BR112020022610A2 - proteína de fusão de receptor de vegf de alta concentração que contém formulações - Google Patents

proteína de fusão de receptor de vegf de alta concentração que contém formulações Download PDF

Info

Publication number
BR112020022610A2
BR112020022610A2 BR112020022610-6A BR112020022610A BR112020022610A2 BR 112020022610 A2 BR112020022610 A2 BR 112020022610A2 BR 112020022610 A BR112020022610 A BR 112020022610A BR 112020022610 A2 BR112020022610 A2 BR 112020022610A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
formulation
sucrose
polysorbate
fusion protein
vegf receptor
Prior art date
Application number
BR112020022610-6A
Other languages
English (en)
Inventor
Kenneth S. Graham
Saurabh Wadhwa
Original Assignee
Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=66669104&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BR112020022610(A2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Regeneron Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Publication of BR112020022610A2 publication Critical patent/BR112020022610A2/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

''PROTEÍNA DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEFG DE ALTA CONCENTRAÇÃO QUE CONTÉM FORMULAÇÕES''. A presente invenção fornece formulações oftálmicas com altas concentrações de proteína de fusão de receptor de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e alta estabilidade durante o armazenamento. Métodos para o tratamento de distúrbios oculares angiogênicos usando as formulações de alta concentração também são fornecidos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PROTE- ÍNA DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEGF DE ALTA CONCENTRA- ÇÃO QUE CONTÉM FORMULAÇÕES”".
[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/813.882, depositado em 5 de março de 2019; Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/769.876, depositado em 20 de novembro de 2018; Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/752.127, depositado em 29 de outubro de 2018; e Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/669.506, depositado em 10 de maio de 2018; cada um dos quais é aqui incorporado por referência em sua totalidade.
CAMPO DA TÉCNICA
[0002] As modalidades no presente documento se referem geral- mente a formulações que contêm proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração adequadas para administração ocular. Mais particularmente, as modalidades no presente documento forne- cem formulações farmacêuticas líquidas para administração intraví- trea, em que as formulações incluem mais de 40 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF e mostram potência, estabilidade, viscosi- dade e pH farmaceuticamente aceitáveis.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0003] Uma cópia oficial da listagem de sequências é submetida simultaneamente ao relatório descritivo eletronicamente via EFS-Web como uma listagem de sequências formatada em ASCII com um nome de arquivo "10430P1-US SEQ LIST ST25.ixt", criado em 9 de maio de 2018 e com um tamanho de 7 KB. A listagem de sequências conti- da no presente documento formatada em ASCII faz parte do relatório descritivo e é incorporada ao presente documento por referência na sua totalidade.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0004] O desenvolvimento de uma formulação líquida terapeutica-
mente útil requer uma combinação de ingredientes, em quantidades diferentes, para fornecer um veículo de entrega funcional e estável pa- ra um fármaco de interesse. Isso é particularmente verdadeiro quando o fármaco é uma proteína e, além disso, um anticorpo. As formulações de anticorpos há muito apresentam desafios para os desenvolvedores e fabricantes de fármacos, pois a atividade e a administração do anti- corpo normalmente requerem uma potência farmaceuticamente acei- tável, osmolalidade, estabilidade da proteína, viscosidade e pH ade- quado. Esses desafios são exacerbados quando o anticorpo está em concentrações mais elevadas na formulação, por exemplo, além de 20 a 40 mg/ml, a concentração da maioria dos anticorpos vendidos far- maceuticamente.
[0005] As formulações de anticorpos de concentração mais alta permitem tempos de injeção mais curtos, volumes de injeção menores, frequência mais baixa de administração de anticorpos e utilidade de fabricação e armazenamento mais eficiente. No entanto, como obser- vado acima, quanto mais alta a concentração de anticorpo ou proteína, mais difícil é manter a atividade adequada e os parâmetros de entrega para a formulação. Em particular, as formulações de proteína e anti- corpo de alta concentração muitas vezes lutam com agregação e vis- cosidade de proteína aumentadas, o que resulta em menor potência geral de anticorpo ou proteína e menor fabricação e menor estabilida- de de armazenamento. Devido aos problemas relacionados a proteí- nas de alta concentração ou formulações de anticorpos, poucas des- sas formulações farmaceuticamente aceitáveis foram desenvolvidas. Há uma necessidade na técnica de preparar formulações de alta con- centração, alta estabilidade, anticorpos e proteínas que incluem a po- tência, estabilidade, viscosidade, osmolalidade e pH adequados.
[0006] Uma dessas proteínas que necessita de formulações de alta concentração é a proteína de fusão de receptor do fator de cres-
cimento endotelial vascular (VEGF). As proteínas de fusão de receptor de VEGF são usadas para bloquear a função de VEGF em uma série de formulações oftálmicas, por exemplo, EYLEAG (Regeneron Phar- maceuticals, Inc.). Formulações que contêm proteína de fusão de re- ceptor de VEGF de alta concentração podem permitir tempos de inje- ção ocular mais curtos, volumes de injeção menores, menos injeções possíveis por ciclo de administração e fabricação e armazenamento mais eficientes.
[0007] A presente invenção é direcionada a superar um ou mais dos problemas discutidos acima.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0008] Várias modalidades descritas no presente documento abrangem formulações que contêm proteína de alta concentração (por exemplo, que são adequadas para administração intravítrea) e, em particular, formulações que contêm proteína de fusão de receptor de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) de alta concentração. Formulações que contêm proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração fornecem uma série de benefícios terapêuticos e econômicos, incluindo potência farmaceuticamente aceitável, fabrica- ção de longo prazo e estabilidade de armazenamento, e uma viscosi- dade e pH compatível com injeção ocular. As formulações que contêm proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração também permitem volumes reduzidos de administração ocular, um benefício para evitar efeitos indesejáveis no volume limitado do olho.
[0009] As modalidades no presente documento fornecem formula- ções com uma proteína de fusão de receptor de VEGF, um tampão, um estabilizador térmico, um agente de redução de viscosidade e um tensoativo. Em outras modalidades, as formulações não incluem um agente de redução de viscosidade. As formulações da presente inven- ção têm um pH e viscosidade adequados para injeção e, em particular,
para injeção ocular terapêutica.
[0010] Em uma modalidade da invenção, uma formulação farma- cêutica da presente invenção é fornecida tendo uma proteína de fusão de receptor de VEGF a uma concentração de pelo menos 41 mg/ml ou uma concentração que contém uma dose única de proteína de fusão de receptor de VEGF (que é discutida no presente documento) em menos de cerca de 100 ul, menos de cerca de 50 ul, cerca de 50 ul, cerca de 57 ul, cerca de 60 ul, cerca de 70 ul, ou cerca de 75 ul, um tampão, opcionalmente um estabilizador térmico e/ou um agente de redução de viscosidade, e um tensoativo, em que a formulação tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,8 (por exemplo, 5,8).
[0011] Em uma modalidade da invenção, a concentração da prote- ína de fusão de receptor de VEGF é de cerca de 30 mg/ml, 60 mg/ml, 114 mg/ml, 120 mg/ml ou 140 mg/ml.
[0012] Em uma modalidade da invenção, o tensoativo pode ser um tensoativo não iônico (por exemplo, cerca de 0,02% a cerca de 0,1%; ou cerca de 0,03% (p/v)). Em uma modalidade da invenção, o tensoa- tivo é um tensoativo não iônico com uma porção química de polioxieti- leno, por exemplo, polissorbato 20 (PS20), polissorbato 80 (PS80), po- loxâmero 188, polietilenoglicol 3350 ou misturas dos mesmos.
[0013] Em uma modalidade da invenção, o tampão é um tampão à base de histidina (por exemplo, 10 mM ou 20 mM), tal como histidina, HCI de histidina ou acetato de histidina; um tampão à base de fosfato, como fosfato de sódio (por exemplo, 10 mM); um tampão à base de acetato, como acetato de sódio e ácido acético, ou um tampão à base de citrato, como citrato de sódio ou ácido cítrico. Em uma modalidade da invenção, se o tampão for tampão de fosfato, o pH é de cerca de 5,7 a cerca de 8,0, cerca de 5,8 a cerca de 8,0, cerca de 5,7 a cerca de 7,0, cerca de 5,8 a cerca de 7,0, cerca de 5,9 a cerca de 7,0 ou cerca de 6,0 a cerca de 7,0; se o tampão for tampão de histidina, o pH é de cerca de 5,5 a cerca de 6,5; se o tampão for tampão citrato, o pH é de cerca de 3,0 a cerca de 6,2 ou cerca de 5,0 a cerca de 6,0; e se o tampão é tampão acetato, o pH é de cerca de 3,7 a cerca de 5,6 ou cerca de 5,0 a cerca de 6,0.
[0014] Em uma modalidade da invenção, o estabilizador térmico é um açúcar, como a sacarose (por exemplo, cerca de 2,5%, 5% ou 8%, 10% ou 20% (p/v), por exemplo, cerca de 2 a 20%), manitol, sorbitol ou trealose; L-prolina (por exemplo, cerca de 2%, 3% ou 4% (p/v)); gli- cina (por exemplo, cerca de 50 mM), glicerol, taurina (por exemplo, cerca de 50 mM) ou ácido propanossulfônico (por exemplo, cerca de 50 mM) ou qualquer combinação dos anteriores.
[0015] Em algumas modalidades da invenção, as formulações farmacêuticas da presente invenção incluem um agente de redução de viscosidade, por exemplo, cloridrato de arginina (por exemplo, mono- cloridrato de L-arginina) (por exemplo, 50 mM), lisina, cloreto de sódio (por exemplo, 40 mM ou 50 mM) ou cloreto de magnésio. Alternativa- mente, em outras modalidades, as formulações da presente invenção excluem especificamente substancialmente todos, senão todos, os agentes de redução de viscosidade.
[0016] Em uma modalidade da invenção, as formulações farma- cêuticas da presente invenção compreendem, consistem em ou con- sistem essencialmente nos constituintes em qualquer uma das formu- lações A-KKKK conforme estabelecido no presente documento.
[0017] Em aspectos aqui, as formulações farmacêuticas da pre- sente invenção podem incluir uma proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept) a uma concentração de cerca de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml, de cerca de 80 mg/ml a cerca 275 mg/ml, cerca de 140 mg/ml a cerca de 150 mg/ml, cerca de 140 mg/ml a cerca de 159 ou 160 mg/ml; incluindo cerca de 60 mg/ml, cerca de 80 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 113,3 mg/ml, cerca de 114,3 mg/ml, cerca de 120 mg/ml, cerca de 133,3 mg/ml, cerca de 140 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou cerca de 250 mg/ml. Em uma modalidade da invenção, a formulação compreende cerca de 40 mg/ml da proteína de fusão de receptor de VEGF.
[0018] Alguns aspectos das formulações farmacêuticas da presen- te invenção incluem um estabilizador térmico a uma concentração de cerca de 2% (p/v) a cerca de 9% (p/v) ou de cerca de 4% (p/v) a cerca de 9% (p/v), com a condição de que quando o estabilizador térmico é taurina ou ácido propanossulfônico, o estabilizador está a uma concen- tração de cerca de 25 mM a cerca de 100 mM, o tensoativo está a uma concentração de cerca de 0,02% (p/v) a cerca de 0,1% (p/v) (por exemplo, cerca de 0,03%), e o tampão é de cerca de 5 mM a cerca de MM.
[0019] A proteína de fusão de receptor de VEGF pode, por exem- plo: e ser codificado pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1 ou nucleotídeos 79-1374 ou 79-1371 de SEQ ID NO: 1; e compreender aminoácidos de SEQ ID NO: 2 ou aminoáci- dos 27-457 ou 27-458 de SEQ ID NO: 2; e compreender: (1) um componente VEGFR1 que compreende os aminoá- cidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2; (2) um componente VEGFR2 que compreende os aminoá- cidos 130 a 231 de SEQ ID NO: 2; (3) um componente de multimerização ("FcAC1 (a)") que compreende os aminoácidos 232 a 457 ou 458 de SEQ ID NO: 2 (os aminoácidos de terminal C de SEQ ID NO: 2, ou seja, K458, podem ou não ser incluídos nas proteínas de fusão de receptor de VEGF). Ob- serve que os aminoácidos 1 a 26 de SEQ ID NO: 2 são a sequência de sinal;
7I97 e compreender um domínio 2 semelhante a imunoglobina (lg) de um primeiro receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR1I) e o domínio 3 de lg de um segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2), opcionalmente incluindo ainda um domínio 4 de Ig do se- gundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2) e um componente de multimerização (por exemplo, domínio Fc de IgG);
e ser conbercept; ou e ser aflibercept.
ARMADILHA DE VEGF. atggtcagctactagggacaceggggtectactatacacactacteagetatetacttcte acaggatctagttccggaagtgataccggtagacctttegtagagatgtacagtgaaatc ccegaaattatacacatgactgaaggaagggagctegtcattecctgcegagttacatea cectaacatcactgttactttaaaaaagtttecactigacactttgatccctgatggaaaa cgcataatctgggacagtagaaagggcttcatcatateaaatgcaacgtacaaagaaata gggcttctgacctataaagcaacagtcaatgggacatttgtataagacaaactatcteaca catcgacaaaccaatacaatcatagatgtggttctgagtccgteteatagaattgaacta tctattagagaaaagocttatettaaattgtacagcaagaactgaactaaatgtaggagatt gacttcaactgggaatacccttcttegaagcatcagcataagaaactigtaaaccgagac ctaaaaacccagtctgggagtgagatgaagaaatttttgagcaccttaactatagatggt gtaaccceggagtgaccaaggattgtacacctgtgcagcatccagtgggctgatgaccaag aagaacagcacatttgtcagggtecatgaaaaggacaaaactcacacatgcccacegitge ccagcacctgaactectagggggacegteagtettectetteccecccaaaacecaaggac acccteatgatcteceggacecetgaggteacatgcatagtagtiggacgtgagccacgaa gaccctgaggtcaagttcaactggtacgtagacggcgtagaggtacataatgccaagaca aagcegegggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagegtecteacegtecta caccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtcetecaacaaagecetecea gcccecccategagaaaaccatctecaaagecaaagggcageceegagaaccacaggtgtac acccetgeceecateecegggatgagctgaccaagaaccaggteagectgacctgcetagte aaaggcttctateccagegacategecgtagagtaggagagcaataggcagecggagaac aactacaagaccacgcctecegtgetagactecegacggcetecttettcctetacagcaag ctcacegtggacaagagcaggtageagcaggggaacgtcetteteatgctecgatgatgcat gaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctetecetgtetecgggtaaatga (SEQ ID NO: 1)
MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTE GRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKE IGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVL NCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTASGSEMKKFLS TLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQAGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 2) AAs 1-26 = Sequência de Sinal AAs 27-129 = FIt1-D2 (VEGFR1-D2) AAs 130-231 = FIkK1-D3 (VEGFR2-D3) AAs 232-458 = FCAC1
[0020] Em outra modalidade da presente invenção, é fornecido um recipiente que contém uma solução aquosa de cerca de 5 mM a cerca de 25 mM de tampão farmaceuticamente aceitável, de cerca de 4% (p/v) a cerca de 9% (p/v) de um estabilizador térmico farmaceutica- mente aceitável, de cerca de 0,02% (p/v) a cerca de 0,1% (p/v) de um tensoativo farmaceuticamente aceitável, e de cerca de 41 mg/ml a cer- ca de 275 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF. Quando o estabilizador térmico inclui taurina ou ácido propanossulfônico, a tauri- na ou ácido propanossulfônico está em uma concentração de cerca de mM a cerca de 100 mM. A solução aquosa tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,8 e pode ser de cerca de 5,5 a cerca de 6,2 (por exemplo, 5,8). Em alguns aspectos, o recipiente é um frasco ou serin-
ga. Em outros aspectos, a solução aquosa não inclui um sal inorgâni- co. Quando o estabilizador térmico é um açúcar, pode ser sacarose, manitol, sorbitol ou trealose e pode estar presente entre cerca de 4% (p/v) e 9% (p/v); o tensoativo pode ser um tensoativo não iônico e po- de incluir uma porção química de polioxietileno, como polissorbato 20, polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350, a uma con- centração de cerca de 0,02% a cerca de 0,1% em peso por volume (p/v), e mais tipicamente, 0,02% a cerca de 0,04% (p/v). Em uma mo- dalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF é co- dificada pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1 ou nucleo- tídeos 79-1374 ou 79-1371 de SEQ ID NO: 1; compreende aminoáci- dos de SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 27-457 ou 27-458 de SEQ ID NO: 2; compreende (1) um componente VEGFR1 que compreende os aminoácidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2; (2) um componente VEGFR2 que compreende os aminoácidos 130 a 231 de SEQ ID NO: 2; e (3) um componente de multimerização ("FcAC1(a)") que compreende os aminoácidos 232 a 457 de SEQ ID NO: 2 (os aminoácidos de terminal C de SEQ ID NO: 2, ou seja, K458, podem ou não ser incluído nas prote- íÍnas de fusão do receptor de VEGF); compreende um domínio 2 seme- lhante a imunoglobina (lg) de um primeiro receptor de VEGF (por exem- plo, VEGFR1) e domínio 3 de lg de um segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2), opcionalmente incluindo ainda um domínio 4 de lg do segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2) e um componen- te de multimerização (por exemplo, domínio Fc de IgG); é conbercept ou é aflibercept.
[0021] Em ainda outras modalidades, as formulações farmacêuti- cas da presente invenção são fornecidas tendo uma proteína de fusão de receptor de VEGF em um veículo aquoso, em que o veículo aquoso tem uma viscosidade de cerca de 0,01 Pa:s (10 cP) a cerca de 0,015 Pas (15 cP) a 20 ºC, mais tipicamente cerca de 0,01 Pa:s (10 cP) a cerca de 0,013 Pa:s (13 cP) a 20 ºC, e mais tipicamente de cerca de 0,011 Pa:s (11 cP) a cerca de 0,012 Pa':s (12 cP) a 20 ºC (por exem- plo, cerca de 0,006, 0,0073, 0,0115 ou 0,012 Pas (6,0, 7,3, 11,5 ou 12,0 cP) a 20 ºC). Em uma modalidade da invenção, a viscosidade é de cerca de 0,012 Pa:s (12 cP) a cerca de 0,015 Pa:s (15 cP) a 20 ºC.
O pH da formulação pode ser de cerca de 5,8 a cerca de 6,5 (por exemplo, cerca de 5,8). Em alguns casos, as formulações não incluem um agente de redução de viscosidade, por exemplo, não incluem clori- drato de arginina, lisina, cloreto de sódio ou cloreto de magnésio.
Em outros casos, as formulações incluem cloridrato de histidina 10 mM ou acetato de histidina 10 mM.
O açúcar pode ser sacarose, manitol, sor- bitol ou trealose e pode estar presente entre cerca de 4% (p/v) e 9% (p/v) (por exemplo, cerca de 5%); o tensoativo pode ser um tensoativo não iônico e pode incluir uma porção química de polioxietileno, tal co- mo polissorbato 20, polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenogli- col 3350, a uma concentração de cerca de 0,02% a cerca de 0,1% em peso por volume (p/v), e mais tipicamente, 0,02% a cerca de 0,04% (p/v) (por exemplo, 0,03%). Além disso, a formulação pode incluir adi- cionalmente um estabilizador térmico selecionado a partir de taurina ou ácido propanossulfônico a uma concentração de entre cerca de 25 MM a cerca de 100 mM e, mais tipicamente, cerca de 50 mM a cerca de 70 mM.
Em uma modalidade da invenção, uma formulação com- preende proteína de fusão de receptor de VEGF, tal como aflibercept, (por exemplo, a uma concentração de cerca de 41-275 mg/ml, cerca de 50 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 115 mg/ml, cerca de 125 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou qualquer uma das "altas" concentrações discutidas no presente documento), cerca de 10 mM de tampão à base de histidina, sacarose a cerca de 5% (p/v), cer- ca de 0,03% (p/v) de tensoativo não iônico, tal como polissorbato, por exemplo, polissorbato 20, e cerca de 50 mM de arginina, L-arginina ou monocloridrato de L-arginina, com um pH de cerca de 5,8. Em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF é codificada pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1 ou nu- cleotídeos 79-1374 ou 79-1371 de SEQ ID NO: 1; compreende amino- ácidos de SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 27-457 ou 27-458 de SEQ ID NO: 2; compreende (1) um componente VEGFR1 que compreende os aminoácidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2; (2) um componente VEGFR2 que compreende os aminoácidos 130 a 231 de SEQ ID NO: 2; e (3) um componente de multimerização ("FcAC1(a)") que compreende os aminoácidos 232 a 457 de SEQ ID NO: 2 (os aminoácidos de terminal C de SEQ ID NO: 2, ou seja, K458, podem ou não ser incluído nas proteínas de fusão do receptor de VEGF); compreende um domínio 2 semelhante a imunoglobina (lg) de um primeiro receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR1) e domínio 3 de lg de um segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2), opcionalmente incluindo ainda um domínio 4 de Ig do segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2) e um componente de multimerização (por exemplo, domínio Fc de IgG); é conbercept ou é aflibercept.
[0022] Em ainda outra modalidade, é fornecida uma formulação farmacêutica da presente invenção que inclui uma proteína de fusão de receptor de VEGF a uma concentração de cerca de 80 mg/ml a cerca de 275 mg/ml em um tampão farmaceuticamente aceitável. Em alguns casos, as formulações farmacêuticas estáveis também podem incluir taurina ou ácido propanossulfônico. As formulações podem ser estáveis a uma temperatura de cerca de 2 ºC a cerca de 8 ºC durante cerca de 24 a 36 meses. Em alguns casos, a proteína de fusão de re- ceptor de VEGF mostra menos de cerca de 5% de aumento em espé- cies de alto peso molecular e, mais tipicamente, menos de cerca de 4,5% de aumento em espécies de alto peso molecular, menos de cer- ca de 4,0% de aumento em espécies de alto peso molecular, menos de cerca de 3,5% de aumento em espécies de alto peso molecular, menos de cerca de 3,0% de aumento em espécies de alto peso mole- cular, menos de cerca de 2,5% de aumento em espécies de alto peso molecular, menos de cerca de 2,0% de aumento em espécies de alto peso molecular e/ou menos do que cerca de 1,5% de aumento em es- pécies de alto peso molecular, quando armazenadas a essas tempera- turas e por esse período de tempo. Em outros casos, a proteína de fusão de receptor de VEGF mostra menos de 2,0% a 3,0% de aumen- to em espécies de alto peso molecular quando as formulações são armazenadas a essas temperaturas e por este período de tempo.
[0023] As modalidades no presente documento também podem incluir formulações farmacêuticas da presente invenção que incluem aflibercept, uma solução de pH tamponado, um açúcar e um tensoati- vo, em que o aflibercept está em uma concentração de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml. Alternativamente, as modalidades podem ser formulações farmacêuticas líquidas estáveis que incluem conbercept, uma solução tamponada de pH, um açúcar e um tensoativo, onde o conbercept está em uma concentração de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml. As formulações farmacêuticas líquidas estáveis também podem incluir taurina ou ácido propanossulfônico. Em alguns aspectos, o afli- bercept ou conbercept está em uma concentração de 80 mg/ml ou 150 mg/ml. Em outros aspectos, as formulações não incluem um sal inor- gânico, cloreto de sódio, por exemplo.
[0024] Algumas modalidades são direcionadas a seringas estéreis, de modo que as seringas sejam pré-preenchidas com uma solução aquosa com 80 mg/ml de aflibercept, conbercept, cloridrato de histidi- na 10 mM, acetato de histidina ou fosfato de sódio, sacarose a 5% (p/v), manitol, sorbitol ou trealose, polissorbato 20 a 0,03% (p/v), polis- sorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350 e cloreto de sódio a 40 mM. Aspectos no presente documento incluem a adição adicional de cerca de 25 mM a cerca de 100 mM, e mais tipicamente cerca de 50 mM a cerca de 70 mM, de taurina ou ácido propanossulfônico.
Em alguns aspectos, as seringas são pré-preenchidas com uma solução aquosa com 80 mg/ml de aflibercept, conbercept, HCI de histidina a 10 MM, acetato de histidina ou fosfato de sódio, sacarose a 8% (p/v), ma- nitol, sorbitol ou trealose, e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350. Aspectos no presente documento incluem a adição adicional de cerca de 25 mM a cerca de 100 mM, e mais tipicamente cerca de 50 mM a cerca de 70 mM, de taurina ou ácido propanossulfônico.
Em ainda outros aspectos, as se- ringas são pré-preenchidas com uma solução aquosa tendo 150 mg/ml de aflibercept, conbercept, cloridrato de histidina 10 mM, acetato de histidina ou fosfato de sódio, sacarose a 5% (p/v), manitol, sorbitol ou trealose, polissorbato 20 a 0,03% (p/v), polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350 e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de cerca de 6,2. Aspectos no presente documento podem incluir a adi- ção adicional de ácido taurina ou propanossulfônico.
Em ainda outros aspectos, as seringas são pré-preenchidas com uma solução aquosa com 150 mg/ml de aflibercept, conbercept, cloridrato de histidina 10 MM, acetato de histidina ou fosfato de sódio, sacarose a 8% (p/v), ma- nitol, sorbitol ou trealose e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350, com um pH de cerca de 6,2 e a solução aquosa não inclui um sal inorgânico.
Os aspectos po- dem incluir ainda cerca de 25 mM a cerca de 100 mM e, mais tipica- mente, cerca de 50 mM a cerca de 70 mM, de taurina ou ácido propa- nossulfônico.
Ainda em outros aspectos, as seringas são pré-preenchi- das com uma solução aquosa com 150 mg/ml de aflibercept ou con- bercept, 10 mM de acetato de sódio ou ácido acético, 5% (p/v) de gli- cerol e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350 e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de cerca de 6,2. Ainda em outros aspectos, as seringas são pré-preen- chidas com uma solução aquosa com 150 mg/ml de aflibercept ou conbercept, 10 mM de acetato de sódio ou ácido acético, 8% (p/v) de glicerol e 0,03% (p/v) polissorbato 20, polissorbato 80, poloxâmero 188 ou polietilenoglicol 3350 e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de cerca de 6,2.
