TWI729970B - 以抗-vegf darpin治療眼睛病狀之方法 - Google Patents
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Abstract
本文揭示藉由投予包含錨蛋白重複結構域之結合蛋白來治療患有滲出性年齡相關性黃斑變性及其他視網膜病状之患者的方法,其中該結合蛋白首次以2個至5個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天,且然後採用更長之劑量間之間隔以額外劑量投予。
Description
本申請案主張於2014年6月24日提出申請之第62/016,620號美國臨時申請案及於2013年11月5日提出申請之第61/900,246號美國臨時申請案之權益。此兩個申請案之全部內容以引用方式併入本文中。
本文揭示藉由投予包含錨蛋白重複結構域之結合蛋白來治療患有滲出性年齡相關性黃斑變性及其他視網膜病状之患者的方法,其中該結合蛋白首次以2個至5個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天,且然後採用更長之劑量間之間隔以額外劑量投予。
視網膜係襯於眼睛後部之內表面之神經組織薄層。視網膜由各種神經元組成,其中最熟悉的係負責視覺之感光體:視桿,其對光更加敏感;及視錐,其對色彩更加敏感。視錐高度集中於黃斑部(視網膜中央之小部分)中。正是眼睛之此部分負責中央高敏度視覺。
在發達國家,視網膜且具體而言黃斑部之疾病係超過50歲年齡之人之視覺障礙及失明之主要原因。此等疾病包括年齡相關性黃斑部變性、近視性黃斑部變性、糖尿病性黃斑水腫、糖尿病性視網膜病變、視網膜分支靜脈阻塞及視網膜中央靜脈阻塞。黃斑部變性亦可發生在兒童中。
此等疾病中之某些可用抑制稱作血管內皮生長因數A(VEGF-A)之蛋白之藥劑來治療。VEGF-A刺激血管生長。在年齡相關性黃斑部變性之滲出性(或血管)形式中,異常高水準之VEGF刺激新血管生長至黃斑部中,從而導致對感光體之不可逆損壞;另外,此等新形成之血管向視網膜中滲漏血液及蛋白質,導致在先前由感光體佔用區域中形成瘢痕。
抑制VEGF-A阻斷此等新血管之形成,且阻斷血液及蛋白質之滲漏,由此維持視力。
目前用於抑制眼睛中VEGF-A之藥物只有幾種:貝伐單抗(bevacizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、阿柏西普(aflibercept)及培加尼布(pegaptanib)。蘭尼單抗係抑制VEGF-A之抗體片段;貝伐單抗係同樣抑制VEGF-A之人類化單株抗體,且與蘭尼單抗源自相同親代抗體。阿柏西普係包含與人類IgG1之Fc部分融合之人類VEGF受體1及2之胞外結構域的重組融合蛋白。培加尼布不如蘭尼單抗、貝伐單抗或阿柏西普有效且因此不經常使用。
事實上,僅有兩種療法可用於抑制眼睛中之VEGF:貝伐單抗/蘭尼單抗及阿柏西普。因此,業內需要能夠治療視網膜疾病且比可用之少數療法更有效或提供不同於該等療法之益處的療法。
本發明者已發現,本發明之方法可用於治療滲出性年齡相關性黃斑部變性及其他視網膜病状,其對患者具有令人驚訝之益處。在一個實施例中,該方法包括遞送頻繁劑量之重組結合蛋白,隨後遞送不太頻繁劑量。
因此,在本發明之一個實施例中,向患者投予約0.25mg至約4mg之結合蛋白,且然後在25天至35天後投予相同劑量;然後可視情況以相同劑量間之間隔投予高達三倍多之結合蛋白。在此等初始頻繁劑量之後,繼續投予結合蛋白,給予至少一個額外劑量,但各額外劑量間之間隔為50天至115天。只要患者需要,治療便以此方式繼續,以50天至115天間隔投予結合蛋白。
此方法可用於改善患有視網膜疾病之患者之視敏度以減少視網膜中之異常流體且減小異常視網膜厚度。
下文更詳細描述此等及其他實施例。
圖1顯示以下患者在基線時及在第1週、第4週、第8週、第12週、第16週及第20週時之最佳矯正視敏度(「BCVA」):在第1天時及在第4週及第8週時接受1mg及2mg根據本發明之結合蛋白(阿比西帕(abicipar))之患有滲出性年齡相關性黃斑部變性(「AMD」)之患者;以及在第1天時及在第4週、第8週、第12週及第16週時接受0.5mg蘭尼單抗之患者。圖2至圖7亦顯示來自以此方式治療之患者之資料。
圖2顯示上文所描述之三個患者群組中具有BCVA之15個或更多個字母改善之患者之比例。2.0mg阿比西帕係針對每週所顯示之三個條棒之集合中之左邊條棒;1.0mg阿比西帕係中間條棒;且0.5mg蘭尼單抗係右邊條棒。
圖3顯示達成按BCVA損失少於15個字母評定之穩定視力之患者之比例。2.0mg阿比西帕係針對每週所顯示之三個條棒之集合中之左邊條棒;1.0mg阿比西帕係中間條棒;且0.5mg蘭尼單抗係右邊條棒。
圖4顯示接受2.0mg阿比西帕、1.0mg阿比西帕及0.5mg蘭尼單抗之患者之平均中央視網膜厚度。
圖5顯示視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體(全部三個室)在治療後已解決之患者之比例。2.0mg阿比西帕係針對每週所顯示之三個條棒之集合中之左邊條棒;1.0mg阿比西帕係中間條棒;且0.5mg蘭尼單抗係右邊條棒。
圖6顯示基線視力(斯內倫(Snellen))為20/320+1且在基線(第1天)時及在第4週及第8週時以2mg阿比西帕治療之88歲年齡之高加索人種男性之視網膜的影像。所顯示之影像係在基線時(圖6A)及此後每四週(圖6B至圖6G)。
圖7顯示基線視力(斯內倫)為20/63+1且在基線(第1天)時及在第4週及第8週時以2mg阿比西帕治療之75歲年齡之西班牙裔女性之視網膜的影像。所顯示之影像係在基線時(圖7A)及此後每四週(圖7B至圖7G)。
圖8及圖9顯示在研究中175名患有滲出性AMD之患者之視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體在治療後已解決之患者之比例,其中在第1天時且然後在第16週時或若患者滿足某些再治療準則可更早向患者給予4.2mg阿比西帕、3.0mg阿比西帕及0.5mg蘭尼單抗。圖8顯示全部三個室中之流體已解決之患者之比例;4.2mg阿比西帕係針對每週所顯示之三個條棒之集合中之左邊條棒;3.0mg阿比西帕係中間條棒;且蘭尼單抗係右邊條棒。圖9顯示此等室中之一者、兩者、全部三者或無一者中之流體已解決之患者之比例。
重組結合蛋白
本發明之方法投予包含包括經設計錨蛋白重複結構域之結合結構域的結合蛋白。此等結合蛋白及其含有之經設計錨蛋白重複結構域之實例描述於第7,417,130號美國專利、第8,110,653號美國專利及第2011/0207668號美國專利申請公開案中,全部三個申請案之全部內容皆以引用方式併入本文中。
術語「重複蛋白」係指包含一或多個重複結構域之蛋白。在一個實施例中,重複蛋白中之每一者包含至多四個重複結構域。在另一實施例中,重複蛋白中之每一者包含至多兩個重複結構域。在另一實施例中,重複蛋白中之每一者僅包含一個重複結構域。重複蛋白亦可包含額外非重複蛋白結構域、多肽標籤及/或多肽接頭。
術語「重複結構域」係指包含作為結構單元之兩個或更多個連續重複單元(模組)之蛋白結構域,其中結構單元具有相同褶疊,且緊密堆積以形成(例如)具有節點疏水核心(joint hydrophobic core)之超螺旋結構。
術語「經設計重複蛋白」及「經設計重複結構域」分別係指作為第7,417,130號美國專利及第8,110,653號美國專利中所闡明程序之結
果而獲得之重複蛋白或重複結構域。經設計重複蛋白及經設計重複結構域係合成的且並非來自自然界。其分別係藉由對應經設計之核酸表現獲得之人造蛋白或結構域。
哺乳動物VEGF家族由稱為VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D(亦稱作FIGF)及胎盤源性生長因數(PIGF,亦稱作PGF)之五種糖蛋白組成。已顯示VEGF-A係抗血管生成療法之有效靶(Ellis,L.M.及Hicklin,D.J.,Nature Rev.Cancer 8,579-591,2008)。VEGF-A配體結合並活化三種結構相似之III型受體酪胺酸激酶,所指為VEGFR-1(亦稱作FLT1)、VEGFR-2(亦稱作KDR)及VEGFR-3(亦稱作FLT4)。VEGF配體對此等酪胺酸激酶受體中之每一者具有獨特結合特異性,此促成其功能多樣性。回應於配體結合,VEGFR酪胺酸激酶活化不同下游信號傳導路徑之網路。VEGFR-1及VEGFR-2主要發現於血管內皮上,而VEGFR-3大多發現於淋巴內皮上。此等受體皆具有胞外結構域、單個跨膜區及間雜有激酶插入結構域之共有酪胺酸激酶序列。最近顯示神經纖毛蛋白(NRP-1)(其最初被識別為神經元導向介體之信號素/腦衰蛋白家族之受體)顯示充當VEGF-A之同種型特異性受體。
已知VEGF-A之各種同種型係藉由自VEGF-A基因內之八個外顯子交替剪接產生。所有同種型均含有外顯子1至5及末端外顯子(外顯子8)。可包括或不包括編碼肝素結合結構域之外顯子6及7。此產生根據其胺基酸編號命名之蛋白家族:VEGF-A165、VEGF-A121、VEGF-A189等。然而,外顯子8在核苷酸序列中含有兩個3'剪接位點,該等3'剪接位點可由細胞用以產生具有相同長度、但不同C-端胺基酸序列之兩個同種型家族(Varey,A.H.R.等人,British J.Cancer 98,1366-1379,2008)。藉由使用外顯子8中之最近端序列(導致包含外顯子8a)產生促血管生成同種型家族VEGF-Axxx(「xxx」表示成熟蛋白之胺基酸編號)。最近描述之抗血管生成VEGF-Axxxb同種型係藉由使用進一步沿著基因距近端剪接位點66bp之遠端剪接位點產生的。此導致剪除外顯子8a及產生編碼VEGF-Axxxb家族之mRNA序列。VEGF-A165係主要的促血管生成同種型且通常在多種人類實體腫瘤中過表現。VEGF-A165b係首個被識別出之外顯子8b編碼之同種型
且顯示經顯示具有抗血管生成效應(Varey等人,在上述引文中;Konopatskaya,O.等人,Molecular Vision 12,626-632,2006)。其係VEGF-A之內源性抑制形式,此降低VEGF-A誘導之內皮細胞之增殖及遷移。儘管其可結合VEGFR-2,但VEGF-A165b結合不產生受體磷酸化或下游信號傳導路徑之活化。
