donne ci-après un bref aperçu des antibiotiques glycopeptidiques les plus importants.

Les bléomycines sont des glycopeptides basiques solubles dans l'eau élaborés par fermentation de Streptomyces verticillus. Elles ont été mentionnées pour la première fois par Umezawa et collaborateurs dans «J. Antibiotics», 19 A: 200 (1966) (voir également le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3681491). Le complexe de bléomycine a été divisé en plusieurs composants comprenant les bléomycines A1; A2, A5 et B2. Le complexe de bléomycine est vendu à l'heure actuelle en vue du traitement de divers néoplasmes chez l'homme, comprenant le carcinome à cellules squameuses, le lym-phosarcome, le sarcome à cellules réticulaires, le cancer du testicule et la maladie de Hodgkin. Une révision de la structure des bléomycines a été récemment publiée par H. Umezawa et collaborateurs dans «J. Antibiotics», 31: 801-804 (1978).

45

Les antibiotiques du groupe de la phléomycine obtenus par fermentation d'une autre souche de Streptomyces verticillus ont été rapportés par Maeda et collaborateurs dans « J. Antibiotics», volume A9, pp. 82-85 (1956); volume A12, p. 111 (1959); volume A12, pp. 285-289 (1959) et volume A17, pp. 149-199 (1964). Comme dans le cas du complexe de bléomycine, la phléomycine a été divisée en plusieurs composants qui peuvent exister aussi bien sous la forme '^pourvue de cuivre que sous la forme chélatée avec le cuivre.

La zorbamycine et les antibiotiques apparentés, à savoir la zor-bonomycine B et la zorbonomycine C, sont décrits dans «J. Antibiotics», 24{%): 543-557 (1971) et dans le brevet britannique N° 1277150. Ces antibiotiques, isolés de milieux de fermentation de Streptomyces bikinìensis var. zorbonensis, sont étroitement apparentés aux familles de la bléomycine et de la phléomycine.

Une autre famille d'antibiotiques du groupe phléomycine-bléo-mycine a été isolée du bouillon de culture d'un variant de Streptomyces humidus et on lui a attribué la référence YA-56. Une description du complexe YA-56 et des composants actifs YA-56X et YA-56Y a été donnée dans «J. Antibiotics», 24 (10): 727-731 (1971) et dans «J. Antibiotics», 26: 77-83 (1973).

Le complexe antibiotique XK 49 et son composant principal, à savoir la victomycine (également appelé XK 49-1-B-2), ont été décrits dans «J. Antiobitics», 28: 358-371 (1975). La victomycine a été isolée d'un antinomycète producteur de sporanges, à savoir Streptosporangium violaceochromogenes MK-49, et paraît être semblable aux bléomycines et à la zorbonomycine B.

Le complexe antibiotique glycopeptidique Bu-2231 et ses composants Bu-2231 A et B (appelé ci-après tallysomycine et tallysomyci-nes respectivement A et B) ont été décrits dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 [voir également «J. Antibiotics», volume 30, pp. 779-805 (1977) et volume 31, p. 667-674 (1978)]. Les tallysomycines sont isolées du bouillon de fermentation de certaines souches de Streptoalloteichus hindustanus et exercent de puissantes activités antimicrobiennes et antitumorales.

La préparation de divers dérivés semi-biosynthétiques de phléomycine et de bléomycine par la technique de la fermentation alimentée par un précurseur a été décrite dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique Nos 3984390 et 3846400. Dans cette technique, des souches de micro-organismes capables de produire les antibiotiques phléomycine et bléomycine sont cultivées dans un milieu de fermentation en présence d'un précurseur aminé pour produire des dérivés nouveaux de phléomycine et de bléomycine présentant une structure en chaîne latérale qui correspond à l'amine ajoutée.

Le brevet britannique N° 2001962 A décrit la préparation de la 3-[(S)-r-phényléthylamino]propylaminobléomycine (pépléomycine) en tant que dérivé semi-biosynthétique de bléomycine particulièrement du fait qu'il allie une puissante activité antitumorale à une faible toxicité pulmonaire.

La présente invention offre de nouveaux dérivés semi-biosynthétiques de tallysomycines A et B et leur procédé de production. L'invention offre des dérivés de tallysomycine A de formule:

CO-NH, ^Hz s?

N' N

™p4

I OH !..

-1-CH—U i

OH

0 0

N_pC-NH-(CH2)3-ÇH-CH2-C-R i 1 5

H,N

OH

HO X 0-^NH2

i

NH,

(la)

646 982

dans laquelle R représente: -NH-(CH2)3-NH2 -NH—(CH2)3-S®(CH3)2,

- NH - (CH2)3 - NH - CH2 - CH2OH,

- NH - (CH2)3 -N(CH2CH2OH)2, -NH-(CH2)4-NH2, -NH-(CH2)3-NH-CH3, ou

- NH - (CH2)3 - NH -ÇH-<Q> ,

CH3

et des dérivés de tallysomycine B de formule: tfh,

nh2

—nh—(ch2)3 — s0(ch3)2, -nh-(ch2)2-nh2, -nh-ch2-ch-ch2-nh2>

I

oh

—nh—(ch2)2—nh—ch2—ch-

■ch,

h h2n ho

N' N

-w ohv^vnv^r

H,C HN, "

CH-CH-îi

' H S'

. K 1 0 1 ' H

HCr-CH3

I

OH

(Ib)

OH

- NH - (CH2)3 -NH - CH2 - CH2OH, —NH—(CH2)3 —N(CH3)2,

-NH- (CH2)3 -N(CH2CH2OH)2,

- NH - (CH2)2 - NH - CH2 - CH2OH, -NH-(CH2)4-NH2,

—NH—(CH2)3—NH—CH3,

—NH—(CH2)3 -NH-(CH2)3

-N O. N (

-£>

ou

OH

\-o--T-OH \—<A-ch nr h2n0h oh

25

ho

0'^NH2

dans laquelle R représente:

ch3

- nh - (ch2)3 - nh - ch-

I

ch3

ainsi que les sels d'addition d'acides acceptables du point de vue pharmaceutique de ces dérivés ou le chélate de cuivre de ces dérivés. Les composés mentionnés ci-dessus peuvent exister sous la forme d'un chélate de cuivre ou sous forme dépourvue de cuivre.

Une forme de réalisation particulièrement appréciée de la présente invention réside dans le dérivé de tallysomycine B de formule:

H2N

HO

C-NH-(CH2)4-NH2

H,C HN.

