WO2024056058A1 - 一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物 - Google Patents

一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物 Download PDF

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WO2024056058A1
WO2024056058A1 PCT/CN2023/119034 CN2023119034W WO2024056058A1 WO 2024056058 A1 WO2024056058 A1 WO 2024056058A1 CN 2023119034 W CN2023119034 W CN 2023119034W WO 2024056058 A1 WO2024056058 A1 WO 2024056058A1
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aqueous pharmaceutical
concentration
polysorbate
fusion protein
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张乐
刘骏
安振明
丛日圆
周兵兵
杨琛
孙丽霞
王庆民
郑焕兰
王亚涛
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齐鲁制药有限公司
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents

Definitions

  • the present application relates to the technical field of pharmaceutical compositions, and specifically to a stable, high-concentration self-buffering pharmaceutical composition.
  • VEGF Vascular endothelial growth factor
  • FDA Food and Drug Administration
  • EMA European Medicines Agency
  • the concentration of therapeutic antibodies in pharmaceutical formulations varies widely depending on, among other things, the route of administration.
  • injection volume is limited, it is often necessary to develop highly concentrated antibody formulations.
  • highly concentrated formulations is often required for intravitreal injection or subcutaneous administration.
  • the formulation of protein drugs itself can present many challenges to pharmaceutical scientists. Therefore, it is necessary to find a formulation that stabilizes protein drugs and makes them resistant to degradation, aggregation, misfolding, etc. caused by proteolysis, denaturation, etc.
  • finding suitable stability conditions can be challenging.
  • Desirable properties include stability at ambient and refrigerated temperatures, suitability for long-term storage, appropriate administration time and dosage, and minimization of post-administration discomfort.
  • Formulations suitable for intravitreal administration have been found in the prior art, there is still a need for stable, high-concentration liquid formulations of VEGF receptor fusion proteins suitable for ophthalmic administration.
  • Formulations containing high concentrations of VEGF receptor fusion proteins can reduce administration volumes, shorten ocular injection times, increase administration doses, extend administration intervals, reduce administration frequency, and improve manufacturing and storage efficiency.
  • the study also found that many commonly used buffers used to prepare drug proteins, especially for ophthalmic drugs, have certain limitations and risks, which may affect the safety of the drugs.
  • Buffers such as: acetate, succinate, citrate, histidine (imidazole), phosphate, and Tris, have been found to have undesirable limitations and disadvantages when used in formulating pharmaceutical proteins, specifically In other words, additional components in the preparation complicate the formulation process, increase harmful components, affect the overall stability and shelf life of the drug, and increase the risk of end-user acceptability. It is generally known in the art that although buffer-free salt systems exist in the prior art, obtaining effective pharmaceutical compositions without buffer salt systems for specific drugs is a challenging task, and the results are often unpredictable. High-concentration self-buffering systems The technical difficulty is even higher. At the same time, in industry, it is very challenging to improve the stability of pharmaceutical compositions.
  • One of the purposes of this application is to provide an improved high-concentration pharmaceutical composition of VEGF-binding molecules without the need for additional buffers. That is, this application provides a system without buffer salts and high-concentration protein self-buffering. As for the pharmaceutical composition, after years of exploration and experimentation, the inventor finally prepared and obtained a high-concentration self-buffering aqueous pharmaceutical composition of VEGF-binding molecules. In addition, this application also surprisingly found that the high-concentration self-buffering system pharmaceutical composition also has high stability and broad application prospects.
  • the present application discloses a self-buffering high-concentration VEGF binding molecule aqueous pharmaceutical composition.
  • High-concentration systems are prone to aggregation events themselves, making preparations unstable, and self-buffering high-concentration systems are even more so.
  • self-buffering high-concentration systems are difficult to store at room temperature, and aggregation events are even more likely to occur.
  • the aflibercept pharmaceutical compositions disclosed herein are stable and have a shelf life sufficient for the manufacture, storage and distribution of the drug.
  • the self-buffered high-concentration aflibercept pharmaceutical composition disclosed in the present application has a storage period of at least 1 month, 3 months or 6 months under room temperature storage conditions (eg, 25°C).
  • the present application discloses a pharmaceutical composition that, when a packaged sample is stored under accelerated conditions (e.g., 25°C ⁇ 2°C), has a SEC-HPLC purity of ⁇ 95% of the starting amount of aflibercept was retained.
  • accelerated conditions e.g. 25°C ⁇ 2°C
  • high temperature conditions 40°C ⁇ 2°C
  • the self-buffered high-concentration aflibercept pharmaceutical composition disclosed in the present application is compared to the high-concentration aflibercept with buffer system. Common pharmaceutical compositions all showed better results.
  • the present application discloses a pharmaceutical composition for detecting insoluble particles of different particle sizes ( ⁇ 2 ⁇ m, ⁇ 5 ⁇ m, ⁇ 10 ⁇ m and/or ⁇ 25 ⁇ m).
  • the aflibercept pharmaceutical composition showed better effects than the high-concentration aflibercept pharmaceutical composition with buffer system.
  • the present application discloses a self-buffering high-concentration VEGF binding molecule aqueous or lyophilized pharmaceutical composition, which includes: 1 VEGF binding molecule, the VEGF binding molecule is selected from VEGF receptor fusion protein or anti-VEGF Antibody or antigen-binding fragment thereof, the concentration of the VEGF-binding molecule is at least about 100 mg/mL; 2 stabilizer, the stabilizer is selected from the group consisting of sucrose, trehalose, proline, and pharmaceutically acceptable salts of proline , lysine, at least one of a pharmaceutically acceptable salt of lysine or sorbitol; 3 surfactant, the surfactant is selected from polysorbate 80, polysorbate 20 or polo At least one of sham; wherein, the aqueous pharmaceutical composition does not contain a buffer and has a pH of about 5.0-7.0.
  • the aqueous pharmaceutical composition does not include a buffer, which refers to histidine buffer, phosphate buffer, citrate buffer, acetate buffer, carbonate buffer, succinate buffer agent, tartaric acid buffer and/or maleic acid buffer.
  • a buffer refers to histidine buffer, phosphate buffer, citrate buffer, acetate buffer, carbonate buffer, succinate buffer agent, tartaric acid buffer and/or maleic acid buffer.
  • the self-buffering high-concentration VEGF binding molecule aqueous or lyophilized pharmaceutical composition further includes: 4 at least one of L-arginine, a pharmaceutically acceptable salt of L-arginine, or sodium chloride kind.
  • the L-arginine or the pharmaceutically acceptable salt of L-arginine is present in an amount of about 0-100 mM, or the sodium chloride is present in an amount of about 0-40 mM. In preferred embodiments, L-arginine or a pharmaceutically acceptable salt of L-arginine is present in an amount of about 20-100mM, or sodium chloride is present in an amount of about 40mM. In more preferred embodiments, the amount of L-arginine or a pharmaceutically acceptable salt of L-arginine is about 20mM, about 40mM, about 50mM, about 60mM, about 70mM, about 80mM, or about 100mM.
  • the concentration of VEGF binding molecules in the aqueous pharmaceutical composition is at least about 100 mg/mL, at least about 114.3 mg/mL, at least about 125 mg/mL, or at least about 180 mg/mL.
  • the aqueous pharmaceutical composition contains about 100-180 mg/mL of VEGF binding molecule. In preferred embodiments, the aqueous pharmaceutical composition contains about 100-125 mg/mL of VEGF binding molecule.
  • the concentration of stabilizer in the aqueous pharmaceutical composition is about 5 w/v% to 10 w/v%.
  • the stabilizer is selected from about 5 w/v% to 9 w/v% sucrose or about 5.5 w/v% to 10 w/v% trehalose.
  • the sucrose concentration is about 5w/v%, about 6w/v%, about 7w/%, about 8w/v% or about 9w/v%, or the concentration of trehalose is about 5.5w/v%, about 6.6w/v%, about 7.7 w/v%, about 8.0 w/v%, or about 10 w/v%.
  • the surfactant is selected from about 0.01 w/v% to 0.05 w/v% of at least one of polysorbate 20, polysorbate 80, or poloxamer.
  • the surfactant is polysorbate 20, and the content of polysorbate 20 is about 0.01w/v%, about 0.03w/v%, about 0.05w/v%, 0.07w /v%, about 0.1w/v% or about 0.2w/v%.
  • the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4; preferably, the pH is about 5.5, about 5.8, about 6.0, about 6.1, about 6.2, or about 6.4.
