KR20210021299A

KR20210021299A - 고농도 vegf 수용체 융합 단백질 함유 제제

Info

Publication number: KR20210021299A
Application number: KR1020207035274A
Authority: KR
Inventors: 케네스 에스. 그라함; 사우라브 와드와
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2018-05-10
Filing date: 2019-05-10
Publication date: 2021-02-25
Also published as: JP2021523162A; US11103552B2; AU2019265005A1; MA52570A; CN116585466A; JOP20200275A1; PH12020551839A1; WO2019217927A1; EP4364724A2; BR112020022610A2; EP3790532A1; CN112739323A; SG11202010684YA; JP2023071798A; US20210353714A1; CL2020002872A1; MX2020011848A; CO2020014427A2; JP7235770B2; US20190343918A1

Abstract

본 발명은 고농도의 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 융합 단백질을 갖고, 저장 중 높은 안정성을 갖는 안과용 제제를 제공한다. 또한, 고농도의 제제를 사용하는 혈관기원 안구 장애의 치료 방법이 제공된다.

Description

고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제

관련 출원의 교차 참조

본 출원은 2019년 3월 5일자에 출원된 미국 임시 출원 제62/813,882호; 2018년 11월 20일자에 출원된 미국 임시 출원 제62/769,876호; 2018년 10월 29일자로 출원된 미국 임시 출원 제62/752,127호; 및 2018년 5월 10일자로 출원된 미국 임시 출원 제62/669,506호의 이익을 주장하며, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.

기술분야

본원의 실시형태는 일반적으로 안구 투여에 적합한 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본원의 실시형태는 40 mg/ml 초과의 VEGF 수용체 융합 단백질을 포함하고, 약학적으로 허용가능한 효능, 안정성, 점도 및 pH를 보이는 유리체내 투여용 액체 약학 제제를 제공한다.

서열 목록

서열 목록의 공식 사본은 생성 날짜가 2018년 5월 9일이고, 크기가 약 7 KB인 파일명 "10430P1-US_SEQ_LIST_ST25.txt"의 ASCII 형식의 서열 목록으로서, EFS-Web을 통해 전자적으로 명세서와 함께 제출된다. 본 ASCII 형식의 문서에 포함된 서열 목록은 명세서의 일부이고, 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.

치료적으로 유용한 액체 제제의 개발은 관심 약물에 대해 기능적이고 안정한 전달 비히클을 제공하기 위해 상이한 양의 성분의 조합을 필요로 한다. 이는 특히 약물이 단백질, 나아가 항체인 경우 그러하다. 항체 활성 및 투여는 전형적으로 약학적으로 허용가능한 효능, 삼투압농도, 단백질 안정성, 점도 및 적절한 pH를 필요로 하기 때문에 약물 개발자 및 제조사에게 항체 제제는 오랫동안 어려운 문제였다. 이러한 문제는 항체가 제제에서 더 높은 농도, 예를 들어 대부분의 약학적으로 판매되는 항체의 농도인 20 내지 40 mg/ml 초과인 경우 더 어려워진다.

더 높은 농도의 항체 제제는 보다 짧은 주사 시간, 더 적은 주사 부피, 더 낮은 항체 투여 빈도, 및 보다 효율적인 제조 및 저장 유용성을 허용한다. 그러나, 상기 언급된 바와 같이, 항체 또는 단백질 농도가 높을수록, 제형에 대한 적절한 활성 및 전달 매개변수를 유지하는 것이 더 어려워진다. 특히, 고농도 항체 및 단백질 제제는 흔히 증가된 단백질 응집 및 점도와 경쟁하여 더 낮은 전체 항체 또는 단백질 효능, 및 더 낮은 제조 및 더 불량한 저장 안정성을 유도한다. 고농도 단백질 또는 항체 제제와 관련된 문제로 인해, 이러한 약학적으로 허용가능한 제제는 거의 개발되지 않았다. 적절한 효능, 안정성, 점도, 삼투압농도 및 pH를 포함하는 고농도, 높은 안정성, 항체 및 단백질 제제의 제조에 대한 업계의 요구가 존재한다.

고농도 제제가 필요한 하나의 상기 단백질은 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 융합 단백질이다. VEGF 수용체 융합 단백질은 다수의 안과용 제제, 예를 들어 EYLEA®(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)에서 VEGF 기능을 차단하기 위해 사용된다. 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 더 짧은 안구 주사 시간, 더 적은 주사 부피, 투여 주기 당 더 적은 가능한 주사, 및 보다 효율적인 제조 및 저장을 허용할 수 있다.

본 발명은 상기 논의된 하나 이상의 문제를 극복하는 것에 관한 것이다.

본원에 기재된 다양한 실시형태는 고농도 단백질 함유 제제(예를 들어, 유리체내 투여에 적합한 제제), 특히 고농도 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 융합 단백질 함유 제제를 포함한다. 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 약학적으로 허용가능한 효능, 장기간 제조 및 저장 안정성, 및 안구 주사와 상용가능한 점도 및 pH를 포함하는 치료적 및 경제적 이점을 다수 제공한다. 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 또한 안구 투여 부피를 감소시켜 제한된 부피의 안구에 대한 바람직하지 않은 효과를 회피한다는 이점을 제공한다.

본원에 제공된 실시형태는 VEGF 수용체 융합 단백질, 완충액, 열 안정화제, 점도 감소제, 및 계면활성제를 갖는 제제를 제공한다. 다른 실시형태에서, 제제는 점도 감소제를 포함하지 않는다. 본 발명의 제제는 주사, 특히 치료적 안구 주사에 적합한 pH 및 점도를 갖는다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제는 41 mg/ml 이상의 농도 또는 약 100 μl 미만, 약 50 μl 미만, 약 50 μl, 약 57 μl, 약 60 μl, 약 70 μl, 또는 약 75 μl의 단일 용량의 VEGF 수용체 융합 단백질(본원에서 논의되어 있음)을 함유하는 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질, 완충액, 선택적으로 열 안정화제 및/또는 점도 감소제, 및 계면활성제를 갖고, 여기서 제제는 pH가 약 5.0 내지 약 6.8(예를 들어, 5.8)이다.

본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질 농도는 약 30 mg/ml, 60 mg/ml, 114 mg/ml, 120 mg/ml 또는 140 mg/ml이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제(예를 들어, 약 0.02% 내지 약 0.1%; 또는 약 0.03%(w/v))일 수 있다. 본 발명의 한 실시형태에서, 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 모이어티를 갖는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 20(PS20), 폴리소르베이트 80(PS80) 폴록사머 188, 폴리에틸렌 글리콜 3350 또는 이들의 혼합물이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 완충액은 히스티딘 기반 완충액(예를 들어, 10 mM 또는 20 mM), 예컨대 히스티딘, 히스티딘 HCl 또는 히스티딘 아세테이트, 포스페이트 기반 완충액, 예컨대 소듐 포스페이트(예를 들어, 10 mM); 아세테이트 기반 완충액, 예컨대 소듐 아세테이트 및 아세트산, 또는 시트레이트 기반 완충액, 예컨대 소듐 시트레이트 또는 시트르산이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 완충액이 포스페이트 완충액인 경우, pH는 약 5.7 내지 약 8.0, 약 5.8 내지 약 8.0, 약 5.7 내지 약 7.0, 약 5.8 내지 약 7.0, 약 5.9 내지 약 7.0 또는 약 6.0 내지 약 7.0이고; 완충액이 히스티딘 완충액인 경우, pH는 약 5.5 내지 약 6.5이고; 완충액이 시트레이트 완충액인 경우, pH는 약 3.0 내지 약 6.2 또는 약 5.0 내지 약 6.0이고; 완충액이 아세테이트 완충액인 경우, pH는 약 3.7 내지 약 5.6 또는 약 5.0 내지 약 6.0이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 열 안정화제는 당류, 예컨대 수크로스(예를 들어, 약 2.5%, 5% 또는 8%, 10% 또는 20%(w/v), 예를 들어 약 2 내지 20%), 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스; L-프롤린(예를 들어, 약 2%, 3% 또는 4%(w/v)); 글리신(예를 들어, 약 50 mM), 글리세롤, 타우린(예를 들어, 약 50 mM) 또는 프로판 술폰산(예를 들어, 약 50 mM) 또는 상기의 임의의 조합이다.

본 발명의 일부 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제는 점도 감소제, 예를 들어 아르기닌 하이드로클로라이드(예를 들어, L-아르기닌 모노하이드로클로라이드)(예를 들어, 50 mM), 리신, 소듐 클로라이드(예를 들어, 40 mM 또는 50 mM), 또는 마그네슘 클로라이드를 포함한다. 대안적으로, 다른 실시형태에서, 본 발명의 제제는 구체적으로 실질적으로 모든(모두는 아니더라도) 점도 감소제를 배제한다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제는 본원에 설명된 제제 A 내지 KKKK 중 어느 하나의 구성성분을 포함하고, 이로 이루어지거나 본질적으로 이로 이루어진다.

본원의 양태에서, 본 발명의 약학 제제는 약 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml, 약 80 mg/ml 내지 약 275 mg/ml, 약 140 mg/ml 내지 약 150 mg/ml, 약 140 mg/ml 내지 약 159 또는 160 mg/ml; 예컨대 약 60 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 113.3 mg/ml, 약 114.3 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 133.3 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 200 mg/ml 또는 약 250 mg/ml의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트)을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시형태에서, 제제는 약 40 mg/ml의 VEGF 수용체 융합 단백질을 포함한다.

본 발명의 약학 제제의 일부 양태는 약 2%(w/v) 내지 약 9%(w/v) 또는 약 4%(w/v) 내지 약 9%(w/v)의 농도의 열 안정화제를 포함하고, 단 열 안정화제가 타우린 또는 프로판 술폰산인 경우, 안정화제는 약 25 mM 내지 약 100 mM의 농도이고, 계면활성제는 약 0.02%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)(예를 들어, 약 0.03%)의 농도이고, 완충액은 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도이다.

VEGF 수용체 융합 단백질은 예를 들어:

ㆍ 서열 식별 번호 1의 핵산 서열 또는 서열 식별 번호 1의 뉴클레오티드 79 내지 1374 또는 79 내지 1371에 의해 인코딩될 수 있고;

ㆍ 서열 식별 번호 2의 아미노산 또는 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 457 또는 27 내지 458을 포함할 수 있고;

ㆍ 하기를 포함할 수 있고;

(1) 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGFR1 성분;

(2) 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분;

(3) 서열 식별 번호 2의 아미노산 232 내지 457 또는 458을 포함하는 다중화 성분("FcΔC1(a)")(서열 식별 번호 2의 C-말단 아미노산, 즉 K458은 VEGF 수용체 융합 단백질에 포함될 수 있거나 포함되지 않을 수 있음). 서열 식별 번호 2의 아미노산 1 내지 26은 신호 서열임을 유의한다;

ㆍ 제1 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR1)의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2 및 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 3, 선택적으로 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 4를 추가로 포함하고, 및 다중화 성분(예를 들어, IgG의 Fc 도메인)을 포함할 수 있고;

ㆍ 콘베르셉트일 수 있거나; 또는

ㆍ 아플리베르셉트일 수 있다.

VEGF 트랩

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(서열 식별 번호 1)

MVSYWDTGVLLCALLSCLLLTGSSSGSDTGRPFVEMYSEIPEIIHMTEGRELVIPCRVTSPNITVTLKKFPLDTLIPDGKRIIWDSRKGFIISNATYKEIGLLTCEATVNGHLYKTNYLTHRQTNTIIDVVLSPSHGIELSVGEKLVLNCTARTELNVGIDFNWEYPSSKHQHKKLVNRDLKTQSGSEMKKFLSTLTIDGVTRSDQGLYTCAASSGLMTKKNSTFVRVHEKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

(서열 식별 번호 2)

AA 1 내지 26 = 신호 서열

AA 27 내지 129 = Flt1-D2(VEGFR1-D2)

AA 130 내지 231 = Flk1-D3(VEGFR2-D3)

AA 232 내지 458 = FcΔC1

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 약 5 mM 내지 약 25 mM의 약학적으로 허용가능한 완충액, 약 4%(w/v) 내지 약 9%(w/v)의 약학적으로 허용가능한 열 안정화제, 약 0.02%(w/v) 내지 약 0.1%(w/v)의 약학적으로 허용가능한 계면활성제, 및 약 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml의 VEGF 수용체 융합 단백질의 수용액을 함유하는 용기가 제공된다. 열 안정화제가 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함하는 경우, 타우린 또는 프로판 술폰산은 약 25 mM 내지 약 100 mM의 농도이다. 수용액은 약 5.0 내지 약 6.8의 pH를 갖고, 약 5.5 내지 약 6.2(예를 들어, 5.8)일 수 있다. 일부 양태에서, 용기는 바이알 또는 시린지이다. 다른 양태에서, 수용액은 무기염을 포함하지 않는다. 열 안정화제가 당류인 경우, 이는 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스일 수 있고, 약 4%(w/v) 내지 9%(w/v)로 존재할 수 있고; 계면활성제는 약 0.02% 내지 약 0.1%(w/v), 보다 전형적으로, 0.02% 내지 약 0.04%(w/v)의 농도의 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350일 수 있고, 폴리옥시에틸렌 모이어티를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 서열 식별 번호 1의 핵산 서열 또는 서열 식별 번호 1의 뉴클레오티드 79 내지 1374 또는 79 내지 1371에 의해 인코딩되고; 서열 식별 번호 2의 아미노산 또는 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 457 또는 27 내지 458을 포함하고; (1) 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGFR1 성분; (2) 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분; 및 (3) 서열 식별 번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 다중화 성분("FcΔC1(a)")(서열 식별 번호 2의 C-말단 아미노산, 즉 K458은 VEGF 수용체 융합 단백질에 포함될 수 있거나 포함될 수 없음)을 포함하고; 제1 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR1)의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2 및 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 3, 선택적으로 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 4를 추가로 포함하고 다중화 성분(예를 들어, IgG의 Fc 도메인)을 포함하고; 콘베르셉트 또는 아플리베르셉트이다.

또 다른 실시형태에서, 수성 비히클 중 VEGF 수용체 융합 단백질을 갖는 본 발명의 약학 제제가 제공되고, 여기서 수성 비히클은 점도가 20℃에서 약 10 cP 내지 약 15 cP, 보다 전형적으로 20℃에서 약 10 cP 내지 약 13 cP, 가장 전형적으로 20℃에서 약 11 cP 내지 약 12 cP(예를 들어, 20℃에서 약 6.0, 7.3, 11.5 또는 12.0 cP)이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 점도는 20℃에서 약 12 cP 내지 약 15 cP이다. 제제의 pH는 약 5.8 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.8)일 수 있다. 일부 경우에, 제제는 점도 감소제를 포함하지 않고, 예를 들어 아르기닌 하이드로클로라이드, 리신, 소듐 클로라이드, 또는 마그네슘 클로라이드를 포함하지 않는다. 다른 경우에, 제제는 10 mM 히스티딘 하이드로클로라이드 또는 10 mM 히스티딘 아세테이트를 포함한다. 당류는 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스일 수 있고, 약 4%(w/v) 내지 9%(w/v)(예를 들어, 약 5%)일 수 있고, 계면활성제는 약 0.02% 내지 약 0.1%(w/v), 보다 전형적으로, 0.02% 내지 약 0.04%(w/v)(예를 들어, 0.03%)의 농도의 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350일 수 있고, 폴리옥시에틸렌 모이어티를 포함할 수 있다. 또한, 제제는 약 25 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 50 mM 내지 약 70 mM의 농도의 타우린 또는 프로판 술폰산으로부터 선택된 열 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 한 실시형태에서, 제제는 (약 41 내지 275 mg/ml, 약 50mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 115 mg/ml, 약 125 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 200 mg/ml의 농도에서 또는 본원에 논의된 임의의 "고"농도에서) VEGF 수용체 융합 단백질, 예를 들어 아플리베르셉트, 약 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 약 5%(w/v) 수크로스, 약 0.03%(w/v) 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트, 예를 들어 폴리소르베이트 20 및 약 50 mM 아르기닌, L-아르기닌 또는 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하고, pH가 약 5.8이다. 본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 서열 식별 번호 1의 핵산 서열 또는 서열 식별 번호 1의 뉴클레오티드 79 내지 1374 또는 79 내지 1371에 의해 인코딩되고; 서열 식별 번호 2의 아미노산 또는 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 457 또는 27 내지 458을 포함하고; (1) 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGFR1 성분; (2) 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분; 및 (3) 서열 식별 번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 다중화 성분("FcΔC1(a)")(서열 식별 번호 2의 C-말단 아미노산, 즉 K458은 VEGF 수용체 융합 단백질에 포함될 수 있거나 포함될 수 없음)을 포함하고; 제1 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR1)의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2 및 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 3, 선택적으로 제2 VEGF 수용체(예를 들어, VEGFR2)의 Ig 도메인 4를 추가로 포함하고 다중화 성분(예를 들어, IgG의 Fc 도메인)을 포함하고; 콘베르셉트 또는 아플리베르셉트이다.

또 다른 실시형태에서, 약학적으로 허용가능한 완충액 중 약 80 mg/ml 내지 약 275 mg/ml의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질을 포함하는 본 발명의 약학 제제가 제공된다. 일부 경우에, 안정한 약학 제제는 또한 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함할 수 있다. 제제는 약 24 내지 36개월 동안 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 안정할 수 있다. 일부 경우에, VEGF 수용체 융합 단백질은 상기 온도에서 및 상기 기간 동안 저장된 경우, 약 5% 미만의 고분자량 종류의 증가, 보다 전형적으로 약 4.5% 미만의 고분자량 종류의 증가, 약 4.0% 미만의 고분자량 종류의 증가, 약 3.5% 미만의 고분자량 종류의 증가, 약 3.0% 미만의 고분자량 종류의 증가, 약 2.5% 미만의 고분자량 종류의 증가, 약 2.0% 미만의 고분자량 종류의 증가, 및/또는 약 1.5% 미만의 고분자량 증가를 보인다. 다른 경우에, VEGF 수용체 융합 단백질은, 제제가 상기 온도에서 및 상기 기간 동안 저장된 경우, 2.0%미만 내지 3.0%의 고분자량 종류의 증가를 보인다.

본원의 실시형태는 또한 아플리베르셉트, pH 완충된 용액, 당류 및 계면활성제를 포함하는 본 발명의 약학 제제를 포함할 수 있고, 여기서 아플리베르셉트는 농도가 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml이다. 대안적으로, 실시형태는 또한 콘베르셉트, pH 완충된 용액, 당류 및 계면활성제를 포함하는 안정한 액체 약학 제제일 수 있고, 여기서 콘베르셉트는 농도가 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml이다. 안정한 액체 약학 제제는 또한 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트는 농도가 80 mg/ml 또는 150 mg/ml이다. 다른 양태에서, 제제는 무기염, 예를 들어 소듐 클로라이드를 포함하지 않는다.

