FR2472611A1 - Antibiotiques, procedes pour leur production et agent antimycotique en contenant - Google Patents
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Abstract
ANTIBIOTIQUES NOUVEAUX OBTENUS EN CULTIVANT DES SOUCHES DU GENRE STREPTOMYCES ET DESIGNES PAR SF-2080A ET SF-2080B. CES PRODUITS REPONDENT APPAREMMENT AUX FORMULES: (CF DESSIN DANS BOPI) APPLICATION COMME MEDICAMENTS ANTIMYCOTIQUES.
Description
La présente invention concerne un nouvel antibiotique et un procédé pour
sa production. Elle concerne plus particulièrement de nouveaux antibiotiques, SF-2080 A et/ou SF-2080 B, obtenus en cultivant une souche produisant la substance SF-2080 qui appartient au genre streptomyces dans un milieu nutritif et en recueillant dans la culture les substances SF2080 ainsi produites, et un procédé de production de l'antibiotique SF2080 A et/ou de l'antibiotique SF-2080 B.
Il est connu que diverses espèces micro-
biennes, par exemple du genre streptomyces, peuvent produire des antibiotiques par culture dans des milieux nutritifs contenant des sources de carbone et d'azote assimilables. Il existe cependant toujours un besoin
d'antibiotiques nouveaux et utiles.
La présente invention concerne de nouveaux antibiotiques désignés respectivement par substance SF-2080 A et substance SF-2080 B, et un procédé de production de ces substances par culture d'une souche produisant la substance SF-2080, appartenant au genre
streptomyces, dans un milieu nutritif.
La fig. 1 représente un spectre d'absorption
UV de la substance SF2080A enregistré à une concentra-
tion de 10 mcg/ml (microgramme/millilitre) dans (I) du méthanol, (II) du méthanol acide (c'est-à-dire une solution méthanolique de HCl 0,01N) et (III) dans du méthanol alcalin (c'est-à-dire une solution méthanolique
de NaOI 0,01 N).
La fig. 2 représente un spectre infra-
rouge de la substance SF-2080A enregistré sur un
comprimé au bromure de potassium.
La fig. 3 est un spectre d'absorption ultra-
violette de la substance SF-2080B enregistré à une concentration de 10 mcg/ml dans (I) du méthanol, (II) du méthanol acide (c'est-à-dire une solution méthanolique
de HCl O,01 N) et (III) du méthanol alcalin (c'est-à-
dire une solution méthanolique de NaOH 0,01 N), et La fig. 4 représente un spectre d'absorption infra-rouge de la substance SF-2080B enregistré sur un comprimé au bromure de potassium. Comme souche produisant l'antibiotique SF-2080 utilisé dans l'invention (l'expression "antibiotique SF-2080"désigne ici à la fois la substance SF-2080 A et la substance SF-2080B), on peut utiliser
n'importe quelle souche capable de produire l'anti-
biotique SF-2080 dans une quantité suffisante pour
être récupérée dans le bouillon de fermentation.
Comme exemples de ces souches, on citera le streptomyces sp. SF-2080 isolé d'un échantillon de sol recueilli
dans le lit du fleuve Chikuma à Nagaro-City, Préfec-
ture de Nagano au Japon.
Les caractéristiques du streptomyces sp. SF-2080 sont les suivantes: (I) caractéristiques morphologiques: Le mycélium de substrat est fortement ramifié et s'étend en vagues. Le diamètre de l'hyphe est de 0,5 - 0,6 micron. Habituellement, on n'observe pas de fragmentation du mycélium de substrat, ni dans un milieu de culture gélos6, ni dans un milieu de culture liquide. Sur le milieu de culture gélosé habituellement utilisé, il ne se forme pas de mycélium aérien. On n'a pas encore observé de spores, sporanges,
zoospores, sclérotes, synnemas, etc...
(II) Caractéristiques de culture:
Les caractéristiques de culture du strepto-
myces sp. SF 2080 ont été observées par la méthode décrite dans E.B. Shirling et D. Gottlieb, International
Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 16, pp. 313-
340 (1966). L'observation a été effectuée après culture à 28 C pendant 14 jours. Les caractéristiques de culture
pour les divers milieux sont indiquées dans le tableau 1.
