KR20160070164A - 항-vegf darpin으로 눈의 병태를 치료하는 방법 - Google Patents

항-vegf darpin으로 눈의 병태를 치료하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20160070164A
KR20160070164A KR1020167014741A KR20167014741A KR20160070164A KR 20160070164 A KR20160070164 A KR 20160070164A KR 1020167014741 A KR1020167014741 A KR 1020167014741A KR 20167014741 A KR20167014741 A KR 20167014741A KR 20160070164 A KR20160070164 A KR 20160070164A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
days
administered
administration
intervals
binding protein
Prior art date
Application number
KR1020167014741A
Other languages
English (en)
Inventor
토마스 호만
자넷 치담
스코트 휫컵
에릭 리파
Original Assignee
알러간, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 알러간, 인코포레이티드 filed Critical 알러간, 인코포레이티드
Publication of KR20160070164A publication Critical patent/KR20160070164A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A61K47/48215—
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • Y10S514/912—

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

삼출성 연령 관련 황반 변성 및 망막의 기타 병태를 갖는 환자의 치료를 위한 방법이 본원에 개시되며, 이는 안키린 반복 도메인을 포함하는 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 제1 투여되고, 이후 투여 사이의 보다 긴 간격으로 추가 투여된다.

Description

항-VEGF DARPIN으로 눈의 병태를 치료하는 방법{METHOD OF TREATING CONDITIONS OF THE EYE WITH AN ANTI-VEGF DARPIN}
관련 출원의 교차 참조
본원은 2014년 6월 24일자로 출원된 미국 가출원 번호 제62/016,620호 및 2013년 11월 5일에 출원된 미국 가출원 번호 61/900,246의 이점을 특허청구한다. 상기 출원 양자의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
망막은 눈의 후부 안쪽 표면에 정렬된 신경 조직의 얇은 층이다. 망막은 다양한 종류의 뉴런으로 구성되며, 이중 가장 알려진 것은 시력을 담당하는 광수용체: 빛에 더욱 민감한 로드(rod) 및 색에 더욱 민감한 원추세포(cone)이다. 원추세포는 망막의 중앙의 작은 부분인 황반에 높은 정도로 농축되어 있다. 이러한 부분은 눈의 중앙의, 고-해상 시력을 담당한다.
망막 질환, 특히 황반 질환은 개발도상국에서 연령이 50세 초과인 사람들에서의 시력 손상 및 시각상실의 주요 원인이다. 이들 질환은 연령 관련 황반 변성, 근시 황반 변성, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨 망막병증, 분지 망막 정맥 폐색, 및 중심 망막 정맥 폐색을 포함한다. 황반 변성은 또한 소아에서도 발생할 수 있다.
이들 질환 중일부는 혈관 내피 성장 인자 A (VEGF-A)로 불리우는 단백질을 억제하는 제제로 치료될 수 있다. VEGF-A은 혈관 성장을 자극한다. 연령 관련 황반 변성의 삼출성 (또는 혈관) 형태, 비정상적으로 높은 수준의 VEGF는 광수용체에 비가역적 손상을 야기하는, 황반으로의 새로운 혈관 성장을 자극하며; 또한, 이러한 새롭게 형성된 혈관은 혈액 및 단백질을 망막에 유출시켜 광수용체가 점유하였던 영역에 상흔을 야기한다. VEGF-A의 억제는 이러한 새로운 혈관의 형성 및 혈액 및 단백질의 유출을 차단하여, 이로써 시력을 보존하도록 한다.
안내 VEGF-A를 억제하는데 현재 사용되는 약물은 소수이며, 이는 베바시주맙, 라니비주맙, 아플리베르셉트, 및 페갑타닙등이다. 라니비주맙은 VEGF-A을 억제하는 항체 단편이고; 베바시주맙은 VEGF-A를 또한 억제하고, 라니비주맙과 같은 모항체로부터 유래된 인간화된 단클론성 항체이다.
아플리베르셉트는 인간 lgG1의 Fc 부분에 융합된 인간 VEGF 수용체 1 및 2의 세포되 도메인을 포함하는 재조합 융합 단백질이다. 페갑타닙은 라니비주맙, 베바시주맙, 또는 아플리베르셉트만큼 효과?이지 않으며, 또한 이들처럼 빈번하게 사용되지 않는다.
사실상, 따라서, 안내 VEGF를 억제하기 위하여 사용될 수 있는 요법은 오직 2가지가 있으며, 이는 베바시주맙/라니비주맙 및 아플리베르셉트이다. 따라서, 이용가능한 상기 소수의 요법에 비하여 더욱 효과적이거나, 또는 상이한 이점을 제공하는 망막 질환을 치료할 수 있는 요법에 대한 본 분야의 요구가 존재한다.
발명의 요약
본 발명자들은 삼출성 연령 관련 황반 변성 및 망막의 기타 병태를, 상기 환자에게 놀라운 이점을 제공하는 동시에 치료하는데 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 일 구현예에서, 본 방법은 재조합 결합 단백질을 빈번한 투여로, 이후 덜 빈번한 투여로 전달하는 단계를 포함한다.
따라서, 본 발명의일 구현예에서, 환자에게 약 0.25 mg 15 내지 약 4 mg의 결합 단백질을 투여하고, 그 다음 25일 내지 35일 이후 동일한 투여량을 투여하며; 그 다음 임의로 동일한 투여 간격으로 결합 단백질을 3회 이하로 더 투여할 수 있다. 이러한, 초기의 빈번한 투여 이후, 적어도 1회의 추가 투여로, 그러나 각 추가 투여 사이의 50 내지 115일의 간격으로 결합 단백질의 투여를 계속한다. 치료는 이러한 방식으로, 50 내지 115일의 간격으로, 상기 환자에게 요구되는 한, 결합 단백질의 투여를 계속한다.
하기와 같은 예시가 있다:
Figure pct00001
이러한 방법은 망막 내 비정상 유체를 감소시키고, 비정상적 망막 두께를 감소시켜 망막 질환을 갖는 환자에서 시력을 개선하는데 사용될 수 있다.
이러한 구현예, 및 기타 구현예는 하기에 보다 상세히 기재된다.
도 1은, 제1일, 및 제4주 및 제8주에서 1 mg 및 2 mg의 결합 단백질 (아비시파르)을 투여받은 삼출성 연령 관련 황반 변성 (“AMD”)을 갖는 환자에서의, 그리고 제1일, 및 제4주, 제8주, 제12주, 및 제16주에서 0.5 mg의 라니비주맙을 투여받은 환자에서의, 기준선, 제1주, 제4주, 제8주, 제12주, 제16주, 및 제20주에서 본 발명에 따른 최적-교정 시력 ("BCVA")을 나타낸다. 도 2-7은 또한 이러한 방식으로 치료된 환자로부터의 데이터를 나타낸다.
도 2는 상기 기술된 3개의 환자 그룹 내에서 15 이상의 BCVA 내 글자 개선을 갖는 환자의 비율을 나타낸다. 2.0 mg 아비시파르는 각 주에서 나타난 3개 막대 세트 중 왼쪽 막대이고; 1.0 mg 아비시파르는 중간 막대이며; 그리고 0.5 mg 라니비주맙은 오른쪽 막대이다.
도 3은 15개 글자 미만의 BCVA 손실로 측정되었던, 안정된 시력을 달성한 환자의 비율을 나타낸다. 2.0 mg 아비시파르는 각 주에서 나타난 3개 막대 세트 중 왼쪽 막대이고; 1.0 mg 아비시파르는 중간 막대이며; 그리고 0.5 mg 라니비주맙은 오른쪽 막대이다.
도 4는 2.0 mg 아비시파르, 1.0 mg 아비시파르, 및 0.5 mg 라니비주맙을 투여받은 환자에서의 평균 중심 망막 두께를 나타낸다.
도 5는 치료 후 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체 (모든 3개 구획)가 해소된 환자의 비율을 나타낸다. 2.0 mg 아비시파르는 각 주에서 나타난 3개 막대 세트 중 왼쪽 막대이고; 1.0 mg 아비시파르는 중간 막대이며; 그리고 0.5 mg 라니비주맙은 오른쪽 막대이다.
도 6은 기준선 (제1일) , 그리고 제4주 및 제8주에 2 mg 아비시파르를 치료한 20/320 +1의 기준선 시력 (스넬렌(Snellen))을 갖는 연령 88세의 백인 남성의 망막 이미지를 나타낸다. 기준선 (도 6a) 및 그 후 매 4주에서의 이미지들이 나타난다 (도 6b-6g).
도 7은 기준선 (제1일) , 그리고 제4주 및 제8주에 2 mg 아비시파르를 치료한 20/63 +1의 기준선 시력 (스넬렌(Snellen))을 갖는 연령 75세의 히스패닉 여성의 망막 이미지를 나타낸다. 기준선 (도 7a) 및 그 후 매 4주에서의 이미지들이 나타난다 (도 7b-7g).
도 8 및 9는, 특정 재-치료 기준에 만족할 경우 제1일 및 이후 제16주 또는 그보다 이른 시기에 투여된 환자 중, 4.2 mg 아비시파르, 3.0 mg 아비시파르, 및 0.5 mg 라니비주맙을 투여받은, 삼출성 AMD을 갖는 175명의 환자의 연구 중에서 치료 후 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체가 해소된 환자의 비율을 나타낸다. 도 8은 모든 3구획 내 유체가 해소된 환자의 비율을 나타내고; 4.2 mg 아비시파르는 각 주에서 나타난 3개 막대 세트 중 왼쪽 막대이고; 3.0 mg 아비시파르는 중간 막대이며; 그리고 라니비주맙은 오른쪽 막대이다. 도 9는 유체가 이들 구획 중 해소된 곳이 1개, 2개, 3개 모두, 또는 이중 어느 것도 아닌 환자의 비율을 나타낸다.
재조합 결합 단백질
본 발명의 방법은 설계된 안키린 반복 도메인을 포함하는 결합 도메인을 포함하는 결합 단백질을 투여한다. 그와 같은 결합 단백질 및 이들이 함유한 설계된 안키린 반복 도메인은, 미국 특허 번호 7,417,130, 미국 특허 번호 8,110,653, 및 미국 특허 출원 공개 번호 2011/0207668에 기술되고, 상기 3건의 전체 내용은 본원에 참고로 편입된다.
용어 “반복 단백질”은 1 이상의 반복 도메인을 포함하는 단백질을 지칭한다. 일 구현예에서, 각각의 반복 단백질은 최대 4개의 반복 도메인을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 각각의 반복 단백질은 최대 2개의 반복 도메인을 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 각각의 반복 단백질은 단 1개의 반복 도메인을 포함한다. 반복 단백질은 또한 추가의 비-반복 단백질 도메인, 폴리펩타이드 태그 및/또는 폴리펩타이드 링커를 포함할 수 있다.
용어 “반복 도메인”은 구조 단위로서 2 이상 연속적인 반복 단위 (모듈)을 포함하는 단백질 도메인을 지칭하며, 여기서 상기 구조 단위는 동일한 접힘(fold)를 갖고, 빽빽히 스태킹되어, 예를 들어 연합 소수성 코어를 갖는 초나선형 구조를 생성한다.
용어 “설계된 반복 단백질” 및 “설계된 반복 도메인”은 미국 특허 번호 7,417,130 및 미국 특허 번호 8,110,653에서 설명된 과정의 결과로서 각각 수득된, 반복 단백질 또는 반복 도메인을 지칭한다. 설계된 반복 단백질 및 설계된 반복 도메인은 합성되는 것이며, 천연에서 유래되지 않는다. 이들은 상응하여 설계된 핵산의 발현에 의하여 각각 수득된, 인공의 단백질 또는 도메인이다.
포유동물 VEGF 패밀리는 VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D (FIGF로도 알려짐) 및 태반 유도된 성장 인자 (PIGF, PGF로도 알려짐)로 지칭되는 5개 당단백질로 구성된다. VEGF-A는 항-혈관형성 요법에 대한 효과적인 표적으로 보여져왔다 (Ellis, L. M. and Hicklin, D. J., Nature Rev. Cancer 8, 579- 591 , 2008). VEGF-A 리간드는 3개의 구조적으로 유사한 유형 III 수용체 티로신 키나제, 지정된 VEGFR-1 (FLT1로도 알려짐), VEGFR-2 (KDR로도 알려짐) 및 VEGFR-3 (FLT4로도 알려짐)에 결합하고, 이들을 활성화한다. VEGF 리간드는 각각의 이들 티로신 키나제 수용체에 대해 독특한 결합 특이성을 가지며, 이는 그들 기능의 다양성에 기여한다. 리간드 결합에 반응하여, VEGFR 티로신 키나제는 뚜렷이 다른 다운스트림 신호전달 경로의 네트워크를 활성화한다. VEGFR-1 및 VEGFR-2는 주로 혈관 내피 상에 발견되고, 반면 VEGFR-3은 주로 림프 내피 상에 발견된다. 이들 수용체는 모두 키나아제-삽입 도메인에 의하여 차단된 세포외 도메인, 단일 막통과 영역 및 공통 티로신 키나제 서열을 갖는다. 더욱이 최근에, 본래 뉴런의 안내 매개체의 세마포린/콜랍신(collapsin) 패밀리에 대한 수용체로서 식별된, 뉴로필린 (NRP-1)이 VEGF-A이 이소형 특이적 수용체로서 작용한다는 것이 나타났다.
VEGF-A의 다양한 이소형은 VEGF-A 유전자 내 8개의 엑손으로부터 대안적 스플라이싱에 의하여 생성되는 것으로 알려진다. 모든 이소형은 엑손 1-5 및 말단 엑손, 엑손 8을 함유한다. 헤파린-결합 도메인을 암호화하는 엑손 6 및 7이 포함되거나 제외될 수 있다. 이는 그들의 아미노산 수에 따라 명명된 단백질 패밀리를 다음과 같이 생성시킨다: VEGF-A165, VEGF-A121, VEGF-A189, 등. 엑손 8은, 그러나, 뉴클레오티드 서열 중 2개의 3’스플라이싱 부위를 함유하고, 이는 동일한 길이를 갖지만 C-말단 아미노산 서열이 다른 이소형의 2개 패밀리를 생성시키는 세포에 의해 사용될 수 있다 (참고: Varey, A.H.R. et al, British J. Cancer 98, 1366-1379, 2008). VEGF-Axxx (“xxx”는 성숙한 단백질의 아미노산 수를 나타낸다), 이소형의 프로(pro)-혈관신생 패밀리는 엑손 8에서의 최근위 서열의 사용에 의해 생성된다 (엑손 8a의 포함을 초래). 더욱 최근에 기술된 항- 혈관신생 VEGF-Axxxb 이소형은, 추가로 근위 스플라이싱 부위로부터의 유전자를 따라서, 원위 스플라이싱 부위 66bp의 사용에 의해 생성된다. 이는 엑손 8a의 스플라이싱 및 VEGF-Axxxb 패밀리를 암호화하는 mRNA 서열의 생성을 초래한다. VEGF-A165는 우세 프로-혈관형성 이소형이며, 다양한 인간 고형 종양에서 일반적으로 과발현된다. VEGF-A165b은 식별된 엑손 8b-암호화된 이소형의 제1형이며, 항-혈관신생 효과를 갖는 것으로 나타났다 (참고: Varey et al, loc. cit; Konopatskaya, O. et al, Molecular Vision 12, 626-632, 2006). 이는 VEGF-A의 내인성 억제성 유형이며, 이는 내피 세포의 VEGF-A 유도된 증식 및 이동을 감소시킨다. 이것이 VEGFR-2에 결합할 수 있을지라도, VEGF-A165b 결합은 다운스트림 신호전달 경로의 수용체 인산화 또는 활성화를 초래하지 않는다.
용어 “단백질”은 폴리펩타이드를 지칭하며, 여기서 상기 폴리펩타이드의 적어도 부분은, 이의 폴리펩타이드 쇄 내에 및/또는 사이에 2차, 3차, 또는 4차 구조를 형성시킴으로써 정의된 3차원 정렬을 갖거나 획득할 수 있다. 만약 단백질이 2개 이상의 폴리펩타이드를 갖는다면, 개별적인 폴리펩타이드 쇄는 비-공유적으로 또는 공유적으로, 예를 들면 2개 폴리펩타이드 사이의 이황화 결합에 의하여 연결될 수 있다. 개별적으로 2차 또는 3차 구조를 형성시킴으로써 정의된 3차원 정렬을 갖거나 획득할 수 있는 단백질의 부분은 "단백질 도메인"이라고 불리운다. 그러한 단백질 도메인은 본 분야의 당업자에게 잘 알려져 있다.
재조합 단백질, 재조합 단백질 도메인 등에 사용된 바와 같은, 용어 “재조합”은 본 분야의 당업자에게 잘 알려진 재조합 DNA 기술의 사용에 의하여 생성된 폴리펩타이드를 의미한다. 예를 들면, 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 DNA 분자 (예를 들면, 유전자 합성에 의하여 생성된)는 박테리아 발현 플라스미드 (예를 들면 pQE30, Qiagen)로 클로닝될 수 있다. 그러한 작제된 재조합 발현 플라스미드가 박테리아 (예를 들면 E. 콜라이)에 삽입될 때, 이러한 박테리아는 이러한 재조합 DNA에 의하여 암호화된 폴리펩타이드를 생성할 수 있다. 상응하여 생성된 폴리펩타이드는 재조합 폴리펩타이드로 불리운다.
용어 "폴리펩타이드 태그"는 폴리펩타이드/단백질에 부착된 아미노산 서열을 지칭하고, 상기 아미노산 서열은 상기 폴리펩타이드/단백질의 정제, 검출, 또는 표적화에 유용하거나, 상기 아미노산 서열은 상기 폴리펩타이드/단백질의 물리화학 행능을 개선하거나, 또는 상기 아미노산 서열은 효과기 기능을 갖는다. 결합 단백질의 개별 폴리펩타이드 태그, 모이어티, 및/또는 도메인은 서로 직접적으로, 또는 폴리펩타이드 링커를 통하여 연결될 수 있다. 이러한 폴리펩타이드 태그는 본 분야에 잘 알려져 있고, 본 분야의 숙련가에게 있어 완전히 이용가능하다. 폴리펩타이드 서열은, 예를 들면, His, myc, FLAG, 또는 Strep-태그 또는 모이어티 예컨대 효소 (예를 들면 효소 유사 알칼리성 포스파타제)이며, 이는 폴리펩타이드/단백질, 또는 표적화 (예컨대 면역글로불린 또는 그것의 단편) 및/또는 효과기 분자로서 사용될 수 있는 모이어티의 검출을 가능하게 한다.
용어 “폴리펩타이드 링커”는 예를 들면, 2개의 단백질 도메인, 폴리펩타이드 태그 및 단백질 도메인, 단백질 도메인 및 비-폴리펩타이드 모이어티 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 또는 2개의 서열 태그에 연결될 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 그와 같은 추가의 도메인, 태그, 비-폴리펩타이드 모이어티 및 링커는 관련 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 일련의 예시는 미국 특허 번호 7,417,130 및 미국 특허 번호 8,110,653에 제공된다. 상기 링커의 예시는 가변 길이의 글리신-세린-링커 및 프롤린-트레오닌-링커이다. 일 구현예에서, 링커의 길이는 2개 및 24개 아미노산이고; 또 하나의 구현예에서, 링커의 길이는 2개 및 16개 아미노산이다.
용어 “폴리펩타이드”는 펩타이드 결합을 통하여 연결된 다중, 즉, 2 이상의 아미노산의 1 이상의 쇄로 구성된 분자에 관한 것이다. 일 구현예에서, 폴리펩타이드는 펩타이드 결합을 통하여 연결된 8개 초과의 아미노산으로 구성된다.
용어 “폴리머 모이어티”은 단백질성 폴리머 모이어티 또는 비-단백질성 폴리머 모이어티를 지칭한다. 일 구현예에서,“단백질성 폴리머 모이어티”는 1개월동안 실온, PBS 중 약 0.1 mM의 농도에서 보관될 때, 안정한 3차 구조를 형성하지 않는 한편, 올리고머 또는 응집물의 10% 이하 (또는 5% 이하, 2% 이하, 1% 이하, 및 임의의 검출가능한 양 이하 (크기 배제 크로마토그래피 (SEC)로 측정시))를 형성하지 않는 폴리펩타이드이다. 상기 단백질성 폴리머 모이어티는 SEC에 대한 분자량 표준으로서 구상 단백질을 사용할 때 이의 유용 분자량(effective molecular weight)보다 높은 SEC에서의 겉보기 분자량에서 구동된다. 일 구현예에서, 단백질성 폴리머 모이어티의 겉보기 분자량은, SEC로 측정시, 이의 아미노산 서열로부터 산출된 이의 유용 분자량보다 1.5배, 2배 또는 2.5배 크다. 일 구현예에서, 비-단백질성 폴리머 모이어티의 겉보기 분자량은, SEC로 측정시, 이의 분자 조성으로부터 산출된 이의 유용 분자량보다 2배, 4배 또는 8배 크다. 일 구현예에서, 단백질성 폴리머 모이어티 중 50%, 70% 또는 심지어 90% 초과의 아미노산은 원형 2색성 (CD) 측정에 의하여 측정시, 실온에서 PBS 중 약 0.1 mM의 농도에서 안정한 2차 구조를 형성하지 않는다. 일 구현예에서, 단백질성 폴리머는 랜덤 코일 형태의 전형적인 근접 UV CD-스펙트럼을 나타낸다. 그와 같은 CD 분석은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 800개 초과의 아미노산을 포함하는 단백질성 폴리머 모이어티가 또한 사용될 수 있다.
단백질성 폴리머 모이어티의 예시는 XTEN®(등록 상표명 Amunix; WO 07/103515) 폴리펩타이드, 또는 WO 08/155134에 기재된 바와 같은 프롤린, 알라닌 및 세린을 포함하는 폴리펩타이드이다. 그와 같은 단백질성 폴리머 모이어티는, 예를 들면, 표준 DNA 클로닝 기술, 이후 이의 표준 발현 및 정제를 사용한 유전적 융합 폴리펩타이드의 발생에 의하여 본 발명의 결합 도메인에 공유적으로 부착될 수 있다. VEGF-Axxx에 결합하는 반복 도메인을 포함하는 결합 단백질 및 그러한 단백질성 폴리머 모이어티는 서열번호: 1 및 서열번호: 4에 나타난다. 서열번호: 1의 아미노산 위치 1 내지 159는 반복 도메인에 상응하고, 서열번호: 1의 아미노산 위치 161 내지
Figure pct00002
은 단백질성 폴리머 모이어티에 상응한다. 서열번호: 4의 아미노산 위치 1 내지 126는 반복 도메인에 상응하고, 서열번호: 4의 아미노산 위치 131 내지 640은 단백질성 폴리머 모이어티에 상응한다.
본 발명의 폴리머 모이어티는 넓은 분자량 범위로 (즉 약 1 kDa 내지 약 150 kDa로) 변화할 수 있다. 일 구현예에서, 폴리머 모이어티는적어도 2 kDa, 5 kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 50 kDa, 70 kDa 또는 100 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