術語「蛋白」係指多肽,其中多肽之至少部分藉由在其多肽鏈內及/或之間形成二級、三級或四級結構而具有或能夠獲取限定三維排列。若蛋白包含兩個或更多個多肽,則個別多肽鏈可非共價地連接或例如藉由兩個多肽之間的二硫鍵共價地連接。個別地具有或能夠藉由形成二級或三級結構獲取限定三維排列之蛋白之一部分稱作「蛋白結構域」。此等蛋白結構域為熟習此項技術之從業者熟知。
如重組蛋白、重組蛋白結構域及諸如此類中所使用之術語「重組」意謂多肽係藉由使用熟習相關技術之從業者熟知之重組DNA技術產生。例如,編碼多肽之重組DNA分子(例如藉由基因合成產生)可選殖入細菌表現質粒(例如pQE30,Qiagen)。當此經構建重組表現質粒插入細菌(例如,大腸桿菌(E.coli))中時,此細菌會產生由此重組DNA編碼之多肽。對應產生之多肽稱作重組多肽。
術語「多肽標籤」係指連接至多肽/蛋白質之胺基酸序列,其中胺基酸序列可用於多肽/蛋白質之純化、檢測或靶向,或其中胺基酸序列改善多肽/蛋白質之物理化學行為,或其中胺基酸序列具有效應子功能。結合蛋白之個別多肽標籤、部分及/或結構域可直接或經由多肽接頭彼此連接。此等多肽標籤皆在此項技術中熟知且為熟習此項技術者完全可獲得。多肽標籤之實例係允許檢測多肽/蛋白質之小多肽序列,例如,His、myc、FLAG或Strep-標籤或諸如酶(例如,如鹼性磷酸酶之酶)之部分,或可用於靶向之部分(諸如免疫球蛋白或其片段)及/或用作效應子分子之部分。
術語「多肽接頭」係指能夠連接(例如)兩個蛋白結構域、多肽標籤與蛋白結構域、蛋白結構域與非多肽部分(諸如聚乙二醇或兩個序列標籤)之胺基酸序列。此等額外結構域、標籤、非多肽部分及接頭為熟習此項技術者已知。實例之列表提供於第7,417,130號美國專利及第8,110,653
號美國專利中。該等接頭之實例係各種長度之甘胺酸-絲胺酸接頭及脯胺酸-蘇胺酸接頭。在一個實施例中,接頭具有介於2個與24個胺基酸之間的長度;在另一實施例中,接頭具有介於2個與16個胺基酸之間的長度。
術語「多肽」係關於由經由肽鍵連接之多個(即兩個或更多個)胺基酸之一或多條鏈組成之分子。在一個實施例中,多肽由經由肽鍵連接之多於八個胺基酸組成。
術語「聚合物部分」係指蛋白性聚合物部分或者非蛋白性聚合物部分。在一個實施例中,「蛋白性聚合物部分」係如下之多肽:當以約0.1mM之濃度在室溫下於PBS中儲存一個月時不形成穩定三級結構,同時不形成超過10%(或不超過5%、不超過2%、不超過1%及不超過任何可檢測量,如藉由尺寸排除層析法(SEC)測定)之寡聚物或聚集體。當使用球形蛋白作為SEC之分子量標準時,此等蛋白性聚合物部分以高於其有效分子量之表觀分子量在SEC中運行。在一個實施例中,藉由SEC測定之蛋白性聚合物部分之表觀分子量係高於由其胺基酸序列計算之其有效分子量之1.5x、2x或2.5x。在一個實施例中,藉由SEC測定之非蛋白性聚合物部分之表觀分子量係高於由其分子組成計算之其有效分子量之2x、4x或8x。在一個實施例中,蛋白性聚合物部分超過50%、70%或甚至90%之胺基酸在室溫下在PBS中在約0.1mM之濃度下不形成穩定二級結構,如藉由圓二色性(CD)量測所測定。在一個實施例中,蛋白性聚合物顯示無規捲曲構象之典型近UV CD譜。此等CD分析為熟習此項技術者熟知。亦可使用包含超過50個、100個、200個、300個、400個、500個、600個、700個或800個胺基酸之蛋白性聚合物部分。
蛋白性聚合物部分之實例係XTEN®(Amunix之注冊商標;WO 07/103515)多肽,或包含脯胺酸、丙胺酸及絲胺酸殘基之多肽,如WO 08/155134中所描述。此等蛋白性聚合物部分可藉由使用標準DNA選殖技術、隨後使用其標準表現及純化產生基因融合多肽來共價連接至(例如)本發明之結合結構域。包含結合VEGF-Axxx之重複結構域及此一蛋白性聚合物部分之結合蛋白之實例顯示於SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:4中。SEQ ID NO:1之1至159位胺基酸對應於重複結構域且SEQ ID NO:1之161至1 O25
位胺基酸對應於蛋白性聚合物部分。SEQ ID NO:4之1至126位胺基酸對應於重複結構域且SEQ ID NO:4之131至640位胺基酸對應於蛋白性聚合物部分。
本發明之聚合物部分之分子量可變化很大(即自約1kDa至約150kDa)。在一個實施例中,聚合物部分具有至少2kDa、5kDa、10kDa、20kDa、30kDa、50kDa、70kDa或100kDa之分子量。
在一個實施例中,聚合物部分藉由多肽接頭連接至結合結構域。此等多肽接頭之實例係SEQ ID NO:8及SEQ ID NO:9之1至8位胺基酸。
非蛋白性聚合物部分之實例係羥乙基澱粉(HES)、聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯。術語「PEG化」意指PEG部分共價連接至(例如)本發明之多肽。可用於結合非蛋白性聚合物部分之在重複結構域與C-端Cys殘基之間含有多肽接頭之重複蛋白的實例係SEQ ID NO:2、3、5、6及7。在一些實施例中,若使用PEG,則其可為直線型或者支鏈排列。
在特定實施例中,PEG部分或任何其他非蛋白性聚合物可(例如)經由馬來醯亞胺接頭偶聯至半胱胺酸巰基,其中半胱胺酸經由肽接頭偶聯至如本文中所述結合結構域(例如SEQ ID NO:3)之N-端或C-端。
術語「結合蛋白」係指包含一或多個結合結構域且在一個實施例中一或多個聚合物部分之蛋白,如下文進一步闡明。在一個實施例中,結合蛋白包含至多四個結合結構域。在一個實施例中,結合蛋白包含至多兩個結合結構域。在另一實施例中,結合蛋白僅具有一個結合結構域。此外,任何此類結合蛋白可包含並非結合結構域、多聚化部分、多肽標籤、多肽接頭及/或單個Cys殘基之額外蛋白結構域。多聚化部分之實例係免疫球蛋白重鏈恆定區(其配對以提供官能免疫球蛋白Fc結構域)以及白胺酸拉鏈或包含在兩個此等多肽之間形成分子間二硫鍵之游離巰基之多肽。單個Cys殘基可用於其他部分與多肽共軛,例如藉由使用熟習此項技術者熟知之用馬來醯亞胺化學品。
在一個實施例中,結合蛋白包含至多四個聚合物部分。在另一實施例中,結合蛋白包含至多兩個聚合物部分。在另一實施例中,結合蛋白僅具有一個聚合物部分。
在一個實施例中,當使用球形蛋白作為分子量標準藉由SEC在室溫下以0.1mM濃度在PBS中分析時結合蛋白具有約10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、85kDa、90kDa、95kDa、100kDa、200kDa、300kDa、400kDa、500kDa、600kDa、700kDa、800kDa、900kDa或1,000kDa之表觀分子量。在一個實施例中,結合蛋白具有34kDa之表觀分子量。
熟習此項技術者將瞭解本文中所使用之各種程度術語之意義。例如,如本文中在提及量之上下文中所使用,術語「約」表示彼等接近於且包括所述量並且仍然執行期望功能或達成期望結果的量,例如「約1mg」包括1mg及彼等適度地接近於1mg且仍然執行期望功能或達成期望結果的量。
術語「結合結構域」意指展示與蛋白支架相同之「褶疊」(三維排列)且具有如下文限定之預定性質之蛋白結構域。此種結合結構域可藉由合理或最常見之組合蛋白工程技術(此項技術中已知之技能)獲得(Skerra,2000,在上述引文中;Binz等人,2005,在上述引文中)。例如,具有預定性質之結合結構域可藉由包括以下步驟之方法獲得:(a)提供展示與下文進一步定義之蛋白支架相同褶疊之蛋白結構域之多樣集合;及(b)篩選多樣集合及/或自多樣集合選擇以獲得具有預定性質之至少一種蛋白結構域。蛋白結構域之多樣集合可根據所使用之篩選及/或選擇系統藉由數種方法提供,且可包括使用熟習此項技術者熟知之方法,諸如噬菌體展示或核糖體展示。
術語「蛋白支架」意指具有其中高度耐受胺基酸插入、取代或缺失之暴露表面區域之蛋白。可用於產生本發明之結合結構域之蛋白支架之實例係抗體或其片段,諸如單鏈Fv或Fab片段、來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)之蛋白A、來自大菜粉蝶(Pieris brassicae)之膽色素結合蛋白或其他脂質運載蛋白、錨蛋白重複蛋白或其他重複蛋白及人纖連蛋
白。蛋白支架為熟習此項技術者已知(Binz等人,2005,在上述引文中;Binz等人,2004,在上述引文中)。
術語「預定性質」係指諸如結合靶、阻斷靶、活化靶介導之反應、酶活性及相關其他性質之性質。端視期望性質之類型,熟習此項技術者將能夠識別用於進行具有期望性質之結合結構域之篩選及/或選擇之格式及必需步驟。較佳地,預定性質係結合靶。
在一個實施例中,本發明之結合結構域不包括如存在於抗體中之免疫球蛋白褶疊及/或III型纖連蛋白結構域。免疫球蛋白褶疊係常見的所有β蛋白褶疊,由約7個排列在兩個β片層中之反向平行β鏈之2層夾心組成。免疫球蛋白褶疊為熟習此項技術者熟知。例如,包含免疫球蛋白褶疊之該等結合結構域描述於WO 07/080392或WO 08/097497中。
在另一實施例中,本發明之結合結構域不包括如見於VEGFR-1或VEGFR-2中之免疫球蛋白樣結構域。該等結合結構域描述於WO 00/075319中。
在一個實施例中,結合結構域包括70個胺基酸至300個胺基酸;在另一實施例中,結合包括100個胺基酸至200個胺基酸。
在一個實施例中,結合結構域缺乏游離Cys殘基。游離Cys殘基不參與二硫鍵之形成。在另一實施例中,結合結構域不含任何Cys殘基。
在一個實施例中,本發明之結合蛋白可在真核或原核細胞(諸如細菌細胞)中或藉由使用無細胞活體外表現系統進行表現。
術語「結構單元」係指藉由沿多肽鏈彼此靠近之兩個或更多個二級結構區段之間的三維相互作用形成之局部有序之多肽部分。此結構單元展示結構基序。術語「結構基序」係指存在於至少一個結構單元中之二級結構元件之三維排列。結構基序為熟習此項技術者熟知。單獨的結構單元不能夠獲得限定之三維排列;然而,其連續排列(例如作為重複結構域中之重複模組)導致相鄰單元之相互穩定從而產生超螺旋結構。