Milieu de culture ose au saccharose-nitrate ose au glucose-asparagine Dse au glycerol-asparagine )se au malate de calcium ose à l'amidon ose à la levure et au malt ose à la tyrosine ose nutritive ose à la farine d'avoine )se de Bennett
TABLEAU 1
Développement et couleur de Mycélium aérien l'envers développement très peu abondant, incolore aucun développement très peu abondant, incolore aucun développement très peu abondant, incolore aucun développement très peu abondant, incolore aucun développement très peu abondant, incolore aucun développement modéré sous forme d'une fine aucun peau, incolore à brun-jaunatre clair développement peu abondant à modéré, incolore à brunjaunâtre clair aucun développement modéré, brun-jaunatre clair aucun développement peu abondant a modéré, incolore aucun
développement nmodéré, incolore à brun-
jaunâtre clair aucun pigment soluble non non non non non non produit produit produit produit produit produit non produit non produit non produit non produit Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc Gélc w o-
(III) Caractéristiques physiologiques:..DTD: (1) Intervalle de températures de. développe-
ment: se développe dans la gélose à la levure et au malt dans l'intervalle de 15 à 45 C, le développement est satisfaisant de 25 à 340C. (2) Liquefaction de la gélatine: positive
(culture à 20 C pendant 21 jours).
(3) Hydrolyse de l'amidon: positive (faible,
culture à 28 C pendant 14 jours).
(4) Action sur le lait écrémé: il ne se produit ni peptomisation ni coagulation par culture à
28 C pendant 14 jours.
(5) Réduction du nitrate: positive (culture
à 28 C pendant 14 jours).
(6) Résistance au sel: le développement a
lieu pour 1,5 % mais non pour 3,0%.
(7) Production de pigments mélanoides: négative. (IV) Utilisation de sources de carbone: Un milieu de culture de base constitué de 0,5 % d'extrait de levure (Difco), de 0,1% de carbonate de calcium et de 1,5% de gélose (Difco) a servi à examiner l'utilisation de sources de carbone. Les résultats sont
donnés dans le tableau 2.
TABLEAU 2
Source de carbone développement D-glucose + D-xylose + D-fructose Larabinose D-mannitol i-inositol L-rhamnose + saccharose
raffinose -
le symbole "+" signifie utilisable
le symbole "-" signifie non utilisable.
(IV) Composition de la paroi cellulaire.
L'analyse selon Becker et al, Appl. Microbiol.
vol. 13, p. 236 (1965) a confirmé que l'acide diamino-
piraelique contenu dans la paroi cellulaire est du type LL.
A en juger par les caractéristiques ci- dessus, le streptomyces sp. SF2080 appartient à l'ordre
des actinomycétales, et il est mesophile. C'est un acti-
nomycète pour lequel on n'observe pas de fragmentation du
mycelium de substrat, et qui contient de l'acide LL-
diaminopimélique dans sa paroi cellulaire.
Il n'est cependant pas possible à l'heure actuelle de déterminer de manière définitive le genre
auquel appartient la souche SF-2080, car les caractéris-
tiques morphologiques telles que spores, sporanges, zoospores, sclérotes et synnemas qui sont nécessaires pour déterminer le genre d'actinomycètes n'ont pas encore été clairement déterminées. Cependant, en tenant compte du
fait que la souche SF-2080 contient de l'acide LL-
diaminopimélique dans la paroi cellulaire, il semble très probable que la souche SF-2080 est une espèce indéterminée appartenant au genre streptomyces, c'est pourquoi elle a été provisoirement baptisée streptomyces
sp. SF-2080.
Cette souche a été déposée sous le nom de streptomyces sp. SF-2080 au Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry of Japan sous le numéro d'entrée FER4-P n 5072 (le 4 juillet 1979) et à l'American Type Culture Collection (ATCC) sous le
n ATCC 31673 (le 28 juillet 1980).