일 구현예에서, 폴리머 모이어티는 폴리펩타이드 링커에 의하여 결합 도메인에 연결될 수 있다. 상기 폴리펩타이드 링커의 예시는 서열번호: 8 및 서열번호: 9의 아미노산 1 내지 8이다.
비-단백질성 폴리머 모이어티의 예시는 하이드록시에틸 전분 (HES), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌이다. 용어 “페길화된”은 PEG 모이어티가 예를 들면, 본 발명의 폴리펩타이드와 공유적으로 부착된 것을 의미한다. 비-단백질성 폴리머 모이어티에 대한 결합에 유용한 반복 도메인 및 a C-말단 Cys 잔기 사이의 폴리펩타이드 링커를 함유하는 반복 단백질의 예시는 서열번호: 2, 3, 5, 6 및 7이다. 일부 구현예에서, PEG는, 사용된다면, 선형 또는 분지형 배열일 수 있다.
특정 구현예에서, PEG 모이어티 또는 임의의 다른 비-단백질성 폴리머는, 예를 들면, 말레이미드 링커를 통하여 시스테인 티올에 커플링되고, 상기 시스테인은 펩타이드 링커를 통하여 본원에 기술된 바와 같이 결합 도메인 (예를 들면 서열번호: 3)의 N- 또는 C-말단에 커플링될 수 있다.
용어 “결합 단백질”은 1 이상의 결합 도메인,일 구현예에서, 하기에 추가로 설명된 바와 같은 1 이상의 폴리머 모이어티를 포함하는 단백질을 지칭한다. 일 구현예에서, 결합 단백질은 최대 4개의 결합 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 결합 단백질은 최대 2개의 결합 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 결합 단백질은 오직 1개의 결합 도메인을 포함한다. 더욱이, 임의의 그와 같은 결합 단백질은 결합 도메인, 다량체화 모이어티, 폴리펩타이드 태그, 폴리펩타이드 링커 및/또는 단일 Cys 잔기가 아닌 추가의 단백질 도메인을 포함할 수 있다. 다량체화 모이어티의 예시는 2개의 상기 폴리펩타이드 사이에서 분자간 이황화 결합을 형성하는 자유 티올을 포함하는 폴리펩타이드 또는 기능적 면역글로불린 Fc 도메인, 및 류신 지퍼를 제공하기 위하여 쌍을 이루는 면역글로불린 중쇄 불변 영역이다. 단일 Cys 잔기는 폴리펩타이드에 기타 모이어티를 콘주게이트 하기 위하여, 예를 들면 본 분야의 숙련가에게 잘 알려진 말레이미드 화학의 사용에 의하여 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 최대 4개의 폴리머 모이어티를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 단백질은 최대 2개의 폴리머 모이어티를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 결합 단백질은 오직 1개의 폴리머 모이어티를 포함한다.
일 구현예에서, 결합 단백질은, 분자량 표준으로서 구상 단백질을 사용하여 SEC에 의하여 실온, PBS 중 0.1 mM의 농도에서 분석 시, 약 10 kDa, 15 kDa, 20 kDa, 25 kDa, 30 kDa, 35 kDa, 40 kDa, 45 kDa, 50 kDa, 55 kDa, 60 kDa, 65 kDa, 70 kDa, 75 kDa, 80 kDa, 85 kDa, 90 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 400 kDa, 500 kDa, 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 또는 1,000 kDa의 겉보기 분자량을 갖는다. 일 구현예에서, 결합 단백질은 34 kDa의 겉보기 분자량을 갖는다.
당해분야의 숙련가는, 본원에 기재된 정도의 다양한 용어들의 의미를 알 것이다. 예를 들면, 본원에서 사용된 바와 같이, 양을 지칭할 때의 맥락에서, 용어 “약”은 여전히 원하는 기능을 수행하거나 원하는 결과를 달성하는 기술된 양에 근접하고 이를 포함하는 양을 나타내며, 예를 들어 "약 1 mg"은 1 mg 및 1 mg에 합리적으로 근접한 양으로서 여전히 원하는 기능을 수행하거나 원하는 결과를 달성하는 양을 포함한다.
용어 “결합 도메인”은 단백질 스캐폴드로서 동일한 “접힘(fold)” (3차원 배열)을 나타내고, 하기 정의된 바와 같은 소정의 특성을 갖는 단백질 도메인을 의미한다. 그와 같은 결합 도메인은, 본 분야에 알려진 합리적인, 또는 가장 통상적인, 조합 단백질 공학 기술, 기능에 의하여 수득될 수 있다 (Skerra, 2000, loc. cit; Binz et al, 2005, loc. cit). 예를 들면, 소정의 특성을 갖는 결합
도메인은 하기 단계를 포함하는 방법에 의하여 수득될 수 있다: (a) 하기에 추가로 정의된 바와 같은 단백질 스캐폴드로서의 동일한 접힘을 나타내는 단백질 도메인의 다양한 수집물을 제공하는 단계; 및 (b) 상기 소정의 특성을 갖는 적어도 하나의 단백질 도메인을 수득하기 위하여 상기 다양한 수집물을 스크리닝하고/하거나 상기 다양한 수집물로부터 선택하는 단계. 단백질 도메인의 상기 다양한 수집물은 사용된 스크리닝 및/또는 선택 시스템에 따라 몇몇 방법에 의하여 제공될 수 있고, 본 분야의 숙련가에게 잘 알려진 방법, 예컨대 파아지 디스플레이 또는 리보솜 디스플레이와 같은 방법의 사용을 포함할 수 있다.
용어 “단백질 스캐폴드”는 아미노산 삽입, 치환 또는 결실에 높은 정도로 내성이 있는 노출된 표면적을 갖는 단백질을 의미한다. 본 발명의 결합 도메인을 생성하기 위하여 사용될 수 있는 단백질 스캐폴드의 예시는 항체 또는 이의 단편 예컨대 단일-사슬 Fv 또는 Fab 단편, 스타필로코쿠스 아우레스(Staphylococcus aureus)로부터 유래된 단백질 A, 피어리스 브래시케(Pieris brassicae) 또는 기타 리포칼린로부터 유래된 결합 단백질, 안키린 반복 단백질 또는 기타 반복 단백질, 및 인간 파이브로넥틴이다. 단백질 스캐폴드는 본 분야의 당업자에게 잘 알려져 있다 (Binz et al, 2005, loc. cit.; Binz et al, 2004, loc. cit.).
용어 “소정의 특성”은 표적으로의 결합, 표적의 차단, 표적-매개된 반응의 활성화, 효소에 의한 활성, 및 관련된 추가 특성과 같은 특성을 지칭한다. 원하는 특성의 유형에 따라서, 숙련가는 원하는 특성을 갖는 결합 도메인의 스크리닝 및/또는 선택을 수행하기 위하여 양식 및 필요한 단계를 식별할 수 있을 것이다. 바람직하게는, 소정의 특성 표적에 결합하는 것이다.
일 구현예에서, 본 발명의 결합 도메인은 항체 및/또는 파이브로넥틴 유형 III 도메인에 제시된 바와 같은 면역글로불린 접힘을 포함하지 않는다. 면역글로불린 접힘은 2개의 β-시트에 배열된 약 7개의 항-평행 β-가닥의 2-층 샌드위치로 구성된 공통 전체-β 단백질 접힘이다. 면역글로불린 접힘은 본 분야의 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들면, 면역글로불린 접힘을 포함하는 그와 같은 결합 도메인은 WO 07/080392 또는 WO 08/097497에 기술되어 있다.
또 하나의 구현예에서, 본 발명의 결합 도메인은 VEGFR-1 또는 VEGFR-2에 발견된 바와 같은 면역글로불린-유사 도메인을 포함하지 않는다. 그와 같은 결합 도메인은 WO 00/075319에 기술되어 있다.
일 구현예에서, 결합 도메인은 70개 아미노산 내지 300개 아미노산을 포함하고; 또 하나의 구현예에서, 결합은 100개 아미노산 내지 200개 아미노산을 포함한다.
일 구현예에서, 결합 도메인은 자유 Cys 잔기가 없다. 자유 Cys 잔기는 이황화 결합 형성에 연관되지 않는다. 또 하나의 구현예에서, 결합 도메인은 임의의 자유 Cys 잔기가 없다.
일 구현예에서, 본 발명의 결합 단백질은 진핵 또는 원핵 세포, 예컨대 박테리아 세포 내에서, 또는 무세포 시험관내 발현계의 사용에 의하여 발현될 수 있다.
용어 “구조 단위”는 폴리펩타이드 사슬을 따라 서로 인접한 2차 구조의 2 이상의 세그먼트 사이의 3차원 상호작용에 의하여 형성된 폴리펩타이드의 국지적으로 질서화된 부분을 지칭한다. 그와 같은 구조 단위는 구조적 모티프를 나타낸다. 용어 “구조적 모티프"는 적어도 하나의 구조 단위에 제시된 2차 구조 요소의 3차원 배열을 지칭한다. 구조적 모티프는 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 구조 단위는 단독으로는 정의된 3차원 배열을 획득할 수 없으나, 이의 연속적인 배열, 예를 들면 반복 도메인 내 반복 모듈은 인접 단위의 상호 안정화를 야기하여 초나선형 구조를 초래한다.
용어 “반복 단위”는 1 이상의 천연 발생 반복 단백질의 반복 서열 모티프를 포함하는 아미노산 서열을 지칭하고, 여기서 상기 “반복 단위”는 다중 사본 중에서 발견되며, 이는 단백질의 접힘을 측정하는 모든 모티프에 공통적인 정의된 접힘 위상기하학적 특성을 나타낸다. 그와 같은 반복 단위의 예시에는 아르마딜로 반복 단위, 류신-풍부 반복 단위, 안키린 반복 단위, 테트라트리코펩타이드(tetratricopeptide) 반복 단위, HEAT 반복 단위, 및 류신-풍부 변종 반복 단위가 있다. 2 이상의 그와 같은 반복 단위를 함유하는 천연 발생 단백질은 "천연 발생 반복 단백질"로 불리운다. 반복 단백질의 개별 반복 단위의 아미노산 서열은, 서로 비교시, 여전히일반적인 패턴을 실질적으로 보유하면서 유의미한 수의 돌연변이, 치환, 부가 및/또는 결실을 가질 수 있다.
용어 “반복 서열 모티프"는 1 이상의 반복 단위로부터 추론된 아미노산 서열을 지칭한다. 일 구현예에서, 반복 단위는 동일한 표적에 대한 결합 특이성을 갖는 반복 도메인으로부터 유래한다.
용어 “접힘 위상기하학적 특성”은 반복 단위의 3차 구조를 지칭한다. 접힘 위상기하학적 특성은 오헬리스(ohelices) 및 β-시트의 적어도 부분을 형성하는 아미노산의 신장(stretches), 또는 선형 폴리펩타이드 또는 루프를 형성하는 아미노산 신장, 또는 a-나선, β-시트 및/또는 선형 폴리펩타이드/루프의 임의의 조합에 의하여 측정될 것이다.
용어 “연속적”은 반복 단위 또는 반복 모듈이일렬로 배열된 배열을 지칭한다. 설계된 반복 단백질에서, 적어도 2개의 반복 단위, 그러나 보통 약 2개 반복 단위 내지 6개 반복 단위가 있으나, 6개 이상의 반복 단위, 또는 20개 이상의 반복 단위가 있을 수 있다. 대개의 경우, 반복 단위는 고도의 서열 동일성 (상응하는 위치에서의 동일한 아미노산 잔기) 또는 서열 유사성 (상이하나, 유사한 물리화학 특성을 갖는 아미노산 잔기)를 나타낼 것이며, 일부 아미노산 잔기는 천연 발생 단백질에서 발견되는 상이한 반복 단위에서 강하게 보존된 주요 잔기일 수 있다. 그러나, 천연 발생 단백질에서 발견된 상이한 반복 단위 사이의 아미노산 삽입 및/또는 결실, 및/또는 치환에 의한 고도의 서열 가변성이, 공통의 접힘 위상기하학적 특성이 유지되는 한, 가능할 것이다.
물리-화학적 수단, 예컨대 X-선 측정학, NMR 또는 CD 분광학에 의한 반복 단백질의 접힘 위상기하학적 특성을 직접적으로 측정하는 방법은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 반복 단위 또는 반복 서열 모티프를 식별 및 측정하거나, 상기 반복 단위 또는 모티프를 포함하는 관련 단백질의 패밀리를 식별하기 위한 방법, 예컨대 상동성 검색 (BLAST 등)은 생물정보학(bioinformatics) 분야에 잘 확립되어 있으며, 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 초기 반복 서열 모티프를 정제(refining)하는 단계는 반복적인 공정을 포함할 수 있다.
용어 “반복 모듈”은 설계된 반복 도메인의 반복된 아미노산 서열을 지칭하며, 이는 천연 발생 반복 단백질의 반복 단위로부터 본래 유도된 것이다. 반복 도메인으로 구성된 각각의 반복 모듈은 천연 발생 반복 단백질의 패밀리 또는 서브패밀리, 예를 들면 아르마딜로 반복 단백질 또는 안키린 반복 단백질의 패밀리의 1 이상의 반복 단위로부터 유도된다.
“반복 모듈”은 상응하는 반복 모듈의 모든 사본에 존재하는 아미노산 잔기를 갖는 위치, 및 아미노산 잔기가 변화 또는 "무작위화"되는 위치 (“무작위의 위치”)를 포함할 수 있다.
용어 “캡핑 모듈”은 반복 도메인의 N- 또는 C-말단 반복 모듈에 융합된 폴리펩타이드를 지칭하며, 여기서 상기 캡핑 모듈은 상기 반복 모듈과의 단단한 3차 상호작용을 형성하여, 이로써 용매로부터의 연속적 반복 모듈과 접촉하지 않은 면에서 상기 반복 모듈의 소수성 코어를 가리는 캡을 제공한다. N- 및/또는 C-말단 캡핑 모듈은 반복 단위와 인접한 천연 발생 반복 단백질에서 발견되는 캡핑 단위 또는 기타 도메인이거나, 또는 이로부터 유래될 수 있다. 용어 “캡핑 단위”는 천연 발생적으로 접혀진 폴리펩타이드를 지칭하며, 상기 폴리펩타이드는 반복 모듈에 N- 또는 C-말단 융합된 특정 구조 단위를 정의하고, 여기서 상기 폴리펩타이드는 상기 반복 모듈과의 단단한 3차 상호작용을 형성하여, 이로써 용매로부터의 한 면에서의 상기 반복 모듈의 소수성 코어를 가리는 캡을 제공한다. 그와 같은 캡핑 단위는 반복 서열 모티프와 서열 유사성을 가질 수 있다. 캡핑 모듈 및 캡핑 반복은 미국 특허 번호 7,417,130 및 미국 특허 번호 8,110,653에 기술되어 있다. 예를 들면, 서열번호: 2의 N-말단 캡핑 모듈은 위치 1 내지 32로부터의 아미노산에 의하여 암호화된다. 위치 5에서 글리신 또는 아스파르테이트 잔기를 갖는 N-말단 캡핑 모듈이 또한 바람직하다.
용어 “표적”은 개별적인 분자 예컨대 핵산 분자, 폴리펩타이드 또는 단백질, 탄수화물, 또는 상기 개별 분자의 임의의 부분 또는 2 이상의 상기 분자의 복합체를 포함하는 임의의 다른 천연 발생 분자를 지칭한다. 표적은 전체 세포 또는 조직 샘플일 수 있거나, 임의의 비-천연 분자 또는 모이어티일 수 있다. 바람직하게는, 표적은, 천연 발생의, 또는 비천연의 폴리펩타이드 또는, 예를 들면 천연 또는 비-천연 인산화, 아세틸화, 또는 메틸화에 의하여 변형된, 화학적 변형을 함유하는 폴리펩타이드이다.일부 구현예에서, 표적은 VEGF-Axxx 또는 VEGFR-2이다.
용어 “공통 서열”은 아미노산 서열을 지칭하고, 여기서 상기 공통 서열은 다중 반복 단위의 구조 및/또는 서열 정렬에 의하여 수득된다. 2 이상의 구조적 및/또는 서열 정렬된 반복 단위를 사용하여, 그리고 상기 정렬에서 갭을 가능케함으로써, 각 위치에서의 가장 빈번한 아미노산 잔기를 측정하는 것이 가능하다. 공통 서열은 각 위치에서 가장 빈번하게 나타나는 아미노산을 포함하는 서열이다. 2개 이상의 아미노산이 단일 위치에서 상기-평균으로 나타날 경우, 공통 서열은 이러한 아미노산의 서브셋을 포함할 수 있다. 2개 이상의 반복 단위는 단일 반복 단백질로 구성된 반복 단위로부터, 또는 2개 이상의 상이한 반복 단백질로부터 취해질 수 있다.
공통 서열 및 이를 측정하는 방법은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
"공통 아미노산 잔기"는 공통 서열 내 특정 위치에서 발견되는 아미노산이다. 만약 2개 이상의, 예를 들면 3개, 4개 또는 5개의, 아미노산 잔기가 2개 이상의 반복 단위 내의 유사한 개연성을 갖는 것으로 발견될 경우, 공통 아미노산은 가장 빈번하게 발견되는 아미노산 중 하나, 또는 상기 2개 이상의 아미노산 잔기의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, 비-천연 발생 결합 단백질 또는 결합 도메인이 사용될 수 있다.
용어 “비-천연 발생”은 합성 또는 자연에서 유래되지 않은, 예를 들면, 인공의 것을 의미한다. 용어 “비-천연 발생 결합 단백질” 또는 “비-천연 발생 결합 도메인”은 결합 단백질 또는 결합 도메인이 합성 (즉, 아미노산의 화학적 합성으로 생성된) 또는 재조합이고, 자연에서 유래되지 않았다는 것을 의미한다. “비-천연 발생 결합 단백질” 또는 “비 천연 발생 결합 도메인”는 상응하여 설계된 핵산의 발현에 의하여 각각 수득된 인공의 단백질 또는 도메인이다. 바람직하게는, 발현은 진핵 또는 박테리아 세포 내에서 또는 세포 시험관내 발현계의 사용에 의하여 행해진다. 더욱이, 상기 용어는 결합 단백질 또는 결합 도메인의 서열이, 서열 데이타베이스, 예를 들면 유전자은행, EMBL-은행 또는 스위스-프롯(Swiss-Prot) 내의 비-인공 서열 엔트리(entry)로서 존재하지 않는다는 것을 의미한다. 이들 데이타베이스 및 다른 유사한 서열 데이타베이스는 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
결합 도메인은, VEGF-Axxx에의 결합에 의하여, 또는 VEGFR-2에의 결합에 의하여, VEGF-Axxx 및 VEGFR-2 사이의 겉보기 해리상수(apparent dissociation constant) (Kd)가 102배 초과로 증가하는 방식으로 VEGF-Axxx가 VEGFR-2에 결합하는 것을 억제할 수 있다. 다른 구현예에서, 해리 상수는 103배 초과로, 104배 초과로, 105배 초과로, 또는 106배 초과로 증가된다. 일 구현예에서, VEGF-Axxx 또는 VEGFR-2에 대한 결합 도메인의 상호작용에 대한 Kd는 107M 미만, 108M 미만, 또는 109M 미만, 1010M 미만, 또는 1011M 미만이다. 단백질-단백질 상호작용의 해리 상수를 측정하는 방법, 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 기반 기술은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
결합 도메인은 VEGF-Axxx에 결합한다. 일 구현예에서, 결합 도메인은 인간 VEGF-A165에 결합한다. 다른 구현예에서, 이는 기타 VEGF-A 이소형에 결합할 수 있다.
일 구현예에서, 결합 단백질 및/또는 결합 도메인은 37°C에서 1 내지 10시간동안 100 mM 디티오트레이톨 (DTT)을 함유하는 PBS 중 인큐베이션 상에서 이의 원상태 3차원 구조를 손실하지 않는다. “PBS”는 본원에서 사용된 바와 같이, 137 mM NaCl, 10 mM 포스페이트 및 2.7 mM KCl를 함유하고 7.4의 pH를 갖는 포스페이트 완충된 수용액을 의미한다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 VEGF-Axxx의 VEGFR-2에 대한 결합을 억제하고, 상기에 정의된 바와 같은 중간점 변성 온도 및 비-집적 특성을 갖는 결합 도메인을 포함하고, 여기서 상기 결합 단백질은 100 nM 미만의 IC50 값을 갖는 HUVEC 스페로이드의 발아(sprouting)를 억제한다.
용어 “HUVEC”는 제대(umbilical) 정맥 내피 세포를 의미하며, 이는 VEGF-A 자극에 반응성인 정상 인간 제대 정맥으로부터 단리될 수 있다.
HUVEC 스페로이드의 발아를 측정하는 검정은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
IC50 값은 물질, 예컨대 결합 단백질 또는 결합 도메인의 농도이며, 이는 실험적 측정 파라미터, 예컨대 HUVEC 스페로이드의 발아의 시험관내 50% 억제를 필요로 한다. IC50 값은 본 분야의 숙련가에에 의하여 용이하게 측정될 수 있다 (Korff T. and Augustin H.G., J. Cell Biol. 143(5), 1341 -52, 1998).
일 구현예에서, 결합 단백질 및/또는 결합 도메인은 10 nM 미만, 1 nM 미만, 0.1 nM 미만, 또는 0.05 nM 미만의 IC50 값을 갖는 HUVEC 스페로이드의 발하를 억제한다.
또 하나의 구현예에서, 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙의 상응하는 IC50 값 미만인 IC50 값을 갖는 HUVEC 스페로이드의 발아를 억제하는 모노머 결합 단백질 및/또는 결합 도메인이 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 결합 도메인의 VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, PIGF 또는 PDGF에 대한 상호작용에 대한 Kd는 1 nM, 10 nM 초과, 102 nM 초과, 103 nM 초과, 또는 104 nM 초과이다.
일 구현예에서, VEGF-Axxx는 개 VEGF-A 164 또는 유인원 VEGF-A 165 또는 인간 VEGF-A165이고, VEGF-Axxxb는 개 VEGF-A 164b 또는 유인원 VEGF-A 165b 또는 인간 VEGF-A 165b이다.
또 하나의 구현예는 결합 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질이고, 여기서 상기 결합 도메인은 VEGF-Axxx의 VEGFR-2에 대한 결합을 억제하고, 상기 결합 도메인은 반복 도메인 또는 설계된 반복 도메인이다. 그와 같은 반복 도메인은 VEGF-Axxx에 대한 결합에 참여할 것인 1개, 2개, 3개, 또는 그 초과의 내부 반복 모듈을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 그와 같은 반복 도메인은 N-말단 캡핑 모듈, 2 내지 4개의 내부 반복 모듈, 및 C- 말단 캡핑 모듈을 포함한다. 일 구현예에서, 결합 도메인은 안키린 반복 도메인 또는 설계된 안키린 반복 도메인이다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 본원에 기술된 바와 같이 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 모이어티에 콘주게이트된 결합 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, PEG 모이어티는 결합 도메인의 단일 Cys 잔기에 커플링된다. Cys 잔기는 결합 도메인의 C-말단에 유전적으로 도입될 수 있다. PEG 모이어티는 이후 화학적 수단에 의하여, 예를 들면, 본 분야의 숙련가에게 잘 알려진 말레이미드 화학(maleimide chemistry)의 사용에 의하여 커플링될 수 있다.