  • the aqueous pharmaceutical composition contains VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 100-180 mg/mL, about 5 w/v%-9 w/v% sucrose, or about 5.5 w/v%-10 w/v% trehalose, about 0.01w/v%-0.2w/v% polysorbate 20, about 0-100mM L-arginine hydrochloride or about 0-40mM sodium chloride; wherein, the aqueous pharmaceutical combination
  • the pH of the substance is about 5.0-7.0.
  • the aqueous pharmaceutical composition contains VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 100-180 mg/mL, about 5%-7w/v% sucrose, or about 5.5%-7.7w/v % trehalose, about 0.01w/v%-0.2w/v% polysorbate 20, about 20-100mM L-arginine hydrochloride or about 0-40mM sodium chloride; wherein, the aqueous drug
  • the pH of the composition is about 5.5-6.4.
  • the aqueous pharmaceutical composition is selected from any of the following:
  • Aqueous pharmaceutical composition A includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition B includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 6 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition C includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 7 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition D includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition E includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition F includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride. Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition G includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 60 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition H includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 60 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition I includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 7 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 60 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition J includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition K includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition L includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 7.7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition M includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 70 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition N includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 70 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition O includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, and polysaccharide at a concentration of about 0.03 w/v%.
  • Aqueous pharmaceutical composition P includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition Q includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition R includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 7.7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition S includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 80 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition T includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 80 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition U comprises: a VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 7 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 80 mM L-arginine hydrochloride, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition V includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition W includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM Acid, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition Acid wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition Y includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.01 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition Z includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.05 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 50 mM, Wherein, the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZA contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZB contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZC contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZD contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, about 5.5 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition ZE contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition ZF contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZG contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 60 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZH contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 60 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZI includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at about 60 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZJ contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZK contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZL contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 60 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZM contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZN contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZO contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZP contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZQ contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, and poly(polymer) at a concentration of about 0.03 w/v%. Sorbitate 20 and about 70mM L-arginine hydrochloride, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZR contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 7.7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZS contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZT contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 80 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZU contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 80 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZV contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZW contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition ZX includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, trehalose at about 7.7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZY contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, sucrose at about 5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.01 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition ZZ contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 125 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.05 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AA contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition AB contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AC contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v% and L-arginine hydrochloride at about 50 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AD contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 50 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AE contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 6.6 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition AF contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 50 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AG contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 60 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AH contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AI contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 7 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AJ contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AK contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 60 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AL contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 60 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AM contains: a VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 70 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AN includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AO contains: a VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 70 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AP contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, trehalose at about 5.5 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AQ includes: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, trehalose at about 6.6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 70 mM , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AR contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 70 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AS contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at a concentration of about 5 w/v%, and polysorbate at a concentration of about 0.03 w/v%. Ester 20 and about 80 mM L-arginine hydrochloride, wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AT contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, sucrose at about 6 w/v%, polysorbate 20 at about 0.03 w/v%, and L-arginine hydrochloride at a concentration of about 80 mM, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AU contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7 w/v% sucrose, about 0.03 w/v% polysorbate 20 and about 80 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AV contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5.5 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 80 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AW contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 6.6 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 80 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • Aqueous pharmaceutical composition AX contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 7.7 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 80 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AY contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.01 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition AZ contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 180 mg/mL, about 5 w/v% sucrose, about 0.05 w/v% polysorbate 20 and about 50 mM L-arginine hydrochloride, wherein , the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the aqueous pharmaceutical composition BA contains: VEGF receptor fusion protein at a concentration of about 114.3 mg/mL, about 8 w/v% trehalose, about 0.03 w/v% polysorbate 20, and about 20 mM L-arginine hydrochloride. , wherein the pH of the aqueous pharmaceutical composition is about 5.5-6.4;
  • the VEGF receptor fusion protein is aflibercept.
  • the VEGF-binding molecule comprises two polypeptides, each polypeptide comprising immunoglobulin-like (Ig) domain 2 of VEGFR1 and immunoglobulin-like (Ig) domain 3 of VEGFR2.
  • the VEGF binding molecule is selected from bevacizumab, ranibizumab, aflibercept or conbercept. In a more preferred embodiment, the VEGF binding molecule is aflibercept.
  • the pharmaceutical composition is stable at 2-8°C, stable for at least 6 months, 12 months, or 24 months; or the pharmaceutical composition is stable at 25°C ⁇ 2°C. Stable, stable for at least 1 month, 3 months or 6 months.
  • the present application provides a lyophilized preparation, which is obtained by lyophilizing the aqueous pharmaceutical composition according to the present application, or the lyophilized preparation is reconstituted to obtain the aqueous pharmaceutical composition of the present application.
  • the present application provides a delivery device comprising an aqueous pharmaceutical composition or a reconstituted lyophilized formulation of the present application.
  • the delivery device is a prefilled syringe.
  • the present application provides a method of treating an ocular disease or disorder mediated by VEGF, comprising administering to a subject an aqueous pharmaceutical composition or delivery device disclosed herein.
  • the site of administration is intravitreal.
  • the present application provides use of an aqueous pharmaceutical composition or delivery device of the present application in the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of an ocular disease or disorder mediated by VEGF, the treatment comprising administering to a subject Aqueous pharmaceutical composition or delivery device of the present application.
  • the site of administration is intravitreal.
  • the ocular disease or disorder includes ocular neovascular disease or vasculogenic eye disease.
  • the ocular disease or disorder includes neovascular (wet) age-related macular degeneration (AMD), age-related macular degeneration (wet), macular edema, macular edema after retinal vein occlusion, retinal vein occlusion (RVO) ), central retinal vein occlusion (CRVO), branch retinal vein occlusion (BRVO), diabetic macular edema (DME), choroidal neovascularization (CNV), iris neovascularization, neovascular glaucoma, post-operative fibrosis and hyperplasia of glaucoma Vitreoretinopathy (PVR), optic disc neovascularization, corneal neovascularization, retinal neovascularization, vitreous neovascularization, corneal pannus, pterygium, vascular retinopathy, diabetic retinopathy (DR), non-proliferative diabetic retinopathy and
  • a method of delivering a VEGF binding molecule to a subject comprising the step of administering to the subject an aqueous pharmaceutical composition or delivery device of the present application.
  • the site of administration is intravitreal.
  • the pharmaceutical composition provided by this application does not require the addition of additional buffers, has high stability, is convenient for storage, and has broad application prospects.
  • Figure 1 is the SEC main peak purity transformation trend chart of preparations A2 and A3 at 40°C ⁇ 2°C.
  • Figure 2 is a trend chart of SEC polymer purity transformation of preparations A2 and A3 under different storage conditions.
  • Figure 3 is the SEC main peak purity transformation trend chart of preparations B1, B2, B3, B4, and B5 under different storage conditions.
  • Figure 4 is the viscosity curve corresponding to preparations B1, B2, B3, B4, and B5.
  • Figure 5 is a SEC main peak purity transformation trend chart of preparations C1-C10 at 37°C ⁇ 2°C.
  • Figure 6 is a SEC purity transformation trend chart of formulations F5 and F6 at 2-8°C and 37°C ⁇ 2°C.
  • the term “about” includes and describes the value or parameter itself.
  • “about x” includes and describes "x” itself.
  • the term “about” refers to ⁇ 1% to 10% in addition to the value or parameter itself. Variety.
  • the term “about” when used in conjunction with a measurement or used to modify a value, unit, constant or series of values refers to ⁇ 1%, ⁇ 2%, ⁇ 3%, ⁇ 4%, ⁇ 5 %, ⁇ 6%, ⁇ 7%, ⁇ 8%, ⁇ 9% or ⁇ 10% variation.
  • aqueous pharmaceutical composition refers to a pharmaceutical composition that includes water.
  • self-buffering refers to the exclusion of components traditionally used to introduce buffering capacity in formulations.
  • excluded buffers include, but are not limited to: histidine buffers, phosphate buffers, citrate buffers, acetate buffers agent, carbonic acid buffer, succinic acid buffer, tartaric acid buffer, maleic acid buffer or mixtures thereof, etc.