1 i ö 1 h

NOS* 3 HC) CH3

1 H

I

OH

H°-

ï tls H3C-T-071

Tallysomycine S

10b

OH

Wq-^-OH

wv-OH

HO 1

H3C-H2N OH

0- ^NH2

Des études initiales portant sur des animaux expérimentaux ont (par exemple néphrotoxicité) que les tallysomycines A et B naturel-démontré que la tallysomycine S10b (comprenant tant les formes dé- 5o les.

pourvues de cuivre que les formes chélatées avec le cuivre et leurs sels acceptables du point de vue pharmaceutique) déploie une excellente activité antitumorale contre un large spectre de tumeurs malignes, tout en présentant des effets secondaires moins indésirables

Le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 révèle la production et l'isolement de deux nouveaux antibiotiques glycopeptidi-'ques appelés Bu-2231 A et B. Des travaux subséquents ont montré que les composés Bu-2231 A et B (appelés maintenant tallysomyci-55 nés A et B) ont les structures ci-après:

co-nh2 çïh2

Lsk'-V""-

x 0

h2n ho

0 S

Il »

c-nh-(ch2)3-çh-ch2-c-nh nh„

JOXÏ1"I ÓH HCT-CH3

1 if3 "307-0-7'

(çh2)3

(çh2)4

nh,

oh hjcy h2n oh oh

9 °n

Tallysomycine A

5

646 982

2>4'NH2

Tallysomycine B

Les tallysomycines mentionnées ci-dessus sont les composants principaux de la fermentation de souches productrices de tallysomycine de Streptoalloteichus hindustanus isolées conformément aux méthodes chromatographiques classiques.

On vient de découvrir, conformément à la présente invention, 25 que la méthode de fermentation révélée dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 précité peut être conduite en présence de certains précurseurs aminés pour produire des dérivés nouveaux de tallysomycines A et B douées de propriétés antimicrobiennes et antitumorales intéressantes. 30

La technique générale de fermentation alimentée par un précurseur aminé décrite dans les brevets des Etats-Unis d'Amérique Nos 3984390 et 3846400 est exploitée dans le procédé de la présente invention. Dans le procédé de l'invention, un précurseur aminé est ajouté au milieu de fermentation produisant la tallysomycine con- 35 formément au brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 précité et il est incorporé au cours de la fermentation au groupe amine terminal de la tallysomycine A et/ou de la tallysomycine B pour former de nouveaux dérivés semi-biosynthétiques comportant une chaîne latérale aminée terminale correspondant au précurseur aminé que 40 l'on ajoute. L'isolement et la purification des dérivés ainsi obtenus peuvent être effectués par des opérations chromatographiques classiques comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 précité. Une description plus détaillée de ce procédé est donnée ci-dessous et dans les exemples qui suivent. 45

Préparation des antibiotiques

Dans la mise en œuvre du procédé de l'invention, une souche de Streptoalloteichus hindustanus productrice de tallysomycine (comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 so précité), notamment la souche E 465-94 ATTC 31 158 de Streptoalloteichus hindustanus ou un mutant de cette souche, est cultivée dans un milieu nutritif aqueux. Le milieu nutritif renferme d'habitude une source assimilable de carbone (par exemple glucose, ribose, galactose, fructose, mannose, saccharose, lactose, amidon soluble ou gly- 55 cérol) et une source assimilable d'azote (par exemple farine de poisson, farine de soja, farine de graine de cotonnier, extrait soluble de maïs, peptones, extrait de malt, farine d'arachide, extrait de levure ou sels d'ammonium). Des sels inorganiques tels que le chlorure de sodium, le chlorure de potassium, le sulfate de magnésium, le 50 carbonate de calcium, des phosphates, etc., sont ajoutés le cas échéant. Des oligo-éléments tels que cuivre, manganèse, fer, zinc, etc., sont ajoutés éventuellement au milieu ou peuvent être introduits sous forme d'impuretés avec d'autres constituants du milieu.

En plus des constituants nutritifs aqueux, il y a un précurseur 65 aminé comme défini ci-après sous la forme de la base libre ou sous la forme d'un sel d'addition d'acide de cette base. Généralement, le précurseur aminé est utilisé sous la forme d'une solution aqueuse neutralisée. Les précurseurs aminés que l'on utilise dans le procédé selon la présente invention sont indiqués ci-après en même temps que le nom de code de la tallysomycine correspondante obtenue comme produit:

(Tableau en tête de la page suivante)

Les aminés utilisées sous forme de bases libres ou de sels d'addition d'acides avec des acides minéraux tels que HBr ou HCl sont ajoutées de préférence au milieu à une concentration d'environ 0,05 à 0,4% en poids/volume, notamment d'environ 0,1 à 0,2% en poids/ volume au début de la fermentation, bien que de bons résultats puissent aussi être obtenus par addition par portions de solution d'amine pendant les premiers stades de la fermentation.

On conduit la fermentation de préférence en suivant le mode opératoire décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 4051237 précité. Conformément à ce brevet, la température d'incubation peut être toute température à laquelle une souche produisant de la tallysomycine est capable de se développer, par exemple 20-54° C, mais il est préférable de conduire la fermentation à 25-35° C, notamment à 27-32° C. On utilise de préférence un pH initial du milieu neutre ou presque neutre, par exemple un pH d'environ 6 à 7, et on conduit généralement la production de l'antibiotique pendant une période d'environ 2 à 10 d. Ordinairement, la production optimale est obtenue en 3 à 7 d. Pour la préparation de quantités relativement faibles, on peut utiliser des fioles agitées par secousses et une culture en surface mais, pour la production à grande échelle, on préfère utiliser une culture aérobie en immersion dans des cuves stériles. Lorsqu'on doit effectuer une fermentation en cuves, il est désirable de produire un inoculum végétatif dans un bouillon nutritif par inoculation de bouillon de culture avec des spores provenant de l'organisme producteur. Lorsqu'on a obtenu un inoculum végétatif actif jeune, on transfère cet inoculum dans des conditions aseptiques dans le milieu renfermé dans la cuve de fermentation. Une aération dans des cuves et des bouteilles peut être effectuée par injection d'air dans le milieu en cours de fermentation ou à sa surface. L'agitation dans les cuves peut être effectuée mécaniquement à l'aide d'un rotor, et on peut ajouter, le cas échéant, un agent antimousses tel que l'huile de saindoux.

La production du dérivé désiré de tallysomycine dans le milieu de culture peut être suivie au cours de la fermentation par la méthode de diffusion en gélose avec disques de papier, en utilisant comme organisme d'essai la souche M6-3 de Mycobacterium smeg-matis.