術語「重複單元」係指包括一或多個天然存在重複蛋白之重複序列基序之胺基酸序列,其中「重複單元」以多個拷貝出現,且其展現
所有決定蛋白之褶疊之基序共同的限定褶疊拓撲結構。該等重複單元之實例係犰狳(armadillo)重複單元、富白胺酸重複單元、錨蛋白重複單元、三角形四肽(tetratricopeptide)重複單元、HEAT重複單元及富白胺酸變體重複單元。含有兩個或更多個此類重複單元之天然存在蛋白稱為「天然存在重複蛋白」。在相互比較時,重複蛋白之個別重複單元之胺基酸序列可具有大量突變、取代、添加及/或缺失,同時仍然實質上保留重複單元之一般模式或基序。
術語「重複序列基序」係指自一或多個重複單元推導出之胺基酸序列。在一個實施例中,重複單元係來自對相同靶具有結合特異性之重複結構域。
術語「褶疊式拓撲結構」係指重複單元之三級結構。褶疊式拓撲結構將由形成至少部分o螺旋或β片層之胺基酸之序列段或形成線性多肽或環之胺基酸序列段或a-螺旋、β片層及/或線性多肽/環之任何組合來決定。
術語「連續」係指排列,其中重複單元或重複模組係串聯排列。在經設計重複蛋白中,存在至少2個重複單元,但通常約2個重複單元至6個重複單元,但亦可存在6個或更多個重複單元或20個或更多個重複單元。在大多數情形中,重複單元將展現高度序列同一性(在對應位置處具相同胺基酸殘基)或序列相似性(胺基酸殘基不同,但具有相似物理化學性質),且一些胺基酸殘基可係於天然存在蛋白中發現之不同重複單元中高度保守之關鍵殘基。然而,只要維持共同的褶疊式拓撲結構,藉由在於天然存在蛋白中發現之不同重複單元之間的胺基酸插入及/或缺失及/或取代之高度序列可變性便將係可能的。
藉由物理化學手段(諸如X-射線結晶學、NMR或CD光譜學)直接確定重複蛋白之褶疊式拓撲結構之方法為熟習此項技術之從業者熟知。在生物資訊學領域中充分建立了用於識別及確定重複單元或重複序列基序或用於識別包括該等重複單元或基序之相關蛋白家族之方法,諸如同源性檢索(BLAST等)且其為此項技術之從業者熟知。精整初始重複序列基序之步驟可包括迭代過程。
術語「重複模組」係指最初源自天然存在重複蛋白之重複單元之經設計重複結構域之重複胺基酸序列。包含於重複結構域中之每一重複模組係源自天然存在重複蛋白之家族或子家族(例如,犰狳重複蛋白或錨蛋白重複蛋白之家族)之一或多個重複單元。
「重複模組」可包括具有存在於對應重複模組之所有拷貝中之胺基酸殘基之位置(「固定位置」)及具有不同或「隨機化」胺基酸殘基之位置(「隨機化位置」)。
術語「加帽模組」係指與重複結構域之N-端或C-端重複模組融合之多肽,其中加帽模組與重複模組形成緊密三級相互作用,藉此提供帽,其將重複模組之疏水核心在不與連續重複模組接觸之側部遮罩與溶劑隔開。N-端及/或C-端加帽模組可係或可源自與重複單元相鄰之加帽單元或其他在天然存在重複蛋白中發現之結構域。術語「加帽單元」係指天然存在的褶疊多肽,其中該多肽限定在N-端或C-端與重複單元融合之特定結構單元,其中多肽與重複單元形成緊密三級相互作用,藉此提供帽,其將重複單元之疏水核心在一側與溶劑隔開。此等加帽單元可具有與重複序列基序相似之序列。加帽模組及加帽重複描述於第7,417,130號美國專利及第8,110,653號美國專利中。例如,SEQ ID NO:2之N-端加帽模組由1至32位胺基酸編碼。亦較佳為在5位具有甘胺酸或天冬胺酸鹽殘基之此N-端加帽模組。
術語「靶」係指諸如核酸分子、多肽或蛋白、碳水化合物或任何其他天然存在分子之個別分子,包括該別分子之任一部分,或該等分子中之兩者或更多者之複合物。靶可係全細胞或組織樣品,或其可係任何非天然分子或部分。較佳地,靶係天然存在或非天然多肽或含有化學修飾之多肽,例如藉由天然或非天然磷酸化、乙醯化或甲基化修飾。在一些實施例中,靶係VEGF-Axxx或VEGFR-2。
術語「共有序列」係指胺基酸序列,其中共有序列係藉由多個重複單元之結構及/或序列比對來獲得。使用兩個或更多個結構及/或序列經比對之重複單元且在比對時允許空位,能夠確定每一位置處之最頻繁胺基酸殘基。共有序列係包含在每一位置處最頻繁出現之胺基酸之序列。在
兩個或更多個胺基酸超過平均數出現在單個位置位置之情況下,共有序列可包含彼等胺基酸之子集。該兩個或更多個重複單元可取自包含於單種重複蛋白中之重複單元,或取自兩種或更多種不同的重複蛋白。
共有序列及其確定方法為熟習此項技術者熟知。
「共有胺基酸殘基」係於共有序列中之某一位置處出現之胺基酸。若兩種或更多種(例如三種、四種或五種)胺基酸殘基以相似概率出現在該兩個或更多個重複單元中,則共有胺基酸可為最頻繁出現之胺基酸中之一者或該兩種或更多種胺基酸殘基之組合。
在一個實施例中,亦可使用非天然存在結合蛋白或結合結構域。
術語「非天然存在」意指合成的或並非來自自然界(例如,人工製造的)。術語「非天然存在結合蛋白」或「非天然存在結合結構域」意指結合蛋白或結合結構域係合成的(即藉由自胺基酸化學合成產生的)或重組的且並非來自自然界。「非天然存在結合蛋白」或「非天然存在結合結構域」係分別藉由對應經設計核酸表現獲得之人造蛋白或結構域。較佳地,表現在真核或細菌細胞中進行,或藉由使用無細胞活體外表現系統進行。此外,該術語意謂結合蛋白或結合結構域之序列並非作為非人工序列條目存在於序列資料庫中,例如,GenBank、EMBL-Bank或Swiss-Prot中。此等資料庫及其他相似序列資料庫為熟習此項技術者熟知。
結合結構域可以VEGF-Axxx與VEGFR-2之間的表觀離解常數(Kd)增大超過102倍之方式藉由結合VEGF-Axxx或藉由結合VEGFR-2來抑制VEGF-Axxx結合VEGFR-2。在其他實施例中,離解常數增大超過103倍、超過104倍、超過105倍或超過106倍。在一個實施例中,結合結構域與VEGF-Axxx或VEGFR-2相互作用之Kd低於107M、低於108M或低於109M、低於1010M或低於1011M。用以確定蛋白-蛋白相互作用之離解常數之方法(諸如基於表面電漿共振(SPR)之技術)為熟習此項技術者熟知。
結合結構域結合VEGF-Axxx。在一個實施例中,結合結構域結合人VEGF-A165。在其他實施例中,其可結合其他VEGF-A同種型。
在一個實施例中,結合蛋白及/或結合結構域在37℃下在含有100mM二硫蘇糖醇(DTT)之PBS中培育1小時或10小時後未失去其天然三維結構。如本文中所使用,「PBS」意指含有137mM NaCl、10mM磷酸鹽及2.7mM KCl且pH為7.4的磷酸鹽緩衝水溶液。
在一個實施例中,結合蛋白包含抑制VEGF-Axxx結合VEGFR-2且具有如上文所定義之中點變性溫度及非聚集性質的結合結構域,其中結合蛋白以低於100nM之IC50值抑制HUVEC球體之發芽(sprouting)。
術語「HUVEC」意指人臍靜脈內皮細胞,其可自正常人臍靜脈分離得到且對VEGF-A刺激起反應。
用以量測HUVEC球體之發芽之分析為熟習此項技術者熟知。
IC50值係諸如結合蛋白或結合結構域之物質對經實驗確定之參數(諸如HUVEC球體之發芽)之活體外50%抑制所需之濃度。熟習此項技術者可容易地確定IC5o值(Korff T.及Augustin H.G.,J.Cell Biol.143(5),1341-52,1998)。
在一個實施例中,結合蛋白及/或結合結構域以低於10nM、低於1nM、低於0.1nM或低於0.05nM之IC50值抑制HUVEC球體之發芽。
在另一實施例中,可使用以低於蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普或培加尼布之對應IC50值之IC50值抑制HUVEC球體之發芽的單體結合蛋白及/或結合結構域。
在一個實施例中,結合結構域與VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PIGF或PDGF相互作用之Kd高於1nM、高於10nM、高於102nM、高於103nM或高於104nM。
在一個實施例中,VEGF-Axxx係狗VEGF-A 164或者猴VEGF-A 165或人VEGF-A165,且VEGF-Axxxb係狗VEGF-A 164b或者猴VEGF-A165b或人VEGF-A165b。
另一實施例係包含結合結構域之重組結合蛋白,其中該結合結構域抑制VEGF-Axxx結合VEGFR-2且其中該結合結構域係重複結構域
或經設計重複結構域。此重複結構域可包含將參與結合VEGF-Axxx之一個、兩個、三個或更多個內部重複模組。在一個實施例中,此種重複結構域包括N-端加帽模組、兩個至四個內部重複模組及C-端加帽模組。在一個實施例中,結合結構域係錨蛋白重複結構域或經設計錨蛋白重複結構域。
在一個實施例中,該結合蛋白包含與聚乙二醇(PEG)部分共軛之如本文所述結合結構域。在一個實施例中,該PEG部分係偶聯至該結合結構域之單個Cys殘基。該Cys殘基可在該結合結構域的C-末端經遺傳引入。該PEG部分則可藉由化學手段(例如,藉由使用熟習此項技術者熟知之馬來醯亞胺化學品)偶聯。
另一實施例係如上文所定義之重組結合蛋白,其包含具有對VEGF-Axxx之結合特異性之至少一個重複結構域,其中該重複結構域與選自SEQ ID NO:1至7之重複結構域之群的重複結構域競爭結合VEGF-Axxx。在一個實施例中,該重複結構域與SEQ ID NO:1或3之重複結構域競爭結合VEGF-Axxx。在另一實施例中,該重複結構域與SEQ ID NO:3之重複結構域競爭結合VEGF-Axxx。
術語「競爭結合」意謂本發明之兩種不同結合結構域不能同時結合同一靶,而二者能夠個別地結合同一靶。因此,該兩種結合結構域競爭結合該靶。確定兩種結合結構域是否競爭結合靶之方法(諸如競爭ELISA量測法或競爭SPR量測法(例如藉由使用購自BioRad之Proteon儀器))為本領域從業者熟知。
與所選重複蛋白競爭結合VEGF-Axxx之重組結合蛋白可藉由熟習此項技術者熟知之方法鑒定,諸如競爭酶聯免疫吸附分析(ELISA)。
另一實施例係包含具有對VEGF-Axxx之結合特異性之重複結構域之重組結合蛋白,該重複結構域選自由SEQ ID NO:1至7之重複結構域組成之群。在一個實施例中,該重複結構域係選自SEQ ID NO:2或3之重複結構域。在另一實施例中,該重複結構域係SEQ ID NO:3之重複結構域。