[0025] A presente invenção também fornece um método para fazer qualquer formulação estabelecida no presente documento que com- preende a etapa de combinar cada componente da formulação em uma única composição. Tal método pode incluir a etapa de adicionar a formulação resultante a um frasco ou dispositivo de injeção. Qualquer composição que seja o produto de tal método também é parte da pre- sente invenção. Por exemplo, as modalidades no presente documento também incluem métodos para preparar uma formulação pela combi- nação de um tampão à base de histidina, à base de citrato, à base de acetato ou à base de fosfato, com sacarose, polissorbato 20 e uma proteína de fusão de receptor de VEGF; e, opcionalmente, um ou mais componentes adicionais, por exemplo, conforme discutido no presente documento. Em alguns casos, a formulação é preparada para incluir também taurina ou ácido propanossulfônico, mas onde não inclui tau- rina ou ácido propanossulfônico, também pode não incluir um sal inor- gânico. Em aspectos no presente documento, a sacarose está em um peso por volume de cerca de 4% a cerca de 10%, o polissorbato 20 tem um peso por volume de cerca de 0,02% a cerca de 0,1% e a pro- teína de fusão de receptor está em uma concentração de desde cerca de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml. Quando a formulação inclui taurina ou ácido propanossulfônico, está presente, por exemplo, em cerca de mM a cerca de 100 mM, mas também pode ser incluído em 50 mM a 70 MM. O método pode incluir carregar um volume predeterminado da formulação preparada em uma seringa estéril, de modo que o vo-
lume tenha uma dose de 0,1 mg a 10 mg da proteína de fusão de re- ceptor de VEGF.
[0026] A presente invenção também fornece um método para ad- ministrar uma formulação da presente invenção a um indivíduo (por exemplo, um humano), compreendendo a injeção intraocular (por exemplo, injeção intravítrea) da formulação no olho do indivíduo. À presente invenção também fornece um método para administrar uma formulação da presente invenção a um indivíduo (por exemplo, um ser humano) que compreende implantar um implante intravítreo que con- tém uma formulação da presente invenção no vítreo do indivíduo.
[0027] As modalidades no presente documento também incluem métodos para tratar um distúrbio ocular angiogênico, por exemplo, de- generação macular relacionada à idade (úmida), edema macular após oclusão da veia da retina, oclusão da veia da retina (RVO), oclusão da veia central da retina (CRVO) oclusão de ramo da veia da retina (BRVO), edema macular diabético (DME), neovascularização coroidal (CNV), neovascularização da íris, glaucoma neovascular, fibrose pós- cirúrgica em glaucoma, vitreorretinopatia proliferativa (PVR), neovas- cularização do disco óptico, neovascularização da córnea, neovascula- rização da retina, pteryvium vítreo, retinopatia vascular ou retinopatia diabética (por exemplo, retinopatia diabética não proliferativa e/ou reti- nopatia diabética proliferativa) em um indivíduo em necessidade do mesmo por injeção intraocular de pelo menos 2 mg (por exemplo, 4 mg, 6 mg ou 8 mg) de receptor de VEGF proteína de fusão (por exem- plo, aflibercept ou conbercept) no olho de um indivíduo em necessida- de do mesmo, por exemplo, qualquer formulação apresentada no pre- sente documento. Em uma modalidade da invenção, o volume de inje- ção é de 100 microlitros ou menos (por exemplo, 100 microlitros, 50 microlitros ou 57 microlitros). O método compreende uma injeção in- travítrea de uma solução aquosa pré-misturada com uma proteína de fusão de receptor de VEGF a uma concentração de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml, um açúcar farmaceuticamente aceitável, um tampão farmaceuticamente aceitável e um tensoativo farmaceuticamente acei- tável. Os métodos de tratamento com a solução aquosa pré-misturada não requerem diluição. Em aspectos no presente documento, a solu- ção aquosa pré-misturada tem um pH de cerca de 6,0 e cerca de 6,5 € tem uma viscosidade entre cerca de 10 cP e 13 cP.
[0028] Em aspectos do método de tratamento, a proteína de fusão de receptor de VEGF compreende VEGFR1IR2-FcAC1 (a) codificado pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1, aminoácidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2, um componente VEGFR2 que compreende aminoácidos 130 a 231 de SEQ ID NO: 2, ou um componente de mul- timerização que compreende os aminoácidos 232 a 457 de SEQ ID NO: 2, ou qualquer combinação dos mesmos. Em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF é aflibercept ou conbercept.
[0029] Outras modalidades em conformidade com a divulgação no presente documento se tornarão evidentes a partir de uma revisão da descrição detalhada a seguir.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0030] O acima e outros aspectos, características e vantagens das modalidades divulgadas no presente documento se tornarão mais evi- dentes para aqueles versados na técnica com referência aos dese- nhos anexos.
[0031] A Figura 1A é um gráfico que determina a estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF (aflibercept) em quatro formu- lações diferentes (B, H, D e G) ao longo de 36 meses a 2 ºCa8ºC.A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando cromatografia líquida de ultra-desempenho de exclusão de ta- manho (SE-UPLC) para identificar a formação de espécies de alto pe-
so molecular (HMW) (um sinal de degradação da proteína).
[0032] A Figura 1B também é um gráfico que determina a estabili- dade da proteína de fusão de receptor de VEGF (aflibercept) em qua- tro formulações (B, H, D e G) ao longo de 36 meses a 2ºCa8ºC.A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando SE-UPLC para identificar a porcentagem das principais espé- cies em cada formulação.
[0033] A Figura 1C é um gráfico de barras que mostra a formação de variantes de carga de proteína de fusão de receptor de VEGF em quatro formulações (B, H, D e G) ao longo de 36 meses em 2 ºCaB8 ºC. O nível de espécies ácidas foi testado na fabricação (0,0), 12 me- ses, 24 meses e 36 meses usando focagem isoelétrica capilar (iCIEF).
[0034] A Figura 1D é um gráfico de barras que mostra a formação de variantes de carga de proteína de fusão de receptor de VEGF em quatro formulações (B, H, D e G) ao longo de 36 meses em 2 ºCaB8 ºC. A identificação das espécies principais foi testada na fabricação (0,0), 12 meses, 24 meses e 36 meses usando iCIEF.
[0035] A Figura 2A é um gráfico que mostra a estabilidade da pro- teína de fusão de receptor de VEGF 150 mg/ml (aflibercept) em um fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v) formulação de pH 6,2 com e sem monocloridrato de L- arginina ao longo de 28 dias a 37 “ºC. A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando SE-UPLC para identifi- car a formação de espécies HMW.
[0036] A Figura 2B é um gráfico que mostra a estabilidade da pro- teína de fusão de receptor de VEGF a 150 mg/ml em um fosfato de sódio a 10 mM, 8% de sacarose (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v) formulação pH 6,2 com e sem L-arginina monocloridrato ao longo de 28 dias a 37 ºC. A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando SE-UPLC para identificar a porcentagem das principais espécies em cada formulação.
[0037] A Figura 3A é um gráfico de barras que mostra a viscosi- dade de formulações tamponadas com fosfato de sódio a 10 mM que têm 155 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF e nenhum sal, arginina a 100 mM, arginina a 200 mM, lisina a 50 MM, lisina a 200 MM, cloreto de sódio a 50 mM ou cloreto de sódio a 100 mM. A visco- sidade foi medida em Pas (cP) em 20 ºC.
[0038] A Figura 3B é um gráfico de barras que mostra a viscosi- dade de formulações tamponadas com histidina a 10 mM que têm 155 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF e nenhum sal, argi- nina a 100 mM, arginina a 200 mM, lisina a 50 mM, lisina a 200 mM, cloreto de sódio a 50 mM ou cloreto de sódio a 100 mM. A viscosidade foi medida em Pas (cP) em 20 ºC.
[0039] A Figura 3C é um gráfico que mostra a viscosidade de vá- rias concentrações da proteína de fusão de receptor de VEGF sob di- ferentes condições de formulação (com ou sem cloridrato de arginina a 50 mM). A viscosidade foi medida em Pas (cP) em 20 ºC.
[0040] A Figura 4A é um gráfico que mostra 150 mg/ml de estabi- lidade da proteína de fusão de receptor de VEGF em fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), pH 6,2 com e sem monocloridrato de L-arginina a 50 mM durante 12 meses a ºC. A proteína de fusão de receptor de VEGF estava em 150 mg/ml. A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando SE-UPLC para identificar a formação de espécies HMW.
[0041] A Figura 4B é um gráfico que mostra 150 mg/ml de estabi- lidade da proteína de fusão de receptor de VEGF em fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), pH 6,2 com e sem monocloridrato de L-arginina a 50 mM durante 12 meses a 5 ºC. A proteína de fusão de receptor de VEGF estava em 150 mg/ml. A estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF foi testada usando SE-UPLC para identificar a porcentagem das principais espé- cies em cada formulação.
[0042] A Figura 5 é um gráfico que mostra a viscosidade das for- mulações sob duas condições de tampão a 20 ºC, tampão fosfato a 10 mM ou tampão histidina a 10 mM. A concentração da proteína de fu- são de receptor de VEGF varia de 10 mg/ml a 170 mg/ml. A viscosida- de foi medida em mPa-S.
[0043] A Figura 6 mostra uma tela de dispersão dinâmica de luz para uma série de diferentes condições de formulação, em que cada uma tem de 2 a 10 mg/ml de proteína. O parâmetro de interação de difusão indicou que a taurina e o PSA (ácido propanossulfônico) me- lhoraram o Kd.
[0044] A Figura 7 é um gráfico que monitora a porcentagem de espécies de alto peso molecular (HMW) nas formulações F1-F9 (for- mulações WW-EEE) ao longo do tempo, conforme medido por croma- tografia líquida de ultra-desempenho de exclusão de tamanho (SE- UPLC) após armazenamento a 5 ºC durante 6 meses. As Formulações F1-F9 são apresentadas na Tabela 7-1 no presente documento.
[0045] A Figura 8 (A-B) mede a porcentagem de espécies de alto peso molecular, por SE-UPLC, após armazenamento a 5 ºC durante 3 meses (A) ou incubação a 37 ºC durante 28 dias (B). As formulações F1-F4 (EEE, SSS, CCC (140 mg/ml) e TTT) são apresentadas na Ta- bela 8-1 abaixo.
[0046] A Figura 9 mostra a viscosidade (Pas (cp)) para as Formu- lações F1-F12, a 20 ºC, no ponto de tempo inicial. As Formulações F1- F12 são apresentadas na Tabela A abaixo. TABELA A. FORMULAÇÕES F1-F12.
H5,8 IPolissorbato 20 a 0,03% arginina a 50 mM |pH 5,8 |IPolissorbato 20 a 0,03% |cloridrato de arginina a 50 mM
[0047] A Figura 10 mostra a osmolalidade (mmol/Kg) das Formu- lações F1-F12 (apresentadas na Tabela A no presente documento).
[0048] A Figura 11 (A-B) mede a porcentagem de espécies de alto peso molecular nas formulações F1-F6 (Formulações GGG, HHH, II, JJJ, LLL e KKK) ao longo do tempo, por SE-UPLC, após armaze- namento a 37 ºC por até 28 dias (A) ou 5 ºC por até 3 meses (B) ao longo do tempo.
[0049] A Figura 12 mostra a dispersão dinâmica de luz (coeficien- te de difusão (cm?/segundo), raio (nm) e % de Pd) no ponto de tempo inicial das formulações mostradas na Tabela 9-3 (GGG-RRR).
[0050] A Figura 13 mostra as imagens de FA e OCT (lente de 30 graus) de linha de base para dois coelhos diferentes (326-OS e 329- OD) antes da administração de aflibercept (OD = oculus dexter (olho direito); OS = oculus sinister (olho esquerdo)). (A) imagem de FA para coelho 326, olho esquerdo; (B) imagem de OCT para coelho 326, olho esquerdo; (c) imagem de FA para coelho 329, olho direito; (D) imagem de OCT para o coelho 329, olho direito.
[0051] A Figura 14 (A-F) mostra um curso de tempo de imagens de FA de coelho nos dias 1 (A), 7 (B) e 14 (C) e a OCT nos dias 1 (D), 7 (E) e 14 (F) para um coelho (326-OS) administrou a formulação tam- pão de histidina (lente de 30 graus) (7 mg/olho).
[0052] A Figura 15 (A-H) mostra um curso de tempo de imagens de FA de coelho em 3 semanas (A), 4 semanas (B), 7 semanas (C) e 8 semanas (D); e a OCT em 3 semanas (E), 4 semanas (F), 7 semanas (G) e 8 semanas (H) para um coelho (326-OS) administrou a formula- ção tampão de histidina (lente de 55 graus) (7 mg/olho).
[0053] A Figura 16 (A-F) mostra um curso de tempo de imagens de FA de coelho no dia 1 (A), semana 1 (B) e semana 2 (C) e a OCT no dia 1 (D), semana 1 (E) e semana 2 (F) para um coelho (329-OS) administrou a formulação de tampão fosfato (lente de 30 graus) (7 mg/olho).
[0054] A Figura 17 (A-H) mostra um curso de tempo de imagens de FA de coelho na semana 3 (A), semana 4 (B), semana 7 (C) e se- mana 8 (D) e a OCT na semana 3 (E), semana 4 (F), semana 7 (G) e semana 8 (H) para um coelho (329-OS) administrou a formulação de tampão fosfato (lente de 55 graus) (7 mg/olho).
[0055] A Figura 18 (A-B) mostra a pureza (porcentagem de espé- cies nativas) (A) e a porcentagem de espécies de alto peso molecular (HMW) (B) em formulações UUU-BBBB ao longo do tempo a 37 “C (até um mês) (ver Tabela 11-1) conforme analisado por SE-UPLC.
[0056] A Figura 19 (A-E) mostra a análise de estabilidade e pure- za de uma formulação com 114,3 mg/ml de armadilha de VEGF (afli- bercept) formulado em histidina a 10 mM, pH 5,8, sacarose a 5%, po- lissorbato 20 a 0,03%, monocloridrato de arginina a 50 mM por deter- minação cromatográfica de exclusão de tamanho da porcentagem de (i) espécies de alto peso molecular (HMW) após incubação a 5 ºC ou 37 ºC por até 2 meses (A) e (ii) espécies principais (pico principal) após incubação a 5 ºC ou 37 ºC por até 2 meses (B); bem como por imagem de microfluxo para determinar a presença de material particu- lado subvisível após incubação a 37 ºC por até 28 dias (C), por análise de obscurecimento por luz de partícula para determinar a presença de material particulado subvisível após incubação a 37 ºC por 28 dias (D), e por determinação microscópica de material particulado subvisível após incubação a 37 ºC por até 28 dias (E).
[0057] A Figura 20 mostra a análise de estabilidade e pureza da formulação CCC, tendo 80, 100, 120 ou 140 mg/ml de aflibercept, por determinação SE-UPLC da porcentagem de espécies de alto peso mo- lecular (HMW) após incubação a 2 a 8 ºC por até a 6 meses (A) ou 37 ºC por até 28 dias (B).
[0058] A Figura 21 mostra a porcentagem de olhos em coelhos testados com supressão completa de vazamento ao longo do tempo, quando administrados 500 microgramas ou 2 mg de aflibercept, ao longo do tempo (teste de Gehan-Breslow-Wilcoxon (P 0,0453)).
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0059] A presente invenção fornece formulações com altas con- centrações de proteínas de fusão do receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), mostrando excelentes propriedades funcionais e de arma- zenamento que foram desenvolvidas apesar de obstáculos técnicos significativos. Por exemplo, um método comum para identificar excipi- entes adequados para uma formulação que inclui um fármaco polipep- tídico (como uma proteína de fusão de receptor de VEGF) é pela ava- liação da estabilidade do polipeptídeo sob condições de estresse ace- lerado, como alta temperatura (por exemplo, 37 ºC). Excipientes, que não são adequados em condições sem estresse (por exemplo, uma temperatura baixa, como 5 ºC), normalmente causarão um efeito inde- sejado, dentro de um curto período de tempo, enquanto sob estresse, por exemplo, agregação de proteínas. Esta abordagem é comum na indústria de biotecnologia e farmacêutica, na medida em que acelera a eliminação de excipientes que provavelmente não estabilizam o produ- to de fármaco. Consulte, por exemplo, Magari, Assessing Shelf Life Using Real-Time and Accelerated Stability Tests, Biopharm Intl. 16(11): 36 a 48 (2003). Em alguns casos, um produto pode ser lança- do com base em dados de estabilidade acelerada, mas isso deve ser feito em paralelo com a análise de vida de prateleira em tempo real (não acelerada). Magari (2003) and FDA, Guidelines for Submitting Documentation for the Stability of Human Drugs and Biologics, Rock- ville, MD (1987). Aqui, no entanto, a 5 ºC, a presença de arginina nas formulações de histidina estava se estabilizando, embora a arginina, ao que parecia, tendesse a diminuir a estabilidade quando sob estres- se de temperatura (37 ºC). Veja a Figura 8 (A-B). Essa propriedade das formulações apresentadas no presente documento teria apresen- tado uma dificuldade técnica para afastar o médico da escolha da ar- ginina; assim, tornando improvável que um médico tivesse escolhido arginina como excipiente. No entanto, as formulações estabelecidas no presente documento resultaram da superação de obstáculos técni- cos como esse para se obter uma formulação com alta estabilidade. À formulação de armadilha de VEGF em tampão de histidina também levou a uma diminuição benéfica na viscosidade em relação à obser- vada com uma formulação de tampão fosfato. Tendo em vista que pe- quenos orifícios de agulha são preferidos para a realização de injeções intravítreas (devido à diminuição do desconforto do paciente e trauma ocular), uma viscosidade relativamente baixa é desejável. Uma formu- lação de viscosidade mais baixa requer menos força para empurrar a formulação através da agulha, tornando assim a injeção da formulação através da agulha mais fácil para o médico assistente. Além disso, as formulações que contêm histidina e arginina foram bem toleradas em olhos de coelho.
[0060] Agora será feita referência em detalhes às modalidades re-
presentativas. Deve ser entendido que as seguintes descrições não se destinam a limitar as modalidades a uma modalidade preferida. Ao contrário, destinam-se a cobrir alternativas, modificações e equivalen- tes que podem ser incluídos dentro do espírito e escopo das modali- dades descritas conforme definido nas reivindicações anexas.
[0061] Exceto se for definido de outro modo, todos os termos téc- nicos e específicos usados no presente documento têm o mesmo sig- nificado que é comumente entendido por uma pessoa de habilidade comum na técnica à qual a presente invenção pertence. Como utiliza- do no presente documento, o termo "cerca de", quando utilizado em referência a um valor numérico particular recitado, significa que o valor pode variar do valor indicado em não mais do que 1%. Por exemplo, como usado no presente documento, a expressão "cerca de 100" inclui 99 e 101 e todos os valores entre (por exemplo, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, etc.).
[0062] Em uma modalidade da invenção, uma formulação farma- cêutica da presente invenção é compatível com USP <789> para inje- ção de pequeno volume (SVP) de soluções oftálmicas, por exemplo, contém menos de cerca de 50 partículas > 10 um de diâmetro por ml; contém menos de cerca de 5 partículas > 25 um de diâmetro por ml; ou contém menos de cerca de 2 partículas > 50 um de diâmetro por ml.
[0063] Observe que, para os propósitos no presente documento, "injeção intravítrea" se refere à injeção no vítreo do olho (próximo à retina na parte posterior do olho). As expressões "adequado para ad- ministração intravítrea", "adequado para injeção intravítrea" e seme- Ihantes significam que a formulação em questão pode ser injetada com segurança no vítreo do olho de um indivíduo sem causar quaisquer reações adversas além daquelas conhecidas por estarem associadas à injeção intravítrea de EYLEA.
[0064] O termo "formulação farmacêutica" no presente documento se refere a formulações incluindo carreadores farmaceuticamente acei- táveis, por exemplo, usados para administrar proteínas de fusão do receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept) a um indi- víduo para uso terapêutico/medicinal.
[0065] O termo "farmaceuticamente aceitável" refere-se a uma formulação que, dentro do escopo do julgamento médico sensato, é adequada para administração ocular.
[0066] O termo "indivíduo" no presente documento se refere a qualquer mamífero (por exemplo, coelho, camundongo, rato ou maca- co) indivíduo, particularmente um humano, por exemplo, para quem o diagnóstico, prognóstico ou terapia é desejado com as formulações como descrito no presente documento.
[0067] O termo formulação "aquosa" refere-se a uma formulação que inclui água.
[0068] O termo "tratar" ou "tratamento" refere-se a uma medida terapêutica que reverte, estabiliza ou elimina uma doença ou distúrbio indesejado (por exemplo, um distúrbio ocular angiogênico ou câncer), por exemplo, causando a regressão, estabilização ou eliminação de um ou mais sintomas ou indícios de tal doença ou distúrbio em qual- quer grau clinicamente mensurável, por exemplo, no que diz respeito a um distúrbio ocular angiogênico, causando uma redução ou manuten- ção da pontuação de gravidade da retinopatia diabética (DRSS), me- lhorando ou mantendo a visão (por exemplo, em melhor acuidade vi- sual corrigida, por exemplo, conforme medido por um aumento nas letras ETDRS), aumentando ou mantendo o campo visual e/ou redu- zindo ou mantendo a espessura retinal central e, com relação ao cân- cer, parando ou revertendo o crescimento, sobrevivência e/ou metás- tase do câncer células no indivíduo. Normalmente, a medida terapêuti- ca é a administração de uma ou mais doses de uma quantidade tera-
peuticamente eficaz da proteína de fusão de receptor de VEGF ao in- divíduo com a doença ou distúrbio.
[0069] "Prevenir" ou "prevenção" refere-se a uma medida profiláti- ca para interromper o desenvolvimento de uma doença ou distúrbio indesejado (por exemplo, um distúrbio ocular angiogênico).
[0070] SE-UPLC pode ser usado na presente invenção para quan- tificar a presença de espécies de alto peso molecular em uma formula- ção. SE se refere a cromatografia de exclusão de tamanho. UPLC re- fere-se a cromatografia líquida de ultra desempenho. Colunas SE ade- quadas, que podem ser usadas em um sistema UPLC, para caracteri- zar tais espécies HMW de proteínas de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept) em uma formulação, são ca- pazes de resolver moléculas na faixa de peso molecular de cerca de
10.000 a 450.000 Daltons. Veja, por exemplo, a coluna ACQUITY UPLC Protein BEH SEC 200À. Em uma modalidade da invenção, duas de tais colunas são conectadas em tandem ao quantificar espécies HMW em uma formulação. UPLC traz melhorias sobre HPLC (croma- tografia líquida de alta performance) em sensibilidade e resolução. UPLC usa instrumentação que opera em altas pressões e usa partícu- las mais finas (normalmente menos de cerca de 2,5 um) do que a usa- da em HPLC. Além disso, as fases móveis UPLC operam em altas ve- locidades lineares do que o HPLC.
[0071] As modalidades no presente documento incluem formula- ções que compreendem uma alta concentração (por exemplo, cerca de 60 mg/ml, cerca de 80 mg/ml, cerca de 90 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 113,3 mg/ml, cerca de 114,3 mg/ml, cerca de 120 mg/ml, cerca de 133,3 mg/ml, cerca de 140 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 200 mg/ml ou cerca de 250 mg/ml) de proteína de fu- são de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept). As formulações adequadas no presente documento incluídas compreen-
dem uma alta concentração de proteína de fusão de receptor de VEGF, um tampão, um estabilizador térmico e um tensoativo. Em al- guns aspectos, uma formulação adequada inclui ainda um agente de redução de viscosidade. Em outros aspectos, a formulação adequada exclui substancialmente todos os agentes de redução de viscosidade. As formulações típicas têm um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,8 (por exemplo, 5,8), mas podem incluir qualquer pH útil para a administra- ção da proteína de fusão de receptor de VEGF ao olho de um indiví- duo.
[0072] A presente invenção inclui formulações que incluem uma proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept) em associação com um ou mais agentes terapêuticos adi- cionais (por exemplo, um inibidor de Ang-2 (por exemplo, um anticorpo anti-ANG2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) ou nesva- cumabe), um ativador de receptor Tie-2, um anticorpo anti-PDGF, re- ceptor de PDGF ou receptor de PDGF beta ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e/ou um antagonista de VEGF adicional, como bevacizumab, ranibizumab, pegaptanibe ou uma forma solúvel de vas- cular humano receptor-3 do fator de crescimento endotelial (VEGFR-3) compreendendo os domínios extracelulares 1-3, expressos como uma proteína de fusão Fc), bem como métodos de prevenção ou tratamen- to compreendendo a administração de tais formulações conforme dis- cutido neste documento. Em uma modalidade da invenção, uma for- mulação da presente invenção inclui uma proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tal como aflibercept, mas exclui qualquer outro agente terapêutico (por exemplo, que é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo).
[0073] O termo "em associação com" indica que uma formulação e um outro agente terapêutico podem ser formulados em uma única composição, por exemplo, para entrega simultânea, ou formulados se-
paradamente em duas ou mais composições (por exemplo, um kit). O outro agente terapêutico pode, ele próprio, ser formulado na sua pró- pria formulação farmacêutica. Cada componente pode ser administra- do a um indivíduo quando o outro componente não for administrado; por exemplo, cada administração pode ser fornecida não simultanea- mente (por exemplo, separadamente ou sequencialmente) em interva- los durante um determinado período de tempo. Além disso, a formula- ção e os agentes terapêuticos adicionais podem ser administrados a um indivíduo pela mesma via ou por uma via diferente.
[0074] Em uma modalidade da invenção, uma formulação da pre- sente invenção inclui qualquer um ou mais de sulfato de sódio (por exemplo, 50 mM); tiocianato de sódio (por exemplo, 50 mM); citrato de sódio (por exemplo, 40 mM); glicina (por exemplo, 50 mM); cloreto de sódio (por exemplo, 50 mM); lisina (por exemplo, 50 mM); aspartato de sódio (por exemplo, 50 mM); e/ou glutamato de sódio (por exemplo, 50 mM). Por exemplo, em uma modalidade, a formulação compreende uma combinação de citrato de sódio (por exemplo, 50 mM) e cloridrato de arginina (por exemplo, 50 mM); glicina (por exemplo, 50 mM) e clo- ridrato de arginina (por exemplo, 50 mM); aspartato de sódio (por exemplo, 50 mM) e cloridrato de arginina (por exemplo, 50 mM); ou glutamato de sódio (por exemplo, 50 mM) e cloridrato de arginina (por exemplo, 50 mM). PROTEÍNAS DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEGF E OUTROS INI-
BIDORES DE VEGF