또 하나의 구현예는, VEGF-Axxx에 대한 결합 특이성을 갖는 적어도 하나의 반복 도메인을 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 재조합 결합 단백질이며, 여기서 상기 반복 도메인은 서열번호: 1 내지 7의 반복 도메인 그룹으로부터 선택된 반복 도메인과 VEGF-Axxx에 대한 결합에 대하여 경쟁한다. 일 구현예에서, 반복 도메인은 서열번호: 1 내지 3의 반복 도메인과 VEGF-Axxx에 대한 결합에 대하여 경쟁한다. 또 하나의 구현예에서, 반복 도메인은 서열번호: 3의 반복 도메인과 VEGF- Axxx에 결합에 대해 경쟁한다.
용어 “결합에 대해 경쟁하다”는 본 발명의 2개의 상이한 결합 도메인이 동일한 표적에 개별적으로 결합할 수 있는 반면, 동일한 표적에 동시에 결합할 수는 없음을 의미한다. 따라서, 그와 같은 2개의 결합 도메인은 표적 결합에 대해 경쟁한다. 방법, 예컨대 경쟁 ELISA 또는 경쟁 SPR 측정 (예를 들면 BioRad로부터의 Proteon 기기를 사용하여)으로 2개의 결합 도메인이 표적에 대한 결합에 대하여 경쟁하는지 여부를 측정하는 것은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
선택된 반복 단백질을 갖는 VEGF-Axxx에 대한 결합에 대해 경쟁하는 재조합 결합 단백질은 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있는 방법, 예컨대 경쟁 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의하여 잘 알려진 방법에 의하여 식별될 수 있다.
또 하나의 구현예는 서열번호: 1 내지 7의 반복 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된, VEGF-Axxx에 대한 결합 특이성을 갖는 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질이다. 일 구현예에서, 반복 도메인은 서열번호: 2 또는 3의 반복 도메인으로부터 선택된다. 또 다른 구현예에서, 반복 도메인은 서열번호: 3의 반복 도메인이다.
일 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVNA (서열번호: 10)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 및 7은, 서로 독립적으로, 그룹 A, D, E, F, H, I, K, L, M, N, Q, R, S, T, V, W 및 Y로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 다른 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23GWTPLHLAA45GHLEIVEVLLK6GADVNA (서열 번호: 11)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 F, T, N, R, V, A, I, K, Q, S 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고;일 구현예에서, 1은 F, T, N, R 또는 V이고; 및 또 하나의 구현예에서, 1은 F 또는 T이고; 2는 W, Y, H 및 F로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 W, Y 또는 H이고; 3은 M, I, F 및 V으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 3은 M 또는 I이고; 4는 H, A, K, G, L, M, N, T, V, W 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 4는 H, A 또는 K이고; 5는 E, Y, F, V, H, I, L, N 및 R으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 5는 E, Y, F, V 또는 H이고; 또 하나의 구현예에서, 5는 E, Y, F 또는 V이고; 그리고 6은 A, N, Y, H 및 R으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVN8 (서열번호: 12)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 T, E, A, D, F, K, N, Q, R, S, W 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 1은 T 또는 E이고; 2는 V, F, Y, A, H, I, K, R, T 및 W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 V, F 또는 Y이고; 3은 S, A, N, F 및 M로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 3은 S, A 또는 N이고; 또 하나의 구현예에서, 3은 S 또는 A이고; 4는 Y, F, S 및 W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 5는 A, S, L 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 5는 A 또는 S이고; 6은 D, N, M, A, I, K 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 6은 D, N 또는 M이고; 또 하나의 구현예에서, 6은 D 또는 N이고; 7은 A, Y, H, N 및 D로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 8은 아미노산 잔기 T 또는 A를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23GWTPLHL4ADLG5LEIVEVLLK6GADVN7 (서열번호: 13)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 K, T 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 아미노산 잔기 N 또는 M을 나타내고; 3은 아미노산 잔기 T 또는 F를 나타내고; 4는 아미노산 잔기 S 또는 A를 나타내고; 5는 아미노산 잔기 H 또는 R를 나타내고; 6은 A, Y, H 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 7은 아미노산 잔기 A 또는 T를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHLAA56GH7EIVEVLLK8GADVNA (서열번호: 14)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 A, N, R, V, Y, E, H, I, K, L, Q, S 및 T로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 1은 A, N, R, V 또는 Y이고; 또 하나의 구현예에서 1은 A 또는 R이고; 2는 S, A, N, R, D, F, L, P, T 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 S, A, N 또는 R이고; 3은 T, V, S, A, L 및 F로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 3은 T, V, S, A 또는 L이고; 또 하나의 구현예에서, 3은 T, V 또는 S이고; 4는 W, F 및 H로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 5는 P, I, A, L, S, T, V 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 5는 P 또는 I이고; 6은 W, F, I, L, T 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 7은 아미노산 잔기 L 또는 P를 나타내고; 그리고 8은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVNA (서열번호: 15)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 H, Q, A, K, R, D, I, L, M, N, V 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 1은 H, Q, A, K 또는 R이고; 또 하나의 구현예에서, 1은 A 또는 R이고; 2는 Y, F 및 H로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 3은 Q, F 및 T로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 4는 W, M, G, H, N 및 T; 바람직하게는 W 및 M로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 5는 T, A, M, L 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 5는 T, A 또는 M이고; 6은 I, L, V, D 및 T로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 6은 I, L 또는 V이고; 그리고 7은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23GWTPLHLAA45GHLEIVEVLLK6GADVNA (서열번호: 16)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 K, M, N, R 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 Y, H, M 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 3은 F, L, M 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 4는 R, H, V, A, K 및 N; 바람직하게는 R, H, V 및 A로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 5는F, D, H, T, Y, M 및 K로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 5는 F, D, H, T 또는 Y이고; 그리고 6은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVN8 (서열번호: 17)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 T, A, H, I, N 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 F, I, Q, R, V 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 3은 A, G, N, Q 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 4는 아미노산 잔기 W 또는 Y를 나타내고; 5는 A, S, T 및 M로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 6은 N, V, S, F, M 및 W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 7은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 8은 아미노산 잔기 T 또는 A를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPLHL5A67GHLEIVEVLLK8GADVNA (서열번호: 18)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 K, A, V 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 N, I 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 3은 T, F, Y 및 W로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 4는 W, D 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 5는 아미노산 잔기 S 또는 A를 나타내고; 6은 D, I 및 M로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 7은 L, T 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 8은 A, H, Y 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1DFK2DTPLHLAA34GH5EIVEVLLK6GADVNA (서열번호: 19)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 L, S 및 T로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 G, S 및 C로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 G 또는 S이고; 3은 아미노산 잔기 S 또는 A를 나타내고; 4는 Q, S, M 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 4는 Q 또는 S이고; 5는 L, M 및 Q로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 6은 A, H, N, Y 및 D로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D2L34TPLHLA567GHLEIVEVLLK8GADVNA (서열번호: 20)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 Y, H, F, I, L 및 W; 바람직하게는 Y 및 H로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 M, D, I, L, V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 M 또는 D이고; 3은 G, S 및 V; 4는 아미노산 잔기 W 또는 F를 나타내고; 5는 A, G 및 T로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 6은 아미노산 잔기 D 또는 W를 나타내고; 7은 아미노산 잔기 L 또는 F를 나타내고; 그리고 8은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23G4TPL5LAA67GHLEIVEVLLK8GADVNA (서열번호: 21)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 K, S, I, N, T 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 1은 K 또는 S이고; 2는 K, N, W, A, H, M, Q 및 S; 바람직하게는 K 및 N로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 3은 F, Q, L, H 및 V; 바람직하게는 F, Q 및 L로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 4는 아미노산 잔기 F 또는 T를 나타내고; 5는 아미노산 잔기 Q 또는 H를 나타내고; 6은 아미노산 잔기 Y 또는 S를 나타내고; 7은 N, H, Y 및 M로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 7은 N 또는 H이고; 그리고 8은 A, H, N 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
또 하나의 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 안키린 반복 서열 모티프
1D23GWT4LHLAADLG5LEIVEVLLK6GADVNA (서열번호: 22)
를 갖는 반복 모듈을 포함하고, 여기서 1은 F, Y, H 및 W; 바람직하게는 F, Y 및 H로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 2는 I, M, D 및 V로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 또 하나의 구현예에서, 2는 I, M 또는 D이고; 3은 아미노산 잔기 F 또는 L을 나타내고; 4는 아미노산 잔기 L 또는 P를 나타내고; 5는 H, L 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타내고; 그리고 6은 A, H, N, C 및 Y로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 잔기를 나타낸다.
1 이상의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 결합 단백질 내 상이한 위치에 부착될 수 있고, 그와 같은 부착은 아민, 티올 또는 기타 적합한 반응성기와의 반응에 의하여 달성될 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 부착 (페길화)은 부위 지향적일 수 있으며, 여기서 적합한 반응성 기는 단백질에 도입되어 페길화가 우선적으로 발생하거나, 본래 결합 단백질 내 존재하는 부위를 형성한다. 티올기는 시스테인 잔기 내에 존재할 수 있고; 아민기는 예를 들면, 폴리펩타이드의 N-말단에서 발견되는일차 아민 또는 아미노산, 예컨대 라이신 또는 아르기닌의 측쇄에 존재하는 아민기일 수 있다. 일 구현예에서, 결합 단백질은 원하는 위치에 시스테인 잔기를 갖기 위하여 변형되며, 이는 시스테인 상에 예를 들면 말레이미드 기능을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 유도체와의 반응에 의한, 부위 유도된 페길화를 가능케한다. 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 넓은 분자량 범위로 (즉 약 1 kDa 내지 약 100 kDa) 가변될 수 있고, 분지형 또는 선형일 수 있다. 일 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜은 약 1 내지 약 50 kDa의 분자량을 갖고; 또 하나의 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜은 약 10 kDa 내지 약 40 kDa, 약 15 kDa 내지 약 30 kDa, 또는 약 20 kDa의 분자량을 갖는다. 이들을 합성하기 위한 결합 단백질 및 방법의 예시는 미국 특허 번호 8,710,187 (WO 2011/135067로 또한 공보됨)에 제공되며, 이의 전체 내용은 본원에 참고로 편입된다.
일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합 도메인을 포함하는 재조합 단백질이 사용될 수 있으며, 여기서 상기 재조합 단백질은 말레이미드-커플링된 PEG, 예컨대 α-[3-(3-말레이미도-1- 옥소프로필)아미노]프로필-ω-메톡시-폴리옥시에틸렌 (NOF, 썬브라이트(Sunbright) ME-200MA (20kD) 또는 썬브라이트(Sunbright) ME-400MA (40kD))에, 이의 C- 말단 시스테인 티올에서 콘주게이트된다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합 도메인을 포함하는 재조합 단백질이 사용될 수 있으며, 여기서 상기 재조합 단백질은 말레이미드-커플링된 PEG, 예컨대 α-[3-(3-말레이미도-1- 옥소프로필)아미노]프로필-ω-메톡시-폴리옥시에틸렌 (NOF, 썬브라이트(Sunbright) ME-200MA (20kD) 또는 썬브라이트(Sunbright) ME-400MA (40kD))에, C- 말단 시스테인 티올에서 번갈아 콘주게이트되는 서열번호: 8로의 펩타이드 결합을 통하여 이의 C- 말단에서 콘주게이트된다.
일부 구현예에서, C-말단 시스테인 티올은 피리딜 디설파이드-커플링된 PEG, 비닐 설폰-커플링된 PEG, 또는 기타 티올 시약을 통하여 커플링된 PEG일 수 있다.
일부 구현예에서, PEG 및 적절한 연결 화합물은 적어도 약 2 kD, 5 kD, 10 kD, 20 kD, 30 kD, 40 kD, 50 kD, 70 kD, 또는 100 kD의 분자량을 갖는다. 일 구현예에서, 말레이미드-커플링된 PEG는 적어도 약 2 kD, 5 kD, 10 kD, 20 kD, 30 kD, 40 kD, 50 kD, 70 kD, 또는 100 kD의 분자량을 갖는다.
특정 구현예에서 α-[3-(3-말레이미도-1-옥소프로필)아미노]프로필-ω- 메톡시-폴리옥시에틸렌은 적어도 약 20 kD 또는 적어도 약 40 kD의 분자량을 갖는다.
일부 구현예에서, 재조합 결합 단백질은, N- 말단 아미노기에서, 적합한 PEG-함유 연결 화합물에 콘주게이트된다. 그와 같은 구현예에서, PEG-에틸렌 시약, PEG NHS-에스테르, PEG NHS-카보네이트, PEG-p-니트로페닐 카보네이트, PEG-트리아진 시약, 등은 본원에 기재된 적합한 결합 단백질의 N-말단에서 콘주게이트된다.
추가 구현예에서, 본 발명은 특정한 재조합 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 게다가, 핵산 분자를 포함하는 벡터가 고려된다.
더욱이, 상기 언급된 결합 단백질, 특히 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질, 또는 특정한 재조합 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 및 임의로 약제학적 허용가능한 담체 및/또는 희석제 중 하나 이상을 포함하는 약제학적 조성물이 고려된다.
제형
