SE449751B - Antibiotiskt aktiva derivat av tallysomycin samt forfarande for framstellning derav - Google Patents

Description

449 751 2 närvarande för behandling av olika neoplasmatillstånd hos människa,skvamöst cellkarcinom, lymfosarkom, retikulumcell- sarkom, testikelkarcinom och Hodgkins sjukdom. En reviderad -strukturformel för bleomycinerna har nyligen publicerats av H. Umezawa et al. i J. Antibiotics ål (1978) 801-804.

Fleomycingruppen av antibiotika, som erhålls genom jäsning av en annan stam av Streptomyces verticillus, har avslöjats av Maeda et al. i J. Antibiotics Vol. gg (1956) 82-85; gl; (1959) lll; älg (1959) 285-289 och êll (1964) 194-199.

I likhet med bleomycin-komplexet har även fleomycin sepa- rerats i ett antal komponenter, som kan existera både i kopparfri och kopparkomplexbunden form.

Zorbamycin och de besläktade antibiotiska föreningarna zor- bonomycin B och zorbonomycin C avslöjas i J. Antibiotics 24 (8) (1971) 543-557 och i den brittiska patentskriften 1 277 150. Dessa antibiotika, som isoleras vid jäsning av Streptomyces bikiniensis var. zorbonensis, är nära besläkta- de med bleomycin- och fleomycin-familjerna.

En annan familj av antibiotika tillhörande fleomycin-bleo- mycin-gruppen har isolerats från odlingsvätskan vid jäsning av en variant av streptomyces numidus och har fått beteck- ningen YA-56. En beskrivning av YA-56-komplexet och de aktiva komponenterna YA-56X och YA-56Y återfinns i J. Antibiotics gå (10) (1971) 727-731 och i J. Antibiotics gg (1973) 77-83.

Det antibiotiska komplexet XK 49 och dess huvudkomponent vik- tomycin (även benämnd XK 49-1-B-2) avslöjas i J. Antibiotics 28 (1975) 358-371. Viktomycin isoleras från en sporbildande aktinomycesart, Streptosporangium violaceochromogenes MK 49, och synes likna bleomycinerna och zorbonomycin B. .ö Det antibiotiska glykopeptid-komplexet Bu-2231 och dess kom- ponenter Bu-223lA och B (betecknas i det följande tallysomy- _ p cin A respektive B) avslöjas i den amerikanska patentskriften 4 051 237; se även J. Antibiotics åg (1977) 779-805 och 4» 449 751 ål (1978) 667-674, Tallysomycinerna isoleras från odlings- vätskan vid jäsning av vissa stammar av Streptoalloteichus hindustanus och uppvisar potent antimikrobiell aktivitet och antitumör-aktivitet.

Framställning av olika halvbiosyntetiska derivat av fleo- mycin och bleomycin medelst den teknik som innebär jäsning under tillsats av en förstadieförening har avslöjats i de amerikanska patentskrifterna 3 984 390 och 3 846 400. Vid det- ta förfarande odlas stammar av mikroorganismer, som har för- måga att producera fleomycin- eller bleomycin-antibiotika, i ett jäsningsmedium i närvaro av en amin-förstadieförening, varvid man erhåller nya fleomycin- eller bleomycin-derivat med en sidokedjestruktur motsvarande den tillsatta aminen.

Den brittiska utläggningsskriften 2 001 962 A avslöjar fram- ställningen av 3-118)-l'-fenyletylaminQ7propylaminobleomycin (pepleomycin) såsom ett speciellt föredraget halvbiosynte- tiskt bleomycin-derivat på grund av dess uppvisade kombina- tion av potent antitumör-aktivitet och låg pulmonal toxici- tet.

Föreliggande uppfinning avser nya halvbiosyntetiska derivat av tallysomycin A och B och ett förfarande för framställning därav. Närmare bestämt tillhandahåller föreliggande uppfin- ning derivat av tallysomycin A med formeln co-NH, NH: 0 Û H N/kåço OH n N N/ ' H3: HN ll N 0 H CHH OH H 3 ° N J C H2 3 o HÛ l H3 o H 0 lr: ou ° aan ou OH OH OH m Dim: Så" ß az NT N' N o N. n] \s - "H2 fl cH-cH-Ls la n _ Il c-NH-(cuzh-(EH-CHZ-c-R 449 751 -NH-(cH2)3-NH2 -NH-(cH2)3-§@(cH3)2 -NH-(cH2)3-NH-cH2-cH2oH -NH-(cH2)3-N(cH2cH2oH)2 -NH-(cH2)4-NH2 -NH-(cH2)3-NH-CH3 eller -NH-(CHZh-NH-CšH-Q » CH3 vari R är och derivat av tallysomycin B med formeln 449 751 vari R är -NH-(cH2)3-NH2 -Nu-(cH2)3-s@(cfl3)2 -NH-(cH2>2-NH2 -NH-cnz-çu-cflz-NH2 oH -NH- nu -NH-(CH2)3~NH-cuz-cH2oH -NH-(CH2)3-N(cH3)2 -NH-(CH2)3-N(cH2cH2oH)2 -NH-(CH2)2-NH-cnz-cH2oH -NH-(cH2)3-Níïjp -NH-(cH2)3-N CH3 -NH-(cH ) -NH-c 23 aï eller liksom farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter av dy- lika derivat. Ovannämnda föreningar kan existera i form av ett kopparkomplex eller i kopparfri form.

En speniellt föredragen utföringsform av föreliggande uppfin- ning avser ett derivat av tallysomycin B med formeln 449 751 HN_4L\«'N"2 É NT ' H 9 cz-x crf-ü J 'sl lL\f/Lï 0 ., N" 1 5 H oH \ 40 Hï/N H3C HN u 0 N H H 3 CH 3 I N «NH-(CH2)4-NH2 Tallysomycin Smb H0 osí NH: Initialstudier under användning av försöksdjur antyder att tallysomycin Slob (innefattande både den kopparfria och kop- parkomplexbundna formen och farmaceutiskt godtagbara salter därav) har utmärkt antitumör-aktivitet med avseende på ett brett spektrum av maligna tumörer och uppvisar samtidigt färre icke önskvärda biverkningar (exempelvis nefrotoxicitet) än naturligt förekommande tallysomycin A och B.

Den amerikanska patentskriften 4 051 237 avslöjar framställ- ning och isolering av två nya glykopeptid-antibiotika, som däri betecknas Bu-2231 A och B. Senare studier har visat att Bu-2231 A och B (som nu benämns tallysomycin A och B) har följande strukturformler: co-NH, NH; 0 "N u NH: É-NH-(CHZ )3 -oH-cug-É-xïzu N, N o N 'f n] NH ' H 9 cH-cH-L' j s 2 :QNJÉÅÉ o" n" N/ 1 S - NH H3: HN "N o H | OH ' (gm) o u o H , on OH Hzu ou 0 on ou 0 , H aina, Tal 'Ivsomycin A .7/ 449 751 CÛ'NH2 NHZ HN n NH; N 9 ca-cH-ÉQ Si I 0 N' N *I »0 H ä / H2" ' 0 n N 143m: HN N o H °H ä 3 H CH; 0 Ho ° _ H0 0 I JN H3C 0 ä OH ou HZN 01-1 0 ou OH H0 aina; Taïlysomycin B Ovannämnda tallysomyciner utgör huvudkomponenterna vid jäs- ning av tallysomycin-producerande stammar av Streptoallo- teichus hindustanus och isolering i enlighet med konventio- nella kromatograferingsförfaranden.

