Verfahren zur Gewinnung der in Wasser leichtlöslichen Komponente des Gemisches der herzwirksamen Stoffe der Bulbus Seillae. Eingehende Untersuchungen über die herzwirksame Substanz der Meerzwiebel, so wie sie beispielsweise nach den Patenten Nr. l.02141 und Nr. 105412 erhalten wird, haben ergeben, dass sie sich in zwei Kom ponenten zerlegen lässt, die in der Droge ne beneinander vorkommen und bei ihrer Ge winnung einander so hartnäckig begleiten, dass die bisherigen Isolierungsmethoden stets zu einem Gemisch führten, obschon die Kom ponenten einzeln sich in ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften deutlich von einander unterscheiden lassen.
In einer Arbeit von Ewins (Journal of Pharmacology and exp. Therapeutics. Band 11I, 1911, Seite 155) wird bereits vermutet, dass in der Meerzwiebel zwei wirksame Sub stanzen nebeneinander vorkommen;
doch wer den diese von Ewins nicht als einheitliche Stoffe charakterisiert. Nach der Art ihrer Isolierung und vor allem aus der geringen Wirksamkeit wenigstens des einen der von Ewins hergestellten Präparate geht hervor, dass diese nur mehr oder weniger weitgehend zersetzte Produkte darstellen können.
Die Ewinschen Präparate zeigen denn auch ge genüber der nach dem vorliegenden Verfah ren gewonnenen Komponente sowohl in der Darstellung, wie in ihren Eigenschaften so grosse Unterschiede, dass es. sich bei keinem der Ewinschen Produkte um einen Körper handeln kann, wie er nach dem vorliegen den Verfahren, das zu einer bisher noch nicht. beschriebenen Substanz führt, gewon nen wird.
Das vorliegende Verfahren zur Isolierung der wasserleichtlöslichen Komponente des Gemisches der herzwirksamen Stoffe der Meerzwiebel beruht auf dem bisher noch un bekannten Unterschied in der Löslichkeit der beiden Komponenten in Wasser und in wäs serigen, zum Beispiel wässerig-alkoholischen oder wässerig-methylalkoholischen, Medien, auch wenn die Komponenten in Form ihrer Verbindungen. mit den in der Meerzwiebel vorhandenen Tanninstoffen, als sogenannte Tannoide, vorliegen.
Im folgenden sei das Gemisch der ak tiven Glykoside der Meerzwiebel als Seil laren, die in Wasser schwerer lösliche Kom ponente desselben als Seillaren A, die in Wasser leichter lösliche Komponente als Seillaren B bezeichnet. Unter Scillaren- tannoid soll das Gemisch- der die aktiven Glykoside enthaltenden Tannoide, unter Scil- larentannoid A das Tannoid des Scillarens A und unter Scillareutannoid B das Tau- noid:
B des Scillarens B verstanden werden.
Durch das Auffinden einer neuen Farben reaktion des Scillarens war es möglich ge worden, dasselbe in einzelne voneinander ver schiedene Fraktionen zu zerlegen, während die physiologische Wirksamkeit wegen ihrer Gleichartigkeit für beide Komponenten zur Unterscheidung derselben nicht anwendbar gewesen wäre.
Während Seillaren A und Scillarentannoid A in Essigsäureanhydrid bei Zusatz von konzentrierter Schwefelsäure eine zunächst karminrote, dann sofort smaragd- gTüne Färbung zeigen, so geben Seillaren B und Scillarentannoid B unter denselben Be dingungen eine rein blaue Farbe, ohne das Auftreten einer roten Anfangsphase.
Da sich die beiden Komponenten, wie bereits erwähnt. in der Droge und bei ihrer Gewinnung dar aus hartnäckig begleiten, so war es nicht vorauszusehen, dass es auf so einfache Weise, wie im vorliegenden Verfahren beschrieben. möglich sein würde, Seillaren B, völlig von Seillaren A befreit, zu gewinnen.
Die Isolierung des Scillarens B nach vor liegendem Verfahren gelingt in der Weise; dass man ein Gemisch der die aktiven C'@lyko- side enthaltenden Tannoide mit Wasser ex trahiert, den wässerigen Auszug mit gerb stoffällenden Mitteln behandelt und das so in Freiheit gesetzte Seillaren B aus dem Fil trate isoliert.