[0075] Para os fins aqui, uma "proteína de fusão de receptor de VEGF" refere-se a uma molécula que compreende um ou mais recep- tores de VEGF ou domínios dos mesmos, fundidos a outro polipeptí- deo, que interfere na interação entre VEGF e um receptor de VEGF natural, por exemplo, em que dois desses polipeptídeos de fusão es- tão associados formando, assim, um homodímero ou outro multímero.
Essas proteínas de fusão de receptor de VEGF podem ser referidas como "VEGF-Trap" ou "armadilha de VEGF". As proteínas de fusão de receptor de VEGF no contexto da presente divulgação que se enqua- dram nesta definição incluem, polipeptídeos quiméricos que compre- endem dois ou mais domínios semelhantes a imunoglobulina (lg) de um receptor de VEGF, como VEGFR1 (também conhecido como Flt1) e/ou VEGFR2 (também conhecido como FIk1 ou KDR), e também po- de conter um domínio de multimerização (por exemplo, um domínio Fc).
[0076] Uma proteína de fusão de receptor de VEGF exemplar é uma molécula referida como VEGF1R2-FcAC1(a) que é codificada pe- la sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1 ou nucleotídeos 79- 1374 ou 79-1371 da mesma.
[0077] VEGF1R2-FcAC1(a) compreende três componentes: (1) um componente VEGFR1 que compreende os aminoá- cidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2; (2) um componente VEGFR2 que compreende os aminoá- cidos 130 a 231 de SEQID NO: 2; e (3) um componente de multimerização ("FcAC1(a)") que compreende os aminoácidos 232 a 457 de SEQ ID NO: 2 (os aminoá- cidos de terminal C de SEQ ID NO: 2, ou seja, K458, podem ou não ser incluídos nas proteínas de fusão do receptor de VEGF, ver Patente No. U.S. 7.396.664 ou 7.354.579, incorporada no presente documento para todos os efeitos). Observe que os aminoácidos 1 a 26 de SEQ ID NO: 2 são a sequência de sinal.
[0078] Em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF compreende os aminoácidos 27-458 ou 27-457 de SEQ ID NO: 2.
[0079] Em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF compreende
(1) um domínio 2 semelhante a imunoglobina (Ig) de um primeiro receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR1), e (2) um domínio 3 de lg de um segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2), (3) e, opcionalmente, incluindo ainda um domínio 4 de Ig do segundo receptor de VEGF (por exemplo, VEGFR2) e (4) um componente de multimerização (por exemplo, domí- nio Fc de IgG).
[0080] Por exemplo, em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF tem o seguinte arranjo dos ditos domí- nios: * [Domínio 2 de VEGFR1 Igl-[domínio 3 de VEGFR?2 Ig]- [MC] (por exemplo, um homodímero do mesmo) ou * [Domínio 2 de VEGFR1 Igl-[domínio 3 de VEGFR?2 Ig]- [domínio 4 de VEGFR2 Igl-[MC] (por exemplo, um homodímero do mesmo).
[0081] Em uma modalidade da invenção, a proteína de fusão de receptor de VEGF é uma mini-armadilha de VEGF que é uma molécu- la de armadilha de VEGF com um componente de multimerização truncado (por exemplo, Fc), por exemplo, em que a mini-armadilha ainda inclui uma região de dobradiça Fc. Ver, por exemplo, VWOZ2005/00895 ou Patente No. U.S. 7.396.664.
[0082] Observe que a presente divulgação também inclui, dentro de seu escopo, formulações de alta concentração incluindo, em vez de proteínas de fusão de receptor de VEGF, moléculas de ligação de VEGF e anticorpos anti-VEGF e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, e bevacizumabe (por exemplo, a uma concentração de cer- ca de 80 a 90 ou 88 mg/ml), e ranibizumabe (por exemplo, a uma concentração de cerca de 20 a 40 mg/ml, por exemplo, 21 a 35, 21 ou 35 mg/ml), * um aptâmero anti-VEGF, como pegaptanibe (por exem- plo, pegaptanibe sódico), * um anticorpo anti-VEGF de cadeia única (por exemplo, VL-V4), tal como brolucizumabe (por exemplo, em uma concentração - *.-*--------- de cerca de 200 a 400 ou 200, 210, 400 ou 420 mg/ml), e um DARPin anti-VEGF, como o Abicipar Pegol DARPin (por exemplo, a uma concentração de cerca de 70 a 140, 70 ou 140 mg/ml), ou e um anticorpo biespecífico anti-VEGF, por exemplo, que também se liga a ANG2, tal como RG7716 (por exemplo, a uma con- centração de cerca de 100 a 400, 100, 105, 400 ou 420 mg/ml).
[0083] A fim de minimizar a repetitividade das modalidades discu- tidas no presente documento, é contemplado que o escopo da presen- te invenção inclui modalidades em que qualquer uma das formulações discutidas no presente documento inclui, no lugar de uma proteína de fusão de receptor de VEGF, um anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou outra molécula de ligação de VEGF como discutida no presente documento (por exemplo, substituída por um DARPIin anti- VEGF) em qualquer uma das concentrações discutidas no presente documento. Por exemplo, a presente invenção inclui uma formulação com 35 ou 80 mg/ml de ranibizumab, um tampão, um estabilizador térmico, um agente de redução de viscosidade e um tensoativo.
[0084] Os DARPins são proteínas de repetição projetadas de Ankyrin. Os DARPins geralmente contêm três a quatro repetições compactadas de aproximadamente 33 resíduos de aminoácidos, com cada repetição que contém uma volta B e duas hélices a antiparalelas. Essa estrutura rígida fornece estabilidade de proteína enquanto permi- te a apresentação de regiões variáveis, normalmente compreendendo seis resíduos de aminoácidos por repetição, para reconhecimento do alvo.
[0085] Um anticorpo "anti-VEGF" ou fragmento de ligação ao antí- geno de um anticorpo refere-se a um anticorpo ou fragmento que se liga especificamente ao VEGF.
[0086] Proteínas de fusão de receptor de VEGF ilustrativas inclu- em aflibercept (EYLEAG, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.) ou con- bercept (vendido comercialmente por Chengdu Kanghong Biotechno- logy Co., Ltd.). Consulte a publicação de pedido de patente internacio- nal no. WO2005/121176 ou WO2007/112675. Os termos "aflibercept" e "conbercept" incluem versões biossimilares dos mesmos. Uma ver- são biossimilar de um produto de referência (por exemplo, aflibercept) geralmente se refere a um produto que compreende a sequência de aminoácidos idêntica, mas inclui produtos que são biossimilares de acordo com a Lei de Competição e Inovação de Preços de Biólogos dos EUA.
[0087] As formulações farmacêuticas da presente invenção são de "alta concentração". As formulações farmacêuticas de alta concentra- ção da presente invenção incluem proteína de fusão de receptor de VEGF a uma concentração de pelo menos 41 mg/ml, de pelo menos 80 mg/ml, de pelo menos 100 mg/ml, de pelo menos 125 mg/ml, de pelo menos 140 mg/ml, de pelo menos 150 mg/ml, de pelo menos 175 mg/ml, de pelo menos 200 mg/ml, de pelo menos 225 mg/ml, de pelo menos 250 mg/ml ou de pelo menos 275 mg/ml. Alternativamente, "al- ta concentração" pode se referir a formulações que incluem uma con- centração de proteína de fusão de receptor de VEGF de cerca de 140 mg/ml a cerca de 160 mg/ml, pelo menos cerca de 140 mg/ml, mas menos de 160 mg/ml, de cerca de 41 mg/ml a cerca de 275 mg/ml, de cerca de 70 mg/ml a cerca de 75 mg/ml ou de cerca de 80 mg/ml a cerca de 250 mg/ml. Em alguns aspectos, a concentração da proteína de fusão de receptor de VEGF na formulação é cerca de qualquer uma das seguintes concentrações: 41 mg/ml; 42 mg/ml; 43 mg/ml; 44 mg/ml; 45 mg/ml; 46 mg/ml; 47 mg/ml; 48 mg/ml; 49 mg/ml; 50 mg/ml; 51 mg/ml; 52 mg/ml; 53 mg/ml; 54 mg/ml; 55 mg/ml; 56 mg/ml; 57 mg/ml; 58 mg/ml; 59 mg/ml; 60 mg/ml; 61 mg/ml; 62 mg/ml; 63 mg/ml; 64 mg/ml; 65 mg/ml; 66 mg/ml; 67 mg/ml; 68 mg/ml; 69 mg/ml; 70 mg/ml; 71 mg/ml; 72 mg/ml; 73 mg/ml; 74 mg/ml; 75 mg/ml; 76 mg/ml; 77 mg/ml; 78 mg/ml; 79 mg/ml; 80 mg/ml; 81 mg/ml; 82 mg/ml; 83 mg/ml; 84 mg/ml; 85 mg/ml; 86 mg/ml; 87 mg/ml; 88 mg/ml; 89 mg/ml; 90 mg/ml; 91 mg/ml; 92 mg/ml; 93 mg/ml; 94 mg/ml; 95 mg/ml; 96 mg/ml; 97 mg/ml; 98 mg/ml; 99 mg/ml; 100 mg/ml; 101 mg/ml; 102 mg/ml; 103 mg/ml; 104 mg/ml; 105 mg/ml; 106 mg/ml; 107 mg/ml; 108 mg/ml; 109 mg/ml; 110 mg/ml; 111 mg/ml; 112 mg/ml; 113 mg/ml; 113,3 mg/ml; 114 mg/ml; 114,1 mg/ml; 114,2 mg/ml; 114,3 mg/ml; 114,4 mg/ml; 114,5 mg/ml; 114,6 mg/ml, 114,7 mg/ml, 114,8 mg/ml; 114,9 mg/ml; 115 mg/ml; 116 mg/ml; 117 mg/ml; 118 mg/ml; 119 mg/ml; 120 mg/ml; 121 mg/ml; 122 mg/ml; 123 mg/ml; 124 mg/ml; 125 mg/ml; 126 mg/ml; 127 mg/ml; 128 mg/ml; 129 mg/ml; 130 mg/ml; 131 mg/ml; 132 mg/ml; 133 mg/ml; 133,3 mg/ml; 133,4 mg/ml, 134 mg/ml; 135 mg/ml; 136 mg/ml; 137 mg/ml; 138 mg/ml; 139 mg/ml; 140 mg/ml; 141 mg/ml; 142 mg/ml; 143 mg/ml; 144 mg/ml; 145 mg/ml; 146 mg/ml; 147 mg/ml; 148 mg/ml; 149 mg/ml; 150 mg/ml; 151 mg/ml; 152 mg/ml; 153 mg/ml; 154 mg/ml; 155 mg/ml; 156 mg/ml; 157 mg/ml; 158 mg/ml; 159 mg/ml; 160 mg/ml; 161 mg/ml; 162 mg/ml; 163 mg/ml; 164 mg/ml; 165 mg/ml; 166 mg/ml; 167 mg/ml; 168 mg/ml; 169 mg/ml; 170 mg/ml; 171 mg/ml; 172 mg/ml; 173 mg/ml; 174 mg/ml; 175 mg/ml; 176 mg/ml; 177 mg/ml; 178 mg/ml; 179 mg/ml; 180 mg/ml; 181 mg/ml; 182 mg/ml; 183 mg/ml; 184 mg/ml; 185 mg/ml; 186 mg/ml; 187 mg/ml; 188 mg/ml; 189 mg/ml; 190 mg/ml; 191 mg/ml; 192 mg/ml; 193 mg/ml; 194 mg/ml; 195 mg/ml; 196 mg/ml; 197 mg/ml; 198 mg/ml; 199 mg/ml; 200 mg/ml; 201 mg/ml; 202 mg/ml; 203 mg/ml; 204 mg/ml; 205 mg/ml; 206 mg/ml;
207 mg/ml; 208 mg/ml; 209 mg/ml; 210 mg/ml; 211 mg/ml; 212 mg/ml; 213 mg/ml; 214 mg/ml; 215 mg/ml; 216 mg/ml; 217 mg/ml; 218 mg/ml; 219 mg/ml; 220 mg/ml; 221 mg/ml; 222 mg/ml; 223 mg/ml; 224 mg/ml; 225 mg/ml; 226 mg/ml; 227 mg/ml; 228 mg/ml; 229 mg/ml; 230 mg/ml; 231 mg/ml; 232 mg/ml; 233 mg/ml; 234 mg/ml; 235 mg/ml; 236 mg/ml; 237 mg/ml; 238 mg/ml; 239 mg/ml; 240 mg/ml; 241 mg/ml; 242 mg/ml; 243 mg/ml; 244 mg/ml; 245 mg/ml; 246 mg/ml; 247 mg/ml; 248 mg/ml; 249 mg/ml; 250 mg/ml; 251 mg/ml; 252 mg/ml; 253 mg/ml; 254 mg/ml; 255 mg/ml; 256 mg/ml; 257 mg/ml; 258 mg/ml; 259 mg/ml; 260 mg/ml; 261 mg/ml; 262 mg/ml; 263 mg/ml; 264 mg/ml; 265 mg/ml; 266 mg/ml; 267 mg/ml; 268 mg/ml; 269 mg/ml; 270 mg/ml; 271 mg/ml; 272 mg/ml; 273 mg/ml; 274 mg/ml; ou 275 mg/ml. Outras concentrações de prote- Ína de fusão de receptor de VEGF são contempladas no presente do- cumento, desde que a concentração funcione de acordo com as moda- lidades do presente documento.
[0088] Em uma modalidade da invenção, uma formulação farma- cêutica da presente invenção é de tal concentração que contém cerca de 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20 mg de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), ou a quantidade de tal proteína em qualquer uma das doses aceitáveis da mesma que são discutidas no presente documento, em cerca de 100 ul ou menos, cerca de 75 ul Ou menos ou cerca de 70 ul ou menos, por exemplo, cerca de 50 ul; 51 ul; 52 ul; 53 ul; 54 ul; 55 ul; 56 ul; 57 ul; 58 ul; 59 ul; 60 ul; 61 ul; 62 ul; 63 ul; 64 ul; 65 ul; 66 ul; 67 ul; 68 ul; 69 ul; 70 ul; 71 ul; 72 ul; 73 ul; 74 ul; 75 ul; 76 ul; 77 ul; 78 ul; 79 ul; 80 ul; 81 ul; 82 ul; 83 ul; 84 ul; 85 ul; 86 ul; 87 ul; 88 ul; 89 ul; 90 ul; 91 ul; 92 ul; 93 ul; 94 ul; 95 ul; 96 ul; 97 ul; 98 ul; 99 ul; ou 100 ul.
[0089] A presente invenção inclui qualquer uma das formulações estabelecidas em "Formulações llustrativas" no presente documento, mas em que a concentração da proteína de fusão de receptor de
VEGF (por exemplo, aflibercept) é substituída por uma concentração que é estabelecida nesta seção ("Proteínas de Fusão do Receptor de VEGF e outros inibidores de VEGF ").
TAMPÕES
[0090] Os tampões para uso no presente documento referem-se a soluções que resistem à mudança de pH pelo uso de conjugados áci- do-base. Os tampões são capazes de manter o pH na faixa de cerca de 5,0 a cerca de 6,8 e, mais tipicamente, de cerca de 5,8 a cerca de 6,5 e, mais tipicamente, de cerca de 6,0 a cerca de 6,5. Em alguns ca- sos, o pH da formulação da presente invenção é de cerca de 5,0, cer- ca de 5,1, cerca de 5,2, cerca de 5,3, cerca de 5,4, cerca de 5,5, cerca de 5,6, cerca de 5,7, cerca de 5,8, cerca de 5,9, cerca de 6,0, cerca de 6,1, cerca de 6,2, cerca de 6,3, cerca de 6,4, cerca de 6,5, cerca de 6,6, cerca de 6,7 ou cerca de 6,8. Tampões de exemplo para inclusão em formulações no presente documento incluem tampões à base de histidina, por exemplo, histidina, cloridrato de histidina e acetato de histidina. Os tampões para inclusão em formulações no presente do- cumento podem, alternativamente, ser tampões à base de fosfato, por exemplo, fosfato de sódio, tampões à base de acetato, por exemplo, acetato de sódio ou ácido acético, ou podem ser à base de citrato, por exemplo, citrato de sódio ou ácido cítrico. É também reconhecido que os tampões podem ser uma mistura dos anteriores, desde que o tam- pão funcione para tamponar as formulações nas faixas de pH descritas acima. Em alguns casos, o tampão é de cerca de 5 mM a cerca de 25 MM, ou mais tipicamente, cerca de 5 mM a cerca de 15 mM. Os tam- pões podem ser cerca de 5 mM, cerca de 6 mM, cerca de 7 mM, cerca de 8 mM, cerca de 9 mM, cerca de 10 mM, cerca de 11 mM, cerca de 12 mM, cerca de 13 mM, cerca de 14 mM, cerca de 15 mM, cerca de 16 mM, cerca de 17 mM, cerca de 18 mM, cerca de 19 mM, cerca de mM, cerca de 21 mM, cerca de 22 mM, cerca de 23 mM, cerca de
24 mM ou cerca de 25 mM.
[0091] Em uma modalidade da invenção, um tampão à base de histidina é preparado usando histidina e monocloridrato de histidina.
TENSOATIVOS
[0092] Tensoativo para uso no presente documento refere-se a ingredientes que protegem a maior concentração de proteína de fusão de receptor de VEGF de vários estresses induzidos de superfície e in- terfacial. Como tal, os tensoativos podem ser usados para limitar ou minimizar a agregação da proteína de fusão de receptor de VEGF e promover a solubilidade da proteína. Os tensoativos adequados no presente documento demonstraram ser não iônicos e podem incluir tensoativos que têm uma porção química de polioxietileno. Os tensoa- tivos ilustrativos nesta categoria incluem: polissorbato 20, polissorbato 80, poloxâmero 188, polietilenoglicol 3350 e misturas dos mesmos. Os tensoativos nas formulações podem estar presentes em cerca de 0,02% a cerca de 0,1% em peso por volume (p/v) e, mais tipicamente, cerca de 0,02% a cerca de 0,04% (p/v). Em alguns casos, o tensoativo é de cerca de 0,02% (p/v), cerca de 0,03% (p/v), cerca de 0,04% (p/v), cerca de 0,05% (p/v), cerca de 0,06% (p/v), cerca de 0,07% (p/v), cer- ca de 0,08% (p/v), cerca de 0,09% (p/v) ou cerca de 0,1% (p/v).
ESTABILIZADORES TÉRMICOS
[0093] Estabilizadores térmicos para uso no presente documento referem-se a ingredientes que fornecem estabilidade térmica contra desnaturação térmica da proteína de fusão de receptor de VEGF, bem como protegem contra a perda da potência ou atividade da proteína de fusão de receptor de VEGF. Estabilizadores térmicos adequados in- cluem açúcares e podem ser sacarose, trealose, sorbitol ou manitol, ou podem ser aminoácidos, por exemplo L-prolina, L-arginina (por exemplo, monoclioridrato de L-arginina) ou taurina. Além disso, os es- tabilizadores térmicos também podem incluir acrilamidas substituídas ou ácido propanossulfônico, ou podem ser compostos como glicerol.
[0094] Em alguns casos, as formulações no presente documento incluem um açúcar e taurina, um açúcar e um aminoácido, um açúcar e ácido propanossulfônico, um açúcar e taurina, glicerol e taurina, gli- cerol e ácido propanossulfônico, um aminoácido e taurina, ou um ami- noácido e ácido propanossulfônico. Além disso, as formulações podem incluir um açúcar, taurina e ácido propanossulfônico, glicerol, taurina e ácido propanossulfônico, bem como L-prolina, taurina e ácido propa- nossulfônico.
[0095] As modalidades no presente documento tipicamente têm estabilizadores térmicos presentes sozinhos, cada um independente- mente presente em uma concentração de, ou presentes em combina- ção em uma concentração total de cerca de 2% (p/v) a cerca de 10% (p/v) ou 4% (/ v) a cerca de 10% (p/v), ou cerca de 4% (p/v) a cerca de 9% (p/v), ou cerca de 5% (p/v) a cerca de 8% (p/v). Os estabilizadores térmicos na formulação podem estar a uma concentração de cerca de 2% (p/v), cerca de 2,5% (p/v), cerca de 3% (p/v), cerca de 4% (p/v), cerca de 5% (p/v), cerca de 6% (p/v), cerca de 7% (p/v), cerca de 8% (p/v), cerca de 9% (p/v), cerca de 10% (p/v) ou cerca de 20% (p/v).
[0096] No que diz respeito à taurina e ao ácido propanossulfônico, em uma modalidade da invenção, esses estabilizadores térmicos po- dem estar presentes nas formulações de cerca de 25 mM a cerca de 100 mM, e mais tipicamente de cerca de 50 mM a cerca de 75 mM (em comparação com os outros estabilizadores térmicos).
AGENTES DE REDUÇÃO DE VISCOSIDADE
[0097] Os agentes de redução de viscosidade são normalmente usados para reduzir ou prevenir a agregação de proteínas. Os agentes de redução da viscosidade para inclusão no presente documento in- cluem: cloreto de sódio, cloreto de magnésio, D- ou L-arginina (por exemplo, monoclioridrato de L-arginina), lisina ou misturas dos mes-
mos. Quando presentes neste documento, os agentes de redução de viscosidade podem estar presentes em cerca de 10 mM a cerca de 100 mM e, mais tipicamente, de cerca de 30 mM a cerca de 75 mM, e ainda mais tipicamente de cerca de 40 mM a cerca de 70 mM. Em al- guns casos, o agente de redução de viscosidade está presente em cerca de 10 mM, cerca de 15 mM, cerca de 20 mM, cerca de 25 mM, cerca de 30 mM, cerca de 35 mM, cerca de 40 mM, cerca de 45 mM, cerca de 50 mM, cerca de 55 mM, cerca de 60 mM, cerca de 65 mM, cerca de 70 mM, cerca de 75 mM, cerca de 80 mM, cerca de 85 mM, cerca de 90 mM, cerca de 95 mM ou cerca de 100 mM.
VISCOSIDADE DA FORMULAÇÃO
[0098] As formulações de acordo com as modalidades do presente documento também podem ter uma viscosidade farmaceuticamente aceitável para administração ocular, por exemplo, injeção intravítrea. Viscosidade geralmente se refere à medida de resistência de um fluido que está sendo deformado por estresse de cisalhamento ou tensão de tração (normalmente medida por técnicas conhecidas na técnica, vis- cosímetro ou reômetro, por exemplo). Viscosidades típicas de formula- ções de acordo com modalidades aqui são de cerca de 0,005 Pas (5,0 cP (centipoise)) a cerca de 0,015 Pa:s (15 cP), de cerca de 0,011 Pas (11 cP) a cerca de 0,014 Pa':s (14 cP), de cerca de 0,012 Pas (12 cP) a cerca de 0,015 Pa:s (15 cP) ou de cerca de 0,011 Pas (11 cP) a cerca de 0,012 Pas (12 cP). Como tal, a viscosidade da formu- lação aqui pode ser cerca de 0,005 Pas (5,0 cP), cerca de 0,006 (6,0), cerca de 0,0071 Pas (7,1 cP), cerca de 0,0072 Pas (7,2 cP), cerca de 0,0073 Pas (7,3 cP), cerca de 0,0074 Pas (7,4 cP), cerca de 0,0075 Pa's (7,5 cP), cerca de 0,0076 Pas (7,6 cP), cerca de 0,01 Pas (10 cP), cerca de 0,0105 Pa:s (10,5 cP), cerca de 0,011 Pa:s (11,0 cP), cerca de 0,0115 Pa:s (11,5 cP), cerca de 0,012 Pa':s (12,0 cP), cerca de 0,0125 Pa':s (12,5 cP), cerca de 0,013 Pa:s (13,0 cP), cerca de
0,0135 Pas (13,5 cP), cerca de 0,014 Pas (14,0 cP), cerca de 0,0145 Pas (14,5 cP) ou cerca de 0,015 Pas (15,0 cP) (por exemplo, quando medido a 20 ºC).
[0099] Várias modalidades no presente documento não requerem a inclusão de um sal inorgânico, ou outro agente de redução de visco- sidade, para manter essas viscosidades altamente úteis. Normalmen- te, as soluções de proteína de alta concentração requerem agentes de redução de viscosidade para evitar a agregação de proteínas e maior viscosidade, tornando as formulações difíceis para injeção intravítrea e reduzindo a potência da proteína de fusão de receptor de VEGF. Co- mo tal, as modalidades no presente documento incluem formulações que não tiveram substancialmente, ou não foram adicionados, cloreto de sódio (NaCl), cloreto de magnésio (MgCl2), cloridrato de D- ou L- arginina, lisina ou outro agente de redução de viscosidade.
OSMOLALIDADE DA FORMULAÇÃO
[00100] “Osmolalidade é um atributo crítico para formulações injetá- veis. É desejável que os produtos correspondam às condições osmóti- cas fisiológicas. Além disso, a osmolalidade fornece confirmação do conteúdo solúvel na solução. Em uma modalidade da invenção, a os- molalidade de uma formulação da presente invenção é menor ou igual a cerca de 506 mmol/kg ou de cerca de 250 a cerca de 506 mmol/kg, Por exemplo, cerca de 250, 260, 270, 280, 290, 299, 300, 310, 314, 315, 316, 324, 343, 346, 349, 369, 384, 403, 426, 430 ou 506 mmol/kg. Em uma modalidade da invenção, a osmolalidade é inferior a cerca de 250 mmol/kg.
PUREZA E ESTABILIDADE DAS FORMULAÇÕES
[00101] As formulações que contêm proteínas de fusão do receptor de VEGF de alta concentração descritas no presente documento são estáveis durante a fabricação e armazenamento. O termo "estável" no presente documento se refere a formulações que incluem proteínas de receptor de VEGF que retêm a estabilidade química e física durante o período de fabricação e armazenamento da formulação, por exemplo, que mantém a integridade e tem degradação, desnaturação ou desdo- bramento mínima. A estabilidade da proteína de receptor de VEGF pode ser determinada usando técnicas analíticas disponíveis na técni- ca em diferentes temperaturas e ao longo de diferentes períodos de tempo. Em particular, a estabilidade química do receptor de VEGF (po- tência) pode ser determinada usando vários bioensaios (por exemplo, uma linha celular BAF/38 VEGFR1/EPOR usada para determinar a liga- ção de VEGF 165 pelas proteínas de fusão do receptor de VEGF aqui) e estabilidade física, por tamanho análise cromatográfica de exclusão (SE), cromatografia de exclusão de tamanho UPLC (cromatografia |í- quida de ultra-desempenho), aparência visual, OD, pH, formação de variante de carga e taxa de formação de espécies de alto peso mole- cular (HMW). Uma proteína de fusão de receptor de VEGF estável é aquela que mostra alteração limitada em sua OD, pH, formação de va- riantes de carga e formação de espécies HMW.
[00102] Uma espécie de "alto peso molecular" (HMW), tal como uti- lizado no presente documento, com referência a uma formulação que contém uma determinada armadilha de VEGF (por exemplo, afliber- cept), refere-se a qualquer espécie de polipeptídeo ou complexo de polipeptídeo na formulação que elui de uma coluna de exclusão de tamanho (por exemplo, SE-UPLC) antes de (por exemplo, com um pe- so molecular mais alto do que) polipeptídeo armadilha de VEGF e/ou um homodiímero deste. A porcentagem de espécies HMW refere-se à porcentagem de tais espécies em relação à quantidade total de poli- peptídeos na formulação, por exemplo, por análise SE-UPLC.
[00103] Em uma modalidade da invenção, como discutido mais de- talhadamente nos Exemplos abaixo, as formulações estáveis mostram potência significativa da proteína de fusão de receptor de VEGF e es-
tabilidade física por um período de até 12 meses, até 24 meses e/ou até 36 meses quando armazenado em cerca de 2 “ºC a cerca de 8 ºC.
[00104] Em uma modalidade da invenção, a formulação da presen- te invenção é uma que: e Após cerca de 28 dias a cerca de 37 ºC tem cerca de 3, 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 30, 35 ou 37% (ou 10 a 15% ou 15 a 20% ou 10 a 20%) aumento em espécies de alto peso molecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 28 dias a cerca de 37 ºC tem cerca de 5,6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 ou 22% (ou 5 a 20% ou a 10% ou 10 a 15% ou 15 a 20%) diminuição nas espécies principais (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 28 dias a cerca de 37 ºC, tem cerca de 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86 ou 87% (ou cerca de 80 a 85%) ou mais proteína como espécie principal (por exemplo, conforme medido por SE- UPLC ou SEC).
e Após cerca de 28 dias a cerca de 37 ºC tem um aumento de cerca de 1 ou 1,5 ou 2% (ou 1 a 2%) nas espécies de baixo peso molecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de um mês a cerca de 37 ºC, ocorre um au- mento de cerca de 16% nas espécies de alto peso molecular; e/ou uma diminuição de cerca de 17% nas espécies principais e/ou um au- mento de cerca de 0,5% ou <1% nas espécies de baixo peso molecu- lar; e/ou após cerca de dois meses a cerca de 5 ºC, tem uma diminui- ção de cerca de 1% nas espécies principais e/ou um aumento de cer- ca de 1% nas espécies de alto peso molecular e/ou nenhuma quanti- dade significativa ou detectável de baixo peso molecular (LMW) espé- cies; e/ou após cerca de 2 meses a cerca de 5 ºC, tem cerca de 97% das espécies principais (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 12 meses a cerca de 2 a 8 ºC, há um au- mento de cerca de 3 a 3,5% nas espécies de alto peso molecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 12 meses a cerca de 2 a 8 ºC tem menos do que cerca de 1% ou 1, 2, 3 ou 4% (por exemplo, 1 a 4% ou 3 a 4%) diminuição nas espécies principais (por exemplo, como medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 12 meses a cerca de 2 a 8 ºC, tem cerca de 94 ou 95% ou mais proteína como espécie principal (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 3 meses a cerca de 2 a 8 “C, há um au- mento de cerca de 1 ou 2% nas espécies de alto peso molecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 6 meses a cerca de 2 a 8 “C tem um au- mento de cerca de <1, 1 ou 2% em espécies de alto peso molecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Depois de cerca de 5º/2 ou 6 meses a cerca de 5 ºC tem cerca de 2,5, 3,0 ou 3,5 (ou cerca de 2,5 a 3,5%) no total de espécies de elevado peso molecular (por exemplo, como medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 6 meses a cerca de 2 a 8 ºC tem menos do que cerca de 1% ou 1 ou 2% (ou cerca de 0,5 a 2% ou 1 a 2%) dimi- nuição nas espécies principais (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 6 meses a cerca de 2 a 8 ºC, tem cerca de 96 ou 97 ou 98% (ou 96 a 98%) ou mais proteína como espécie princi- pal (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 24 meses ou 36 meses a cerca de 2a 8 ºC, tinha menos de cerca de 5 ou 6 ou 7% (por exemplo, cerca de 1,5, 2, 3, 4 ou 5%) (ou 1,5 a 5% ou 1,5 a 2,5 %) aumento em espécies de alto peso molecular; e/ou tem cerca de 3,0, 3,25, 3,5, 4,0, 4,5 ou 5% de espécies de alto peso molecular total; e/ou uma diminuição de cer- ca de 2 ou 3% (ou 2 a 3%) das espécies principais; e/ou uma quanti- dade total de espécies principais de cerca de 95 ou 96% ou mais (ou 95 a 96%) (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 1 mês a cerca de 37 ºC, tem cerca de 97, 98, 99 ou 100% (ou 97 a 100%) de aflibercept na formulação que é recuperável por RP-HPLC.
e Imediatamente após a fabricação e purificação, tem me- nos de cerca de 1,5, 2, 2,5, 3,0 ou 3,5% de espécies de alto peso mo- lecular (por exemplo, conforme medido por SE-UPLC ou SEC).