Det har nu visat sig i enlighet med föreliggande uppfinning att det jäsningsförfarande som avslöjas i den amerikanska patentskriften 4 051 237 kan utföras i närvaro av vissa aminförstadieföreningar för framställning av nya derivat av tallysomycin A och B med värdefulla antimikrobiella egenska- per och antitumör-egenskaper.

Den allmänna teknik besträffande jäsning under tillsats av aminförstadieföreningar som avslöjats i de amerikanska pa- tentskrifterna 3 984 390 och 3 846 400 utnyttjas vid förfa- randet enligt föreliggande uppfinning. Vid förfarandet enligt uppfinningen sätts en aminförstadieförening till tallysomy- cin-jäsningsmediet enligt den amerikanska patentskriften 4 051 237 och införlivas under jäsningen med den ändstående aminresten i tallysomycin A och/eller B under bildning av nya halvbiosyntetiska derivat med en ändstâende aminsidokedja, som motsvarar den tillsatta aminförstadieföreningen. Isole- ring och rening av de på så sätt erhållna derivaten kan ut- H - q-H-c-NH(cH2)3-NH-(c1+2) 4-NH2 449 751 föras medelst konventionella kromatograferingsförfaranden i enlighet med den amerikanska patentskriften 4 051 237.

Framställning av antibiotika Vid utförande av förfarandet enligt uppfinningen odlas en tallysomycin-producerande stam av Streptoalloteichus hin- dustanus (avslöjas i den amerikanska patentskriften 4 051 237), företrädesvis stammen Streptoalloteichus hindustanus E 465-94 ATCC 31158 eller en mutant därav, i ett vattenhal- tigt näringsmedium. Näringsmediumet innehåller en assimiler- bar kolkälla (exempelvis glukos, ribos, galaktos, fruktos, mannos, sackaros, laktos, lösiig stärkelse eller glycerol) och en assimilerbar kvävekälla (exempelvis fiskmjöl, sojabön- mjöl, bomullsfrömjöl, majsstöpvätska, peptoner, köttextrakt, jordnötsmjöl, jästextrakt eller ammoniumsalter). Oorganiska salter, såsom natriumklorid, kaliumklorid, magnesiumsulfat, kalciumkarbonat, fosfater, etc., tillsätts om så erfordras.

Spårelement, såsom koppar, mangan, järn, zink, etc., sätts till mediumet, om så önskas, eller kan tillföras såsom för- oreningar i andra beståndsdelar av mediumet.

Förutom ovan beskrivna konventionella näringsbeståndsdelar sätter man till mediumet en aminförstadieförening av nedan angivet slag i form av den fria basen eller såsom ett syra- additionssalt därav. I allmänhet används aminförstadieför- eningen i form av en neutraliserad vattenlösning. De amin- förstadieföreningar som är lämpliga för användning enligt föreliggande uppfinning återges nedan tillsammans med kodbe- teckningen för motsvarande tallysomycin-produkt.

EE Kemisk benämning 1,2 díaminoetan 1,3-diaminopropan 1,4-diaminobutan 1,3-diamino-2-hydroxipropan N-(¿3-hydroxiety1)-1,2-di- aminoetan N-(ß -hydroxipropyïyï ,2-d1'- aminoetan N-metyï-1,3-diaminopropan N-(ß -hydroxíety1 )-1 ,3-d'í- aminopropan N-(1'-fenylety1)41,3-dí- aminopropan N,N-dimetyï-1,3-di- aminøpropan Struktur NH2-(cH2)3"NH2 NH2-(CH2 -NH2 )4 NH2-CH2-ÄH-CH2-NH2 H NH2-(CH -NH-CH2-CHZOH 2)2 NH2_(CH2)2°NH-CH2-çH-CHB UH NH2-(CH2)3-NH-CH3 NH2°(CH2)3'NH"CH2-CHZOH NH2-(cH2)3-NH-§H4<::> CH3 NH2-(CH2)3-N(CH3)2 N,N-di(ß-4wdroxíety1)-1,3-di-NH2-(çH2)3-N(çH2-CH20H)2 aminopropan N-(3-amínonropy1)-morfoïin NH2_(gH2)3_N/-\p 449 751 Taïïysomycin- sïutprodukt * 51a' 51b 51øa= 5105 511a' S11b Sea' Seb 514a' 514b 57b saa' San Sïzb 449 751 10 Amin Talïysomycín- Kemisk benämning Struktur slutprodukt * N-(3-aminopropy1)-2- _ _ pipekolin NH2 (cH2)3 N S135 CH3 3-amínopropy1-dímety1- Q smfornumlaoria "flgfWflflg-ä ÅCHQZ S23, 52,, C1 " xTa11ysomycin-derivaten namnges genom att varje aminförstadíeförening tiïïskrivs ett nummer, varvid tallysomycín-slutprodukten betecknas ef- ter numret på den ändstâende aminen och bokstaven a eller b beroende på om den är ett derivat av taïlysomycín A eller B. Så exempelvis är taïlysomycin Sïob ett derivat av tallysomycin B med 1,4-diaminobutan W såsom ändstående amin.

Aminerna, som utnyttjas i form av de fria baserna eller såsom syraadditionssalter med mineralsyror såsom HBr eller HCl, sätts företrädesvis till mediumet i en koncentration av ca 0,05-04 % (vikt/volym), isynnerhet ca 0,1-O,2% (vikt/volym), i början av jäsningen, ehuru goda resultat även kan uppnås genom portionsvis tillsats av aminlösningen under ett tidigt skede av jäsningen.

Odlingen utförs i enlighet med det förfarande som anges i den amerikanska patentskriften 4 051 237. Inkuberingstempe- raturen kan således vara vilken som helst temperatur, vid vilken en tallysomycin-producerande stam kan växa, exempel- vis 200-5400, men det är föredraget att utföra jäsningen vid 25° - 3s°c, speciellt via z7° - 32°c. Ett neutralt eller nä- ra nog neutralt begynnelse-pH, t.ex. pH 6-7, används företrä- desvis i mediumet och antibiotikaproduktionen utförs vanligen under en tidsperiod av 2-10 dygn. Normalt uppnås optimal pro- 449 751 11 duktion efter 3-7 dygn. För framställning av relativt små mängder kan skakkolvar och ytkulturer utnyttjas men för framställning av större mängder föredras submers aerob od- ling i sterila tankar. Då tankjäsning skall utföras är det önskvärt att producera ett vegetativt inokulat i en närings- vätska genom ympning av odlingsvätskan med en spor från den producerande organismen. Då ett ungt aktivt vegetativt inoku- lat har erhållits överförs detta aseptiskt till mediumet i jäsningstanken. Luftning i tankar och kolvar kan uppnås genom tvångscirkulation av luft genom eller över ytan av jäsnings- mediumet. Omröring i tankar kan uppnås genom en mekanisk om- rörare och ett antiskumningsmedel, såsom isterolja, kan till- sättas efter behov.