In Ausnutzung des aufgefundenen Lös lichkeitsunterschiedes der beiden Komponen ten, auch als Tannoide, und unter Verwen- dung der Farbreaktionen als Kontrolle. isi es gelungen, innerhalb des Grundgedankens der Erfindung, das Verfahren mit Hilfe ver schiedener technischer Massnahmen und bis zu einem gewissen Grade auch ohne Rück sicht auf den Reinheitsgrad des Ausgan:
@- präparates durchzuführen. Es hat sich zum Beispiel gezeigt, dass der -Unterschied in der Löslichkeit der Komponenten in Wasser oder wässerigen Medien auch bestehen bleibt, wenn das Scillarentannoid von einer grossen Menge von Ballaststoffen begleitet wird.
Ob in der einzelnen Ausführungsform des Verfahrens die Isolierung -des Scillarentannoides B durch fraktionierte Auflösung des Scillarentannoi- des in Wasser oder wässerigen Medien, zum Beispiel Wasseralkohol oder Wassermethyl alkohol, wobei Scillarentannoid A ungelöst bleibt, oder durch fraktionierte Fällung, zum Beispiel durch .Salze, wobei Scillarentannoid A zuerst ausfällt, oder durch fraktionierte Ausschüttelung mit einem organischen Lö sungsmittel, zum Beispiel Essigester,
wo bei Scillarentannoid A zuerst übergeht, oder durch fraktionierte Adsorption, zum Beispiel an Tierkohle, erfolgt, die Isolierung tles Scillarentannoides B geschieht in allen Fällen auf Grund der verschiedenen Löslich keit der beiden Komponenten in -VÄ'asser. wobei Scillarenta.nnoid B in der wässerige-ri Lösung hileibt.
Aus einer so gewonnenen Lösung wird das Seillaren B aus seinem Tannoid da-durcL in Freiheit gesetzt, dass man sie nun mit gerbstoffällenden Mitteln, am besten mit unlöslichen, behandelt und das so in Frei heit gesetzte Seillaren B schliesslich in Übli cher Weise, zum Beispiel, wie in den oben zitierten Patenten für Seillaren beschrieben wurde, isoliert.
Die Trennung in zwei Komponenten wird vollständiger. die Komponenten, werden rei ner, wenn man die bei einer ersten Tren nungsoperation gewonnenen Fraktionen einer nochmaligen Trennung wiederum auf Grund der verschiedenen Löslichkeit in wässerigen Medien, aber vorteilhaft auf eine von der ersten abweichenden Art, durchführt.
Seillaren B kann aus seiner Lösung auf verschiedene Weise, zum Beispiel durch er schöpfendes Aussalzen oder Fällen mit einem Clerbstoff oder durch Ausschütteln oder er- .#chöpfende Adsorption der eingeengten Lö sung oder durch Einengen seiner Lösung zur Trockne und Herauslösen des Glykosids aus dem Rückstand mit einem organischen Lösungsmittel, zum Beispiel absolutem Al- koho,l, gewonnen werden.
Die Gewinnung des Scillarens B. lässt sich auch in der Weise durchführen, dass man die Hauptmenge der gerbstoffähnlichen Ver bindungen aus dem Scillarentannoid, zum Beispiel wie in den oben zitierten Patenten zur Darstellung des Scillarens, entfernt und erst mit einem so vorgereinigten Präparat die Abtrennung des Scillarens A auf Grund seiner Schwerlöslichkeit in wässerigen Me dien durchführt, worauf man das Seillaren B vor seiner Isolierung nochmals mit gerbstoff- fällenden Mitteln behandelt,
da gerbstoff- a -hnliehe Substanzen auch bei der Herstellung von Seillaren nur sehr schwer bis auf Spu ren wegzubringen sind und sich beim Tren- nungsprozess in der Lösung des Scillarens B anreichern.