e Após cerca de 6 meses a cerca de 37 ºC, tem pelo menos cerca de 70% ou 75% (por exemplo, 70 a 75%) de aflibercept como espécie principal/pico principal (por exemplo, conforme medido por fo- cagem isoelétrica capilar (clIEF) ou capilar captado focalização isoelé- trica) (espécies não ácidas e não básicas).
e Após cerca de 36 meses a cerca de 2 a 8 ºC, tem um au- mento de cerca de 1 ou 2% (ou 1 a 2%) em espécies ácidas (por exemplo, conforme medido por focagem isoelétrica capilar (cIEF) ou focagem isoelétrica capilar com imagem).
e Após cerca de 36 meses a cerca de 2 a 8 ºC, tem cerca de 1% ou menos diminuição na espécie principal/pico principal (por exemplo, conforme medido por focagem isoelétrica capilar (cIEF) ou focagem isoelétrica capilar com imagem).
e Após cerca de 36 meses a cerca de 2 a 8 ºC, tem cerca de 78 a 79% de espécies principais/pico principal (por exemplo, con- forme medido por focagem isoelétrica capilar (cIEF) ou focagem isoe- létrica capilar capturada) e/ou e Quando administrado por via intravítrea a um mamífero,
como um ser humano ou coelho ou camundongo (por exemplo, com um distúrbio ocular angiogênico, como DMRI úmida), não causa quaisquer eventos adversos que sejam clinicamente diferentes daque- les observados para EYLEA (por exemplo, quando EYLEA é adminis- trado por via intravítrea de 0,5 ou 2,0 mg); ou não causa inflamação clinicamente significativa no olho, aumento prolongado da pressão in- traocular (PIO), aumento prolongado da pressão arterial ou diminuição e/ou descolamento da retina.
[00105] Além disso, em uma modalidade da invenção, proteínas de fusão de receptor de VEGF de alta concentração são estáveis, uma vez que mostram pouca ou nenhuma formação de variantes de carga ácida ao longo da fabricação e armazenamento, por exemplo, pouca ou nenhuma formação de variantes de carga testadas por Focalização Isoelétrica Capilar Imageada, por exemplo.
[00106] Em uma modalidade da invenção, uma formulação da pre- sente invenção exibe menos ou igual a cerca de 8% de espécies de baixo peso molecular (LMW).
[00107] Em uma modalidade da invenção, uma formulação da pre- sente invenção tem menos do que cerca de 0,2, 0,4 ou 0,5 EU (unida- des de endotoxina)/ml de endotoxina;
[00108] Em uma modalidade da invenção, uma formulação da pre- sente invenção é essencialmente livre de matéria particulada ou maté- ria particulada de cerca de 1, 2, 5, 10, 25 ou 50 micrômetros (ou mais) de tamanho.
[00109] Em uma modalidade da invenção, quando uma formulação da presente invenção é analisada por CE-SDS não reduzido (eletrofo- rese em gel capilar de SDS), pelo menos 97% da área total do pico é o pico principal.
[00110] Em uma modalidade da invenção, quando uma formulação da presente invenção é analisada por UPLC de exclusão de tamanho
(SE-UPLC), pelo menos 93, 94 ou 95% da área total do pico é o pico principal e menor ou igual a 3,5, 4, 5 ou 6% é agregado.
[00111] Em uma modalidade da invenção, uma formulação da pre- sente invenção está a cerca de 2 ºC, 3 ºC, 4 ºC, 5ºC,6ºC,7ºCou8 ºC, 2 a 8 ºC (por exemplo, uma temperatura média de 5 ºC), 23 ºC, 25 ºC, 30 ºC ou 37 ºC.
FORMULAÇÕES ILUSTRATIVAS
[00112] As formulações ilustrativas de proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração incluem o seguinte:
[00113] Formulação A: aflibercept 80 mg/ml, tampão à base de his- tidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00114] Formulação B: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00115] Formulação C: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00116] Formulação D: aflibercept 80 mg/ml, tampão à base de his- tidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2.
[00117] Formulação E: aflibercept 80 mg/ml, tampão à base de fos- fato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e clo- reto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00118] Formulação F: aflibercept 80 mg/ml, tampão à base de ci- trato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00119] Formulação G: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex-
cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00120] Formulação H: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00121] Formulação |: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00122] “Formulação J: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00123] “Formulação K: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00124] Formulação L: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00125] Formulação M: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00126] Formulação N: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00127] Formulação O: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00128] Formulação P: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2.
[00129] Formulação Q: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00130] Formulação R: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00131] Formulação S: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00132] Formulação T: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 (por exemplo, 6,2), e, opcionalmente, excluin- do especificamente um agente de redução de viscosidade.
[00133] “Formulação U: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00134] Formulação V: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00135] Formulação W: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00136] Formulação X: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00137] Formulação Y: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00138] Formulação Z: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00139] Formulação AA: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00140] Formulação BB: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2.
[00141] Formulação CC: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00142] “Formulação DD: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00143] Formulação EE: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00144] Formulação FF: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00145] Formulação GG: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00146] Formulação HH: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00147] Formulação |l: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00148] Formulação JJ: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente excluindo um agente de redução de viscosidade.
[00149] “Formulação KK: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00150] Formulação LL: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00151] Formulação MM: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00152] Formulação NN: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2.
[00153] Formulação OO: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00154] Formulação PP: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2.
[00155] Formulação QQ: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00156] Formulação RR: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00157] Formulação SS: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, excluindo especifica- mente um agente de redução de viscosidade.
[00158] “Formulação TT: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00159] Formulação UU: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, excluindo especifica- mente um agente de redução de viscosidade.
[00160] Formulação VV: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2 e, opcionalmente, especificamente ex- cluindo um agente de redução de viscosidade.
[00161] Formulação WW: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e taurina a
50 mM, com um pH de 5,8.
[00162] Formulação XX: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, 4% (p/v) de prolina, polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloridrato de arginina a 50 MM, com um pH de 5,8.
[00163] Formulação YY: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e taurina a 50 MM, com um pH de 5,8.
[00164] Formulação ZZ: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a MM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 0,03% (p/v) 20 e cloridrato de arginina a 50 MM, com um pH de 5,8.
[00165] Formulação AAA: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8.
[00166] Formulação BBB: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 0,03% (p/v) 20 e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8.
[00167] Formulação CCC: 80, 100, 120 ou 140 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloridrato de arginina a 50 MM, com um pH de 5,8.
[00168] Formulação DDD: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 10 mM, 4% (p/v) de prolina, polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8.
[00169] Formulação EEE: 140 mg/ml de proteína de fusão de re-
ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e, opci- onalmente, sem estabilizador térmico, com um pH de 5,8.
[00170] Formulação FFF: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), fosfato de sódio a 10 mM, sa- carose a 5% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% com um pH de 6,2.
[00171] Formulação GGG: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; sulfato de sódio a 50 MM
[00172] Formulação HHH: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; 50 mM de tiocianato de sódio
[00173] Formulação ll: 140 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; saca- rose a 5%, polissorbato 20 a 0,03%; citrato de sódio a 40 mM
[00174] Formulação JJJ: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 MM, pH 5,8; sa- carose a 5%, polissorbato 20 a 0,03%; glicina a 50 mM
[00175] Formulação KKK: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%, polissorbato 20 a 0,03%; cloreto de sódio a 50 MM
[00176] Formulação LLL: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 MM, pH 5,8; sa- carose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; lisina a 50 mM
[00177] Formulação MMM: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; aspartato de sódio a 50 MM
[00178] Formulação NNN: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; glutamato de sódio a 50 mM
[00179] “Formulação OOO: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; citrato de sódio a 50 mM; clo- ridrato de arginina a 50 mM
[00180] Formulação PPP: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; glicina a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 MM
[00181] Formulação QQQ: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; aspartato de sódio a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM
[00182] “Formulação RRR: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; glutamato de sódio a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM
[00183] “Formulação SSS: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept); His a 20 mM, pH 5,8; saca- rose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; cloridrato de L-arginina a 10 MM
[00184] Formulação TTT: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept); His a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; 100 mM de cloridrato de L-arginina
[00185] Formulação UUU: 30 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 10%, fosfato a 10 MM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00186] Formulação VVV: 30 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 20%, fosfato a 10 MM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00187] Formulação WWW: 60 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 10%, fosfato a mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00188] Formulação XXX: 60 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 20%, fosfato a 10 MM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00189] Formulação YYY: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00190] Formulação ZZZ: 120 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 20%, fosfato a 10 MM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2
[00191] Formulação AAAA: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, NaCl a 50 mM, pH 6,2
[00192] “Formulação BBBB: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), sacarose a 20%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, NaCl a 50 mM, pH 6,2
[00193] “Formulação CCCC: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 5%, cloreto de sódio a 40 mM, PS20 0,03%, pH 6,2
[00194] “Formulação DDDD: 80 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF (por exemplo, aflibercept), tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e mono- cloridrato de L-arginina a 50 MM, com um pH de 5,8.
[00195] Formulação EEEE: 120,0 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, + 12 mg/ml), tampão à base de histidina a 20 mM (por exemplo, + 2 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monocloridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1).
[00196] Formulação FFFF: 113,3 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, 102 a 125 mg/ml), tampão à base de histidina a 20 mM (por exemplo, + 2 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monocloridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1).
[00197] Formulação GGGG: 114,3 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, 103 a 126 mg/ml), tampão à base de histidina a 10 mM (por exemplo, + 1 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato 20 (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monocloridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1).
[00198] Formulação HHHH: 100,0 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, + 10 mg/ml), tampão à base de histidina a 20 mM (por exemplo, + 2 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato 20 (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monocloridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1).
[00199] Formulação Ill: 133,3 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, + 13 mg/ml), tampão à base de histidina a 20 mM (por exemplo, + 2 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato 20 (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monoclioridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1).
[00200] Formulação JJJJ: 150 mg/ml de aflibercept (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, + 15 mg/ml), fosfato de sódio a 10 mM, 8%
(p/v) sacarose (por exemplo, + 0,8%), 0,03% (p/v) polissorbato 20 (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e cloridrato de L-arginina 50 mM, pH 6,2 (por exemplo, 6,0 a 6,4 ou 5,9 a 6,5).
[00201] “Formulação KKKK: 114,3 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, + 14 mg/ml), tampão à base de histidina a 20 mM (por exemplo, + 2 mM), sacarose a 5% (p/v) (por exemplo, + 0,5%), 0,03% (p/v) polissorbato (por exemplo, 0,02 a 0,04%) e monocloridrato de L-arginina a 50 mM (por exemplo, + 5 mM), com um pH de 5,8 (por exemplo, 5,6 a 6,0 ou 5,5 a 6,1);
[00202] — ou qualquer formulação apresentada no presente documen- to.
[00203] Em uma modalidade da invenção, a concentração de qual- quer constituinte da formulação (por exemplo, todos os constituintes) listado acima (por exemplo, qualquer uma das formulações A-KKKK) ou que é discutido no presente documento é + cerca de 3%, 5% ou cerca de 10% de a concentração especificamente mencionada.
MÉTODOS DE FABRICAÇÃO
[00204] As modalidades no presente documento incluem métodos de fabricação de uma formulação farmacêutica da presente invenção, incluindo uma proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, qualquer uma das formulações A-KKKK conforme estabelecido no presente documento) que compreende combinar os componentes da formulação em uma única composição e, opcionalmente, introduzir formulação em um recipiente ou dispositivo, por exemplo, um frasco, ou dispositivo de distribuição, por exemplo, uma seringa pré-cheia. As formulações, frascos ou dispositivos que são o produto de tais méto- dos fazem parte da presente invenção.
[00205] Em uma modalidade da invenção, o método de fabricação de uma proteína de fusão de receptor de VEGF que contém a formula-
ção farmacêutica da presente invenção (por exemplo, qualquer uma das formulações A-KKKK conforme estabelecido neste documento) compreende as etapas de cultura de uma célula hospedeira (por exemplo, hamster chinês célula de ovário) que compreende um ou mais polinucleotídeos que codificam uma proteína de fusão de recep- tor de VEGF (por exemplo, aflibercept) em um meio de cultura e sob condições em que a proteína é expressa; e purificar a proteína da cé- lula hospedeira e/ou meio de cultura e combinar uma porção da prote- Ína com excipientes de uma formulação farmacêutica como estabele- cido no presente documento. Mais uma vez, as formulações, frascos ou dispositivos que são o produto de tais métodos fazem parte da pre- sente invenção.
[00206] Em uma modalidade da invenção, é feita uma determinação quanto à quantidade e tipo de proteína de fusão de receptor de VEGF necessária na formulação para torná-la uma concentração elevada e para seu uso final. A mesma determinação é feita em relação à quan- tidade e tipo de tampão, a quantidade e tipo de tensoativo, a quantida- de e tipo de estabilizador térmico e a inclusão ou exclusão específica de um agente de redução de viscosidade. Esses componentes são combinados e misturados, certificando-se de que o pH da formulação esteja no valor desejado, por exemplo, entre cerca de 5,0 e cerca de 6,8 (por exemplo, 5,8), e/ou que a viscosidade esteja em um valor de- sejado, por exemplo, cerca de 0,006, 0,0073, 0,0115 ou 0,012 Pa's (6,0, 7,3, 11,5 ou 12,0 cP) a 20 ºC. Em uma modalidade da invenção, formulações que contêm proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração podem ser esterilizadas e armazenadas em uma condição estável, por exemplo, por até 24 ou 36 meses em 2 ºCa8"C (por exemplo, 5 ºC).
[00207] Consulte, por exemplo, Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-
Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Paren- teral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieber- man, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Sys- tems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Tox- icity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.
DOENÇAS ANGIOGÊNICAS DOS OLHOS E CÂNCER
[00208] As formulações farmacêuticas da presente invenção que compreendem proteínas de fusão do receptor de VEGF (por exemplo, qualquer uma das formulações farmacêuticas A-KKKK) podem ser uti- lizadas no tratamento ou prevenção de qualquer distúrbio angiogênico ocular por administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de fusão de receptor de VEGF em uma formulação da presente invenção a um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, por injeção intravítrea. Os distúrbios oculares angiogênicos no presente documento se referem a qualquer doença ocular que seja causada ou associada ao crescimento ou proliferação de vasos san- guíneos e/ou vazamento de vasos sanguíneos. Exemplos não limitati- vos de distúrbios oculares angiogênicos que são tratáveis ou evitáveis usando as formulações e métodos no presente documento, incluem: e degeneração macular relacionada à idade (úmida), e edema macular, e edema macular após a oclusão da veia retiniana, e oclusão da veia retiniana (RVO), e oclusão da veia central da retina (CRVO), e obstrução da veia retiniana do ramo (BRVO) e edema macular diabético (DME), e neovascularização coroidal (CNV),
e neovascularização da íris, e glaucoma neovascular, + fibrose pós-cirúrgica no glaucoma, e vitreorretinopatia proliferativa (PVR), e neovascularização do disco óptico, e neovascularização da córnea, e neovascularização retinal, e neovascularização vítrea, e pannus, e pterígio, e retinopatia vascular, e retinopatias diabéticas (por exemplo, retinopatia diabética não proliferativa (por exemplo, caracterizada por um nível de Escala de Gravidade de Retinopatia Diabética (DRSS) de cerca de 47 ou 53) ou retinopatia diabética proliferativa; por exemplo, em um indivíduo que não sofre de DME) e e retinopatia diabética em paciente com edema macular di- abético (EMD).
[00209] As formulações farmacêuticas da presente invenção que compreendem proteínas de fusão do receptor de VEGF (por exemplo, qualquer uma das formulações farmacêuticas A-KKKK) podem ser usadas no tratamento ou prevenção de qualquer câncer por adminis- tração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de proteína de fu- são de receptor de VEGF em uma formulação de a presente invenção a um indivíduo em necessidade do mesmo, por exemplo, por injeção intramuscular, intratumoral, subcutânea ou intravenosa. Os cânceres incluem aqueles cujo crescimento, proliferação, sobrevivência e/ou metástase depende, até certo ponto, da angiogênese. Em uma moda- lidade da invenção, o câncer é câncer colorretal, câncer de pulmão, câncer de pele, câncer de mama, câncer de cérebro, câncer de estô-
mago, câncer renal, câncer de próstata, câncer de fígado ou câncer de pâncreas.
[00210] Assim, a presente invenção fornece métodos para tratar ou prevenir um distúrbio ocular angiogênico em um indivíduo em necessi- dade do mesmo que compreendem administrar uma quantidade tera- peuticamente eficaz de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) (por exemplo, cerca de 4, 6 ou 8,0, 8,1, 8,4 ou 8,5 mg), por exemplo, em uma formulação farmacêutica de acordo com a presente invenção, intraocularmente, por exemplo, no vítreo, de um olho do indivíduo. Em uma modalidade da invenção, ambos os olhos são administrados com a proteína de fusão de receptor de VEGF. Em uma modalidade da invenção, doses terapeuticamente efi- cazes da proteína de fusão de receptor de VEGF são administradas a cada 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 7 semanas, 8 semanas, 9 semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 se- manas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas, 17 se- manas 18 semanas, 19 semanas, 20 semanas, 21, semanas, 22 se- manas, 23 semanas ou 24 semanas. Em uma modalidade da inven- ção, tais métodos de tratamento ou prevenção são feitos na ausência de aumentos significativos na pressão arterial (sistólica e/ou diastólica) e/ou no desenvolvimento de hipertensão (por exemplo, Grau 1, Grau 2 ou Grau 3) e/ou pressão intraocular anormalmente alta no indivíduo. Em uma modalidade da invenção, o método inclui a etapa de, após a dita administração, monitorar o indivíduo quanto a aumentos significa- tivos na pressão arterial (sistólica e/ou diastólica) e/ou o desenvolvi- mento de hipertensão (por exemplo, Grau 1, Grau 2 ou Grau 3) e/ou pressão intraocular anormalmente alta.
MODOS DE ADMINISTRAÇÃO
[00211] As formulações farmacêuticas da presente invenção que incluem uma proteína de fusão de receptor de VEGF podem ser admi-
nistradas de acordo com sistemas de distribuição conhecidos clinica- mente aprovados. Em modalidades no presente documento, esses sis- temas de entrega podem incluir administrar as formulações ao pacien- te por injeção ocular, intraocular, intracoroidal, intravítrea ou subcon- juntival. Alternativamente, as formulações farmacêuticas da presente invenção também podem ser administradas ao paciente por vias tópi- cas, por exemplo, colírios, géis para os olhos, unguentos para os olhos e semelhantes. Outras vias de distribuição possíveis para as formula- ções incluídas no presente documento incluem intradérmica, intramus- cular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intranasal, epidural e oral.
[00212] Em uma modalidade da invenção, a injeção intravítrea de uma formulação farmacêutica da presente invenção inclui a etapa de perfurar o olho com uma seringa e agulha (por exemplo, agulha de in- jeção de calibre 30) contendo a formulação e injetar a formulação (por exemplo, menos de ou igual a cerca de 100 microlitros; cerca de 40, 50, 55, 56, 57, 57,1, 58, 60, 70 ou 75 microlitros) no vítreo do olho (por exemplo, com um volume suficiente para entregar uma quantidade te- rapeuticamente eficaz de proteína de fusão de receptor de VEGF, por exemplo, de cerca de 4, 5, 6, 7, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8 ou 8,9, 9, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF). Opcionalmente, o método inclui as etapas de administração de um anestésico local (por exemplo, proparacaína, lidocaína ou tetra- caína), um antibiótico (por exemplo, uma fluoroquinolona), antisséptico (por exemplo, iodopovidona) e/ou um agente dilatador da pupila para o olho sendo injetado. Em uma modalidade da invenção, um campo es- téril ao redor do olho a ser injetado é estabelecido antes da injeção. Em uma modalidade da invenção, após a injeção intravítrea, o indiví- duo é monitorado para elevações na pressão intraocular e/ou pressão sanguínea. Em uma modalidade da invenção, o outro olho também é injetado pelo mesmo procedimento.
QUANTIDADES DE PROTEÍNA DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEGF A SEREM ADMINISTRADAS
[00213] Cada dose de proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração a um indivíduo ao longo de um tratamento pode conter a mesma ou substancialmente a mesma quantidade de proteína de fusão. Alternativamente, a quantidade de qualquer dose pode ser diferente ou variável ao longo de um curso de tratamento.
[00214] Uma quantidade eficaz ou terapeuticamente eficaz de pro- teína de fusão de receptor de VEGF para o tratamento ou prevenção do câncer (por exemplo, que é mediado, pelo menos em parte, pela angiogênese) ou um distúrbio ocular angiogênico refere-se à quanti- dade da proteína de fusão de receptor de VEGF suficiente para causar a regressão, estabilização ou eliminação do câncer ou distúrbio ocular angiogênico, por exemplo, pela regressão, estabilização ou eliminação de um ou mais sintomas ou indícios do câncer ou distúrbio ocular an- giogênico por qualquer grau clinicamente mensurável, por exemplo, com relação a um distúrbio ocular angiogênico, causando uma redu- ção ou manutenção do escore de gravidade da retinopatia diabética (DRSS), melhorando ou mantendo a visão (por exemplo, na melhor acuidade visual corrigida, por exemplo, medida por um aumento nas letras ETDRS), aumentando ou mantendo o campo visual e/ou redu- zindo ou manter a espessura retiniana central e, em relação ao câncer, interromper ou reverter o crescimento, sobrevivência e/ou metástase de células cancerosas no indivíduo. Em uma modalidade da invenção, uma quantidade eficaz ou terapeuticamente eficaz de proteína de fu- são de receptor de VEGF para tratar ou prevenir um distúrbio ocular angiogênico é de cerca de 0,5 mg a cerca de 10 mg ou 0,5 mg a cerca de 20 mg por dose, incluindo: cerca de 0,5 mg ou Mais; ou cerca de 2 mg ou mais, por exemplo, cerca de 2,1 mg; 2,2 mg; 2,3 mg; 2,4 mg;