Produktionen av det önskade tallysomycin-derivatet i odlings- mediumet kan följas under jäsningsförloppet medelst pappers- skive-agardiffusions-metoden under utnyttjande av Mycobac- terium smegmatis-stammen M6-3 såsom testorganism.

Isolering och rening Efter det att optimal potens har uppnåtts i jäsningsvätskan (såsom t.ex. kan fastställas medelst ovannämnda analysmetod) avskiljs myceliet och icke upplösta återstoder från jäsnings- vätskan medelst konventionell teknik, såsom filtrering eller centrifugering. Antibiotikaaktiviteten finns i filtratet och kan utvinnas därifrån genor användning av konventionell ad- sorptionsteknik; se exempelvis J. Antibiotics §Q(l0) (1977) 779-788.

Vid en föredragen utföringsform adsorberas filtratet först på ett katjonbytarharts, exempelvis ett harts av den typ som är tillgängligt från Rohm & Haas Company under varunamnet AMBERLITE IRC-50 (NH4Éform). Hartset tvättas med vatten och tallysomysin-fraktionerna elueras med en vattenhaltig mine- ralsyra, exempelvis 0,lN HCl. Det eluat som innehåller de aktiva fraktionerna neutraliseras med en vattenlösning av ammoniak och omrörs företrädesvis med aktivt kol. Kolet i 449 751 12 tillvaratas genom filtrering, tvättas med vatten och elue- ras därefter med vattenhaltig butanol (butanol och utspädd HCl i volymförhållandet l:l) vid surt pH (exempelvis pH 2).

Vattenskiktet av elueringsmedlet neutraliseras med ett ba- siskt anjonbytarharts och koncentreras i vakuum. Det koncen- trerade eluatet från jonbytaren IRC-50 (om koladsorptions- steget utelämnas) eller det aktiva kolet upplöses härnäst i vatten, adsorberas på ett harts med benämningen DIAION HP-20 (varunamn för ett makroporöst, nonjonogent adsorbtionsharts bestående av en styren-divinylbensen-sampolymer och tillgäng- lig från Mitsubishi Chemical Co., Japan) och elueras med vatten för erhållande av en blandning av tallysomyciner i kopparkomplexbunden form.

Separation och rening av de önskade tallysomycin-derivaten, som bildas vid den jäsning som utförs under tillsats av en förstadieförening, kan åstadkommas genom att man adsorberar ovan erhållna orena tallysomycin-komplex på en katjonbytare av typen modifierat dextranderivat, exempelvis en modifierad polysackarid-dextran av den typ som saluförs kommersiellt un- der varunamnet CM-SEPHADEX C-25 av Pharmacia Fine Chemicals Inc. Tallysomycin-derivatet eller -derivaten elueras steg- vis med en vattenlösning av ammoniumformiat i koncentratio- ner varierande mellan l och 7%. Fraktioner, som innehåller sama derivat, sammanförs, avsaltas genom adsorption på ak- tivt kol (eluering med en sur vattenlösning av butanol) och lyofiliseras för erhållande av det renade tallysomycin-deri- vatet såsom ett kopparkomplex. Ytterligare rening kan om så önskas åstadkommas genom konventionell kromatograferings- och/eller gelfiltreringsteknik.

Tallysomycin-derivaten enligt föreliggande uppfinning har förmågan att bilda komplex med koppar i likhet med tallysomy- cin A och B och därför kan de nya derivaten och deras syra- additionssalter föreligga i kopparkomplexbunden form eller i kopparfri form. De kopparfria formerna av tallysomycin- -derivaten kan framställas utgående från motsvarande koppar- a, 449 751 13 komplexbundna former medelst kända förfaranden, exempelvis de som avslöjas i den amerikanska patentskriften 4 051 237 och den brittiska utläggningsskriften 2 001 962A.

Tallysomycin-derivaten i form av de fria baserna enligt fö- religgande uppfinning kan omvandlas till farmaceutiskt god- tagbara syraadditionssalter medelst konventionella metoder.

Exempel på dylika salter innefattar ogiftiga salter med or- ganiska eller oorganiska syror, såsom klorvätesyra, svavelsy- ra, fosforsyra, ättiksyra, myrsyra, stearinsyra, maleinsyra, bensoesyra, bärnstenssyra och bromvätesyra.

Antimikrobiell aktivitet Minimuminhiberingskoncentrationerna (MIK) för de halvbiosyn- tetiska tallysomycin-derivaten enligt föreliggande uppfin- ning bestämdes med avseende på svampar och grampositiva, gram- negativa och syrabeständiga bakterier medelst den tvâfaldiga agarutspädningsmetoden. Näringsagar användes för bakterier och sabouraud-agar för svamp. Resultaten återges i tabell l nedan i jämförelse med tallysomycin A och B. 449 751 Antímikrobielï aktivitet hos taïïysomycín-derivat 14 Tabe11 1 Staghyïo- coccus Sarcina Baci11us Myco- Taïïyso- aureus ïutea subtíïís bacterium @!§;g Smith PCI1001 PCI 219 607 A 0.1 0.05 B 0.0 0.h 0.006 0.2 s1a 0.h 0.1 <0.003 0.012 S1b 1.6 1.6 <0.05 <0.05 Sza 0.2 »0.8 <0.05 <0.05 Szb 1.6 6.3 S3b 0.8 1.6 0.013 0.05 S4b 0.8 3.1 0.006 0.003 S5b 6.3 12.5 0.025 0-2 saa 0.8 1.6 0.03 0.h Ssb 6.3 12.5 0.02 0.2 S7b 6.3 12.5 0.1 3.1 Ssa 0.2 0.h 0.006 0.1 Sgb 0.h 0.8 0.013 0-l Sgb 0.0 0.8 0.013 0.1 sïoa 1.6 0.h 0.00 0.2 Sïob 6.3 3.1 0.2 0.2 S11a 0.8 0.2 0.025 0-1 S11b 3.1 0.8 0.1 0.1 Sïzb 12.5 12.5 0-Ä 0-2 Sïab 6.3 6.3 0-8 0-2 S14a 0.8 0.8 0.1 0.l S14b 3.1 0 0.2 3-1 .b 449 751 15 ïhbell 1 §forts.) Antimíkrobielï aktivitet hos ta11ysomyc1n-derivat Escheríchía Proteus Candida Aspergiïïus “fixsëëlfs 1123:22: íxvfzäääs A ' _0.o5 0.1 '12.5 1.6 B 0.2 0.2 6.3 I 0 8 sïa _ 0.1 0.h 3.1 0.8 510 0.1 1.6 12.5 1.6 522 <0.05 0.2 6.3 0.h Szb 0.h 1.6 25 0.8 53b 0.1 ' 0.2 12.5 0.8 54b 0.h 0 h 25 0.8 Ssb 0.1 3 1 25 0.1 gea 0.1 1 6 6 3 0 2 55b 0.1 3 1 25 o 57b 0.h ' 6.3 >5o 0.1 533 0 1 0.h 12.5 0.8 Ssb 0.2 0.8 >50 1.6 Sgb 0.1 0.8 25 ° 1.6 Sïoa 0.h 0.8 3.1 1.6 S1ob 0.8' 3.1 12.5 6.