  • Proteins are known to provide buffering capacity to formulations in addition to any buffering capacity present in formulations that do not contain buffer components. Therefore, these terms do not imply that the formulation cannot have any buffering capacity.
  • high concentration formulations include formulations with concentrations of at least 100 mg/mL, 101 mg/mL, 102 mg/mL, 103 mg/mL, 104 mg/mL, 105 mg/mL, 106 mg/mL, 107 mg/mL, 108 mg/mL, 109 mg/mL, 110mg/mL, 111mg/mL, 112mg/mL, 113mg/mL, 114mg/mL, 114.1mg/mL, 114.2mg/mL, 114.3mg/mL, 114.4mg/mL, 114.5mg/mL, 114.6mg/mL, 114.7mg/mL, 114.8mg/mL, 114.9mg/mL, 115mg/mL, 116mg/mL, 117mg/mL, 118mg/mL, 119mg/mL, 120mg/mL, 121mg/mL, 122mg
  • VEGF-binding molecule refers to a VEGF receptor fusion protein, an anti-VEGF antibody or antigen-binding fragment, or an antibody or fragment that specifically binds to VEGF.
  • exemplary VEGF receptor fusion proteins include aflibercept (Regeneron Pharmaceuticals, Inc.), see International Patent Application Publication WO2005/121176 or WO2007/112675.
  • VEGF receptor fusion protein refers to a molecule containing one or more VEGF receptors or domains thereof fused to another polypeptide that interferes with the interaction between VEGF and a native VEGF receptor, e.g., two of Such fusion polypeptides combine to form homodimers or other multimers.
  • VEGF receptor fusion proteins can be called "VEGF-Trap” or "VEGF Trap”.
  • VEGF receptor fusion proteins falling within this definition within the scope of the present application include chimeric polypeptides containing two or more immunoglobulin (Ig)-like domains of a VEGF receptor, such as VEGFR1 (also known as Flt1) and/or VEGFR2 (also known as Flk1 or KDR), and may also contain a multimerization domain (eg, an Fc domain).
  • VEGFR1 also known as Flt1
  • VEGFR2 also known as Flk1 or KDR
  • Fc domain multimerization domain
  • aflibercept includes biosimilar forms of aflibercept, which generally refers to products that contain the same amino acid sequence.
  • the amino acid sequence and nucleic acid sequence of aflibercept in the example have been recorded in the literature, see WO2000075319A1.
  • treatment when used in this application means the treatment described in this application.
  • Said “treating” means administering an antibody of the present application to a subject in need of such treatment (e.g., a subject suffering from a VEGF-mediated ocular disorder or a subject who may eventually acquire such a disorder) , to prevent, cure, delay a disorder or recurrence of a disorder, reduce the severity of a disorder or a recurrence of a disorder, or ameliorate one or more symptoms of a disorder or a recurrence of a disorder, or to prolong the survival of a subject beyond the period of There is no survival period expected under such treatment.
  • subject or “patient” refers to humans and non-human mammals, including, but not limited to, primates, rabbits, pigs, horses, dogs, cats, sheep and cattle.
  • Protein content determination Protein content was determined using a Lunatic microspectrometer. Use purified water for blank subtraction, use 330nm light scattering to correct the 280nm UV absorption, and calculate the protein concentration according to Formula 1, in which the extinction coefficient ⁇ is 1.5 (L/g ⁇ cm -1 ).
  • Size Exclusion Chromatography Use size exclusion chromatography to quantify aggregates, monomers, and fragments.
  • This assay utilizes TSKgel G3000SWXL7.8x300mm 5 ⁇ m column and run on a Waters e2695-2489 HPLC system.
  • the mobile phase is potassium phosphate buffer. Dilute the sample to 1 mg/mL with mobile phase, and the injection volume is 25 ⁇ L.
  • the protein was eluted isocratically at a flow rate of 0.5 mL/min for 30 min, and the absorbance of the eluate was measured at 215 nm.
  • Use Empower 3 software for integration processing.
  • rCE-SDS Reducing Capillary Electrophoresis: Determination of % (Main Peak 1 + Main Peak 2) purity by reduction capillary electrophoresis (rCE-SDS). This determination was performed on a SCIEX PA800plus capillary electrophoresis system with 50 ⁇ m I.D. uncoated quartz capillary. The effective separation length of the capillary is 20cm, the total length is 30.2cm for separation, the PDA220nm bandwidth is 10nm for detection, and the 32Karat software is used for integration processing.
  • Non-reducing SDS-PAGE The % main peak purity is determined by non-reducing SDS-PAGE electrophoresis. This determination is performed using polyacrylamide gel electrophoresis, with a separation gel concentration of 8% and a stacking gel concentration of 4.5%. Electrophoresis detection was carried out under the condition of constant current 10mA/block gel. After staining with Coomassie Brilliant Blue R250 and destaining with destaining solution, the gel imaging system was used for scanning and imaging, and the purity of the target band was analyzed.
  • Imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis Charge heterogeneity and identification experiments are measured by imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis (iCIEF). This measurement is performed on the Maurice C system of the imaging capillary electrophoresis instrument.
  • the effective separation length of the capillary is 5cm.
  • the focusing time is 6 minutes, the focusing procedure is 1.5kV-1min, the detection is 3kV-5min, and the Empower 3 software is used for integration processing.
  • MFI microfluidic imaging particle analysis The number of particles is determined by the MFI microfluidic imaging particle analysis system. This determination is performed in the MFI particle analysis system MFI 5200.
  • the sample volume to be tested is 1mL, the total effective volume is 0.7mL, and the analysis volume is 0.51 mL, analyzed using MVSS analysis software.
  • ELISA determination of binding activity The binding activity of recombinant human vascular endothelial growth factor receptor-antibody fusion protein injection and VEGF165 was determined by ELISA method. First, coat human VEGF165 protein on a 96-well plate, then add gradient dilutions of this product, then add secondary antibody, chromogenic solution, and stop solution in sequence, read the absorbance value, and calculate the binding ability of this product to human VEGF165 antigen.
  • test data uses Soft Max Pro or other similar software for four-parameter fitting analysis, and the results are automatically analyzed according to the following formula: the logarithmic value of the reference product (self-made) concentration is the X-axis, the absorbance value is the Y-axis, and the software will give the results for the test The half effective concentration (EC 50 ) of the product and the reference product was calculated, and an “S”-shaped curve was drawn.
  • EC 50 half effective concentration
  • concentration of VEGF binding molecules, the concentration of stabilizers, the concentration of surfactants, the concentration of L-arginine, the concentration of pharmaceutically acceptable salts of L-arginine, and the concentration of sodium chloride described in this application Respectively refer to the concentration of VEGF binding molecules, stabilizers, surfactants, L-arginine, pharmaceutically acceptable salts of L-arginine, and sodium chloride in the aqueous pharmaceutical composition.
  • the experimental conditions in the following embodiments are: shaking at room temperature (25 ⁇ 2°C) for one week (25°C1W), freeze-thaw cycles 3 times (freezing at -40°C for 16h, thawing at 25°C for 8h as one cycle), placing at 2-8°C for 1 month (2-8°C1M), placing at 2-8°C for 6 months (2-8°C6M), placing at 25°C ⁇ 2°C for 1 month (25°C1M), placing at 40°C ⁇ 2°C for one week (40°C1W), placing at 40°C ⁇ 2°C for two weeks (40°C2W) or placing at 40°C ⁇ 2°C for 1 month (40°C1M).
  • VEGF receptor fusion protein (aflibercept) with approximately 40 mg/mL, approximately 114.3 mg/mL, and approximately 180 mg/mL were tested for long-term efficacy, physical stability, and Formation of charge heterogeneous bodies.
  • the component contents of the four preparations are shown in Table 1.1.
  • buffer exchange is performed with the intended excipient solution and concentrated to the desired antibody concentration by ultrafiltration. After completing the ultrafiltration concentration, add the excipients to be added to the antibody solution in the form of mother liquor, sterile filter all formulations through a 0.22 ⁇ m low protein binding filter, and fill them into sterile 2mL tube bottles under aseptic conditions.
  • Use film-coated rubber stopper and aluminum-plastic combination cover to seal.
  • Test examples A1 and A2 are solutions with a buffer system
  • test examples A3 and A4 are solutions with a self-buffering system.