La souche SF 2080 a des propriétés qui se
modifient facilement, comme les autres souches d'acti-
nomycètes. Une telle modification peut être provoquée artificiellement par irradiation, par exemple avec des rayons UV, des rayons X, des ondes à haute fréquence ou des rayonnements radioactifs, et par des produits chimiques. On peut donc utiliser dans l'invention tous les variants ainsi que les mutants pourvu qu'ils soient capables de produire la substance SF2080 A et/ou la substance SF-2080 B. Conformément au procédé de l'invention, la souche décrite ci-dessus est cultivée dans un milieu contenant des substances nutritives assimilables par des microorganismes connus. Ces substances nutritives peuvent être des matières connues classiquement utilisées dans la culture des souches d'actinomycètes. Comme exemples de sources de carbone utilisables, on citera le glucose, le glycérol, le saccharose, l'amidon, la dextrine, le
sirop de maltose, la mélasse, l'huile de soja etc...
Comme exemples de sources d'azote utilisables, on citera la farine de soja, le germe de blé, la. farine de graine de coton, l'extrait de viande, la peptone, l'extrait de levure, la levure sèche, la liqueur de trempage du mais,
le sulfate d'ammonium, le nitrate de sodium etc...
On peut en outre ajouter, si on le désire, des sels minéraux comme le carbonate de calcium, le chlorure de
sodium, le chlorure de cobalt, des phosphates etc...
ainsi que des matières organiques ou minérales augmentant
la production microbienne de l'antibiotique SF-2080.
La méthode de culture de submersion en milieu aéré est celle qui convient le mieux pour la culture de la souche produisant l'antibiotique SF-2080 comme c'est souvent le cas pour la production des antibiotiques connus. La gamme de températures appropriée à la culture
va de 25 à 340C, et on opère de préférence à une tempé-
rature de 28 à 320C. La production des substances SF-2080 atteint un maximum en 2 à 7 jours, tant pour les cultures agitées que les cultures en réservoir, et les substances
SF-2080 s'accumulent dans le bouillon de culture.
Le dosage des antibiotiques SF-2080 peut s'effectuer par une combinaison du dosage biologique
à - -
utilisant Sarcina lutea comme organisme d'essai, et de
la chromatographie sur couche mince de gel de silice.
La substance SF-2080 A et la substance SF-
2080 B ont respectivement les propriétés physiques et chimiques décrites ci-après. Compte tenu de ces pro-
priétés, elles peuvent être extraites et purifiées.
Le procédé suivant donne de bons résultats.
Au filtrat obtenu en filtrant la matière solide (c'est-à-dire le mycélium) d'un bouillon de culture contenant les substances désirées, on ajoute un solvant organique non miscible à l'eau tel que l'acétate d'éthyle etc... Puis on mélange pour extraire les substances désirées. Par ailleurs, on ajoute à la matière solide c'est-à-dire au mycélium un solvant organique
miscible à l'eau tel que l'acétone,-le méthanol etc..
pour en extraire les substances désirées. Après évapo-
ration du solvant organique, on extrait les substances désirées par un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle etc.. On rassemble les extraits du filtrat et de la matière solide (c'est-à-dire le mycélium). On fait évaporer le solvant, ce qui fournit une substance huileuse. On ajoute à la substance huileuse un solvant
tel que le n-hexane etc.. pour extraire les impuretés.
On dissout le résidu ainsi obtenu dans du méthanol etc.., et on soumet la solution obtenue à une chromatographie sur colonne en utilisant des supports tels que le gel de silice, l'alumine, des média filtrants sous forme de
gel pour tamis moléculaires etc.. pour isoler l'anti-
biotique SF-2080 A et/ou l'antibiotique SF-2080 B. On dissout la substance SF-2080 A et/ou la substance SF-2080 B ainsi isolées dans une petite quantité de méthanol, puis on les fait recristalliser pour obtenir les cristaux correspondants. Analysés par chromatographie sur couche mince avec divers systèmes de solvants, les cristaux de la substance SF- 2080 A et/ou de la substance SF-2080 B donnent une tache unique. Ceci tend à montrer
que ces substances sont chacune un produit pur.
