CH645120A5 - Procede de preparation de sulfate de vindesine. - Google Patents

Description

Cette invention fournit un procédé de préparation de sulfate de vindésine qui donne un produit ayant une bonne stabi-55 lité de conversation et facile à manipuler.

Cette invention fournit un procédé de préparation de sulfate de vindésine, qui comprend les étapes consistant à dissoudre de la vindésine-base essentiellement pure dans de l'acétonitrile ou de l'acétone, à une concentration d'environ 1 %, 60 puis à y ajouter une quantité équimoléculaire d'acide sulfurique aqueux, de préférence IN, par rapport à la vindésine-base, en agitant à une vitesse telle qu'elle minimise la formation de disulfate de vindésine, de façon à obtenir un produit qui est du monosulfate de vindésine pratiquement pur. 65 La vitesse d'addition et le degré de mélange deviennent déterminants au fur et à mesure que la neutralisation de la vin-désine-base touche à sa fin.

On effectue le procédé de l'invention de préférence en

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deux étapes. Premièrement, on ajoute lentement (goutte à goutte en agitant) un équivalent d'acide sulfurique aqueux (de préférence IN) par rapport à la vindésine-base à une solution de vindésine à 1% dans de l'acétonitrile. Une fois cette addition terminée, on agite la suspension résultante pendant environ une demi-heure, après quoi on effectue une addition lente, avec agitation, de l'équivalent restant d'acide sulfurique aqueux. Puis on poursuit l'agitation pendant une demi-heure supplémentaire, après quoi on sépare par filtration le sulfate de vindésine qui a précipité. On lave le gâteau de filtration avec le même solvant organique que celui utilisé pour dissoudre la vindésine-base initialement, puis on le sèche à poids constant. Le rendement en sulfate à partir de la base est de 94-96%.

Plus particulièrement, on ajoute l'acide sulfurique aqueux IN à la solution à 1 % de vindésine dans l'acétonitrile, à une vitesse telle que la vitesse d'addition de l'acide sulfurique à la solution de vindésine, associée au degré d'agitation ou au degré de mélange, permet d'éviter la formation de disulfate de vindésine. On a trouvé qu'une vitesse d'environ 1 ml par minute était satisfaisante, en particulier vers la fin du processus de neutralisation. On utilise commodément une burette pour l'addition.

Dans la mise en oeuvre du présent procédé, le produit principal formé entre la vindésine-base et le premier équivalent d'acide sulfurique est l'hémisulfate (deux moles de vindésine par mole d'acide sulfurique). Le second équivalent d'acide sulfurique, que l'on ajoute à la même vitesse, transforme l'hémisulfate en monosulfate (une mole de vindésine par mole d'acide sulfurique). Si l'addition est trop rapide, en particulier vers la fin du processus de neutralisation ou si l'on utilise un excès d'acide sulfurique, il se forme le disulfate (une mole de vindésine pour deux moles d'acide sulfurique). Si la quantité d'acide sulfurique ajoutée à la vindésine est calculée comme étant deux équivalents par rapport au poids de la vindésine, considérée comme pure à 97 % (alcaloïde pur contenant du -solvant, etc ...), tout acide sulfurique qui est fixé sous forme de disulfate laisse nécessairement un peu de vindésine présente sous forme de l'hémisulfate, car il y a insuffisamment d'acide sulfurique pour former le monosulfate pour la quantité totale de vindésine. L'hémisulfate est moins stable que le monosulfate de vindésine. Par exemple, après un mois à 25 °C, l'hémisulfate de vindésine possède seulement 85,2% de la puissance initiale, tandis que le monosulfate de vindésine en possède 97,4%. Ainsi, le processus d'addition lente selon cette invention évite la formation de disulfate et la présence d'hémisul-fate dans le produit et donne un monosulfate de vindésine de stabilité satisfaisante et qui est facile à manipuler pour les préparations pharmaceutiques. Le monosulfate de vindésine ainsi obtenu présente également des propriétés physiques permettant de l'utiliser comme référence analytique.