Isolement et purification

Après que la puissance optimale du bouillon a été atteinte (comme déterminé par exemple par la méthode d'essai mentionnée ci-dessus), le mycélium et les résidus non dissous sont séparés du

646982

6

* On nomme les dérivés de tallysomycine en attribuant un numéro à chaque précurseur aminé, puis en désignant la tallysomycine obtenue comme produit final par le numéro de son amine terminale et par la lettre a ou b selon qu'il s'agit d'un dérivé de tallysomycine A ou B. Par exemple, la tallysomycine S10b est le dérivé de tallysomycine B dont l'amine terminale est le 1,4-diaminobutane.

Amine

Tallysomycine obtenue comme produit final*

Nom chimique

Formule

1.2-diaminoéthane

1.3-diaminopropane

1.4-diaminobutane

1,3-diamino-2-hydroxypropane

NH2-(CH2)2-NH2

NH2-(CH2)3-NH2

NH2-(CH2)4-NH2

NH2 - CH2 - CH - CH2 - NH2 1

s,b

S[a> Slb S|0ai S,„b S.'.b

N-(P-hydroxyéthyl)-1,2-diaminoéthane N-(ß-hydroxypropyl)-1,2-diaminoéthane

OH

NH2 - (CH2)2 - NH - CH2 - CH2OH

NH2 - (CH2)2 - NH - CH2 - CH - CH3

i

Sçb S5b

N-méthyl-1,3-diaminopropane N-(p-hydroxyéthyl)-1,3-diaminopropane

OH

NH2-(CH2)3-NH-CH3

NH2 - (CH2)3 -NH - CH2 - CH2OH

Sila, Sub Sêa, S6b

N-(l '-phényléthyl)-l ,3-diaminopropane

NH2-(CH2)3-NH-CH-Ç^

S[4a> S 14b

N,N-diméthyl-l ,3-diaminopropane N,N-di(P-hydroxyéthyl)-l,3-diaminopropane

N-(3-aminopropyl)morpholine ch3

NH2—(CH2)3 — N(CH3)2

NH2 -(CH2)3 -N(CH2-CH2OH)2

NH2-(CH2)3-N O \ t

NH2-(CH2)3-N^)

ch3

NH2—(CH2)3—S®(CH3)2 1

Cl©

S,b

Sga, S8b

Sl2b

N-(3-aminopropyl)-2-pipécoline

Sl3b

Chlorure de 3-aminopropyldiméthylsulfonium

S2a> S2b bouillon de fermentation par des moyens classiques, par exemple par filtration ou par centrifugation. L'activité antibiotique se trouve dans le filtrat et peut en être isolée par des techniques classiques d'adsorption [voir par exemple «J. Antibiotics», 30 (10): 779-788 (1977)].

Dans une forme de réalisation appréciée, le filtrat est tout d'abord adsorbé sur une résine d'échange cationique, par exemple une résine du type vendu par la firme Rohm & Haas Company sous la désignation commerciale Amberlite IRC-50 (forme NH4.+). On lave la résine avec de l'eau et on élue les fractions de tallysomyeine avec un acide minéral aqueux, par exemple l'acide chlorhydrique dé-cinormal. L'éluat contenant les fractions actives est neutralisé avec une solution aqueuse d'ammoniac et il est de préférence agité avec du carbone activé. Le charbon est recueilli par filtration, lavé à l'eau puis élué avec du butanol aqueux (butanol/HCl dilué, 1/1 volume/ volume) à un pH acide (par exemple pH 2). La phase aqueuse de l'éluant est neutralisée avec une résine basique d'échange anionique et concentrée sous vide. L'éluat concentré venant de la résine IRC-50 (si l'étape d'adsorption sur du carbone a été omise) ou de carbone activé est ensuite dissous dans l'eau, adsorbé sur une résine du type Diaion HP-20 (désignation commerciale d'une résine adsorbante non ionique macroporeuse composée d'un copolymère styrène/di-vinylbenzène produit par la firme Mitsubishi Chemical Co.) et élué avec de l'eau en donnant un mélange de tallysomycines brutes sous la forme du chélate de cuivre.

La séparation et la purification des dérivés de tallysomycine désirés formés au cours de la fermentation amorcée par un précurseur peuvent être effectuées par adsorption du complexe de tallysomycine brute obtenu ci-dessus, sur un échangeur cationique d'ions consistant en un dérivé de dextrane modifié, par exemple un dex-trane polysaccharidique modifié du type vendu dans le commerce sous la marque déposée CM-Sephadex C-25 par la firme Pharmacia Fine Chemicals Inc. Le ou les dérivés de tallysomycine sont élués par étapes avec une solution aqueuse de formiate d'ammonium dont les concentrations varient d'environ 1 à 7%. Des fractions contenant le même dérivé sont rassemblées, relarguées par adsorption sur du carbone activé (élution avec du butanol aqueux acide) et lyophilisées en donnant le dérivé de tallysomycine purifié sous la forme d'un chélate de cuivre. On peut parfaire la purification, le cas échéant, par 50 des opérations classiques de Chromatographie et/ou de filtration sur gel.

Les dérivés de tallysomycine de la présente invention ont la propriété de se chélater avec le cuivre comme le font les tallysomycines A et B et, en conséquence, les nouveaux dérivés et leurs sels d'addi-55 tion d'acides peuvent exister sous la forme d'un complexe de cuivre ou sous la forme dépourvue de cuivre. Les formes dépourvues de cuivre des dérivés de tallysomycine peuvent être préparées à partir des formes correspondantes complexées avec le cuivre, par les procédés connus tels que ceux qui sont décrits dans le brevet des Etats-60 Unis d'Amérique N° 4051237 et dans la demande de brevet britannique mise à l'inspection publique sous le N° 2001962 A.

Les dérivés de tallysomycine sous la forme des bases libres de la présente invention peuvent être convertis, par des opérations classiques, en sels d'addition d'acides acceptables du point de vue phar-65 maceutique. Des exemples de ces sels comprennent les sels non toxiques d'acides orgnaiques ou inorganiques tels que les acides chlorhydrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique, stéarique, ma-léique, benzoïque, succinique et bromhydrique.

40

45

7

646 982

Activité antimicrobienne

Les concentrations inhibitrices minimales (CIM) des dérivés semi-biosynthétiques de tallysomycine de la présente invention ont été déterminées contre des champignons et des bactéries Gram positives, Gram négatives et acidorésistantes par la méthode de dilution double sur gélose. De la gélose nutritive a été utilisée pour les bactéries et de la gélose de Sabouraud a été utilisée pour les champignons. Les résultats sont reproduits sur le tableau suivant, comparativement aux tallysomycines A et B.

Activité antimicrobienne de dérivés de tallysomycine

Tallysomycine

Staphylo-coccus aureus Smith

Sorcina lutea PCI 1001

Bacillus subtilis PCI 219

Mycobacterium 607

A

0,1

0,05

<0,003

0,2

B

0,4

0,4

0,006

0,2

s,.