Les propriétés physiques et chimiques des substances SF-2080A et SF-2080B obtenues par le procédé ci-dessus sont les suivantes: 1. Composition é1émentaire (% en poids) 2. Masse moléculaire 3. Formule brute 4. Point de fusion 5. Pouvoir rotatoire 6. Spectre d'absorption ultra-violette 7. Spectre d'absorption infra-rouge
TAELEAU 3
Substance SF-2080 A
C, 27,06%; H,1,17%; N, 14,84%;
Cl, 39,23% 181 (spectre de masse)
C4H2N202C12
205 à 207 C (d&ccmposition) [a]25 = o0 (C=0,5,méthanol) représenté à la fig. 1. Les maxima 1% d'absorption sont 269 nm (E1jm490) 1% lIi et 320 nm (E1%m230) en solution dans
1 1%
le méthanol; 271 nm (E1M500) et 320 nm 1% (Elcm90) en solution dans HC1 O, 01 N dans le méthanol; et 220 nm (E1%M520) et 325-1% "0E0' et 325 nm (Elc800) en solution dans NaOH O,O1 N dans le mrthanol Représenté à la fig. 2. Les bandes
d'absorption, déterminées par la mé-
thode au comprimé de bromure de potas-
sium, sont 3270, 3150, 1570, 1510, 1480,
1400, 1360, 1280, 1200, 1140, 1070, 960,
830, 820, 750 cm1.
Substance SF-2080 B
C, 36,79%; H, 1,67%; N, 7,95%;
Cl, 39,89% 356 (spectre de masse) CllH6N203C14 202 à 211 C (décomposition) )aD =0 (C=0,5,méthanol) Représenté à la fig. 3. Les maxima 1% d'absorption sont 276 nm (E1m300) et 1%1m 328 nm (El1%70) en solution dans le ian 1% méthanol; 277 nm (El310) et 335 nm 1% (E1%a150) en solution dans HCl 0,01 N 1% dans le mxthanol; et 245 nm (E1 570) 1% an et 313 nm (E1jM570) en solution dans NaOH 0,01 N dans le mrthanol Représenté à la fig. 4. Les bandes d'absorption, déterminées en utilisant la méthode au comprimé de braoure de potassium, sont 3360, 1580, 1510, 1490,
1480, 1440, 1420, 1360, 1310, 1290, 1240,
1210, 1160, 1110, 930, 890, 860, 800, 770,
740 cm1.
ms -4 -% -.b y' Tableau 3 (suite) 8. Réactions colorées 9. Aspect et couleur de la substance
10. Propriétés élec-
triques 11. Valeurs de Rf en chromatographie sur couche mince (gel de silice F254 de la Sté E. Merck) 12. Solubilité Positives: réaction à l'iode
et réaction de Lemieux.
Négatives: réaction à la ninhydrine
et réaction au chlorure ferrique.
Cristaux en aiguilles brun-clair à jaune. Se comporte comme une substance
électriquement neutre à l'électro-
phorèse sur papier sous forte tension.
0,68 (benzene/acétone, 2:1 en volume) 0,73 (chlorofonie/mréthanol, :1 en volume) Très soluble dans le méthanol, l'acétone, soluble dans le chloroforme, peu soluble
dans l'eau, le n-hexane.
Positives: réaction à l'iode et réaction
de Lemideux.
Négatives: réaction à la ninhydrine et
réaction au chlorure ferrique.
Cristaux en aiguilles jaunes.
Se comporte comme une substance électri-
quement neutre à l'électrophorèse sur
papier sous forte tension.
0,73 (benzène/acétone, 2:1 en volume) 0,80 (chloroforre/néthanol, 10:1 en volume). Très soluble dans le méthanol, l'acétone, soluble dans le chloroforme, peu soluble
dans l'eau, le n-hexane.
NI --4 oM 0%b Tableau 3 (suite) 13. Fomule dcveloppée apparente. Cet rNO2 C H H
CL NO NC2 CL
CL N CH I
OH C
__. _. _...
I-P o -', O% -
Les concentrations minima inhibitrices des sub-
stances SF-2080 A et SF-2080B vis-à-vis de divers micro-
organismes, mesurées par la méthode de dilution dans la
gélose, sont données dans le tableau 4, ci-dessous.
La substance SF-2080 A est généralement efficace contre toutes les souches de bactéries essayées, tandis que la substance SF-2080 B est très efficace sur un nombre limité de souches, mais présente une activité faible
ou nulle sur les autres.
La toxicité aigUe des substances SF-2080 A et
SF-2080 B a été mesurée par administration intrapéri-
tonéale à des souris. Par administration de la substance SF-2080 A à la dose de 30 mg/kg toutes les souris sont mortes, mais à la dose de 10 mg/kg, toutes les souris ont survécu. Par ailleurs, par administration de la substance SF-2080 B à la dose de 100 mg/kg, les 2/3 des souris ont survécu. Les substances SF-2080 A et SF-2080B sont donc utilisables comme médicaments, pesticides,
médicaments vétérinaires, agents stérilisants, etc...
ou comme matières destinées à être transformées en ceux-ci.