在一個實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序
1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVNA(SEQ ID NO:10)
其中1、2、3、4、5、6及7彼此獨立地表示選自A、D、E、F、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W及Y之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23GWTPLHLAA45GHLEIVEVLLK6GADVNA(SEQ ID NO:11)
其中1表示選自由F、T、N、R、V、A、I、K、Q、S及Y組成之群之胺基酸殘基;在一個實施例中,1為F、T、N、R或V;且在另一實施例中,1為F或T;2表示選自由W、Y、H及F組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為W、Y或H;3表示選自由M、I、F及V組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,3為M或I;4表示選自由H、A、K、G、L、M、N、T、V、W及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,4為H、A或K;5表示選自由E、Y、F、V、H、I、L、N及R組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,5為E、Y、F、V或H;在另一實施例中,5為E、Y、F或V;且6表示選自由A、N、Y、H及R組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVN8(SEQ ID NO:12)
其中1表示選自由T、E、A、D、F、K、N、Q、R、S、W及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,1為T或E;2表示選自由V、F、Y、A、H、I、K、R、T及W組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為V、F或Y;3表示選自由S、A、N、F及M組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,3為S、A或N;在另一實施例中,3為S或A;4表示選自由Y、F、S及W組成之群之胺基酸殘基;5表示選自由A、S、L及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,5為A或S;6表示選自由D、N、M、A、I、K及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,6為D、N或M;在另一實施例中,6為D或N;7表示選自由A、Y、H、N及D組成之群之胺基酸殘基;且8表示胺基酸殘基T或A。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23GWTPLHL4ADLG5LEIVEVLLK6GADVN7(SEQ ID NO:13)
其中1表示選自由K、T及Y組成之群之胺基酸殘基;2表示胺基酸殘基N或M;3表示胺基酸殘基T或F;4表示胺基酸殘基S或A;5表示胺基酸殘基H或R;6表示選自由A、Y、H及N組成之群之胺基酸殘基;且7表示胺基酸殘基A或T。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPLHLAA56GH7EIVEVLLK8GADVNA(SEQ ID NO:14)
其中1表示選自由A、N、R、V、Y、E、H、I、K、L、Q、S及T組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,1為A、N、R、V或Y;在另一實施例中,1為A或R;2表示選自由S、A、N、R、D、F、L、P、T及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為S、A、N或R;3表示選自由T、V、S、A、L及F組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,3為T、V、S、A或L;在另一實施例中,3為T、V或S;4表示選自由W、F及H組成之群之胺基酸殘基;5表示選自由P、I、A、L、S、T、V及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,5為P或I;6表示選自由W、F、I、L、T及V組成之群之胺基酸殘基;7表示胺基酸殘基L或P;且8表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVNA(SEQ ID NO:15)
其中1表示選自由H、Q、A、K、R、D、I、L、M、N、V及Y組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,1為H、Q、A、K或R;在另一實施例中,1為A或R;2表示選自由Y、F及H組成之群之胺基酸殘基;3表示選自由Q、F及T組成之群之胺基酸殘基;4表示選自由W、M、G、H、N及T組成之群之胺基酸殘基;較佳為W及M;5表示選自由T、A、M、L及V組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,5為T、A或M;6
表示選自由I、L、V、D及T組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,6為I、L或V;且7表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23GWTPLHLAA45GHLEIVEVLLK6GADVNA(SEQ ID NO:16)
其中1表示選自由K、M、N、R及V組成之群之胺基酸殘基;2表示選自由Y、H、M及V組成之群之胺基酸殘基;3表示選自由F、L、M及V組成之群之胺基酸殘基;4表示選自由R、H、V、A、K及N組成之群之胺基酸殘基;較佳為R、H、V及A;5表示選自由F、D、H、T、Y、M及K組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,5為F、D、H、T或Y;且6表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPLHLAA56GHLEIVEVLLK7GADVN8(SEQ ID NO:17)
其中1表示選自由T、A、H、I、N及S組成之群之胺基酸殘基;2表示選自由F、I、Q、R、V及N組成之群之胺基酸殘基;3表示選自由A、G、N、Q及V組成之群之胺基酸殘基;4表示胺基酸殘基W或Y;5表示選自由A、S、T及M組成之群之胺基酸殘基;6表示選自由N、V、S、F、M及W組成之群之胺基酸殘基;7表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基;且8表示胺基酸殘基T或A。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPLHL5A67GHLEIVEVLLK8GADVNA(SEQ ID NO:18)
其中1表示選自由K、A、V及N組成之群之胺基酸殘基;2表示選自由N、I及Y組成之群之胺基酸殘基;3表示選自由T、F、Y及W組成之群之胺基酸殘基;4表示選自由W、D及Y組成之群之胺基酸殘基;5表示胺基酸殘基S或A;6表示選自由D、I及M組成之群之胺基酸殘基;7表示選自由L、T及Y組成之群之胺基酸殘基;且8表示選自由A、H、Y及N組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1DFK2DTPLHLAA34GH5EIVEVLLK6GADVNA(SEQ ID NO:19)
其中1表示選自由L、S及T組成之群之胺基酸殘基;2表示選自由G、S及C組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為G或S;3表示胺基酸殘基S或A;4表示選自由Q、S、M及N組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,4為Q或S;5表示選自由L、M及Q組成之群之胺基酸殘基;且6表示選自由A、H、N、Y及D組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D2L34TPLHLA567GHLEIVEVLLK8GADVNA(SEQ ID NO:20)
其中1表示選自由Y、H、F、I、L及W組成之群之胺基酸殘基;較佳為Y及H;2表示選自由M、D、I、L、V組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為M或D;3表示選自由G、S及V組成之群之胺基酸殘基;4表示胺基酸殘基W或F;5表示選自由A、G及T組成之群之胺基酸殘基;6表示胺基酸殘基D或W;7表示胺基酸殘基L或F;且8表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23G4TPL5LAA67GHLEIVEVLLK8GADVNA(SEQ ID NO:21)
其中1表示選自由K、S、I、N、T及V組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,1為K或S;2表示選自由K、N、W、A、H、M、Q及S組成之群之胺基酸殘基;較佳為K及N;3表示選自由F、Q、L、H及V組成之群之胺基酸殘基;較佳為F、Q及L;4表示胺基酸殘基F或T;5表示胺基酸殘基Q或H;6表示胺基酸殘基Y或S;7表示選自由N、H、Y及M組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,7為N或H;且8表示選自由A、H、N及Y組成之群之胺基酸殘基。