0,4

0,1

<0,003

0,012

S,b

1,6

1,6

<0,05

<0,05

S*

0,2

0,8

<0,05

<0,05

S2b

1,6

6,3

<0,05

0,2

S3b

0,8

1,6

0,013

0,05

0,8

3,1

0,006

0,003

s3b

6,3

12,5

0,025

0,2

Séa

0,8

1,6

0,03

0,4

Sêb

6,3

12,5

0,02

0,2

Sîb

6,3

12,5

0,1

3,1

Ssa

0,2

0,4

0,006

0,1

Sgb

0,4

0,8

0,013

0,1

§9b

0,4

0,8

0,013

0,1

SlOa

1,6

0,4

0,04

0,2

SlOb

6,3

3,1

0,2

0,2

Sila

0,8

0,2

0,025

0,1

Sllb

3,1

0,8

0,1

0,1

Sl2b

12,5

12,5

0,4

0,2

S|3b

6,3

6,3

0,8

0,2

s,4a

0,8

0,8

0,1

0,1

S 14b

3,1

3,1

0,4

0,2

Activité antimicrobienne de dérivés de tallysomycine

Tallysomycine

Escherichia coli NIHJ

Proteus mirabilis A 9554

Candida albicans IAM 4888

Aspergillus fumigatus IAM 2593

A

0,05

0,4

12,5

1,6

B

0,2

0,2

6,3

0,8

S,a

0,1

0,4

3,1

0,8

Sib

0,4

1,6

12,5

1,6

s*

<0,05

0,2

6,3

0,4

S2b

0,4

1,6

25

0,8

Sab

0,1

0,2

12,5

0,8

S4b

0,4

0,4

25

0,8

S5b

0,4

3,1

25

0,4

Séa

0,4

1,6

6,3

0,2

Sßb

0,4

3,1

25

0,8

S,b

0,4

6,3

>50

0,4

S8a

0,1

0,4

12,5

0,8

Sab

0,2

0,8

>50

1,6

Sgb

0,1

0,8

25

1,6

SlOa

0,4

0,8

3,1

1,6

SlOb

0,8

3,1

12,5

6,3

Sila

0,1

0,2

1,6

0,8

Activité antimicrobienne de dérivés de tallysomycine (suite)

Tallysomycine

Escherichia coli NIHJ

Proteus mirabilis A 9554

Candida albicans IAM 4888

Aspergillus fumigatus IAM 2593

Sub

0,2

1,6

12,5

6,3

Sl2b

1,6

50

>100

25

S 13b

0,4

12,5

>100

12,5

Sl4a

0,2

3,1

50

3,1

Sl4b

0,4

25

>100

25

Les pouvoirs antibactériens relatifs (étalon de tallysomycine A = 1000 ixg/mg) des dérivés de tallysomycine ont été déterminés par la méthode de diffusion en gélose avec disques de papier, en utilisant comme organisme d'essai la souche M6-3 de Mycobacterium smegmatis. Les résultats sont reproduits sur le tableau suivant.

Pouvoir antibactérien de dérivés de tallysomycine

Pouvoir

Tallysomycine antibactérien

(Hg/mg)

A

1000

B

900

Sia

1075

S,b

1000

S2a

350

S2b

300

S3b

725

S4b

405

S5b

500

Sßa

460

Sób

340

S,b

380

S8a

550

Sab

370

Sçb

380

SlOa

1450

SlOb

1100

Sila

570

Sllb

450

Sl2b

390

S 13b

1090

S 14a

1300

s 14b

1090

Activité antitumorale

L'activité d'induction de prophages de la bactérie lysogénique E. coli W1709 (X) a été déterminée conformément à la méthode décrite par Lein et collaborateurs dans «Nature», 196: 783-784 (1962). Le comptage des plaques a été effectué sur la plaque de gélose renfermant le composé d'essai t et une plaque c. Un rapport t/c des nombres de plaques supérieur à 3,0 est défini comme étant un niveau important et l'activité d'induction lysogénique (activité ILB) est exprimée par la concentration minimale pouvant être induite du composé d'essai. Les résultats sont reproduits sur le tableau suivant.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

646 982

8

Activité ILB de dérivés de tallysomycine

Tallysomycine

Activité ILB (Hg/ml)

A

0,00125

B

0,01

Sia

0,16

S,b

0,31

Sla

0,31

S2b

0,63

s3b

0,31

Silb

—

S5b

0,08

Sßa

0,02

Sôb

0,08

Sîb

0,08

Sga

0,005

Sgb

0,02

S()b

0,16

SlOa

0,16

SlOb

0,31

Sila

0,08

Sllb

0,63

Sl2b

0,31

Sl3b

0,08

Sl4a

0,01

Sl4b

0,04

L'activité antitumorale des dérivés de tallysomycine a été étudiée sur quatre types de tumeurs expérimentales chez la souris. La leucémie à lymphocytes P388 et le carcinome pulmonaire de Lewis ont été implantés par voie intrapéritonéale à des souris BDFj des deux sexes, à des taux respectifs d'inoculum de 3 x 105 et 5 x 105 cellules par souris. On inocule la tumeur d'ascite (sarcome 180) par voie intrapéritonéale à des souris mâles de souche dd à raison de 2,5 x 1016 cellules par souris. Le mélanome mélanotique B16 est implanté par voie sous-cutanée à des souris BDFt à raison de 5 x 105 cellules par souris. 24 h après l'implantation de cellules tumorales, on administre des doses graduelles des composés d'essai à des souris par voie intrapéritonéale, le volume d'injection étant de 0,2 ml/10 g de poids corporel. Les composés d'essai sont administrés une fois par jour pendant 9 d (programme qd 1 ->9), excepté aux souris auxquelles on inocule le carcinome du poumon de Lewis, qui sont traitées pendant 11 d (qd 1 -► 11). On note quotidiennement les cas mortels et les survivants parmi les animaux traités et non traités (témoins) pendant la période d'observation de 45 d après l'implantation de cellules tumorales, et on calcule le temps moyen de survie pour chacun des groupes d'essais (T) et des groupes témoins (C). Une valeur T/C égale ou supérieure à 125% indique qu'un essai antitumoral important a été obtenu contre la leucémie P388 et le carcinome pulmonaire de Lewis. La dose réelle donnant un rapport T/C de 125% a été estimée par analyse par régression linéaire et définie comme étant la dose efficace 125 ou DE125. La dose efficace 150 (DE150) a été utilisée pour évaluer l'effet antitumoral contre le sarcome 180. Dans l'essai portant sur le mélanome B16, les dimensions de la tumeur ont été déterminées 16 d après l'inoculation des cellules tumorales et la dose donnant une inhibition de 50% de la croissance de la tumeur (DIS0)a été calculée d'après les courbes de régression. L'activité antitumorale des dérivés est indiquée sur le tableau suivant.