TABLEAU 4
Concentratiors minima inhibitrice (mcg/ml) Organisme d'essai SF-2080 A SF2080 B Staphylococcus aureus FDA 209P 1,56 0,20 JC- 1 Staphylococcus aureus Smith 3,13 0,20 Staphylococcus epidermidis 313 010
ATCC 14990
Bacillus subtilis ATCC 6633 1,56 0,10 Escherichia coli NIHJ JC-2 6,25 100 Escherichia coli K-12 IAM 1264- 6,25 100 Salmonella typhi 0-901-W - 6,25 50 Shigella dysenteriae Shigae 3,13 50 Klebsiella pneumoniae ATCC 27763 6, 25 >100 Proteus vulgaris OX-19 6,25 0,78 Serratia marcescens N 1 6,25 > 100 Pseudomonas aeruginosa IAM 1007 6,25 >100 Cryptococcus neoformans Cr1 25 >100 Trichophyton asteroides 3,12 >100 Trichophyton interdigitale 1, 56 100 Aspergillus fumigatus 25 >100 Pyricularia oryzae 0,8 3,13 Diaporthe citri 0,8 0,4 En outre, la substance SF - 2080 A présente non seulement une activité antibactérienne, mais encore inhibe la croissance de champignons. La concentration minima inhibitrice de la croissance (CMI) sur chaque souche d'essai par la méthode de dilution sur plaques est donnée ci-dessous:
TABLEAU 5
Souche d'essai CMI (mcg/ml) Candida albicans C-A-24 100 Cryptococcus neoformans Cr-1 25 Trichophyton asteroides 3,12 Trichophyton interdigitale 1,56 Aspergillus fumigatus 25 Ceci indique que la substance SF - 2080 A
est également un composé utile comme agent antimycotique.
La substance SF - 2080 A peut être appliquée sur la région affectée, par exemple sous forme de pommade
ou de solution. Un exemple de formulation comme pré-
paration liquide additionnée d'un agent rendant la peau
perméable est donné dans le tableau 6.
TABLEAU 6
Substance SF - 2080 A 0,25 g Sébacate de diéthyle 2,5 ml Eau distillée de la Pharmacopée 2,5 ml Ethanol pour faire 25 ml Un essai de traitement d'une infection sur des cobayes infectées sur leur dos par une souche de Trichophyton asteroides a été effectué en utilisant la préparation liquide dont la formulation est donnée dans le tableau 6. Cet essai confirme que par comparaison avec la pyrrolnitrine et avec la clotrimazole, utilisés comme médicaments témoins, la substance SF - 2080 A de l'invention présente d'excellents effets thérapeutiques tant à l'observation à l'oeil qu' aux essais de rapport de culture positive (essais de culture de parties soignées A initialement infectées: on observe un déclin marqué
de l'organisme responsable de l'infection.
En comparant les propriétés physiques et chimiques et les caractéristiques biologiques des substances SF-2080A et SF-2080 B avec celles des antibiotiques connus, on trouve qu'elles sont toutes deux
des antibiotiques nouveaux.
Les exemples non limitatifs suivants sont
donnés à titre d'illustration de l'invention.
Exemple 1
On prépare un milieu liquide comprenant 1 % en poids d'amidon soluble, 1 % en poids de glucose, 0,5 % en poids de peptone, 0,3 % en poids d'extrait de levure, 0,2 % en poids de farine de soja, 0,2 % en poids d'extrait de viande et O,1 % en poids de carbonate de calcium. Puis on introduit séparément des portions de ml du milieu liquide ainsi préparé dans un erlenmeyer de 100 ml et on les stérilise. On inocule Streptomyces sp SF-2080 (FERM-P N 5072, ATCC N 31673) dans le milieu liquide et on fait incuber sur un agitateur à 28 C pendant 5 jours pour préparer la Première Culture d'Ensemencement. On répète le mode opératoire ci-dessus en augmentant progressivement le volume, pour préparer une Seconde Culture d'Ensemencement (c'est-à-dire, la Première Culture d'Ensemencement est inoculée dans ml du milieu liquide introduit dans un erlenmeyer de 500 ml et mise à incuber à 280C pendant 2 jours pour préparer la Seconde Culture d'Ensemencement) et une Troisième Culture d'Ensemencement (c'est-à-dire que la Seconde Culture d'Ensemencement est inoculée dans 800 ml du milieu liquide introduit dans un erlenmeyer de 5 1 et mise à incuber à 28 C pendant 2 jours pour
préparer la Troisième Culture d'Ensemencement).