약제학적 허용가능한 담체 및/또는 희석제는 본 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있고, 하기에서 더 상세히 설명된다. 더욱이 추가로, 상기 언급된 재조합 결합 단백질, 특히 반복 도메인을 포함하는 결합 단백질 중 하나 이상을 포함하는 진단 조성물이 고려된다.
약제학적 조성물은 상기 기술된 바와 같은 결합 단백질 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제를 포함한다 (Remington’s Pharmaceutical Sciences 1 sixth edition, Osol, A. Ed. [1980]). 숙련가에게 알려진 적합한 담체, 부형제 또는 안정제는 염수, 링거액, 덱스트로오스 용액, 한스 용액, 고정유, 에틸 올레이트, 염수 중 5% 덱스트로오스, 등장성 및 화학적 안정성을 개선하는 물질, 및 버퍼 및 보존제이다. 기타 적합한 담체는 예컨대 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글라이콜산, 폴리머 아미노산 및 아미노산 공중합체와 같은, 조성물을 투여받는 개체에 해로운 항체의 생산을 그 자체로 유도하지 않는 임의의 담체를 포함한다. 약제학적 조성물은 또한 추가의 활성제, 예컨대 항암제 또는 항-혈관형성제 (예를 들면 인간 VEGF-Axxxb; 바람직하게는, 인간 VEGF-A165b)를 포함하는 조합 제형일 수 있다.
일 구현예에서, 제형은 상기에서 기재된 바와 같은 결합 단백질 및 비제한적으로 폴리소르베이트 20 0.04%, 버퍼 예컨대 히스티딘, 포스페이트 또는 락트산 및 당 예컨대 수크로오스 또는 트레할로오스를 포함하는 비이온성 세제와 같은 세제를 포함한다. 제형은 또한 PBS를 포함할 수 있다.
생체내 투여를 위하여 사용되는 제형은 무균성 또는 멸균성이어야 한다. 이는 멸균된 여과 막을 통한 여과에 의하여 용이하게 달성될 수 있다.
치료 방법
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 VEGF-Axxx 및 VEGFR-2 사이의 결합을 억제하는 방법을 포함하고, 이는 안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 억제를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 상기 안키린 반복 도메인은 서열 번호 1 내지 7의 안키린 반복 도메인으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 서열번호: 1 내지 5의 안키린 반복 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.일부 구현예에서, 안키린 반복 도메인은 서열번호: 2 또는 3의 안키린 반복 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 재조합 결합 도메인은 109M 미만의 Kd를 갖는 VEGF-Axxx에 결합한다.
상기 방법은 허혈성 망막증, 신생혈관 망막증, 또는 둘 모두 허혈성 망막증 및 신생혈관 망막증과 관련된 것들을 포함하는 특정 눈 질환을 치료하기 위하여 사용될 수 있다. 본원에 개시된 방법에 의하여 치료될 수 있는 허혈성 망막증과 관련된일부 병태는 당뇨병성 황반 부종, 중심 정맥 폐색, 및 분지형 정맥 폐색을 포함할 수 있다. 본원에 개시된 방법에 의하여 치료될 수 있는 신생혈관 망막증과 관련된일부 병태는, 증식성 당뇨 망막병증, 삼출성 연령 관련 황반 변성, 병리적 근시, 맥락막 신생혈관화(neovascularation), 히스토플라마증에 대한 2차 신생혈관형성, 결절 맥락막 신생혈관화(neovasularization), 및 망막 혈관종 증식을 포함할 수 있고, 상기 방법은 연령 관련 황반 변성, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시 분지 망막 정맥 폐색, 및 중심 망막 정맥 폐색을 치료하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 방법은 현존하는 항-VEGF 요법에 난치성인 상기-열거된 질환을 갖는 환자를 치료하는데 또한 사용될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "치료하다"는 의료적으로 다루는 것을 의미한다. 이는, 예를 들면, AMD의 개시를 예방하기 위하여, 뿐만 아니라 이의 중증도를 완화하기 위하여 본 발명의 재조합 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다.
황반 변성은 황반 아래의 맥락막 혈관의 혈관형성 성장으로부터 초래된다. 진전된 황반 변성은 삼출성 및 위축성의 2가지 유형이 있다. 삼출성 황반 변성이 전체 황반 변성의 오직 15%를 차지하지만, 거의 모든 삼출성 황반 변성이 시각 상실을 야기한다.일단 한쪽 눈이 삼출성 황반 변성에 의하여 영향을 받으면, 병태는 거의 항상 다른쪽 눈에도 영향을 미친다. 삼출성 및 위축성 황반 변성은, 상기 질환이 주로 나이든 사람에게 발견되므로 종종 소위 연령 관련 황반 변성 또는 연령 관련 “습식(wet)” 황반 변성으로 불리운다.
본원에서 사용된 바와 같이, “항-VEGF 요법에 난치성인”은 알려진 항-VEGF 요법, 예컨대 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙 요법으로 만족스러운 생리적 반응을 달성할 수 없음을 지칭한다. 그와 같은 환자는, 예를 들면, 라니비주맙, 베바시주맙, 또는 아플리베르셉트의 적어도 3회의 유리체내 주사, 또는 아플리베르셉트 (또는 전술한 것들 중 임의의 조합 요법으로 적어도 3회의 유리체내 주사) 후 비정상 중심 망막 두께 (황반의 중심 1 mm2 영역)에서의 20% 미만의 감소를 가질 수 있다. 일 구현예에서, 항- VEGF 요법에 난치성인 환자는 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙 요법에도 불구하고 계속되는 시력 악화를 경험한다. 또 하나의 구현예에서, 항- VEGF 요법에 난치성인 환자는 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙 요법에도 불구하고 망막의 비후화(thickening)를 경험한다.일부 구현예에서, 항- VEGF 요법에 난치성인 환자는 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙 요법에도 불구하고 무시해도 좋은 수준의 해부학적 개선을 나타낸다.
일부 구현예에서, 결합 단백질은 주사당 결합 단백질의 약 0.1 mg 내지 약 10 mg의 투여로 유리체내 투여된다. 일부 구현예에서, 결합 단백질은 약 0.25 mg 내지 약 5 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 0.25 mg 내지 약 4 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 0.25 mg 내지 약 3 mg (주사 당 결합 단백질), 약 0.25 mg 내지 약 2 mg (주사 당 결합 단백질), 그리고 약 0.25 mg 내지 약 1 mg (주사 당 결합 단백질)의 투여로 투여되고; 다른 구현예에서, 결합 단백질은 약 0.5 mg 내지 약 5 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 0.5 mg 내지 약 4 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 0.5 mg 내지 약 3 mg (주사 당 결합 단백질), 약 0.5 mg 내지 약 2 mg (주사 당 결합 단백질), 그리고 약 0.5 mg 내지 약 1 mg (주사 당 결합 단백질)의 투여로 투여되고; 다른 구현예에서, 결합 단백질은 약 1 mg 내지 약 5 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 1 mg 내지 약 4 mg (주사 당 결합 단백질 중), 약 1 mg 내지 약 3 mg (주사 당 결합 단백질), 그리고 약 1 mg 내지 약 2 mg (주사 당 결합 단백질)의 투여로 투여된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 주사 당 약 0.1 mg, 약 0.2 mg, 약 0.25 mg, 약 0.3 mg, 약 0.35 mg, 약 0.4 mg, 약 0.45 mg, 약 0.5 mg, 약 0.55 mg, 약 0.6 mg, 약 0.65 mg, 약 0.7 mg, 약 0.75 mg, 약 0.8 mg, 약 0.9 mg, 약 0.95 mg, 약 1 mg, 약 1.1 mg, 약 1.2 mg, 약 1.3 mg, 약 1.4 mg, 약 1.5 mg, 약 1.6 mg, 약 1.7 mg, 약 1.8 mg, 약 1.9 mg, 약 2 mg, 약 2.0 mg, 2.1 mg, 약 2.2 mg, 약 2.3 mg, 약 2.4 mg, 약 2.5 mg, 약 2.6 mg, 약 2.7 mg, 약 2.8 mg, 약 2.9 mg, 약 3 mg, 약 3.0 mg, 3.1 mg, 약 3.2 mg, 약 3.3 mg, 약 3.4 mg, 약 3.5 mg, 약 3.6 mg, 약 3.7 mg, 약 3.8 mg, 약 3.9 mg, 약 4 mg, 약 4.0 mg, 4.1 mg, 약 4.2 mg, 약 4.3 mg, 약 4.4 mg, 약 4.5 mg, 약 4.6 mg, 약 4.7 mg, 약 4.8 mg, 약 4.9 mg, 약 5 mg, 및 약 5.0 mg의 결합 단백질의 투여로 투여된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여의 초기 투여로 투여되며; 즉, 결합 단백질의 단일 투여는 환자의 눈에 투여되고, 이후 또 다른 투여는 동일한 눈에 25일 내지 35일 이후 투여되며, 필요하면, 이는 상기 눈이 총 2회 내지 5회 투여의 초기 투여를 투여받을 때까지 반복된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여가 제1 투여된다. 이러한 구현예에서, 결합 단백질의 단회 투여 (예를 들면, 0.5 mg 내지 약 4 mg의 결합 단백질의 단일 주사)가 눈에 투여되며, 이후 동일 투여량이 25일 내지 35일 후에 치료된 눈 당 총 2회의 초기 투여가 투여된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여가 제1 투여된다. 이러한 구현예에서, 결합 단백질의 단회 투여 (예를 들면, 0.5 mg 내지 약 4 mg의 결합 단백질의 단일 주사)가 눈에 투여되며, 동일 투여량이 25일 내지 35일 후에 상기 눈에 투여되고, 그리고 25일 내지 35일 후에 치료된 눈 당 총 3회의 초기 투여가 이후 투여된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여가 제1 투여된다. 이러한 구현예에서, 결합 단백질의 단회 투여 (예를 들면, 0.5 mg 내지 약 4 mg의 결합 단백질의 단일 주사)가 눈에 투여되며, 동일 투여량이 25일 내지 35일 후에 상기 눈에 투여되고, 25일 내지 35일 후에 상기 눈에 투여되고, 그리고 다시 25일 내지 35일 후에 치료된 눈 당 총 4회의 초기 투여가 이후 투여된다.
일 구현예에서, 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여가 제1 투여된다. 이러한 구현예에서, 결합 단백질의 단회 투여 (예를 들면, 0.5 mg 내지 약 4 mg의 결합 단백질의 단일 주사)가 25일 내지 35일 후에 눈에 투여되며, 동일 투여량이 25일 내지 35일 후에 상기 눈에 투여되고, 그리고 25일 내지 35일 후에 치료된 눈 당 총 5회의 초기 투여가 이후 투여된다.
또 다른 구현예에서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 제1 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 130일의 간격으로 추가 투여된다.
일 구현예에서, 50 내지 100일, 50 내지 95일, 50 내지 90일, 50 내지 85일, 50 내지 80일, 50 내지 75일, 50 내지 70일, 50 내지 65일, 및 50 내지 60일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 55 내지 100일, 55 내지 95일, 55 내지 90일, 55 내지 85일, 55 내지 80일, 55 내지 75일, 55 내지 70일, 55 내지 65일, 및 55 내지 60일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 60 내지 100일, 60 내지 95일, 60 내지 90일, 60 내지 85일, 60 내지 80일, 60 내지 75일, 60 내지 70일, 및 60 내지 65일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 65 내지 100일, 65 내지 95일, 65 내지 90일, 65 내지 85일, 65 내지 80일, 65 내지 75일, 및 65 내지 70일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 70 내지 100일, 70 내지 95일, 70 내지 90일, 70 내지 85일, 70 내지 80일, 및 70 내지 75일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 75 내지 100일, 75 내지 95일, 75 내지 90일, 75 내지 85일, 및 75 내지 80일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 80 내지 100일, 80 내지 95일, 80 내지 90일, 및 80 내지 85일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 85 내지 100일, 85 내지 95일, 및 85 내지 90일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있고; 또 다른 구현예에서, 90 내지 100일, 및 90 내지 95일의 (각 추가 투여 사이의) 간격이 있다. 또 하나의 구현예에서, 각 추가 투여 사이에 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 또는 130일의 간격이 있다.
예를 들어, 일 구현예에서, 결합 단백질의 단회 투여 (예를 들면, 0.5 mg 내지 약 4 mg의 결합 단백질의 단일 주사)가 눈에 투여되며, 동일 투여량이 25일 내지 35일 후에 상기 눈에 투여되며, 25일 내지 35일 후에 치료된 눈 당 총 3회의 초기 투여가 이후 투여되고, 이후 동일한 투여량이 상기 눈이 치료를 요구하는 한, 매 55일 내지 65일마다 상기 눈에 투여된다.
일부 구현예에 따라, 본 발명의 방법에 따라 재조합 결합 단백질의 주사를 투여받은 환자는 기준선으로부터, 비정상 중심 망막 두께에서의 20% 이상의 감소, 25% 이상의 감소, 30% 이상의 감소, 35% 이상의 감소, 40% 이상의 감소, 45% 이상의 감소, 50% 이상의 감소, 55%이상의 감소, 60% 이상의 감소, 65% 이상의 감소, 70% 이상의 감소, 75%이상의 감소, 80% 이상의 감소, 85% 이상의 감소, 90% 이상의 감소, 95%이상의 감소, 99%의 감소, 또는 100%의 감소를 나타낼 수 있다.
일부 구현예에 따르면, 본원에 개시된 결합 단백질의 1 이상의 주사를 투여받은 후 항-VEGF 치료 예컨대 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙에 난치성인 환자는 기준선으로부터, 비정상 중심 망막 두께에서의 약 20% 이상의 감소를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시된 결합 단백질의 1 이상의 주사를 투여받은 후 환자는 기준선으로부터, 비정상 중심 망막 두께에서의 약 30% 이상의 감소를 나타낼 수 있다. 또 다른 구현예에 따르면, 본원에 개시된 결합 단백질의 1 이상의 주사를 투여받은 후 환자는 기준선으로부터, 비정상 중심 망막 두께에서의 약 40% 이상의 감소를 나타낼 수 있다.
예를 들어, 눈 질환, 예컨대 연령 관련 황반 변성의 치료를 위한 방법은 본원에 개시된 빈도로 0.5 mg 내지 5 mg의 범위의 양으로 재조합 결합 단백질의 유리체내 주사를 포함할 수 있다. 재조합 결합 단백질은 서열번호: 3의 안키린 반복 도메인을 포함한다.
예를 들어, 항-VEGF 치료 예컨대 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙에 난치성인 환자에서 연령 관련 황반 변성의 치료를 위한 방법은 본원에 개시된 빈도로 0.5 mg 내지 5 mg의 범위의 양으로 재조합 결합 단백질의 유리체내 주사를 포함할 수 있다. 재조합 결합 단백질은 서열번호: 3의 안키린 반복 도메인을 포함한다. 그와 같은 예시에서, 상기 주사 또는 주사(들)을 투여받은 환자는 1회 이상의 주사를 투여받은 후 비정상 중심 망막 두께에서의 20% 초과의 감소를 경험할 수 있다.일부 구현예에서, 상기 주사 또는 주사(들)을 투여받은 환자는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 그 이상의 주사를 투여받은 후 망막의 비후화(thickening)를 경험하지 않는다.
예를 들어, 항-VEGF 치료 예컨대 라니비주맙, 베바시주맙, 아플리베르셉트, 또는 페갑타닙에 난치성인 환자에서 당뇨병성 황반 부종의 치료를 위한 방법은 본원에 개시된 빈도로 0.5 mg 내지 5 mg의 범위의 양으로 재조합 결합 단백질의 유리체내 주사를 포함할 수 있다. 재조합 결합은 서열번호: 3의 안키린 반복 도메인을 포함한다. 그와 같은 예시에서, 상기 주사 또는 주사(들)을 투여받은 환자는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 그 이상의 주사를 투여받은 후 비정상 중심 망막 두께에서의 20% 초과의 감소를 경험할 수 있다.일부 구현예에서, 상기 주사 또는 주사(들)을 투여받은 환자는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 또는 그 이상의 주사를 투여받은 후 망막의 비후화(thickening)를 경험하지 않는다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에 의하여 추가로 예시된다. 발명자들은, 폴리에틸렌 글리콜에 접합된 서열번호: 3의 안키린 반복 도메인을 포함하는 본 발명의 결합 단백질, 아비시파르 페골(abicipar pegol; 상기 화합물은 포괄 명칭 “아비시파르 페골”을 갖고, 경우에 따라 본원에서 속칭으로 “아비시파르”로 불리운다)을 시험하였다.
개요
발명자들은 이전에 아비시파르 페골을 항-VEGF 요법에 난치성인 후기 삼출성 AMD를 갖는 환자에게 유리체내 주사로서 투여된 개방-표지의, 투여-점증확대 안전성 측정으로 시험한 적이 있다. 그들은 삼출성 AMD를 갖는 치료-비처리 환자에서의 아비시파르 및 라니비주맙의 무작위의, 이중-마스킹된 평가를 갖는 연구에 따랐다 ("단계 2 연구"). 목적은 망막 부종 및 최적-교정 시력 (BCVA) 상에서 4.2 mg 및 3mg 아비시파르의 치료 효과의 안전성 및 지속시간을 평가하고, 아비시파르의 전신성 약력학적 프로파일을 특성화하기 위함이었다.
이러한 실시예에서, 발명자들은 아비시파르 및 라니비주맙의 무작위의, 이중-마스킹된 비교를 수행하였다 (“단계 3 연구”). 환자를 아비시파르 1 mg, 아비시파르 2 mg 또는 라나비주맙(ranabizumab) 0.5 mg의 3개 그룹 중 무작위화하여 20주 동안 이를 따르게 하였다. 모든 환자에게 제0주, 제4주, 및 제8주에서 3개월 투여량을 투여하였다. 라나비주맙(ranabizumab)-치료된 환자를 제12주 및 제16주에 추가의 라니비주맙 투여로 투여하였으며, 한편 아비시파르 환자에게 위장(sham) 주사를 투여하였다. 단계 3의 목표는 BCVA 및 망막 부종 상에서 유사한 또는 더 나은 효과가, 더 적은 투여의 아비시파르 (3회 투여) vs 라니비주맙 (5회 투여)로 달성될 수 있는지 여부; 아비시파르의 최종 투여로부터 8주 및 12주 후 vs 라니비주맙의 제4 및 제5 투여로부터 4주 후가 비교 가능한지를 평가하는 것이다.
단계 3 내의 일차 효능 변수는 제16주 (제3주사 이후 8주)에서의 연구내 BCVA의 기준선으로부터의 평균 변화이다. 2 mg 및 1 mg 아비시파르로 치료된 환자는 각각 8.2 및 6.3 글자를 얻었고, 이와 비교하여 라니비주맙-치료된 환자는 5.3 글자를 얻었다 (제4 주사 후 4주). 주요 2차 효능 변수는 망막내 유체의 제거였다. 유리체내(Intraverinal) 유체를 광 간섭성 단층촬영으로 평가된 바와 같은 망막내 부종, 망막내 낭포 및 망막하 유체로서 특성화하였다. 치료의 제3 투여 후 제12주, 제4주에서, 망막내 유체가 없는 환자의 비율은 아비시파르 2 mg, 아비시파르 1 mg 및 라니비주맙 그룹에서 각각 78%, 68 및 50%이었다. 아비시파르의 제3 투여 후 제16주, 제8주에서, 라니비주맙의 제4 투여로부터 4주 후에, 망막내 유체가 없는 환자의 비율은 아비시파르 2 mg, 아비시파르 1 mg 및 라니비주맙 그룹에서 각각 52, 44 및 19%이었다. 망막내 유체의 존재는 시력 손실을 야기하는, 망막 내 신경 네트워크의 파괴를 유발한다. 망막내 유체의 제거는 시력을 보존한다.
환자 선택
대략 64명의 환자들을 하기 그룹 중 하나로 3:3:2 배당으로 무작위화하였다:
● 기준선에서 투여된 2 mg의 아비시파르, 제4주 및 제8주 (3회 주사)
● 기준선에서 투여된 1 mg의 아비시파르, 제4주 및 제8주 (3회 주사)
● 기준선에서 투여된 0.5 mg의 라니비주맙, 제4주, 제8주, 제12주, 및 제16주 (5회 주사)
64명의 환자를 선택하였다. 이들의 평균 연령은 76.6 년이었고, 주로 백인이었고, 그리고 다수가 여성이었다. 기준선에서, 평균 BCVA는 58.5 내지 60.4 글자 범위 내에 있었다 (-20/63 스넬렌 등가). 평균 기준선 중심 망막 두께 (“CRT”)는 463 내지 526 μm 범위 내였다. 인구학적 또는 기준선 특성 중 임의의 것에 대한 치료 그룹 간의 유의미한 차이는 없었으나 (표 1), 우세 전형적 병변을 갖는 환자의 비율은 기타 치료 그룹에서보다 아비시파르 2.0 mg 그룹에서 현저하게 높았다.