Wie das Verfahren im einzelnen aus geführt werden kann, erhellt am besten aus den Beispielen, die unter Benützung der oben angeführten Variationsmöglichkeiten immer unter Ausnützung des Löslichkeits unterschiedes der beiden Komponenten in wässerigen Medien durch den Fachmann leicht vermehrt werden könnten.
Das Seillaren B, dessen Kristallisation bis jetzt nicht gelang, ist in reinem Zustand ein weisses Pulver, das in Wasser und in den Alkoholen sehr leicht löslich ist, schwer da gegen in Essigester und sehr schwer in Chloroform und Äther. Es dreht die Ebene des polarisierten Lichtes nach rechts. Es ist gegen Hydrolyse relativ beständig, ver. dünnte Mineralsäuren verseifen es langsam. Dabei wird ein gut kristallisierendes Agly- kon (Scillaridin B), aber nur in geringer Ausbeute, gewonnen. Scillaridin B kristalli siert aus Methylalkohol in farblosen, glän. zenden Spiessen.
Es ist in Wasser und Äther fast unlöslich, in den üblichen gebräueh- lichen Lösungsmitteln löst es sich etwas leichter.
Die Elementaranalyse von Scillaridin B ergab für C: 73,1 %, für H: 7,4 %. Subli mieren lässt sich,Scillaridin B nicht. Es sin tert bei 225 und schmilzt unter Zersetzung bei 22$ bis 229 . Die Mischung von Essig säureanhydrid und konzentrierter Schwefel säure (1,00: 2) löst sowohl das. Seillaren B, wie dessen Aglykon mit tief blauer Farbe, die längere Zeit bestehen bleibt. Die physio logische Wirksamkeit von Seillaren B be trägt pro mgr 1500 bis 1600 Froschdosen (F. D. nach Houghton-Straub).
<I>Beispiel 1:</I> 150 gr eines Rohegtraktpräparates aus Bulbus Scillae, das durch Extraktion von sorgfältig getrockneter und gepulverter Bulbus Scillae mit Alkohol und Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum bei niedriger Temperatur zur Trockne gewonnen wird, werden in 450 cm' Methanol gelöst und fil triert. In das Filtrat werden unter Umrüh ren 4 bis 4i/2 Liter Chloroform eingetragen, wobei sich die Hauptmenge der Verunreini gungen ausscheidet.
Nach dem Stehen über Nacht wird die Flüssigkeit abgegossen, durch Filtration geklärt und im Vakuum zur Trockne verdampft.
50 gr des Trockenrückstandes, welcher ein mit erheblichen Mengen von Ballaststof fen verunreinigtes Seillarentannoid darstellt:, werden mit wenig Wasser zu einem homo genen Brei angerieben, welcher mit Wasser bis zu 10e0 cm' verdünnt wird.
Hierbei Erfolgt eine erste Trennung in Scillaren- tannoid <I>A</I> und Seillarentannoid <I>B.</I> Um die Abscheidung des Scillarentannoides AA zu be günstigen und die Filtration zu erleichtern wird vorteilhaft etwas Salz zugesetzt, bei spielsweise 25 cm' einer gesättigten Hoch salzlösung. Nach kurzem Stehen wird ab- genutscht, mit wenig Lösungsmittel nach gewaschen und scharf abgesaugt.
Das wässerige Filtrat, welches das Scil- larentannoid B enthält, reagiert meist schwach sauer und wird nach vorsichtiger Neutrali sation, zum Beispiel mit verdünnter Natron lauge, mit kleinen Portionen eines unlös lichen Gerbstoffällungsmittels, zum Beispiel Bleihydroxyd, so oft geschüttelt, bis dieses weiss bleibt. Saure Beimengungen entfernt man noch unter Zusatz von 1 cm' 2 n H,SO., pro Liter Flüssigkeit durch erschöpfendes Ausschütteln mit Chloroform.
Die mit Soda wieder neutral gemachte Lösung wird mit Ammonsulfat gesättigt und das Seillaren B mit Essigester erschöpfend ausgeschüttelt. Die Essigesterlösung wird im Vakuum bei tiefer Temperatur bis fast zur Trockne einge dampft, der Rückstand mit trockenem Äther übergossen, digeriert - und abfiltriert. Die Eigenschaften des. hierauf getrockneten Scillarens B stimmen mit den oben angegebe nen überein.