일부 실시형태는 시린지가 80 mg/ml 아플리베르셉트, 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 하이드로클로라이드, 히스티딘 아세테이트 또는 소듐 포스페이트, 5%(w/v) 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350, 및 40 mM 소듐 클로라이드를 갖는 수용액으로 예비충전되도록 하는 멸균 시린지에 관한 것이다. 본원의 양태는 약 25 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 50 mM 내지 약 70 mM의 타우린 또는 프로판 술폰산의 추가적인 첨가를 포함한다. 일부 양태에서, 시린지는 80 mg/ml 아플리베르셉트, 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 HCl, 히스티딘 아세테이트 또는 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350을 갖는 수용액으로 예비충전된다. 본원의 양태는 약 25 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 50 mM 내지 약 70 mM의 타우린 또는 프로판 술폰산의 추가적인 첨가를 포함한다. 또 다른 양태에서, 시린지는 150 mg/ml 아플리베르셉트, 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 하이드로클로라이드, 히스티딘 아세테이트 또는 소듐 포스페이트, 5%(w/v) 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350, 및 40 mM 소듐 클로라이드를 갖고, pH는 약 6.2인 수용액으로 예비충전된다. 본원의 양태는 타우린 또는 프로판 술폰산의 추가적인 첨가를 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 시린지는 150 mg/ml 아플리베르셉트, 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 하이드로클로라이드, 히스티딘 아세테이트 또는 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350을 갖고, pH는 약 6.2인 수용액으로 예비충전되고, 수용액은 무기 염을 포함하지 않는다. 양태는 약 25 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 50 mM 내지 약 70 mM의 타우린 또는 프로판 술폰산을 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 시린지는 150 mg/ml 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트, 10 mM 소듐 아세테이트 또는 아세트산, 5%(w/v) 글리세롤 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350, 및 40 mM 소듐 클로라이드를 갖고 pH는 약 6.2인 수용액으로 예비충전된다. 또 다른 양태에서, 시린지는 150 mg/ml 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트, 10 mM 소듐 아세테이트 또는 아세트산, 8%(w/v) 글리세롤 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 또는 폴리에틸렌 글리콜 3350, 및 40 mM 소듐 클로라이드를 갖고 pH는 약 6.2인 수용액으로 예비충전된다.

본 발명은 또한 제제의 각 성분을 단일 조성물로 조합하는 단계를 포함하는 본원에 설명된 임의의 제제의 제조 방법을 제공한다. 이러한 방법은 수득한 제제를 바이알 또는 주사 장치로 첨가하는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 방법의 생성물인 임의의 조성물은 또한 본 발명의 일부를 형성한다. 예를 들어, 본원의 실시형태는 또한 히스티딘 기반, 시트레이트 기반, 아세테이트 기반 또는 포스페이트 기반 완충액과 수크로스, 폴리소르베이트 20 및 VEGF 수용체 융합 단백질; 및 선택적으로 예를 들어 본원에서 논의된 하나 이상의 추가적인 성분을 조합함으로써 제제를 제조하는 방법을 포함한다. 일부 경우에, 제제는 또한 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함하도록 제조되지만, 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함하지 않는 경우, 이는 또한 무기염을 포함하지 않을 수 있다. 본원의 양태에서, 수크로스는 약 4% 내지 약 10%(w/v)이고, 폴리소르베이트 20은 약 0.02% 내지 약 0.1%(w/v)이고, 수용체 융합 단백질은 약 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml의 농도이다. 제제가 타우린 또는 프로판 술폰산을 포함하는 경우, 이는 예를 들어 약 25 mM 내지 약 100 mM로 존재할 수 있지만, 50 mM 내지 70 mM에서 포함될 수 있다. 상기 방법은 미리 측정된 부피가 0.1 mg 내지 10 mg 용량의 VEGF 수용체 융합 단백질을 갖도록, 상기 부피의 제조된 제제를 멸균 시린지로 로딩하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 대상체의 안구 내에 본 발명의 제제를 안구내 주사(예를 들어, 유리체내 주사)하는 것을 포함하는 대상체(예를 들어, 인간)에 상기 제제를 투여하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 대상체의 유리체 내에 본 발명의 제제를 함유하는 유리체내 임플란트를 이식하는 것을 포함하는 대상체(예를 들어, 인간)에 본 발명의 제제를 투여하는 방법을 제공한다.

본원의 실시형태는 또한 혈관기원 안구 장애, 예를 들어 연령 연관 황반 변성(wet), 망막 정맥 폐색 후 황반 부종, 망막 정색 폐색(RVO), 중심 망막 정맥 폐색(CRVO), 분지 망막 정맥 폐색(BRVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 맥락막 혈관신생(CNV), 홍채 혈관신생, 신혈관 녹내장, 녹내장 수술후 섬유증, 증식성 유리체 망막병증(PVR), 시신경 혈관신생, 각막 혈관신생, 망막 혈관신생, 유리체 혈관신생, 판누스(pannus), 익상편, 혈관성 망막증 또는 당뇨병성 망막증(예를 들어, 비증식성 당뇨병성 망막증 및/또는 증식성 당뇨병성 망막증)의 치료가 필요한 대상체에서, 적어도 약 2 mg(예를 들어, 4 mg, 6 mg 또는 8 mg)의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트), 예를 들어 본원에 설명된 임의의 제제를 이를 필요로 하는 대상체의 안구 내에 안구내 주사하는 치료 방법을 포함한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 주사 부피는 100 마이크로리터 이하(예를 들어, 100 마이크로리터, 50 마이크로리터 또는 57 마이크로리터)이다. 상기 방법은 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질, 약학적으로 허용가능한 당류, 약학적으로 허용가능한 완충액 및 약학적으로 허용가능한 계면활성제를 갖는 사전 혼합된 수용액의 유리체내 주사를 포함한다. 사전 혼합된 수용액을 사용하는 치료 방법은 희석을 필요로 하지 않는다. 본원의 양태에서, 사전 혼합된 수용액은 pH가 약 6.0 내지 약 6.5이고, 점도가 약 10 cP 내지 13 cP이다.

치료 방법의 양태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 서열 식별 번호:1의 핵산 서열에 의해 인코딩된 VEGFR1R2-FcΔC1(a), 서열 식별 번호:2의 아미노산 27 내지 129, 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분, 또는 서열 식별 번호:2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 다중화 성분, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트이다.

본원의 개시물에 따른 다른 구현예들은 하기의 상세한 설명의 검토로부터 명백해질 것이다.

본원에 개시된 실시형태들의 상기 및 다른 양태, 특징 및 이점들은 첨부된 도면을 참조로 당업자에게 더 명백해질 것이다.
도 1a는 2℃ 내지 8℃에서 36개월의 과정에 걸쳐 4개의 상이한 제제(B, H, D 및 G)에서의 VEGF 수용체 융합 단백질(아플리베르셉트) 안정성을 결정하는 그래프이다. 고분자량(HMW) 종류의 형성(단백질 분해의 표시)을 확인하기 위해, 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UPLC)를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 1b는 또한 2℃ 내지 8℃에서 36개월의 과정에 걸쳐 4개의 제제(B, H, D 및 G)에서의 VEGF 수용체 융합 단백질(아플리베르셉트) 안정성을 결정하는 그래프이다. 각각의 제제 중 주요 종류의 백분율을 확인하기 위해 SE-UPLC를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 1c는 2℃ 내지 8℃에서 36개월의 과정에 걸쳐 4개의 제제(B, H, D 및 G)에서의 VEGF 수용체 융합 단백질 전하 변형의 형성을 보여주는 막대 그래프이다. 산성 종류의 수준을 제조시(0.0), 12개월, 24개월 및 36개월에서 이미지화 모세관 등전 포커싱(iCIEF)을 사용하여 시험하였다.
도 1d는 2℃ 내지 8℃에서 36개월의 과정에 걸쳐 4개의 제제(B, H, D 및 G)에서의 VEGF 수용체 융합 단백질 전하 변형의 형성을 보여주는 막대 그래프이다. 주요 종류의 확인은 제조시(0.0), 12개월, 24개월 및 36개월에서 iCIEF를 사용하여 시험하였다.
도 2a는 37℃에서 28일의 과정에 걸쳐, pH는 6.2인 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20 제제(L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하여 및 미포함하여) 중에서 150 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(아플리베르셉트)의 안정성을 나타내는 그래프이다. HMW 종류의 형성을 확인하기 위해 SE-UPLC를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 2b는 37℃에서 28일의 과정에 걸쳐, pH는 6.2인 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20 제제(L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하여 및 미포함하여) 중에서 150 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질의 안정성을 나타내는 그래프이다. 각각의 제제 중 주요 종류의 백분율을 확인하기 위해 SE-UPLC를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 3a는 155 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질을 갖고 염을 갖지 않고, 100 mM 아르기닌, 200 mM 아르기닌, 50 mM 리신, 200 mM 리신, 50 mM 소듐 클로라이드 또는 100 mM 소듐 클로라이드를 갖는 10 mM 소듐 포스페이트 완충 제제의 점도를 나타내는 막대 그래프이다. 점도는 20℃에서 cP로 측정되었다.
도 3b는 155 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질을 갖고 염을 갖지 않고, 100 mM 아르기닌, 200 mM 아르기닌, 50 mM 리신, 200 mM 리신, 50 mM 소듐 클로라이드 또는 100 mM 소듐 클로라이드를 갖는 10 mM 히스티딘 완충 제제의 점도를 나타내는 막대 그래프이다. 점도는 20℃에서 cP로 측정되었다.
도 3c는 상이한 제제 조건(50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함하거나 포함하지 않고) 하에서 다양한 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질의 점도를 나타내는 그래프이다. 점도는 20℃에서 cP로 측정되었다.
도 4a는 5℃에서 12개월에 걸쳐, pH는 6.2인 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하여 및 미포함하여) 중에서 150 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질의 안정성을 나타내는 그래프이다. VEGF 수용체 융합 단백질은 150 mg/ml이었다. HMW 종류의 형성을 확인하기 위해 SE-UPLC를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 4b는 5℃에서 12개월에 걸쳐, pH는 6.2인 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하여 및 미포함하여) 중에서 150 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질의 안정성을 나타내는 그래프이다. VEGF 수용체 융합 단백질은 150 mg/ml이었다. 각각의 제제 중 주요 종류의 백분율을 확인하기 위해 SE-UPLC를 사용하여 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 시험하였다.
도 5는 20℃, 10 mM 포스페이트 완충액 또는 10 mM 히스티딘 완충액의 두 가지 완충 조건 하에서 제제의 점도를 나타내는 그래프이다. VEGF 수용체 융합 단백질 농도는 10 mg/ml 내지 170 mg/ml에서 변경된다. 점도는 mPa-S로 측정되었다.
도 6은 각각 2 내지 10 mg/ml 단백질을 갖는 다수의 상이한 제제 조건에 대한 동적 광 산란 스크린을 나타낸다. 확산 상호작용 매개변수는 타우린 및 PSA(프로판 술폰산)가 Kd를 개선했다는 것을 나타냈다.
도 7은 5℃에서 6개월 동안 저장 후 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UPLC)에 의해 측정된 바와 같은, 시간에 따른 제제 F1 내지 F9(제제 WW 내지 EEE)에서의 고분자량(HMW) 종류의 백분율을 모니터링하는 그래프이다. 제제 F1 내지 F9는 본원의 표 7-1에 예시된다.
도 8(a 내지 b)은 5℃에서 3개월 동안 저장 후(a) 또는 37℃에서 28일 동안 배양 후(b), SE-UPLC에 의한 고분자량 종류의 백분율을 측정한다. 제제 F1 내지 F4(EEE, SSS, CCC(140 mg/ml) 및 TTT)는 하기 표 8-1에 예시된다.
도 9는 초기 시점에서 20℃에서 제제 F1 내지 F12에 대한 점도(cp)를 나타낸다. 제제 F1 내지 F12는 하기 표 A에 예시된다.

도 10은 제제 F1 내지 F12(본원의 표 A에 예시됨)의 삼투압농도(mmol/Kg)를 보여준다.
도 11(a 내지 b)은 37℃에서 28일 이하 동안 저장 후(a) 또는 5℃에서 3개월 이하 동안 저장 후(b), SE-UPLC에 의해 시간에 따른 제제 F1 내지 F6(제제 GGG, HHH, III, JJJ, LLL 및 KKK)의 고분자량 종류의 백분율을 측정한다.
도 12는 표 9-3에 나타난 제제(GGG 내지 RRR)의 초기 시점에서 동적 광 산란(확산 계수(cm²/초), 반경(nm) 및 %Pd)을 나타낸다.
도 13은 아플리베르셉트의 투여 전 두 상이한 토끼(326-OS 및 329-OD)에 대한 OCT(30도 렌즈) 및 베이스라인 FA 이미지를 나타낸다(OD=오큘러스 덱스터(우안구); OS=오큘러스 시니스터(좌안구)). (A) 토끼 326에 대한 FA 이미지, 좌안구; (B) 토끼 326에 대한 OCT 이미지, 좌안구; (C) 토끼 329에 대한 FA 이미지, 우안구; (D) 토끼 329에 대한 OCT 이미지, 우안구.
도 14(a 내지 f)는 히스티딘 완충 제제(7 mg/안구)를 투여한 한 마리의 토끼(326-OS)에 대한, 1일(a), 7일(b) 및 14일(c)에서의 토끼 FA 이미지 및 1일(d), 7일(e) 및 14일(f)에서의 OCT(30도 렌즈)의 시간 과정을 나타낸다.
도 15(a 내지 h)는 히스티딘 완충 제제(7 mg/안구)를 투여한 한 마리의 토끼(326-OS)에 대한, 3주(a), 4주(b), 7주(c) 및 8주(d)에서의 토끼 FA 이미지; 및 3주(e), 4주(f), 7주(g) 및 8주(h)에서의 OCT(55도 렌즈)의 시간 경과를 나타낸다.
도 16(a 내지 f)은 포스페이트 완충 제제(7 mg/안구)를 투여한 한 마리의 토끼(329-OS)에 대한, 1일(a), 1주(b) 및 2주(c)에서의 토끼 FA 이미지 및 1일(d), 1주(e) 및 2주(f)에서의 OCT(30도 렌즈)의 시간 경과를 나타낸다.
도 17(a 내지 h)은 포스페이트 완충 제제(7 mg/안구)를 투여한 토끼(329-OS)에 대한, 3주(a), 4주(b), 7주(c) 및 8주(d)에서의 토끼 FA 이미지 및 3주(e), 4주(f), 7주(g) 및 8주(h)에서의 OCT(55도 렌즈)의 시간 경과를 나타낸다.
도 18(a 내지 b)은 SE-UPLC에 의해 분석된, 37℃에서 시간에 따른(1개월 이하) 제제 UUU 내지 BBBB의 순도(순수 종류의 백분율)(a) 및 고분자량(HMW) 종류의 백분율(b)을 나타낸다(표 11-1 참조).
도 19(a 내지 e)는 (i) 2개월 이하 동안 5℃ 또는 37℃에서 배양 후 고분자량 종류(HMW)(a) 및 (ii) 2개월 이하 동안 5℃ 또는 37℃에서 배양 후 주요 종류(주요 피크)(b)의 백분율의 크기 배제 크로마토그래피 측정;뿐만 아니라 28일 이하 동안 37℃에서 배양 후 비가시적 미립자 물질의 존재를 측정하기 위한 마이크로플로우 이미징(c); 28일 이하 동안 37℃에서 배양 후 비가시적 미립자 물질의 존재를 측정하기 위한 입자 광 차폐 분석(d), 및 28일 이하 동안 37℃에서 배양 후 비가시적 미립자 물질의 현미경 측정(e)에 의한, 10 mM 히스티딘, pH 5.8, 5% 수크로스, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM 아르기닌 모노하이드로클로라이드 중 제제화된 114.3 mg VEGF 트랩(아플리베르셉트)을 갖는 제제의 안정성 및 순도 분석을 나타낸다.
도 20은 6개월 이하 동안 2 내지 8℃에서 배양 후(a) 또는 28일 이하 동안 37℃에서 배양 후(b) 고분자량 종류(HMW)의 백분율의 SE-UPLC 측정에 의한, 80, 100, 120 또는 140 mg/ml 아플리베르셉트를 갖는 제제 CCC의 안정성 및 순도 분석을 나타낸다.
도 21은 시간에 따른, 500 마이크로그램 또는 2 mg 아플리베르셉트가 투여될 때 완전 누출 억제(complete leak suppression)를 이용하여 시험된 토끼에서의 안구의 백분율을 나타낸다(게한-브레슬로우-윌콕슨(Gehan-Breslow-Wilcoxon) 시험(P 0.0453)).

본 발명은 상당한 기술적 문제에도 불구하고 개발된 탁월한 기능 및 저장 특성을 나타내는 고농도의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트)을 갖는 제제를 제공한다. 예를 들어, 폴리펩티드 약물(예컨대, VEGF 수용체 융합 단백질)을 포함하는 제제에 적합한 부형제를 확인하는 일반적인 방법은 고온(예를 들어, 37℃)과 같은 촉진된 스트레스 조건 하에서 폴리펩티드 안정성의 평가에 의한 것이다. 비스트레스 조건(예를 들어 5℃와 같은 저온) 하에서 적합하지 않은 부형제는 전형적으로 스트레스 하에 있는 동안, 단기간 내에 바람직하지 않은 효과를 야기할 것이다(예를 들어, 단백질 응집). 이러한 접근법은 의약품을 안정화시킬 가능성이 없는 부형제의 제거를 촉진하는 한 생명공학 및 제약 산업에서 일반적이다. 예를 들어 문헌[Magari, Assessing Shelf Life Using Real-Time and Accelerated Stability Tests, Biopharm Intl. 16(11): 36-48 (2003)]을 참조한다. 일부 경우에, 가속화된 안정성 데이터를 기반으로 제품이 출시될 수 있지만, 이는 실시간 저장 수명 분석(가속화되지 않음)과 병행하여 수행되어야 한다. 문헌 [Magari (2003)] 및 FDA, Guidelines for Submitting Documentation for the Stability of Human Drugs and Biologics, Rockville, MD (1987). 여기서, 그러나, 5℃에서, 아르기닌은 온도 스트레스(37℃)하에 있을 때 안정성을 감소시키는 것으로 나타났지만, 히스티딘 제제 중 아르기닌의 존재는 안정화를 유도하였다. 도 8(a 내지 b)을 참조한다. 이러한 본원에 예시된 제제의 특성은, 기술적 어려움을 보여 의사가 아르기닌을 선택하는 것을 방지하여 의사가 부형제로서 아르기닌을 선택할 수 없도록 하였다. 그럼에도 불구하고, 본원에 설명된 제제는 높은 안정성을 갖는 제제를 달성하기 위해 이러한 기술적 어려움을 극복하였다. 또한 히스티딘 완충액 중 VEGF 트랩의 제제는 포스페이트 완충액 제제로 관찰된 것에 비해 점도의 유리한 감소를 유도하였다. 작은 바늘 구멍이 유리체내 주사를 수행하기에 적합하기 때문에(환자의 불편함 및 안구 외상 감소로 인해), 상대적으로 낮은 점도가 바람직하다. 더 낮은 점도 제제는 바늘을 통해 제제를 밀어내는 힘을 더 적게 요구하여, 치료자에게 바늘을 통한 제제의 주사를 더 용이하도록 만든다. 또한, 히스티딘 및 아르기닌 함유 제제는 토끼 안구에서 잘 견뎠다.