( Tableau en tête de la colonne suivante)

Des doses graduelles des composés d'essai sont administrées par voie intrapéritonéale à des groupes de souris dd. L'injection est effectuée une seule fois ou une fois par jour pendant 9 d consécutifs. On note les cas mortels ou des cas de survie des animaux pendant

Activité antitumorale (mg/kg/d, voie intrapéritonéale)

Tallysomycine*

P 388 (DE12S)

S 180 (DE1S0)

B 16 (Diso)

Cancer du poumon de Lewis (DE125)

A (sans Cu)

0,26

0,07

0,27

0,13

B (sans Cu)

0,89

0,06

0,82

0,11

S,a

1,2

0,07

0,84

—

Slb

2,0

0,11

0,15

0,12

Sia

>3,0

0,07

0,17

0,14

S2b

0,91

0,12

0,33

0,65

S3b

0,32

0,06

0,20

0,26

S4b

>3,0

0,13

0,50

—

Ssb

0,66

0,10

0,31

0,38

Sôa

0,70

0,09

0,12

0,47

Sób

2,2

0,08

0,22

0,17

Sîb

2,1

0,14

0,16

—

Sga

0,78

—

—

—

Sgb

1,5

0,25

0,26

0,12

Sgb

>3,0

0,42

0,29

0,41

SlOa

0,28

0,08

0,39

—

SlOb

—

• 0,03

0,59

—

S10b (sans Cu)

0,47

0,02

0,75

0,21

Sua

0,60

—

—

—

Sub

0,28

0,20

0,70

0,32

S 12b

1,30

0,06

1,30

—

S|3b c

0,70

0,33

0,23

—

a!4a

Sl4b

3,0

0,08

0,43

0,29

* Forme chélatée avec le cuivre, sauf spécification contraire.

30 d après la dernière dose de composé d'essai pour calculer la dose létale moyenne simple ou multiple (DL50). Les résultats sont reproduits ci-dessous.

Toxicité aiguë de dérivés de tallysomycine

Tallysomycine*

DLso (mg/kg/d, voie intrapéritonéale)

Dose unique

Dose multiple (qd 1 - 9)

A (sans Cu)

19

4,4

B (sans Cu)

46

6,8

Sia

25

—

S,b

19

—

s*

25

—

S2b

32

2,0

S3b

19

—

S4b

13

—

S5b

46

4,0

Sóa

15

—

S«,

30

—

S,b

30

—

S8a

42

—

Sgb

30

—

Sgb

32

—

SlOa

27

—

SlOb

27

—

S10b (sans Cu)

42

4,0

Sua

18

—

Sub

21

—

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Toxicité aiguë de dérivés de tallysomycine (suite)

Tallysomycine*

DLS0 (mg/kg/d, voie intrapéritonéale)

Dose unique

Dose multiple (qd 1 - 9)

S|2b

>50

—

Sl3b

35

—

S 14a

—

—

S 14b

—

16

* Forme chélatée avec le cuivre, sauf spécification contraire.

L'indice thérapeutique antitumoral a été calculé pour chaque dérivé d'après le rapport de la toxicité et de l'activité antitumorale. Comme l'indique le tableau suivant, plusieurs des nouveaux dérivés semi-biosynthétiques de tallysomycine présentent de meilleurs indices thérapeutiques que les tallysomycines A et B d'origine naturelle dans certaines des tumeurs expérimentales qui ont été examinées.

Indices thérapeutiques antitumoraux de dérivés de tallysomycine

Tallysomycine*

Indices thérapeutiques antitumoraux**

P 388

S 180

B 16

Cancer pulmonaire de Lewis

A (sans Cu)

73

271

70

146

B (sans Cu)

52

767

56

418

s,.

21

357

30

—

S,b

10

173

127

158

S3a

<8

357

147

179

s2b

35

267

97

49

S3b

59

317

95

73

S4b

<4

100

26

—

S5b

70

460

148

121

$6a

21

167

125

32

§6b

14

375

136

176

s»

14

214

188

—

S8a

54

—

—

—

Sgb

20

120

115

250

Syb

<11

76

110

78

SlOa

96

338

69

—

SlOb

—

900

46

—

S,0b (sans Cu)

89

2100

50

200

Sila

30

—

—

—

Sl[b

75

105

30

66

Sl2b

>38

>833

>38

—

Sl3b Su

50

106

152

—

"Ma

Sl4b

—

—

—

—

* Forme chélatée au cuivre, sauf spécification contraire.

** Rapport de la toxicité (DL50) pour une dose unique à la dose antitumorale efficace (DE12s, DE1S0 ou DI50).

On a évalué la néphrotoxicité de la tallysomycine S[0b sur Ie modèle de la souris en utilisant un dosage de l'azote d'urée sanguine comme critère d'appréciation et l'hydroxyproline pulmonaire comme modèle de toxicité pulmonaire [voir «Cancer Res.», 35: 787 (1978)]. La toxicité de la tallysomycine S10b envers le rein n'est pas supérieure à celle de la bléomycine, à des doses équitoxiques. La tal-

646982

lysomycine S]0b produit un accroissement du taux d'hydroxyproline pulmonaire, qui est l'indice d'une toxicité pulmonaire. Toutefois, la pente à la dose a été plus plate que celle que l'on observe avec la bléomycine, et la teneur en hydroxyproline aux doses fortes a été réduite comparativement à celle d'animaux traités avec la bléomycine, à des doses équitoxiques.

Comme l'indiquent les résultats donnés ci-dessus, les dérivés de tallysomycine de la présente invention sont utiles comme agents antimicrobiens pour inhiber le développement d'organismes microbiens, tant bactériens que fongiques, qui sont pathogènes envers les animaux et les plantes. Ils sont également utiles pour inhiber le développement de tumeurs chez les mammifères. Les composés peuvent être administrés de la même manière que la bléomycine du commerce, et les doses optimales pour un ensemble donné de conditions peuvent être déterminées par l'homme de l'art par des tests classiques de détermination de la dose et d'après les résultats donnés ci-dessus.

La présente invention couvre également des compositions pharmaceutiques qui renferment une quantité antimicrobienne ou antitumorale efficace d'un dérivé de tallysomycine de la présente invention, ou d'un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de ce dérivé, en association avec un véhicule ou diluant inerte acceptable du point de vue pharmaceutique.