BCVA는, Arch Ophthalmol ., 119(10):1417-36 (2001)에 기재된 바와 같은 ETDRS 방법의 변형을 사용함에 의해 정량하였다. BCVA 시험을 눈의 접촉이 필요한 임의의 검사에 선행하였으며, 굴절 후 수행하였다.
시력가 감소하지 않으면, 4 미터에서 굴절을 수행하였으며, 감소할 경우 1 미터에서 수행하였다. 우측 눈을 처음 굴절시키고, 이후 좌측 눈을 굴절시켰다. 시험 프레임을 환자 얼굴 상에 놓고, 렌즈 셀(lens cell)이 안와의 전측 평면에 평행하고 동공 앞에 중심에 오도록 조정하였다. 렌즈 셀을 각막으로부터의 적절한 거리로 조정하였다. 굴절되지 않은 눈을 접혀진 조직으로 패칭함에 의하여, 눈 위에 흑색 차폐기에 도포함에 의하여 차폐하였다. 초기, 근사 굴절로부터 수득된 렌즈 교정을 시험 프레임에 삽입하였다. 렌즈를 눈과 가까운 구획에서 렌즈를 삽입함으로써 배치하였으며; 원통형 렌즈 교정을 구형 교정 앞의 구획에 놓아두고, 축을 조정하였다. 환자가 이심성(eccentric) 시야를 사용하고, 필요시, 다른쪽 눈도 완전히 차폐되는 것을 식별하도록 하였다. 구형체 전력, 실린터 축, 및 실린더 전력을 이후 측정하고 정밀개선하였다.
BVCA 시험을 4 미터에서 시작하였다. 처음으로 우측 눈을 시험하였고, 이후 좌측 눈을 시험하였다. 참가자 눈으로부터 시력 차트로의 거리는 4 미터였다 (13 피트 및 1.5 인치, 또는 157.5 인치). 참가자를 서거나 앉도록 하였으며; 둘 중 임의의 경우에, 관찰자는 참가자가 편안하게 서거나 앉아있는지 여부 및 두부가 시험 동안에 앞쪽 또는 뒤쪽으로 움직이지 않는지 여부, 및 참가자의 눈이 4 미터 거리에서 유지되고 있는지 식별하였다. 시험자는 참가자가 읽은 각각의 글자가 정답인지, 오답인지 여부를 스코어링하였다. 일단 참가자가 분명한 단일-글자 반응으로 글자를 식별하고, 그 다음 글자를 읽으면, 이전 글자의 교정은 허용하지 않았다. 만약 참가자가 다음 글자를 소리내어 읽기 전에, 반응을 소리내어 변경하면 (예를 들어 "'O'가 아니라 'C'였음"), 변경은 허용되었다. 만약 참가자가 그 다음 글자를 읽기 시작한 후 반응을 변경한다면, 변경은 허용되지 않았다. 참가자가 글자를 읽지 못한다고 말할 시, 참가자에게 추측을 하도록 하였다. 만약 참가자가 2 이상의 글자 중 하나로서 글자를 식별한다면, 참가자가 그 다음 글자를 읽더라도, 참가자에게 한 글자를 선택하도록 요구하였으며, 필요하다면, 추측하도록 하였다. 판독 또는 추측을 강행하였음에도 불구하고, 유의미한 판독이 더이상 진행되지 않는 것이 확실시될 때 (일반적으로 참가자가 적어도 1개의 글자를 추측하는 것이 불가능할 때), 관찰자는 상기 눈에 대해 시험을 중단하였다. 참가자를 추측하도록 하는 다음과 같은 몇가지 이유가 있다: 글자를 식별할 수 없다는 그들의 진술이 종종 신뢰할 수 없기 때문에; 참가자들을 추측하도록 하는 것이 참가자의 노력을 최대화하도록 도움이 되기 때문에; 상이한 임상에서 수행된 절차 중 균일성을 확신하도록 도움이 되기 때문에; 그리고 참가자의 편견 (꾀병)을 방지하도록 도움이 되기 때문에.
4 미터에 정확하게 19개 이하의 글자를 판독하는 눈을 1 미터에서 시험하였다. 1 미터에서 시험하기 전에, 더 가까운 시험 거리에 대해 보충하기 위하여 시험 프레임에 이미 있는 4-미터 교정에 +0.75 구형체를 첨가하였다. 참가자가 4-미터 시험에서 서거나 앉을 수 있는 것과 달리, 참가자는 1-미터 실험에서 앉을수만 있었다. 참가자에게 1 미터에서, 오직 제1의 6개 줄로 상기 거리에서 최대 30개만을 읽도록 요구하였다.
우측 눈의 실험이 완료된 후, 좌측 눈에 대해 4 미터에서부터 실험을 반복하였다.
표 1: 인구학적 및 기준선 특성 (단계 3, mITT)
Figure pct00003
중요 안전성 변수
● 부작용 (AE) 및 심각한 부작용 (SAE)
● BCVA
● 일반적인 신체 검사
● 혈액 화학, 혈액학 및 요검사
● 후-주사 평가
면역원성 및 전신 약력학적 측정치:
● 아비시파르의 전신 (혈청) 수준
● 아비시파르에 대한 결합 항체 및 중화 항체
효능 측정:
● 당뇨 망막병증 연구 (ETDRS)의 초기 치료로 평가된 BCVA
시력 프로토콜
o 기준선으로부터의 평균 변화
o BCVA 반응군 분석:
1. 기준선으로부터의 15글자 초과의 개선 (향상된 시력)
2. 기준선으로부터의 15글자 미만의 손실 (안정된 시력)
● 광 간섭성 단층촬영(OCT) 으로 측정 시, 망막 부종 또는 중심 망막 두께 (중심와의 1 mm2 영역; CRT)을 중심 판독 중심 (CRC)에 의하여 평가하였다.
● CRC으로 측정 시의 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체의 OCT의 평가
OCT는 망막의 고-해상도 영상화 광학적 섹션을 제공하는, 레이저-기반, 비-침습성, 진단 시스템이다. 연구대상인 눈에서의 망막의 중앙 1mm 하부범주의 두께를 Spectralis 스펙트럼 도메인 OCT (SD-OCT) (Heidelberg 엔지니어링) 또는 Cirrus 스펙트럼 도메인 OCT (Carl Zeiss)를 사용함에 의하여 포착하였다. Spectralis OCT 디바이스는 6.0 mm x 6.0 mm에서 512 A 스캔 및 49 B 스캔의 용적 스캔 및 6.0 mm 스캔 길이 및 768 해상도에서의 수평 및 수직 B 스캔의 조준점(cross hair) 스캔으로 포착하였다. 상기 디바이스를 Heidelberg 아이 익스플로러(Eye Explorer) 버전 1.6.2.0 및 HRA2 / Spectralis 패밀리 획득(Family Acquisition) 모듈 5.1.2.0 이상의 버전으로 구동하였다. Cirrus OCT 디바이스는 6.0 mm x 6.0 mm에서 512 A 스캔 및 128 B 스캔의 황반 큐브 스캔 및 6.0 mm 스캔 길이 및 1024 해상도에서의 수평 및 수직 B 스캔의 조준점(cross hair) 스캔으로 포착하였다. 디바이스를 Cirrus 소프트웨어 버전 4.5 이상으로 구동하였다.
스크리닝 방문에서 환자로부터 수집된 전자 OCT 이미지를, 환자 적격성을 식별하기 위하여 CRC에 의하여 재검토하였다. 모든 연구 방문에서의 모든 환자로부터 수집된 전자 OCT 이미지를, 망막 유체의 해소에서의 치료 효과를 평가하기 위하여 CRC에 송부하였다.
동일한 OCT 시스템 (즉, Spectralis 또는 Cirrus)을 상기 연구에 걸친 임의의 소정의 환자에 대하여 CRT를 평가하기 위하여 사용하였다.
질환 재발을 식별하기 위하여 사용된 데이터는 연구대상 눈에 대한 중앙 판독 센터에 의하여 등급화된 BCVA 및 CRT을 포함한다. 조사자에 의하여 평가된, 1.25 mm2 초과의 신규 출혈 또는 현재 출혈을 재치료 경우 보고 형태 (CRF) 상에서 포착하였다. 이러한 CRF 상의 포착된 양성 반응을 현재 출혈의 신규 또는 증가의 식별으로서 사용하였다.
아비시파르-치료된 환자는, 만약 연구 약물치료의 제3 주사 (제12주) 후 활성 질환의 증거가 있을 경우 케어 요법 표준 (SOC)으로 중단할 수 있었으며; 라니비주맙-치료된 환자는 활성 질환의 증거와 무관하게 4주 간격으로 반복 주사를 투여받았다.
활성 질환의 증거
발명자는 OCT 상의 망막 유체를 갖는 눈이, 제12주 및 그 이후에, 치료되어야 하며, 단, 4주 간격으로 투여된 3회 연속 주사 이후 망막 유체 내 감소가 없는 눈은 예외로 하는 프로토콜을 제공하였다. 상기 눈에 대해, 계속된 치료가 소용없을 수 있고, 안과의 및 환자는 치료를 연기하도록 선택하는 것이 가능하다. 만약 OCT 상에 (치료 중단 시의 방문과 비교하여) 증가된 망막된 유체가 있다면, 이후 방문에서 이러한 눈에서의 치료가 재도입될 수 있다. OCT 상에 증가된 망막된 유체가 없으나, 활성 CNV의 기타 징후가 있다면, 눈은 치료되어야 한다. 이들 징후는 신규의 망막하 또는 망막내 출혈, 지속적 망막하 또는 망막내 출혈, 감소된 시력 (또 다른 설명 없이, 최종 방문과 비교하여), 플루오레신 혈관조영술 (FA) 상의 증가된 병변 크기 (최종 혈관조영 또는 FA 상 누출과 비교하여).
중요 후속조치 방문
● 단계 1: 제3일, 제1주, 제2주, 제4주, 제8주, 제12주, 제16주, 제20주, 제24주/중단
● 단계 2: 제3일, 제1주, 제2주, 제4주, 제6주, 제8주, 제12주, 제16주, 제20주, 제24주, 제28주 및 제32주/중단
● 단계 3: 제3일, 제1주, 제4주, 제8주, 제12주, 제16주, 제20주/중단
분석
안전성 집단을 부작용에 대하여 분석하였고, 변형된 의도-치료 (mITT) 군을 성향, 인구통계, 기준선 특성, 중심 망막 두께, 및 BCVA에 대해 분석하였으며; CRT 및 BCVA 최종-관찰-수행된-포워드 (LOCF)를 환자가 SOC (예를 들어, 라니비주맙, 아플리베르셉트, 베바시주맙)로의 치료를 투여받은 후 데이터를 입력하기 위하여 사용하였다.
안전성
인과관계와 상관 없이, 연구대상 눈에서의 가장 흔한 (그룹 당 2 초과의 경우) 부작용 (AE)은 아비시파르-그룹 내에서는 망막 출혈, 유리체 부유물, 유리체 탈착이었고, 라니비주맙 그룹에서의 황반 상흔 및 망막 출혈이었다 (표 2). 임의의 그룹에서 심각한 부작용은 보고되지 않았다. 염증-관련된 AE가 2 mg-치료된 환자 중 2명 및 1 mg-치료된 환자 중 3명에서 발생하였다(표 2). 부작용 중 어떤 것도 제1 연구 주사 후 발생하지 않았으며; 맥락막염 및 포도막염 AE가 제2 주사 후 발생하였으며; 홍채염 및 유리체염 AE가 제3 주사 후 발생하였다. 라니비주맙-치료된 그룹 내 눈 염증은 보고되지 않았다.
표 2: 대상 눈에서의 인과관계와 무관한 부작용 (그룹 당 2 초과의 경우) 눈 염증 (임의의 경우)
Figure pct00004
효능
2 mg 및 1 mg 아비시파르 그룹에서, 제12주까지 SOC로 빠져나간 환자는 없었다. 2 mg 그룹 내에서, 3명의 환자가 제12주에서 SOC로 빠져나갔고, 5명의 환자가 제16주에서 빠져나갔다. 1 mg 그룹 내에서, 5명의 환자가 제12주에서 빠져나갔고, 6명의 환자가 제16주에서 빠져나갔다. 제12주 이후 활성 질환의 증거가 있는 라니비주맙-치료된 환자는 라니비주맙으로 계속 재치료되었고; 6명의 라니비주맙-치료된 환자가 제12주에서 SOC에 대한 기준을 만족하였으며, 3명의 환자가 제16주에서 그러하였다.
최적-교정 시력 (BCVA)
기준선으로부터의 평균 BCVA 변화는 모든 그룹에서 개선되었고; 아비시파르의 최종 투여 이후 제12주, 제4주에서 기준선으로부터의 BCVA 변화는 2 mg, 1 mg 및 라니비주맙 치료 그룹에서 각각 8.9개, 6.2개 및 5.3개 글자였다. 제16주에서,일차 종료점, 즉 기준선으로부터의 BCVA 변화는 도 1에서 나타난 바와 같이, 각각의 그룹에서 8.2개, 6.3개 및 5.3개의 글자였다. 아비시파르 및 라니비주맙 치료 그룹 간의 차이는 통계적으로 유의미하지 않더라도, 따라서 상당하였다 (도 1 및 도 2, 3, 및 4에서의, 표준 케어를 투여받은 후의 데이터가 누락됨; 누락 값은 LOCF을 사용하여 전가됨).
BCVA에서의 15개 이상의 글자 개선을 갖는 환자의 비율은, 라니비주맙 그룹과 비교하여, 2 mg 아비시파르 그룹에서 수치적으로 높았다. 제12주에서, 2 mg, 1 mg 아비시파르 및 라니비주맙 그룹에서 각각 22%, 8% 및 13%가 15개 이상의 글자 만큼 개선되었다. 제16주에서, 값은 22%, 12% 및 13%였다 (도 2). 아비시파르 그룹 중 0명의 환자가, 그리고 라니비주맙 그룹 중 1명의 환자가 20주 연구 동안에 15개 이상의 글자의 손실을 보였다.
안정한 시력을 15개 글자 미만의 BCVA 손실로서 평가하였다. 아비시파르 그룹 중 모든 환자가 안정한 시력을 달성하였으며, 라니비주맙 그룹 중 1명의 환자가 그렇지 않았다 (도 3).
중심 망막 두께
기준선 CRT 값은 2 mg 아비시파르 및 라니비주맙 치료 그룹 사이에서 비교가능하였으며, 1 mg 아비시파르 그룹은 대략 60 μm 더 두꺼웠다. 제12주까지, CRT 감소는 3개 치료 그룹 내에서 각각 140, 195 및 126 μm이었다. 제16주에서, 이러한 값은 111, 161, 및 127 μm이었으며; 2.0 mg 아비시파르 및 라니비주맙 치료 그룹 간의 차이는 모든 경우에서 유의미하지 않았다. CRT가 정상 상한치로, 또는 그 미만으로 감소한 환자의 비율은 제1주 내지 제16주에서 아비시파르 그룹에서 수치적으로 더 높았으며, 한편 제8주에서의 차이는 라니비주맙 그룹 (p=0.041)과 비교하여 1 mg 그룹에서 유의미하게 더 높았다. 제12주에서, CRT가 정상 상한치로, 또는 그 미만으로 감소한 환자의 비율은 3개 치료 그룹에서 각각 57%, 64% 및 44%이었다. 제16주에서, 값은 48%, 52% 및 44%이었다. 도 4는 상기 연구에 걸쳐 나타난 평균 CRT 값을 나타낸다.
유체의 해부학적 해소(Anatomical Resolution)에서의 치료 효과
sdOCT 이미지 중의 망막내 유체, 망막내 낭포 및 망막하 유체의 존재는 활성 삼출성 병변의 측정치로서 판독 센터에 의하여 스코어링되었다. 3개 모두의 유체 구획이 제1, 제2, 및 제3 투여로부터 4주 후 해소된 (전체 건조) 환자의 비율은 2 mg 아비시파르 그룹 내에서 52, 74, 및 78%이었고, 1 mg 아비시파르 그룹 내에서 40, 52, 및 68%이었고, 라니비주맙 그룹 내에서 13, 19 및 50%이었다. 아비시파르 2.0 mg 및 1.0 mg의 제3 투여 후 제16주, 제8주에서, 라니비주맙의 제4 투여로부터 4주 후에, 이러한 값은 아비시파르 2 mg, 아비시파르 1 mg 및 라니비주맙 그룹에서 각각 52, 44 및 19%이었다. 도 5는 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체 (전체 3 구획)이 치료 후 해소된 환자의 비율을 나타낸다. 2 mg 아비시파르로 치료된 환자 내의 2개의 예시가 도 6 및 7에서 나타난다. 중심 망막의 비정상 유체의 해소(resolution)에서 입증된 바와 같이, 이들 환자에서의 중심 망막 두께에서의 뚜렷한 감소가 있다.
이전 연구와의 비교
1.0 및 2.0 mg 아비시파르는, 질환 진행의 측정 상에서 더 높은 투여의 효과에 의하여 놀라운 결과를 만들어낸 치료로부터 4, 8, 또는 12 주 후 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체를 감소시키는데 효과적으로 사용될 수 있다. 삼출성 AMD를 갖는 175명의 치료-비처리 환자의 임상 시험에서, 4.2mg 및 3.0 mg 아비시파르가, 초기 투여 이후, 망막 유체를 현상하는데 라니비주맙에서보다 더 효과적이지 않다는 것이 발견되었다. 환자를 제1일에 투여하고, 이후 제16주에 투여하거나, 만약 그들이 특정 재-치료 기준을 만족한다면 이보다 더 조기에 투여한다. 도 8은 치료 후 망막내 유체, 망막내 낭포, 및 망막하 유체 (모든 3개 구획)이 해소된 환자의 비율을 나타내고; 도 9는 유체가 이들 구획 중 해소된 곳이 1개, 2개, 3개 모두, 또는 이중 어느 것도 아닌 환자의 비율을 나타낸다.
본 발명이 특정 구현예 및 실시예의 맥락에서 개시되었다고 하더라도, 본 발명은 기타 대안적 구현예에 대한 구체적으로 개시된 구현예 및/또는 본 발명 및 이의 명백한 변형 및 동등체의 사용을 넘어서는 범위까지 확장됨을 본 분야의 숙련가는 이해할 것이다. 수많은 변형이 자세히 나타나고 기술되는 것과 함께, 본 발명의 범위 내에 있는 다른 변형도 본 개시사항에 기반하여 본 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 실시예의 특정 특징 및 양태의 다양한 조합 또는 하부-조합이 배열될 수 있고, 여전히 본원의 범위 내에 있음이 또한 고려된다. 따라서, 개시된 구현예의 다양한 특징 및 양태는 개시된 발명의 가변된 양식을 수행하기 위하여 서로 조합 또는 치환될 수 있음이 이해되어야 한다. 따라서, 본원에 개시된 본 발명의 범위는 상기 기술된 특정 구현예에 제한되지 않고, 하기 청구항의 정당한 판독에 의하여서만 측정되어야 함이 의도된다.
SEQUENCE LISTING <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1025 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 1 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asn Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Phe Asp Trp Met Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala His Glu Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Thr Asp Val Ser Gly Tyr Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ala Asp 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Thr Lys Asp Asn Thr Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ser Ala Asp 100 105 110 Leu Gly Arg Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp 115 120 125 Val Asn Ala Gln Asp Lys Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile 130 135 140 Asp Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Ser 145 150 155 160 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu 165 170 175 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu 180 185 190 Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 195 200 205 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr 210 215 220 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 225 230 235 240 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro 245 250 255 Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Ser Pro Ala 260 265 270 Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 275 280 285 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 290 295 300 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala 305 310 315 320 Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu 325 330 335 Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 340 345 350 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr 355 360 365 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 370 375 380 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro 385 390 395 400 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr 405 410 415 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 420 425 430 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 435 440 445 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu 450 455 460 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly 465 470 475 480 Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 485 490 495 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr 500 505 510 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu 515 520 525 Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 530 535 540 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Thr 545 550 555 560 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 565 570 575 Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 580 585 590 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro 595 600 605 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 610 615 620 