대표적인 실시형태에 대한 참조가 상세히 이루어질 것이다. 하기 설명은 실시형태를 하나의 바람직한 실시형태로 제한하고자 하는 것이 아님을 이해해야 한다. 반대로, 이들은 첨부된 청구범위에 정의된 기재된 실시형태의 사상 및 범위 내에 포함될 수 있는 대안, 변형 및 등가물을 포함하는 것으로 의도된다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시물이 속하는 기술 분야의 당업자가 일반적으로 이해하고 있는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 특정 열거된 수치에 관하여 사용될 때, 그 값이 열거된 값과 1% 이하만큼 다를 수 있음을 의미한다. 예를 들어 본원에 사용된 바와 같이, 표현 "약 100"은 99 및 101 및 그 사이의 모든 값(예를 들어, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4% 등)을 포함한다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제는 안과용 용액의 소용량 주사(SVP)에 대한 USP<789>를 준수하며, 예를 들어 ml 당 직경이 10 μm 이상인 약 50개 미만의 입자를 함유하고; ml 당 직경이 25 μm 이상인 약 5개 미만의 입자를 함유하거나; ml 당 직경이 50 μm 이상인 약 2개 미만의 입자를 함유한다.

본원의 목적을 위해, "유리체내 주사"는 안구의 유리체(안구의 후면에 망막 근처) 내로의 주사를 지칭한다는 것을 유의한다. 표현 "유리체내 투여에 적합함", "유리체내 주사에 적합함" 등은 해당 제제가 EYLEA의 유리체내 주사와 관련된 것으로 알려진 것 이외 임의의 이상 반응을 야기하지 않으면서 대상체의 안구의 유리체 내에 안전하게 주사될 수 있음을 의미한다.

본원에서 용어 "약학적 제제"는 예를 들어 치료적/의학적 용도를 위해 대상체에 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트)을 투여하기 위해 사용된 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제제를 의미한다.

용어 "약학적으로 허용가능한"은 적절한 의학적 판단 범위 내에서 안구에 투여하기 적합한 제제를 의미한다.

본원에서 용어 "대상체"는 본원에 기재된 제제에 의해 진단, 예후 또는 치료가 바람직한 임의의 포유 동물(예를 들어, 토끼, 마우스, 래트 또는 원숭이), 특히 인간을 의미한다.

용어 "수성" 제제는 물을 포함하는 제제를 의미한다.

용어 "치료하다" 또는 "치료"는 예를 들어 혈관기원 안구 장애에 관한 임의의 임상적으로 측정가능한 정도로 바람직하지 않은 질환 또는 장애(예를 들어 혈관기원 안구 장애 또는 암)의 하나 이상의 증상 또는 징후의 퇴행, 안정화 또는 제거를 유발함으로써, 당뇨병성 망막병증 중증도 점수(DRSS)의 감소 또는 유지를 유발함으로써, 시력을 개선 또는 유지시킴으로써(예를 들어, ETDRS 문자의 증가에 의해 측정된 것과 같은 최상의 교정 시력에서), 시야를 증가 또는 유지시킴으로써 및/또는 중심 망막 두께를 감소 또는 유지시킴으로써, 암에 관하여, 대상체에서 암 세포의 성장, 생존 및/또는 전이를 중지 또는 역전시킴으로써, 상기 질환 또는 장애를 역전, 안정화 또는 제거하는 치료적 조치를 의미한다. 전형적으로, 치료적 조치는 질환 또는 장애가 있는 대상체에 대한 치료적 유효량의 VEGF 수용체 융합 단백질의 1회 이상의 용량의 투여이다.

"예방하다" 또는 "예방"은 바람직하지 않은 질환 또는 장애(예를 들어, 혈관기원 안구 장애)의 발전을 중지하기 위한 예방적 조치를 의미한다.

SE-UPLC는 제제 내 고분자량 종류의 존재를 정량화하기 위해 본 발명에서 사용될 수 있다. SE는 크기 배제 크로마토그래피를 의미한다. UPLC는 초고성능 액체 크로마토그래피를 의미한다. 제제 중의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트)의 이러한 HMW 종류를 특징화하기 위해 UPLC 시스템에서 사용될 수 있는 적합한 SE 컬럼은 약 10,000 내지 450,000 달톤의 분자량 범위의 분자를 분해할 수 있다. 예를 들어, ACQUITY UPLC 단백질 BEH SEC 200Å 컬럼을 참조한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 상기 컬럼 중 둘은 제제 중의 HMW 종류를 정량화할 때 직렬로 연결된다. UPLC는 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)보다 감도 및 분해능에서 개선을 유도한다. UPLC는 HPLC에서 사용된 것보다 미세한 입자(일반적으로 약 2.5 μm 미만)를 사용하고, 고압에서 작동하는 기기를 사용한다. 나아가, UPLC 이동상은 HPLC보다 높은 선형 속도에서 작동한다.

본원의 실시형태는 고농도 (예를 들어, 약 60 mg/ml, 약 80 mg/ml, 약 90 mg/ml, 약 100 mg/ml, 약 113.3 mg/ml, 약 114.3 mg/ml, 약 120 mg/ml, 약 133.3 mg/ml, 약 140 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 200 mg/ml, 또는 약 250 mg/ml )의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트)을 포함하는 제제를 포함한다. 본원에 포함된 적합한 제제는 고농도의 VEGF 수용체 융합 단백질, 완충액, 열 안정화제 및 계면활성제를 포함한다. 일부 양태에서, 적합한 제제는 추가로 점도 감소제를 포함한다. 다른 양태에서, 적합한 제제는 실질적으로 모든 점도 감소제를 배제한다. 전형적인 제제는 pH가 약 5.0 내지 약 6.8(예를 들어, 5.8)이지만, 대상체의 안구에 VEGF 수용체 융합 단백질을 투여하기에 유용한 임의의 pH를 포함할 수 있다.

본 발명은 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트)과 회합된, 하나 이상의 추가의 치료제(예를 들어, Ang-2 저해제(예를 들어, 항 ANG2 항체 또는 이들의 항원 결합 단편 또는 네스바큐맙), Tie-2 수용체 활성화제, 항PDGF, PDGF 수용체 또는 PDGF 수용체 베타 항체 또는 이들의 항원 결합 단편 및/또는 부가적인 VEGF 안타고니스트, 예컨대 베바시주맙, 라니비주맙, 페갑타닙 또는 세포외 도메인 1 내지 3을 포함하는 인간 혈관 내피 성장 인자 수용체-3(VEGFR-3)의 가용성 형태(Fc 융합 단백질로서 표현됨))를 포함하는 제제뿐만 아니라 본원에 논의된 이러한 제제를 투여하는 것을 포함하는 예방 또는 치료 방법을 포함한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 VEGF 수용체 융합 단백질, 예컨대 아플리베르셉트를 포함하지만 임의의 추가의 치료제(예를 들어, 이는 항체 또는 이들의 항원 결합 단편임)는 배제한다.

용어 "회합(association)된"은 예를 들어 동시 전달을 위해 제제 및 추가의 치료제가 단일 조성물로 제제화될 수 있거나, 둘 이상의 조성물(예를 들어, 키트)로 별개로 제제화될 수 있다는 것을 나타낸다. 추가의 치료제는 그 자체로 이의 고유의 약학 제제로 제제화될 수 있다. 각각은 다른 성분과 동시에 대상체에게 투여될 수 있거나 다른 성분이 투여될 때와 다른 시간에 대상체에게 투여될 수 있고, 예를 들어 각각의 투여는 주어진 기간에 걸쳐 간격을 두고 비동시적으로(예를 들어, 별개로 또는 순차적으로) 주어질 수 있다. 나아가, 제제 및 추가의 치료제는 동일한 경로 또는 상이한 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 임의의 하나 이상의 소듐 술페이트(예를 들어 50 mM); 소듐 티오시아네이트(예를 들어 50 mM); 소듐 시트레이트(예를 들어 40 mM); 글리신(예를 들어 50 mM); 소듐 클로라이드(예를 들어 50 mM); 리신(예를 들어 50 mM); 소듐 아스파르테이트(예를 들어 50 mM); 및/또는 소듐 글루타메이트(예를 들어 50 mM)를 포함한다. 예를 들어, 한 실시형태에서, 제제는 소듐 시트레이트(예를 들어 50 mM) 및 아르기닌 하이드로클로라이드(예를 들어 50 mM); 글리신(예를 들어 50 mM) 및 아르기닌 하이드로클로라이드(예를 들어 50 mM); 소듐 아스파르테이트(예를 들어 50 mM) 및 아르기닌 하이드로클로라이드(예를 들어 50 mM); 또는 소듐 글루타메이트(예를 들어 50 mM) 및 아르기닌 하이드로클로라이드(예를 들어 50 mM)의 조합을 포함한다.

VEGF 수용체 융합 단백질 및 다른 VEGF 저해제

본원의 목적을 위해, "VEGF 수용체 융합 단백질"은 VEGF 및 천연 VEGF 수용체 사이의 상호작용을 방해하는 또 다른 폴리펩티드에 융합된(예를 들어, 여기서 상기 융합 폴리펩티드 중 둘은 회합되어 동종이량체 또는 다른 다량체를 형성함) 하나 이상의 VEGF 수용체 또는 이들의 도메인을 포함하는 분자를 의미한다. 상기 VEGF 수용체 융합 단백질은 "VEGF-트랩" 또는 "VEGF 트랩"으로 지칭될 수 있다. 본 정의 내에 속하는 본 개시물의 맥락 내의 VEGF 수용체 융합 단백질은 VEGF 수용체, 예컨대 VEGFR1(Flt1로도 알려짐) 및/또는 VEGFR2(Flk1 또는 KDR로도 알려짐)의 2개 이상의 면역글로불린(Ig)-유사 도메인을 포함하고 다량체화 도메인(예를 들어, Fc 도메인)을 함유할 수 있는 키메라 폴리펩티드를 포함한다.

예시적인 VEGF 수용체 융합 단백질은 서열 식별 번호 1의 핵산 서열 또는 이들의 뉴클레오티드 79 내지 1374 또는 79 내지 1371에 의해 인코딩되는 VEGF1R2-FcΔC1(a)로 지칭되는 분자이다.

VEGF1R2-FcΔC1(a)는 3개의 성분을 포함한다:

(2) 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분; 및

(3) 서열 식별 번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 다중화 성분("FcΔC1(a)")(서열 식별 번호 2의 C-말단 아미노산, 즉 K458은 VEGF 수용체 융합 단백질에 포함될 수 있거나 포함되지 않을 수 있고, 예를 들어 본원에 모든 목적을 위해 포함된 미국 특허 제7,396,664호 또는 제7,354,579호를 참조함). 서열 식별 번호 2의 아미노산 1 내지 26은 신호 서열임을 유의한다.

본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 458 또는 27 내지 457을 포함한다.

본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 하기를 포함한다:

(1) 제1 VEGF 수용체(예를 들어 VEGFR1)의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2, 및

(2) 제2 VEGF 수용체(예를 들어 VEGFR2)의 Ig 도메인 3,

(3) 및 선택적으로 추가로 제2 VEGF 수용체(예를 들어 VEGFR2)의 Ig 도메인 4를 포함함,

(4) 다중화 성분(예를 들어 IgG의 Fc 도메인).

예를 들어, 본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 상기 도메인의 하기 배열을 갖는다:

ㆍ [VEGFR1 Ig 도메인 2]-[VEGFR2 Ig 도메인 3]-[MC](예를 들어, 이들의 동종이량체) 또는

ㆍ [VEGFR1 Ig 도메인 2]-[VEGFR2 Ig 도메인 3]-[VEGFR2 Ig 도메인 4]-[MC](예를 들어, 이들의 동종이량체).

본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 절단된 다중화 성분(예를 들어 Fc)을 갖는 VEGF 트랩 분자인 VEGF 미니 트랩이고, 예를 들어 여기서 미니 트랩은 여전히 Fc 힌지 영역을 포함한다. 예를 들어 WO 제2005/00895호 또는 미국 특허 제7,396,664호를 참조한다.

본 개시물이 또한 이의 범위 내에 VEGF 수용체 융합 단백질 대신에 VEGF 결합 분자 및 항VEGF 항체 및 이들의 항원 결합 단편,

ㆍ 베바시주맙(예를 들어 약 80 내지 90 또는 88 mg/ml의 농도에서),

ㆍ 라니비주맙(예를 들어 약 20 내지 40 mg/ml, 예를 들어 21 내지 35, 21 또는 35 mg/ml의 농도에서),

ㆍ 항VEGF 압타머, 예컨대 페갑타닙(예를 들어 페갑타닙 소듐),

ㆍ 단쇄(예를 들어, V_L-V_H) 항VEGF 항체, 예컨대 브롤루시주맙(예를 들어 약 200 내지 400 또는 200, 210, 400 또는 420 mg/ml의 a-*--*--------- 농도에서),

ㆍ 항VEGF DARPin, 예컨대 아비시파르 페골 DARPin(예를 들어 약 70 내지 140, 70 또는 140 mg/ml의 농도에서), 또는

ㆍ 예를 들어 ANG2에 또한 결합하는 이중특이적 항VEGF 항체, 예컨대 RG7716(예를 들어 약 100 내지 400, 100, 105, 400 또는 420 mg/ml의 농도에서)을 포함하는 고농도 제제를 포함한다.

본원에서 논의된 실시형태의 반복성을 최소화하기 위해, 본 발명의 범위는 본원에서 논의된 임의의 제제가 VEGF 수용체 융합 단백질 대신에 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 본원에 논의된 다른 VEGF 결합 분자(예를 들어 항VEGF DARPin으로 치환된)를 본원에 논의된 임의의 농도로 포함하는 실시형태를 포함하는 것으로 간주된다. 예를 들어, 본 발명은 35 또는 80 mg/ml 라니비주맙, 완충액, 열 안정화제, 점도 감소제, 및 계면활성제를 갖는 제제를 포함한다.

DARPin은 디자인 안키린 반복 단백질(Designed Ankyrin Repeat Protein)이다. DARPin은 일반적으로 약 33개의 아미노산 잔기의 3 내지 4 개의 완전히 패킹된 반복을 함유하며, 각각의 반복은 β-나선 및 두 개의 역평행 α-헬릭스를 함유한다. 이러한 견고한 프레임워크는 단백질 안정성을 제공하는 동시에 표적 인식을 위해 일반적으로 반복 당 6개의 아미노산 잔기를 포함하는 가변 영역의 제시를 허용한다.

"항VEGF" 항체 또는 항체의 항원 결합 단편은 VEGF에 특이적으로 결합하는 항체 또는 단편을 의미한다.

예시적인 VEGF 수용체 융합 단백질은 아플리베르셉트(EYLEA®, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.사) 또는 콘베르셉트(Chengdu Kanghong Biotechnology Co., Ltd.사에 의해 상업적으로 판매됨)를 포함한다. 국제 특허 출원 공개 WO 제2005/121176호 또는 WO 제2007/112675호를 참조한다. 용어 "아플리베르셉트" 및 "콘베르셉트"는 이들의 생유사 버전을 포함한다. 해당 제품(예를 들어, 아플리베르셉트)의 생유사 버전은 일반적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제품을 의미하지만 미국 바이오로직스 가격 경쟁 및 이노베이션 Act하에서 생유사한 제품을 포함한다.

본 발명의 약학 제제는 "고농도"이다. 본 발명의 고농도 약학 제제는 41 mg/ml 이상, 80 mg/ml 이상, 100 mg/ml 이상, 125 mg/ml 이상, 140 mg/ml 이상, 150 mg/ml 이상, 175 mg/ml 이상, 200 mg/ml 이상, 225 mg/ml 이상, 250 mg/ml 이상, 또는 275 mg/ml 이상의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질을 포함한다. 대안적으로, "고농도"는 약 140 mg/ml 내지 약 160 mg/ml, 약 140 mg/ml 이상 내지 약 160 mg/ml 미만, 약 41 mg/ml 내지 약 275 mg/ml, 약 70 mg/ml 내지 약 75 mg/ml 또는 약 80 mg/ml 내지 약 250 mg/ml의 VEGF 수용체 융합 단백질의 농도를 포함하는 제제를 의미한다. 일부 양태에서, 제제 중의 VEGF 수용체 융합 단백질 농도는 대략 하기 농도 중 어느 하나이다: 41 mg/ml; 42 mg/ml; 43 mg/ml; 44 mg/ml; 45 mg/ml; 46 mg/ml; 47 mg/ml; 48 mg/ml; 49 mg/ml; 50mg/ml; 51 mg/ml; 52 mg/ml; 53 mg/ml; 54 mg/ml; 55 mg/ml; 56 mg/ml; 57 mg/ml; 58 mg/ml; 59 mg/ml; 60 mg/ml; 61 mg/ml; 62 mg/ml; 63 mg/ml; 64 mg/ml; 65 mg/ml; 66 mg/ml; 67 mg/ml; 68 mg/ml; 69 mg/ml; 70 mg/ml; 71 mg/ml; 72 mg/ml; 73 mg/ml; 74 mg/ml; 75 mg/ml; 76 mg/ml; 77 mg/ml; 78 mg/ml; 79 mg/ml; 80 mg/ml; 81 mg/ml; 82mg/ml; 83 mg/ml; 84 mg/ml; 85 mg/ml; 86 mg/ml; 87mg/ml; 88 mg/ml; 89 mg/ml; 90 mg/ml; 91 mg/ml; 92 mg/ml; 93 mg/ml; 94 mg/ml; 95mg/ml; 96 mg/ml; 97 mg/ml; 98 mg/ml; 99 mg/ml; 100 mg/ml; 101 mg/ml; 102 mg/ml; 103 mg/ml; 104 mg/ml; 105 mg/ml; 106mg/ml; 107 mg/ml; 108 mg/ml; 109 mg/ml; 110 mg/ml; 111 mg/ml; 112 mg/ml; 113 mg/ml; 113.3 mg/ml; 114 mg/ml; 114.1 mg/ml; 114.2 mg/ml; 114.3 mg/ml; 114.4 mg/ml; 114.5 mg/ml; 114.6 mg/ml, 114.7 mg/ml, 114.8 mg/ml; 114.9 mg/ml; 115 mg/ml; 116 mg/ml; 117 mg/ml; 118 mg/ml; 119 mg/ml; 120 mg/ml; 121 mg/ml; 122 mg/ml; 123 mg/ml; 124 mg/ml; 125 mg/ml; 126 mg/ml; 127mg/ml; 128 mg/ml; 129 mg/ml; 130 mg/ml; 131 mg/ml; 132 mg/ml; 133 mg/ml; 133.3 mg/ml; 133.4 mg/ml, 134 mg/ml; 135 mg/ml; 136 mg/ml; 137 mg/ml; 138 mg/ml; 139 mg/ml; 140 mg/ml; 141 mg/ml; 142 mg/ml; 143 mg/ml; 144 mg/ml; 145 mg/ml; 146 mg/ml; 147 mg/ml; 148 mg/ml; 149 mg/ml; 150 mg/ml; 151 mg/ml; 152 mg/ml; 153 mg/ml; 154mg/ml; 155 mg/ml; 156 mg/ml; 157mg/ml; 158 mg/ml; 159 mg/ml; 160 mg/ml; 161 mg/ml; 162 mg/ml; 163 mg/ml; 164 mg/ml; 165 mg/ml; 166 mg/ml; 167 mg/ml; 168 mg/ml; 169 mg/ml; 170 mg/ml; 171 mg/ml; 172 mg/ml; 173 mg/ml; 174 mg/ml; 175 mg/ml; 176 mg/ml; 177 mg/ml; 178 mg/ml; 179 mg/ml; 180 mg/ml; 181 mg/ml; 182 mg/ml; 183 mg/ml; 184 mg/ml; 185 mg/ml; 186 mg/ml; 187 mg/ml; 188 mg/ml; 189 mg/ml; 190 mg/ml; 191 mg/ml; 192 mg/ml; 193 mg/ml; 194 mg/ml; 195 mg/ml; 196 mg/ml; 197 mg/ml; 198 mg/ml; 199 mg/ml; 200 mg/ml; 201 mg/ml; 202 mg/ml; 203 mg/ml; 204 mg/ml; 205 mg/ml; 206 mg/ml; 207 mg/ml; 208 mg/ml; 209 mg/ml; 210 mg/ml; 211 mg/ml; 212 mg/ml; 213 mg/ml; 214 mg/ml; 215 mg/ml; 216 mg/ml; 217 mg/ml; 218 mg/ml; 219 mg/ml; 220 mg/ml; 221 mg/ml; 222 mg/ml; 223 mg/ml; 224 mg/ml; 225 mg/ml; 226 mg/ml; 227 mg/ml; 228 mg/ml; 229 mg/ml; 230 mg/ml; 231 mg/ml; 232 mg/ml; 233 mg/ml; 234 mg/ml; 235 mg/ml; 236 mg/ml; 237mg/ml; 238 mg/ml; 239 mg/ml; 240 mg/ml; 241 mg/ml; 242 mg/ml; 243 mg/ml; 244 mg/ml; 245 mg/ml; 246 mg/ml; 247 mg/ml; 248 mg/ml; 249 mg/ml; 250 mg/ml; 251 mg/ml; 252 mg/ml; 253 mg/ml; 254 mg/ml; 255 mg/ml; 256 mg/ml; 257 mg/ml; 258 mg/ml; 259 mg/ml; 260 mg/ml; 261 mg/ml; 262 mg/ml; 263 mg/ml; 264 mg/ml; 265 mg/ml; 266 mg/ml; 267 mg/ml; 268 mg/ml; 269 mg/ml; 270 mg/ml; 271 mg/ml; 272 mg/ml; 273 mg/ml; 274 mg/ml; 또는 275 mg/ml. 본원의 실시형태에 따라 농도가 기능하는 한 다른 VEGF 수용체 융합 단백질 농도가 본원에 고려된다.