Le traitement thérapeutique d'un animal (de préférence un mammifère) atteint d'une infection microbienne ou d'une tumeur maligne, a lieu par l'administration à l'animal en question d'une dose antimicrobienne ou antitumorale efficace d'un dérivé de tallysomycine de la présente invention ou d'un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de ce dérivé.

L'invention est illustrée par les exemples suivants, donnés à titre non limitatif.

Exemple 1 - S2a et S2b

Un milieu gélosé incliné à l'extrait de malt est inoculé avec Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31 158 et soumis à l'incubation pendant une semaine à 28° C. Le milieu incliné est utilisé pour inoculer 100 ml de milieu de germination ayant la composition suivante, dans une fiole d'Erlenmeyer de 500 ml:

%

glucose

1,5

extrait de levure

0,2

polypeptone

0,5

k2hpo4

0,05

MgS04-7H20

0,05

CaC03

0,5

On ajuste le pH à 7,2 avant la stérilisation en autoclave. On fait incuber les fioles ensemencées à 33° C pendant 48 h sur une se-coueuse rotative fonctionnant à 230 tr/min. La culture d'ensemencement obtenue ci-dessus est transférée dans 100 ml de milieu fermen-tescible contenu dans une fiole d'Erlenmeyer de _500 ml, à un taux d'inoculum de 10% (volume/volume). Le milieu fermentescible contient les ingrédients suivants:

%

saccharose 2,5

glucose 0,5

Pharmamedia (farine de graine de cotonnier) 3,0 extraits solubles de distillerie 3,0

(NH4)2S04 0,3

ZnS04-7H20 0,003

CuS04-5H20 0,01

CaC03 0,4

Une solution aqueuse neutralisée de chlorure de 3-aminopropyl-diméthylsulfonium est ajoutée au milieu fermentescible avant la stérilisation, à une concentration de 0,1% (poids/volume) exprimée en chlorhydrate. Le pH du milieu est ajusté à 7,0 avant la stérilisation. On fait incuber à 28° C les fioles renfermant le milieu fermentescible

9

s

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

.5

646 982

10

inoculé pendant 5 d sur une secoueuse rotative fonctionnant à 250 tr/min. On surveille la progression de la fermentation par l'épreuve de diffusion en gélose utilisant des disques de papier, l'organisme d'essai étant la souche M6-3 de M. smegmatis.

Le bouillon de fermentation contenant les tallysomycines S2a et S2b est agité en présence d'un auxiliaire de filtration et le filtrat (201) est agité en présence d'Amberlite IRC-50 (60% de forme NH4+, 3,51). On lave la résine avec de l'eau, puis on élue la fraction active avec trois fois 41 de HCl 0,2 N. On ajuste le pH de l'éluat actif à 6,0 et on agite avec 400 g de charbon activé. Les composants doués d'activité biologique adsorbés sur le carbone activé sont élués par agitation trois fois avec un mélange de n-butanol et d'eau, le pH étant maintenu à 2,0 au cours de l'élution. Les éluats aqueux rassemblés sont neutralisés et concentrés sous vide à un volume d'environ 100 ml et le concentré est chromatographié sur une colonne de 1,21 de Diaion HP-20. On développe la colonne avec de l'eau et on recueille des fractions de tallysomycine de couleur bleue. Par évapo-ration des fractions correspondantes, on obtient un mélange brut de tallysomycines (4,85 g) que l'on Chromatographie sur une colonne de 330 ml de CM-Sephadex C-25 développée avec une solution de formiate d'ammonium à concentration croissante. Les tallysomycines S2b, S2a et B sont éluées successivement avec du formiate d'ammonium à 4%. Chaque fraction antibiotique est relarguée par adsorption sur du charbon activé suivie d'une élution avec une solution aqueuse acide de n-butanol. Par lyophilisation de l'éluat aqueux, on obtient 156 mg de tallysomycine S2a et 570 mg de tallysomycine S2b en même temps que 210 mg de tallysomycine A et 540 mg de tallysomycine B, chacune étant sous forme chélatée avec le cuivre.

Exemple 2 - S6a et S6b

On répète le processus de fermentation de l'exemple 1, à la différence qu'on utilise le chlorhydrate de N-(P-hydroxyéthyl)-l,3-diami-nopropane comme précurseur aminé. Le bouillon récolté (111) est filtré avec un auxiliaire de filtration. L'activité antibiotique contenue dans le filtrat est adsorbée sur de la résine Amberlite IRC-50 (60% de forme NH4+, 2,41) et éluée de la résine avec de l'acide chlorhy-drique décinormal. On ajuste le pH de l'éluat à 6,5 puis on fait passer l'éluat sur une colonne de 21 de Diaion HP-20. On élue la colonne avec de l'eau. On concentre sous vide toutes les fractions contenant des tallysomycines et on les lyophilise pour obtenir 824 mg d'une substance solide bleue. On sépare les tallysomycines par Chromatographie sur CM-Sephadex C-25 (200 ml) en utilisant comme éluant une solution aqueuse de formiate d'ammonium. On élue la tallysomycine S6b avec du formiate d'ammonium à 2%, les tallysomycines S6a et B avec du formiate d'ammonium à 3% et finalement la tallysomycine A avec une solution de formiate d'ammonium à 5%. On traite chaque fraction avec du charbon activé en vue du relargage. Les rendements en tallysomycines chélatées au cuivre sont les suivants: A 61 mg, B 31 mg, S6a 201 mg et S6b 288 mg.

Exemple 3 - S8a et S8b

On répète le processus de fermentation de l'exemple 1 à la différence qu'on utilise du chlorhydrate de N,N-di-(P-hydroxyéthyl)-l,3-diaminopropane comme précurseur aminé à une concentration de 0,2% en poids/volume. Le bouillon récolté (10 1) est filtré. Les composants de la tallysomycine dans le filtrat de culture sont adsorbés sur de la résine Amberlite IRC-50 (60% de forme NH4+, 2,21) et élués avec une solution diluée d'acide chlorhydrique. L'éluat actif est neutralisé et chargé sur une colonne de 2 1 de Diaion HP-20 que l'on développe avec de l'eau. Les fractions renfermant l'activité biologique sont concentrées sous vide en donnant 1,16 g de tallysomycines brutes. La substance solide est chromatographiée sur une colonne de 300 ml de CM-Sephadex C-25. La tallysomycine S8b est la première à être éluée de la colonne avec du formiate d'ammonium à 2%, les tallysomycines S8a et B sont éluées avec du formiate d'ammonium à 3%, puis la tallysomycine A est éluée avec une solution à 5% de formiate d'ammonium. Les fractions correspondantes sont relarguées par adsorption sur du carbone. Les rendements en tallysomycines chélatées au cuivre sont les suivants: A 184 mg, B 171 mg, Sga 63 mg et S8b 248 mg.