2,5 mg; 2,6 mg; 2,7 mg; 2,8 mg; 2,9 mg; 3,0 mg; 3,1 mg; 3,2 mg; 3,3 mg; 3,4 mg; 3,5 mg; 3,6 mg; 3,7 mg; 3,8 mg; 3,9 mg; 4,0 mg; 4,1 mg; 4,2 mg; 4,3 mg; 4,4 mg; 4,5 mg; 4,6 mg; 4,7 mg; 4,8 mg; 4,9 mg; 5,0 mg; 5,1 mg; 5,2 mg; 5,3 mg; 5,4 mg; 5,5 mg; 5,6 mg; 5,7 mg; 5,8 mg; 5,9 mg; 6,0 mg; 6,1 mg; 6,2 mg; 6,3 mg; 6,4 mg; 6,5 mg; 6,6 mg; 6,7 mg; 6,8 mg; 6,9 mg; 7,0 mg; 7,1 mg; 7,2 mg; 7,3 mg; 7,4 mg; 7,5 mg; 7,6 mg; 7,7 mg; 7,8 mg; 7,9 mg; 8,0 mg; 8,1 mg; 8,2 mg; 8,3 mg; 8,4 mg; 8,5 mg; 8,6 mg; 8,7 mg; 8,8 mg; 8,9 mg; 9 mg; 9,1 mg; 9,2 mg; 9,3 mg; 9,4 mg; 9,5 mg; 9,6 mg; 9,7 mg; 9,8 mg; 9,9 mg, 10,0 mg, 10,1 mg; 10,2 mg; 10,3 mg; 10,4 mg; 10,5 mg; 10,6 mg; 10,7 mg; 10,8 ma; 10,9 mg; 11 mg; 11,1 mg; 11,2 mg; 11,3 mg; 11,4 mg; 11,5 mg; 11,6 mg; 11,7 mg; 11,8 mg; 11,9 mg; 12 mg; 12,1 mg; 12,2 mg; 12,3 mo; 12,4 mg; 12,5 mg; 12,6 mg; 12,7 mg; 12,8 mg; 12,9 mg; 13 mg; 13,1 mg; 13,2 mg; 13,3 mg; 13,4 mg; 13,5 mg; 13,6 mg; 13,7 mg; 13,8 ma; 13,9 mg; 14 mg; 14,1 mg; 14,2 mg; 14,3 mg; 14,4 mg; 14,5 mg; 14,6 mg; 14,7 mg; 14,8 mg; 14,9 mg; 15 mg; 15,1 mg; 15,2 mg; 15,3 ma; 15,4 mg; 15,5 mg; 15,6 mg; 15,7 mg; 15,8 mg; 15,9 mg; 16 mg; 16,1 mg; 16,2 mg; 16,3 mg; 16,4 mg; 16,5 mg; 16,6 mg; 16,7 mg; 16,8 ma; 16,9 mg; 17 mg; 17,1 mg; 17,2 mg; 17,3 mg; 17,4 mg; 17,5 mg; 17,6 mg; 17,7 mg; 17,8 mg; 17,9 mg; 18 mg; 18,1 mg; 18,2 mg; 18,3 ma; 18,4 mg; 18,5 mg; 18,6 mg; 18,7 mg; 18,8 mg; 18,9 mg; 19 mg; 19,1 mg; 19,2 mg; 19,3 mg; 19,4 mg; 19,5 mg; 19,6 mg; 19,7 mg; 19,8 ma; 19,9 mg; ou 20 mg. Em uma modalidade da invenção, uma quantidade eficaz ou terapeuticamente eficaz de proteína de fusão de receptor de VEGF para o tratamento ou prevenção do câncer é de cerca de 4 mg/kg (por exemplo, por via intravenosa). Essa dose pode ser admi- nistrada, por exemplo, a cada 2 semanas.
[00215] Em uma modalidade da invenção, uma proteína de fusão de receptor de VEGF é administrada em um volume suficiente para entregar a dose desejada de proteína de fusão, por exemplo, como discutido acima. Em uma modalidade da invenção, o volume distribuí- do (por exemplo, para tratar ou prevenir um distúrbio ocular angiogêni- co, por exemplo, por injeção intravítrea) é menor ou igual a cerca de 100 microlitros (por exemplo, cerca de qualquer um dos seguintes vo- lumes: 25 microlitros; 26 microlitros; 27 microlitros; 28 microlitros; 29 microlitros; 30 microlitros; 31 microlitros; 32 microlitros; 33 microlitros; 34 microlitros; 35 microlitros; 36 microlitros; 37 microlitros; 38 microli- tros; 39 microlitros; 40 microlitros; 41 microlitros; 42 microlitros; 43 mi- crolitros; 44 microlitros; 45 microlitros; 46 microlitros; 47 microlitros; 48 microlitros; 49 microlitros; 50 microlitros; 51 microlitros; 52 microlitros; 53 microlitros; 54 microlitros; 55 microlitros; 56 microlitros; 57 microli- tros; 58 microlitros; 59 microlitros; 60 microlitros; 61 microlitros; 62 mi- crolitros; 63 microlitros; 64 microlitros; 65 microlitros; 66 microlitros; 67 microlitros; 68 microlitros; 69 microlitros; 70 microlitros; 71 microlitros; 72 microlitros; 73 microlitros; 74 microlitros; 75 microlitros; 76 microli- tros; 77 microlitros; 78 microlitros; 79 microlitros; 80 microlitros; 81 mi- crolitros; 82 microlitros; 83 microlitros; 84 microlitros; 85 microlitros; 86 microlitros; 87 microlitros; 88 microlitros; 89 microlitros; 90 microlitros; 91 microlitros; 92 microlitros; 93 microlitros; 94 microlitros; 95 microli- tros; 96 microlitros; 97 microlitros; 98 microlitros ou 99 microlitros).
[00216] Em uma modalidade da invenção, a formulação é adminis- trada (por exemplo, para tratar ou prevenir um distúrbio ocular angio- gênico, por exemplo, por injeção intravítrea) em um volume que é cer- ca de 60 microlitros ou menos, cerca de 70 microlitros ou menos ou cerca de 75 microlitros ou menos ou cerca de 100 microlitros ou me- nos. Por exemplo, em uma modalidade da invenção, cerca de 2, 4,6, 8,0, 8,1, 8,0 a 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8 ou 8,9, 9,0 ou 10 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF é administrado em cerca de 50, 60, 70 ou 75 microlitros.
[00217] O escopo da presente invenção também abrange métodos para entregar 0,5 ou 2 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, para tratar ou prevenir um distúrbio ocular angiogênico, por exemplo, por injeção intravítrea) na formulação farmacêutica da presente invenção em um baixo volume, tal menos de 50 ul (por exemplo, cerca de 1, 5, 10, 17, 17,5, 18, 18,5, 20, 30, 40 ou 45 ul).
[00218] A presente invenção também inclui uma composição inclu- indo ou consistindo ou consistindo essencialmente em um "volume de dosagem única" da formulação farmacêutica da presente invenção, ou seja, um volume contendo uma única dose de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept) em uma formulação far- macêutica da presente invenção (por exemplo, cerca de 50 ul ou 60 ul, 70 ul ou 75 ul ou qualquer volume que contenha cerca de 4, 6, 8 ou 10 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF). Conforme discutido abaixo, um recipiente (por exemplo, frasco ou dispositivo de injeção) compreendendo um único volume de dosagem, opcionalmente incluin- do um pequeno volume de enchimento excessivo de formulação, tam- bém faz parte da presente invenção.
RECIPIENTES E DISPOSITIVOS DE INJEÇÃO
[00219] “Formulações de proteína de fusão de receptor de VEGF de alta concentração de acordo com modalidades no presente documento (por exemplo, qualquer uma das formulações A-KKKK) podem ser pré- embaladas ou pré-carregadas em vários recipientes úteis e dispositi- vos de injeção. Assim, a presente invenção inclui recipientes e disposi- tivos de injeção que contêm tais formulações. Em uma modalidade no presente documento, o recipiente é um frasco que pode ser estéril. Em outra modalidade no presente documento, o recipiente é um tubo de ensaio que pode ser estéril. Em uma modalidade da invenção, um dis- positivo de injeção (que pode ser estéril) é uma seringa (por exemplo, uma seringa pré-cheia ou autoinjetor). Em uma modalidade da inven- ção, o dispositivo de injeção é um implante intravítreo, por exemplo,
um implante intravítreo recarregável.
[00220] Uma seringa "pré-cheia" é uma seringa que é preenchida com uma formulação da presente invenção antes da venda ou uso pe- lo médico ou paciente.
[00221] "Estéril" no presente documento se refere a asséptico ou isento de substancialmente todos ou todos os micro-organismos vivos e esporos dos mesmos.
[00222] As seringas, tal como aqui utilizadas, incluem barris feitos, por exemplo, de vidro ou polímero, por exemplo, ciclo-olefina conforme descrito na Publicação de Patente nº US 2017/0232199, incorporada no presente documento para todos os efeitos, um êmbolo e uma agu- lha.
[00223] Recipientes e dispositivos de injeção podem ser revestidos com silicone (por exemplo, óleo de silicone ou silicone cozido (por exemplo, <40 ug ou <100 ug)).
[00224] Em uma modalidade da invenção, um recipiente ou disposi- tivo de injeção é substancialmente livre de metal ou substancialmente livre de tungstênio ou com baixo teor de tungstênio.
[00225] Em uma modalidade da invenção, a seringa contém uma ou mais graduações de linha de dosagem e/ou é um sistema de dosagem de dose.
[00226] Recipientes de acordo com modalidades no presente do- cumento podem conter as formulações de proteína de fusão de recep- tor de VEGF de alta concentração. Em alguns aspectos, o recipiente ou dispositivo de injeção pode incluir um rótulo indicando as indica- ções de uso. Em alguns casos, o recipiente ou dispositivo de injeção no presente documento pode incluir bulas com instruções de uso con- forme descrito ao longo deste relatório descritivo.
[00227] Em outras modalidades, um volume que contém uma dose única ou doses múltiplas (por exemplo, 2 ou mais de 2) de uma proteí-
na de fusão de receptor de VEGF de alta concentração (por exemplo, em que a dose é 2 mg, 4 mg, 6 mg, 8 mg ou 10 mg de proteína de fu- são de receptor de VEGF), como descrito acima, podem ser pré- embalados em um recipiente ou dispositivo de injeção, por exemplo, uma seringa estéril, por exemplo, para armazenamento até o uso. Em um exemplo, o volume no recipiente inclui uma dose única de proteína de fusão de receptor de VEGF, opcionalmente incluindo ainda uma pequena quantidade de volume de enchimento excessivo. As seringas pré-carregadas estéreis podem ser mantidas em condições de arma- zenamento (por exemplo, 2 ºC a 8 ºC), por exemplo, por até 12 meses, 24 meses ou 36 meses. O enchimento excessivo é um volume em ex- cesso que deve ser suficiente para permitir a retirada e/ou administra- ção do volume adequado. Em uma modalidade da invenção, o recipi- ente tem um volume de dosagem única ou volumes de dosagem múl- tipla e cerca de 5% a 10% do volume de enchimento excessivo.
[00228] Os tamanhos de seringa podem ser, por exemplo, 0,3 cc, 0,5 cc ou 1 cc, por exemplo. As seringas estéreis normalmente inclu- em uma agulha útil para injeção ocular, normalmente cerca de 12,7 milímetros (7 polegada), ou 12,5 mm a 16 mm de comprimento, e po- dem ser calibre 29, calibre 30, calibre 31, calibre 32 ou calibre 33 com base no paciente e no especialista de preferência em cuidados de sa- úde. Outros comprimentos e medidores de agulha podem ser usados, desde que a agulha seja eficaz para realizar a injeção intravítrea.
[00229] Embora a invenção tenha sido particularmente mostrada e descrita com referência a uma série de modalidades, deve ser enten- dido por aqueles versados na técnica que mudanças na forma e nos detalhes podem ser feitas nas várias modalidades aqui divulgadas sem se afastar do espírito e do escopo da invenção e que as várias modalidades divulgadas no presente documento não se destinam a atuar como limitações ao escopo das reivindicações.
FORMULAÇÕES ADICIONAIS
[00230] A presente invenção inclui as seguintes formulações que compreendem mais do que 40 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (por exemplo, aflibercept ou conbercept) e: (a) um tampão incluindo um sal de histidina (por exemplo, HCI de histidina ou acetato de histidina, por exemplo, 10 mM a 50 mM) e tendo pH variando de 5,7 a 6,2; um açúcar (por exemplo, mais de 6%, mas não mais de 10%), como sacarose, trealose, manitol ou gli- cose; um tensoativo selecionado a partir do grupo que consiste em po- lissorbato 20 e polissorbato 80 (por exemplo, 0% a 0,1%); (b) um tampão que contém histidina, tal como L-histidina/ cloridrato de histidina (por exemplo, 10 mM); um tensoativo não iônico, como polissorbato 20 (por exemplo, 0,03%), um sal inorgânico, como NaCl (por exemplo, 40 mM) e um carboidrato, como sacarose (por exemplo, 5%), por exemplo, pH 6,0 a 6,5 (por exemplo, 6,2 ou 6,5); (c) ácido cítrico (por exemplo, 5 mM, 10 mM, 15 mM, 20 MM, 25 mM ou 30 mM), sacarose (por exemplo, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7 %, 8%, 9% ou 10%), arginina (por exemplo, 5 mM, 10 mM, 15 MM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM ou 50 mM ou 100 mM), e polissorbato 20 (por exemplo, 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% ou 0,10%); (d) um tampão tal como fosfato, histidina, acetato, succina- to, citrato, glutamato e/ou lactato (por exemplo, a 5 a 20 ou 5 a 50 mM); um tensoativo não iônico, como um polissorbato (por exemplo, PS20 ou PS80), um polietilenoglicol dodecil éter, um poloxâmero, 4- (1,1,3,3-Tetrametilbutil)fenil-polietilenoglicol, um alquilssacarídeo ou um alquilglicosídeo, um agente tonicificante, como um poliol ou um aminoácido, por exemplo, sacarose, trealose, sorbitol, manitol, glicerol, prolina, arginina, metionina, glicina ou lisina, em que a formulação tem uma osmolalidade final de cerca de 300 mOsm/kg, e em que a con-
centração do ânion cloreto é inferior a cerca de 10 mM; pH 5,0 a 6,5; ou (e) fosfato de sódio a 10 mM, cloreto de sódio a 40 mM, po- lissorbato 20 a 0,03% e sacarose a 5%, pH 6,2.
EXEMPLOS
[00231] Os exemplos a seguir são fornecidos apenas para fins ilus- trativos e não se destinam a limitar o escopo da invenção. Houve ten- tativas de garantir precisão em relação aos números usados (por exemplo, quantidades, temperatura etc.), porém, alguns erros e desvi- os experimentais devem ser considerados. Quaisquer formulações apresentadas nestes exemplos fazem parte da presente invenção.
[00232] Nestes exemplos, quando um experimento é conduzido en- tre 2 a 8 ºC, a temperatura é direcionada para 5 ºC com uma tolerân- cia de variação de + 3 ºC. EXEMPLO 1: FORMULAÇÕES DE PROTEÍNA DE FUSÃO DE RE- CEPTOR DE VEGF 80 MG/ML MANTÊM A POTÊNCIA, ESTABILIDADE FÍSICA E CARGA AO LONGO DE UM PERÍODO DE 36 MESES.
[00233] Uma série de quatro formulações diferentes com 80 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF (aflibercept) foram testadas quanto à potência de longo prazo, estabilidade física e desenvolvimen- to de variantes de carga. A lista de ingredientes de cada uma das qua- tro formulações é mostrada na Tabela 1-1. Cada formulação foi avalia- da quanto à formação de espécies HMW da proteína de fusão de re- ceptor de VEGF ao longo do armazenamento em 2 ºC a 8 ºC por 36 meses, bem como para a porcentagem das espécies principais por SE-UPLC. Cada formulação que contém proteína de fusão de receptor de VEGF também foi avaliada usando focagem isoelétrica capilar ima- geada ao longo do mesmo curso de tempo e temperatura. Finalmente, a potência de cada formulação foi testada por bioensaio ao longo do mesmo período de tempo e temperatura.
TABELA 1-1. FORMULAÇÕES QUE CONTÊM PROTEÍNA DE FU-
SÃO DE RECEPTOR DE VEGF [omaação [ESET] Esso | MEmNS | Soco [Monitoria [ e FIBRA a 62 | ER o nu a ça ED a a e2 Fe os 62 TABELA 1-2. % DE ESPÉCIES HMW
TSF FE NA
B D Formulação | Formulação | Formulação | Formulação 1 2 3 4 een a8ºc 7 6 16 13 || aa a aço o aa gg ao ha das — l20 —(a1 | 160 lo |l28 |j|20 23 || oa aa Da 120 18 —f3o | 180 32 132 268 |25 | 240 136 [36 131 lg | TABELA 1-3. % DE PICO PRINCIPAL TE ra pra pre]
B H D G 1 2 3 4 aee) | | | | a8ºC oo loes fot [og14 [ogg | 4 ore fogo [og4 [og3 | lor7z jorg jog2 jogr | sao lor7 or5 oego [oeo | 60 lor1 for2 [org [or7z | so loso oro og jors | 120 lor2 foro | 180 Jos8s fosg [ora [or5 | 240 jos5 joga jogg jorr | 1860 —los7z los7z [o68 lo68 |
TABELA 1-4. % DE ESPÉCIES ÁCIDAS | emgasão [Formação | Fomp ação | Fomareção |
B H D G ia] TESS Fometo [Fem |Fomigção 1 2 3 4 aee | a8C ro 158 [151 Jo j152 | 2 1:56 j1w9 |NP jiw60 | 240 160 [171 162 fio [360 169 [174 [172 l176 | TABELA 1-5. % DE ESPÉCIE PRINCIPAL ge rg ge rm]
B H D osaegae] ES [mário remate [rominção 1 2 3 4 aee E a8C oo À i7es j7o1 1792 799 | Mao 73 73 NR 77 | [240 793 ——|785 795 793 | [360 786 |781 |787 [786
[00234] Os dados são mostrados nas Figuras 1A, 1B, ICe ID. À Figura 1A mostra a porcentagem de espécies de proteína de fusão de receptor de VEGF HMW formadas para cada uma das quatro formula- ções. A armadilha de VEGF mostra uma taxa ligeiramente mais lenta de formação de espécies HMW quando a formulação é à base de his- tidina, em comparação com o fosfato de sódio. Conforme mostrado na Figura 1A, a % de espécies HMW após armazenamento em 2 º a 8 ºC por 36 meses aumentou 2,6% nas formulações de fosfato de sódio (Formulações 1 e 2), em comparação com o aumento de 1,6 a 1,9% nos tampões de histidina (Formulações 3 e 4). Os dados foram confir- mados, como mostrado na Figura 1B, onde SE-UPLC foi usado para identificar a porcentagem da principal espécie de proteína de fusão de receptor de VEGF presente ao longo do mesmo período de tempo e faixa de temperatura. Como um ponto de comparação, os ensaios fo- ram executados na formulação EYLEAG atual (40 mg/ml) com fosfato de sódio a 10 mM, que mostrou um aumento de 1,2% na % de espé-
cies HMW após armazenamento em 2 º a 8 ºC por 36 meses (não mostrado). Além disso, cada uma das quatro formulações de 80 mg/ml de armadilha de VEGF foi testada quanto à potência e comparada com a atividade EYLEAG (não mostrada). A potência foi mantida por bioen- saio para todas as quatro formulações, bem como EYLEAG. Estes da- dos mostram que as formulações no presente documento são capazes de manter a estabilidade da proteína de fusão de receptor de VEGF comparável a EYLEAG.
[00235] Com referência às Figuras 1C e 1D, a porcentagem de va- riantes de carga armadilha de VEGF formadas após armazenamento em 2 º a 8 ºC por 36 meses também foi testado. A Figura 1C mostra que a armadilha de VEGF nas Formulações 1 a 4 não mostrou ne- nhuma mudança significativa na porcentagem de espécies ácidas ao longo de 36 meses, e a Figura 1D mostra a mesma descoberta para a porcentagem de espécies principais ao longo de 36 meses. A desco- berta de que a armadilha de VEGF manteve as espécies de variantes de carga durante o armazenamento mostra que a qualidade da arma- dilha de VEGF TRAP foi mantida, e processos como desaminação, formação de piroglutamato de terminal N, isomerização, agregação, etc. não ocorreram ao longo dos parâmetros de armazenamento.
[00236] Os dados no Exemplo 1 mostram que as formulações com o dobro da concentração de armadilha de VEGF encontrada em EYLEAGO podem manter a estabilidade física, qualidade e potência ao longo de 36 meses a 2 º a 8 ºC. Além disso, embora todas as quatro formulações tenham mostrado potência semelhante ao longo do perí- odo, as formulações contendo histidina resultaram em um aumento ligeiramente menor na formação de espécies HMW (sinal de degrada- ção de proteína), mostrando que, em algumas circunstâncias, a histi- dina pode ser um tampão de escolha. No entanto, os resultados para os tampões à base de histidina e fosfato mostraram excelente estabili-
dade ao longo do estudo. EXEMPLO 2: ESTABILIDADE DE ARMADILHA VEGF 150 MG/ML EM FORMULAÇÕES DE TAMPÃO DE FOSFATO DE SÓDIO/SACAROSE.
[00237] Duas formulações de fosfato de sódio foram testadas para estabilidade física de 150 mg/ml armadilha de VEGF (aflibercept) a 37ºC por 28 dias. A lista de ingredientes de cada uma das duas formu- lações é mostrada na Tabela 2-1. Cada formulação foi avaliada quanto à formação de espécies HMW ao longo do armazenamento a 37ºC para os 28 dias, bem como para a porcentagem das espécies princi- pais por SE-UPLC. TABELA 2-1. PROTEÍNA DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEGF (A- FLIBERCEPT) QUE CONTÉM FORMULAÇÕES PARA O EXEMPLO 2 Formulação VEGFT Fosfato de Sacarose | Polissorbato arginina (mg/ml) (mM) (plv) 20 (pv) (mM) EI soa NA [62 | TABELA 2-2. % DE ESPÉCIES HMW Fosfato de sódio a 10 Fosfato de sódio a 10 mM, mM, Sacarose a 8%, Sacarose a 8%, Polissorbato Polissorbato 20 a 20 a 0,03%, Monocioridrato de 0,03%, pH 6,2 L-arginina a 50 mM, pH 6, | | rostato — UU jrFostatoaentta | [ias a ae ao a A Mo as o | PBLo oa oBo Lao BR2 TR TABELA 2-3. % DE PICO PRINCIPAL Fosfato de sódio a 10 Fosfato de sódio a 10 mM, mM, Sacarose a 8%, Sacarose a 8%, Polissorbato 20 Polissorbato 20 a 0,03%, | a0,03%, Monocioridrato de pH 6. L-arginina a 50 mM, pH 6,2 [| lFostato — —Fosfatoarainina | Lo 0,0 97,6 98,1 93,6 o ao PL ea Ba Leo 81 las
[00238] A Figura2A mostra que não houve diferença significativa de % de espécies HMW formadas entre as duas formulações durante o armazenamento a 37 ºC por 28 dias, o que foi confirmado pela por- centagem das espécies principais por SE-UPLC (Figura 2B). Não hou- ve mudança na aparência, turbidez ou pH das duas formulações ao longo dos 28 dias (não mostrado).
[00239] Os resultados foram então comparados com as formula- ções que incluíram 40 mg/ml de EYLEAG e a Formulação 1 do Exem- plo 1 (80 mg/ml de armadilha de VEGF em tampão de fosfato de só- dio). Como esperado, as formulações de 150 mg/ml de armadilha de VEGF mostraram uma maior porcentagem de formação de espécies HMW em comparação com a formulação EYLEAG e uma porcentagem um pouco maior de formação de espécies HMW em comparação com a Formulação 1 do Exemplo 1.
[00240] Testes adicionais foram realizados em formulações que contêm armadilha de VEGF de alta concentração e as formulações que contêm histidina mostraram melhor proteção dessas moléculas do que as formulações baseadas em fosfato de sódio. Além disso, a in- clusão de cloreto de sódio em cada uma das formulações testadas re- almente causou desestabilização da armadilha de VEGF em 37 ºC. Os dados no Exemplo 2 mostram que mesmo em altas concentrações de proteína de fusão de receptor de VEGF 150 mg/ml e armazenamento em temperatura razoavelmente extrema, as formulações no presente documento fornecem excelente proteção para estabilidade física. EXEMPLO 3: A VISCOSIDADE DA FORMULAÇÃO FARMACEUTI- CAMENTE ACEITÁVEL PODE SER OBTIDA PARA 150 MG/ML DE ARMADILHA DE VEGF.
[00241] Várias formulações que contêm armadilha de VEGF (afli- bercept) foram testadas quanto ao seu comportamento de viscosidade. As formulações que têm entre 10 mg/ml a 160 mg/ml armadilha de
VEGF foram testadas na presença e ausência de vários agentes de redução de viscosidade.
[00242] A Figura 3A mostra formulações com 155 mg/ml de armadi- lha de VEGF em tampão de fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 5% e um pH de 6,2 em combinação sem sal inorgânico, arginina, lisina, cloreto de sódio e cloreto de magnésio mostraram pouca diferença na viscosidade. Em cada caso, a viscosidade foi medida em Pa's (cP) a ºC. Uma faixa de viscosidade entre cerca de 0,017 Pa':s (17 cP) (sem sal inorgânico) e 0,015 Pa:s (15 cP) (cloreto de magnésio a 100 mM) foi observada, com pouca variação entre a qual o agente de re- dução de viscosidade foi usado, ou com a presença de um agente de redução de viscosidade. A Figura 3B mostra uma série semelhante de formulações, exceto que o tampão de base é histidina 10 mM e pH 5,8. Aqui, a falta de qualquer sal inorgânico proporcionou uma formu- lação com uma viscosidade de 0,0115 Pa:s (11,5 cP) e lisina 50 mM com uma viscosidade de 0,014 Pa:s (14 cP). O tampão que contém histidina forneceu excelente viscosidade, em linha com outros injetá- veis biológicos de baixa concentração.
[00243] A Figura 3C mostra a viscosidade de armadilha de VEGF entre as concentrações de 10 mg/ml e 160 mg/ml, com fosfato de só- dio a 10 MM, sacarose a 5% a um pH de 6,2 na ausência de arginina e em cloridrato de arginina a 50 mM. A inclusão do agente de redução de viscosidade resultou em viscosidades semelhantes para todas as concentrações de armadilha de VEGF testadas. Como mostrado nas Figuras 3A e 3B, o agente de redução de viscosidade teve pouco efei- to positivo na viscosidade da formulação, mesmo em concentrações de proteína mais altas. Este é um resultado surpreendente, uma vez que arginina e outros agentes de redução de viscosidade mostraram anteriormente ter propriedades benéficas na viscosidade de proteína de alta concentração.
TABELA 3-1. FORMULAÇÕES DE VISCOSIDADE-FOSFATO (Pa':s (cP) A 20 ºC) Fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 5%, pH 6,2 viscosidade ' Arginina a 100 mM Arginina a 200 MM Lisina a 50 mM mM ' Cloreto de Magnésio a 50 100 mM ' TABELA 3-2. FORMULAÇÕES DE VISCOSIDADE-HISTIDINA (Pa:s (cP) A 20 ºC) Histidina a 10 mM, pH 5,8 Sem redutor de viscosidade Arginina a 100 mM Arginina a 200 mM Lisina a 50 mM Lisina a 200 mM Cloreto de Sódio a 50 mM Cloreto de Sódio a 100 mM Cloreto de Magnésio a 50 mM Cloreto de Magnésio a 100 mM EXEMPLO 4: O CLORIDRATO DE ARGININA MELHORA A ESTABI- LIDADE DE 150 MG/ML DE ARMADILHA DE VEGF EM FORMULA- ÇÕES DE TAMPÃO DE FOSFATO DE SÓDIO/SACAROSE.
[00244] “Duas formulações de fosfato de sódio foram testadas quan- to à estabilidade física de 150 mg/ml de armadilha de VEGF (afliber- cept) em 2 a 8 “*C por 12 meses. A lista de ingredientes de cada uma das duas formulações é mostrada na Tabela 4-1. A Formulação 2 in- clui ainda cloridrato de arginina a 50 mM. Cada formulação foi avaliada quanto à formação de espécies HMW ao longo do armazenamento a 37 ºC durante os 12 meses, bem como para a porcentagem das espé- cies principais por SE-UPLC.
TABELA 4-1. PROTEÍNA DE FUSÃO DE RECEPTOR DE VEGF (A- FLIBERCEPT) QUE CONTÉM FORMULAÇÕES PARA O EXEMPLO 3 s VEGFT | Fosfato de | Sacarose | Polissorbato Cloridrato de Formação [555 demo | om rea as | cxmneas FI (1) 150 og oo 6a o F2 (JJJJ so a a a
[00245] A Figura4A mostra que a inclusão de cloridrato de arginina a 50 mM à formulação melhorou a estabilidade física da armadilha de VEGF. Esse atributo de estabilização na armadilha de VEGF foi confir- mado na Figura 4B, onde a percentagem da espécie principal permanece mais elevada para a armadilha de VEGF na presença de cloridrato de arginina a 50 MM. Esses dados mostram que existem situações em que a adição de cloridrato de arginina fornece um efeito estabilizador à ar- madilha de VEGF armazenada. Os dados de cromatografia de exclu- são de tamanho tabulados são apresentados na Tabela 4-2 e 4-3. TABELA 4-2. % DE ESPÉCIES HMW RN aaa A Sacarose a 8%, Polissorbato | Sacarose a 8%, Polissorbato a 0,03%, pH 6,2 20 a 0,03%, Monocioridrato de L-arginina a 50 mM, pH 6,2 Lo
EEE “Cc o A a o Bo Ba Bo A BB Bo DA Bo PB Az
EP EX RR EX TABELA 4-3. % DE PICO PRINCIPAL Fosfato de sódio a 10 mM, Fosfato de sódio a 10 mM, 20 a 0,03%, pH 6,2 0,03%, Monocioridrato de L-arginina a 50 mM, pH 6,2 Lo Meses a 28 BE | 0,0 1 2,0 3,0 6,0 9,0 12,0
EXEMPLO 5: VISCOSIDADE DE 10 MG/ML A 170 MG/ML DE AR-
MADILHA DE VEGF EM TAMPÕES DE HISTIDINA E FOSFATO
[00246] A Figura5 mostrou que o tampão fosfato a 10 mM e o tam- pão histidina a 10 MM ambos tinham viscosidades altamente úteis pa- ra uma faixa de concentrações de armadilha de VEGF (aflibercept). Em concentrações mais altas de armadilha de VEGF, o tampão histi- dina mostrou uma melhora na viscosidade (em relação ao fosfato). À viscosidade foi medida a 20 ºC. EXEMPLO 6: TAURINA E ÁCIDO PROPANO SULFÔNICO FORNE- CEM ESTABILIDADE MELHORADA PARA FORMULAÇÕES DE AR- MADILHA DE VEGF DE ALTA CONCENTRAÇÃO (AFLIBERCEPT).
[00247] Um experimento foi conduzido para determinar o efeito na estabilidade da proteína com várias combinações de formulação. À Figura 6 mostra um gráfico de dispersão dinâmica de luz para formula- ções tendo em qualquer lugar de 2 mg/ml de proteína a 10 mg/ml de proteína (aflibercept). As formulações que incluíram taurina a 70 mM ou PSA a 70 mM mostraram auto-interação reduzida em concentra- ções mais altas. Esses dados indicam que taurina e PSA podem ser inclusões úteis em formulações de proteínas de alta concentração, como as que estão em questão neste caso. EXEMPLO 7: ESTUDO DE ESTABILIDADE DE LONGO PRAZO DE VÁRIAS FORMULAÇÕES QUE CONTÊM HISTIDINA.
[00248] Um total de 9 formulações diferentes de aflibercept foram testadas com várias concentrações de tampão, estabilizadores térmi- cos e sais hidrofóbicos. As 9 formulações, F1-F9, estão resumidas abaixo na Tabela 7-1.