본 발명의 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제는 약 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20 mg VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)을 함유하는 농도, 또는 약 100 μl 이하, 약 75 μl 이하 또는 약 70 μl 이하, 예를 들어, 약 50 μl; 51 μl; 52 μl; 53 μl; 54 μl; 55 μl; 56 μl; 57 μl; 58 μl; 59 μl; 60 μl; 61 μl; 62 μl; 63 μl; 64 μl; 65 μl; 66 μl; 67 μl; 68 μl; 69 μl; 70 μl; 71 μl; 72 μl; 73 μl; 74 μl; 75 μl; 76 μl; 77 μl; 78 μl; 79 μl; 80 μl; 81 μl; 82 μl; 83 μl; 84 μl; 85 μl; 86 μl; 87 μl; 88 μl; 89 μl; 90 μl; 91 μl; 92 μl; 93 μl; 94 μl; 95 μl; 96 μl; 97 μl; 98 μl; 99 μl; 또는 100 μl의, 본원에 논의된 임의의 허용가능한 용량의 단백질을 함유하는 농도의 제제이다.

본 발명은 본원의 "예시적 제제"에 설명된 임의의 제제를 포함하지만, 여기서 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어, 아플리베르셉트)의 농도는 상기 섹션("VEGF 수용체 융합 단백질 및 다른 VEGF 저해제")에 설명되는 농도로 대체된다.

완충액

본원에서 사용하기 위한 완충액은 산-염기 접합체를 사용하여 pH 변화에 저항하는 용액을 의미한다. 완충액은 약 5.0 내지 약 6.8, 보다 전형적으로 약 5.8 내지 약 6.5, 가장 전형적으로 약 6.0 내지 약 6.5 범위의 pH를 유지할 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 제제의 pH는 약 5.0, 약 5.1, 약 5.2, 약 5.3, 약 5.4, 약 5.5, 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 약 6.4, 약 6.5, 약 6.6, 약 6.7, 또는 약 6.8이다. 본원의 제제에 포함시키기 위한 예시적 완충액은 히스티딘 기반 완충액, 예를 들어 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드 및 히스티딘 아세테이트를 포함한다. 본원의 제제에 포함시키기 위한 완충액은 대안적으로 포스페이트 기반 완충액, 예를 들어 소듐 포스페이트, 아세테이트 기반 완충액, 예를 들어 소듐 아세테이트 또는 아세트산, 또는 시트레이트 기반 완충액, 예를 들어 소듐 시트레이트 또는 시트르산일 수 있다. 또한 완충액이 상기 기재된 pH 범위에서 제제를 완충하는 기능을 하는 한 완충액은 상기의 혼합물일 수 있다는 것을 인식한다. 일부 경우에, 완충액은 약 5 mM 내지 약 25 mM, 또는 보다 전형적으로 약 5 mM 내지 약 15 mM이다. 완충액은 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM, 약 10 mM, 약 11 mM, 약 12 mM, 약 13 mM, 약 14 mM, 약 15 mM, 약 16 mM, 약 17 mM, 약 18 mM, 약 19 mM, 약 20 mM, 약 21 mM, 약 22 mM, 약 23 mM, 약 24 mM, 또는 약 25 mM일 수 있다.

본 발명의 실시형태에서, 히스티딘 기반 완충액은 히스티딘 및 히스티딘 모노하이드로클로라이드를 사용하여 제조된다.

계면활성제

본원에서 사용하기 위한 계면활성제는 다양한 표면 및 계면 유도 스트레스로부터 고농도의 VEGF 수용체 융합 단백질을 보호하는 성분을 의미한다. 따라서, 계면활성제는 VEGF 수용체 융합 단백질 응집을 제한하거나 최소화하고 단백질 용해성을 개선하기 위해 사용될 수 있다. 본원에서 적합한 계면활성제는 비이온성 계면활성제인 것으로 나타났고, 폴리옥시에틸렌 모이어티를 갖는 계면활성제를 포함할 수 있다. 이러한 분류에서 예시적인 계면활성제는 하기를 포함한다: 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 폴리에틸렌 글리콜 3350 및 이들의 혼합물. 제제 중의 계면활성제는 약 0.02% 내지 약 0.1%(w/v), 보다 전형적으로 약 0.02% 내지 약 0.04%(w/v)로 존재할 수 있다. 일부 경우에, 계면활성제는 약 0.02%(w/v), 약 0.03%(w/v), 약 0.04%(w/v), 약 0.05%(w/v), 약 0.06%(w/v), 약 0.07%(w/v), 약 0.08%(w/v), 약 0.09%(w/v), 또는 약 0.1%(w/v)이다.

열 안정화제

본원에서 사용하기 위한 열 안정화제는 VEGF 수용체 융합 단백질의 열 변성에 대한 열 안정성을 제공할 뿐만 아니라 VEGF 수용체 융합 단백질 효능 또는 활성 손실에 대한 보호를 제공하는 성분을 의미한다. 적합한 열 안정화제는 당류를 포함하고, 수크로스, 트레할로스, 소르비톨 또는 만니톨일 수 있거나 아미노산, 예를 들어 L-프롤린, L-아르기닌(예를 들어 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드), 또는 타우린일 수 있다. 부가적으로, 열 안정화제는 또한 치환된 아크릴아미드 또는 프로판 술폰산을 포함할 수 있거나 글리세롤과 같은 화합물일 수 있다.

일부 경우에, 본원의 제제는 당류 및 타우린, 당류 및 아미노산, 당류 및 프로판술폰산, 당류 및 타우린, 글리세롤 및 타우린, 글리세롤 및 프로판술폰산, 아미노산 및 타우린, 또는 아미노산 및 프로판술폰산 모두를 포함한다. 또한, 제제는 당류, 타우린 및 프로판술폰산, 글리세롤, 타우린 및 프로판술폰산뿐만 아니라 L-프롤린, 타우린 및 프로판술폰산을 포함할 수 있다.

본원의 실시형태는 전형적으로 단독의 열 안정화제를 갖고, 각각은 독립적으로 약 2%(w/v) 내지 약 10%(w/v) 또는 4%(w/v) 내지 약 10%(w/v), 또는 약 4%(w/v) 내지 약 9%(w/v), 또는 약 5%(w/v) 내지 약 8%(w/v)의 농도에서 제공되거나, 상기의 총 농도에서 조합으로 제공된다. 제제 중의 열 안정화제는 약 2%(w/v), 약 2.5%(w/v), 약 3%(w/v), 약 4%(w/v), 약 5%(w/v), 약 6%(w/v), 약 7%(w/v), 약 8%(w/v), 약 9%(w/v), 약 10%(w/v) 또는 약 20%(w/v)의 농도일 수 있다.

본 발명의 한 실시형태에서, 타우린 및 프로판 술폰산에 관해, 이러한 열 안정화제는 약 25 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 50 mM 내지 약 75 mM(다른 열 안정화제와 비교하여)에서 제제에 제공될 수 있다.

점도 감소제

전형적으로 점도 감소제는 단백질 응집을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 본원에서 포함하기 위한 점도 감소제는 하기를 포함한다: 소듐 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, D- 또는 L-아르기닌(예를 들어 L-아르기닌 모노하이드로클로라이드), 리신, 또는 이들의 혼합물. 본원에 제공된 경우, 점도 감소제는 약 10 mM 내지 약 100 mM, 보다 전형적으로 약 30 mM 내지 약 75 mM, 보다 더욱 전형적으로 약 40 mM 내지 약 70 mM에서 제공될 수 있다. 일부 경우에, 점도 감소제는 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 약 50 mM, 약 55 mM, 약 60 mM, 약 65 mM, 약 70 mM, 약 75 mM, 약 80 mM, 약 85 mM, 약 90 mM, 약 95 mM, 또는 약 100 mM에서 제공된다.

제제 점도

본원의 실시형태에 따른 제제는 또한 안구 투여, 예를 들어 유리체내 주사를 위해 약학적으로 허용가능한 점도를 가질 수 있다. 점도는 일반적으로 전단 응력 또는 인장 응력에 의해 변형되는 유체의 저항의 측정치를 의미한다(전형적으로 당업계에 알려진 기술, 예를 들어 점도계 또는 레오미터에 의해 측정됨). 본원의 실시형태에 따른 제제의 전형적인 점도는 약 5.0 cP(센티푸아즈) 내지 약 15 cP, 약 11 cP 내지 약 14 cP, 약 12 cP 내지 약 15 cP 또는 약 11 cP 내지 약 12 cP이다. 따라서, 본원의 제제 점도는 약 5.0 cP, 약 6.0 cP, 약 7.1 cP, 약 7.2 cP, 약 7.3 cP, 약 7.4 cP, 약 7.5 cP, 약 7.6 cP, 약 10 cP, 약 10.5 cP, 약 11.0 cP, 약 11.5 cP, 약 12.0 cP, 약 12.5 cP, 약 13.0 cP, 약 13.5 cP, 약 14.0 cP, 약 14.5 cP, 또는 약 15.0 cP(예를 들어 20℃에서 측정된 경우)일 수 있다.

본원의 다양한 실시형태는 상기 매우 유용한 점도를 유지하기 위해 무기염, 또는 다른 점도 감소제를 포함하지 않아도 된다. 전형적으로, 고농도 단백질 용액은 단백질 응집과 높은 점도를 회피하기 위해 점도 감소제를 필요로 하여, 제제가 유리체내 주사되기가 어려워지고, VEGF 수용체 융합 단백질의 효능이 감소된다. 따라서, 본원의 실시형태는 소듐 클로라이드(NaCl), 마그네슘 클로라이드(MgCl₂), D- 또는 L-아르기닌 하이드로클로라이드, 리신 또는 다른 점도 감소제를 실질적으로 갖지 않거나 이들을 첨가하지 않은 제제를 포함한다.

제제 삼투압농도

삼투압농도는 주사가능한 제제에 대한 중요한 특성이다. 생리학적 삼투 조건과 제품이 일치하는 것이 바람직하다. 추가로, 삼투압농도는 용액 중 가용성 함량의 확인을 제공한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제의 삼투압농도는 약 506 mmol/Kg 이하이거나 약 250 내지 약 506 mmol/Kg, 예를 들어 약 250, 260, 270, 280, 290, 299, 300, 310, 314, 315, 316, 324, 343, 346, 349, 369, 384, 403, 426, 430 또는 506 mmol/Kg이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 삼투압농도는 약 250 mmol/Kg 미만이다.

제제의 순도 및 안정성

본원에 기재된 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 제조 및 저장 중 안정하다. 본원에서 용어 "안정한"은 제제 제조 및 저장 기간에 걸쳐 화학적 및 물리적 안정성을 모두 유지하는, 예를 들어 완전성을 유지하고 최소한의 분해, 변성 또는 풀림을 갖는 VEGF 수용체 단백질을 포함하는 제제를 의미한다. VEGF 수용체 단백질 안정성은 상이한 기간에 걸쳐 상이한 온도에서 업계에서 이용가능한 분석 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 특히, VEGF 수용체 화학적 안정성(효능)은 다양한 바이오어세이(예를 들어 본원의 VEGF 수용체 융합 단백질에 의한 VEGF₁₆₅ 결합을 결정하기 위해 사용된 BAF/3 VEGFR1/EPOR 세포주)에 의해 결정될 수 있고, 물리적 안정성은 크기 배제(SE) 크로마토그래피 분석, UPLC(초고성능 액체 크로마토그래피) 크기 배제(SE) 크로마토그래피, 시각적 외관, OD, pH, 전하 변형 형성, 및 고분자량(HMW) 종류 형성율에 의해 결정될 수 있다. 안정한 VEGF 수용체 융합 단백질은 OD, pH, 전하 변형 형성, 및 HMW 종류의 형성에서 제한된 변화를 보이는 것이다.

제시된 VEGF 트랩(예를 들어 아플리베르셉트)을 함유하는 제제에 관련하여 본원에 사용된 "고분자량(HMW)" 종류는 VEGF 트랩 폴리펩티드 및/또는 이들의 동종이량체에 앞서 크기 배제 컬럼(예를 들어, SE-UPLC)에서 용리되는(예를 들어, 이보다 분자량이 높은) 제제 중의 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 착물의 임의의 종류를 의미한다. HMW 종류의 백분율은 예를 들어 SE-UPLC 분석에 의한 제제 중의 폴리펩티드의 전체 양에 대한 상기 종류의 백분율을 의미한다.

본 발명의 한 실시형태에서, 하기 실시예에서 충분히 논의된 바와 같이, 안정한 제제는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 저장된 경우, 12개월 이하, 24개월 이하, 및/또는 36개월 이하의 기간 동안 유의한 VEGF 수용체 융합 단백질 효능 및 물리적 안정성을 보인다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는:

ㆍ 약 37℃에서 약 28일 후, 약 3, 5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 30, 35 또는 37%(또는 10 내지 15% 또는 15 내지 20% 또는 10 내지 20%)의 고분자량 종류의 증가(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 28일 후, 약 5, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22%(또는 5 내지 20% 또는 5 내지 10% 또는 10 내지 15% 또는 15 내지 20%)의 주요 종류의 감소(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 28일 후, 약 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86 또는 87%(또는 약 80 내지 85%)이상의 주요 종류로서의 단백질(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)을 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 28일 후, 약 1 또는 1.5 또는 2%(또는 1 내지 2%)의 저분자량 종류의 증가(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 1개월 후, 약 16%의 고분자량 종류의 증가; 및/또는 약 17%의 주요 종류의 감소 및/또는 약 0.5% 또는 1% 미만의 저분자량 종류의 증가를 갖는 것; 및/또는 약 5℃에서 약 2개월 후 약 1%의 주요 종류의 감소, 및/또는 약 1%의 고분자량 종류의 증가 및/또는 유의하지 않은 또는 검출가능하지 않은 양의 저분자량(LMW) 종류를 갖는 것; 및/또는 약 5℃에서 약 2개월 후 약 97%의 주요 종류(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 12개월 후, 약 3 내지 3.5%의 고분자량 종류의 증가(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 12개월 후, 약 1% 미만 또는 1, 2, 3 또는 4%(예를 들어, 1 내지 4% 또는 3 내지 4%)의 주요 종류의 감소(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 12개월 후, 약 94 또는 95%이상의 주요 종류로서의 단백질(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)을 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 3개월 후, 약 1 내지 2%의 고분자량 종류의 증가(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 6개월 후, 1 미만, 1 또는 2%의 고분자량 종류의 증가(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 5℃에서 약 5¹/₂ 또는 6개월 후, 약 2.5, 3.0 또는 3.5%(또는 약 2.5 내지 3.5%)의 총 고분자량 종류(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 6개월 후, 약 1% 미만 또는 1 또는 2%(또는 약 0.5 내지 2% 또는 1 내지 2%)의 주요 종류의 감소(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 6개월 후, 약 96 또는 97 또는 98%(또는 96 내지 98%)이상의 주요 종류로서의 단백질(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)을 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 24개월 또는 36개월 후, 약 5 또는 6 또는 7% 미만(예를 들어 약 1.5, 2, 3, 4 또는 5%)(또는 1.5 내지 5% 또는 1.5 내지 2.5%)의 고분자량 종류의 증가; 및/또는 약 3.0, 3.25, 3.5, 4.0, 4.5 또는 5%의 총 고분자량 종류; 및/또는 약 2 또는 3%(또는 2 내지 3%)의 주요 종류의 감소; 및/또는 약 95 또는 96% 이상(또는 95 내지 96%)의 주요 종류의 총량(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)을 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 1개월 후, RP-HPLC에 의해 회수가능한 약 97, 98, 99 또는 100%(또는 97 내지 100%)의 제제 중의 아플리베르셉트를 갖는 것이고,

ㆍ 제조 및 정제 직후, 약 1.5, 2, 2.5, 3.0 또는 3.5%미만의 고분자량 종류(예를 들어 SE-UPLC 또는 SEC에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 37℃에서 약 6개월 후, 적어도 약 70% 또는 75%(예를 들어 70 내지 75%)의 주요 종류/주요 피크로서 아플리베르셉트(예를 들어 모세관 등전 포커싱(cIEF) 또는 이미지화 모세관 등전 포커싱에 의해 측정된 바와 같음)(비산성 및 비염기성 종류)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 36개월 후, 약 1 또는 2%(또는 1 내지 2%)의 산성 종류의 증가(예를 들어 모세관 등전 포커싱(cIEF) 또는 이미지화 모세관 등전 포커싱에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 36개월 후, 약 1% 이하의 주요 종류/주요 피크의 감소(예를 들어 모세관 등전 포커싱(cIEF) 또는 이미지화 모세관 등전 포커싱에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고,

ㆍ 약 2 내지 8℃에서 약 36개월 후, 약 78 내지 79%의 주요 종류/주요 피크(예를 들어 모세관 등전 포커싱(cIEF) 또는 이미지화 모세관 등전 포커싱에 의해 측정된 바와 같음)를 갖는 것이고/이거나

및/또는

ㆍ (예를 들어 wet AMD와 같은 혈관기원 안구 장애를 갖는)인간 또는 토끼 또는 마우스와 같은 포유 동물에게 유리체내 투여한 경우, EYLEA에 대해 관찰된 것(예를 들어 EYLEA가 0.5 또는 2.0 mg에서 유리체내 투여된 경우)과 임상적으로 상이한 임의의 부작용을 유발하지 않거나; 안구에 임상적으로 유의한 염증, 연장된 안압(IOP) 증가, 연장된 혈압 증가 또는 감소 및/또는 망막 박리를 유발하지 않는 것이다.