Une courbe de titrage pour la neutralisation de la vindésine-base par l'acide sulfurique aqueux IN, effectuée comme précédemment, présente un point d'inflexion à pH 6,5 correspondant à la formation de l'hémisulfate de vindésine. L'addition du second équivalent d'acide sulfurique IN fait que le pH apparent de la solution tombe à une valeur comprise entre 4,5 et 5,0.

Bien qu'il soit possible de suivre la réaction précédente avec un pH-mètre, le point final s'est révélé être variable (4,5-5,0). Il est préférable que la quantité d'acide sulfurique ajouté soit calculée sur la base de la quantité de vindésine-base présente, déterminée par Chromatographie liquide sous pression élevée, plutôt que de se fier à la détermination du point final. Il est très important, pour la stabilité du monosulfate de vindésine préparé par le procédé de cette invention, d'utiliser de la vindésine-base de pureté élevée.

L'addition d'un excès d'acide sulfurique fait que le pH apparent descend encore lorsque le monosulfate est transformé en disulfate. La présence de disulfate dans le monosulfate donne, par dissolution dans l'eau (10 mg/ml), un pH plus acide que celui qu'une solution de monosulfate de vindésine pur pourrait fournir (pH 4,5). Le disulfate de vindésine en solution dans l'eau à 10 mg/ml a un pH de 2.0. La microanalyse du sulfate solide indique un pourcentage de soufre à 3,76%, quantité calculée pour le monosulfate de vindésine.

Le sulfate de vindésine obtenu par le présent procédé est hydraté et contient de 4 à 5% d'eau (environ deux moles) selon une détermination Karl Fisher. Ainsi, le sulfate de vindésine contient par molécule une mole de vindésine, une mole d'acide sulfurique et deux moles d'eau. Ce produit est une nouvelle substance.

Dans la mise en oeuvre du procédé de cette invention, l'acétonitrile a été déterminé comme étant le solvant de choix pour la dissolution de la vindésine en vue de sa neutralisation par l'acide sulfurique aqueux. On peut également utiliser l'acétone, mais on préfère l'acétonitrile car le monosulfate de vindésine préparé dans ce solvant a une meilleure stabilité. L'utilisation d'acide sulfurique IN et d'une solution de vindésine à 1 % dans l'acétonitrile (ou l'acétone) a été précisée car on a trouvé que ces concentration étaient optimales. Comme l'homme de l'art le verra, la modification des concentrations précédentes peut donner du monosulfate de vindésine de propriétés satisfaisantes. De tels modes opératoires font partie du domaine de l'invention.

L'invention est en outre illustré par l'exemple spécifique suivant:

Exemple 1

On prépare une solution à partir de 32,84 g de vindésine-base et de 3284 ml d'acétonitrile. On y ajoute un équivalent d'acide sulfurique aqueux IN en agitant, à raison d'1 ml/mn (1 g de vindésine-base d'une pureté de 97% demande 1,25 ml d'acide sulfurique aqueux 1,0 N). Après addition du premier équivalent d'acide sulfurique, on agite la suspension résultante à la température ambiante pendant 20 à 30 minutes, après quoi on ajoute le second équivalent d'acide sulfurique aqueux IN à la même vitesse, en agitant. Pendant l'addition du second équivalent d'acide sulfurique, l'hémisulfate formé par addition du premier équivalent se transforme en monosulfate de vindésine. Après addition du second équivalent d'acide sulfurique, on agite la solution résultante pendant 30 minutes supplémentaires à la température ambiante. Puis on filtre le sulfate de vindésine ainsi préparé et on lave le gâteau de filtration avec 100 ml d'acétonitrile. On sèche sous vide le précipité à une température ne dépessant pas 35 °C, jusqu'à poids constant; rendement = 34,8 - 35,6 g (94-96%).