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro 625 630 635 640 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr 645 650 655 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 660 665 670 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 675 680 685 Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Ser Pro Ala 690 695 700 Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 705 710 715 720 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 725 730 735 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro 740 745 750 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 755 760 765 Glu Ser Gly Pro Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro 770 775 780 Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr 785 790 795 800 Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 805 810 815 Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 820 825 830 Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu 835 840 845 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 850 855 860 Ser Thr Glu Glu Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr Ser Thr Glu Glu 865 870 875 880 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Thr Ser Glu 885 890 895 Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 900 905 910 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Gly Pro 915 920 925 Gly Ser Glu Pro Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Ser Glu Pro 930 935 940 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Ser Pro Ala Gly Ser Pro Thr 945 950 955 960 Ser Thr Glu Glu Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro 965 970 975 Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala Pro Gly Ser Glu Pro 980 985 990 Ala Thr Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro 995 1000 1005 Glu Ser Gly Pro Gly Thr Ser Thr Glu Pro Ser Glu Gly Ser Ala 1010 1015 1020 Pro Gly 1025 <210> 2 <211> 168 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 2 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asn Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Phe Asp Trp Met Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala His Glu Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Thr Asp Val Ser Gly Tyr Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ala Asp 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys His Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Thr Lys Asp Asn Thr Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ser Ala Asp 100 105 110 Leu Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp 115 120 125 Val Asn Ala Gln Asp Lys Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile 130 135 140 Asp Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Gly 145 150 155 160 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Cys 165 <210> 3 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 3 Gly Ser Asp Leu Asp Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asn Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Arg Asp Ser Thr Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Pro Trp Gly 35 40 45 His Pro Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Ala Asp Phe Gln Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ala Val 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Ala Gln Asp Lys Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile Asp 100 105 110 Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Gly Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Cys 130 135 <210> 4 <211> 540 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 4 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asn Gly Ala Asp Val Asn Thr 20 25 30 Ala Asp Ser Thr Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Val Pro Trp Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Lys Asp Phe Gln Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ala Ile 65 70 75 80 Gly His Gln Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Ala Gln Asp Lys Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile Asp 100 105 110 Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Gly Ser 115 120 125 Gly Ser Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro 130 135 140 Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 145 150 155 160 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro 165 170 175 Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser 180 185 190 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala 195 200 205 Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro 210 215 220 Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 225 230 235 240 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro 245 250 255 Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser 260 265 270 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala 275 280 285 Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro 290 295 300 Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 305 310 315 320 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro 325 330 335 Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser 340 345 350 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala 355 360 365 Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro 370 375 380 Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 385 390 395 400 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro 405 410 415 Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser 420 425 430 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala 435 440 445 Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro 450 455 460 Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 465 470 475 480 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro 485 490 495 Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser 500 505 510 Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala 515 520 525 Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser 530 535 540 <210> 5 <211> 135 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 5 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Val Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asp Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Ser Asp Phe Lys Gly Asp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ser Gln Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Tyr Asp Met Leu Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Asp Leu 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Ala Gln Asp Arg Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile Asp 100 105 110 Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Gly Ser 115 120 125 Pro Ser Thr Ala Asp Gly Cys 130 135 <210> 6 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 6 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Val Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Thr Asn Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Lys Asp Gln Phe Gly Phe Thr Pro Leu Gln Leu Ala Ala Tyr Asn Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Phe Asp Ile Phe Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Asp Leu 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Asn Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Ala Gln Asp Lys Phe Gly Arg Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile Asp 100 105 110 Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Ser Gly 115 120 125 Ser Cys 130 <210> 7 <211> 168 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat protein <400> 7 Gly Ser Asp Leu Gly Lys Lys Leu Leu Glu Ala Ala Arg Ala Gly Gln 1 5 10 15 Asp Asp Glu Val Arg Ile Leu Met Ala Asn Gly Ala Asp Val Asn Ala 20 25 30 Val Asp Tyr Ile Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ala Tyr Gly 35 40 45 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Ser Ala Asp Val Asn 50 55 60 Ala Glu Asp Phe Ala Gly Tyr Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Ser Asn 65 70 75 80 Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp Val 85 90 95 Asn Thr Lys Asp Asn Thr Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ser Ala Asp 100 105 110 Leu Gly His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Tyr Gly Ala Asp 115 120 125 Val Asn Thr Gln Asp Lys Phe Gly Lys Thr Ala Phe Asp Ile Ser Ile 130 135 140 Asp Asn Gly Asn Glu Asp Leu Ala Glu Ile Leu Gln Lys Ala Ala Gly 145 150 155 160 Ser Pro Ser Thr Ala Asp Gly Cys 165 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide linker <400> 8 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Cys 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Polypeptide linker <400> 9 Gly Ser Pro Ser Thr Ala Asp Gly Cys 1 5 <210> 10 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 10 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 11 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 11 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 12 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 12 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Xaa <210> 13 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 13 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Xaa Ala Asp Leu Gly 1 5 10 15 Xaa Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Xaa <210> 14 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 14 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Xaa Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 15 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 15 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 16 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 16 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Trp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 17 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (33)..(33) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 17 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Xaa <210> 18 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 18 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu His Leu Xaa Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 19 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (18)..(18) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 19 Xaa Asp Phe Lys Xaa Asp Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Xaa Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 20 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (13)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 20 Xaa Asp Xaa Leu Xaa Xaa Thr Pro Leu His Leu Ala Xaa Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 21 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (14)..(15) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 21 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Xaa Thr Pro Leu Xaa Leu Ala Ala Xaa Xaa Gly 1 5 10 15 His Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala <210> 22 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Ankyrin repeat sequence motif <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (27)..(27) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 22 Xaa Asp Xaa Xaa Gly Trp Thr Xaa Leu His Leu Ala Ala Asp Leu Gly 1 5 10 15 Xaa Leu Glu Ile Val Glu Val Leu Leu Lys Xaa Gly Ala Asp Val Asn 20 25 30 Ala