  • the experimental results found that: under the conditions of shaking at room temperature (25 ⁇ 2°C) for one week, freezing and thawing cycles three times, and placing at 2-8°C for 6 months, the samples of Test Example A1, Test Example A2, and Test Example A3 were relatively stable, SEC- There was no significant change in HPLC purity and so on. Under the condition of being placed at 25°C for one month, in Test Examples A1, A2, A3, and A4, except for the obvious decrease in nr-SDS-PAGE purity, there was no significant change in the other purity.
  • test results are shown in Table 1.2-1.4.
  • the SEC main peak purity transformation trend chart of preparations A2 and A3 at 40°C ⁇ 2°C is shown in Figure 1, under different storage conditions.
  • the SEC polymer purity transformation trend chart of formulations A2 and A3 is shown in Figure 2. From the above results, it can be seen that the SEC-HPLC purity of test example A3 has been greatly improved compared with test example A2. Specifically, in Test Example A3, compared with Test Example A2, the SEC-HPLC main peak purity increased by 5.9% and the aggregates decreased by 5.9%. In industry, it is difficult to improve protein stability. An improvement of 1-2% purity is of high significance, and an improvement of 5.9% purity is a very significant breakthrough.
  • test results of Test Examples A1-A4 show that the self-buffering preparation of the present application that does not contain histidine and phosphate buffers shows excellent stability throughout the entire research process.
  • Table 1.7 and Table 1.8 show the MFI test results of insoluble particles.
  • test example A3 has improved nr-SDS-PAGE and rCE-SDS purity.
  • test example A3 has improved insoluble particles compared with A1 and A2.
  • the A3 preparation has lower concentrations of insoluble particles. This is a surprising result.
  • the improvement of insoluble particles can reduce the rate of adverse reactions in patients due to injection. Therefore, the results of this test indicate that the self-buffering formulation of the present application has excellent performance in ophthalmic administration. Prospects.
  • Example 2 Stability comparison of self-buffering system preparations containing different concentrations of L-arginine hydrochloride
  • Test Examples B1-B7 are self-buffering preparations containing different concentrations of L-arginine hydrochloride. The contents of each component are shown in Table 2.1. The concentration of aflibercept in B1-B7 is approximately 114.3 mg/mL.
  • Example 2 tested the effects of adding 20mM, 40mM, 50mM, 60mM, 70mM, 80mM, and 100mM L-arginine hydrochloride on the stability of the pharmaceutical composition.
  • Example 3 Stability comparison of self-buffering system preparations containing different types and concentrations of stabilizers
  • Test examples C1-C10 are self-buffering preparations containing different types and concentrations of stabilizers.
  • the content of aflibercept is approximately 114.3 mg/mL.
  • the contents of each component are shown in Table 3.1.
  • Example 3 examined the effects of different stabilizer types and concentrations on the stability of pharmaceutical compositions.
  • Table 3.2-3.11 shows the SEC-HPLC, rCE-SDS, and nr-SDS-PAGE Monomer/MAIN ( Main peak), HMWS (polymer), and fragment (LMWS) percentage results.
  • Figure 5 shows the SEC main peak purity transformation trend of preparations C1-C10 at 37°C ⁇ 2°C.
  • sucrose and trehalose have obvious protective effects on aflibercept.
  • Adjust the pH value, protein content and polysorbate 20 content in different self-buffering system preparations Each component is shown in Table 4.1.
  • the stability of aflibercept preparations under the following conditions was tested: 6w/v% sucrose, 50mM L-arginine hydrochloride, pH values of 5.5, 5.8, and 6.1 respectively, and protein contents of approximately 100mg/mL and approximately 114.3mg respectively.
  • polysorbate 20 is 0.01w/v%, 0.03w/v%, 0.05w/v% respectively.
  • the test results are shown in Table 4.2-4.12. From the above results, it can be seen that the main peak purity of preparations D1-D10 0h SEC-HPLC is above 99.0%; the results of 2-8°C 1M and 25°C 1M show that the D1-D10 preparations The purity of the main peak of SEC-HPLC is between 97.7% and 98.9%; the viscosity of the preparation is between 5.6-10.1cP, and the osmotic pressure result is 342-387mOsmol/kg. The above results show that the stability of high-concentration self-buffering preparations is maintained at a good level within the range of protein content 100-125mg/mL, pH 5.5-6.1, and polysorbate 20 content 0.01-0.05w/v%.
  • Table 5.1 shows component information for both formulations.
  • To prepare the formulation solution dilute it with the expected excipient solution, add the excipient to be added to the antibody solution in the form of a stock solution, sterile filter all formulations through a 0.22 ⁇ m low protein binding filter, and fill under sterile conditions to In sterile 2mL tube vials, use a film-coated rubber stopper and an aluminum-plastic combination cap to seal.
  • HMWS high molecular weight species
  • LMWS major peaks
  • Figure 6 is the SEC purity transformation trend chart of preparations F5 and F6 at 2-8°C and 37°C ⁇ 2°C. From the results, it can be found that after stability investigation of 3M at 2-8°C and 1M at 37°C, there is no significant difference in the purity of the main peak of preparation F1-F4SEC-HPLC, indicating that the preparation has good stability in the range of pH 5.8-6.4; at 37°C At 1 M, there is no significant difference in the purity of the main peaks of F5 and F6 SEC-HPLC, indicating that the freeze-dried preparation of the present application has good stability and feasibility.