S11a 0.1 0.2 1.6 0. sïïb 0.2 1.6 12.5 6.3 s12b 1.6 S0 >100 25 s13b 0.h 12.5 >l00 12.5 s14a 0.2 3.1 50 3.1 0.1 25 _ >10o f'25 449 751 16 De relativa antibakteriella potenserna (tallysomycin A- -standard = 100 pg/mg) för tallysomycin-derivaten bestäm- des medelst pappersskive-agardiffusionsmetoden under använd- ning av Mycobacterium smegmatis stam M6-3 såsom testorga- nism. Resultaten återges i tabell 2 nedan.

Tabell 2 Antibakteriell potens hos tallysomycin-derivat Tallysomycin Antibakteriell potens UN/09) -Å 1,000 B 900 Sïa' 1,075 Sw V 1,000 Sza 350 Szb 300 Sgb "(25 S4b h05 Ssb 500 56a h60 Seb 3h° 57b 380 S8a 0 550 gsb 370 S90 380 S10a l'h5O Sïob 1,100 Slla 570 S11b h5° Sïzb 390 S13b 1,090 S143 1,300 ¶ 514gw 31999 449 751 17 Antitumöraktivitet Profaginduktionsaktiviteten med avseende på den lysogena bak- terien E. coli Wl709 (Å) bestämdes enligt den metod som har avslöjats av Lein et al. i Nature låg (1962) 783-784. Plaque- räkningen gjordes på agarplattan, som innehöll testföreníng- en (t),och kontrollplatta (c). Ett t/c-förhållande vid plaque-räkningen av större än 3,0 definieras såsom en signi- fikant nivå och lysogeninduktionsaktiviteten (ILB-aktivite- ten) uttrycktes såsom minsta inducerande koncentration av testföreningen. Resultaten återges i tabell 3 nedan.

Tabell 3 ILB-aktivitet av tallysomycin-derivat Tallysomycin ILB-aktivitet (Eg/ml) ' Å 0.00l2S B o.o1 Sïa 0.16 Sïb 0.31 S23 o.31 Szb 0.63 53b 0.31 s m) ' _ Ssb 0.08 saa 0.02 Sßb 0.08 S7b I 0.05 Sea 0.005 $8b 0.02 sgb == 0.16 sïoa M 0.16 510b ' 'o.31 449 751 18 Tabell 3 (forts.) ILB-aktivitet av tallysomycin-derivat Tallysomycin ILB-aktivitet (Eg/ml) 5113 o.o8 51;b 0.63 51¿b 0.31 'S13b 0.08 S14a _ o.o1 t S]4b 0.0h Antitumöraktiviteten av tallysomycin-derivaten undersöktes med avseende på fyra experimentella tumörsystem hos möss.

Lymfocytisk leukemi P388 och Lewis lungkarcinom implantera- des intraperitonealt på BDFl-möss av vardera könet i en im- 5 respektive 5 x l05 celler per mus. plantatstorlek av 3 x l0 Sarkom 180 askitestumör inympades intraperitonealt på möss av hankön tillhörande dd-stam med 2,5 x 1016 celler per mus.

Melanotisk melanom B16 implanterades subkutant på BDFl-möss med 5 x lO5 celler per mus. 24 timmar efter implantering av tumörcellerna administrerades uppmätta doser av testfören- ingarna till mössen intraperitonealt i en injektionsvolym av 0,2 ml per l0 g kroppsvikt. Testföreningarna administrerades en gång per dygn under 9 dygn _(qd)l~+ 9 schema) med undan- tag av de möss som hade ympats med Lewis lungkarcinom, vil? ka möss behandlades under ll dygn (¶d)l à ll). Antalet döda eller överlevande av de behandlade och obehandlade (kontroll) djuren registrerades dagligen under en observationsperiod om 45 dygn efter implantering av tumörcellerna och medianöverlev- nadstiden beräknades för vardera av test (T)~ och kontroll (Q)-gruppen. Ett T/C-värde lika med eller större än l25% an- tyder att en signifikant antitumöreffekt uppnås med avseende på leukemi P388 och Lewis lungkarcinom. Den verkliga dos som 449 751 19 gav ett T/C-värde av 125% har beräknats genom linjär reg- ressionsanalys och definierats såsom den effektiva dosen 125 eller EDIZ5. Den effektiva dosen 150 (TDl50) har ut- nyttjats för utvärdering av antitumöreffekten med avseen- de på Sarkom 180. Vid försöket med B16-melanom uppmättes tumörens storlek på den sextonde dagen efter tumörinymp- ningen och den dos som gav 50% inhibering av tumörtillväx- ten (ID5O) beräknades genom regressionsanalys. Antitumör- aktiviteten av derivaten återges i tabell 4 nedan.

Tabell 4 Antitumöraktivitet (mg/kg/dygn, ip) Pass S180 B16 Lewis luns Išllxšgmxgül* (EÜ12s) (5Dxso) (IÜ50) (ED125) A (cu-fri) 0.26 0.07 0.27 0.13 B (Cu-fri) 0.89 0.06 0.82 0.11 -S16 1.2 0.07 0.8h _ S1b _ 2.0 0.11 0.15 0.12 Sza >3.o 0.07 0.17 0.1h Szb 0.91 0.12 0.33 0.65 S3b 0.32 0.06 0.20 0.26 S4b >3.0 0.13 0.50 _ S5b 0.66 0.10 0.31 0.38 Sea 0.70 0.09 0.12 0.h7 Ssb ' 2.2 0.08 0.22 0.17.