在另一實施例中,該錨蛋白重複結構域包含重複模組,該重複模組具有錨蛋白重複序列基序1D23GWT4LHLAADLG5LEIVEVLLK6GADVNA(SEQ ID NO:22)
其中1表示選自由F、Y、H及W組成之群之胺基酸殘基;較佳為F、Y及H;2表示選自由I、M、D及V組成之群之胺基酸殘基;在另一實施例中,2為I、M或D;3表示胺基酸殘基F或L;4表示胺基酸殘基L或P;5表示選自由H、L及Y組成之群之胺基酸殘基;且6表示選自由A、H、N、C及Y組成之群之胺基酸殘基。
可在結合蛋白中的不同位置連接一或多個聚乙二醇部分,且該連接可藉由與胺、硫醇或其他適合的反應性基團反應來達成。聚乙二醇部分之連接(PEG化)可為位點定向的,其中適合的反應性基團係被引入蛋白中以產生聚乙二醇化優先發生的位點,或者原本存在於結合蛋白中。巰基可存在於半胱胺酸殘基中;且胺基可為(例如)見於多肽N-端之一級胺或存在於胺基酸(諸如離胺酸或精胺酸)側鏈中之胺基。在一個實施例中,修飾結合蛋白以便在期望位置具有半胱胺酸殘基,從而容許在半胱胺酸上進行位點定向聚乙二醇化,例如藉由與攜帶馬來醯亞胺官能基之聚乙二醇衍生物反應。聚乙二醇部分之分子量可變化很大(即自約1kDa至約100kDa)且可為支鏈或直鏈。在一個實施例中,聚乙二醇具有約1至約50kDa之分子量;在另一實施例中,聚乙二醇具有約10kDa至約40kDa、約15kDa至約30kDa、或約20kDa之分子量。該等結合蛋白及其合成方法之實例提供於第8,710,187號美國專利(亦如WO 2011/135067中所公佈),該專利之整體內容以引用方式併入本文中。
在一個實施例中,可使用包含如本文所述結合結構域之重組蛋白,其中該重組蛋白係在其C-端半胱胺酸巰基處與馬來醯亞胺偶聯之PEG(諸如α-[3-(3-馬來醯亞胺基-1-側氧基丙基)胺基]丙基-ω-甲氧基-聚氧乙烯(NOF,Sunbright ME-200MA(20kD)或Sunbright ME-400MA(40kD)))共軛。在一個實施例中,可使用包含如本文所述結合結構域之重組結合蛋白,其中該結合結構域係在其C-端經由肽鍵與SEQ ID NO:8共軛,SEQ ID NO:8
進而在C-端半胱胺酸巰基處與馬來醯亞胺偶聯之PEG(諸如α-[3-(3-馬來醯亞胺基-1-側氧基丙基)胺基]丙基-ω-甲氧基-聚氧乙烯(NOF,Sunbright ME-200MA(20kD)或Sunbright ME-400MA(40kD)))共軛。
在一些實施例中,C-端半胱胺酸巰基可與吡啶二硫物偶聯之PEG、乙烯基碸偶聯之PEG或經由其他硫醇試劑偶聯之PEG共軛。
在一些實施例中,PEG以及適當連接化合物具有至少約2kD、5kD、10kD、20kD、30kD、40kD、50kD、70kD或100kD之分子量。在一個實施例中,馬來醯亞胺偶聯之PEG具有至少約2kD、5kD、10kD、20kD、30kD、40kD、50kD、70kD或100kD之分子量。
在某些實施例中,α-[3-(3-馬來醯亞胺基-1-側氧基丙基)胺基]丙基-ω-甲氧基-聚氧乙烯具有至少約20kD或至少約40kD之分子量。
在一些實施例中,重組結合蛋白可在N-端胺基處與適合的含有PEG之連接化合物共軛。在該等實施例中,PEG-乙烯試劑、PEG NHS-酯、PEG NHS-碳酸酯、PEG-碳酸對-硝基苯酯、PEG-三嗪試劑及諸如此類可在本文所述適合結合蛋白之N-端共軛。
在又一實施例中,本發明係關於編碼特定重組結合蛋白之核酸分子。此外,考慮包含該核酸分子之載體。
此外,考慮包含上文所提及之結合蛋白(具體而言包含重複結構域之重組結合蛋白)或編碼特定重組結合蛋白之核酸分子中之一或多者以及視情況醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑的醫藥組合物。
調配物
醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑為熟習此項技術者已知且在下文更詳細說明。甚至此外,考慮包含上文所提及之重組結合蛋白、具體而言包含重複結構域之結合蛋白中之一或多者的診斷組合物。
醫藥組合物包含如上文所述之結合蛋白及醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences,1 第6版,Osol,A.編輯[1980])。技術人員已知之適合之載劑、賦形劑或穩定劑係鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液、漢克溶液(Hank's solution)、不揮發油、油酸乙酯、含5%右旋糖之鹽水、增強等滲性及化學穩定性之物質、
緩衝劑及防腐劑。其他適合之載劑包括本身不誘導產生對接受該組合物之個體有害之抗體諸如蛋白、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合胺基酸及胺基酸共聚物的任何載劑。醫藥組合物亦可為包含額外活性劑(諸如抗癌劑或抗血管生成劑(例如人類VEGF-Axxxb;較佳地,人類VEGF-A165b)之組合調配物。
在一個實施例中,調配物包含如上文所述之結合蛋白及清潔
劑(諸如非離子型清潔劑,包括但不限於0.04%聚山梨醇酯20)、緩衝劑(諸如組胺酸、磷酸鹽或乳酸)以及糖(諸如蔗糖或海藻糖)。調配物亦可包含PBS。
欲用於活體內投予之調配物必須為無菌性或無菌的。此容易地經由無菌濾膜過濾來達成。
治療方法
在一個實施例中,本發明之方法包括藉由向需要該抑制之患者投予劑量為約0.25mg至約4mg之包含錨蛋白重複結構域之重組結合蛋白來抑制VEGF-Axxx與VEGFR-2之間之結合的方法,其中該錨蛋白重複結構域係選自由SEQ ID NO:1至7之錨蛋白重複結構域組成之群。
在一些實施例中,該錨蛋白重複結構域係選自由SEQ ID NO:1至5之錨蛋白重複結構域組成之群。在一些實施例中,該錨蛋白重複結構域係選自由SEQ ID NO:2或3之錨蛋白重複結構域組成之群。在一個實施例中,該重組結合結構域以低於109M之Kd結合VEGF-Axxx。
該等方法可用於治療某些眼部病状,包括與缺血性視網膜病變、新生血管性視網膜病變或缺血性視網膜病變及新生血管性視網膜病變二者相關之彼等。可藉由本文所揭示方法治療之與缺血性視網膜病變相關之一些病状可包括糖尿病性黃斑水腫、中央靜脈阻塞及分支靜脈阻塞。可藉由本文所揭示方法治療之與新生血管性視網膜病變相關之一些病状可包括增殖性糖尿病性視網膜病變、滲出性年齡相關性黃斑變性、病理性近視、脈絡膜新生血管、繼發於組織胞漿菌病之新生血管、息肉狀脈絡膜新生血管及視網膜血管瘤樣增殖,該方法可用於治療年齡相關性黃斑變性、糖尿病性黃斑水腫、病理性近視、視網膜分支靜脈阻塞及視網膜中央靜脈阻塞。
該方法亦可用於治療現有抗-VEGF療法難以治療的患有上文所列示疾病之患者。
如此處所用之「治療」意指進行醫療處理。其包括(例如)投予本發明之重組結合蛋白來預防AMD發作以及以減輕其嚴重程度。
黃斑變性由黃斑部下面之脈絡膜之新生血管生長引起。存在兩種類型之晚期黃斑變性:滲出性及萎縮性。儘管滲出性黃斑變性僅佔所有黃斑變性之15%,但近乎所有滲出性黃斑變性均導致失明。一旦一隻眼睛受滲出性黃斑變性影響,則該病状幾乎總是影響另一隻眼睛。滲出性黃斑變性及萎縮性黃斑變性常稱作年齡相關性黃斑變性或年齡相關性「濕性」黃斑變性,其為老年人中最常見之疾病。
如此處所用,「抗-VEGF療法難以治療的」係指用已知抗-VEGF療法(諸如蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普或培加尼布療法)不能達成令人滿意之生理反應。在至少3次經玻璃體內注射蘭尼單抗、貝伐單抗或阿柏西普(或至少3次經玻璃體內注射任一前述療法之組合)後,該等患者可(例如)具有異常中央視網膜厚度(黃斑部之中央1mm2區域)之小於20%減少。在一個實施例中,儘管接受蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普、或培加尼布療法,但抗-VEGF療法難以治療的患者經歷視力之持續惡化。在另一實施例中,儘管接受蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普或培加尼布療法,但抗-VEGF療法難以治療的患者經歷視網膜增厚。在一些實施例中,儘管接受蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普或培加尼布療法,但抗-VEGF療法難以治療的患者顯示可忽略之解剖學改善。
在一些實施例中,該等結合蛋白係以每次注射介於約0.1mg與約10mg之間之結合蛋白之劑量經玻璃體內投予。在一些實施例中,該等結合蛋白係以每次注射介於約0.25mg與約5mg之間之結合蛋白、每次注射介於約0.25mg與約4mg之間之結合蛋白、每次注射介於約0.25mg與約3mg之間之結合蛋白、每次注射介於約0.25mg與約2mg之間之結合蛋白及每次注射介於約0.25mg與約1mg之間之結合蛋白之劑量投予;在其他實施例中,該等結合蛋白係以每次注射介於約0.5mg與約5mg之間之結合蛋白、每次注射介於約0.5mg與約4mg之間之結合蛋白、每次注射介
於約0.5mg與約3mg之間之結合蛋白、每次注射介於約0.5mg與約2mg之間之結合蛋白及每次注射介於約0.5mg與約1mg之間之結合蛋白之劑量投予;在其他實施例中,該等結合蛋白係以每次注射介於約1mg與約5mg之間之結合蛋白、每次注射介於約1mg與約4mg之間之結合蛋白、每次注射介於約1mg與約3mg之間之結合蛋白及每次注射介於約1mg與約2mg之間之結合蛋白之劑量投予。
在一個實施例中,該等結合蛋白係以每次注射約0.1mg、約0.2mg、約0.25mg、約0.3mg、約0.35mg、約0.4mg、約0.45mg、約0.5mg、約0.55mg、約0.6mg、約0.65mg、約0.7mg、約0.75mg、約0.8mg、約0.9mg、約0.95mg、約1mg、約1.1mg、約1.2mg、約1.3mg、約1.4mg、約1.5mg、約1.6mg、約1.7mg、約1.8mg、約1.9mg、約2mg、約2.0mg、2.1mg、約2.2mg、約2.3mg、約2.4mg、約2.5mg、約2.6mg、約2.7mg、約2.8mg、約2.9mg、約3mg、約3.0mg、3.1mg、約3.2mg、約3.3mg、約3.4mg、約3.5mg、約3.6mg、約3.7mg、約3.8mg、約3.9mg、約4mg、約4.0mg、4.1mg、約4.2mg、約4.3mg、約4.4mg、約4.5mg、約4.6mg、約4.7mg、約4.8mg、約4.9mg、約5mg及約5.0mg之結合蛋白之劑量投予。