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Abstract

提供一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物，包含VEGF结合分子、稳定剂和表面活性剂等，该组合物的pH为5.0-7.0。该药物组合物没有额外添加缓冲剂，具有很高的稳定性，方便储存，应用前景广阔。

Description

一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物
本申请要求于2022年09月16日提交中国专利局、申请号为CN202211134160.6、发明名称“一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物”的中国专利申请，2022年09月20日提交中国专利局、申请号为CN202211141413.2、发明名称“一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物”的中国专利申请，2023年09月07日提交中国专利局、申请号为CN202311153498.0、发明名称“一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本申请涉及药物组合物技术领域，具体涉及一种稳定的高浓度自缓冲药物组合物。
背景技术
血管内皮生长因子(VEGF)是血管生成和新生血管形成的已知调节剂，并且已被证明是与肿瘤和眼部疾病或障碍形成的关键因子。包括VEGF受体融合蛋白或VEGF抗体在内的许多VEGF结合分子已被批准用于人类和其他哺乳动物中的治疗性用途。例如，(Regeneron Pharmaceuticals，Inc.)，其是一种抗VEGF药物，通过与VEGF紧密结合，降低血管通透性，进一步抑制新生血管的生成。美国食品药品监督管理局(Food and drug administration，FDA)和欧洲药物管理局(European medicines agency，EMA)从2014年8月以来相继批准了其通过玻璃体注射治疗视网膜静脉阻塞继发黄斑水肿、湿性年龄相关性黄斑变性和糖尿病性黄斑水肿等适应症。
但是，现有技术还存在着许多不足和需要改进的地方。例如，药物配制品中治疗性抗体的浓度根据施用途径等方式的不同存在广泛地变化。当受注射体积限制时，通常需要开发高浓度的抗体配制品。例如，对于玻璃体内注射或皮下给药经常需要开发高浓度的配制品。同时，蛋白质药物的配制本身就可能给制药科学家带来许多挑战。因此，必须找到一种稳定蛋白质药物并使其对由蛋白水解，变性等导致的降解、聚集、错误折叠等具有抗性的制剂。特别是对于在实质性方面与已知蛋白质不同的工程化蛋白质，找到合适的稳定性条件可能具有挑战性。还令人希望的是具有对患者方便的形式的蛋白质药物。所希望的特性包括环境温度和冷藏温度下的稳定性、长期储存的适用性、合适的给药时间和给药剂量，以及最小化给予后的不适。
虽然现有技术中已经发现了适合于玻璃体内施用的制剂，但是目前仍需要稳定的适合眼科给药的高浓度VEGF受体融合蛋白的液体制剂。含有高浓度VEGF受体融合蛋白的制剂可以减少给药体积，缩短眼部注射时间，增加给药剂量，延长给药间隔，降低给药频率，并提高制造和储存效率。同时，研究还发现很多常用的用于配制药物蛋白的缓冲剂，尤其对于眼科用药，具有一定的限制和风险，有可能影响药物的安全性。
缓冲剂，例如：乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、组氨酸(咪唑)、磷酸盐和Tris，其已经被发现在用于配制药物蛋白时具有不希望的限制和缺点，具体而言，制剂中额外的组分，其使配制过程变得复杂，增加了有害组分、影响药物整体稳定性、贮存期限，同时增加最终用户可接受性的风险。本领域普遍知晓现有技术中虽存在无缓冲盐的体系，但针对具体药物获得有效的无缓冲盐体系的药物组合物是一项挑战性的工作，结果往往是难以预料，高浓度自缓冲体系的技术难度则更高，同时，在工业上，药物组合物稳定性的提高是很有挑战的，从制剂角度上，高蛋白浓度导致更高的蛋白聚集率，因为不同的组成成分更近距离的接触会导致分子间的吸引和自我聚集事件的发生。由于体积排阻和道南平衡效应，获得符合UF/DF步骤要求的pH和辅料浓度也是一项挑战，更高的蛋白浓度加剧了这种挑战，因此，有必要继续优化缓冲体系，开发稳定的适合眼科给药的高浓度VEGF受体融合蛋白的液体制剂。
发明内容
本申请的目的之一是提供改善的具有高浓度的、无需额外的缓冲剂的VEGF结合分子高浓度药物组合物，即，本申请提供了一种无缓冲盐的体系，高浓度的蛋白自缓冲药物组合物，发明人通过多年的探索和试验，最终制备获得了一种VEGF结合分子的高浓度自缓冲水性药物组合物。此外，本申请还令人惊讶的发现高浓度自缓冲体系药物组合物还具有很高的稳定性，应用前景广阔。
本申请公开了一种自缓冲高浓度的VEGF结合分子水性药物组合物。高浓度体系本身容易发生聚集事件使得制剂不稳定，而自缓冲高浓度体系更是如此，一般而言，自缓冲高浓度体系在室温条件下难于储存，聚集事件更是极易发生。本申请公开的阿柏西普药物组合物是稳定的，且具有对于生产、储存和分配药物而言足够的贮存期限。例如，本申请公开的自缓冲高浓度阿柏西普药物组合物在室温贮存条件(例如，25℃)下具有至少1个月、3个月或6个月的储存期限。
在一些实施方案中，本申请公开了一种药物组合物，当在加速条件(例如，25℃±2℃)下储存包装的样品时，1个月后在组合物中SEC-HPLC纯度有≥95％起始量的阿柏西普保留不变。在其它实施方案中，当在高温条件(40℃±2℃)下储存包装的样品时，本申请公开的自缓冲高浓度阿柏西普药物组合物相对于有缓冲体系的高浓度阿柏西普药物组合物均表现出了更好的效果。
在一些实施方案中，本申请公开了一种药物组合物，对不同粒径的不溶性微粒进行检测(≥2μm、≥5μm、≥10μm和/或≥25μm)，本申请公开的自缓冲高浓度阿柏西普药物组合物相对于有缓冲体系的高浓度阿柏西普药物组合物均表现出了更好的效果。
在一些实施方案中，本申请公开了一种自缓冲高浓度的VEGF结合分子水性或冻干药物组合物，其包含：①VEGF结合分子，所述VEGF结合分子选自VEGF受体融合蛋白或抗VEGF抗体或其抗原结合片段，所述VEGF结合分子的浓度为至少约100mg/mL；②稳定剂，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖、脯氨酸、脯氨酸的药学上可接受的盐、赖氨酸、赖氨酸的药学上可接受的盐或山梨醇中的至少一种；③表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或泊洛沙姆中的至少一种；其中，水性药物组合物不包含缓冲剂且具有约5.0-7.0的pH。
在一些实施方案中，水性药物组合物不包含缓冲剂，所述缓冲剂指的是组氨酸缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、乙酸缓冲剂、碳酸缓冲剂、丁二酸缓冲剂、酒石酸缓冲剂和/或顺丁烯二酸缓冲剂。
在一些实施方案中，自缓冲高浓度的VEGF结合分子水性或冻干药物组合物还包含：④L-精氨酸、L-精氨酸的药学上可接受的盐或氯化钠中的至少一种。
在一些实施方案中，所述L-精氨酸或所述L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为约0-100mM，或所述氯化钠的含量为约0-40mM。在优选的实施方案中，L-精氨酸或L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为约20-100mM，或氯化钠的含量为约40mM。在更优选的实施方案中，L-精氨酸或L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为约20mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM或约100mM。
在一些实施方案中，水性药物组合物中VEGF结合分子的浓度至少为约100mg/mL、至少为约114.3mg/mL、至少为约125mg/mL或至少为约180mg/mL。
在一些实施方案中，水性药物组合物包含约100-180mg/mL的VEGF结合分子。在优选的实施方案中，水性药物组合物包含约100-125mg/mL的VEGF结合分子。
在一些实施方案中，水性药物组合物中稳定剂的浓度为约5w/v％-10w/v％。在一些实施方案中，稳定剂选自约5w/v％-9w/v％的蔗糖或者约5.5w/v％-10w/v％的海藻糖，在优选的实施方案中，蔗糖的浓度为约5w/v％、约6w/v％、约7w/％、约8w/v％或约9w/v％，或海藻糖的浓度为约5.5w/v％、约6.6w/v％、约7.7w/v％、约8.0w/v％或约10w/v％。
在一些实施方案中，表面活性剂选自约0.01w/v％-0.05w/v％的聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或泊洛沙姆中的至少一种。在优选的实施方案中，表面活性剂为聚山梨醇酯20，所述聚山梨醇酯20的含量为约0.01w/v％、约0.03w/v％、约0.05w/v％、0.07w/v％、约0.1w/v％或约0.2w/v％。
在一些实施方案中，水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；优选的，所述pH为约5.5、约5.8、约6.0、约6.1、约6.2或约6.4。
在一些实施方案中，水性药物组合物包含浓度为约100-180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％-9w/v％的蔗糖或约5.5w/v％-10w/v％的海藻糖、约0.01w/v％-0.2w/v％的聚山梨酯20、约0-100mM的L-盐酸精氨酸或约0-40mM的氯化钠；其中，所述水性药物组合物的pH为约5.0-7.0。
在一些实施方案中，水性药物组合物包含浓度为约100-180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％-7w/v％的蔗糖或约5.5w/v％-7.7w/v％的海藻糖、约0.01w/v％-0.2w/v％的聚山梨酯20、约20-100mM的L-盐酸精氨酸或约0-40mM的氯化钠；其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4。
在一些实施方案中，水性药物组合物选自如下任一种：
水性药物组合物A包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物B包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物C包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物D包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物E包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物F包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物G包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物H包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物I包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物J包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物K包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物L包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物M包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物N包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物O包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山 梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物P包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物Q包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物R包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物S包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物T包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物U包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物V包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物W包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物X包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物Y包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.01w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物Z包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.05w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZA包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZB包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZC包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZD包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZE包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZF包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZG包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZH包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZI包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZJ包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZK包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZL包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZM包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZN包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZO包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZP包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZQ包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚 山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZR包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZS包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZT包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZU包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZV包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZW包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZX包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZY包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.01w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物ZZ包含：浓度为约125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.05w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AA包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AB包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AC包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AD包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AE包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AF包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AG包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AH包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AI包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AJ包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AK包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AL包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AM包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AN包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AO包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AP包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AQ包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AR包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AS包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨 酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AT包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AU包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7w/v％的蔗糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AV包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5.5w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AW包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约6.6w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AX包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约7.7w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AY包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.01w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物AZ包含：浓度为约180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约5w/v％的蔗糖、约0.05w/v％的聚山梨酯20和约50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
水性药物组合物BA包含：浓度为约114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、约8w/v％的海藻糖、约0.03w/v％的聚山梨酯20和约20mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为约5.5-6.4；
优选地，所述VEGF受体融合蛋白为阿柏西普。
在一些实施方案中，VEGF结合分子包含两条多肽，每条多肽包含VEGFR1的免疫球蛋白样(Ig)结构域2和VEGFR2的免疫球蛋白样(Ig)结构域3。在优选的实施方案中，VEGF结合分子选自贝伐单抗、雷珠单抗、阿柏西普或康柏西普。在更优选的实施方案中，VEGF结合分子为阿柏西普。
在一些实施方案中，所述药物组合物在2-8℃下是稳定的，稳定持续至少6个月、12个月或24个月；或所述药物组合物在25℃±2℃下是稳定的，稳定持续至少1个月、3个月或6个月。
在一些实施方案中，本申请提供了一种冻干制剂，其由根据本申请的水性药物组合物经冻干获得，或者所述冻干制剂经复溶以后获得本申请的水性药物组合物。
在一些实施方案中，本申请提供了一种递送装置，其包含本申请中的水性药物组合物或复溶后的冻干制剂。在一个优选实施方案中，递送装置为预填充的注射器。
在一些实施方案中，本申请提供了一种治疗由VEGF介导的眼部疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用本申请公开的水性药物组合物或递送装置。在一个优选实施方案中，所述施用的部位是玻璃体内。
在一些实施方案中，本申请提供了本申请的水性药物组合物或递送装置在制备治疗由VEGF介导的眼部疾病或障碍的药物组合物中的用途，所述治疗包括向受试者施用本申请的水性药物组合物或递送装置。在一个优选实施方案中，所述施用的部位是玻璃体内。
在一些实施方案中，眼部疾病或障碍包括眼部新生血管性疾病或血管原性眼病。
在一些实施例中，眼部疾病或障碍包括新血管性(湿性)老年性黄斑变性(AMD)年龄相关性黄斑变性(湿性)、黄斑水肿、视网膜静脉阻塞后的黄斑水肿、视网膜静脉阻塞(RVO)、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、视网膜分支静脉阻塞(BRVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、脉络膜新生血管(CNV)、虹膜新生血管、新生血管性青光眼、青光眼的手术后纤维化、增生性玻璃体视网膜病变(PVR)、视盘新血管形成、角膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、玻璃体新生血管形成、角膜翳、翼状胬肉、血管性视网膜病、糖尿病性视网膜病变(DR)、非增殖性糖尿病性视网膜病和/或增殖性糖尿病性视网膜病。
在一些实施方案中，公开了一种向受试者递送VEGF结合分子的方法，包括向所述受试者施用本申请的水性药物组合物或递送装置的步骤。在一个优选实施方案中，所述施用的部位是玻璃体内。
本申请提供的药物组合物不需要额外添加缓冲剂，具有很高的稳定性，方便储存，应用前景广阔。
附图说明
附图更进一步说明了本申请所公开的新特性。参照这些附图将能更好地理解本申请中所公开的特性和优点，但应当理解，这些附图仅用于说明本申请所公开原理的具体的实施方案，而非意欲对所附权利要求的范围加以限制。