Dans l'exemple précédent, la vitesse d'addition de l'acide sulfurique dilué à la solution de vindésine-base ou d'hémisul-fate de vindésine est de 1 ml/mn. Des vitesses inférieures donnent pratiquement les mêmes résultats, on peut utiliser des vitesses d'addition plus rapides pourvu que l'agitation soit suffisante pour permettre d'éviter la formation du disulfate. Ce qui est important n'est pas la vitesse d'addition absolue de l'acide sulfurique aqueux dilué, mais l'addition à une vitesse appropriée associée à une agitation suffisante pour minimiser la formation de disulfate, en particulier vers la fin du processus de neutralisation.

Le mode opératoire précédent peut être effectué en deux étapes, c'est-à-dire que l'hémisulfate qui est un composé bien caractérisé, peut être isolé, séché puis remis en suspension dans un solvant organique pour l'addition du second équivalent d'acide sulfurique à la suspension.

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Claims (5)

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1. Procédé de préparation de sulfate de vindésine, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à dissoudre de la vindésine-base pratiquement pure dans l'acétonitrile ou de l'acétone, à une concentration d'environ 1 %, puis à y ajouter une quantité équimoléculaire d'acide sulfurique aqueux par rapport à la vindésine-base, en agitant à une vitesse telle que l'on minimise la formation de disulfate de vindésine, pour obtenir un produit qui est du monosulfate de vindésine pratiquement pur.

2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant est l'acétonitrile.

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REVENDICATIONS

3. Procédé selon l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'acide sulfurique aqueux est ajouté à une vitesse de 1 ml par minute ou à une vitesse inférieure.

4". Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à dissoudre la vindésine-base dans de l'acétonitrile ou de l'acétone à une concentration d'environ 1 %, puis à y ajouter un équivalent d'acide sulfuri-

que aqueux par rapport à la vindésine-base en agitant de façon à former l'hémisulfate de vindésine, puis à ajouter un second équivalent d'acide sulfurique aqueux par rapport à la vindésine-base, en agitant, pour transformer l'hémisulfate de 5 vindésine en monosulfate de vindésine, à une vitesse telle que l'on minimise la formation de disulfate de vindésine, pour obtenir un produit qui est essentiellement le monosulfate de vindésine essentiellement pur sous forme du dihydrate.

5. Sulfate de vindésine, sous forme de monosulfate de vin-io désine pratiquement pur, obtenu par le procédé selon l'une des revendications 1 à 4.

La vindésine est décrite dans le brevet belge n° 813 168 délivré le 2 Octobre 1974, et est appelée ici Carboxamide en C-3 de la 4 - désacétyl - VLB. Le composé a la formule développée suivante:

-CHst-CHi

CH3-0—** 6

La vindésine peut également être appelée 3-Carboxamide de la 4 - désacétyl-3 - décarbométhoxy-VLB ou 23-amino -04 - désacêtyl-23 - déméthoxy-vincaleucoblastine. Un sulfate de la vindésine est également décrit de façon particulière dans le brevet belge n° 813168. _

La vindésine présente, dans les systèmes tumoraux transplantés chez les animaux, une activité approchant celle de la vincristine bien que ne possédant pas certains effets secondaires neurologiques potentiels qui accompagnent l'utilisation clinique de la vincristine. La vindésine est à l'heure actuelle en essai clinique dans le monde entier et s'est révélée être utile au cours des premiers essais vis-à-vis de certaines leucémies, certains lymphomes et certains carcinomes du poumon.

La vinblastine et la vincristine, deux alcaloïdes de vinca apparentés vendus à l'heure actuelle comme agents destructeurs des cellules cancéreuses, sont préparées sous forme de leurs sulfates pour leur utilisation par administration intraveineuse à des patients souffrant de diverses tumeurs. On a cependant trouvé que le sulfate de vindésine, préparé en mélangeant simplement une solution de vindésine-base dans différents solvants avec deux équivalents d'acide sulfurique dilué 50 puis en évaporant à siccité, était électrostatique (difficile à manipuler) et que sa stabilité à la conversation n'était pas satisfaisante.