在一個實施例中,該結合蛋白係以2個至5個劑量之初始劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天;即,向患者一眼睛投予單一劑量之結合蛋白,然後25天至35天後向同一眼睛投予另一劑量,其中必要時重複劑量,直至該眼睛接受總計2個至5個初始劑量。
在一個實施例中,該結合蛋白首次以2個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。在該實施例中,向一眼睛投予單一劑量之結合蛋白(例如,單次注射0.5mg至約4mg之結合蛋白),且然後25天至35天後向該眼睛投予相同劑量,每個經治療眼睛總計2個初始劑量。
在一個實施例中,該結合蛋白首次以3個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。在該實施例中,向一眼睛投予單一劑量之結合蛋白(例如,單次注射0.5mg至約4mg之結合蛋白),25天至35天後向該
眼睛投予相同劑量,且然後25天至35天後再次投予,每個經治療眼睛總計3個初始劑量。
在一個實施例中,該結合蛋白首次以4個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。在該實施例中,向一眼睛投予單一劑量之結合蛋白(例如,單次注射0.5mg至約4mg之結合蛋白),25天至35天後向該眼睛投予相同劑量,25天至35天後再次投予,且然後25天至35天後又再次投予,每個經治療眼睛總計4個初始劑量。
在一個實施例中,該結合蛋白首次以5個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。在該實施例中,向一眼睛投予單一劑量之結合蛋白(例如,單次注射0.5mg至約4mg之結合蛋白),25天至35天後向該眼睛投予相同劑量,25天至35天後再次投予,且25天至35天後又再次投予,且然後25天至35天後再投予一次,總計每個經治療眼睛5個初始劑量。
在另一實施例中,首先以2個至5個初始劑量向一眼睛投予結合蛋白,各劑量間之間隔為25天至35天,且然後補投至少一個額外劑量,其中各額外劑量間之間隔為50天至130天。
在一個實施例中,各額外劑量間之間隔為50天至100天、50天至95天、50天至90天、50天至85天、50天至80天、50天至75天、50天至70天、50天至65天及50天至60天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為55天至100天、55天至95天、55天至90天、55天至85天、55天至80天、55天至75天、55天至70天、55天至65天及55天至60天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為60天至100天、60天至95天、60天至90天、60天至85天、60天至80天、60天至75天、60天至70天及60天至65天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為65天至100天、65天至95天、65天至90天、65天至85天、65天至80天、65天至75天及65天至70天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為70天至100天、70天至95天、70天至90天、70天至85天、70天至80天及70天至75天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為75天至100天、75天至95天、75天至90天、75天至85天及75天至80天;在另一實施
例中,各額外劑量間之間隔為80天至100天、80天至95天、80天至90天及80天至85天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為85天至100天、85天至95天及85天至90天;在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為90天至100天及90天至95天。在另一實施例中,各額外劑量間之間隔為30天、35天、40天、45天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、105天、110天、115天、120天、125天或130天。
例如,在一個實施例中,向一眼睛投予單一劑量之結合蛋白(諸如單次注射0.5mg至約4mg之結合蛋白),25天至35天後向該眼睛投予相同劑量,且然後25天至35天後再次投予,每個經治療眼睛總計3個初始劑量,隨後只要眼睛需要治療,則每55天至65天向該眼睛投予相同劑量。
根據一些實施例,按照本發明方法接受重組結合蛋白注射之患者可顯示異常中央視網膜厚度自基線減少20%或更大、減少25%或更大、減少30%或更大、減少35%或更大、減少40%或更大、減少45%或更大、減少50%或更大、減少55%或更大、減少60%或更大、減少65%或更大、減少70%或更大、減少75%或更大、減少80%或更大、減少85%或更大、減少90%或更大、減少95%或更大、減少99%或減少100%。
根據一些實施例,抗-VEGF治療(諸如蘭尼單抗、貝伐單抗、阿柏西普或培加尼布)難以治療的患者在接受一或多次本文所揭示之結合蛋白注射後可顯示異常中央視網膜厚度自基線減少約20%或更大。根據一些實施例,患者在接受一或多次本文所揭示之結合蛋白注射後可顯示異常中央視網膜厚度自基線減少約30%或更大。根據又一些其他實施例,患者在接受一或多次本文所揭示之結合蛋白注射後可顯示異常中央視網膜厚度自基線減少小於40%或更大。
例如,用於治療眼部病状(諸如年齡相關性黃斑變性)之方法可包括以本文所述頻率以0.5mg至5mg範圍內之量經玻璃體內注射重組結合蛋白。該重組結合蛋白包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域。
在另一實例中,用於治療抗-VEGF治療(諸如蘭尼單抗、貝伐單抗或蘭尼單抗及貝伐單抗)難以治療的患者之年齡相關性黃斑變性的方法可包括以0.5mg至5mg範圍內之量經玻璃體內注射重組結合蛋白。該重組結合蛋白包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域。在此實例中,接受此一注射或此等注射的患者在接受一或多次注射後會經歷異常中央視網膜厚度減少超過20%。在一些實施例中,接受此一注射或此等注射之患者在接受一次、兩次、三次、四次、五次或更多次注射後未經歷視網膜增厚。
在另一實例中,用於治療抗-VEGF治療(諸如蘭尼單抗、貝伐單抗或蘭尼單抗及貝伐單抗)難以治療的患者之糖尿病性黃斑水腫的方法可包括以0.5mg至5mg範圍內之量經玻璃體內注射重組結合蛋白。該重組結合包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域。在此實例中,接受此一注射或此等注射之患者在接受一次、兩次、三次、四次、五次或更多次注射後可經歷異常中央視網膜厚度減少超過20%。在一些實施例中,接受此一注射或此等注射之患者在接受一次、兩次、三次、四次、五次或更多次注射後未經歷視網膜增厚。
藉由以下實例對本發明予以進一步說明。本發明者測試了聚乙二醇化阿比西帕(abicipar pegol)(本發明包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域之結合蛋白),該錨蛋白重複結構域與聚乙二醇共軛(該化合物具有通用名「聚乙二醇化阿比西帕」,在本文中偶爾簡稱為「阿比西帕」)。
概述
本發明者先前已在開放標籤劑量遞增安全性評估中測試了聚乙二醇化阿比西帕,其係經玻璃體內注射投予抗-VEGF療法難以治療的患有晚期滲出性AMD之患者。本發明者接著利用阿比西帕及蘭尼單抗之隨機化雙盲評價對患有滲出性AMD之初治患者進行研究(「2期研究」)。目的係評估4.2mg及3mg阿比西帕對視網膜水腫及最佳矯正視敏度(BCVA)治療效果之安全性及持續時間以及表徵阿比西帕之全身藥物動力學概況。
在此實例中,本發明者進行了阿比西帕與蘭尼單抗之隨機化雙盲比較(「3期研究」)。將患者隨機分到三個組阿比西帕1mg、阿比西帕2
mg或雷珠單抗0.5mg中之一個中,並隨訪20周。所有患者每月在第0週、第4週及第8週時接受3個劑量。經雷珠單抗治療之患者在第12週及第16週時接受額外蘭尼單抗劑量,同時阿比西帕患者接受假注射。3期之目標係評估是否可以較少劑量之阿比西帕(3個劑量)與蘭尼單抗(5個劑量)達成對BCVA及視網膜水腫之相似或更佳效果;在阿比西帕之最後一個劑量之後8週及12週與在蘭尼單抗之第四個及第五個劑量之後4週做出比較。
3期之主要功效變數係在第16週(在第三次注射之後8週)時研究眼中BCVA自基線之平均變化。將分別獲得8.2個及6.3個字母之以2mg及1mg阿比西帕治療之患者與(在第四次注射之後4週)獲得5.3個字母之蘭尼單抗治療之患者進行比較。關鍵次要功效變數係視網膜內流體之消除。在以光學相干斷層掃描進行評估時,膜內流體表徵為視網膜內水腫、視網膜內囊腫及視網膜下流體。在第12週時(治療之第三個劑量之後4週),阿比西帕2mg組、阿比西帕1mg組及蘭尼單抗組中沒有視網膜內流體之患者之比例係78%、68%及50%。在第16週時在阿比西帕之第三個劑量之後8週及在蘭尼單抗之第四個劑量之後4週,阿比西帕2mg組、阿比西帕1mg組及蘭尼單抗組中沒有視網膜內流體之患者之比例分別係52%、44%及19%。視網膜內流體之存在致使視網膜中之神經網路之破壞,從而導致視力損失。視網膜內流體之消除保持視力。
患者選擇
將大約64名患者以3:3:2隨機分配到以下組中之一組中:
˙在基線、第4週及第8週投予2mg阿比西帕(3次注射)
˙在基線、第4週及第8週投予1mg阿比西帕(3次注射)