Beispiel <I>2</I> Das Ausgangsmaterial für die Herstellung von Seillaren B in diesem Beispiel wird so gewonnen, @dass man sorgfältig getrocknete und gepulverte glykosidrciche Meerzwiebel mit Alkohol erschöpfend extrahiert, den Extrakt im Vakuum bei niedriger Tempera tur zur Trockne verdampft,
in Wasser wie der auflöst und unter Zusatz von etwa 100 gr NaCl pro Liter mit Essigester erschöpfend ausschüttelt. Das beim Verdampfen des Essigesters im Vakuum in der Kälte zur Trockne hinterbleibende Produkt stellt Scil- la.rentannoid dar. Davon werden 40 gr in einer Reibschale mit wenig Wasser zunächst zu einem homogenen Brei verrieben und dieser Brei unter weiterer Wasserzugabe und Reiben verdünnt, wobei das Scillaren- tannoid A gewöhnlich flockig ausfällt.
Sich bildende Klumpen werden durch Kne ten mit etwas Wasser ebenfalls in den kör nigen Zustand übergeführt. Im ganzen wird 1 Liter Wasser verwendet. Durch Zusatz von 25 eins einer gesättigten Kochsalzlösung wird die Ausscheidung des Scillarentannoides A vervollständigt, die man nach kurzem Stehen abfiltriert. Die wässerige Lösung de" Scillarentannoides B wird, wie in Beispiel 1, nach vorsichtiger Neutralisation mit kleinen Portionen eines unlöslichen Gerbstoff fällungsmittels, zum Beispiel Bleihydroxyd, so oft behandelt, bis letzteres weiss bleibt.
Aus der zuletzt abfiltrierten Lösung ent fernt man geringe Mengen V erunreinigungert saurer Natur durch Ansäuern mit 1 eins 2 n H2S0, pro Liter und erschöpfendes Aus schütteln mit Chloroform und dampft die wieder neutral gemachte wässerige Lösung des Scillarens B nun im Vakuum sorgfältig zur Trockne ein. Absoluter Alkohol löst aus dem Rückstand das Seillaren B in reiner Form heraus; nach dem Verjagen des Lö sungsmittels im Vakuum bei niedriger Tem peratur hinterbleibt es mit den Eigenschaf ten, wie sie oben beschrieben wurden.
<I>Beispiel 3:</I> 30 gr Seillaren, wie es zum Beispiel nach den Patenten Nr.1,02141 und Nr.105412 aus Bulbus Scillae erhalten wird, werden in 200 cm' Methanol gelöst und in 1000 eins Wasser unter Rühren eingetragen. Hierbei fällt die Hauptmenge des Scillarens A als weisser Niederschlag aus, der sich beim Ver jagen des Methanols im Vakuum bei nie driger Temperatur noch vermehrt. Die Aus scheidung wird abgenutscht und scharf ab gepresst.
Das wässerige Filtrat enthält nun das Seillaren B mit einem nur noch geringen Anteil von Seillaren A und noch mit einer gerbstoffähnlichen Verunreinigung, die sich in dieser Fraktion anreicherte, in Lösung. Die Entfernung dieser Begleitstoffe gelingt durch Zusatz von 25 cm' gesättigter Koch salzlösung pro 1 Liter wässeriger Lösung und von etwas wasserunlöslichem Gerbstoff- fällungsmittel, zum Beispiel 15 gr frisch ge fälltem Bleihydröxyd,
Durchschütteln und Abfiltrieren. Gegebenenfalls ist noch mit etwas Gerbstoffällungsmittel nachzubehan deln, bis dieses weiss bleibt. Eine letzte or ganische Verunreinigung entfernt man durch Ausschütteln der Lösung des Scillarens B mit Chloroform. Dann wird sie im Vakuum bei niedriger Temperatur zur Trockne ver dampft. Aus dem Trockenrückstand wird das Seillaren B zum Beispiel mit wenig ab solutem Alkohol herausgelöst, worauf man im Vakuum zur Trockne eindampft. Der Trockenrückstand stellt reines Seillaren Y dar mit den in der Beschreibung genannten Eigenschaften.