On introduit ensuite dans un fermenteur en acier inoxydable de 50 1, 35 1 d'un milieu de culture
2472611
comprenant 2 % en poids de sirop de maltose, 0,15 % en poids d'huile de soja, 1 % en poids de farine de soja-, 0,25 % en poids de substance soluble des distillateurs, (distillers soluble), 0,5 % en poids de Fermamedia (marque commerciale, fabriqué par la Traders Oil Mill Co. Texas), 0,0005 % en poids de sulfate ferreux, 0,00005 % en poids de chlorure de nickel, 0,00005% en
poids de chlorure de cobalt et 0,1 % en poids de carbo-
nate de calcium, on le stérilise, puis on l'inocule
avec 800 ml de la Troisième Culture d'Ensemencement.
On effectue la culture à 280C en aérant et en'agitant.
La quantité d'air introduite est de 35 1/minute et la
vitesse de rotation de 300 tours/minute.
Au bout de 120 heures, on arrête la culture et on filtre le bouillon, ce qui fournit une fraction solide et un filtrat. On ajoute 20 1 d'acétate d'éthyle
à 25 1 du filtrat, et on agite pour extraire le cons-
tituant actif. Puis on isole la couche d'acétate d'ét-
thyle. Par ailleurs, on ajoute 10 1 d'une solution aqueuse d'acétone à 50 % à la fraction solide et on agite pour extraire le constituant actif. On sépare la fraction solide par filtration. Puis on concentre le filtrat sous pression réduite pour faire évaporer l'acétone, on ajoute alors 2,5 1 d'acétate d'éthyle et on agite pour extraire le constituant actif. Puis on isole la couche d'acétate d'éthyle et on la réunit à la couche d'extraction du filtrat par l'acétate d'éthyle. Après concentration du mélange obtenu sous
pression réduite, on obtient environ 30 ml d'une subs-
tance bitumineuse.
Après addition de n-hexane à la substance bitumineuse obtenue ci-dessus, les substances désirées
sont pratiquement insolubles dans le n-hexane et res-
tent sous forme de précipité. Après élimination du liquide surnageant, on fait passer le précipité sur une colonne de 700 ml de Wako Gel C-100 (fabriqué par
247261 1
la Wako Pure Chemical Industries Ltd) préalablement
garnie de chloroforme, et on l'élue avec du chloro-
forme, ce qui fournit des fractions actives. On concentre ces fractions actives et l'on obtient 800 mg d'un produit huileux. On dissout le produit huileux ainsi obtenu dans 5 ml environ du méthanol, on le fait passer dans une colonne de 600 ml de Sephadex LH - 20 (fabriqué par la Société Pharmacia, en Suède) et on l'élue
-avec du méthanol pour séparer des fractions de 30 ml.
La substance 2080 A est éluée dans les fractions 18 à 21, et la substance SF - 2080 B dans les fractions à 30. Dans les fractions 22 à 24, on élue un mélange des substances SF - 2080 A et SF - 2080 B. On rassemble les fractions 22 à 24, on les concentre et on les sépare à nouveau par chromatographie sur Sephadex
LH - 20.
On obtient ainsi 230 mg de la substance SF - 2080 A et 200 mg de la substance SF - 2080 B, que l'on dissout chacun dans une petite quantité de méthanol et précipite sous forme de cristaux, ce qui donne 90 mg de la substance SF - 2080 A et 80 mg de la substance SF - 2080 B.
Exemple 2
On arrache les poils d'un cobaye blanc Hartly (4 cobayes par groupe) dans 4 régions de son dos (2 régions de 4 x 6 cm de chaque côté) que l'on infecte avec une solution o nage Trichophyton asteroides (milieu de culture liquide de Sabourand; nombre de cellules vivantes: 2 x 107/ml) avec une brosse, à raison de 0,5 ml pour chaque région. Deux jours après l'infection, on applique 0,25 ml d'une solution à 1% de la susbstance SF 2080 A (voir tableau 6) sur une région de chaque côté, une fois par jour
et pendant 8 jours consécutifs.