˙在基線、第4週、第8週、第12週及第16週投予0.5mg蘭尼單抗(5次注射)
選擇六十四名患者。此等患者之平均年齡為76.6歲,為高加索人為主且大部分為女性。在基線時,平均BCVA介於58.5個字母與60.4個字母之間(等效於約20/63斯內倫)。平均基線中央視網膜厚度(「CRT」)介於463μm與526μm之間之範圍內。對於人口統計特徵或基線特徵中之
任一者,在各治療組之間無顯著差異(表1),但在阿比西帕2.0mg組中具有主要典型性病變之患者之比例顯著高於在其他治療組中。
藉由使用如Arch Ophthalmol.,119(10):1417-36(2001)中所述之ETDRS方法之改良形式來定量BCVA。BCVA測試優於要求與眼睛接觸之任何檢查,且係在驗光後進行。
驗光係在4米處進行,除非視敏度下降,在該情況下驗光係在1米處進行。首先對右眼驗光,隨後左眼。將試鏡架放置於患者面部上並調整以使鏡片單元與眼眶之前平面平行且中心在瞳孔前面。調整鏡片單元以距角膜適當距離。藉由用折疊薄紙罩住並在眼睛上方施加黑色遮板來遮住不驗光的眼睛。自開始粗略驗光獲得之矯正鏡片插入到試鏡架中。藉由將鏡片插入最靠近眼睛的隔室中將其定位;將圓柱形矯正鏡片放置於球面矯正鏡片前面的隔室中並調整軸。鼓勵患者使用偏心注視,必要時,確保另一隻眼睛被完全遮住。然後測定並細化球鏡度、柱鏡軸線及柱鏡度。
在4米處開始BVCA測試。首先測試右眼且然後測試左眼。從參與者眼睛到視敏度圖表之距離為4米(13英尺1.5英吋或157.5英吋)。允許參與者站立或坐著;在任一情況下,檢查者確保參加者舒適地站著或坐著,在測試期間頭部不向前或向後移動,且參與者眼睛保持在4米距離處。檢查者評定參與者讀出之每個字母為正確或錯誤。一旦參與者以確定之單字母回答識別一字母並讀出下一字母,則對前一個字母之矯正不被接受。若參與者在大聲讀出下一個字母之前大聲改變了回答(即,「其為『C』,而非『O』」),則該改變被接受。若參與者在開始讀出下一個字母之後改變回答,則該改變不被接受。當參與者說他無法讀出一字母時,鼓勵他猜測。若參與者識別一字母為兩個或更多個字母中之一者,則讓他選擇一個字母且必要時讓他猜測,即便他讀出了下一個字母。當顯然無法進一步進行有意義的讀取時(通常在參與者不能猜測一字母之情況下),儘管激勵讀出或猜測,但檢查者應停止對該眼睛的測試。鼓勵參與者猜測出於幾個原因:參與者聲稱其無法識別一字母通常並不可靠;鼓勵他們猜測有助於最大化參與者之努力;其有助於確保在不同診所中進行之程序之一致性;且其可有助於防止參與者之偏見(裝病)。
在1米處測試在4米處正確讀取19個或更少之字母之眼睛。在1米處測試之前,對已在試鏡架中之4-米矯正鏡片補增一+0.75球鏡以補償更近之測試距離。儘管對於4-米測試參與者可站立或坐著,但對於1米測試參與者僅能坐著。令參與者在1米處唯讀取前6列,使得在該距離處最高分為30。
完成右眼測試後,在4米處開始對左眼重複該測試。
關鍵安全性變數
˙不良事件(AE)及嚴重不良事件(SAE)
˙BCVA
˙常規體檢
˙血液化學、血液學及尿液分析
˙注射後評價
免疫原性及全身藥物動力學量度:
˙全身阿比西帕(血清)水準
˙阿比西帕之結合抗體及中和抗體
功效量度
˙利用糖尿病性視網膜病變研究之早期治療(ETDRS)視敏度方案評估之BCVA
○自基線之平均變化
○BCVA回答者分析:
2.自基線損失小於15個字母(穩定視力)
˙如藉由光學相干斷層掃描(OCT)量測並藉由中央讀取中心(CRC)評價之視網膜水腫或中央視網膜厚度(凹處中央1mm2區域;CRT)
˙藉助OCT評價之視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體,如藉由CRC量測。
OCT係提供視網膜之高解析度成像光學切片之基於雷射之無創診斷系統。使用Heidelberg Engineering之Spectralis譜域OCT(SD-OCT)或者Carl Zeiss之Cirrus譜域OCT來捕獲研究眼中視網膜之中央1mm子域之厚度。Spectralis OCT裝置在固定於黃斑部上之情況下捕獲容積掃描(在6.0mm×6.0mm下利用512 A掃描及49 B掃描)及十字型掃描(在6.0mm掃描長度及768解析度下利用水準及垂直B掃描)。該裝置係利用Heidelberg Eye Explorer版本1.6.2.0及HRA2/Spectralis Family Acquisition Module 5.1.2.0或更高版本運行。Cirrus OCT裝置在固定於黃斑部上之情況下捕獲黃斑立方掃描(在6.0mm×6.0mm下利用512 A掃描及128 B掃描)及十字型掃描(在6.0mm掃描長度及1024 A掃描下利用水準及垂直B-掃描)。該裝置運行Cirrus軟體版本4.5或更高版本。
由CRC重新審查在篩選就診時自患者收集之電子OCT影像以確定患者合格。將在所有研究就診時自所有患者收集之電子OCT影像呈送給CRC以評估治療對於解決視網膜流體之效果。
在整個研究中對任何既定患者皆使用相同OCT系統(即,Spectralis或Cirrus)來評價CRT。
用於確定疾病復發之資料包括由中央讀取中心對研究眼分級之BCVA及CRT。將大於1.25mm2之新的出血或現有出血(如由研究者評價)收集到再治療病例報告表(CRF)上。收集於此CRF上之陽性反應被用作新的出血或現有出血增加之證據。
若在第三次注射研究藥物後(第12週)存在活動性疾病之證據,則經阿比西帕治療之患者可避免標準護理療法(SOC);經蘭尼單抗治療之患者以4週間隔接收重複注射,不論是否存在活動性疾病之證據。
本發明者之方案前提為,在第12週及其以後,應對OCT上具有視網膜流體之眼睛進行治療,在以4週間隔投予之3次連續注射後視網膜流體未減少之眼睛除外。對於該等眼睛,可能的是,繼續治療可能是徒勞的且眼科醫師及患者可選擇暫停治療。若OCT上之視網膜流體增加(相對於停止治療時之就診),則可在隨後就診時對此等眼睛再定制治療。若OCT上無視網膜流體,但有活動性CNV之其他跡象,則應對眼睛進行治療。此等跡象包括新的視網膜下或視網膜內出血、持久性視網膜下或視網膜內出血、無另一種解釋之相對於最後一次就診視敏度下降、相對於最後一次血管攝影螢光素血管攝影術(FA)上之病灶尺寸增大、或FA上之洩漏。
關鍵隨訪
˙1期:第3天、第1週、第2週、第4週、第8週、第12週、第16週、第20週、第24週/退出時
˙2期:第3天、第1週、第2週、第4週、第6週、第8週、第12週、第16週、第20週、第24週、第28週及第32週/退出時
˙3期:第3天、第1週、第4週、第8週、第12週、第16週、第20週/退出時
分析安全性人群之不良事件並且分析改良之意向治療(mITT)人群之處置、人口統計資料、基線特徵、中央視網膜厚度及BCVA;在患者接受SOC(例如,蘭尼單抗、阿柏西普、貝伐單抗)治療後使用CRT及BCVA最後觀察值前推法(last-observation-carried-forward,LOCF)來輸入資料。
安全性
不論因果關係,在研究眼中最常見的(>2個事件/組)不良事件(AE)在阿比西帕組中為視網膜出血、玻璃體漂浮物、玻璃體脫離及眼睛
疼痛,且在蘭尼單抗組中為黃斑部結疤及視網膜出血(表2)。在任何組中均未報導嚴重不良事件。以2mg進行治療之患者中有2名發生炎症相關之AE且以1mg進行治療之患者中有3名發生炎症相關之AE(表2)。在第一次研究注射後未發生不良事件;在第二次注射後發生脈絡膜炎及眼色素層炎AE;在第三次注射後發生虹膜炎及玻璃體炎AE。在蘭尼單抗治療組中未報導眼部炎症。
功效
在2mg及1mg阿比西帕組中,直至第12週無患者脫離SOC。在2mg組中,在第12週有3名患者脫離SOC,且在第16週有5名患者脫離。在1mg組中,在第12週有5名患者脫離,且在第16週有6名脫離。第12週後具有活動性疾病跡象之經蘭尼單抗治療之患者繼續以蘭尼單抗進行再治療;在第12週有6名經蘭尼單抗治療之患者滿足SOC準則且在第16週有3名滿足。
最佳矯正視敏度(BCVA)
在所有組中自基線之平均BCVA變化均有所改善;在第12週(最後一個劑量之阿比西帕後4週),在2mg治療組、1mg治療組及蘭尼
單抗治療組中自基線之BCVA變化分別為8.9個、6.2個及5.3個字母。在第16週,在各自組中主要終點自基線之BCVA變化為8.2個、6.3個及5.3個字母,如圖1中所展示。因此阿比西帕治療組與蘭尼單抗治療組間之差異相當大,縱使不為統計上顯著的(在圖1以及圖2、圖3及圖4中,在接受標準護理後之資料視為缺失;缺失值使用LOCF來填補)。
與蘭尼單抗組相比,在2mg阿比西帕組中BCVA改善15個或更多個字母之患者之比例在數值上更高。在第12週,在2mg阿比西帕組、1mg阿比西帕組及蘭尼單抗組中改善15個或更多個字母者分別為22%、8%及13%。在第16週,該等值為22%、12%及13%(圖2)。在20週研究期間阿比西帕組中沒有患者且蘭尼單抗組中有1名患者損失15個或更多個字母。
依照BCVA損失小於15個字母來評估穩定視力。阿比西帕組中之所有患者均達成穩定視力;蘭尼單抗組中有一名患者未達成(圖3)。
中央視網膜厚度
儘管基線CRT值在2mg阿比西帕治療組與蘭尼單抗治療組之間係相當的,但1mg阿比西帕組要厚大約60μm。截至第12週,在該三個治療組中CRT減少分別為140μm、195μm及126μm。在第16週,此等值為111μm、161μm及127μm;2.0mg阿比西帕治療組與蘭尼單抗治療組間之差異在任何時間均不明顯。在第1週至第16週在阿比西帕組中CRT減少至正常值上限或其以下之患者之比例在數值上更高且與蘭尼單抗組(p=0.041)相比在1mg組中在第8週之差異顯著更大。在第12週,CRT減少至正常值上限或其以下之患者之比例在該三個治療組中分別為57%、64%及44%。在第16週,該等值為48%、52%及44%。圖4展示在整個研究中之平均CRT值。
治療對流體之解剖學消退之影響
由讀取中心對sdOCT影像中存在之視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體進行評分作為活動性滲出性病變之量度。在第一個、第二個及第三個劑量之後4週全部3個流體室均消退(全部乾燥)之患者之比例在2mg阿比西帕組中為52%、74%及78%,在1mg阿比西帕組中