TABELA 7-1. FORMULAÇÕES F1-F9. so | VEGFT | mpode [concentração de) Sacarose | Proline | Polissorbato 20 | Estabilizador | Concentração do. ránio 2555 5 pasmo rama aaa mes nao aos, | e po e e pe eh E] pe e e fe eee E pr e Rs Efe e ho | fes e e E E Ee eo EE pe e e fe eee E fem de e Es e kk] pen fe e e pie e E] VEGFT = armadilha de VEGF (aflibercept)
[00249] “Quatorze (14) ml de cada formulação foram combinados em tubos Falcon de 15 ml. A formulação foi então esterilizada por fil- tração usando um filtro de seringa de 0,22 uM e preenchida em fras- cos de vidro Tipo 1 de 2 ml estéreis. Oito (8) frascos foram preenchi- dos para cada formulação com volume de 0,4 ml em uma capela de fluxo laminar.
[00250] SE-UPLC (espécie de peso molecular) foi realizada em to- das as amostras para determinar a estabilidade química de cada for- mulação.
[00251] A porcentagem de espécies de HMW ao longo do tempo para cada uma das formulações F1-F9 são mostradas na Figura 7 (ver também Tabela 7-2). As Formulações F4 e F7 exibiram a menor por- centagem de espécies HMW após 4 meses a 5 ºC. Os resultados mos- traram que a adição de excipientes como arginina e prolina reduziu significativamente a taxa de % de formação de espécies HMW em formulações de armadilha de VEGF.
TABELA 7-2. ANÁLISE SE-UPLC (2 A 8 ºC) Fem BRO BM | Lo 8ºc principal principal HMW principal lo l153 loga 148 fogs2 [13 fogi | los 18 fog13 [18 jogi3 192 jogos | o 1219 for81 216 jorea 219 Jos1w5 — | ão —jl264 or36 |26 Jorôz [27 |oroo | [30 28 ort [2766 [9724 28 jort3 | [40 307 — fogos [300 [9700 311 Jogso | 50 1324 fo676 |31 Joss [328 lo672 | [60 33 Josss [324 [o6766 338 Joss | FAZ) [FSIAA) — [F6(BBB) E | Em principal principal principal 1,31 98,69 98,55 1,69 [9831 170 fog21 196 fo0804 | 1,95 98,05 97,69 97,74 2,37 97,63 97,20 97,28 2,61 97,39 97,01 97,09 2,84 97,16 96,83 3,03 [9697 344 —foss56 335 —fos6s | 3,13 FTICCO) FB (DDD) [FEB CJ o principal principal principal 1,20 98,80 98,47 1,74 98,26 98,13 97,95 2,08 97,92 2,52 2,76 97,20 2,97 3,14 96,86 3,26 EXEMPLO 8: ESTUDO DE ESTABILIDADE DE 140 MG/ML DE AR- MADILHA DE VEGF COM CONCENTRAÇÕES VARIÁVEIS DE AR- GININA.
[00252] Foi estudado o impacto da variação da concentração de arginina-HCI na estabilidade de quatro formulações de fármaco ocular de 140 mg/ml de armadilha de VEGF (aflibercept). A avaliação da es- tabilidade foi realizada na condição de armazenamento de 2 a 8 ºC. O produto de fármaco (DP) também foi incubado em condições de es- tresse (37 ºC). As quatro formulações sendo avaliadas neste estudo de estabilidade (F1-F4) são descritas na Tabela 8-1 apresentada abai- xo. TABELA 8-1. FORMULAÇÕES F1-F4 nome daramenão ms o. o E oo en so came 9º (mM) (pm 20 e FE eE
[00253] Aproximadamente 145 ml das formulações de histidina ar- madilha de VEGF de 187 mg/ml foram descongeladas. Trinta e seis (36) ml de cada formulação, com exceção de F3, foram combinados; 39 ml de F3 em massa foram combinados. Cada formulação foi esteri- lizada por filtro dentro de um LFH (capela de fluxo laminar) usando um 0,22 um Filtro de esterilização PVDF Durapore antes do enchimento. Frascos de vidro Schott tipo | de 2 ml limpos e despirogenados tampa- dos com rolhas de soro de 13 mm (S2-F451 4432/50B2-40) foram usados para realizar estudos de estabilidade.
[00254] A análise SE-UPLC das formulações foi realizada como es- tabelecido acima. As medições de % de HMW, usando SE-UPLC, em cada formulação ao longo do tempo são apresentadas na Figura 8 (AB). Veja também as Tabelas 8-2 e 8-3.
[00255] “Quando armazenadas a 5 ºC, essas formulações exibiram uma redução na taxa de formação da% de espécies HMW que foi pro- porcional à concentração de arginina-HCl. Sob estresse, no entanto, esse efeito foi revertido. As formulações, a 37 ºC, exibiram um aparen- te aumento na % de espécies de HMW proporcional à concentração de arginina-HCl. Esta propriedade tornou altamente improvável a des- coberta dos efeitos benéficos da arginina sobre o aflibercept na pre- sença de tampão de histidina. Normalmente, para o desenvolvimento de formulações na indústria de biotecnologia, o efeito de vários excipi- entes em um fármaco é inicialmente rastreado sob estresse (por exemplo, a temperatura elevada, como 37 ºC) por um curto período de tempo.
O objetivo desta abordagem é eliminar rapidamente os excipi- entes que provavelmente não terão um bom desempenho na ausência de estresse (por exemplo, em temperaturas mais baixas, como 5 ºC) por um longo período de tempo.
No presente documento, a arginina foi identificada como um excipiente útil, apesar de seu efeito na estabili- dade a 37 ºC.
Uma vez que o produto de fármaco formulado é nor- malmente armazenado por meses a 4 a 5 ºC após a fabricação, o afli- bercept em tampão de arginina e histidina seria uma formulação alta- mente valiosa para o armazenamento estável de medicamento a longo prazo.
TABELA 8-2. ANÁLISE SE-UPLC (2 A 8 ºC)
Lo AAA nem [EEE Dae 2a8ºC principal % de HMW principal % de HMW lo jo RX fog PR | los os 23 ——florse ———/21 | o az3o aro [oa Dee | Ms aa Ra jo [Ba | Ro aros 295 fornos ao esa ao foro aos | ao je 318 fosse [ano | [60 96,35 3,65 96,40 3,60 F3 (CCC ET principal % de HMW principal % de HMW 97,85 97,81 97,67 97,73 97,47 97,59 97,37 97,50 97,22 97,36 97,14 97,31 97,04 97,16 96,60 96,77
TABELA 8-3. ANÁLISE SE-UPLC (37 ºC) |Diasaarõe | prncipat | %demen púneia ade | Dias a 37 “C | principal % de HMW principal % de HMW lo for7a 97,78 93,66 93,32 [mo 8a [1035 fez — 18 210 86,64 13,08 85,69 13,82 Pao [eso [1585 Tess eso F3 (CCC FA
E principal % de HMW principal % de HMW 97,85 92,38 86,90 83,11 79,44 EXEMPLO 9: ESTABILIDADE DE ARMADILHA DE VEGF NA PRE- SENÇA DE CONTRA-ÍONS DA SÉRIE HOFMEISTER E OUTROS EXCIPIENTES.
[00256] O efeito de vários contra-íons e outros excipientes na esta- bilidade de várias formulações foi determinado. A. TRIAGEM DE CONTRA-ÍONS
[00257] Os contra-íons (por exemplo, sulfato, tiocianato e citrato) foram testados na forma de sais de sódio com formulações de alta concentração de armadilha de VEGF (aflibercept) (140 mg/ml). Além disso, outros excipientes de aminoácidos (por exemplo, glicina e lisina) também foram testados.
[00258] “Aproximadamente 42 ml de 187 mg/ml da substância de fármaco para os olhos armadilha de VEGF foram descongelados. Fo- ram preparados 50 ml de substância de fármaco formulada intermediá- ria (155,56 mg/ml), com uma concentração de 110% da substância medicamentosa formulada a 140 mg/ml e concentração de excipiente alvo (excluindo os contra-íons, glicina e lisina).
[00259] O fármaco formulado intermediário foi ainda diluído com as soluções-mãe de excipiente 0,5 M (contra-íons, glicina ou lisina) para produzir as formulações de fármaco formulado a 140 mg/ml listadas na Tabela 9-1 abaixo. Cada formulação final foi esterilizada por filtração com um filtro de 0,22 um de seringa PVDF m dentro de uma capela de fluxo laminar antes de encher frascos de vidro Schott limpos despiro- genados de 2 ml tipo | rolhados com tampas de soro de 13 mm S2- F451 4432/50 82-40 (ELN item Nº 19700004 Wash Nº O 000078949). Sessenta (60) frascos foram cheios com 0,5 ml de cada formulação. Seis (6) frascos foram preenchidos com 1,5 ml. TABELA 9-1. FORMULAÇÕES PARA TRIAGEM DE CONTRA-ÍONS Excipiente (mM) Formulação Esiaot ras [rem | Histidina a 20 mia/Pã2o : os ta/sacaross a 5%/Citrato E o Glicina a 50 MM Histidina a 20 mM/PS20 a 0,03%/Sacarose a 5%/Glicina a 50 mM Í 140 Coreto de Sódio a 50 mM Histidina a 20 mM/PS20 a 0,03%/Sacarose a 5%6/Cloreto | 149 mesmos | Histidina a20 — Cm 5%/Lisina a 50 mM Í IM B. TRIAGEM DE GLUTAMATO E ASPARTATO
[00260] Foi testada a estabilidade de formulações de alta concen- tração de armadilha de VEGF (aflibercept) (140 mg/ml) na presença de contra-íons orgânicos em combinação com cloridrato de arginina. Além disso, dois novos contra-íons (glutamato e asparato) foram testados quanto à compatibilidade com armadilha de VEGF de alta concentra- ção (em combinação e sem cloridrato de arginina). As formulações testadas estão resumidas abaixo na Tabela 9-2.
[00261] Aproximadamente 50 ml de 187 mg/ml da substância de fármaco armadilha de VEGF foram descongelados. 60 ml de substân- cia de fármaco formulada intermediária (155,56 mg/ml) com 110% da substância medicamentosa formulada a 140 mg/ml e concentração de excipiente alvo (excluindo os contra-íons, citrato,
glicina, glutamato e aspartato). O fármaco intermediário formulado foi ainda diluído com as soluções de excipiente estoque 1M (cloridrato de arginina, citrato de sódio, glicina, glutamato de sódio e aspartato de sódio) para produzir as formulações de fármaco formulado de 140 mg/ml listadas na tabela abaixo. Cada formulação final foi esterilizada por filtração com um filtro de 0,22 um de seringa PVDF dentro de uma capela de fluxo laminar antes do enchimento em frascos de vidro Schott tipo | de 2 ml limpos e despirogenados rolhados com rolhas de soro de 13 mm S2-F451 4432/50 B2-40 (ELN item Nº 19700004 Wash Nº 0000078949). Sessenta (60) frascos foram cheios com 0,5 ml de cada formulação. Seis (6) frascos foram preenchidos com 1,5 ml. TABELA 9-2. FORMULAÇÕES PARA TRIAGEM DE GLUTAMATO E
ASPARTATO Glicina a 50 mM+Cloridrato de Arginina a So mM |stisna 2 2a ssa a OaSSAacaess a SGAN | 140 Giutamato de Sódio a 50 mM +Cloriórato de Arginina a SO MM] a An asto ce agnesSdmaa o 140
[00262] O teste de viscosidade foi realizado usando um viscosíme- tro RHEOSENSE m-VROCO. Aproximadamente, 0,5 ml de amostra não diluída foram carregados em uma seringa de vidro. A amostra foi equilibrada à temperatura desejada e injetada em um chip ou célula de medição. A viscosidade foi calculada medindo-se a queda de pressão da entrada à saída, que está correlacionada ao estresse de cisalha- mento na parede do chip. Os resultados são expressos como mPas-1 ou cp. Consulte a Figura 9 e a Tabela 9-3.
[00263] O testede osmolalidade foi realizado usando um osmôme- tro de pressão de vapor VAPRO. Aproximadamente, 10 ul de amostra não diluída foram inoculados em um disco de papel. A depressão da temperatura do ponto de orvalho, uma função da pressão de vapor da solução, foi medida por meio de um termopar sensível e relatada como osmolalidade da solução. Os resultados são expressos em mmol/kg ou mOsm. Consulte a Figura 10 e a Tabela 9-3.
[00264] Espécies de alto peso molecular em certas formulações ao longo do tempo, após armazenamento a 37 ºC ou 5 ºC, também foram avaliadas por SE-UPLC. Consulte a Figura 11 (AB) e as Tabelas 9-4 e 9-5.
[00265] Os experimentos de dispersão dinâmica de luz foram reali- zados usando um DynaPro& Plate Reader Il. Aproximadamente, 100 ul de amostra não diluída foram carregados em uma placa de 96 po- ços. Foram obtidas trinta e cinco aquisições para cada poço a 25 ºC. A análise da função de autocorrelação usando regularização foi realiza- da no software DYNAMICS v7.1. Os gráficos de raio (nm) vs % de in- tensidade e % de massa vs raio (nm) gráficos foram gerados para de- rivar o raio molecular médio e os valores de % de polidispersidade (% de Pd) para cada amostra. Veja a Figura 12. TABELA 9-3. VISCOSIDADE E OSMOLALIDADE DE VÁRIAS FOR-
MULAÇÕES Sulfato de Tiocianato de | Citrato de Glicinaa | Cloreto de | Lisinaa Parâmetro testado sódio a 50 sódio a 50 mM | sódio a 40 50 mM sódio a 50 | 50mM mM(GGG) | (HHH) mM (1) (JJ) mM (KKK) | (LLL) viscosidade (cp Osmolalidade nao Citrato de ” Aspartato de | Glutamato de | sódio a 50 mM | Mr”, frei de | sódio a SO mM + | Sódio a 50 mM Sah o mM [sódio o mM aa so | Arqinina a 50 HCI de Arginina | HCI de Arqinina OCO mM(PPP) |a50mM(QQQ) |a50mM(RRR) 13,0 343 [346 —fs6 36 42 ao | TABELA 9-4. ANÁLISE SE-UPLC; % DE HMW (37 ºC) Sulfato de Tiocianato de | Citrato de ia Cloreto de sei %deHMw | SU ”. ta Glicina a 50 | SOM Lisina a (dias a 37 ºC) o 7 [86 1155 82 63 aro dr | 14 ass Pag a a a 28
TABELA 9-5. ANÁLISE SE-UPLC; % DE HMW (5 ºC)
E + 3 EXEMPLO 10: TOLERABILIDADE DE ENTREGA IVT DE ARMADI- LHA DE VEGF DE DOSE ELEVADA (140 MG/ML) EM COELHOS NORMAIS.
[00266] A terapêutica anti-VEGF, administrada via injeção intraví- trea, é atualmente o padrão de tratamento para o tratamento da dege- neração macular relacionada à idade neovascular, edema macular di- abético e doença oclusiva vascular retinal. No entanto, as injeções in- travítreas mensais ou bimestrais representam uma carga significativa de tratamento para pacientes, cuidadores e médicos. Há uma necessi- dade premente de terapias mais eficazes e duráveis na prática clínica. Este estudo é para investigar a tolerabilidade de armadilha de VEGF formulado de forma estável em altas doses (140 mg/ml, equivalente a 14 vezes da dose clínica) em olhos normais de coelho branco da Nova Zelândia.
[00267] Duas formulações de armadilha de VEGF de alta dose (afli- bercept) em tampão de histidina ou em tampão fosfato foram testadas. Três coelhos por coorte receberam 7 mg de armadilha de VEGF em 50 ul por injeção intravítrea bilateral única de cada formulação. Os sinais de inflamação ocular foram monitorados por lâmpada de fenda, tomo- grafia de coerência óptica (OCT) e angiografia de fundo no dia 1, dia 4, semana 1 e depois semanalmente até 12 semanas pós-administração intravítrea. A pressão intraocular foi medida com Tonopen antes e 10 minutos e 30 minutos após a injeção intravítrea e, em seguida, em ca- da ponto de tempo de acompanhamento. Os animais foram sacrifica- dos na semana 12.
[00268] Os olhos do coelho foram doseados com:
[00269] (1) 140 mg/ml de aflibercept, Histidina a 20 mM, Sacarose a 5%, HCI de Arginina a 50 MM, PS20 a 0,03%, pH 5,8;
[00270] ou
[00271] (2) 140 mg/ml de aflibercept, Fosfato de sódio a 10 MM, Sacarose a 5%, Cloreto de sódio a 40 mM, PS20 0,03%, pH 6,2.
[00272] Dois dos seis olhos do grupo do tampão de histidina mostraram sombras escuras no vítreo até 8 semanas após a IVT, que foram confirmadas por exame com lâmpada de fenda como catarata local devido a lesão posterior da lente, relacionado ao procedimento. Um dos 6 olhos do grupo do tampão de fosfato mostrou sombras escuras no vítreo até 8 semanas após a IVT, que foram confirmadas por exame com lâmpada de fenda como catarata local devido a lesão posterior da lente (relacionado ao procedimento).
[00273] As formulações de armadilha de VEGF de alta dose (140 mg/ml) testadas foram bem toleradas em olhos normais de coelho branco da Nova Zelândia em 12 semanas após a administração intra- vítrea única. Após uma única injeção intravítrea de 7 mg de armadilha de VEGF, não foram observados sinais de anormalidades ou inflama- ção no fundo. O vítreo estava claro e o padrão vascular da retina pare- cia normal. Não foram observados descolamento de retina, hemorragia ou alterações na cabeça do nervo óptico. Não houve alteração da pressão intraocular em comparação com a linha de base. A angiogra- fia de fluoresceína (FA) de linha de base e as imagens de OCT de olhos de coelho estão representadas na Figura 13 (A-D). As imagens de FA e OCT de curso de tempo de olhos de coelho em cada grupo de tratamento ao longo de 8 semanas estão representadas nas figuras 14, 15, 16 e 17. Os dados do olho esquerdo (OS) ou do olho direito (OD) dos coelhos 326 e 329 são mostrados.
EXEMPLO 11: AVALIAÇÃO DA ESTABILIDADE DAS FORMULA- ÇÕES UUU-BBBB
[00274] Este estudo examinou a estabilidade de 60 mg/ml e 120 mg/ml de armadilha de VEGF (aflibercept) em fosfato a 10 mM, 10% Ou sacarose a 20% (Sac.), O ou NaCl a 50 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2 quando incubado a 37 ºC por até 6 meses. As formula- ções para este estudo de estabilidade são apresentadas abaixo na Tabela 11-1. TABELA 11-1. FORMULAÇÕES UUU-BBBB Designação de [Armadilha de % de Sa- |mM NaCl Fomalção veerimen ie E Fem e ER e a Fm Rm mw EE Tm we BE mw FE Tm e = Formulação de base: fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2 Armadilha de VEGF = aflibercept
[00275] A formulação foi esterilizada por filtração com um filtro PVDF de 0,2 um em uma capela de fluxo laminar antes da distribuição.
[00276] Os frascos que contêm cada formulação foram armazena- dos a 37 ºC por 1 mês.
TABELA 11-2. RESULTADOS DA CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTO DESEMPENHO DE FASE REVERSA (RP-HPLC) Condição Incubação | % [VGFT] Formulação de armazenamento | Real de VEGFT mgiml meses) recuperado mgiml e [oo 11000 Sacarose a 10% (UUU) — |37º€ 30 mg/ml! Be BABA Sacarose a 20% (VVV) 60 mg/ml 37ºC o Jo [5890 | Sacarose a 10% (WWW) 60 mg/ml leo RE HERS Ee Sacarose a 20% (XXX) 120 mg/ml! de 37º Sacarose a 10% (AAA) 120 mg/ml de [35e EHEHE Sacarose a 20% (277 Sacarose a 10% 37ºC 100,0 120,14 TS e les lime 1,0 97,9 117,64 Sacarose a 20% 37ºC 100,0 120,55 NaCl a 50 mM (BBBB) 1,0 97,0 116,94 VGFT = Armadilha de VEGF, aflibercept TABELA 11-3. RESULTADOS DA CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ULTRA DESEMPENHO POR EXCLUSÃO DE TAMANHO (SE-UPLC) = de armazenamento | Real total de HMW total de LMW (meses) 30 mg/ml de VGFT o (ro Sacarose a 10% (UUU) ag Ag 30 mg/ml de VGFT eo ERA Sacarose a 20% (VVV) jo pao ——Jo6s6 jo 60 mg/ml de VGFT eo RAE ABA Sacarose a 10% (WWW) O Bs a 60 mg/ml de VGFT o (Gr Sacarose a 20% (000) aa ag a 120 mg/ml de VGFT ae ERA BE Sacarose a 10% (AAA) 120 mg/ml de VGFT Sameaamaa de le des dg faca e " - NaCl a 50 mM (AAAA) EEN e Ee e A acarose a o * = NaCl a 50 mM (BBBB) aa, belo ds bo VGFT = Armadilha de VEGF, aflibercept
[00277] Todas as formulações eram essencialmente livres de partí- culas por inspeção visual e medição de densidade óptica. Não houve perda significativa de proteína na recuperação por RP-HPLC após 1 mês aos 37 )ºC (Tabela 11-2) e essa tendência continuou por 6 me- ses.
[00278] A principal via de degradação para armadilha de VEGF foi a agregação sob essas condições (Figura 18 (A-B); Tabela 11-3). A es- tabilidade da armadilha de VEGF era dependente das concentrações de proteína e sacarose. As formulações com concentrações mais bai- xas de armadilha de VEGF e sacarose mais alta foram mais estáveis. Manter a mesma razão de proteína:sacarose não resultou na mesma taxa de degradação. Por exemplo, F1 e F4 têm a mesma razão de pro- teína:sacarose de 3:1, mas F4 era menos estável do que F1 devido à sua maior concentração de proteína. Tendências semelhantes foram observadas até 6 meses. EXEMPLO 12: ESTUDO DE TOXICOLOGIA INTRAVÍTREA DE DOSE
REPETIDA EM MACACOS COM DIFERENTES FORMULAÇÕES DE AFLIBERCEPT.
[00279] A segurança de várias formulações em macacos cinomolgo é avaliada neste exemplo. Um total de 7 doses intravítreas são admi- nistradas a ambos os olhos aproximadamente Q4W para os Grupos 1 a 3; um total de 3 doses intravítreas são administradas em ambos os olhos aproximadamente Q4W nos grupos 4 a 9. Uma necropsia termi- nal é realizada aproximadamente uma semana após a última dose (N = 3/sexo/grupo) com necropsia de recuperação (2/sexo/grupo) aproxi- madamente 12 semanas após a última dose
[00280] As seguintes avaliações são realizadas: e Avaliação de segurança com base em sinais clínicos, pe- sos corporais, sinais vitais, dados eletrocardiográficos (pré-dose final do tratamento e final da recuperação), medições de pressão arterial
(através do punho da cauda), patologia clínica e anatômica e Exames oculares abrangentes em intervalos regulares du- rante os intervalos de dosagem e recuperação, incluindo microscopia de lâmpada de fenda, oftalmoscopia indireta e medições de pressão intraocular e Fotografia do fundo, angiografia de fluoresceína e eletror- retinografia no pré-tratamento, durante a semana 9 do estudo (todos os grupos), semana 26 (apenas Grupos 1 a 3) e no final do período de recuperação e Amostras de sangue e vítreo (no término) para análise bi- oanalítica, análise de ADA e avaliação toxicocinética TABELA 13. SUMÁRIO DO GRUPO DE ESTUDO* Nisexo para s Vol de de d de , N Gra [user do te TITE! [Mamma ie [IH esses | Histidina a 20 mM, 50 mM de : PS20 a 0,03% 80 mg/ml de Aflibercepte em Histidi 20 mM, Arginii : Esses A a 0,03% — 140 mgíml de Aflibercepte Histidi 20 mM, - : a 5%, PS20 a 0,03% :
ESSE DR Histidina a 20 mM, Sacarose a 5 3 2 5%, PS20 a 0,03% — 140 mg/ml de Aflibercepte | Sacarose a 5%. PS20 a 0.03% Histidina a 20 mM, Glicina a a 0,03% 80 mg/ml de Aflibercepte em sm o e E 50 mM, Sacarose a 5%, PS20 a 0,03% — 140 mgiml de Aflibercepte Histidi 20 mM, Glicir 2 9 [asomM Sacaroseas%, | 5º 7 s EB ? PS20 a 0,03% * cada uma das ditas formulações faz parte da presente invenção
[00281] Espera-se que as formulações testadas em qualquer um ou mais dos Grupos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e/ou 9 serão determinadas como tendo um perfil de segurança comparável ao EYLEA em macacos ci- nomolgos, conforme medido em as avaliações discutidas acima.
EXEMPLO 13: ESTUDO DE ESTABILIDADE COM O PRODUTO AR- MADILHA DE VEGF.
[00282] Uma formulação incluindo 114,3 mg/ml de armadilha de VEGF (aflibercept) e Histidina a 10 mM, pH 5,8, sacarose a 5%, polis- sorbato 20 a 0,03%, monocloridrato de arginina a 50 mM foi preparada em um LFH (capela de fluxo laminar) usando uma esterilização de PVDF Durapore de 0,22 um filtrar antes de encher. Frascos de vidro Schott tipo | de 3 ml limpos e despirogenados foram preenchidos com 0,3 ml de Fármaco e tampados com tampas de soro de 13 mm (S2- F451 4432/50B2-40). As amostras foram analisadas em vários pontos de tempo após armazenamento a 37 ºC ou 5 ºC para pureza por cro- matografia de exclusão por tamanho (SEC) para determinar a presen- ça (%) de espécies de alto peso molecular (HMW), espécies de baixo peso molecular (LMW) e o pico principal (principal); bem como ima- gens de microfluxo, contagem de partículas líquidas HIAC (por obscu- recimento de luz) e microscopicamente para determinar a presença de partículas de vários tamanhos.
[00283] Os dados de estabilidade e pureza após armazenamento a 37 “C, 25 “Ce2a8“C são mostrados na Figura 19 (A-E). Veja tam- bém as Tabelas 13-1 a 13-4. TABELA 13-1. ANÁLISE DE PUREZA POR CROMATOGRAFIA DE EXCLUSÃO DE TAMANHO (SEC) Meses — ———[%dePrincipal [%deHMW — [%delmw =| o asas az 15X EX LA A DO 04595 ===> [88,59 11,18 0,918 Lo Meses ————— J]%dePrincipal [%deHMW — T%delmw =| o [9823 EE Po ara aa 2 ana as
TABELA 13-2. IMAGEAMENTO DE MICROFLUXO/PARTÍCULAS
SUBVISÍVEIS Meses — |>1um —J22um [25um J>1oum [225um | eo fes da je a o | andias — [128 — lie vo o ho | TABELA 13-3. MATÉRIA PARTICULADA SUBVISÍVEL MEDIDA POR OBSCURECIMENTO DE LUZ (HIACY/PARTÍCULAS SUBVISÍVEIS mes mo eo [PR = ss —p q anaas jar TABELA 13-4. ANÁLISE MICROSCÓPICA DE PARTÍCULAS SUBVI-
SÍVEIS mes mo e PRO e as EE EXEMPLO 14: ESTUDO DE ESTABILIDADE COM CONCENTRA- ÇÕES VARIÁVEIS DE ARMADILHA DE VEGF.
[00284] Foi estudado o impacto da variação da concentração de armadilha de VEGF na estabilidade de quatro formulações de fárma- cos para os olhos de armadilha de VEGF (aflibercept). As concentra- ções variaram entre 80 e 140 mg/ml. A avaliação da estabilidade foi realizada na condição de armazenamento de 2 a 8 ºC. O produto de fármaco (DP) também foi incubado em condições de estresse (37 ºC). As quatro formulações (cada uma das quais é denominada "CCC" no presente documento) sendo avaliadas neste estudo de estabilidade são descritas na Tabela 14-1 apresentada abaixo.
[00285] Aproximadamente 27 ml de cada formulação foram prepa-
rados dentro de um LFH (capela de fluxo laminar) usando um filtro de esterilização de PVDF Durapore de 0,22 um antes do enchimento. Frascos de vidro Schott tipo | de 2 ml limpos e despirogenados foram preenchidos e tampados com tampas de soro de 13 mm (S2-F451 4432/50B2-40). As amostras foram analisadas em vários pontos de tempo após armazenamento a 37 ºC ou 2 a 8 ºC para pureza por cro- matografia líquida de ultra desempenho de exclusão de tamanho (SE- UPLC) para determinar a presença (%) de espécies de alto peso mo- lecular (HMW) e o pico principal (principal).
[00286] Os dados que mostram a porcentagem de HMW após a in- cubação a 2 a 8 ºC ou 37 ºC por até 6 meses são apresentados na Figura 20 (AB). Veja também as Tabelas 14-2 e 14-3. Quando arma- zenadas a 37 ºC e 5 "ºC, essas formulações exibiram uma correlação positiva da taxa de formação de HMW com a concentração de armadi- lha de VEGF. A formulação de 140 mg/ml exibiu a maior taxa de % de formação de espécies HMW. TABELA 14-1. FORMULAÇÕES TESTADAS. Número d ” Fomiação 47 Tess [55 [nt [5 Jo mM (pv) 20 (pv) (mgiml) F1 (CCC ENE) F2 (CCC ECC 50 20 5 0,03 5,8 F4 (CCC TABELA 14-2. ANÁLISE SE-UPLC (2 A 8 ºC) 2a8"“C | principal HMW principal HMW principal HMW principal HMW mo 9790 — [210 1978 214 [9783 1217 978 215 | A st 208 aaa ares a35 o7ato 1253 98 |22 97566 244 9738 126 992 278 | Bo 9761 239 9738 —| 26 [or — 1283 Joroa —j29%6 | B5 19739 1261 9710 290 Jo6za Na | Boedsr36s 1264 97 296 9674 1326 96606 [340 |
TABELA 14-3. ANÁLISE SE-UPLC (37 ºC) qua 0,0 Jarno —j210 978 214 ——J978 (217 978 |215 | o [676 1271 8388 [1588 — [8118 [1846 7648 [2029 EXEMPLO 15: EYLEA DE DOSE ELEVADA TEM DURAÇÃO DE AÇÃO PROLONGADA NO MODELO D,L-AAA DE VAZAMENTO NE- OVASCULAR SUSTENTADO.
[00287] O efeito de um aumento de quatro vezes na dose na dura- ção da ação do aflibercept para inibir o vazamento vascular retinal crônico no modelo D,L-AAA foi determinado neste Exemplo.
[00288] Os animais utilizados foram coelhos brancos da Nova Ze- lândia 3 meses após a indução da doença DL-AAA (ácido DL-a- aminoadípico). Os grupos de tratamento foram: e Placebo (tampão de formulação) 50 mcli/olho; n = 6 olhos e Aflibercept 500 mceg/olho em 50 mcl; n = 7 olhos e Aflibercept 2 mg/olho em 50 mcl; n = 8 olhos
[00289] A formulação usada em cada grupo de tratamento foi: Histi- dina a 10 mM, sacarose a 8%, PS20 a 0,03%, pH 5,8. Os exames of- tálmicos, que foram realizados na linha de base e nas semanas 1,2, 4, 6, 7, 9, 10, 11, 13 e 18, foram de imagem de pressão intraocular (PIO), red-free (RF) (para determinar morfologia dos vasos sanguíneos), an- giografia com fluoresceína (AF; para determinar vazamento vascular), tomografia de coerência óptica (OCT; para identificar inflamação ví- trea). O soro (ADA) e o plasma (níveis do fármaco) foram coletados na linha de base e nas semanas 1,2,4,6e9.
[00290] Os dados dos exames de AF de cada grupo são apresen- tados na Figura 21. Esses dados demonstraram que a inibição do va- zamento vascular nas retinas de animais que receberam doses mais altas de aflibercept durou mais tempo do que a dos animais que rece-
beram doses mais baixas.
O número de olhos tratados nos quais a permeabilidade vascular foi completamente inibida foi significativamen- te maior no grupo de dose de 2 mg em todos os tempos de amostra- gem até 18 semanas após a dosagem.