图1是40℃±2℃下制剂A2、A3的SEC主峰纯度变换趋势图。
图2是不同放置条件下制剂A2、A3的SEC聚体纯度变换趋势图。
图3是不同放置条件下制剂B1、B2、B3、B4、B5的SEC主峰纯度变换趋势图。
图4是制剂B1、B2、B3、B4、B5所对应的黏度曲线图。
图5是37℃±2℃下制剂C1-C10的SEC主峰纯度变换趋势图。
图6是2-8℃和37℃±2℃下制剂F5和F6的SEC纯度变换趋势图。
具体实施方式
术语“约”包括并描述了值或参数本身。例如，“约x”包括并描述了“x”本身。如本申请所使用的，当与测量值结合使用或用于修饰值、单位、常数或一系列值时，术语“约”除了包括该值或参数本身外，还指±1％-10％的变化。在一些实施例中，当与测量值结合使用或用于修饰值、单位、常数或一系列值时，术语“约”指±1％、±2％、±3％、±4％、±5％、±6％、±7％、±8％、±9％或±10％的变化。
术语“水性”药物组合物是指包括水的药物组合物。
术语“自缓冲”是指，排除传统上用于在制剂中引入缓冲能力的组分，例如排除缓冲剂包括但不限于：组氨酸缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、乙酸缓冲剂、碳酸缓冲剂、丁二酸缓冲剂、酒石酸缓冲剂、顺丁烯二酸缓冲剂或其混合物等等。除了存在于不含缓冲剂组分的制剂中的任何缓冲能力之外，已知蛋白质可为制剂提供缓冲能力。因此，这些术语并不意味着配方不能具有任何缓冲能力。
术语“高浓度”制剂包含浓度为至少100mg/mL、101mg/mL、102mg/mL、103mg/mL、104mg/mL、105mg/mL、106mg/mL、107mg/mL、108mg/mL、109mg/mL、110mg/mL、111mg/mL、112mg/mL、113mg/mL、114mg/mL、114.1mg/mL、114.2mg/mL、114.3mg/mL、114.4mg/mL、114.5mg/mL、114.6mg/mL，114.7mg/mL，114.8mg/mL、114.9mg/mL、115mg/mL、116mg/mL、117mg/mL、118mg/mL、119mg/mL、120mg/mL、121mg/mL、122mg/mL、123mg/mL、124mg/mL、125mg/mL、126mg/mL、127mg/mL、128mg/mL、129mg/mL、130mg/mL、131mg/mL、132mg/mL、133mg/mL、134mg/mL、135mg/mL、136mg/mL、137mg/mL、138mg/mL、139mg/mL、140mg/mL、141mg/mL、142mg/mL、143mg/mL、144mg/mL、145mg/mL、146mg/mL、147mg/mL、148mg/mL、149mg/mL、150mg/mL、151mg/mL、152mg/mL、153mg/mL、154mg/mL、155mg/mL、156mg/mL、157mg/mL、158mg/mL、159mg/mL、160mg/mL、161mg/mL、162mg/mL、163mg/mL、164mg/mL、165mg/mL、166mg/mL、167mg/mL、168mg/mL、169mg/mL、170mg/mL、171mg/mL、172mg/mL、173mg/mL、174mg/mL、175mg/mL、176mg/mL、177mg/mL、178mg/mL、179mg/mL、180mg/mL的VEGF受体融合蛋白浓度。
术语“VEGF结合分子”是指VEGF受体融合蛋白、抗VEGF抗体或抗原结合片段或VEGF特异性结合的抗体或片段。例示性的VEGF受体融合蛋白包括阿柏西普(Regeneron Pharmaceuticals，Inc.)，参见国际专利申请公开WO2005/121176或WO2007/112675。
术语“VEGF受体融合蛋白”是指包含与另一个多肽融合的一个或多个VEGF受体或其结构域的分子，其干扰VEGF和天然VEGF受体之间的相互作用，例如，其中两个这样的融合多肽结合，从而形成同型二聚体或其他多聚体。这样的VEGF受体融合蛋白可以被称为“VEGF-Trap”或“VEGF Trap”。在本申请内容范围内的落入该定义的VEGF受体融合蛋白包括嵌合多肽，其包含VEGF受体的两个或更多个免疫球蛋白(Ig)样结构域，例如VEGFR1(也称为Flt1)和/或VEGFR2(也称为Flk1或KDR)，并且也可包含多聚结构域(例如Fc结构域)。
术语“阿柏西普”包括其生物相似形式，阿柏西普的生物相似形式通常是指包含相同氨基酸序列的产品。示例中阿柏西普的氨基酸序列和核酸序列已在文献中有所记载，参见WO2000075319A1中所示。
术语“治疗”在本申请中使用时表示本申请所描述的治疗手段。所述“治疗”的方法采用向需要此类治疗的受试者(例如，患有VEGF介导的眼部障碍的受试者或最终可能获得此类障碍的受试者)施用本申请的抗体，以预防、治愈、延迟障碍或复发的障碍，减轻障碍或复发的障碍的严重性，或改善障碍或复发的障碍的一种或多种症状，或者为了延长受试者的存活使其超过在没有这样的治疗下所预期的存活期。
术语“受试者”或“患者”是指人和非人哺乳动物，包括但不限于灵长类动物、兔、猪、马、狗、猫、绵羊和牛。
蛋白质含量测定：采用Lunatic微量光谱分析仪对蛋白质含量进行测定。以纯化水进行空白扣除，以330nm的光散射校正280nm的紫外光吸收，依照公式1计算蛋白质浓度，其中消光系数ε为1.5(L/g·cm-1)。
分子排阻层析(SEC)：使用分子大小排阻层析来量化聚合体、单体和片段。这种测定利用TSKgel G3000SWXL7.8x300mm 5μm柱，并在Waters e2695-2489HPLC系统上运行。流动相为磷酸钾盐缓冲剂。用流动相稀释样品到1mg/mL，注射体积为25μL。以0.5mL/min的流速将蛋白质等度洗脱30min，于215nm检测洗脱物的吸光度。利用Empower 3软件进行积分处理。
还原毛细管电泳(rCE-SDS)：通过还原毛细管电泳(rCE-SDS)测定％(主峰1+主峰2)纯度，将这一测定在SCIEX PA800plus毛细管电泳系统上以50μm I.D.非涂层石英毛细管进行，毛细管有效分离长度20cm，全长30.2cm分离，PDA220nm带宽10nm检测，利用32Karat软件进行积分处理。
非还原SDS-PAGE(nrSDS-PAGE)：通过非还原SDS-PAGE电泳法测定％主峰纯度，这种测定使用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行，分离胶浓度为8％，浓缩胶浓度为4.5％，以恒流10mA/块胶条件下进行电泳检测，考马斯亮蓝R250染色、脱色液脱色后采用凝胶成像系统进行扫描成像，并分析其目标带纯度。
成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)：通过成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)法测定电荷异质性及鉴别实验，这种测定在成像毛细管电泳仪Maurice C系统上进行，毛细管有效分离长度5cm，聚焦时间6min，聚焦程序1.5kV-1min，3kV-5min检测，利用Empower 3软件进行积分处理。
MFI微流成像颗粒分析：通过MFI微流成像颗粒分析系统测定微粒数，将这一测定在MFI颗粒分析系统MFI 5200中进行，待测样品体积为1mL，总有效体积为0.7mL，分析体积0.51mL，利用MVSS分析软件进行分析。
m-VROC型粘度计测定黏度：通过Rheosense的技术构建的e-VROCTM是同时测量拉伸粘度和剪切粘度的出色工具。粘度计使用MEMS压力传感器测量收缩上游和下游的压力，并记录流量变化。流体通过收缩/膨胀经历几乎恒定的拉伸，从而能够计算表观拉伸粘度。
冰点下降法测定渗透压摩尔浓度：采用测量溶液的冰点下降来间接测定其渗透压摩尔浓度。在理想的稀溶液中，冰点下降符合△Tf＝Kf·m的关系，式中，△Tf为冰点下降，Kf为冰点下降常数(当水为溶剂时为1.86)，m为重量摩尔 浓度。而渗透压符合Po＝ko·m的关系，式中，Po为渗透压，ko渗透压常数，m为溶液的重量摩尔浓度。由于两式中的浓度等同，故可以用冰点下降法测定溶液的渗透压摩尔浓度。
ELISA测定结合活性：通过ELISA方法测定重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白注射液与VEGF165的结合活性。首先将人VEGF165蛋白包被在96孔板上，然后加入梯度稀释的本品，再依次加入二抗、显色液、终止液，读取吸光值，计算本品与人VEGF165抗原的结合能力。试验数据采用Soft Max Pro或其他同类软件进行四参数拟合分析，并按下式自动分析结果：参考品(自制)浓度的对数值为X轴，吸光值为Y轴，软件将给出供试品和参考品的半数有效浓度(EC50)，并绘制“S”型曲线。
本申请所述的VEGF结合分子的浓度、稳定剂的浓度、表面活性剂的浓度、L-精氨酸的浓度、L-精氨酸的药学上可接受的盐的浓度、氯化钠的浓度分别是指VEGF结合分子、稳定剂、表面活性剂、L-精氨酸的浓度、L-精氨酸的药学上可接受的盐、氯化钠在水性药物组合物中的浓度。
下述实施例中的实验条件分别为：室温(25±2℃)振荡一周(25℃1W)、冻融循环3次(-40℃冻16h、25℃融8h为一次循环)、2-8℃放置1个月(2-8℃1M)、2-8℃放置6个月(2-8℃6M)、25℃±2℃放置1个月(25℃1M)、40℃±2℃放置一周(40℃1W)、40℃±2℃放置二周(40℃2W)或40℃±2℃放置1个月(40℃1M)。
实施例1：自缓冲体系制剂样品制备
测试了具有约40mg/mL、约114.3mg/mL和约180mg/mL VEGF受体融合蛋白(阿柏西普，又称阿帕西普，aflibercept)的四种不同制剂的长期效力、物理稳定性和电荷异质体的形成。四种制剂的组分含量如表1.1所示。为配制制剂溶液，使用预期的辅料溶液进行缓冲剂交换，并通过超滤浓缩至所需抗体浓度。完成超滤浓缩后，将要添加的辅料以母液形式添加至抗体溶液中，将所有配制剂通过0.22μm低蛋白质结合滤器无菌过滤，并在无菌条件下灌装至无菌2mL管制瓶中，使用覆膜胶塞和铝塑组合盖密封。通过SEC-HPLC、nr-SDS-PAGE、rCE-SDS，以确定高分子量种类(HMWS、LMWS)和主要峰(Monomer/MAIN)的存在(％)，评估每种制剂在不同条件的储存过程中阿柏西普的稳定性。
以下是不同的制剂及其稳定性结果：
表1.1含有阿柏西普的制剂组成
注：“-”表示未添加。
表1.2制剂A1的稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表1.3制剂A2的稳定性数据

注：“/”表示未检测出。
表1.4制剂A3的稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表1.5制剂A4稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表1.6制剂A2-A4黏度和渗透压数据
试验例A1和试验例A2为具有缓冲剂体系的方案、试验例A3和试验例A4为自缓冲体系方案。实验结果发现：在室温(25±2℃)振荡一周、冻融循环3次、2-8℃放置6个月的条件下，试验例A1、试验例A2、试验例A3样品较稳定，SEC-HPLC纯度等无明显变化。在25℃放置1个月的条件下，试验例A1、试验例A2、试验例A3、试验例A4，除nr-SDS-PAGE纯度明显下降外，其他各个纯度均无明显变化。
在40℃±2℃放置1个月的条件下，试验结果如表1.2-1.4所示，40℃±2℃下制剂A2、A3的SEC主峰纯度变换趋势图如图1所示，不同放置条件下制剂A2、A3的SEC聚体纯度变换趋势图如图2所示。从上述结果可知，试验例A3的SEC-HPLC纯度较试验例A2获得了较大的提升。具体而言，试验例A3与试验例A2相比，SEC-HPLC主峰纯度提高了5.9％，聚集体降低5.9％。在工业上，蛋白质稳定性的提高很困难，1-2％纯度的提高具有有很高的意义，5.9％的纯度提高是一个非常显著的突破。另外在制备工艺过程中自缓冲体系的高浓度制剂制备更加节约辅料的成本。综上，试验例A1-A4的试验结果表明，本申请的不含组氨酸和磷酸盐缓冲剂的自缓冲制剂在整个研究过程中均显示出极好的稳定性。
表1.7不溶性微粒—MFI结果
表1.8不溶性微粒—MFI结果(形态学分析)
表1.7、表1.8显示了不溶性微粒的MFI检测结果。对于眼科玻璃体内注射的产品来说，聚集体的降低，有望降低患者的免疫原性等一系列不良反应。试验例A3相比于A1和A2，nr-SDS-PAGE、rCE-SDS纯度有所改善。同时，试验例A3与A1和A2相比，不溶性微粒有所改善，在对于≥2μm、≥5μm、≥10μm和≥25μm不溶性微粒的分析中，A3制剂均具有浓度更低的不溶性微粒。这是一个令人惊讶的结果，对于眼科给药来说，不溶性微粒的改善可以降低由于注射导致的患者不良反应率，因此，本试验结果表明本申请的自缓冲制剂在眼科给药中具有优异的前景。