S7b 2.1 0.1h 0.16 _ S 0.78 _ _ _ 449 751 Tabell 4 (forts.) 20 Antitumöraktivitet (mg/kg/dygn, ip) Tallysomycinx Seb 590 Slüa 5100 5100 Slla 5110 5120 (Cu-fri) 5130 S14a 5140 X kopparkomplexbunden form om ej annat anges Toxicitetsbestämning P388 S180 B16 Lewis lung (Enïzs) (ED150) (1050) (ED12s) 1.5 0.25 0.26 0.12 >3.o 0_h2 0.29 0.01 0.28 0.08 0.39 _ - 0.03 0.59 _ 0.h7 0.02 0.75 0.21 0.60 _ _ _ 0.28 0.20 0.70 0.32 1.30 0.06 1.30 _ 0.70 0.33 0.23 _ - 3.0 0.08 0.h3 0.29 Uppmätta doser av testföreningarna administrerades intraperi- tonealt till grupper av dd-möss. Injektionen gavs endast en gång eller en gång dagligen under 9 på varandra följande da- gar. Antalet döda eller överlevande djur registrerades under 30 dagar efter administrering av den sista dosen av test- föreningen för beräkning av den letala enkel- eller multipel- mediandosen (LD50).

Resultaten återges i tabell 5 nedan. 449 751 21 Tabell 5 Akut och subakut toxicitet av tallysomycin-derivat v 3950 (ms/kg/dag, in) 'Ta11ysomycin* muïtipeïdos gqd 1 »92 w w» 3 (tu-fri) 1,5 6.8 s1a es - Sw 19 ° Sza > 25 " 5% 32 2.0 S3b 19 ' s4b' 13 ” ssb us “-0 Sßa 15 - Seb 30 ' S71; 30 " Saa 142 ' Sgb ' 30 " Sgb 32 - .

Smal 5* 27 _ Smb 27 ' 51ob (Cu-fri) H2 “'° 449 751 22 Tabell 5 (forts.) Akut och subaküt toxicítet av tallysomycín-derivat Qw (ms/kg/dag, in) Taïlysomycín* enkeïdos muïtígeïdos gqd 1 »-92 511a 18 ' Snb 21 " 512b >5° I ° Sub i 35 ' Swa ' ' _ 16 sm xkopparkomplexbunden form om ej annat anges Det terapeutiska antitumörindexet beräknades för varje de- rivat med ledning av förhållandet mellan toxicitet och anti- tumöraktivitet. Såsom framgår av tabell 6 nedan uppvisar fle- ra av de nya halvbiosyntetiska tallysomycin-derivaten bättre .terapeutiskt index än naturligt erhållet tallysomycin A och B med avseende på vissa av de undersökta experimentella tu- mörsystemen.

Tabell 6 Terapeutiskt antítumñrindex för taïlysomycin-derivat _Terapeutiskt antítumörindex** Talïysomgcín * P388 S180 B16 Lewis Lung A (Cu-fri) Ta en 10 H6 B (Cu-fri) 52 767 56 E15 Sïa 21 357 30 - . . } _ 8 Sïb 10 173 127 _ 15 Sza <8 357 ih? 179 , _ hg gzb ' 35 267 9T 53b _ _ 59 317 95 73 5 ab _ <1» 1oo Ta11Xsom1cín * S S 5b 66 S S S w 7b sa Seb San S1Oa 51ob 51ob S11a S11b 51zb; S13b 14a S146 S x kopparkomplexbunden form om ej annat anges æcu-fri) i Eâêå TO 2l 11 11 51 20 96 89. se 75 >ss so 23 Terapeutískt antítumöríndexx* S180 h6o 167 120 76 338 900 2100 105 >833 106 449 751 B16 lha 125 136 188 115 11o 69 h6 S0 30 >38 152 Tabell 6 (forts.) Terapeutiskt antítumörindex för taïïysomycin-derivat Lewis Lung 121 32 lT6 250 78 200 66 x*enke1dostoxicítet (LD5O)/effektiv antitumördos (ED125, ED150 e11er 1n50) Tamlysomycin Slob utvärderades med avseende på nefrotoxici- tet hos möss under utnyttjande av BUN-mätning såsom slutpunkt och en lunghydroxiprolinmodell för pulmonaltoxicitet (se 449 751 24 Cancer Res. âä (1978) 787. Toxiciteten av tallysomycin Slob med avseende på njuren var icke större än toxiciteten av bleo- mycin vid ekvitoxiska doser. Tallysomycin Slob åstadkom en ökning av lunghydroxiprolin, vilket antyder pulmonaltoxici- tet. Dos-svarskurvans lutning var emellertid mindre än den som har observerats för bleomycin och hydroxiprolinhalten vid höga doser var reducerad jämfört med halten hos djur, som ha- de behandlats med bleomycin i ekvitoxiska doser.

Såsom framgår av ovan angivna data är tallysomycin-deriva- ten enligt föreliggande uppfinning användbara såsom antimik- robiella medel för inhibering av tillväxten av mikrobiella organismer, både bakterier och svampar, vilka är patogena med avseende på djur och växter. De är även användbara för inhi- bering av tillväxten av tumörer hos däggdjur. Föreningarna kan administreras på samma sätt som det kommersiellt till- gängliga bleomycinet och optimala dosnivåer under givna be- tingelser kan fastställas av fackmannen under användning av konventionella doseringsbestämningsförsök och ovan tillhanda- hållna data.

Inom ramen för föreliggande uppfinning faller farmaceutiska kompositioner, som innefattar en effektiv antimikrobiell el- ler tumörinhiberande mängd av ett tallysomycin-derivat en- ligt föreliggande uppfinning eller ett farmaceutiskt godtag- bart syraadditionssalt därav, i kombination med en inert, farmaceutiskt godtagbar bärare eller utspädningsmedel.

Enligt'en annan aspekt av uppfinningen tillhandahålls ett förfarande för terapeutisk behandling av ett värddjur (före- trädesvis däggdjur), som har angripits av en mikrobiell in- fektion eller av en malign tumör, vilket förfarande innebär att man till ett dylikt värddjur administrerar en effektiv antimikrobiell eller tumörinhiberande dos av ett tallysomy- cin-derivat enligt föreliggande uppfinning eller ett farma- ceutiskt godtagbart syraadditionssalt därav. 44 9 7.51 zs Uppfinningen âskådliggörs närmare medelst följande utför- ingsexempel, vari temperaturangivelserna avser Celsiusgrader.

Exemgel 1 Framställning av Sza och Szb Maltextrakt-snedagar, som hade ympats med Streptoalloteichus hindustanus ATCC 31158, inkuberades under 1 vecka vid 280.

Snedagarn användes för ympning av 100 ml odlingsmedium med följande sammansättning i en 500 ml Erlenmeyer-kolv: glukos 1,5 % jästextrakt 0,2 polypepton 0,5 KZHPO4 0,05 MgSO4'7H2O 0,05 CaCO3 0,5 pH inställdes på 7,2 före sterilisering i en autoklav. Kol- varna med ympkulturerna inkuberades vid 330 under 48 timmar i en rotationsanordning, som arbetade med 230 varv/minut.