Claims (38)

REIVINDICAÇÕES
1. Formulação farmacêutica aquosa caracterizada pelo fato de que compreende: uma proteína de fusão de receptor de VEGF, anticorpo anti- VEGF ou fragmento de ligação a antígeno ou molécula de ligação a VEGF a uma concentração de pelo menos cerca de 100 mg/ml; cerca de 5% de sacarose um tampão de histidina; e cerca de 0,03% de tensoativo; opcionalmente, em associação a um outro agente terapêu- tico; em que a formulação tem um pH de cerca de 5,0 a cerca de 6,8.
2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracteri- zada pelo fato de que é adequada para administração intravítrea.
3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ca- racterizada pelo fato de que compreende ainda sulfato de sódio, tioci- anato de sódio, glicina, NaCl, aspartato de sódio, L-arginina e/ou glu- tamato de sódio.
4. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações | a 3, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF ou anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou molécula de ligação a VEGF é: (i) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com- preende dois polipeptídeos que compreendem (1) um componente VEGFR1 que compreende os aminoácidos 27 a 129 de SEQ ID NO: 2; (2) um componente VEGFR2 que compreende os aminoácidos 130 a 231 de SEQ ID NO: 2; e (3) um componente de multimerização que compreende os aminoácidos 232 a 457 de SEQ ID NO: 2; (ii) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com-
preende dois polipeptídeos que compreendem o domínio 2 do tipo imunoglobina (lg) de um primeiro receptor de VEGF e o domínio 3 de Ig de um segundo receptor de VEGF e um componente de multimeri- zação; (iii) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com- preende dois polipeptídeos que compreendem um domínio 2 do tipo imunoglobina (Ig) de um primeiro receptor de VEGF, um domínio 3 de Ig de um segundo receptor de VEGF, um domínio 4 de lg do dito se- gundo receptor de VEGF e um componente de multimerização; (iv) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com- preende dois polipeptídeos que compreendem um domínio 2 do tipo imunoglobina (Ig) de VEGFR1, um domínio 3 de lg de um VEGFR2 e um componente de multimerização; (v) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com- preende dois polipeptídeos que compreendem um domínio 2 do tipo imunoglobina (Ig) de VEGFR1, um domínio 3 de Ig de VEGFR2, um domínio 4 de lg de VEGFR2 e um componente de multimerização; (vi) uma proteína de fusão de receptor de VEGF que com- preende dois polipeptídeos VEGFRIR2-FcAC1 (a) codificados pela sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1; ou (vii) selecionado a partir do grupo que consiste em: bevaci- zumab, ranibizumab, pegaptanib, brolucizumab, um DARPIin anti- VEGF e um anticorpo biespecífico anti- VEGF/ANG?2.
5. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações | a 4, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF ou anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou molécula de ligação a VEGF é uma proteína de fusão de receptor de VEGF selecionada a partir do grupo que consiste em: aflibercept e conbercept.
6. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi-
cações 1| a 5, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF ou anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou molécula de ligação a VEGF é uma proteína de fusão de receptor de VEGF em uma concentração de cerca de 41 a cerca de 275 mg/ml.
7. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações | a 6, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF ou anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou molécula de ligação a VEGF é uma proteína de fusão de receptor de VEGF a uma concentração de: e cerca de 100 mg/ml; e cerca de 111,5 mg/ml; e cerca de 112,0 mg/ml; e cerca de 113,3 mg/ml; e cerca de 114,3 mg/ml; e cerca de 115,6 mg/ml; e cerca de 116,3 mg/ml; e cerca de 120 mg/ml; e cerca de 133 mg/ml; e cerca de 140 mg/ml; e cerca de 150 mg/ml; e cerca de 200 mg/ml; e cerca de 250 mg/ml; e aquela que contém cerca de 4 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF em cerca de 100 ul ou menos, cerca de 70 ul ou menos, cerca de 75 ul ou menos, cerca de 50 ul ou menos ou cerca de 60 ul ou menos; e aquela que contém cerca de 6 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF em cerca de 100 ul ou menos, cerca de 70 ul ou menos, cerca de 75 ul ou menos, cerca de 50 ul ou menos ou cerca de 60 ul ou menos;
e aquela que contém cerca de 8 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF em cerca de 100 ul ou menos, cerca de 70 ul ou menos, cerca de 75 ul ou menos, cerca de 50 ul ou menos ou cerca de 60 ul ou menos; ou e aquela que contém cerca de 10 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF em cerca de 100 ul ou menos, cerca de 70 ul ou menos, cerca de 75 ul ou menos, cerca de 50 ul ou menos ou cerca de 60 ul ou menos.
8. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que: (i) a osmolalidade é de cerca de 299 a cerca de 506 mmol/kg; e/ou (ii) a viscosidade é de cerca de 0,006 a 0,015 Pa:s (6 a 15 cP) a 20 ºC.
9. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o pH é de 5,8 a 6,5.
10. Formulação, de acordo com a reivindicação 9, caracte- rizada pelo fato de que o pH é cerca de 5,8.
11. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que o tensoativo é um ten- soativo não iônico.
12. Formulação, de acordo com a reivindicação 11, caracte- rizada pelo fato de que o tensoativo não iônico é selecionado a partir do grupo que consiste em polissorbato 20, polissorbato 80, poloxâme- ro 188, polietilenoglicol 3350 e misturas dos mesmos.
13. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a histidina é cloridrato de histidina.
14. Formulação, de acordo com a reivindicação 13, caracte- rizada pelo fato de que compreende cloridrato de histidina em cerca de mM a 20 mM.
15. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que compreende um estabi- lizador térmico que é um açúcar.
16. Formulação, de acordo com a reivindicação 15, ca- racterizada pelo fato de que o açúcar é sacarose, manitol, sorbitol ou trealose.
17. Formulação, de acordo com a reivindicação 15 ou 16, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 2,5% (p/v), cerca de 5% (p/v), cerca de 8% (p/v), cerca de 10% (p/v) ou cerca de 20% (w/v) sacarose.
18. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que compreende tensoativo a uma concentração de cerca de 0,03% (p/v).
19. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que compreende o monoclio- ridrato de L-arginina.
20. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 1 a 19, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF ou anticorpo anti-VEGF ou fragmento de anticorpo ou molécula de ligação a VEGF é uma proteína de fusão de receptor de VEGF que tem menos de cerca de 3,5% de espécies de alto peso molecular imediatamente após a fabricação e purificação e/ou menor ou igual a cerca de 6% de espécies de alto peso molecular após ar- mazenamento por cerca de 24 meses a cerca de 2a 8ºC.
21. Formulação caracterizada pelo fato de que compreende os componentes em uma formulação selecionada a partir do grupo que consiste em: Formulação A: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v)
e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação B: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação C: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação D: 80 mg/ml de aflibercept, tampão baseado em histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2; Formulação E: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação F: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2.
Formulação G: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação H: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação |: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de ci- trato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação J: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2; Formulação K: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v),
com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação L: 80 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação M: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação N: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação O: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação P: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2;
Formulação Q: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação R: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação S: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação T: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação U: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v),
com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação V: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação W: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação X: 150 mg/ml de aflibercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação Y: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação Z: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 MM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação AA: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação BB: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2;
Formulação CC: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação DD: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação EE: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03%
(p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação FF: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação GG: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação HH: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação ||: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação JJ: 80 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação KK: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação LL: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação MM: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação NN: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 6,2;
Formulação OO: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v)
e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação PP: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 80 a 0,03% (p/v) e cloreto de sódio a 40 mM, com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação QQ: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação RR: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação SS: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação TT: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação UU: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de fosfato a 10 MM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação VV: 150 mg/ml de conbercept, tampão à base de citrato a 10 mM, sacarose a 8% (p/v) e polissorbato 80 a 0,03% (p/v), com um pH de 5,8 a 6,2;
Formulação WW: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e taurina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação XX: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, prolina a 4% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloridrato de arginina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação YY: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e taurina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação ZZ: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tampão à base de histidina a 10 mM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloridrato de arginina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação AAA: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8;
Formulação BBB: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 2,5% (p/v), prolina a 2,0% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8;
Formulação CCC: 80, 100, 120 ou 140 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e cloridrato de argi- nina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação DDD: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 10 MM, prolina a 4% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e PSA a 50 mM, com um pH de 5,8;
Formulação EEE: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v) e polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e sem estabilizador térmico, com um pH de 5,8;
Formulação FFF: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, fosfato de sódio a 10 MM, sacarose a 5% (p/v) e polis-
sorbato 20 a 0,03% com um pH de 6,2;
Formulação GGG: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; sulfato de sódio a 50 mM;
Formulação HHH: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; tiocianato de sódio a 50 mM;
Formulação Ill: 140 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%, polissorbato 20 a 0,03%; citrato de sódio a 40 mM;
Formulação JJJ: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%, polissorbato a 0,03%; glicina a 50 mM;
Formulação KKK: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%, polissor- bato 20 a 0,03%; cloreto de sódio a 50 mM;
Formulação LLL: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; lisina a 50 MM;
Formulação MMM: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; aspartato de sódio a 50 mM;
Formulação NNN: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; glutamato de sódio a 50 mM;
Formulação OOO: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; citrato de sódio a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM;
Formulação PPP: 140 mg/ml de proteína de fusão de re-
ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; glicina a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM;
Formulação QQQ: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; aspartato de sódio a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM;
Formulação RRR: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; histidina a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissor- bato 20 a 0,03%; glutamato de sódio a 50 mM; cloridrato de arginina a 50 mM;
Formulação SSS: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF; His a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; cloridrato de L-arginina a 10 MM;
Formulação TTT: 140 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF; His a 20 mM, pH 5,8; sacarose a 5%; polissorbato 20 a 0,03%; cloridrato de L-arginina a 100 mM;
Formulação UUU: 30 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação VVV: 30 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, sacarose a 20%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação WWW: 60 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação XXX: 60 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, sacarose a 20%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação YYY: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a
0,03%, pH 6,2;
Formulação ZZZ: 120 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, sacarose a 20%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação AAAA: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, sacarose a 10%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, NaCl a 50 mM, pH 6,2;
Formulação BBBB: 120 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, sacarose a 20%, fosfato a 10 mM, polissorbato 20 a 0,03%, NaCl a 50 mM, pH 6,2;
Formulação CCCC: 140 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 5%, cloreto de sódio a 40 mM, PS20 a 0,03%, pH 6,2;
Formulação DDDD: 80,0 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monoclioridrato de L-arginina a 50 mM, com um pH de 5,8;
Formulação EEEE: 120,0 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monocloridrato de L-arginina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação FFFF: 113,3 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monoclioridrato de L-arginina a 50 mM, com um pH de 5,8;
Formulação GGGG: 114,3 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF, tampão à base de histidina a 10 MM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monocloridrato de L-arginina a 50 MM, com um pH de 5,8;
Formulação HHHH: 100,0 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monocloridrato de L-arginina a 50 MM, com um pH de 5,8; e Formulação Ill: 133,3 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monoclioridrato de L-arginina a 50 mM, com um pH de 5,8; Formulação JJJJ: 150 mg/ml de aflibercept, fosfato de sódio a 10 mM, sacarose a 8% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e clori- drato de arginina a 50 mM, pH 6,2; Formulação KKKK: 114,3 mg/ml de proteína de fusão de receptor de VEGF, tampão à base de histidina a 20 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v) e monocloridrato de L-arginina a 50 MM, com um pH de 5,8; Formulação LLLL: 90 mg/ml de proteína de fusão de recep- tor de VEGF, histidina a 10 mM, sacarose a 5% (p/v), polissorbato 20 a 0,03% (p/v), pH 5,75; e Formulação MMMM: 90 mg/ml de proteína de fusão de re- ceptor de VEGF, histidina a 10 mM, sacarose a 7% (p/v), polissorbato a 0,03% (p/v), pH 5,75.
22. Formulação, de acordo com a reivindicação 21, ca- racterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF é aflibercept ou conbercept.
23. Formulação, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizada pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF tem menos do que cerca de 3,5% de espécies de alto peso mo- lecular imediatamente após a fabricação e purificação e/ou menos que ou igual a cerca de 6% de espécies de alto peso molecular após ar- mazenamento por cerca de 24 meses a cerca de 2a 8ºC.
24. Recipiente ou dispositivo de injeção caracterizado pelo fato de que compreende a formulação, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 23.
25. Recipiente ou dispositivo de injeção, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que é um frasco, seringa, autoinjetor ou seringa pré-cheia.
26. Método para preparar a formulação, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que compreende combinar os componentes da dita formulação em uma única composição.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracteriza- do pelo fato de que compreende ainda carregar um volume da formu- lação em uma seringa.
28. Formulação caracterizada pelo fato de que é o produto do método como definido na reivindicação 26 ou 27.
29. Método para administrar uma formulação, como defini- da em qualquer uma das reivindicações 1 a 22 e 27, a um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende injetar de forma intraocular a formulação no olho do indivíduo.
30. Método para tratar um distúrbio ocular angiogênico em um indivíduo em necessidade do mesmo caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma injeção intraocular de mais de cerca de 2 mg de uma proteína de fusão de receptor de VEGF ao olho do indivíduo.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracteriza- do pelo fato de que compreende administrar cerca de 4 mg, cerca de 6 mg, cerca de 8 mg ou cerca de 10 mg da proteína de fusão de recep- tor de VEGF ao olho do indivíduo.
32. Método para tratar um distúrbio ocular angiogênico em um indivíduo em necessidade do mesmo, em que o método é caracte- rizado pelo fato de que compreende injetar de forma intraocular mais do que cerca de 2 mg de proteína de fusão de receptor de VEGF em uma formulação, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 23 e 28, em um olho do indivíduo.
33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracteriza- do pelo fato de que compreende injetar cerca de 4 mg, cerca de 6 mg, cerca de 8 mg ou cerca de 10 mg da proteína de fusão de receptor de VEGF no olho do indivíduo.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 33, caracterizado pelo fato de que a injeção intraocular é uma injeção intravítrea.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 34, caracterizado pelo fato de que o distúrbio angiogênico do olho é degeneração macular relacionada à idade (úmida), edema macular, edema macular após oclusão da veia da retina, oclusão da veia da retina (RVO), oclusão da veia central da retina (CRVO), oclu- são de ramo da veia da retina (BRVO), edema macular diabético (DME), neovascularização coroidal (CNV), neovascularização da íris, glaucoma neovascular, fibrose pós-cirúrgica em glaucoma, vitreorreti- nopatia proliferativa (PVR), neovascularização do disco óptico, neo- vascularização da córnea, neovascularização da retina, neovasculari- zação vítrea, pannus, pterígio, retinopatia vascular não proliferativa, retinopatia vascular não proliferativa retinopatia e/ou retinopatia diabé- tica proliferativa.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 35, caracterizado pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF é administrada em cerca de 100 microlitros ou me- nos, cerca de 90 microlitros, cerca de 80 microlitros, cerca de 75 mi- crolitros, cerca de 70 microlitros, cerca de 60 microlitros ou cerca de 50 microlitros.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica-
ções 30 a 36, caracterizado pelo fato de que a proteína de fusão de receptor de VEGF está contida em uma formulação que compreende: sacarose a cerca de 5%; um tampão de histidina; e cerca de 0,03% de tensoativo.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 30 a 37, caracterizado pelo fato de que mais do que cerca de 2,0 mg da proteína de fusão de receptor de VEGF são injetados uma vez a cada 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 semanas.
BR112020022610-6A 2018-05-10 2019-05-10 proteína de fusão de receptor de vegf de alta concentração que contém formulações BR112020022610A2 (pt)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862669506P 2018-05-10 2018-05-10
US62/669,506 2018-05-10
US201862752127P 2018-10-29 2018-10-29
US62/752,127 2018-10-29
US201862769876P 2018-11-20 2018-11-20
US62/769,876 2018-11-20
US201962813882P 2019-03-05 2019-03-05
US62/813,882 2019-03-05
PCT/US2019/031879 WO2019217927A1 (en) 2018-05-10 2019-05-10 High concentration vegf receptor fusion protein containing formulations