추가로, 본 발명의 한 실시형태에서, 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질은 제조 및 저장 과정에 걸쳐 산성 전하 변형 형성을 보이지 않거나 이를 적게 보이기 때문에, 예를 들어 이미지화 모세관 등전 포커싱에 의해 시험된 바와 같이 전하 변형 형성을 보이지 않거나 이를 적게 보이기 때문에 안정하다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 약 8% 이하의 저분자량(LMW) 종류를 나타낸다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 약 0.2, 0.4 또는 0.5 EU(엔도톡신 단위)/엔도톡신 ml 미만을 갖는다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 미립자 물질을 본질적으로 갖지 않거나 약 1, 2, 5, 10, 25 또는 50 마이크로미터(또는 그 이상)의 크기의 미립자 물질을 본질적으로 갖지 않는다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제가 환원되지 않은 CE-SDS(SDS 모세관 겔 전기영동)에 의해 분석된 경우, 97% 이상의 총 피크 영역이 주요 피크이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제가 크기 배제 UPLC(SE-UPLC)에 의해 분석된 경우, 93, 94 또는 95% 이상의 총 피크 영역이 주요 피크이고, 3.5, 4, 5 또는 6% 이하가 응집물이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 제제는 약 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃ 또는 8℃, 2 내지 8℃(예를 들어 5℃의 평균 온도), 23℃, 25℃, 30℃ 또는 37℃이다.

예시적 제제

예시적인 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 하기를 포함한다:

제제 A: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 B: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 C: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 D: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임.

제제 E: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 F: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 G: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 H: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 I: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 J: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 K: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 L: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 M: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 N: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 O: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 P: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임.

제제 Q: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 R: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 S: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 T: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2(예를 들어 6.2)이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 U: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 V: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 W: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 X: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 Y: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 Z: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 AA: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 BB: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임.

제제 CC: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 DD: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 EE: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 FF: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 GG: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 HH: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 II: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 JJ: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 KK: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 LL: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 MM: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 NN: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임.

제제 OO: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 PP: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임.

제제 QQ: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 RR: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 SS: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 TT: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 UU: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 VV: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2이고, 선택적으로 구체적으로 점도 감소제를 배제함.

제제 WW: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 타우린, pH는 5.8임.

제제 XX: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 4%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 5.8임.

제제 YY: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 타우린, pH는 5.8임;

제제 ZZ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 5.8임;

제제 AAA: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임.

제제 BBB: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임;

제제 CCC: 80, 100, 120 또는 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 5.8임.

제제 DDD: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 4%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임.

제제 EEE: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 선택적으로 열 안정화제 없음, pH는 5.8임;

제제 FFF: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10 mM 소듐 포스페이트, 5%(w/v) 수크로스, 및 0.03% 폴리소르베이트 20, pH는 6.2임;

제제 GGG: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 술페이트

제제 HHH: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 티오시아네이트

제제 III: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 40 mM 소듐 시트레이트

제제 JJJ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 글리신

제제 KKK: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 클로라이드

제제 LLL: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 리신

제제 MMM: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 아스파르테이트

제제 NNN: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 글루타메이트

제제 OOO: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 시트레이트, 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드

제제 PPP: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 글리신, 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드

제제 QQQ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 아스파르테이트, 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드

제제 RRR: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 글루타메이트, 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드

제제 SSS: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM His, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 10 mM L-아르기닌 하이드로클로라이드

제제 TTT: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM His, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 100 mM L-아르기닌 하이드로클로라이드

제제 UUU: 30 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 VVV: 30 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 WWW: 60 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 XXX: 60 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 YYY: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 ZZZ: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2

제제 AAAA: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM NaCl, pH 6.2

제제 BBBB: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM NaCl, pH 6.2

제제 CCCC: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 10 mM 소듐 포스페이트, 5% 수크로스, 40 mM 소듐 클로라이드, 0.03% PS 20, pH 6.2

제제 DDDD: 80 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트), 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임.

제제 EEEE: 120.0 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 + 12 mg/ml), 20 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 2 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임.

제제 FFFF: 113.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 102 내지 125 mg/ml), 20 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 2 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임.

제제 GGGG: 114.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 103 내지 126 mg/ml), 10 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 1 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임.

제제 HHHH: 100.0 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 + 10 mg/ml), 20 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 2 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임.

제제 IIII: 133.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 + 13 mg/ml), 20 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 2 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임.

제제 JJJJ: 150 mg/ml 아플리베르셉트(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 + 15 mg/ml), 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.8%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%) 및 50 mM L-아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 6.2(예를 들어 6.0 내지 6.4 또는 5.9 또는 6.5)임;

제제 KKKK: 114.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어 + 14 mg/ml), 20 mM 히스티딘 기반 완충액(예를 들어 + 2 mM), 5%(w/v) 수크로스(예를 들어 + 0.5%), 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.02 내지 0.04%), 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드(예를 들어 + 5 mM), pH는 5.8(예를 들어 5.6 내지 6.0 또는 5.5 내지 6.1)임;

또는 본원에 설명된 임의의 제제.

본 발명의 한 실시형태에서, 상기 열거된(예를 들어 제제 A 내지 KKKK 중 어느 하나) 또는 본원에 논의된 임의의 제제 구성요소(예를 들어 모든 구성요소)의 농도는 구체적으로 언급된 농도의 ± 약 3%, 5% 또는 약 10%이다.

제조 방법

본원의 실시형태는 제제의 성분을 단일 조성물로 조합하는 것과 선택적으로 제제를 용기 또는 장치, 예를 들어 바이알, 또는 전달 장치, 예를 들어 예비충전된 시린지로 도입하는 것을 포함하는 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 본원에 설명된 제제 A 내지 KKKK 중 어느 것)을 포함하는 본 발명의 약학 제제의 제조 방법을 포함한다. 이러한 방법의 생성물인 제제, 바이알 또는 장치는 본 발명의 일부이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 약학 제제(예를 들어, 본원에 설명된 제제 A 내지 KKKK 중 어느 것)의 제조 방법은, 단백질이 발현되는 조건 하에서 배양 배지에서 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)을 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포(예를 들어, 차이니즈 햄스터 난소 세포)를 배양하는 단계; 및 숙주 세포 및/또는 배양 배지로부터 단백질을 정제하는 단계 및 일부 단백질과 본원에 설명된 약학 제제의 부형제를 조합하는 단계를 포함한다. 또한, 이러한 방법의 생성물인 제제, 바이알 또는 장치는 본 발명의 일부이다.

본 발명의 한 실시형태에서, 고농도로 만들기 위해 및 최종 사용을 위해 제제에서 요구된 VEGF 수용체 융합 단백질을 양 및 유형이 결정된다. 완충액의 양 및 유형, 계면활성제의 양 및 유형, 열 안정화제의 양 및 유형, 및 점도 감소제의 포함, 또는 특정 배제에 관해 동일하게 결정된다. 이러한 성분은 조합되고 혼합되어 제제 pH가 예를 들어 약 5.0 내지 약 6.8(예를 들어 5.8)의 목적하는 값이고/이거나, 점도가 예를 들어 20℃에서 약 6.0, 7.3, 11.5 또는 12.0 cP의 목적하는 값이 된다. 본 발명의 한 실시형태에서, 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 멸균될 수 있고, 예를 들어 2℃ 내지 8℃(예를 들어 5℃)에서 24 또는 36 이하의 개월 동안의 안정한 조건에서 저장될 수 있다.

예를 들어, 문헌[Hardman, 등 (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.]; 문헌[Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.]; 문헌[Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY]; 문헌[Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.]을 참조한다.

혈관기원 안구 장애 및 암

VEGF 수용체 융합 단백질을 포함하는 본 발명의 약학 제제(예를 들어 임의의 약학 제제 A 내지 KKKK)는 본 발명의 제제 중의 치료학적 유효량의 VEGF 수용체 융합 단백질을 필요로 하는 대상체에 예를 들어 유리체내 주사에 의해 투여함으로써 임의의 혈관기원 안구 장애를 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 본원에서 혈관기원 안구 장애는 혈관의 성장 또는 증식 및/또는 혈관 누출에 의해 유발되거나 이와 연관된 임의의 안구 질환을 의미한다. 본원의 제제 및 방법을 사용하여 치료가능하거나 예방가능한 혈관기원 안구 장애의 비제한적인 예는:

ㆍ 연령 연관 황반 변성(wet),

ㆍ 황반 부종,

ㆍ 망막 정맥 폐색 후 황반 부종,

ㆍ 망막 정맥 폐색(RVO),

ㆍ 중심 망막 정맥 폐색(CRVO),

ㆍ 분지 망막 정맥 폐색(BRVO),

ㆍ 당뇨병성 황반 부종(DME),

ㆍ 맥락막 신혈관 형성(CNV),

ㆍ 홍채 혈관신생,

ㆍ 신혈관 녹내장,

ㆍ 녹내장 수술후 섬유증,

ㆍ 증식성 유리체 망막병증(PVR),

ㆍ 시신경 혈관신생,

ㆍ 각막 혈관신생,

ㆍ 망막 혈관신생,

ㆍ 유리체 혈관신생,

ㆍ 판누스(pannus),

ㆍ 익상편,

ㆍ 혈관성 망막증,

ㆍ 당뇨병성 망막증(예를 들어 DME를 겪지 않는 대상체에서의, 예를 들어 비증식성 당뇨병성 망막증(예를 들어 약 47 또는 53의 당뇨병성 망막증 중증도 범위(DRSS)에 의해 특징화됨) 또는 증식성 당뇨병성 망막증) 및

ㆍ 당뇨병성 황반 부종(DME)을 앓는 환자에서 당뇨병성 망막증을 포함한다.

VEGF 수용체 융합 단백질을 포함하는 본 발명의 약학 제제(예를 들어 임의의 약학 제제 A 내지 KKKK)는 본 발명의 제제 중의 치료학적 유효량의 VEGF 수용체 융합 단백질을 필요로 하는 대상체에 예를 들어 근육내, 종양내, 피하 또는 정맥내 주사에 의해 투여함으로써 임의의 암을 치료하거나 예방하는데 사용될 수 있다. 암은 성장, 증식, 생존 및/또는 전이가 어느 정도 혈관기원에 의존하는 암을 포함한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 암은 결장직장암, 폐암, 피부암, 유방암, 뇌암, 위암, 신장암, 전립선암, 간암 또는 췌장암이다.

따라서, 본 발명은 치료학적 유효량의 예를 들어 본 발명에 따른 약학 제제 중의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)(예를 들어, 약 4, 6, 또는 8.0, 8.1, 8.4 또는 8.5 mg)을 이를 필요로 하는 대상체에서 대상체의 안구내로, 예를 들어 유리체내로 이를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 혈관기원 안구 장애의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 양 안구는 VEGF 수용체 융합 단백질이 투여된다. 본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질의 치료학적 유효 용량은 약 매 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주 또는 24주에 1번 투여된다. 본 발명의 한 실시형태에서, 상기 치료 또는 예방 방법은 대상체의 혈압(수축기 및/또는 확장기)의 유의한 증가 및/또는 고혈압(예를 들어 등급 1, 등급 2 또는 등급 3)의 진전 및/또는 비정상적으로 높은 안압의 부재 하에서 수행된다. 본 발명의 한 실시형태에서, 상기 방법은 상기 투여 후 혈압(수축기 및/또는 확장기)의 유의한 증가 및/또는 고혈압(예를 들어 등급 1, 등급 2 또는 등급 3)의 진전 및/또는 비정상적으로 높은 안압에 대해 대상체를 모니터링하는 단계를 포함한다.

투여 방식

VEGF 수용체 융합 단백질을 포함하는 본 발명의 약학 제제는 알려진 의료적으로 승인된 전달 시스템에 따라 투여될 수 있다. 본원의 실시형태에서, 이러한 전달 시스템은 안구, 안구내, 맥락막내, 유리체내 또는 결막하 주사에 의해 환자에게 제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 약학 제제는 또한 국소 경로, 예를 들어 점안제, 점안겔, 점안연고 등에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 본원의 제제를 위한 다른 가능한 전달 경로는 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강, 경막외 및 경구를 포함한다.

본 발명의 한 실시형태에서, 본 발명의 약학 제제의 유리체내 주사는 제제를 함유하는 시린지 및 바늘(예를 들어 30 게이지 주사 바늘)로 안구를 뚫고, 안구의 유리체에 제제(예를 들어 약 100 마이크로리터 이하; 약 40, 50, 55, 56, 57, 57.1, 58, 60, 70 또는 75 마이크로리터)를 주사(예를 들어 치료적 유효량의 VEGF 수용체 융합 단백질, 예를 들어 약 4, 5, 6, 7, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8 또는 8.9, 9, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20 mg VEGF 수용체 융합 단백질을 전달하기에 충분한 부피로)하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 상기 방법은 주사될 안구에 국소 마취제(예를 들어 프로파라카인, 리도카인 또는 테트라카인), 항생제(예를 들어 플루오로퀴놀론), 소독제(예를 들어 포비돈 요오딘) 및/또는 동공 확장제를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 주사될 안구 주변의 멸균 부위가 주사 전에 확립된다. 본 발명의 한 실시형태에서, 유리체내 주사후, 대상체는 안압 및/또는 혈압 상승에 대해 모니터링된다. 본 발명의 한 실시형태에서, 다른 안구도 동일한 절차로 주사된다.

투여되는 VEGF 수용체 융합 단백질의 양

치료 과정에 걸쳐 대상체에 대한 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질의 각 용량은 동일하거나 실질적으로 동일한 양의 융합 단백질을 함유할 수 있다. 대안적으로, 임의의 1회 용량은 치료 과정에 걸쳐 상이하거나 가변적일 수 있다.

암(예를 들어 혈관신생에 의해 적어도 부분적으로 매개됨) 또는 혈관기원 안구 장애의 치료 또는 예방을 위한 VEGF 수용성 융합 단백질의 유효량 또는 치료적 유효량은 예를 들어 혈관기원 안구 장애에 관해 임의의 임상적으로 측정가능한 정도에 의해 암 또는 혈관기원 안구 장애의 하나 이상의 증상 또는 징후의 퇴행, 안정화 또는 제거를 유발함으로써, 당뇨병성 망막병증 중증도 점수(DRSS)의 감소 또는 유지를 유발함으로써, 시력을 개선 또는 유지시킴으로써(예를 들어, ETDRS 문자의 증가에 의해 측정된 것과 같은 최상의 교정 시력에서), 시야를 증가 또는 유지시킴으로써 및/또는 중심 망막 두께를 감소 또는 유지시킴으로써, 및 암에 관하여, 대상체에서 암 세포의 성장, 생존 및/또는 전이를 중지 또는 역전시킴으로써, 암 또는 혈관기원 안구 장애를 역전, 안정화 또는 제거를 유발하기에 충분한 VEGF 수용체 융합 단백질의 양을 의미한다. 본 발명의 한 실시형태에서, 혈관기원 안구 장애의 치료 또는 예방을 위한 VEGF 수용체 융합 단백질의 유효량 또는 치료적 유효량은 하기를 포함하여 용량 당 약 0.5 mg 내지 약 10 mg 또는 0.5 mg 내지 약 20 mg이다: 약 0.5 mg 이상; 또는 약 2 mg 이상, 예를 들어 약 2.1 mg; 2.2 mg; 2.3 mg; 2.4 mg; 2.5 mg; 2.6 mg; 2.7 mg; 2.8 mg; 2.9 mg; 3.0 mg; 3.1 mg; 3.2 mg; 3.3 mg; 3.4 mg; 3.5 mg; 3.6 mg; 3.7 mg; 3.8 mg; 3.9 mg; 4.0 mg; 4.1 mg; 4.2 mg; 4.3 mg; 4.4 mg; 4.5 mg; 4.6 mg; 4.7 mg; 4.8 mg; 4.9 mg; 5.0 mg; 5.1 mg; 5.2 mg; 5.3 mg; 5.4 mg; 5.5 mg; 5.6 mg; 5.7 mg; 5.8 mg; 5.9 mg; 6.0 mg; 6.1 mg; 6.2 mg; 6.3 mg; 6.4 mg; 6.5 mg; 6.6 mg; 6.7 mg; 6.8 mg; 6.9 mg; 7.0 mg; 7.1 mg; 7.2 mg; 7.3 mg; 7.4 mg; 7.5 mg; 7.6 mg; 7.7 mg; 7.8 mg; 7.9 mg; 8.0 mg; 8.1 mg; 8.2 mg; 8.3 mg; 8.4 mg; 8.5 mg; 8.6 mg; 8.7 mg; 8.8 mg; 8.9 mg; 9 mg; 9.1 mg; 9.2 mg; 9.3 mg; 9.4 mg; 9.5 mg; 9.6 mg; 9.7 mg; 9.8 mg; 9.9 mg, 10.0 mg, 10.1 mg; 10.2 mg; 10.3 mg; 10.4 mg; 10.5 mg; 10.6 mg; 10.7 mg; 10.8 mg; 10.9 mg; 11 mg; 11.1 mg; 11.2 mg; 11.3 mg; 11.4 mg; 11.5 mg; 11.6 mg; 11.7 mg; 11.8 mg; 11.9 mg; 12 mg; 12.1 mg; 12.2 mg; 12.3 mg; 12.4 mg; 12.5 mg; 12.6 mg; 12.7 mg; 12.8 mg; 12.9 mg; 13 mg; 13.1 mg; 13.2 mg; 13.3 mg; 13.4 mg; 13.5 mg; 13.6 mg; 13.7 mg; 13.8 mg; 13.9 mg; 14 mg; 14.1 mg; 14.2 mg; 14.3 mg; 14.4 mg; 14.5 mg; 14.6 mg; 14.7 mg; 14.8 mg; 14.9 mg; 15 mg; 15.1 mg; 15.2 mg; 15.3 mg; 15.4 mg; 15.5 mg; 15.6 mg; 15.7 mg; 15.8 mg; 15.9 mg; 16 mg; 16.1 mg; 16.2 mg; 16.3 mg; 16.4 mg; 16.5 mg; 16.6 mg; 16.7 mg; 16.8 mg; 16.9 mg; 17 mg; 17.1 mg; 17.2 mg; 17.3 mg; 17.4 mg; 17.5 mg; 17.6 mg; 17.7 mg; 17.8 mg; 17.9 mg; 18 mg; 18.1 mg; 18.2 mg; 18.3 mg; 18.4 mg; 18.5 mg; 18.6 mg; 18.7 mg; 18.8 mg; 18.9 mg; 19 mg; 19.1 mg; 19.2 mg; 19.3 mg; 19.4 mg; 19.5 mg; 19.6 mg; 19.7 mg; 19.8 mg; 19.9 mg; 또는 20 mg. 본 발명의 한 실시형태에서, 암의 치료 또는 예방을 위한 VEGF 수용체 융합 단백질의 유효량 또는 치료적 유효량은 약 4 mg/kg(예를 들어 정맥내)이다. 상기 용량은 예를 들어 2주마다 투여될 수 있다.