Exemple ^-Si0a et SI0b

Le processus de fermentation de l'exemple 1 est répété, à la différence que du dichlorhydrate de 1,4-diaminobutane est utilisé comme précurseur aminé. Le bouillon de fermentation (351, pH 7,5) est centrifugé en vue de séparer le gâteau mycélien. La liqueur surnageante claire ainsi obtenue est agitée avec la résine Amberlite IRC-50 (60% de forme NH4+, 61) pendant 30 min. On lave la résine avec deux portions de 301 d'eau, puis on l'élue avec 3 portions de 101 d'eau acide, en maintenant le pH au-dessous de 2,0 au cours de l'élution. On rassemble les éluats, on ajuste leur pH à 7,8 et on les agite avec 800 g de charbon activé. On élue la fraction active avec un mélange à 1/1 de n-butanol et d'eau acide (5 1 de chaque, pH 2,0) et on répète trois fois l'élution. On réunit les phases aqueuses, on les neutralise avec de la résine Amberlite IR-45 (forme OH) (résine basique d'échange anionique de la firme Rohm & Haas Co., Etats-Unis d'Amérique) et on les concentre sous vide à un volume de 300 ml. On charge le concentré sur une colonne de 3 1 de Diaion HP-20 que l'on développe avec de l'eau. On surveille l'élution par un titrage biologique et on concentre les fractions renfermant l'activité biologique pour obtenir un mélange de tallysomycines sous la forme d'une substance solide bleue (6 g). On Chromatographie la substance solide sur une colonne de 300 ml de CM-Sephadex C-25 qu'on lave préalablement avec une solution à 1% de formiate d'ammonium. La colonne est développée avec des concentrations croissantes (1 ~3%) de solution aqueuse de formiate d'ammonium. Les premières fractions douées d'activité biologique éluées avec du formiate d'ammonium à 3% sont réunies (250 ml) et agitées avec 30 g de charbon activé. Le carbone est séparé, lavé à l'eau et élué deux fois avec un mélange à 1/1 de n-butanol et d'eau acide (120 ml de chaque). Les éluats aqueux sont neutralisés avec la résine Amberlite IR-45 (forme OH), puis évaporés en donnant une préparation semi-pure de tallysomycine S10b (1.60 g). L'échantillon est chromatographié de nouveau sur une colonne de 240 ml d'Amberlite XT-2 (résine adsor-bante macroporeuse formée d'un copolymère non ionique styrène/ divinylbenzène, en fines particules, de la firme Rohm & Haas Co., Etats-Unis d'Amérique) qu'on développe avec de l'eau. Les éluats renfermant l'activité biologique sont rassemblés, concentrés et lyophilisés en donnant 1,25 g de tallysomycine S10b pure chélatée avec le cuivre. Les tallysomycines S10a et B sont éluées avec succès de la colonne de CM-Sephadex avec une solution à 3% de formiate d'ammonium, ce qui donne 360 mg de tallysomycine S10a chélatée au cuivre et 370 mg de tallysomycine B. On obtient également des traces de tallysomycine A à partir de l'éluat de formiate d'ammonium à 5%.

Exemple 5

En suivant essentiellement le même mode opératoire que dans les exemples 1 à 4, on prépare les dérivés semi-biosynthétiques de tallysomycine suivants, par fermentation, alimentés par une amine.

( Voir page suivante )

Exemple 6

Les tallysomycines dépourvues de cuivre correspondant aux dérivés chélatés au cuivre préparés dans les exemples 1 à 5 peuvent être obtenues par traitement à l'hydrogène sulfuré dans le méthanol conformément au mode opératoire décrit dans l'exemple 1 du brevet des Etats-Unis d'Amérique N° 3646197.

Les propriétés physico-chimiques des dérivés de tallysomycine préparés dans les exemples 1 à 5 sont indiquées sur le tableau suivant.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

11

646 982

* Le système S-102 de Chromatographie sur couche mince (TLC) utilise une plaque de gel de silice 60F254 (Merck) et un système de solvants comprenant du méthanol et de l'acétate d'ammonium en solution aqueuse à 10% (1/1 volume/volume); le système S-123 de Chromatographie sur couche mince utilise une plaque de gel de silice 60F254 (Merck) et un système de solvants formé de méthanol, d'acétate d'ammonium à 10% et d'hydr-oxyde d'ammonium à 10% (10/9/1 volume/volume).

La détection est effectuée au moyen d'un analyseur de Chromatographie sur couche mince à double longueur d'onde (Shimadzu GS-910) à 290 nm. ~

** Appareil: Waters Associates Model ALC 204 à injecteur type U6K.

Colonne: |iBondapak Ci8 Waters Associates (4 x 300 mm), préalablement lavé avec une solution de EDTA à 0,5%.

Phase mobile: CH3CN/H20 (3/7 volume/volume) contenant le réactif Pic B-7 de Waters Associates.

Détecteur: Détecteur UV modèle 440 à 254 nm.

Débits: 1,0 ml/min (pression 80 MPa).

Volume de l'échantillon injecté: 1 jil de solution à 2 mg/ml. L'invention est susceptible d'une application industrielle.

Dérivé de tallysomycine obtenu comme produit

Précurseur de chlorhydrate d'amine

Volume de bouillon fermentescible (1)

Rendement (mg)

Su

1,3-diaminopropane

6,7

traces s,b

1,3-diaminopropane

6,7

70

S3b

1,2-diaminoéthane

1,9

6

S4b

1,3-diamino-2-hydroxypropane

8,5

17

s5b

N-(ß-hydroxypropyl)-1,2-diaminoéthane

5

32

Sîb

N,N-diméthyl-1,3-diaminopropane

10

96

Sgb

N-(P-hydroxyéthyl)-1,2-diaminoéthane

10

286

Sila

N-méthyl-1,3-diaminopropane

3,2

43

Sllb

N-méthyl-1,3-diaminopropane

3,2

259

Sl2b

N-(3-aminopropyl)morpholine

2,2

94

Sl3b

N-(3-aminopropyl)-2-pipécoline

10

137

S 14a

N-(l '-phényléthyl)-1,3-diaminopropane

4

20

S 14b

N-(l'-phényléthyl)-1,3-diaminopropane

4

210

Propriétés physico-chimiques des nouveaux dérivés de tallysomycine Propriétés physico-chimiques des nouveaux dérivés de tallysomycine

ccm(rf)*

25

Tallysomycine h2o

Analyse - trouvé (%)

clhp**

Tallysomycine

^max.nm (El'cm)

c h

n

S-102

S-123

(Temps de rétention)