Den ovan erhållna ympkulturen överfördes till 100 ml jäs- ningsmedium i en 500 ml Erlenmeyer-kolv i en ympstorlek av 10% (volym/volym)-Jäsningsmediumet innehöll följande be- ståndsdelar: sackaros 2,5 % glukos 0,5 PHARMAMEDIA 3,0 (bomullsfrömjöl) "distiller's soluble“ 3,0 (NH4)2SO4, 0,3 ZnSO4-7H2O - 0,003 CuSO4-5H20 0,01 CaCO3 0,4 449 751 za En neutraliserad vattenlösning av 3-aminopropyldimetylsulfo- niumklorid sattes till jäsningsmediumet före sterilisering i en koncentration av 0,l% (vikt/volym) såsom hydroklorid- salt. MediHmGtSpH-värde inställdes på 7,0 före sterilise- ring. Jäsningskolvarna innehållande ympkulturen inkubera- des vid 280 under 5 dygn i en rotationsskakanordning, som arbetade vid 250 varv/minut. Jäsningsförloppet följdes me- delst pappersskive-agardiffusionsanalys under användning av M. smegmatis stam M6-3 såsom testorganism.

Jäsningsvätskan, som innehöll tallysomycin Sza och Szb, om- rördes med filterjäsmedel och filtratet (20 liter) omrördes med AMBERLITE IRC-50 (60% NH4+-form, 3,5 liter). Hartset tvättades med vatten och därefter eluerades aktiviteten med 0,2 N HCl (3 x 4 liter). Det aktiva eluatet inställdes på pH 6,0 och omrördes med aktivt kol (400 g). De bioaktiva kompo- nenter som hade adsorberats på det aktiva kolet eluerades ge- nom omröring tre gånger med en blandning av n-butanol och vatten, varvid pH hölls vid 2,0 under elueringen. De kombi- nerade vattenhaltiga eluaten neutraliserades och koncentre- rades i vakuum till ca 100 ml och koncentratet kromatografe- rades på en kolonn av DIAION HP-20 (1,2 liter). Kolonnen framkallades med vatten för erhållande av blåfärgade tally- somycin-fraktioner. Indunstning av önskade fraktioner ifrå- ga gav en tallysomycin-råblandning (4,85 g), som kromatogra- ferades på en kolonn av CM-SEPHADEX C-25 (330 ml), vilken framkallades med ökande koncentrâtioner av en lösning av am- moniumformiat. Tallysomycin Szb, Sza och B eluerades i tur och ordning med 2% HCOONH4 och tallysomycin A eluerades med ~4% HCOONH4. Varje antibiotikafraktion avsaltades genom ad- sorption På aktivt kol, följt av eluering med en sur vatten- lösning av n-butanol. Lyofilisèring av det vattenhaltiga elua- tet gav tallysomycin Sza (156 mg) och Szb (570 mg) jämte tallysomycin A (210 mg) och B (540 mg), samtliga i koppar- komplexbunden form." 449 751 27 Exemgel 2 Framställning av Söa och S6b Jäsningsförfarandet enligt exempel l upprepades med undan- tag av att N-(ß-dwdroxietyl)-1,3-diaminopropan (HCl-saltet) användes såsom aminförstadieförening. Den tillvaratagna jäs- ningsvätskan (11 1iter)filtrerades med filterhjälpmedel. An- tibiotikaaktiviteten i filtratet adsorberades på AMBERLITE IRC-50-harts (60% NH4+-form, 2,4 liter) och eluerades från hartset med 0,1 N HCl. Eluatet inställdes på pH 6,5 och fick därefter passera en kolonn av DIAION HP-20 (2 liter). Kolon- nen eluerades med vatten. De fraktioner som innehöll tallyso- mycinerna koncentrades i vakuum och lyofiliserades för er- hållande av 824 mg av ett blått fast material. Tallysomyci- nerna separerades genom kromatografering på CM-SEPHADEX C-25 (200 ml) under användning av en vattenlösning av ammoniumfor- - miat såsom elueringsmedel. Tallysomycin Ssb eluerades med 2% HCOONH4-, S HCOONH4 för avsaltning. Utbytena av de kopparkomplexbundna tallyso- Ga och B med 3% HCOONH4- och slutligen A med 5% -lösning. Varje fraktion behandlades med aktivt kol mycinerna var: A 61 mg, B 3l mg, Söa 201 mg och S6b 288 mg.

Exemgel 3 Framställning av Ssa och Seb Jäsningsförfarandet enligt exempel l upprepades med undantag av att N,N-di(j3-hydroxietyl)-1,3-diaminopropan (HCl-saltet) användes såsom aminförstadieförening i en koncentration av 0,2% (vikt/volym). Den tillvaratagna jäsningsvätskan (10 liter) filtrerades. Tallysomycin-komponenterna i filtratet från odlingsvätskan adsorberades på AMBERLITE IRC-50 (60% NH4+-form, 2,2 liter) och eluerades med en utspädd HCl-lös- ning. Det aktiva eluatet neutraliserades och applicerades på en kolonn av DIAION HP-20 (2 liter), som framkallades med vatten. De bioaktiva fraktionerna koncentrerades i va- 449 751 28 kuum för erhållande av 1,16 g tallysomyciner i form av en råprodukt. Det fasta materialet kromatograferades på en ko- lonn av GHSEM§EEX C-25 (300 ml). Tallysomycin Ssb eluera- des först från kolonnen med 2% HCOONH4-, Ssa och B med 3% HCOONH4- och därefter A med 5% HCOONH4-lösning. De önskade fraktionerna ifråga avsaltades genom adsorbtion på kol. Ut- bytena av de kopparkomplexbundna tallysomycinerna var: A 184 mg, B 171 mg, Ssa 63 mg och Ssb 248 mg.

Exempel 4 Framställning av Sloa och Slob Jäsningsförfarandet enligt exempel l upprepades med undan- tag av att l,4-diaminobutan-dihydroklorid användes såsom aminförstadieförening. Jäsningsvätskan (35 liter, pH 7,5) centrifugerades för att avskilja myceliekakan. Den på så sätt erhållna klara överliggande vätskan omrördes med AMBER- LITE IRc-so-narts (60% NHf-form, 6 liter) under 30 minu- ter. Hartset tvättades med två portioner om 30 liter vat- ten vardera och eluerades därefter med tre portioner om 10 liter vardera av surt vatten, varvid pH hölls under 2,0 under elueringen. Eluaten kombinerades, inställdes på pH 7,8 och omrördes med 800 g aktivt kol. Aktiviteten eluera- des med en 1:1-blandning av n-butanol och surt vatten (5 liter vardera, pH 2,0) och elueringen upprepades tre gång- er. Vattenskikten kombinerades, neutraliserades med AMBER- LITE IR-45 (OH-form, basiskt anjonbytarharts tillgängligt från Rohm & Haas Co., USA) och koncentrerades i vakuum till 300 ml. Koncentratet applicerades på en kolonn av DIAION HP-20 (3 liter), som framkallades med vatten. Elue- ringen följdes genom bioanalys och de bioaktiva fraktionerna koncentrerades för erhållande av en blandning av tallysomy- cinerna såsom ett blått fast material (6 g). Det fasta ma- terialet kromatograferades på en kolonn av CM-SEPHADEX C-25 (300 ml), som förtvättades med en l % HCOONH4-lösning. Ko- lonnen framkallades med ökande koncentrationer (l%-3%) av en 449 751 29 vattenlösning av ammoniumformiat. De första bioaktiva frak- tionerna, som eluerades med 3% HCOONH4, kombinerades (250 ml) och omrördes med 30 g aktivt kol. Kolet avskiljdes, tvättades med vatten och eluerades två gånger med en 1:1- -blandning av n-butanol och surt vatten (120 ml vardera).