본 발명의 한 실시형태에서, VEGF 수용체 융합 단백질은 예를 들어 상기 논의된 융합 단백질의 목적하는 용량을 전달하기에 충분한 부피로 투여된다. 본 발명의 한 실시형태에서, (예를 들어, 유리체내 주사에 의해 혈관기원 안구 장애를 치료 또는 예방하기 위해) 전달된 부피는 약 100 마이크로리터 이하(예를 들어 약 임의의 하기 부피: 25 마이크로리터; 26 마이크로리터; 27 마이크로리터; 28 마이크로리터; 29 마이크로리터; 30 마이크로리터; 31 마이크로리터; 32 마이크로리터; 33 마이크로리터; 34 마이크로리터; 35 마이크로리터; 36 마이크로리터; 37 마이크로리터; 38 마이크로리터; 39 마이크로리터; 40 마이크로리터; 41 마이크로리터; 42 마이크로리터; 43 마이크로리터; 44 마이크로리터; 45 마이크로리터; 46 마이크로리터; 47 마이크로리터; 48 마이크로리터; 49 마이크로리터; 50 마이크로리터; 51 마이크로리터; 52 마이크로리터; 53 마이크로리터; 54 마이크로리터; 55 마이크로리터; 56 마이크로리터; 57 마이크로리터; 58 마이크로리터; 59 마이크로리터; 60 마이크로리터; 61 마이크로리터; 62 마이크로리터; 63 마이크로리터; 64 마이크로리터; 65 마이크로리터; 66 마이크로리터; 67 마이크로리터; 68 마이크로리터; 69 마이크로리터; 70 마이크로리터; 71 마이크로리터; 72 마이크로리터; 73 마이크로리터; 74 마이크로리터; 75 마이크로리터; 76 마이크로리터; 77 마이크로리터; 78 마이크로리터; 79 마이크로리터; 80 마이크로리터; 81 마이크로리터; 82 마이크로리터; 83 마이크로리터; 84 마이크로리터; 85 마이크로리터; 86 마이크로리터; 87 마이크로리터; 88 마이크로리터; 89 마이크로리터; 90 마이크로리터; 91 마이크로리터; 92 마이크로리터; 93 마이크로리터; 94 마이크로리터; 95 마이크로리터; 96 마이크로리터; 97 마이크로리터; 98 마이크로리터 또는 99 마이크로리터)이다.

본 발명의 한 실시형태에서, (예를 들어 유리체내 주사에 의해 혈관기원 안구 장애를 치료 또는 예방하기 위해) 제제는 약 60 마이크로리터 이하, 약 70 마이크로리터 이하 또는 약 75 마이크로리터 이하 또는 약 100 마이크로리터 이하의 부피로 투여된다. 예를 들어, 본 발명의 한 실시형태에서, 약 2, 4, 6, 8.0, 8.1, 8.0 내지 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8 또는 8.9, 9.0 또는 10 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질은 약 50, 60, 70 또는 75 마이크로리터로 투여된다.

본 발명의 범위는 또한 50 μl 미만(예를 들어, 약 1, 5, 10, 17, 17.5, 18, 18.5, 20, 30, 40 또는 45 μl)과 같은 작은 부피로 본 발명의 약학적 제제 중의 0.5 또는 2 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질을 전달하기 위한 방법(예를 들어 유리체내 주사에 의해 혈관기원 안구 장애를 치료 또는 예방하기 위해)을 포함한다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학 제제의 "단일 투여량 부피", 즉 본 발명의 약학 제제 중의 단일 용량의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트)을 함유하는 부피(예를 들어, 약 50 μl 또는 60 μl, 70 μl 또는 75 μl 또는 약 4, 6, 8 또는 10 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질을 함유하는 부피)를 포함하거나 이로 이루어지거나 이로 본질적으로 이루어진 조성물을 포함한다. 하기 논의된 바와 같이, 선택적으로 제제의 작은 과충진 부피를 포함하는 단일 투여량 부피를 포함하는 용기(예를 들어, 바이알 또는 주사 장치)도 또한 본 발명의 일부이다.

용기 및 주사 장치

본원의 실시형태에 따른 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 제제(예를 들어, 임의의 제제 A 내지 KKKK)는 다양한 유용한 용기 및 주사 장치에 미리 포장되거나 미리 로딩될 수 있다. 따라서, 본 발명은 상기 제제를 함유하는 용기 및 주사 장치를 포함한다. 본원의 한 실시형태에서, 용기는 멸균될 수 있는 바이알이다. 본원의 또 다른 실시형태에서, 용기는 멸균될 수 있는 시험관이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 주사 장치(멸균될 수 있음)는 시린지(예를 들어 예비 충전된 시린지 또는 자동주사기)이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 주사 장치는 유리체내 임플란트, 예를 들어 재충전가능한 유리체내 임플란트이다.

"예비 충전된" 시린지는 의사 또는 환자가 판매하거나 사용하기 전에 본 발명의 제제로 충전된 시린지이다.

본원에서 "멸균"은 무균이거나 실질적으로 모든 살아있는 미생물 및 이들의 포자가 없거나, 모든 살아있는 미생물 및 이들의 포자가 없는 것을 의미한다.

본원에서 사용된 시린지는 예를 들어 유리 또는 중합체, 예를 들어 미국 특허 출원 제2017/0232199호(본원에 모든 목적을 위해 포함됨)에 기재된 시클로올레핀, 플런저 및 바늘로 구성된 배럴을 포함한다.

용기 및 주사 장치는 실리콘(예를 들어 실리콘 오일 또는 베이크 실리콘(예를 들어 <40 μg 또는 <100 μg))으로 코팅될 수 있다.

본 발명의 한 실시형태에서, 용기 또는 주사 장치는 실질적으로 금속이 없거나 실질적으로 텅스텐이 없거나 텅스텐이 적다.

본 발명의 한 실시형태에서, 시린지는 하나 이상의 용량선 눈금을 함유하고/하거나 용량 측정 시스템이다.

본원의 실시형태에 따른 용기는 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질 제제를 담을 수 있다. 일부 양태에서, 용기 또는 주사 장치는 사용 표시를 나타내는 라벨을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본원의 용기 또는 주사 장치는 본 명세서 전반에 걸쳐 기재된 사용 지침서와 함께 패키지 삽입물을 포함할 수 있다.

다른 실시형태에서, 상기 기재된 바와 같은 고농도 VEGF 수용체 융합 단백질의 단일 용량 또는 다중 용량(예를 들어 2 이상)(예를 들어 용량은 2 mg, 4 mg, 6 mg, 8 mg 또는 10 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질임)을 함유하는 부피는 예를 들어 사용까지 저장을 위해 용기 또는 주사 장치, 예를 들어 멸균 시린지에 미리 포장될 수 있다. 한 예에서, 용기 중의 부피는 선택적으로 소량의 과충진 부피를 추가로 포함하는 단일 용량의 VEGF 수용체 융합 단백질을 포함한다. 멸균의 미리 로딩된 시린지는 예를 들어 12개월, 24개월 또는 36개월 이하 동안 저장 조건(예를 들어 2℃ 내지 8℃) 하에서 유지될 수 있다. 과충진은 적절한 부피의 회수 및/또는 투여를 허용하기에 충분한 과량의 부피이다. 본 발명의 한 실시형태에서, 용기는 단일 투여량 부피 또는 다중 투여량 부피를 갖고 약 5% 내지 10% 과충진 부피를 갖는다.

시린지 크기는 예를 들어 0.3 cc, 0.5 cc 또는 1 cc일 수 있다. 멸균 시린지는 전형적으로 약 ½인치, 또는 12.5 mm 내지 16 mm 길이의 안구 주사에 유용한 니들을 포함하고, 이는 환자 및 건강 관리 전문가에 따라 29 게이지, 30 게이지, 31 게이지, 32 게이지 또는 33 게이지일 수 있다. 바늘이 유리체내 주사를 달성하기에 효과적이라면 다른 바늘 길이 및 게이지가 사용될 수 있다.

본 발명이 다수의 실시형태를 참조하여 구체적으로 도시되고 기재되어 있지만, 당업자에게 본 발명의 범위 및 사상을 벗어나지 않으면서 본원에 개시된 다양한 실시형태에 대한 형태 및 세부사항이 변경될 수 있고, 본원에 개시된 다양한 실시형태는 청구항의 범위에 대한 제한으로서 작용하지 않는다는 것을 이해해야 한다.

부가적 제제

본 발명은 40 mg/ml 초과의 VEGF 수용체 융합 단백질(예를 들어 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트) 및 하기를 포함하는 하기 제제를 포함한다:

(a) 히스티딘 염(예를 들어 히스티딘-HCl 또는 히스티딘-아세테이트, 예를 들어 10 mM 내지 50 mM)을 포함하고, pH가 5.7 내지 6.2 범위인 완충액; 당류(예를 들어 6% 초과, 그러나 10% 이하), 예컨대 수크로스, 트레할로스, 만니톨 또는 글루코스; 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80(예를 들어 0% 내지 0.1%)으로 이루어진 군으로부터 선택된 계면활성제;

(b) 히스티딘 함유 완충액, L-히스티딘/히스티딘 하이드로클로라이드(예를 들어 10 mM); 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.03%), 무기염, 예컨대 NaCl(예를 들어 40 mM), 및 탄수화물, 예컨대 수크로스(예를 들어 5%), 예를 들어 pH 6.0 내지 6.5(예를 들어, 6.2 또는 6.5);

(c) 시트르산(예를 들어 5 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM 또는 30 mM), 수크로스(예를 들어 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% 또는 10%), 아르기닌(예를 들어 5 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM 또는 50 mM 또는 100 mM), 및 폴리소르베이트 20(예를 들어 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09% 또는 0.10%);

(d) 완충액, 예컨대 포스페이트, 히스티딘, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 글루타메이트, 및/또는 락테이트(예를 들어 5 내지 20 또는 5 내지 50 mM); 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트(예를 들어 PS20 또는 PS80), 폴리에틸렌 글리콜 도데실 에테르, 폴록사머, 4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)페닐-폴리에틸렌 글리콜, 알킬당류 또는 알킬글리코시드, 삼투향상제(tonicifying agent), 예컨대 폴리올 또는 아미노산, 예를 들어 수크로스, 트레할로스, 소르비톨, 만니톨, 글리세롤, 프롤린, 아르기닌, 메티오닌, 글리신, 또는 리신, 여기서 제제는 최종 삼투압농도가 약 300 mOsm/kg이고, 클로라이드 음이온의 농도는 약 10 mM미만이고; pH 5.0 내지 6.5임; 또는

(e) 10 mM 소듐 포스페이트, 40 mM 소듐 클로라이드, 0.03% 폴리소르베이트 20, 및 5% 수크로스, pH 6.2.

실시예

하기 실시예는 단지 예시적 목적으로 제공되고 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 사용된 숫자의 측면에서 정확성을 보장하려고 노력하였지만, 일부 실험적 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 이러한 실시예에 설명된 임의의 제제는 본 발명의 일부이다.

이러한 실시예에서, 2 내지 8℃에서 실험이 실시된 경우, 온도는 +3℃의 허용범위로 5℃로 맞춰진다.

실시예 1: 80 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질 제제는 36개월 기간에 걸쳐 효능, 물리적 안정성 및 전하를 유지한다.

80 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질(아플리베르셉트)을 갖는 일련의 4개의 상이한 제제를 장기간 효능, 물리적 안정성 및 전하 변형의 진전에 대해 시험하였다. 각 4개의 제제의 성분 목록을 표 1-1에 나타낸다. 각 제제는 2℃ 내지 8℃에서 36개월 동안 저장 과정에 걸쳐 SE-UPLC에 의해 VEGF 수용체 융합 단백질 HMW 종류 형성뿐만 아니라 주요 종류 백분율에 대해 평가되었다. 각 VEGF 수용체 융합 단백질 함유 제제는 또한 동일한 기간 및 온도에 걸쳐 이미지화 모세관 등전 포커싱을 사용하여 평가되었다. 마지막으로 각 제제의 효능은 동일한 기간 및 온도에 걸쳐 바이오어세이에 의해 시험되었다.

데이터는 도 1a, 1b, 1c 및 1d에 도시된다. 도 1a는 각 네 가지 제제에 대해 형성된 VEGF 수용체 융합 단백질 HMW 종류의 백분율을 나타낸다. VEGF TRAP은 제제가 소듐 포스페이트에 비해 히스티딘 기반인 경우 약간 더 느린 속도의 HMW 종류 형성을 보여준다. 도 1a에서 나타난 바와 같이, 36개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장 후 %HMW 종류는, 히스티딘 완충액(제제 3 및 4)에서 1.6에서 1.9%로 증가한 것에 비해, 소듐 포스페이트 제제(제제 1 및 2)에서 2.6% 증가하였다. 도 1b에서 나타난 바와 같이, 데이터가 확인되었고, 여기서 SE-UPLC는 동일한 시간 프레임 및 온도 범위에 걸쳐 존재하는 VEGF 수용체 융합 단백질 주요 종류의 백분율을 확인하기 위해 사용되었다. 비교 점으로, 10 mM 소듐 포스페이트를 갖는 현재 EYLEA® 제제(40 mg/ml)에서 어세이를 수행하였고, 이는 36개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장 후 %HMW 종류의 1.2% 증가를 보였다(도시되지 않음). 또한, 각각의 네 가지 80 mg/ml VEGF TRAP 제제를 효능에 대해 시험하였고, EYLEA® 활성과 비교하였다(도시되지 않음). EYLEA®뿐만 아니라 모든 네 가지 제제에 대한 바이오어세이에 의해 효능은 유지되었다. 이러한 데이터는 본원의 제제가 EYLEA®에 필적하는 VEGF 수용체 융합 단백질 안정성을 유지할 수 있다는 것을 보여준다.

도 1c 및 1d에 관해, 36개월 동안 2℃ 내지 8℃에서 저장 후 형성된 VEGF TRAP 전하 변형의 백분율이 또한 시험되었다. 도 1c는 제제 1 내지 4의 VEGF TRAP이 36개월의 기간에 걸쳐 산성 종류 백분율에서 의미 있는 변화를 보이지 않았다는 것을 보여주고, 도 1d는 36개월의 기간에 걸쳐 주요 종류 백분율에 대해 동일한 결과를 보여준다. VEGF TRAP이 저장 중 전하 변형 종류를 유지했다는 발견은 VEGF TRAP의 품질이 유지되었고, 저장 매개변수의 과정에 걸쳐 탈아미노화, N-말단 피로글루타메이트 형성, 이성질화, 응집 등과 같은 과정이 발생하지 않는다는 것을 보여준다.

실시예 1의 데이터는 EYLEA®에서 확인된 VEGF TRAP 농도의 2배를 갖는 제제가 2℃ 내지 8℃에서 36개월의 과정에 걸쳐 물리적 안정성, 품질 및 효능을 유지할 수 있다는 것을 보여준다. 추가로 모든 네 가지 제제가 상기 기간에 걸쳐 유사한 효능을 보였지만, 히스티딘 함유 제제는 HMW 종류 형성(단백질 변성의 표시)의 약간 적은 증가를 보였고, 이는 일부 상황 하에서 히스티딘이 완충액의 선택일 수 있음을 보여준다. 그러나, 히스티딘 및 포스페이트 기반 완충액 모두에 대한 발견은 연구 과정에 걸쳐 탁월한 안정성을 보였다.

실시예 2: 소듐 포스페이트 완충액/수크로스 제제 중의 150 mg/ml VEGF TRAP 안정성.

두 가지 소듐 포스페이트 제제를 28일 동안 37℃에서 150 mg/ml VEGF 트랩(아플리베르셉트)의 물리적 안정성에 대해 시험하였다. 각 2개의 제제의 성분 목록을 표 2-1에 나타낸다. 각 제제는 37℃에서 28일 동안 저장 과정에 걸쳐 SE-UPLC에 의해 HMW 종류 형성뿐만 아니라 주요 종류 백분율에 대해 평가되었다.

도 2a는 37℃에서 28일 동안 저장 중 두 제제 사이에 형성된 %HMW 종류의 의미 있는 차이가 없었음을 보여주고, 이는 SE-UPLC에 의한 주요 종류의 백분율에 의해 확인된 바와 같다(도 2b). 28일의 기간에 걸쳐 두 제제의 외관, 탁도 또는 pH는 변화가 없었다(도시되지 않음).

이어서, 40 mg/ml EYLEA®를 포함한 제제 및 실시예 1로부터의 제제 1(소듐 포스페이트 완충액 중 80 mg/ml VEGF TRAP)과 결과를 비교하였다. 예측한 대로, 150 mg/ml VEGF TRAP 제제는 EYLEA® 제제에 비해 보다 높은 HMW 종류 형성 백분율 및 실시예 1의 제제 1에 비해 다소 높은 HMW 종류 형성 백분율을 보였다.

고농도 VEGF TRAP 함유 제제에 대해 추가의 시험을 수행하였고, 히스티딘 함유 제제는 소듐 포스페이트 기반 제제보다 상기 분자의 더 양호한 보호를 보였다. 추가로, 각각의 시험 제제로 소듐 클로라이드를 포함하는 것은 실제로 37℃에서 VEGF TRAP의 탈안정화를 유발하였다. 실시예 2의 데이터는, 심지어 고농도의 150 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질에서 및 매우 극한 온도 저장에서 본원의 제제가 물리적 안정성에 대한 우수한 보호를 제공한다는 것을 보여준다.

실시예 3: 150 mg/ml VEGF TRAP에 대해 약학적으로 허용가능한 제제 점도가 달성될 수 있다.

다수의 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 함유 제제를 점도 거동에 대해 시험하였다. 10 mg/ml 내지 160 mg/ml VEGF 트랩을 갖는 제제를 다양한 점도 감소제의 존재 및 부재 하에서 시험하였다.

도 3a는 무기염 없음, 아르기닌, 리신, 소듐 클로라이드 및 마그네슘 클로라이드와 함께, pH가 6.2인 10 mM 소듐 포스페이트 완충액, 5% 수크로스 중 155 mg/ml VEGF 트랩을 갖는 제제를 보여준다. 각각의 경우, 점도는 20℃에서 cP로 측정되었다. 약 17 cP(무기염 없음) 및 15 cP(100 mM 마그네슘 클로라이드) 사이의 점도 범위가 관찰되었고, 이때 점도 감소제가 존재하지 않거나 점도 감소제가 사용된 것 사이에는 약간의 변화가 있다. 도 3b는 염기 완충액이 10 mM 히스티딘이고 pH가 5.8인 것을 제외하고 유사한 일련의 제제를 보인다. 여기서, 임의의 무기염의 부족은 11.5 cP의 점도의 제제를 제공하였고, 50 mM의 리신으로는 14 cP의 점도의 제제를 제공하였다. 히스티딘 함유 완충액은 다른 저농도 생물학적 주사와 일치하는 탁월한 점도를 제공하였다.

도 3c는 10 mM 소듐 포스페이트, 5% 수크로스와, 6.2의 pH에서 아르기닌의 부재 하에서 및 50 mM의 아르기닌 하이드로클로라이드에서의 10 mg/ml 및 160 mg/ml의 농도 사이의 VEGF 트랩의 점도를 보여준다. 점도 감소제의 포함은 모든 시험된 VEGF 트랩 농도에 대해 유사한 점도를 유도하였다. 도 3a 및 3b에 나타난 바와 같이, 점도 감소제는 심지어 보다 높은 단백질 농도에서도 제제 점도에 대해 약간의 긍정적인 영향을 가졌다. 이는 아르기닌 및 다른 점도 감소제가 이전에는 고농도 단백질 점도에 대해 유익한 특성을 갖는 것으로 나타남에 따라 놀라운 결과이다.

실시예 4: 아르기닌 하이드로클로라이드는 소듐 포스페이트 완충액/수크로스 제제 중의 150 mg/ml VEGF TRAP의 안정성을 개선한다.