Claims (61)

  1. VEGF-Axxx 및 VEGFR-2 사이의 결합을 억제하는 방법으로서,
    안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 억제를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 재조합 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 투여되는, 방법.
  2. 황반 변성을 치료하는 방법으로서,
    안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 재조합 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 투여되는, 방법.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 황반 변성은 삼출성(exudative) 황반 변성인, 방법.
  4. 망막 질환을 갖는 환자에서 시력(visual acuity)을 개선하는 방법으로서,
    안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 개선이 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 재조합 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 투여되는, 방법.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 망막 질환은 삼출성 황반 변성, 결절 맥락막 맥관병증, 망막 혈관종 증식, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 및 분지 망막 정맥 폐색으로부터 선택되는, 방법.
  6. 망막 내 유체를 감소시키는 방법으로서,
    안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 감소가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 재조합 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 투여되는, 방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 유체는 망막내(intraretinal) 유체, 망막하(subretinal) 유체, 및 망막내 낭포(intraretinal cysts) 내 유체로부터 선택되는, 방법.
  8. 망막 두께를 감소시키는 방법으로서,
    안키린 반복 도메인을 포함하는 재조합 결합 단백질의 약 0.25 mg 내지 약 4 mg을, 상기 감소가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 재조합 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 내지 5회 투여로 투여되는, 방법.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되는, 방법.
  10. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되는, 방법.
  11. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되는, 방법.
  12. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되는, 방법.
  13. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 각 추가 투여 사이에 25일 내지 115일의 간격으로 2회 내지 5회 투여 후, 추가 투여를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  16. 청구항 14에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 60일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  17. 청구항 14에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 80일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  18. 청구항 14에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 2회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 105일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  19. 청구항 13에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  21. 청구항 19에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 60일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  22. 청구항 19에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 80일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  23. 청구항 19에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 3회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 105일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  24. 청구항 13에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  26. 청구항 24에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 60일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  27. 청구항 24에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 80일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  28. 청구항 24에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 4회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 105일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  29. 청구항 13에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되고, 이후 각 투여 사이에 50일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  30. 청구항 29에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  31. 청구항 29에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 50일 내지 60일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  32. 청구항 29에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 80일 내지 90일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  33. 청구항 29에 있어서, 상기 결합 단백질은 각 투여 사이에 25일 내지 35일의 간격으로 5회 투여로 투여되고, 이후 각 추가 투여 사이에 105일 내지 115일의 간격으로 추가 투여되는, 방법.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 적어도 5 kDa의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티를 추가로 포함하는, 방법.
  35. 청구항 34에 있어서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 5 kDA, 10 kDA, 및 20 kDa로 구성된 군으로부터 선택된 분자량을 갖는, 방법.
  36. 청구항 1 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안키린 반복 도메인의 N-말단 캡핑 모듈은 위치 5에서 Asp 잔기를 포함하는, 방법.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안키린 반복 도메인은 서열번호: 1, 서열번호: 2, 서열번호: 3, 서열번호: 4, 서열번호: 5, 서열번호: 6, 서열번호: 7의 안키린 반복 도메인들로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 서열번호: 3의 아미노산 1 내지 126을 포함하는 안키린 반복 도메인을 포함하는, 방법.
  39. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안키린 반복 도메인은 서열번호: 10, 서열번호: 11, 서열번호: 12, 서열번호: 13, 서열번호: 14, 서열번호: 15, 서열번호: 16, 서열번호: 17, 서열번호: 18, 서열번호: 19, 서열번호: 20, 서열번호: 21, 및 서열번호: 22로 구성된 군으로부터 선택된 안키린 반복 서열 모티프를 갖는 반복 모듈을 포함하는 안키린 반복 도메인을 포함하는, 방법.
  40. 청구항 1 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 도메인은 109M 미만의 Kd를 갖는 VEGF-Axxx에 결합하는, 방법.
  41. 청구항 1 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 VEGFR-1에 결합하는 VEGF-Axxx를 억제하는, 방법.
  42. 청구항 1 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안키린 반복 도메인은 폴리펩타이드 링커 및 C-말단 Cys 잔기에 대한 펩타이드 결합을 통하여 이의 C-말단에서 콘주게이트되고, 상기 C-말단 Cys의 티올은 말레이미드-커플링된 폴리에틸렌 글리콜에 추가로 콘주게이트되는, 방법.
  43. 청구항 42에 있어서, 상기 말레이미드-커플링된 폴리에틸렌 글리콜은 α-[3-(3-말레이미도-1-옥소프로필)아미노]프로필-ω-메톡시-폴리옥시에틸렌인, 방법.
  44. 청구항 42에 있어서, 상기 폴리펩타이드 링커는 2개 내지 24개의 아미노산으로 구성된, 방법.
  45. 청구항 1 내지 44 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제로 투여되는, 방법.
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 담체는 PBS인, 방법.
  47. 청구항 45 또는 46에 있어서, 상기 결합 단백질은 유리체내(intravitreal) 주사에 의하여 투여되는, 방법.
  48. 청구항 1 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결합 단백질은 약 0.25 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 2 mg, 약 3 mg, 또는 약 4 mg의 투여로 투여되는, 방법.
  49. 청구항 1 및 청구항 9 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 황반 변성, 결절 맥락막 맥관병증, 망막 혈관종 증식, 당뇨병성 황반 부종, 병리적 근시, 분지 망막 정맥 폐색, 또는 중심 망막 정맥 폐색을, 상기 병태를 갖는 환자에서 치료하는데 효과적인, 방법.
  50. 청구항 1 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자의 최적 교정 시력은 치료 시작으로부터 12주 후 적어도 15글자 만큼 개선되는, 방법.
  51. 청구항 1 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는, 치료 시작으로부터 4주, 8주, 또는 12주 후, 중심 망막 내 유체의 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100%의 감소를 경험하는, 방법.
  52. 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는, 치료 시작으로부터 4주, 8주, 또는 12주 후, 망막내 부종, 망막내 낭포, 및 망막하의 유체 중 하나 이상에서 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 100%의 감소를 경험하는, 방법.
  53. 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는, 치료 시작으로부터 4주, 8주, 또는 12주 후, 망막내 부종, 망막내 낭포, 및 망막하의 유체 중 하나 이상에서 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 또는 약 99%의 감소를 경험하는, 방법.
  54. 청구항 52 또는 53에 있어서, 상기 감소는 스펙트럼 도메인 OCT에 의하여 평가되는, 방법.
  55. 청구항 1 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 치료 시작으로부터 4주, 8주, 또는 12주 후, 중심 망막 두께, 망막내 부종, 망막내 낭포, 및 망막하 유체 중 적어도 2개, 또는 적어도 3개, 또는 모두에서의 감소를 경험하는, 방법.
  56. 청구항 1 내지 55 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 라니비주맙(ranibizumab), 베바시주맙(bevacizumab), 아플리베르셉트(aflibercept), 또는 페갑타닙(pegaptanib) 요법에 난치성인, 방법.
  57. 청구항 56에 있어서, 상기 환자에서 라니비주맙, 베바시주맙, 또는 아플리베르셉트의 3회의 유리체내 주사 후, 황반의 1 mm2 영역 중심 내에서의 감소가 20% 미만인, 방법.
  58. 청구항 56 또는 57에 있어서, 상기 환자 라니주맙(ranizumab) 요법의 3회, 4회, 5회, 또는 6회 투여에 난치성인, 방법.
  59. 청구항 56 또는 57에 있어서, 상기 환자 베바시주맙 요법의 3회, 4회, 5회, 또는 6회 투여에 난치성인, 방법.
  60. 청구항 56 또는 57에 있어서, 상기 환자 아플리베르셉트 요법의 3회, 4회, 5회, 또는 6회 투여에 난치성인, 방법.
  61. 청구항 56 또는 57에 있어서, 상기 환자 페갑타닙 요법의 3회, 4회, 5회, 또는 6회 투여에 난치성인, 방법.
KR1020167014741A 2013-11-05 2014-11-04 항-vegf darpin으로 눈의 병태를 치료하는 방법 KR20160070164A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361900246P 2013-11-05 2013-11-05
US61/900,246 2013-11-05
US201462016620P 2014-06-24 2014-06-24
US62/016,620 2014-06-24
PCT/US2014/063951 WO2015069668A1 (en) 2013-11-05 2014-11-04 Method of treating conditions of the eye with an anti-vegf darpin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20160070164A true KR20160070164A (ko) 2016-06-17