24726 11
On applique le même mode opératoire que ci-dessus, excepté que l'on utilise une solution à
1% de pyrrolnitrine et une solution à 1% de Clotri-
mazole. On compare les cobayes ainsi traités à ceux n'ayant reçu aucun traitement. L'observation à l'oeil nu montre que la substance SF - 2080 A produit le meilleur effet
thérapeutique à la fois en ce qui concerne l'épaissis-
sement de la peau affectée, la rougeur et la désqua-
mation (Tableau 7).
TABLEAU 7
Effet Substance Pyrrol- Clotri-
SF - 2080 A nitrinel mazole2 Epaississement Très active Active Actif Rougeur* Très active Inactive Inactif Desquamation Très active Inactive Actif _ active l Pyrrolnitrine CL NO
2
H
2 Clotrimazole: -
/\ C
Au bout de 8 jours de traitement, on prélève 3 morceaux de peau sur chacune des régions affectées et on les cultive sur une plaque de gélose de Sabourand pendant 7 jours pour observer le rapport de culture
positive de l'organisme infecté.
24726 11
Dans le groupe traité par la substance
SF - 2080 A comparé au groupe traité par la pyrrolni-
trine, au groupe traité par le Clotrimazole et au groupe non traité, on observe une diminution évidente du rapport de culture positive (voir tableau 8).
TABLEAU 8
Jour de Substance Pyrrol- Clotri- Pas de culture SF - 2080 A nitrine mazole traitement cu lM Mture
19 2472611
Claims (6)
1. Substance SF-2080-A, caractérisée en ce qu'elle présente les propriétés suivantes: composition élémentaire (en poids):
C, 27, 06 %; H, 1,17 %; N, 14,84 %; CL, 39,23 %;
masse moléculaire: 181 (par spectrographie de masse) formule brute: C4 H2 N2 02 C12
point de fusion: 205 à 207 OC (avec décompo-
sition); pouvoir rotatoire [aJ = O (C= 0,5, méthanol); spectre d'absorption ultraviolette: il est représenté à la fig. 1. Les maxima d'absorptionsont à 269 et 320 nm en solution méthanolique, 271 et 320 rnu en solution dans de l'acide chlorhydrique 0,01 N dans le méthanol et 220 et 325 nm en solution dans de l'hydroxyde de sodium 0,01 N dans le méthanol;
spectre d'absorption infra-rouge: il est re-
présenté à la fig.
2. Les bandes d'absorption; déterminées par la méthode au comprimé de bromure de potassium, sont
3270, 3150, 1570, 1510, 1480, 1400, 1360, 1280, 1200,
1140, 1070, 960, 830, 820, 750 cm-1.
réactions colorées: réactions à l'iode et réactionsde Lemieux positives, réactionsà la ninhydrine et réaction au chlorure ferrique négatives; Aspect et couleur: cristaux en aiguilles brun-clair à jaune; Propriétés électriques: se comporte comme une substance neutre à l'électrophorèse sur papier sous forte tension; Rf en chromatographie sur couche mince (gel de silice); 0,68 (benzène/acétone = 2: 1 en volume), 0,73 (chloroforme/méthanol = 10: 1 en volume);
-2472611
Solubilité: très soluble dans le méthanol et l'acétone, soluble dans le chloroforme, peu soluble dans l'eau et le n-hexane; et formule développée apparente:
C, --NO '
CQ H 2. Agernt antimycotique contenant comme constituant actif la substance SF-2080 A répondant à la formule suivante:
CL NO2
CQ
H
3. Substance SF-2080 B, caractérisée en ce qu'elle présente les propriétés suivantes: composition élémentaire (en poids):
C, 36,79 %; H, 1,67 %; N, 7,95 %; Cl, 39,89 %.
masse moléculaire: 356 (par spectrographie de masse) formule brute: C11 H6 N2 03C14;
point de fusion: 202 à 211 C (avec décom-
position); pouvoir rotatoire: [c] D5 =0 (C = 0,5, méthanol; spectre d'absorption ultraviolette: il est représenté à la fig. 3. Les maxima d'absorption sont à 276 et 328 nm en solution méthanolique, 277 et 335 am en solution dans l'acide chlorhydrique 0,01 N dans le méthanol, et 245 et 313 nm en solution dans l'hydroxyde de sodium 0,01 N dans le méthanol; spectre d'absorption infra-rouge: il est
représenté à la fig.