두 가지 소듐 포스페이트 제제를 12개월 동안 2 내지 8℃에서 150 mg/ml VEGF 트랩(아플리베르셉트)의 물리적 안정성에 대해 시험하였다. 각 2개의 제제의 성분 목록을 표 4-1에 나타낸다. 추가로 제제 2는 50mM 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함한다. 각 제제는 37℃에서 12개월 동안 저장 과정에 걸쳐 SE-UPLC에 의해 HMW 종류 형성뿐만 아니라 주요 종류 백분율에 대해 평가되었다.

도 4a는 제제에 대한 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드의 첨가가 VEGF TRAP 물리적 안정성을 개선하였다는 것을 보여준다. VEGF TRAP에 대한 이러한 안정화는 도 4b에서 확인되었고, 여기서 주요 종류 백분율은 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드의 존재 하에서 VEGF TRAP에 대해 더 높게 유지된다. 이러한 데이터는 아르기닌 하이드로클로라이드의 첨가가 저장된 VEGF TRAP에 대해 안정화 효과를 제공하는 상태가 있음을 보여준다. 표로 나타낸 크기 배제 크로마토그래피 데이터는 표 4-2 및 4-3에 예시된다.

실시예 5: 히스티딘 및 포스페이트 완충액 중 10 mg/ml 내지 170 mg/ml VEGF TRAP의 점도

도 5는 10 mM 포스페이트 완충액 및 10 mM 히스티딘 완충액이 모두 다양한 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 농도에 대해 유용한 점도를 가졌음을 보였다. 보다 높은 VEGF 트랩 농도에서, 히스티딘 완충액은 점도의 개선(포스페이트에 대해)을 보였다. 점도는 20℃에서 측정되었다.

실시예 6: 타우린 및 프로판 술폰산은 고농도 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 제제에 대해 개선된 안정성을 제공한다.

다수의 제제 조합으로 단백질 안정성에 대한 효과를 결정하기 위한 실험을 실시하였다. 도 6은 2 mg/ml 단백질 내지 10 mg/ml 단백질(아플리베르셉트)을 갖는 제제에 대한 동적 광 산란 플롯을 나타낸다. 70 mM 타우린 또는 70 mM PSA를 포함한 제제는 높은 농도에서 감소된 자가 상호작용을 나타냈다. 이러한 데이터는 타우린 및 PSA가 고농도 단백질 제제에서 이 경우 논의된 것과 같이 유용한 내포물이 될 수 있다는 것을 나타낸다.

실시예 7: 다양한 히스티딘 함유 제제의 안정성의 장기간 연구.

총 9개의 상이한 아플리베르셉트 제제를 다양한 완충 농도, 열 안정화제 및 소수성 염으로 시험하였다. 9 개의 제제, F1 내지 F9는 하기 표 7-1에 요약된다.

14 mL의 각 제제를 15 mL 팔콘 튜브에서 컴파운딩하였다. 이후, 0.22 μM 시린지 필터를 사용하여 제제를 멸균 여과하고, 멸균 2 mL 1형 유리 바이알에 채웠다. 8개의 바이알을 층류 후드에서 0.4 mL 부피를 갖는 각 제제로 채웠다.

SE-UPLC(분자량 종류)를 모든 샘플에 대해 수행하여 각 제제의 화학적 안정성을 결정하였다.

각 제제 F1 내지 F9에 대해 시간에 따른 HMW 종류의 백분율을 도 7에 나타낸다(또한 표 7-2 참조). 제제 F4 및 F7은 5℃에서 4개월 후 HMW 종류의 가장 낮은 백분율을 보였다. 결과는 아르기닌 및 프롤린과 같은 부형제의 첨가가 VEGF 트랩 제제에서 %HMW 종류 형성율을 유의하게 감소시킨다는 것을 보였다.

실시예 8: 다양한 아르기닌 농도에 의한 140 mg/mL VEGF 트랩의 안정성 연구.

4개의 140 mg/mL VEGF 트랩(아플리베르셉트) 안구 의약품 제제의 안정성에 대한 가변적인 아르기닌-HCl의 농도의 영향을 연구하였다. 안정성 평가는 2 내지 8℃의 저장 조건에서 수행되었다. 또한 의약품(DP)은 스트레스(37℃) 조건 하에서 배양되었다. 본 안정성 연구에서 평가되는 4개의 제제(F1 내지 F4)는 하기 예시된 표 8-1에 기재되어 있다.

대략 145 mL의 187 mg/mL VEGF 트랩 히스티딘 제제를 해동시켰다. F3을 제외하고 36 mL의 각 제제를 컴파운딩하고; 39 mL의 벌크 F3을 컴파운딩하였다. 채우기 전 각 제제를 0.22 μm Durapore PVDF 멸균 필터를 사용하여 LFH(층류 후드) 내에서 여과 멸균하였다. 13 mm 세럼 스토퍼(S2-F451 4432/50B2-40)로 막힌 투명한 탈열화된 2 mL 1형 Schott 유리 바이알을 사용하여 안정성 연구를 수행하였다.

제제의 SE-UPLC 분석을 상기 설명된 대로 수행하였다. 시간에 따른 각 제제에서 SE-UPLC를 사용한 %HMW 측정을 도 8(a 내지 b)에 예시한다. 또한 표 8-2 및 8-3을 참조한다.

5℃에서 저장할 때, 이러한 제제는 아르기닌-HCl의 농도에 비례하는 %HMW 종류의 형성율의 감소를 나타냈다. 그러나, 스트레스 하에서 이러한 효과는 역전되었다. 37℃에서 제제는 아르기닌-HCl의 농도에 비례하여 %HMW 종류의 명백한 증가를 보였다. 이러한 특성에 의해 히스티딘 완충액의 존재 하에서 아플리베르셉트에 대한 아르기닌의 유익한 효과가 발견될 가능성은 거의 없었다. 전형적으로, 생명공학 산업에서 제제 개발을 위해, 약물에 대한 다양한 부형제의 효과가 단기간 동안 스트레스 하에서(예를 들어 37℃와 같은 승온에서) 먼저 스크리닝된다. 이러한 접근법의 목적은 장기간에 걸쳐 스트레스의 부재 하에서(예를 들어 5℃와 같은 저온에서) 양호하게 수행되지 않을 부형제를 신속하게 제거하는 것이다. 여기서, 아르기닌은 37℃에서 안정성에 미치는 이의 영향에도 불구하고 유용한 부형제로 확인되었다. 제제화된 의약품은 전형적으로 제조 후 4 내지 5℃에서 수개월 동안 보관되기 때문에, 아르기닌 및 히스티딘 완충액 중 아플리베르셉트는 장기간 안정한 의약품 보관을 위한 매우 가치 있는 제제일 수 있다.

실시예 9: 호프마이스터(Hofmeister) 시리즈로부터의 반대이온 및 기타 부형제의 존재 하에서 VEGF 트랩 안정성.

여러 제제의 안정성에 대한 다양한 반대이온 및 기타 부형제의 효과를 결정하였다.

A. 반대이온 스크리닝

반대이온(예를 들어, 술페이트, 티오시아네이트 및 시트레이트)을 고농도 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 제제(140 mg/ml)와 소듐 염 형태로 시험하였다. 부가적으로, 기타 아미노 첨가 부형제(예를 들어, 글리신 및 리신)를 또한 시험하였다.

대략 42 ml의 187 mg/ml VEGF 트랩 안구 약물 물질을 해동시켰다. 110% 농도의 140 mg/ml 제제화된 약물 물질 및 표적 부형제 농도를 갖는(반대이온, 글리신 및 리신 제외) 50 ml의 중간 제제화된 약물 물질(155.56 mg/ml)을 제조하였다.

중간 제제화된 약물 물질을 0.5M 스톡 부형제 용액(반대이온, 글리신 또는 리신)으로 추가로 희석하여 하기 표 9-1에 열거된 140 mg/ml 제제화된 약물 물질 제제를 생성하였다. 13 mm 세럼 스토퍼 S2-F451 4432/50 82-40(ELN 아이템# 19700004 워시# 0 000078949)으로 막힌 투명한 탈열화된 2 mL I형 Schott 유리 바이알에 채우기 전에, 층류 후드 내에서 0.22 μm PVDF 시린지 필터로 각각의 최종 제제를 여과 멸균하였다. 60개의 바이알을 0.5 ml의 각각의 제제로 채웠다. 6개의 바이알을 1.5 ml로 채웠다.

B. 글루타메이트 및 아스파르테이트 스크리닝

아르기닌 하이드로클로라이드와 조합하여 유기 반대이온의 존재 하에서 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 고농도 제제(140 mg/ml)의 안정성을 시험하였다. 또한, 2개의 새로운 반대이온(글루타메이트 및 아스파르테이트)을 고농도 VEGF 트랩(아르기닌 하이드로클로라이드와 함께 및 아르기닌 하이드로클로라이드 없이)과의 상용성에 대해 시험하였다. 시험된 제제는 하기 표 9-2에 요약된다.

대략 50 ml의 187 mg/ml VEGF 트랩 약물 물질을 해동시켰다. 110%의 140 mg/ml 제제화된 약물 물질 및 표적 부형제 농도를 갖는(반대이온, 시트레이트, 글리신, 글루타메이트 및 아스파르테이트 제외) 60 ml의 중간 제제화된 약물 물질(155.56 mg/ml)을 제조하였다. 중간 제제화된 약물 물질을 1M 스톡 부형제 용액(아르기닌 하이드로클로라이드, 소듐 시트레이트, 글리신, 소듐 글루타메이트 및 소듐 아스파르테이트)으로 추가로 희석하여 하기 표에 열거된 140 mg/ml 제제화된 약물 물질 제제를 생성하였다. 13 mm 세럼 스토퍼 S2-F451 4432/50 B2-40(ELN 아이템# 19700004 워시# 0 000078949)으로 막힌 투명한 탈열화된 2 mL I형 Schott 유리 바이알에 채우기 전에, 층류 후드 내에서 0.22 μm PVDF 시린지 필터로 각각의 최종 제제를 여과 멸균하였다. 60개의 바이알을 0.5 ml의 각각의 제제로 채웠다. 6개의 바이알을 1.5 ml로 채웠다.

RHEOSENSE m-VROC® 점도계를 사용하여 점도 시험을 수행하였다. 대략, 0.5 mL의 희석되지 않은 샘플을 유리 시린지 위에 로딩하였다. 샘플을 목적하는 온도로 평형화시키고, 칩 또는 측정 셀에 주입하였다. 점도는 칩 벽면의 전단 응력과 관련되는 입구에서 출구로의 압력 강하를 측정함으로써 계산되었다. 결과는 mPas-1 또는 cp로 표현된다. 도 9 및 표 9-3을 참조한다.

VAPRO 증기압 삼투압계를 사용하여 삼투압 시험을 수행하였다. 대략, 10 μL의 희석되지 않은 샘플을 페이퍼 디스크에 접종하였다. 용액 증기압의 함수인 이슬점 온도 저하를 감응성 열전대를 통해 측정하고, 용액의 삼투압으로 보고하였다. 결과는 mmol/kg 또는 mOsm으로 표현된다. 도 10 및 표 9-3을 참조한다.

37℃ 또는 5℃에서 보관 후, 시간에 따른 특정한 제제 중 고분자량 종류를 또한 SE-UPLC로 평가하였다. 도 11(a 내지 b) 및 표 9-4 및 9-5를 참조한다.

DynaPro® 플레이트 판독기II를 사용하여 동적 광 산란 실험을 수행하였다. 대략, 100 μL의 희석되지 않은 샘플을 96-웰 플레이트 위에 로딩하였다. 25℃에서 각각의 웰에 대해 35개의 획득을 얻었다. 정규화를 사용하여 자기상관 함수 분석을 DYNAMICS v7.1 소프트웨어에서 수행하였다. 반경(nm) 대 %강도 플롯 및 %질량 대 반경(nm) 플롯을 생성하여 각 샘플에 대한 평균 분자 반경 및 %다분산도 값(%Pd)을 유도하였다. 도 12를 참조한다.

실시예 10: 정상 토끼에서 고용량 VEGF 트랩(140 mg/ml)의 IVT 전달 내성.

유리체내 주사를 통해 투여된 항-VEGF 치료제는 현재 신생혈관 연령 관련 황반 변성, 당뇨병성 황반 부종 및 망막 혈관 폐쇄성 질환의 치료를 위한 표준 치료법이다. 그러나, 매월 또는 격월 유리체내 주사는 환자, 간병인 및 의사에게 상당한 치료 부담을 나타낸다. 임상 실습에서 보다 효과적이고 내구성 있는 치료법이 긴급히 요구된다. 본 연구는 정상 뉴질랜드 백토끼 안구에서 안정적으로 제제화된 고용량 VEGF 트랩(140 mg/ml, 임상 용량의 14배임)의 내약성을 조사하기 위한 것이다.

히스티딘 완충액 또는 포스페이트 완충액 중 고용량 VEGF-트랩(아플리베르셉트)의 두 제제를 시험하였다. 코호트 당 세 마리의 토끼는 각 제제의 단일 양측 유리체내 주사에 의해 50 uL의 7mg의 VEGF 트랩을 받았다. 안구 염증 징후를 세극등, 광학 일관성 단층촬영(OCT) 및 안저혈관 조영술에 의해 1일, 4일, 1주 모니터링한 후 유리체내 투여 후 12주까지 매주 모니터링하였다. 안압을 유리체내 주사 전과 주사 10분 후 및 30분 후에 토노펜(Tonopen)으로 측정한 후 모든 추적 시점에서 측정하였다. 동물은 12주에 안락사되었다.

토끼 안구는:

(1) 140 mg/ml 아플리베르셉트, 20 mM 히스티딘, 5% 수크로스, 50 mM 아르기닌 HCl, 0.03% PS 20, pH 5.8

또는

(2) 140 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 소듐 포스페이트, 5% 수크로스, 40 mM 소듐 클로라이드, 0.03% PS 20, pH 6.2로 투여되었다.

히스티딘 완충제 군으로부터의 6개의 안구 중 2개는 IVT 후 8주까지 유리체에 어두운 그림자를 보였고, 이는 세극등 검사에 의해 시술과 관련된 후방 수정체 손상으로 인한 국소 백내장으로 확인되었다. 포스페이트 완충액 군으로부터의 6개의 안구 중 하나는 IVT 후 8주까지 유리체에 어두운 그림자를 보였고, 이는 세극등 검사에 의해 후방 수정체 손상으로 인한 국소 백내장으로 확인되었다(시술 관련됨).

시험된 고용량 VEGF 트랩(140 mg/ml) 제제는 단일 유리체내 투여 12주 후 내에 정상 뉴질랜드 백토끼 안구에서 잘 견뎠다. 7 mg의 VEGF 트랩의 단일 유리체내 주사 후, 안저에 이상 또는 염증의 징후는 나타나지 않았다. 유리체는 투명했고, 망막 혈관 패턴은 정상으로 나타났다. 망막 박리, 출혈 또는 시신경 헤드 변화는 관찰되지 않았다. 기준과 비교하여 유리체 안압 변화는 없었다. 토끼 안구의 기준 플루오레세인 혈관조영술(FA) 및 OCT 이미지는 도 13(a 내지 d)에 나타나 있다. 8주에 걸친 각 치료군에서의 토끼 안구의 시간 경과 FA 및 OCT 이미지는 도 14, 15, 16 및 17에 나타나 있다. 토끼 326 및 329의 좌안(OS) 또는 우안(OD)으로부터의 데이터가 나타나 있다.

실시예 11: 제제 UUU 내지 BBBB의 안정성 평가

본 연구는 최대 6개월 동안 37℃에서 배양될 때, 10 mM 포스페이트, 10% 또는 20% 수크로스(Suc.), 0 또는 50 mM NaCl, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2 중 60 mg/ml 및 120 mg/ml VEGF 트랩(아플리베르셉트)의 안정성을 시험하였다. 본 안정성 연구를 위한 제제를 표 11-1에 하기 예시한다.

디스펜싱 전에 층류 후드에서 PVDF 0.2 μm 필터로 제제를 여과 멸균하였다.

각 제제를 함유하는 바이알을 1개월 동안 37℃에서 보관하였다.

모든 제제는 육안 검사 및 광학 밀도 측정에 의해 본질적으로 입자가 없었다. 37℃에서 1개월 후 RP-HPLC에 의한 회수에서 유의한 단백질 손실은 없었고(표 11-2), 이러한 경향은 6개월까지 지속되었다.

VEGF 트랩에 대한 주요 분해 경로는 이러한 조건 하에서의 응집이었다(도 18(a 내지 b); 표 11-3). VEGF 트랩의 안정성은 단백질과 수크로스 농도에 따라 달라졌다. 더 낮은 VEGF 트랩 농도 및 더 높은 수크로스를 갖는 제제는 더 안정하였다. 동일한 단백질:수크로스 비를 유지하는 것은 동일한 분해율을 유도하지 않았다. 예를 들어, F1 및 F4는 3:1의 동일한 단백질:수크로스 비를 가졌지만, F4는 이의 높은 단백질 농도로 인해 F1보다 덜 안정하였다. 유사한 경향이 6개월까지 관찰되었다.

실시예 12: 상이한 아플리베르셉트 제제에 의한 원숭이에서의 반복 투여 유리체내 독성 연구.

사이노몰구스 원숭이에서 다양한 제제의 안정성을 본 실시예에서 평가한다. 총 7개의 유리체내 용량은 그룹 1 내지 3에 대한 대략 Q4W 양 안구에 투여되고, 총 3개의 유리체내 용량은 그룹 4 내지 9에 대한 대략 Q4W 양 안구에 투여된다. 말기 부검은 마지막 투여 대략 1주 후(N=3/성별/그룹)에, 회복 부검은 마지막 투여 대략 12주 후(2/성별/그룹)에 수행된다.

하기 평가가 수행된다:

ㆍ 임상 징후, 체중, 활력 징후, 심전도 데이터(투여 전 치료 종료 및 회복 종료), 혈압 측정(꼬리 커프를 통함), 임상 및 해부학적 병리를 기준으로 하는 안전성 평가

ㆍ 세극등 현미경, 간접 검안경 검사 및 안압 측정을 포함하는 투여 및 회복 간격 동안 정기적인 주기로 포괄적인 안구 검사

ㆍ 연구 9주(모든 그룹), 26주(오직 그룹 1 내지 3) 동안 치료전 및 회복 기간 종료시 안저 촬영, 형광 혈관조영술 및 전위 조영술

ㆍ 생물 분석, ADA 분석 및 독성역학 평가를 위한 혈액 및 유리체 샘플(종료시).

그룹 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및/또는 9 중 어느 하나 이상에서 시험된 제제는, 상기 논의된 평가에서 측정된 바와 같이 사이노몰구스 원숭이에서 EYLEA에 필적하는 안전성 프로파일을 갖는 것으로 결정될 것으로 예측된다.

실시예 13: VEGF 트랩 생성물에 의한 안전성 연구.

114.3 mg/mL VEGF 트랩(아플리베르셉트) 및 10 mM 히스티딘, pH 5.8, 5% 수크로스, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM 아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 제제를 채우기 전 0.22 μm Durapore PVDF 멸균 필터를 사용하여 LFH(층류 후드) 내에서 제조하였다. 투명한 탈열화된 3 mL I형 Schott 유리 바이알을 0.3 mL의 의약품으로 채우고, 13 mm 세럼 스토퍼(S2-F451 4432/50B2-40)로 막았다. 샘플을 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 순도에 대해 37℃ 또는 5℃에서 저장 후 다양한 시점에서 분석하여, 고분자량 종류(HMW), 저분자량 종류(LMW) 및 주요 피크(주요)의 존재(%)를 결정하였을 뿐 아니라, 마이크로플로우 이미징, HIAC 액체 입자 카운팅(빛 차폐에 의함), 및 현미경으로 다양한 크기의 입자의 존재를 결정하였다.