為40%、52%及68%,且在蘭尼單抗組中為13%、19%及50%。在第16週,在第三次注射2.0mg及1.0mg阿比西帕後8週以及在第四次注射蘭尼單抗後4週,此等值在2mg阿比西帕組、1mg阿比西帕組及蘭尼單抗組中分別為52%、44%及19%。圖5展示在治療後視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體(全部三個室)消退之患者之比例。經2mg阿比西帕治療之患者中之兩個實例展示於圖6及圖7中。此等患者之中央視網膜厚度顯著減少,此藉由中央視網膜中異常流體之消退證實。
與先前研究結果之比較
該1.0mg及2.0mg阿比西帕可用於在開始治療之4週、8週或12週之後有效減少視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體,更高劑量對於疾病進展之該等量度之影響更令人驚訝。在患有滲出性AMD之175名初治患者之臨床試驗中,發現4.2mg及3.0mg阿比西帕在初始劑量之後在解決視網膜流體方面不如蘭尼單抗有效。在第1天且然後在第16週對患者給藥,或若其滿足某些再治療準則可更早給藥。圖8展示視網膜內流體、視網膜內囊腫及視網膜下流體(全部三個室)已解決之患者之比例;圖9展示此等室中之一者、兩者、全部三者或無一者中之流體已解決之患者之比例。
儘管已在某些實施例及實例之上下文中揭示本發明,但熟習此項技術者將理解,本發明超出特定揭示之實施例延伸至其他替代實施例及/或對本發明及其明顯修改及等效內容之使用。另外,儘管已詳細地展示及描述本發明之若干變化形式,但熟習此項技術者將基於本發明而容易地明瞭在本發明之範疇內之其他修改。亦預期,可做出對該等實施例之特定特徵及態樣之各種組合或子組合且其仍屬於本發明之範疇內。因此,應理解,所揭示實施例之各種特徵及態樣可彼此組合或替代以便執行所揭示發明之變化之模式。因此,本文中所揭示之本發明之範疇意欲不應受限於上文所描述之特定揭示之實施例,而是僅應藉由對以下申請專利範圍之清楚理解來確定。
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<223> 錨蛋白重複蛋白
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<223> 錨蛋白重複蛋白
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<223> 錨蛋白重複蛋白
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<223> 多肽連接體
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<223> 多肽連接體
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<222> (1)..(1)
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
<222> (27)..(27)
<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<223> 錨蛋白重複序列基序
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<221> misc_特徵
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
<222> (3)..(4)
<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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<223> Xaa可為任何天然存在之胺基酸
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<221> misc_特徵
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Claims (30)
- 一種包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域之重組結合蛋白之用途,其係用以製備用於治療黃斑變性或藉由抑制VEGF-Axxx與VEGFR-2之間之結合治療視網膜疾病之藥物,其中該結合蛋白係向需要該治療之患者之眼部投予0.25mg至4mg之2個至5個劑量,其中各劑量間之間隔為25天至35天,其中該結合蛋白於該2個至5個劑量之後再以至少一個額外劑量投予,各額外劑量間之間隔為56天。
- 一種包含SEQ ID NO:3之錨蛋白重複結構域之重組結合蛋白之用途,其係用以製備用於治療黃斑變性或藉由抑制VEGF-Axxx與VEGFR-2之間之結合治療視網膜疾病之藥物,其中該結合蛋白係向需要該治療之患者之眼部投予0.25mg至4mg之2個至5個劑量,其中各劑量間之間隔為25天至35天,其中該結合蛋白於該2個至5個劑量之後再以至少一個額外劑量投予,各額外劑量間之間隔為84天。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該黃斑變性係滲出性黃斑變性。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該視網膜疾病係選自滲出性黃斑變性、息肉狀脈絡膜血管病變、視網膜血管瘤樣增殖、糖尿病性黃斑水腫、病理性近視、視網膜分支靜脈阻塞及視網膜中央靜脈阻塞。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以2個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以3個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以4個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以5個劑量投予,各劑量間之間隔為25天至35天。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白進一步包含分子量為至少5kDa之聚乙二醇部分。
- 如請求項9之用途,其中該聚乙二醇部分具有選自由5kDA、10kDA及20kDa組成之群之分子量。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該錨蛋白重複結構域包含N-端 加帽模組,該N-端加帽模組包含5位處之Asp殘基。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合結構域以低於109M之Kd結合VEGF-Axxx。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該錨蛋白重複結構域在其C-端經由肽鍵與多肽接頭及C-端Cys殘基共軛,其中該C-端Cys之巰基進一步與馬來醯亞胺偶聯之聚乙二醇共軛。
- 如請求項13之用途,其中該馬來醯亞胺偶聯之聚乙二醇係α-[3-(3-馬來醯亞胺基-1-側氧基丙基)胺基]丙基-ω-甲氧基-聚氧乙烯。
- 如請求項13之用途,其中該多肽接頭由2個至24個胺基酸組成。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係與醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑一起投予。
- 如請求項16之用途,其中該載劑係PBS。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係藉由玻璃體內注射投予。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以0.25mg、0.5mg、1mg、2mg、3mg或4mg之劑量投予。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中在開始治療12週後該患者之最佳矯正視敏度改善至少15個字母。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中在開始治療4週、8週或12週後該患者經歷中央視網膜中流體20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%之減少。
- 如請求項21之用途,其中該減少係藉由譜域OCT來評估。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中在開始治療4週、8週或12週後該患者經歷以下項中至少兩者或至少三者或全部之減少:中央視網膜厚度、視網膜內水腫、視網膜內囊腫及視網膜下流體。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該患者係蘭尼單抗(ranibizumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、阿柏西普(aflibercept)或培加尼布(pegaptanib)療法難以治療的。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中在3次經玻璃體內注射蘭尼單 抗、貝伐單抗或阿柏西普後,該患者具有黃斑部之中央1mm2區域之小於20%減少。
- 如請求項24之用途,其中該患者係三個、四個、五個或六個劑量之蘭尼單抗(ranizumab)療法難以治療的。
- 如請求項24之用途,其中該患者係三個、四個、五個或六個劑量之貝伐單抗療法難以治療的。
- 如請求項24之用途,其中該患者係三個、四個、五個或六個劑量之阿柏西普療法難以治療的。
- 如請求項24之用途,其中該患者係三個、四個、五個或六個劑量之培加尼布療法難以治療的。
- 如請求項1至2中任一項之用途,其中該結合蛋白係以2mg之劑量投予。
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