De vattenhaltiga eluaten neutraliserades med AMBERLITE IR-45 (OH-form) och indunstades därefter, varvid man erhöll ett halvrent material av tallysomycin Slob (l,6O g). Provet kromatograferades ånyo på en kolonn av AMBERLITE XT-2 (240 ml; ett makroporöst, nonjonogent adsorbtionsharts av sty- ren-divinylbensen-sampolymer med fin partikelstorlek, till- gängligt från Rohm & Haas Co., USA), som framkallades med vatten. De bioaktiva eluaten kombinerades, koncentrerades och lyofiliserades för erhållande av rent kopparkomplexbun- det tallysomycin Slob (l,25 g). Tallysomycin Sloa och B eluerades med framgång från CM-SEPHADEX-kolonnen med en 3% HCOONH4-lösning för erhållande av kopparkomplexbundet tally- somycin Sloa (360 mg) och tallysomycin B (370 mg). Spârmäng- der av tallysomycin A erhölls från 5% HCOONH4-eluatet.

Exemgel 5 Genom väsentligen samma förfaranden som har beskrivits i ex- emplen 1-4 framställdes följande halvbiosyntetiska tallyso- mycin-derivat medelst jäsning under tillsats av aminför- stadieföreningar. 449 751 Jäsníngs- vätskans vol. (1it.) (Uïbyte) (m9) 30 Tabell 7 Tallysomycin- Aminhydrok1orid- derivat förstadieförening Sïa _ 1,3-diaminopropan S1 b il S3b 1,2-díaminoetan S4b 1,3-diamino-2-hydroxipropan S5b N-(jâ-hydroxipropyl)-1,2-di- aminoetan S7b N,N-dimetyl-1,3-diamino- propan Sgb N-(1-hydroxiety1)-1,2-di- aminoetan S]1a N-metyï-1,3-diamínopropan Sub " S12b N-(3-aminopropyl)morfo1in S13b N-(3-amínopropyl)-2-pípekolín S]4a N-(1'-fenyletyl)-1,3-diamino- propan Smb " Exem Exemgel 6 6,7 1,9 8,5 10 10 3,2 2,2 10 spår 70 6 17 32 96 286 43 259 94 137 20 210 De kopparfria tallysomyciner som motsvarar de enligt ex- empel 1-5 framställda kopparkomplexbundna derivaten kunde erhållas genom behandling med H28 i metanol i enlighet med det förfarande som anges i exempel l i den amerikanska patent- skriften 3 646 197.

Fysikalisk-kemiska egenskaper för de i exemplen l-5 fram- ställda tallysomycin-derivaten återges i tabellerna 8 och 9 nedan. 31 Tabe11 8 Fysikaïisk/kemiska egenskaper hos nya taïïysomycin-derivat 449 751 Taïïysømgcin Sïa S10 TLc (Rf)** fiE¿Ef+ 5-102 5-123 (retentíonstid) 0.50 0.23 6'2h" 0.65 0.37 h'u8" o.2h 0.15 6'30" 0.38 0.3h 5'18" 0.59 0.51 h-h9" 0.66 0.h0 h'hT" 0.50 0.58 h=5h" 0.h2 0.22 6'18" 0.50 0.ho h'h2" 0.hh 0.25 h'5h" 0.56 0.h0 6*2h" 0.70 0.5h h'h8" 0.56 o.h8 h'52" o.h3 0.2h 6'20" 0.61 0.39 h'h7" 0.27 0.16 - 0.h9 0.35 h'h7" 0.h9 0.60 h'bT" o.h6 0.36 5'37" 0.52 0.37 - 0.62 0.50 7'05" 449 751 32 Tabeïï 9 Fysikaïisk-kemiska egenskaper hos nya talïysomycin-derivat , "2° 1% Ta11ysomyc1n Ämaxflm (E1cm) 51a 2h2(126), 292(lo2) Sïbí 2u2(1o8), 29ø(9h) 523 2ho(120), 290(1o8) Sgb auu.s(129),292 53b 2uo(123), 291(112) 54b 2h2(12o), 29o(1o3) šsb 2uu(12h), 29o(1o2) söa 2u3(1os), 291(ß3) söb 2u3(128), 291(1o3) s7b 2hs(12o), 29o(96) sga 2h3(1o7), 291(B5) Sßb 2h3(11h), 29o(92) Sgb 2h3(1oh), 290(8T) sïoa 2uu(1nz), 292<112> sïob 2hu(1h1), 292(l16) s11a 2uh(62), 292(53) sïïb 2nu(112), 292(91) Sïzb 2h5(7h), 292(59) S13b 2h3(1h2). 292(1lh) S14a 2u3(1o2>, 292 2n3<1us), 292(109) 514b Anaï. fünnet _§_ H _fl_ 39.5h 5.h5 15.01 38.51 h0.lT 39.73 39.81 h0.B9 h0.73 39.80 39.76 38.81 uo.1¿ 3h.98 39.1h 5.51 6.05 6.39 6.00 6.0h 6.18 5.97 5.9h 5.85 5.h8 5-09 5.85 lh.3O 15.02 15-35 15.21 1h.Sl 1h.T9 1s.h2 15.56 1h.7h l5.0h l3.0h 13.63

Claims (25)