Sia

242 (126), 292 (102)

Sia

0,50

0,23

6 min 24 s

30

S,b

242 (108), 290 (94)

39,54

5,45

15,01

S,b

0,65

0,37

4 min 48 s

S2a

240 (120), 290 (108)

Sia

0,24

0,15

6 min 30 s

S2b

244.5 (129), 292 (104)

38,51

5,51

14,30

Sjb

0,38

0,34

5 min 18 s

s»

240(123), 291 (112)

S3b

0,59

0,51

4 min 49 s

S4b

242 (120), 290 (103)

S^b

0,66

0,40

4 min 47 s

35

s5b

244 (124), 290 (102)

40,17

6,05

15,02

S5b

0,50

0,58

4 min 54 s

Söa

243 (105), 291 (83)

39,73

6,39

15,35

Sóa

0,42

0,22

6 min 18 s

S6b

243 (128), 291 (103)

39,81

6,00

15,21

S6b

0,50

0,40

4 min 42 s

Sîb

245 (120), 290 (96)

40,89

6,04

14,51

S*

0,44

0,25

4 min 54 s

Saa

243 (107), 291 (85)

Sfa

0,56

0,40

6 min 24 s

40

Ssb

243 (114), 290(92)

40,73

6,18

14,79

Ssb

0,70

0,54

4 min 48 s

Sçb

243 (104), 290 (87)

39,80

5,97

15,42

S,b

0,56

0,48

4 min 52 s

SlOa

244(142), 292(112)

39,76

5,94

15,58

SlOa

0,43

0,24

6 min 20 s

st0b

244(141), 292(116)

38,81

5,85

14,74

SlOb

0,61

0,39

4 min 47 s

Sila

244 (62), 292 (53)

Sila

0,27

0,16

—

45

Sllb

244(112), 292(91)

40,16

5,48

15,04

Sllb

0,49

0,35

4 min 47 s

S |2b

245 (74), 292 (59)

34,98

5,09

13,04

S|2b

0,49

0,60

4 min 47 s

S 13b

243(142), 292(114)

39,14

5,85

13,63

Sub

0,46

0,36

5 min 37 s

S 14a

243 (102), 292 (72)

Sl4a

0,52

0,37

—

S|4b

243 (143), 292 (109)

S 14b

0,62

0,50

7 min 5 s

50

55

r

Claims (6)

646 982

1. Un dérivé de tallysomycine A de formule:

h2n co-nh2

l hn

X

-vs h,c hn.

II

0

h

,ch-ch—u.

I

oh b'

■^N-^CH3 HCT^CH3

u

H3C£^

' oh i j h2n oh

U0--^-OH y^S^-OH

ho r o-^nh2

dans laquelle R représente:

-NH-(CH2)3-NH2 as

—NH—(CH2)3 — S®(CH3)2,

- NH - (CH2)3 - NH - CH2 - CH2OH,

- NH - (CH2)3 - N(CH2CH2OH)2,

-NH-(CH2)4-NH2,

—NH—(CH2)3 — NH—CH3, ou 30

- NH - (CH2)3 - NH - CH O-

ch3

ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de ce dérivé ou le chélate de cuivre de ce dérivé.

2 VH2

II

0

h,c hn.

un ^ k jl sxot» i «

n-^ch, HCr-ch, I

V^N' i h

«o-

oh h,n

(OH !..

oh oh oh ho j?

0' NHz dans laquelle R représente:

—nh—(ch2)3 — nh2, —nh—(ch2)3—s9(ch3)2, -nh-(ch2)2-nh2,

- nh - ch2 - ch - ch2 - nh2,

I

oh

-nh-(ch2)2-nh-ch2-ch-ch3

I

oh

-nh -(ch2)3 -nh- ch2 -ch20h, —nh—(ch2)3 — n(ch3)2, —nh—(ch2)3 —n(ch2ch20h)2,

- nh - (ch2)2 - nh - ch2 - ch2oh, -nh-(ch2)4-nh2,

- nh - (ch2)3 -nh - ch3,

-nh-

ou

—nh—(ch2)3 — n o,

\ t

I-(ch;)3-NP ch3

-nh—(ch2)3 —nh — ch—^ y/ ch3

0 H

c-r

(Ib)

ou un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue pharmaceutique de ce dérivé ou le chélate de cuivre de ce dérivé.

2. Un dérivé de tallysomycine B de formule:

J

0 0

Il II

-C-NH-(CH2)3-CH-CH2-C-R

NHo

(la)

h2n ho scn n n

W

2

revendications

3

646 982

mycine du milieu de culture sous une forme dépourvue de substances produites simultanément.

3. Procédé de production d'un dérivé de tallysomycine A ou B 35 de formule la ou Ib suivant l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver une couche productrice de tallysomycine de Streptoalloteichus hindustanus dans un milieu nutritif aqueux en présence d'un précurseur aminé de formule:

40 NH2—(CH2)2 —NH2,

NH2—(CH2)3—NH2,

NH2—(CH2)4—NH2,

NH2 - CH2 - CH - CH2 - NH2,

45

50

oh nh2 - (ch2)2 - nh - ch2 - ch2oh, nh2 - (ch2)2 - nh - ch2 - ch - ch3,

I

oh nh2-(ch2)3-nh-ch3, nh2 - (ch2)3 - nh - ch2 - ch20h, nh2 - (ch2)3 -nh -ch -

ch3

nh2—(ch2)3—n(ch3)2,

nh2 - (ch2)3 - n(ch2ch2oh)2,

nh2-(ch2)3-n o, N (

60

NH2-(CH2);

nh2(ch2)3

,-tçy.

ch, - s®(ch3)2

I

Cl©

ou ou un sel d'addition d'acide inorganique de ce composé, jusqu'à ce que le dérivé désiré de tallysomycine ait été produit par ledit organisme dans ledit milieu de culture et à recueillir le dérivé de tallyso-

4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que la souche productrice de tallysomycine est la souche ATCC 31158 de Streptoalloteichus hindustanus.

5. Procédé suivant l'une des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que le précurseur aminé est le 1,4-diaminobutane ou un sel d'addition d'acide inorganique de ce composé et le dérivé recueilli de tallysomycine B est la tallysomycine S10b de formule:

r>h2

Iuh-^Y"

X 0

h2n ho.

-vs h

ch h,c oh ohy^nyti

H%^NOot3° HCnCHj 1

i oh 1 hjn oh n

-CH-ii i

OH

.7

c-nh-(ch2)4-nh2

oV»

i o

L-^rc oh y—çA-oa m «Al«.

6. Médicament, caractérisé en ce qu'il est constitué par ou en ce qu'il contient un composé suivant les revendications 1 et 2.