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112020022610A2 true BR112020022610A2 (pt) 2021-02-09

Family

ID=66669104

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112020022610-6A BR112020022610A2 (pt) 2018-05-10 2019-05-10 proteína de fusão de receptor de vegf de alta concentração que contém formulações

Country Status (16)

Country Link
US (3) US11103552B2 (pt)
EP (2) EP3790532A1 (pt)
JP (2) JP7235770B2 (pt)
KR (1) KR20210021299A (pt)
CN (2) CN116585466A (pt)
AU (1) AU2019265005A1 (pt)
BR (1) BR112020022610A2 (pt)
CA (1) CA3099551A1 (pt)
CL (3) CL2020002872A1 (pt)
CO (1) CO2020014427A2 (pt)
JO (1) JOP20200275A1 (pt)
MA (1) MA52570A (pt)
MX (1) MX2020011848A (pt)
PH (1) PH12020551839A1 (pt)
SG (1) SG11202010684YA (pt)
WO (1) WO2019217927A1 (pt)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0710645A2 (pt) 2006-04-07 2012-03-20 The Procter & Gamble Company Anticorpos que se ligam à proteína humana tirosina fosfatase beta (hptpbeta) e usos dos mesmos
DK2718326T3 (da) 2011-06-13 2020-10-26 Csl Ltd Antistoffer mod g-csfr og anvendelser deraf
WO2013056240A1 (en) 2011-10-13 2013-04-18 Aerpio Therapeutics, Inc. Methods for treating vascular leak syndrome and cancer
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
AU2016381964B2 (en) 2015-12-30 2024-02-15 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
PT3716992T (pt) 2017-11-30 2022-08-31 Regeneron Pharma Utilização de um antagonista do vegf para tratar distúrbios oculares angiogénicos
CA3085158C (en) * 2017-12-22 2023-04-04 Samsung Bioepis Co., Ltd. Liquid composition comprising vegf antagonist
CN112203679A (zh) 2018-03-02 2021-01-08 科达制药股份有限公司 Il-6抗体及其融合构建体和缀合物
EP3790532A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High concentration vegf receptor fusion protein containing formulations
CN113164597A (zh) 2018-09-24 2021-07-23 爱尔皮奥制药公司 靶向HPTP-β（VE-PTP）和VEGF的多特异性抗体
KR102467349B1 (ko) * 2018-10-29 2022-11-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 항체 제형
US11634485B2 (en) 2019-02-18 2023-04-25 Eli Lilly And Company Therapeutic antibody formulation
CN114786731A (zh) 2019-10-10 2022-07-22 科达制药股份有限公司 治疗眼部病症的方法
JP2023502501A (ja) * 2019-11-25 2023-01-24 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 眼内血管新生のための長時間作用型ｖｅｇｆ阻害剤
MY193349A (en) 2019-12-06 2022-10-06 Regeneron Pharma Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
KR20220134595A (ko) * 2020-01-27 2022-10-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 등전 포커싱 샘플 매트릭스
KR20220001106A (ko) * 2020-06-29 2022-01-05 (주)메디톡스 고농도 항-ｖｅｇｆ 항체 제제 및 이에 사용하기 위한 항-ｖｅｇｆ 항체
AU2021399879A1 (en) * 2020-12-16 2023-06-22 CSL Innovation Pty Ltd Protein formulations and uses thereof
CN114681592A (zh) * 2020-12-31 2022-07-01 天境生物科技(杭州)有限公司 包含可溶性gp130二聚体的制剂和使用方法
JP2024507347A (ja) * 2021-02-17 2024-02-19 アレコル リミテッド Ｆｃドメインを含む操作されたタンパク質コンストラクトの水性組成物
WO2022195505A1 (en) * 2021-03-16 2022-09-22 Kashiv Biosciences, Llc Novel formulation of fusion protein
US20240182553A1 (en) * 2021-03-25 2024-06-06 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. Antibody fusion proteins and uses thereof
US20230302085A1 (en) 2021-05-17 2023-09-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Extended, High Dose VEGF Antagonist Regimens for Treatment of Angiogenic Eye Disorders
CN113289029B (zh) * 2021-05-20 2023-09-05 上海赛金生物医药有限公司 一种单克隆抗体-细胞因子融合蛋白制剂
KR20240053633A (ko) * 2021-09-06 2024-04-24 레크 파마슈티칼스 디.디. Vegf 수용체 융합 단백질을 위한 제제
JP2023135645A (ja) 2022-03-15 2023-09-28 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 血管新生性眼障害の処置のための長期高用量ｖｅｇｆアンタゴニストレジメン
WO2023177691A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Extended, high dose vegf antagonist regimens for treatment of angiogenic eye disorders
WO2023206134A1 (en) * 2022-04-27 2023-11-02 Beijing Sightnovo Medical Technology Co., Ltd Compositions and methods for eye diseases
US11723955B1 (en) * 2022-05-13 2023-08-15 Allgenesis Biotherapeutics Inc. VEGFR fusion protein pharmaceutical composition
TW202413399A (zh) * 2022-09-01 2024-04-01 澳大利亞商維吉尼克斯有限公司 醫藥組成物及其使用方法
TW202412840A (zh) * 2022-09-16 2024-04-01 大陸商齊魯製藥有限公司 一種穩定的高濃度自緩衝藥物組合物
WO2024165077A1 (zh) * 2023-02-10 2024-08-15 信达生物制药(苏州)有限公司 一种包含抗vegfa和vegfc双特异性结合蛋白的药物制剂
CN118108862B (zh) * 2024-04-29 2024-08-09 上海鼎新基因科技有限公司 抗血管新生的融合蛋白及其应用

Family Cites Families (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5580856A (en) 1994-07-15 1996-12-03 Prestrelski; Steven J. Formulation of a reconstituted protein, and method and kit for the production thereof
KR19980703876A (ko) 1995-04-14 1998-12-05 스티븐 엘. 허스트 분산성이 개선된 분말화된 약학적 조성물
AU716785B2 (en) 1995-07-27 2000-03-09 Genentech Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
US6685940B2 (en) 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE122007000021I1 (de) 1997-04-07 2007-05-24 Genentech Inc Anti-vefg Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
AUPP494798A0 (en) 1998-07-29 1998-08-20 Pacific Biolink Pty Limited Protective protein formulation
US7306799B2 (en) 1999-06-08 2007-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF inhibitors for treatment of eye disorders
US6833349B2 (en) 1999-06-08 2004-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating inflammatory skin diseases
US7303746B2 (en) 1999-06-08 2007-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating eye disorders with modified chimeric polypeptides
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
US7396664B2 (en) 1999-06-08 2008-07-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. VEGF-binding fusion proteins and nucleic acids encoding the same
US7070959B1 (en) 1999-06-08 2006-07-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified chimeric polypeptides with improved pharmacokinetic properties
BRPI0011407B8 (pt) 1999-06-08 2021-05-25 Regeneron Pharma molécula de ácido nucléico quimérica, polipeptídeo de fusão, vetor de expressão, sistema de vetor hospedeiro, e, métodos de produzir um polipeptídeo de fusão
US6586574B1 (en) 1999-08-17 2003-07-01 Nn A/S Stabilization of freeze-dried cake
SI1324776T2 (en) 2000-10-12 2018-06-29 Genentech, Inc. Concentrated protein formulations with reduced viscosity
US8703126B2 (en) 2000-10-12 2014-04-22 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
MXPA04000747A (es) 2001-07-25 2004-07-08 Protein Desing Labs Inc Formulacion farmaceutica liofilizada estable de anticuerpos igg.
US20050123509A1 (en) 2001-10-19 2005-06-09 Lehrman S. R. Modulating charge density to produce improvements in the characteristics of spray-dried proteins
US20050013867A1 (en) 2001-10-19 2005-01-20 Lehrman S. Russ Use of proton sequestering agents in drug formulations
KR100913714B1 (ko) 2001-11-08 2009-08-24 패시트 바이오테크 코포레이션 Ｉｇｇ 항체의 안정한 액상 약학 제형물
ES2311094T3 (es) 2002-02-27 2009-02-01 Immunex Corporation Composicion estabilizada de tnfr-fc que comprende arginina.
AU2004229335C1 (en) 2003-04-04 2010-06-17 Genentech, Inc. High concentration antibody and protein formulations
US7399612B2 (en) 2003-06-30 2008-07-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. VEGF-binding fusion proteins and nucleic acids encoding the same
AR046510A1 (es) 2003-07-25 2005-12-14 Regeneron Pharma Composicion de un antagonista de vegf y un agente anti-proliferativo
WO2005016369A1 (en) 2003-08-06 2005-02-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of a vegf antagonist in combination with radiation therapy
US20050196340A1 (en) 2003-08-06 2005-09-08 Jocelyn Holash Use of a VEGF antagonist in combination with radiation therapy
KR101471732B1 (ko) 2003-08-27 2014-12-16 옵쏘테크 코포레이션 안구의 혈관신생성 장애를 치료하기 위한 조합 치료법
WO2005121176A1 (fr) 2004-06-08 2005-12-22 Chengdu Kanghong Biotechnologies Co. Ltd Proteine chimerique inhibitrice d'angiogenese et utilisation associee
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
NZ598502A (en) 2004-10-21 2013-07-26 Genentech Inc Use of vegf antagonists in intraocular neovascular disease treatment
EP3195874A1 (en) 2005-03-25 2017-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vegf antagonist formulations
KR20080031684A (ko) 2005-06-14 2008-04-10 암젠 인코포레이티드 자가 - 완충성 단백질 제형
ES2390354T3 (es) 2005-07-22 2012-11-12 Amgen, Inc Liofilizados de proteínas concentrados, procedimientos y usos
WO2007014170A2 (en) 2005-07-25 2007-02-01 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for protein deaggregation
JP2009516692A (ja) 2005-11-22 2009-04-23 ワイス 免疫グロブリン融合タンパク質製剤
AU2006330858A1 (en) 2005-12-21 2007-07-05 Wyeth Protein formulations with reduced viscosity and uses thereof
FR2895258B1 (fr) 2005-12-22 2008-03-21 Aventis Pharma Sa Combinaison comprenant de la combretastatine et des agents anticancereux
KR20080098504A (ko) 2006-02-03 2008-11-10 메디뮨 엘엘씨 단백질 제제
TW200806317A (en) 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
US8216575B2 (en) 2006-03-31 2012-07-10 Chengdu Kanghong Biotechnologies Co., Ltd. Inhibition of neovascularization with a soluble chimeric protein comprising VEGF FLT-1 and KDR domains
CN100502945C (zh) 2006-03-31 2009-06-24 成都康弘生物科技有限公司 Vegf受体融合蛋白在治疗眼睛疾病中的应用
EP2364691B1 (en) 2006-06-16 2013-04-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. VEGF antagonist formulations suitable for intravitreal administration
WO2009015345A1 (en) 2007-07-25 2009-01-29 Amgen Inc. Pharmaceutical compositions comprising fc fusion proteins
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
JP5785077B2 (ja) 2008-08-05 2015-09-24 ワイス・エルエルシー 崩壊温度より高温での凍結乾燥
US8623395B2 (en) 2010-01-29 2014-01-07 Forsight Vision4, Inc. Implantable therapeutic device
AU2010263058A1 (en) 2009-06-18 2012-01-12 Wyeth Llc Lyophilized formulations for small modular immunopharmaceuticals
WO2010148321A1 (en) 2009-06-18 2010-12-23 Wyeth Llc Slow dissolution method for reconstitution of lyophilized material
WO2011008770A2 (en) 2009-07-14 2011-01-20 Biogen Idec Ma Inc. Methods for inhibiting yellow color and peroxide formation in a composition
WO2011017070A1 (en) 2009-07-28 2011-02-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for producing high concentration lyophilized pharmaceutical formulations
AU2010279569A1 (en) 2009-08-04 2012-03-01 Genentech, Inc. Concentrated polypeptide formulations with reduced viscosity
US20130029909A1 (en) 2009-09-15 2013-01-31 John Ryan Treatment of cancer
MX2012009755A (es) 2010-02-26 2012-09-12 Novo Nordisk As Composiciones que contienen anticuerpo estable.
NZ602685A (en) 2010-03-01 2014-10-31 Cytodyn Inc Concentrated protein formulations and uses thereof
MX2012012743A (es) 2010-05-03 2012-11-23 Genentech Inc Composiciones y metodos utiles para reducir la viscosidad de formulaciones que contienen proteina.
RU2013104381A (ru) 2010-07-02 2014-08-10 Дженентек, Инк. Лечение отслойки васкуляризированного пигментного эпителия терапевтическим средством против vegf
CA2807508A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Forsight Vision4, Inc. Subconjunctival implant for posterior segment drug delivery
CN103816115B (zh) * 2010-08-31 2017-06-27 成都康弘生物科技有限公司 一种含有抑制血管增生的融合蛋白的药物组合物及用途
WO2012097019A1 (en) 2011-01-13 2012-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of a vegf antagonist to treat angiogenic eye disorders
RS58825B1 (sr) 2011-04-25 2019-07-31 Icon Bioscience Inc Vođice za doziranje za injekcioni špric
JO3283B1 (ar) 2011-04-26 2018-09-16 Sanofi Sa تركيب يتضمن أفليبيرسيبت, حمض فولينيك, 5- فلورويوراسيل (5- Fu) وإرينوسيتان (FOLFIRI)
JP6176849B2 (ja) 2011-07-19 2017-08-09 中外製薬株式会社 アルギニンアミドまたはその類似化合物を含む安定なタンパク質含有製剤
EP3578203A1 (en) 2011-10-28 2019-12-11 Integritybio Inc. Protein formulations containing amino acids
GB201122408D0 (en) 2011-12-23 2012-02-08 Univ Strathclyde Method for preparing dry protein formulations
MX357393B (es) 2012-01-23 2018-07-06 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti - ang2.
US20130323242A1 (en) 2012-06-01 2013-12-05 Ophthotech Corp. Compositions comprising an anti-pdgf aptamer and a vegf antagonist
CA2874412A1 (en) 2012-06-01 2013-12-05 Ophthotech Corporation Compositions comprising an anti-pdgf aptamer and a vegf antagonist
HRP20211572T1 (hr) 2012-06-01 2022-02-04 Novartis Ag Štrcaljka
EP2863951A1 (en) 2012-06-12 2015-04-29 Boehringer Ingelheim International GmbH Pharmaceutical formulation for a therapeutic antibody
US9592297B2 (en) 2012-08-31 2017-03-14 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
WO2014084508A1 (ko) 2012-11-27 2014-06-05 (주)알테오젠 단백질과 Fc 도메인을 융합한 융합 단백질의 안정화용 조성물
EP3003369A4 (en) 2013-05-28 2017-04-26 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising pyrophosphate
MX2020009878A (es) 2013-07-18 2022-07-27 Mannkind Corp Composiciones farmaceuticas en polvo seco estables al calor y metodos.
PL3065761T3 (pl) 2013-11-05 2020-05-18 Allergan, Inc. Sposób leczenia schorzeń oczu za pomocą darpinu przeciwko vegf
US20170232199A1 (en) 2014-05-12 2017-08-17 Formycon Ag Pre-Filled Plastic Syringe Containing a VEGF Antagonist
US10478498B2 (en) 2014-06-20 2019-11-19 Reform Biologics, Llc Excipient compounds for biopolymer formulations
EP4285930A3 (en) 2014-06-26 2024-02-28 Amgen Inc. Protein formulations
TR201909951T4 (tr) 2014-07-18 2019-07-22 Sanofi Sa Kanser olduğundan şüphelenilen bir hastanın aflibersept ile tedavisinin sonucunun öngörülmesine yönelik yöntem.
CN105435222B (zh) 2014-09-25 2018-05-29 信达生物制药(苏州)有限公司 重组融合蛋白制剂
CN104940926B (zh) 2014-09-25 2017-09-22 信达生物制药(苏州)有限公司 重组融合蛋白制剂
TWI705827B (zh) 2014-11-07 2020-10-01 瑞士商諾華公司 治療眼部疾病之方法
US20160144025A1 (en) 2014-11-25 2016-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and formulations for treating vascular eye diseases
US20170326106A1 (en) 2014-12-11 2017-11-16 Bayer Healthcare Llc Treatment of age related macular degeneration with a small active choroidal neovascularization lesion
EP3973977A1 (en) * 2015-03-31 2022-03-30 Ildong Pharm Co., Ltd. Pharmaceutical composition for preventing and treating eye diseases, containing, as active ingredient, fusion protein in which tissue-penetrating peptide and anti-vascular endothelial growth factor preparation are fused
IL256245B (en) 2015-06-16 2022-09-01 Merck Patent Gmbh Treatments that combine a pd-l1 antagonist
KR101808234B1 (ko) 2015-06-23 2017-12-12 (주)알테오젠 IgG Fc 도메인을 가지는 융합 단백질의 안정한 액상 제제
KR20200035496A (ko) 2015-09-22 2020-04-03 화이자 인코포레이티드 치료학적 단백질 제형의 제조 방법 및 이러한 방법에 의해 생산된 항체 제형
MY191756A (en) 2015-09-23 2022-07-14 Genentech Inc Optimized variants of anti-vegf antibodies
IL258570B2 (en) 2015-10-16 2024-07-01 Regeneron Pharma Stable protein preparations
EP3377100A1 (en) 2015-11-18 2018-09-26 Formycon AG Pre-filled pharmaceutical package comprising a liquid formulation of a vegf-antagonist
JP2019501687A (ja) 2015-11-18 2019-01-24 フォーマイコン アーゲーＦｏｒｍｙｃｏｎ Ａｇ Ｖｅｇｆ拮抗薬を収容したプレフィルドプラスチックシリンジ
US20190046641A1 (en) 2015-11-30 2019-02-14 Medimmune, Llc Optimized ratios of amino acids and sugars as amorphous stabilizing compounds in pharmaceutical compositions containing high concentrations of protein-based therapeutic agents
CN108778330A (zh) 2016-01-08 2018-11-09 科尼尔赛德生物医学公司 用阿柏西普和其他生物制品治疗后眼部障碍的方法和装置
EP3407868A1 (en) 2016-01-26 2018-12-05 Formycon AG Liquid formulation of a vegf antagonist
EP3443346B1 (en) 2016-04-13 2023-08-30 Medimmune, LLC Use of amino acids as stabilizing compounds in pharmaceutical compositions containing high concentrations of protein-based therapeutic agents
CA3030422C (en) 2016-07-13 2021-10-26 Reform Biologics, Llc Stabilizing excipients for therapeutic protein formulations
JP7114567B2 (ja) 2016-08-17 2022-08-08 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 生体分子を含む高濃縮液体製剤の調製のためのプロセス
BR112019003175A2 (pt) 2016-08-18 2019-06-18 Regeneron Pharma métodos para determinar o potencial de uma proteína para se auto-associar e para preparar uma formulação farmacêutica de baixa viscosidade contendo uma proteína, e, mistura bioanalítica.
CA3038894A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody and protein therapeutic formulations and uses thereof
MY197672A (en) * 2016-10-07 2023-07-03 Regeneron Pharma Room temperature stable lyophilized protein
JP7116059B2 (ja) 2016-11-21 2022-08-09 ジャスト－エヴォテック バイオロジックス、インコーポレイテッド アフリベルセプト製剤及びその使用
US11000518B2 (en) 2016-12-01 2021-05-11 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. Use of combination of VEGFR inhibitor and PARP inhibitor in preparation of medicament for treating gastric cancer
US11123411B2 (en) 2016-12-08 2021-09-21 Gary E. Borodic Method of treating macular degeneration using botulinum toxin-based pharmaceuticals
GEP20237513B (en) 2016-12-23 2023-06-12 Serum Institute Of India Pvt Ltd Improved methods for enhancing antibody productivity in mammalian cell culture and minimizing aggregation during downstream, formulation processes and stable antibody formulations obtained thereof
US10617756B2 (en) 2017-01-05 2020-04-14 Shimojani, LLC Drug regimen for treatment of cerebral ischemia
KR101861163B1 (ko) 2017-04-26 2018-05-25 삼천당제약주식회사 안과용 약학 조성물
EP3624846B1 (en) 2017-05-16 2024-08-07 Bhami's Research Laboratory, Pvt. Ltd. High concentration protein formulations with reduced viscosity including a combination of nicotinic acid and tryoptophan
WO2018217995A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Formycon Ag Sterilizable pre-filled pharmaceutical packages comprising a liquid formulation of a vegf-antagonist
US20200108064A1 (en) 2017-06-08 2020-04-09 Eye Therapies, Llc Low-dose brimonidine combinations and uses thereof
TW201904610A (zh) 2017-06-14 2019-02-01 德商拜耳製藥公司 用於治療新生血管型青光眼之非抗體vegf拮抗劑
WO2019023392A1 (en) 2017-07-25 2019-01-31 Elektrofi, Inc. FORMATION OF PARTICLES COMPRISING AGENTS
WO2019020777A1 (en) 2017-07-26 2019-01-31 Formycon Ag LIQUID FORMULATION OF A VEGF ANTAGONIST
WO2019036619A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Reform Biologics, Llc STABILIZING EXCIPIENTS FOR FORMULATIONS OF THERAPEUTIC PROTEIN
IT201700101582A1 (it) 2017-09-12 2019-03-12 Milano Politecnico Dispositivo per rilascio intraoculare
US20200255496A1 (en) 2017-09-18 2020-08-13 Amgen Inc. Vegfr-fc fusion protein formulations
KR20190038456A (ko) 2017-09-29 2019-04-08 한미약품 주식회사 효력이 향상된 지속성 단백질 결합체
US11246846B2 (en) 2017-10-23 2022-02-15 Michael S. Tempesta Trisodium citrate compositions having enhanced uptake across digestive mucosa
MX2020005142A (es) 2017-11-16 2021-01-15 Iveric Bio Inc Un método para tratar o prevenir la vasculopatía coroidal polipoidal idiopática (ipcv).
EP3709971A2 (en) 2017-11-17 2020-09-23 Amgen Inc. Vegfr-fc fusion protein formulations
CN111356471A (zh) 2017-11-20 2020-06-30 济世发展生物药业有限公司 包含赖氨酸盐作为张力调节剂的阿柏西普制剂及其用途
PT3716992T (pt) 2017-11-30 2022-08-31 Regeneron Pharma Utilização de um antagonista do vegf para tratar distúrbios oculares angiogénicos
JP2021505548A (ja) 2017-12-06 2021-02-18 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 化学療法抵抗性の卵巣がんまたは乳がんの治療におけるｐａｒｐ阻害剤の使用
CA3085158C (en) 2017-12-22 2023-04-04 Samsung Bioepis Co., Ltd. Liquid composition comprising vegf antagonist
CN111741761B (zh) 2018-01-26 2023-04-18 加利福尼亚大学董事会 用于使用抗vegf剂治疗血管生成病症的方法和组合物
EP3761953A1 (en) 2018-03-08 2021-01-13 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of aflibercept
US11426446B2 (en) 2018-03-08 2022-08-30 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of aflibercept
BR112020020854A2 (pt) 2018-04-12 2021-01-19 Amgen Inc. Métodos para produzir composições de proteínas estáveis
CN108671229B (zh) 2018-05-08 2022-03-25 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白的药物组合制剂
EP3790532A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High concentration vegf receptor fusion protein containing formulations
TW202011995A (zh) 2018-07-03 2020-04-01 比利時商葛萊伯格有限公司 高濃度液體抗體配製物
WO2020055123A1 (ko) 2018-09-10 2020-03-19 삼성바이오에피스 주식회사 단백질을 포함하는 액상 조성물
US20210353713A1 (en) 2018-10-26 2021-11-18 Amgen Inc. Formulations comprising a tris buffer and a protein
CN110664757B (zh) 2018-11-19 2022-08-02 成都瑞沐生物医药科技有限公司 纳米晶滴眼剂、其制备方法及其应用
KR20210093976A (ko) 2018-11-21 2021-07-28 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 고농도 단백질 제형
PT3897595T (pt) 2018-12-20 2023-03-22 Thea Lab Composição oftálmica nutracêutica para o tratamento de patologias retinianas com um componente neovascular
JP2022523063A (ja) 2019-01-30 2022-04-21 アムジエン・インコーポレーテツド アフリベルセプトの属性、並びにその特性決定及び修飾方法
JP2022520084A (ja) 2019-02-11 2022-03-28 スロゼン オペレーティング， インコーポレイテッド 眼障害におけるｗｎｔシグナル伝達の調節
CN113710228A (zh) 2019-02-13 2021-11-26 诺瓦利克有限责任公司 用于治疗眼部新生血管形成的组合物和方法
US20200390724A1 (en) 2019-06-17 2020-12-17 Sol-Gel Technologies Ltd. Treatment of ocular diseases with ophthalmic tapinarof compositions
US20200390725A1 (en) 2019-06-17 2020-12-17 Sol-Gel Technologies Ltd. Treatment of ocular diseases with ophthalmic tapinarof compositions
WO2020255135A1 (en) 2019-06-17 2020-12-24 Sol-Gel Technologies Ltd. Treatment of ocular inflammatory diseases with topical ophthalmic tapinarof compositions
CN112203642A (zh) 2019-03-25 2021-01-08 阿特根公司 用于皮下注射的包含人透明质酸酶ph20变体和药物的药物组合物
CN113660953A (zh) 2019-04-01 2021-11-16 豪夫迈·罗氏有限公司 用于稳定含蛋白质制剂的组合物和方法
US20220184186A1 (en) 2019-04-03 2022-06-16 Denali Therapeutics Inc. Formulations of protein molecules comprising iduronate 2-sulfatase
US20220226477A1 (en) 2019-04-23 2022-07-21 Amgen Inc. The use of low molecular weight polyvinylpyrrolidone (pvp) to reduce viscosity of high concentration protein formulations
EP3736574A1 (en) 2019-05-07 2020-11-11 Atlas Antibodies AB A formulation comprising an isotope labeled fusion polypeptide
WO2020239051A1 (zh) 2019-05-30 2020-12-03 江苏恒瑞医药股份有限公司 Cdk4/6抑制剂与vegfr抑制剂联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
CA3144459A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions comprising reduced level of host cell proteins
US20210100856A1 (en) 2019-09-11 2021-04-08 Adverum Biotechnologies, Inc. Methods of treating ocular neovascular diseases using aav2 variants encoding aflibercept
JP2022547681A (ja) 2019-09-12 2022-11-15 ルピン・リミテッド 眼科使用のためのｖｅｇｆ阻害剤の改変された投薬
US20220340630A1 (en) 2019-09-13 2022-10-27 National Science And Technology Development Agency Composition of renaturation buffer solution for dimeric proteins and method of renaturation dimeric proteins using the composition thereof
JP2022548150A (ja) 2019-09-17 2022-11-16 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 高濃縮タンパク質製剤中の粘度低減剤としてのカンファースルホン酸およびそのカチオン性賦形剤との組み合わせ

Also Published As

Publication number Publication date
US20190343918A1 (en) 2019-11-14
CL2020002872A1 (es) 2021-03-26
EP4364724A2 (en) 2024-05-08
MX2020011848A (es) 2021-03-29
PH12020551839A1 (en) 2021-06-28
WO2019217927A1 (en) 2019-11-14
US20240058418A1 (en) 2024-02-22
KR20210021299A (ko) 2021-02-25
CL2023003448A1 (es) 2024-07-19
CO2020014427A2 (es) 2020-12-21
CN116585466A (zh) 2023-08-15
EP4364724A3 (en) 2024-08-07
JP7235770B2 (ja) 2023-03-08
JOP20200275A1 (ar) 2020-11-02
EP3790532A1 (en) 2021-03-17
CL2021001957A1 (es) 2022-04-08
JP2023071798A (ja) 2023-05-23
AU2019265005A1 (en) 2020-12-17
CA3099551A1 (en) 2019-11-14
CN112739323A (zh) 2021-04-30
MA52570A (fr) 2021-03-17
SG11202010684YA (en) 2020-11-27
US11103552B2 (en) 2021-08-31
US20210353714A1 (en) 2021-11-18
JP2021523162A (ja) 2021-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112020022610A2 (pt) proteína de fusão de receptor de vegf de alta concentração que contém formulações
US11071780B2 (en) Methods and formulations for treating vascular eye diseases using aflibercept and nesvacumab
ES2927049T3 (es) Uso de un antagonista del VEGF para tratar trastornos oculares angiogénicos
US20230302085A1 (en) Extended, High Dose VEGF Antagonist Regimens for Treatment of Angiogenic Eye Disorders
US9155745B2 (en) Bevacizumab formulations with lower aggregation propensity, comprising corticosteroid anti-inflammatory drugs
TW202400215A (zh) 用於血管新生眼睛病症之治療之延長高劑量ｖｅｇｆ拮抗劑方案
KR20220062279A (ko) 안질환의 치료 방법
EA046718B1 (ru) Составы, содержащие слитый белок рецептора фрэс в высокой концентрации
TW202400214A (zh) 用於血管新生眼睛病症之治療之延長高劑量ｖｅｇｆ拮抗劑方案
KR20240055758A (ko) 시누클레인병증을 치료하기 위한 조성물 및 방법

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]
B154 Notification of filing of divisional application [chapter 15.50 patent gazette]

Free format text: O PEDIDO FOI DIVIDIDO NO BR122023001023-0 PROTOCOLO 870230005234 EM 19/01/2023 11:17.O PEDIDO FOI DIVIDIDO NO BR122023001043-4 PROTOCOLO 870230005317 EM 19/01/2023 13:58.

B06W Patent application suspended after preliminary examination (for patents with searches from other patent authorities) chapter 6.23 patent gazette]