1. 449 751 33 xx TLC (tunnskiktskromatografi)-systemet S-102 utnyttjar en pïatta av kiseïgel 60F (Merck) och en 1:1-voïymbiandning av metanol och en 10%-ig všâieniösning av ammoniumacetat såsom lösnings- medelssystem; TLC-systemet S-123 utnyttjar en pïatta av kiseï- gel 60F (Merck) och en 10:9:1-vo1ymb1andning av metanol, 10%- -igt amåäâiumacetat och 10%-ig ammoniumhydroxid såsom ïösningsme- delssystem. Detektering skedde medelst TLC-scanner utnyttjande dubbe1 vågïängd (shimadzu as-910) vid zsonm. ++ Apparat: Waters Associates Model ALC 204 med en injektor av typ U6K. Kolonnz Waters Associates pßondapak C18 (4 x 300mm) förtvättad med en 0,5%-ig EDTA-lösning. Mobil fas: 3:7-voïymbïandning av CH3CN:H20 innehållande Waters Associates' reagens PIC B-7. Detektor: modell 440 uv-detektor vid 254 nm. 2 Fiödeshastighetenz 1,0 m1/min. (tryck: 56 kg/cm ). ~ Injicerad provstorïekz 1 pl av en iösning innehåïïande 2 mg/mi. Föreliggande uppfinning kan tillgodogöras industriellt. Patentkrav l. Derivat av tallysomycin A med formeln C°'NHz "H2 Å 0 0 Jvmiz II u HN 3 Q-:Ü-c-NH-(cnz)3-en-cuz-c-R s NH2 ~° oim, där R är _NH_(cH2)3_NH2 -NH-(cflzn-sncnsiz -NH-(ßHzia-NH-cnz-cuzou -NH-(CH2)3-~(cH¿cH2oH)2 -NH-(CH¿)4-NH2 -NH-(Cflzg-NH-cna 8"" -NH-(cflzia-NH-an-Q . ~ CH3 449 751 34 och derivat av tallysomycin B med formeln gN-Åu/"W n Q N':]-C-R Nr N I I I _11 I S HZN åQ H N s *hc H " " H en Qåïmiiz 'NH-(CH2)3'NH2 -NH- ( cH¿)3-s@( C113) 2 ..-NH-(cH2)2'NH2 'NH'CH2'çH'CH2'NH2 OH -NH-(CH2)2-NH-CH2-QH-CH3 OH -NH-(CH2)3_NH“CH2“cH2oH -NH-(CH2)3-N(CH3)2 'NH'(cH2)3'N(cH2cH20H)2 -NH-(CH2)2-NH-CH2-CHZOH -NH-(cnz )4-NH2 -NH-(cnzb-NCQ CH3 där R är 449 751 35 och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav.

2. Derivat av tallysomycin A enligt krav 1 med benämningen tallysomycin Sla, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3NH2, och farmaceutiskt godtagbara syraadditions- salter därav.

3. Derivat av tallysomycin A enligt krav 1 med benämningen tallysomycin Sza, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-S+(CH3)2, och farmaceutiskt godtagbara syraaddi- tionssalter därav.

4. Derivat av tallysomycin A enligt krav l med benämningen S6a' -NH~CH2CH2 salter därav. k ä n n'e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3- OH, och farmaceutiskt godtagbara syraadditions-

5. Derivat av tallysomycin A enligt krav l med benämningen Ssa, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3- -N(CH2CH20H)2, och farmaceutiskt godtagbara syraadditions- salter därav.

6. Derivat av tallysomycin A enligt krav l med benämningen Sloa, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)4-NH2, och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav.

7. Derivat av tallysomycin A enligt krav 1 med benämningen Slla, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-NH-CH3 och farmaceutiskt godtagbara syraadditions- salter därav. _$.

8. Derivat av tallysomycin A enligt krav 1 med benämningen Sl4a, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är ~NH-(CH2)3-NH-C'IH E , och farmaceutiskt godtagbara syra- CH3 additionssalter därav. 449 751 as

9. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen S lb' och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav.

10. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen Szb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-S+(CH3)2, och farmaceutiskt godtagbara syraaddi- tionssalter därav.

11. ll. Derivat av tallysomycin B enligt krav l med benämningen S3b k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)2-NH2, och farmaceutiskt godtagbara syraaddi- tionssalter därav.

12. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen S4b' -NH-ca k ä n n e t e c k n a t därav, att R är 2-DH-CH2-NH2, och farmaceutiskt godtagbara syraaddi- OH tionssalter därav.

13. Derivat av tallysomycin B enligt krav l med benämningen Ssb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)2-NH-CH2-?H-CH3, och farmaceutiskt godtagbara sy- OH raadditionssalter därav.

14. Derivat av tallysomycin B enligt krav l med benämningen Ssb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-NH-CH2-CH2 additionssalter därav. OH, och farmaceutiskt godtagbara syra-

15. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen S7b, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-N(CH3)2, och farmaceutiskt godtagbara syra- additionssalter därav.

16. Derivat av tallysomycin B enligt krav l med benämningen Sab, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-NH2, 0/ 449 751 37 -NH-(CH2)3-N(CH2CH20H)2, och farmaceutiskt godtagbara sy- raadditionssalter därav. _

17. Derivat av tallysomycin B enligt krav l med benämningen Sgb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)2-NH-CH2-CH2OH, och farmaceutiskt godtagbara syra- additionssalter därav.

18. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen Slob, k ä n n e t e c k n a t. därav, att R är -NH-(CH2)4-NH2, och farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter därav.

19. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen Sllb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH(CH2)3-NH-CH3, och farmaceutiskt godtagbara syraadditions- - salter därav.

20. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen S lzb, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-N - 0, och farmaceutiskt godtagbara syraad- ditionssalter därav.

21. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen S13b, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CH2)3-N , och farmaceutiskt godtagbara syraad- CH3 ditionssalter därav.

22. Derivat av tallysomycin B enligt krav 1 med benämningen Sl4b, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är -NH-(CHZM-NH-ÉH , och farmaceutiskt godtagbara sy- CH3 raadditionssalter därav. 449 751 aa

23. Förfarande för framställning av ett tal1ysomycin-deri- vat enligt krav 1, k ä n n e t e c k nia t därav, att man odlar en tallysomycin-producerande stam av Streptoallo- teíchus hindustanus i ett vattenhaltigt näringsmedium i närvaro av en aminförstadieförening med formeln NH2'(CH2)2°NH2, NHz' NHZ-cHZ-çfl-cuz-NHZ, on NHZ-(cHZM-NH-cHZ-cuzon, Naz-(cHQZ-NH-cHZ-çH-cua. oH NHZ-(cnzg-NH-cuy NHZ-(cHZM-NH-cnz-cnzon, NHZ-(cHZg-NH-cífl-Q . NH2I(cH2)3“N(cH2cH2°H)2I NHZ-(Cflzß-Ní -n NHZ-(cflzg-N: > e e' Q ""z'(°"z)a'§ (CHTÛT me f; 449 751 39 eller ett oorganiskt syraadditionssalt därav, till dess en väsentlig mängd av det önskade tallysomycinderivatet har producerats av nämnda organism i nämnda odlingsmedium och att man utvinner det önskade tallysomycin-derivatet från odlingsmediumet väsentligen fritt från samtidigt bildade substanser.

24. Förfarande enligt krav 23, k ä n n e t e c k n a t därav, att den tallysomycin-producerande stammen är Strepto- alloteichus hindustanus ATCC 31158» '

25. Förfarande enligt krav 23 Eller 24, k ä"n n e t e c k - n a t därav, att aminförstadieföreningen är l,4-diamino- butan eller ett oorganiskt syraadditionssalt därav och att det utvunna tallysomycin-derivatet är tallysomycin Slob med formeln " c-NH-(cH2)4-NH2 ° N. | N, P H 0 N I S | _ . Hzrlfišffiço UH u N ' N/CH :EH-LJ "aC HN " o H I ou ä 3 H CH; o Ho o ll f' Hc 3 0 0 HZNOH OH OH CH Ho Oâïwig