37℃, 25℃ 및 2 내지 8℃에서 저장 후 안정성 및 순도 데이터를 도 19(a 내지 e)에 나타낸다. 또한 표 13-1 내지 13-4를 참조한다.

실시예 14: 다양한 VEGF 트랩 농도에 의한 안전성 연구.

4개의 VEGF 트랩(아플리베르셉트) 안구 의약품 제제의 안정성에 대한 가변적인 VEGF 트랩의 농도의 영향을 연구하였다. 농도는 80 내지 140 mg/mL 범위였다. 안정성 평가는 2 내지 8℃의 저장 조건에서 수행되었다. 또한 의약품(DP)은 스트레스(37℃) 조건 하에서 배양되었다. 본 안정성 연구에서 평가되는 4개의 제제(각각은 본원에서 "CCC"로 명칭됨)는 하기 예시된 표 14-1에 기재되어 있다.

채우기 전 대략 27 mL의 각각의 제제를 0.22 μm Durapore PVDF 멸균 필터를 사용하여 LFH(층류 후드) 내에서 제조하였다. 투명한 탈열화된 2 mL I형 Schott 유리 바이알을 채우고, 13 mm 세럼 스토퍼(S2-F451 4432/50B2-40)로 막았다. 샘플을 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UPLC)에 의해 순도에 대해 37℃ 또는 2 내지 8℃에서 저장 후 다양한 시점에서 분석하여, 고분자량 종류(HMW) 및 주요 피크(주요)의 존재(%)를 결정하였다.

2 내지 8℃ 또는 37℃에서 최대 6개월 동안 배양 후 HMW 백분율을 나타내는 데이터는 도 20(a 내지 b)에 예시된다. 또한 표 14-2 및 14-3을 참조한다. 37℃ 및 5℃에서 저장할 때, 이러한 제제는 VEGF 트랩의 농도에 대해 HMW 형성율의 양의 상관관계를 나타냈다. 140 mg/mL 제제는 가장 높은 %HMW 종류 형성율을 보였다.

실시예 15: 고용량 Eylea는 지속적 신생혈관 누출의 D,L-AAA 모델에서 연장된 기간의 작용을 갖는다.

D,L-AAA 모델에서 만성 망막 혈관 누출을 저해하기 위한 아플리베르셉트의 작용 기간에 대한 용량의 4배 증가 효과를 본 실시예에서 결정하였다.

사용된 동물은 DL-AAA(DL-α-아미노아디프산) 질환 유도 3개월 후 뉴질랜드 백토끼였다. 치료군은:

ㆍ 플라시보(제제 완충액) 50 mcl/안구; n=6개의 안구

ㆍ 50 mcl 중 아플리베르셉트 500 mcg/안구; n=7개의 안구

ㆍ 50 mcl 중 아플리베르셉트 2 mg/안구; n=8개의 안구였다.

각 치료군에서 사용된 제제는 10 mM 히스티딘, 8% 수크로스, 0.03% PS 20, pH 5.8이었다. 기준선과 1, 2, 4, 6, 7, 9, 10, 11, 13, 및 18주에서 수행된 안과 검사는 안압(IOP), 무적색(RF: red-free) 이미징(혈관 모폴로지를 결정하기 위함), 플루오레세인 혈관조영술(FA; 혈관 누출을 결정하기 위함), 광학 일관성 단층촬영(OCT; 유리체 염증을 확인하기 위함)이었다. 혈청(ADA) 및 혈장(약물 수준)을 기준선과 1, 2, 4, 6 및 9주에 수집하였다.

각 그룹의 FA 검사로부터의 데이터는 도 21에 예시된다. 이러한 데이터는 고용량의 아플리베르셉트를 수여받는 동물의 망막에서 혈관 누출 저해가, 저용량을 수여받는 동물에서보다 오래 지속되었다는 것을 입증하였다. 혈관 투과성이 완전히 저해된 치료된 안구의 개수는 투여 후 최대 18주까지 모든 샘플링 시점에서 2 mg 투여군에서 유의하게 더 높았다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> HIGH CONCENTRATION VEGF RECEPTOR FUSION PROTEIN CONTAINING FORMULATIONS <130> 10430-WO <150> US 62/669,506 <151> 2018-05-10 <150> US 62/752,127 <151> 2018-10-29 <150> US 62/769,876 <151> 2018-11-20 <150> US 62/813,882 <151> 2019-03-05 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1377 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggtcagct actgggacac cggggtcctg ctgtgcgcgc tgctcagctg tctgcttctc 60 acaggatcta gttccggaag tgataccggt agacctttcg tagagatgta cagtgaaatc 120 cccgaaatta tacacatgac tgaaggaagg gagctcgtca ttccctgccg ggttacgtca 180 cctaacatca ctgttacttt aaaaaagttt ccacttgaca ctttgatccc tgatggaaaa 240 cgcataatct gggacagtag aaagggcttc atcatatcaa atgcaacgta caaagaaata 300 gggcttctga cctgtgaagc aacagtcaat gggcatttgt ataagacaaa ctatctcaca 360 catcgacaaa ccaatacaat catagatgtg gttctgagtc cgtctcatgg aattgaacta 420 tctgttggag aaaagcttgt cttaaattgt acagcaagaa ctgaactaaa tgtggggatt 480 gacttcaact gggaataccc ttcttcgaag catcagcata agaaacttgt aaaccgagac 540 ctaaaaaccc agtctgggag tgagatgaag aaatttttga gcaccttaac tatagatggt 600 gtaacccgga gtgaccaagg attgtacacc tgtgcagcat ccagtgggct gatgaccaag 660 aagaacagca catttgtcag ggtccatgaa aaggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga 1377 <210> 2 <211> 458 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(26) <400> 2 Met Val Ser Tyr Trp Asp Thr Gly Val Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys Leu Leu Leu Thr Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asp Thr Gly Arg Pro 20 25 30 Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu 35 40 45 Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr 50 55 60 Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys 65 70 75 80 Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr 85 90 95 Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His 100 105 110 Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile 115 120 125 Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu 130 135 140 Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile 145 150 155 160 Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu 165 170 175 Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe 180 185 190 Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu 195 200 205 Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr 210 215 220 Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 225 230 235 240 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 245 250 255 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 260 265 270 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 275 280 285 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 290 295 300 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 305 310 315 320 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 325 330 335 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 340 345 350 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 355 360 365 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375 380 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 385 390 395 400 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405 410 415 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 420 425 430 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 435 440 445 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455

Claims

수성 약학 제제로서,
약 100 mg/ml이상의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질, 항VEGF 항체 또는 항원 결합 단편 또는 VEGF 결합 분자;
약 5% 수크로스
히스티딘 완충액; 및
약 0.03% 계면활성제;
선택적으로, 추가의 치료제를 같이 포함하고,
제제는 약 5.0 내지 약 6.8의 pH를 갖는 수성 약학 제제.
제1항에 있어서, 유리체내 투여에 적합한 수성 약학 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 소듐 술페이트, 소듐 티오시아네이트, 글리신, NaCl, 소듐 아스파르테이트, L-아르기닌 및/또는 소듐 글루타메이트를 추가로 포함하는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질 또는 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 VEGF 결합 분자는:
(i) (1) 서열 식별 번호 2의 아미노산 27 내지 129를 포함하는 VEGFR1 성분; (2) 서열 식별 번호 2의 아미노산 130 내지 231을 포함하는 VEGFR2 성분; 및 (3) 서열 식별 번호 2의 아미노산 232 내지 457을 포함하는 다중화 성분을 포함하는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 VEGF 수용체 융합 단백질;
(ii) 제1 VEGF 수용체의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2 및 제2 VEGF 수용체의 Ig 도메인 3, 및 다중화 성분을 포함하는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 VEGF 수용체 융합 단백질;
(iii) 제1 VEGF 수용체의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2, 제2 VEGF 수용체의 Ig 도메인 3, 상기 제2 VEGF 수용체의 Ig 도메인 4 및 다중화 성분을 포함하는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 VEGF 수용체 융합 단백질;
(iv) VEGFR1의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2, VEGFR2의 Ig 도메인 3, 및 다중화 성분을 포함하는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 VEGF수용체 융합 단백질;
(v) VEGFR1의 면역글로불린 유사(Ig) 도메인 2, VEGFR2의 Ig 도메인 3, VEGFR2의 Ig 도메인 4 및 다중화 성분을 포함하는 두 개의 폴리펩티드를 포함하는 VEGF수용체 융합 단백질;
(vi) 서열 식별 번호 1의 핵산 서열에 의해 인코딩된 두 개의 VEGFR1R2-FcΔC1(a) 폴리펩티드를 포함하는 VEGF 수용체 융합 단백질이거나; 또는
(vii) 베바시주맙, 라니비주맙, 페갑타닙, 브롤루시주맙, 항VEGF DARPin 및 이중특이적 항VEGF/ANG2 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질 또는 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 VEGF 결합 분자는: 아플리베르셉트 및 콘베르셉트로 이루어진 군으로부터 선택된 VEGF 수용체 융합 단백질인 수성 약학 제제.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질 또는 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 VEGF 결합 분자는 약 41 내지 약 275 mg/ml의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질인 수성 약학 제제.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질 또는 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 VEGF 결합 분자는:
ㆍ 약 100 mg/ml;
ㆍ 약 111.5 mg/ml;
ㆍ 약 112.0 mg/ml;
ㆍ 약 113.3 mg/ml;
ㆍ 약 114.3 mg/ml;
ㆍ 약 115.6 mg/ml;
ㆍ 약 116.3 mg/ml;
ㆍ 약 120 mg/ml;
ㆍ 약 133 mg/ml;
ㆍ 약 140 mg/ml;
ㆍ 약 150 mg/ml;
ㆍ 약 200 mg/ml;
ㆍ 약 250 mg/ml의 농도의 VEGF 수용체 융합 단백질이고,
ㆍ 약 100 μl 이하, 약 70 μl 이하, 약 75 μl 이하, 약 50 μl 이하, 또는 약 60 μl 이하의 약 4 mg VEGF 수용체 융합 단백질을 함유하는 VEGF 수용체 융합 단백질이고;
ㆍ 약 100 μl 이하, 약 70 μl 이하, 약 75 μl 이하, 약 50 μl 이하, 또는 약 60 μl 이하의 약 6 mg VEGF 수용체 융합 단백질을 함유하는 VEGF 수용체 융합 단백질이고;
ㆍ 약 100 μl 이하, 약 70 μl 이하, 약 75 μl 이하, 약 50 μl 이하, 또는 약 60 μl 이하의 약 8 mg VEGF 수용체 융합 단백질을 함유하는 VEGF 수용체 융합 단백질이고;
ㆍ 약 100 μl 이하, 약 70 μl 이하, 약 75 μl 이하, 약 50 μl 이하, 또는 약 60 μl 이하의 약 10 mg VEGF 수용체 융합 단백질을 함유하는 VEGF 수용체 융합 단백질인 수성 약학 제제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 삼투압 농도가 약 299 내지 약 506 mmol/Kg이고/이거나;
(ii) 20℃에서 점도가 약 6 내지 15 cP 인 수성 약학 제제.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, pH가 5.8 내지 6.5인 수성 약학 제제.
제9항에 있어서, pH가 5.8인 수성 약학 제제.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제가 비이온성 계면활성제인 수성 약학 제제.
제11항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 폴록사머 188, 폴리에틸렌 글리콜 3350 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘이 히스티딘 하이드로클로라이드인 수성 약학 제제.
제13항에 있어서, 약 10 mM 내지 20 mM 히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 당류인 열 안정화제를 포함하는 수성 약학 제제.
제15항에 있어서, 당류가 수크로스, 만니톨, 소르비톨 또는 트레할로스인 수성 약학 제제.
제15항 또는 제16항에 있어서, 약 2.5%(w/v), 약 5%(w/v), 약 8%(w/v), 약 10%(w/v) 또는 약 20%(w/v) 수크로스를 포함하는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.03%(w/v)의 농도의 계면활성제를 포함하는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, L-아르기닌 모노하이드로클로라이드를 포함하는 수성 약학 제제.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질 또는 항VEGF 항체 또는 항체 단편 또는 VEGF 결합 분자가 제조 및 정제 직후 약 3.5% 미만의 고분자량 종류 및/또는 약 2 내지 8℃에서 약 24 개월 동안 저장 후 약 6% 이하의 고분자량 종류를 갖는 VEGF 수용체 융합 단백질인 수성 약학 제제.
제제로서,
제제 A: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 B: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 C: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 D: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임;
제제 E: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 F: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 G: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 H: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 I: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 J: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 K: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 L: 80 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 M: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 N: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 O: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 P: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임;
제제 Q: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 R: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 S: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 T: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 U: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 V: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 W: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 X: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 Y: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 Z: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 AA: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 BB: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임;
제제 CC: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 DD: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 EE: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 FF: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 GG: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 HH: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 II: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 JJ: 80 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 KK: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 LL: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 MM: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 NN: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 6.2임;
제제 OO: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 PP: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, 및 40 mM 소듐 클로라이드, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 QQ: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 RR: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 SS: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 TT: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 UU: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 포스페이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 VV: 150 mg/ml 콘베르셉트, 10 mM 시트레이트 기반 완충액, 8%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 80, pH는 5.8 내지 6.2임;
제제 WW: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 타우린, pH는 5.8임;
제제 XX: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 4%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 클로라이드, pH는 5.8임;
제제 YY: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 타우린, pH는 5.8임;
제제 ZZ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 AAA: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임;
제제 BBB: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 2.5%(w/v) 수크로스, 2.0%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임;
제제 CCC: 80, 100, 120 또는 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 DDD: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 4%(w/v) 프롤린, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM PSA, pH는 5.8임;
제제 EEE: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 열 안정화제 없음, pH는 5.8임;
제제 FFF: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 소듐 포스페이트, 5%(w/v) 수크로스, 및 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH는 6.2임;
제제 GGG: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 술페이트;
제제 HHH: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 티오시아네이트;
제제 III: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 40 mM 소듐 시트레이트;
제제 JJJ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 글리신;
제제 KKK: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 클로라이드;
제제 LLL: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 리신;
제제 MMM: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 아스파르테이트;
제제 NNN: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 글루타메이트;
제제 OOO: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 시트레이트, 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 PPP: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 글리신; 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 QQQ: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 아스파르테이트; 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 RRR: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 50 mM 소듐 글루타메이트; 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 SSS: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM His, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 10 mM L-아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 TTT: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM His, pH 5.8; 5% 수크로스; 0.03% 폴리소르베이트 20; 100 mM L-아르기닌 하이드로클로라이드;
제제 UUU: 30 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 VVV: 30 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 WWW: 60 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 XXX: 60 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 YYY: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 ZZZ: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, pH 6.2;
제제 AAAA: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM NaCl, pH 6.2;
제제 BBBB: 120 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20% 수크로스; 10 mM 포스페이트, 0.03% 폴리소르베이트 20, 50 mM NaCl, pH 6.2;
제제 CCCC: 140 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 소듐 포스페이트, 5% 수크로스, 40 mM 소듐 클로라이드, 0.03% PS 20, pH 6.2;
제제 DDDD: 80.0 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 EEEE: 120.0 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 FFFF: 113.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 GGGG: 114.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 HHHH: 100.0 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임; 및
제제 IIII: 133.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 JJJJ: 150 mg/ml 아플리베르셉트, 10 mM 소듐 포스페이트, 8%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20 및 50 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH는 6.2;
제제 KKKK: 114.3 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 20 mM 히스티딘 기반 완충액, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, 및 50 mM L-아르기닌 모노하이드로클로라이드, pH는 5.8임;
제제 LLLL: 90 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘, 5%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 5.75; 및
제제 MMMM: 90 mg/ml VEGF 수용체 융합 단백질, 10 mM 히스티딘, 7%(w/v) 수크로스, 0.03%(w/v) 폴리소르베이트 20, pH 5.75로 이루어진 군으로부터 선택된 제제 중의 성분을 포함하는 제제.
제21항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질이 아플리베르셉트 또는 콘베르셉트인 제제.
제21항 또는 제22항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질이 제조 및 정제 직후 약 3.5% 미만의 고분자량 종류 및/또는 약 2 내지 8℃에서 약 24 개월 동안 저장 후 약 6% 이하의 고분자량 종류를 갖는 제제.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 제제를 포함하는 용기 또는 주사 장치.
제24항에 있어서, 바이알, 시린지, 자동주사기 또는 예비충전된 시린지인 용기 또는 주사 장치.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 제제의 성분을 단일 조성물로 조합하는 것을 포함하는 상기 제제의 제조 방법.
제26항에 있어서, 소정량의 제제를 시린지로 로딩하는 것을 추가로 포함하는 제제의 제조 방법.
제26항 또는 제27항에 따른 방법의 생성물인 제제.
대상체의 안구 내에 제1항 내지 제22항 및 제27항 중 어느 한 항에 따른 제제를 안구내 주사하는 것을 포함하는 제제의 투여 방법.
약 2 mg 초과의 VEGF 수용체 융합 단백질의 안구내 주사를 대상체에 안구에 투여하는 것을 포함하는, 혈관기원 안구 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 치료 방법.
제30항에 있어서, 약 4 mg, 약 6 mg, 약 8 mg 또는 약 10 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질을 대상체의 안구에 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
대상체의 안구 내에 제1항 내지 제23항 및 제28항 중 어느 한 항에 따른 제제 중의 약 2 mg 초과의 VEGF 수용체 융합 단백질을 안구내 주사하는 것을 포함하는, 혈관기원 안구 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서의 치료 방법.
제32항에 있어서, 약 4 mg, 약 6 mg, 약 8 mg 또는 약 10 mg의 VEGF 수용체 융합 단백질을 대상체의 안구에 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 안구내 주사가 유리체내 주사인 치료 방법.
제30항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 혈관기원 안구 장애가 연령 연관 황반 변성(wet), 황반 부종, 망막 정맥 폐색 후 황반 부종, 망막 정맥 폐색(RVO), 중심 망막 정맥 폐색(CRVO), 분지 망막 정맥 폐색(BRVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 맥락막 혈관신생(CNV), 홍채 혈관신생, 신혈관 녹내장, 녹내장 수술후 섬유증, 증식성 유리체 망막병증(PVR), 시신경 혈관신생, 각막 혈관신생, 망막 혈관신생, 유리체 혈관신생, 판누스(pannus), 익상편, 혈관성 망막증, 당뇨병성 망막증, 비증식성 당뇨병성 망막증 및/또는 증식성 당뇨병성 망막증인 치료 방법.
제30항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질이 약 100 마이크로리터 이하, 약 90 마이크로리터, 약 80 마이크로리터, 약 75 마이크로리터, 약 70 마이크로리터, 약 60 마이크로리터 또는 약 50 마이크로리터로 투여되는 치료 방법.
제30항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, VEGF 수용체 융합 단백질이 약 5% 수크로스, 히스티딘 완충액; 및 약 0.03% 계면활성제를 포함하는 제제 내에 함유되는 치료 방법.
제30항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 2.0 mg 초과의 VEGF 수용체 융합 단백질이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24주에 한 번 투여되는 치료 방법.