Family

ID=51947485

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167014741A KR20160070164A (ko) 2013-11-05 2014-11-04 항-vegf darpin으로 눈의 병태를 치료하는 방법

Country Status (14)

Country Link
US (4) US20150126458A1 (ko)
EP (2) EP3065761B1 (ko)
JP (3) JP2016536369A (ko)
KR (1) KR20160070164A (ko)
CN (1) CN105960247A (ko)
AU (2) AU2014346921A1 (ko)
CA (1) CA2927012A1 (ko)
DK (1) DK3065761T3 (ko)
ES (1) ES2773317T3 (ko)
HU (1) HUE047910T2 (ko)
PL (1) PL3065761T3 (ko)
PT (1) PT3065761T (ko)
TW (1) TWI729970B (ko)
WO (1) WO2015069668A1 (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0710645A2 (pt) 2006-04-07 2012-03-20 The Procter & Gamble Company Anticorpos que se ligam à proteína humana tirosina fosfatase beta (hptpbeta) e usos dos mesmos
WO2013056240A1 (en) 2011-10-13 2013-04-18 Aerpio Therapeutics, Inc. Methods for treating vascular leak syndrome and cancer
WO2013169614A1 (en) 2012-05-07 2013-11-14 Allergan, Inc. Method of treating amd in patients refractory to anti-vegf therapy
EP3790532A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High concentration vegf receptor fusion protein containing formulations
CN113164597A (zh) 2018-09-24 2021-07-23 爱尔皮奥制药公司 靶向HPTP-β（VE-PTP）和VEGF的多特异性抗体
WO2020245173A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Molecular Partners Ag Recombinant fap binding proteins and their use
CN116710135A (zh) * 2020-10-07 2023-09-05 6线生物技术公司 用于治疗眼部疾病的方法和试剂
CN114075290B (zh) * 2022-01-20 2022-04-19 南京鼓楼医院 Cd40靶向结合蛋白、其编码核酸以及用途

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0011407B8 (pt) 1999-06-08 2021-05-25 Regeneron Pharma molécula de ácido nucléico quimérica, polipeptídeo de fusão, vetor de expressão, sistema de vetor hospedeiro, e, métodos de produzir um polipeptídeo de fusão
EP2149604A1 (en) 2000-09-08 2010-02-03 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
US7696320B2 (en) 2004-08-24 2010-04-13 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for VEGF and/or EGFR and methods of use therefor
EP1996937A4 (en) 2006-03-06 2009-04-08 Amunix Inc GENETIC PACKS AND USES THEREOF
WO2008097497A2 (en) 2007-02-02 2008-08-14 Adnexus, A Bristol-Myers Squibb R & D Company Vegf pathway blockade
PL2173890T3 (pl) 2007-06-21 2011-07-29 Univ Muenchen Tech Białka czynne biologicznie o zwiększonej stabilności in vivo i (lub) in vitro
NZ592591A (en) * 2008-11-03 2012-04-27 Molecular Partners Ag Binding proteins comprising ankyrin repeast domains that inhibit the vegf-a receptor interaction
AR081361A1 (es) * 2010-04-30 2012-08-29 Molecular Partners Ag Proteinas de union modificadas que inhiben la interaccion de receptor del factor de crecimiento endotelial vascular de glicoproteina a vegf-a
WO2013169614A1 (en) * 2012-05-07 2013-11-14 Allergan, Inc. Method of treating amd in patients refractory to anti-vegf therapy

Also Published As

Publication number Publication date
US20220175881A1 (en) 2022-06-09
CN105960247A (zh) 2016-09-21
PT3065761T (pt) 2020-02-21
US20210008158A1 (en) 2021-01-14
AU2014346921A1 (en) 2016-06-02
US20150126458A1 (en) 2015-05-07
WO2015069668A1 (en) 2015-05-14
TW201609125A (zh) 2016-03-16
TWI729970B (zh) 2021-06-11
JP2016536369A (ja) 2016-11-24
JP2022107628A (ja) 2022-07-22
EP3628324A1 (en) 2020-04-01
DK3065761T3 (da) 2020-02-17
HUE047910T2 (hu) 2020-05-28
EP3065761B1 (en) 2020-01-08
EP3065761A1 (en) 2016-09-14
US20170157207A1 (en) 2017-06-08
PL3065761T3 (pl) 2020-05-18
JP2020169191A (ja) 2020-10-15
ES2773317T3 (es) 2020-07-10
AU2020202968A1 (en) 2020-05-21
CA2927012A1 (en) 2015-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220175881A1 (en) Method of treating conditions of the eye with an anti-vegf darpin
US20220096596A1 (en) Method of treating amd in patients refractory to anti-vegf therapy
US20210069293A1 (en) Modified binding proteins inhibiting the vegf-a receptor interaction
KR101698362B1 (ko) Ｖｅｇｆ－ａ 수용체 상호작용을 억제하는 결합 단백질
AU2014243418A1 (en) Modified binding proteins inhibiting the VEGF-A receptor interaction

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application