4. Les bandes d'absorption, déter-
minées par la méthode au comprimé de bromure de potas-
sium, sont:
3360, 1580, 1510, 1490, 1480, 1440, 1420, 1360, 1310,
1290, 1240, 1210, 1160, 1110, 930, 890, 860, 800,
770, 740 cm-1.
Réactions colorées: réaction à l'iode et réaction de Lemieux positives, réaction à la ninhydrine et réaction au chlorure ferrique négatives; Aspect et couleur: cristaux jaunes en forme d'aiguilles Propriétés électriques: se comporte comme une substance neutre à l'électrophorèse sur papier sous forte tension; Rf en chromatographie sur couche mince (gel de silice) 0,73 (benzene/acétone = 2:1 en volume), 0,80 (chloroforme/méthanol = 10:1 en volume); Solubilité: très soluble dans le méthanol et l'acétone, et peu soluble dans l'eau et le n-hexane; et Formule développée apparente: 1"N 2
C2 N H2
OH Ci 4. Procédé de production de l'antibiotique SF - 2080 A, caractérisé en ce qu'on utilise une souche produisant l'antibiobique SF - 2080 A appartenant au genre Streptomyces dans un milieu nutritif, et en ce qu'on récupère l'antibiotique SF - 2080 A dans la culture.
5. Procédé de production de l'antibiotique SF - 2080 B, caractérisé en ce qu'on cultive une souche produisant l'antibiotique SF - 2080 B appartenant au genre Streptomyces dans un milieu nutritif, et en ce qu'on récupère l'antibiotique SF - 2080 B dans la culture.
6. Procédé suivant l'une quelconque des
revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que la souche
appartenant au genre Streptomycessp est Sr- 2080 (FERM-P
N 5072, ATCC N 31673).
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376778A (en) | 1979-12-24 | 1983-03-15 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Antibiotic substances and processes for production thereof |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0080051B1 (fr) * | 1981-10-07 | 1986-02-05 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Composés hétérocycliques et compositions antibactériennes et antifongiques les contenant |
| BR8906202A (pt) * | 1988-12-05 | 1990-09-25 | American Cyanamid Co | Processo e composicao para o controle de pragas de insetos,acaros e moluscos,composto para tal controle e processo para sua preparacao |
| US5162308A (en) * | 1988-12-05 | 1992-11-10 | American Cyanamid Company | Pyrrole carbonitrile and nitropyrrole insecticidal, acaricidal and molluscicidal agents and methods for the preparation thereof |
| US5204332A (en) * | 1988-12-05 | 1993-04-20 | American Cyanamid Company | Pyrrole carbonitrile and nitropyrrole insecticidal and acaricidal and molluscicidal agents |
| US5371239A (en) * | 1989-12-22 | 1994-12-06 | American Cyanamid Company | Methods and compositions for protecting animals against attack and infestation by helminth, acarid and arthropod endo- and ectoparasites |
| JPH0641067A (ja) * | 1992-04-20 | 1994-02-15 | Kitasato Inst:The | 新規カルパイン阻害物質ｋｐ−１２４１及びその製造法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH465769A (de) * | 1964-03-25 | 1968-11-30 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Verfahren zur Herstellung und Gewinnung des neuen Antibiotikums Pyrrolnitrin |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3932458A (en) * | 1971-11-04 | 1976-01-13 | Sterling Drug Inc. | Antimicrobial and plant-active 4,5-dihalopyrrole-2-carbonitriles |
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-
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-
1981
- 1981-01-05 MX MX819259U patent/MX6925E/es unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH465769A (de) * | 1964-03-25 | 1968-11-30 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Verfahren zur Herstellung und Gewinnung des neuen Antibiotikums Pyrrolnitrin |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CA1982 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376778A (en) | 1979-12-24 | 1983-03-15 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Antibiotic substances and processes for production thereof |
Also Published As
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