实施例2：含有不同L-盐酸精氨酸浓度的自缓冲体系制剂的稳定性比较
试验例B1-B7为含有不同L-盐酸精氨酸浓度的自缓冲制剂，各个组分含量如表2.1所示，其中B1-B7中阿柏西普的浓度为约114.3mg/mL。实施例2检测了分别添加20mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、100mM的L-盐酸精氨酸对药物组合物稳定性的影响。
表2.1含有不同L-盐酸精氨酸浓度的制剂
表2.2制剂B1稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.3制剂B2稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.4制剂B3稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.5制剂B4稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.6制剂B5稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.7制剂B6稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表2.8制剂B7稳定性数据

注：“/”表示未检测出。
通过SEC-HPLC、nr-SDS-PAGE、rCE-SDS评估了不同浓度的L-盐酸精氨酸的自缓冲制剂在2-8℃、25℃±2℃、37℃±2℃条件下的物理稳定性，实验结果如表2.2-2.8以及图3-4所示，其中图3是不同放置条件下制剂B1、B2、B3、B4、B5的SEC主峰纯度变换趋势图，图4是制剂B1、B2、B3、B4、B5所对应的黏度曲线图。
上述试验结果表明：在2-8℃3M和25℃1M的条件下，含有20mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、100mM的L-盐酸精氨酸的药物组合物稳定性均非常优异，其各项纯度与初期(0时)相比，均无明显变化，同时不同浓度的L-盐酸精氨酸对制剂黏度无明显影响。
实施例3：含有不同稳定剂种类和浓度的自缓冲体系制剂的稳定性比较
试验例C1-C10为含有不同种类和浓度稳定剂的自缓冲制剂，其中阿柏西普的含量均为约114.3mg/mL，各个组分含量如表3.1所示。实施例3检测了不同稳定剂种类和浓度对药物组合物稳定性的影响。
表3.1含有阿柏西普的制剂
注：“-”表示未添加。
表3.2制剂C1稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.3制剂C2稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.4制剂C3稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.5制剂C4稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.6制剂C5稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.7制剂C6稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.8制剂C7稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.9制剂C8稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.10制剂C9稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.11制剂C10稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表3.2-3.11显示了C1-C10制剂在0h、37℃±2℃、2-8℃及25℃±2℃条件下的SEC-HPLC、rCE-SDS、nr-SDS-PAGE的Monomer/MAIN(主峰)、HMWS(聚体)、片段(LMWS)百分比结果，图5是显示了37℃±2℃下制剂C1-C10的SEC主峰纯度变换趋势。从上述结果可以看出：通过添加蔗糖、海藻糖、山梨醇、脯氨酸、盐酸赖氨酸等辅料制备了C1-C10十种纯度较高的自缓冲高浓度制剂，且0h SEC-HPLC主峰纯度均在98.7％以上；37℃1M结果显示，C1-C3制剂SEC-HPLC主峰纯度在86.1％-88.8％之间；C4-C6制剂SEC-HPLC主峰纯度在88.7％-91.0％之间；C7、C8、C9制剂SEC-HPLC主峰纯度分别为78.4％、67.3％和85.1％；rCE-SDS、nr-SDS-PAGE各制剂纯度变化未见明显差异。
以上试验结果表明，蔗糖和海藻糖对阿柏西普有着明显的保护作用，进一步探索蔗糖与海藻糖的含量范围，发现蔗糖浓度在5w/v％-7w/v％，海藻糖浓度在5.5w/v％-7.7w/v％的范围内时，药物组合物均具有优异的稳定性。
实施例4：不同自缓冲体系制剂的稳定性比较
调节不同自缓冲体系制剂中pH值、蛋白质含量和聚山梨酯20含量，各个组分如表4.1所示。测试了条件如下的阿柏西普制剂的稳定性：6w/v％蔗糖，50mM L-盐酸精氨酸，pH值分别为5.5、5.8、6.1，蛋白质含量分别为约100mg/mL、约114.3mg/mL、约125mg/mL，聚山梨酯20分别为0.01w/v％、0.03w/v％、0.05w/v％。
表4.1含有阿柏西普的制剂

表4.2制剂D1稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.3制剂D2稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.4制剂D3稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.5制剂D4稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.6制剂D5稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.7制剂D6稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.8制剂D7稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.9制剂D8稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.10制剂D9稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.11制剂D10稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表4.12制剂D1-D10黏度及渗透压数据
试验结果如表4.2-4.12所示，从上述结果可以看出：制剂D1-D10 0h SEC-HPLC主峰纯度均在99.0％以上；2-8℃1M和25℃1M的结果显示，D1-D10制剂SEC-HPLC主峰纯度在97.7％-98.9％之间；制剂黏度在5.6-10.1cP，渗透压结果为342-387mOsmol/kg。上述结果表明，在蛋白质含量100-125mg/mL、pH 5.5-6.1、聚山梨酯20含量0.01-0.05w/v％范围内，高浓度自缓冲制剂稳定性均保持在良好的水平上。
实施例5：制剂稀释试验
为模拟稀释后的阿柏西普在玻璃体内的稳定性，测试了具有2mg/mL和0.1mg/mL的阿柏西普的制剂的稳定性。表5.1显示了两种制剂的组分信息。为配制制剂溶液，使用预期的辅料溶液进行稀释，将要添加的辅料以母液形式添加至抗体溶液中，将所有配制剂通过0.22μm低蛋白质结合滤器无菌过滤，并在无菌条件下灌装至无菌2mL管制瓶中，使用覆膜胶塞和铝塑组合盖密封。通过SEC-HPLC，以确定高分子量种类(HMWS、LMWS)和主要峰(Monomer/MAIN)的存在(％)，评估两种制剂在37℃储存过程中阿柏西普的稳定性，以表征药品在玻璃体内的稳定性。
表5.1含有阿柏西普的制剂
表5.2制剂E1稳定性数据
表5.3制剂E2稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
试验结果如表5.2-5.3所示，通过以上结果可以发现：经过37℃3M的稳定性考察，制剂1与制剂2SEC-HPLC主峰纯度未有明显变化，说明模拟的稀释后的阿柏西普在玻璃体内具有良好的稳定性。
实施例6：制剂冻干和pH试验
为了进一步确认pH值范围以及考察冻干制剂稳定性，分别在pH 5.8、6.0、6.2、6.4条件下，考察制剂的稳定性，同时制备冻干制剂样品。将所有配制剂通过0.22μm低蛋白质结合滤器无菌过滤，并在无菌条件下灌装至无菌2mL管制瓶中，使用覆膜胶塞和铝塑组合盖密封。将这些制剂溶液放置在如下条件：37℃1M和2-8℃3M，考察样品的稳定性。表6.1是不同的制剂信息，其中阿柏西普的含量为约114.3mg/mL，表6.2-6.7是不同的制剂的稳定性结果。
表6.1含有阿柏西普的制剂
注：“-”表示未添加。
表6.2制剂F1稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表6.3制剂F2稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表6.4制剂F3稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表6.5制剂F4稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表6.6制剂F5冻干粉稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
表6.7制剂F6冻干粉稳定性数据
注：“/”表示未检测出。
试验结果如表6.2-6.7和图6所示，其中图6是2-8℃和37℃±2℃下制剂F5和F6的SEC纯度变换趋势图。通过结果可以发现：经过2-8℃3M及37℃1M的稳定性考察，制剂F1-F4SEC-HPLC主峰纯度无明显差异，表明制剂在pH为5.8-6.4的范围内稳定性良好；在37℃1M下，F5和F6SEC-HPLC主峰纯度无明显差异，表明本申请的冻干制剂具有很好的稳定性和可行性。
上文所述的本申请的实施方案仅为示例性的，任何本领域技术人员都可以认识到或者可以确定无数的特定化合物、材料和操作的等价物，而不需要进行超出常规的试验。所有这些等价物都是在本申请范围之内的，并且被权利要求所包含。

Claims (24)

  1. 一种水性药物组合物，其包含：
    ①VEGF结合分子，所述VEGF结合分子选自VEGF受体融合蛋白或抗VEGF抗体或其抗原结合片段，所述VEGF结合分子的浓度至少为100mg/mL；
    ②稳定剂，所述稳定剂选自蔗糖、海藻糖、脯氨酸、脯氨酸的药学上可接受的盐、赖氨酸、赖氨酸的药学上可接受的盐或山梨醇中的至少一种；
    ③表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20或泊洛沙姆中的至少一种；
    其中，所述水性药物组合物不包含缓冲剂且pH为5.0-7.0。
  2. 根据权利要求1所述的水性药物组合物，其中，所述水性药物组合物还包含：④L-精氨酸、L-精氨酸的药学上可接受的盐或氯化钠中的至少一种；
    优选地，所述L-精氨酸或所述L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为0-100mM，或所述氯化钠的含量为0-40mM。
  3. 根据权利要求2所述的水性药物组合物，其中，所述L-精氨酸或所述L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为20-100mM，或所述氯化钠的含量为40mM；
    优选地，所述L-精氨酸或所述L-精氨酸的药学上可接受的盐的含量为20mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM或100mM。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述水性药物组合物中VEGF结合分子的浓度至少为100mg/mL、至少为114.3mg/mL、至少为125mg/mL或至少为180mg/mL；
    优选地，所述水性药物组合物中VEGF结合分子的浓度为100-180mg/mL，优选为100-125mg/mL。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述稳定剂的浓度为5w/v％-10w/v％；优选地，所述稳定剂选自蔗糖或海藻糖，所述蔗糖的浓度为5w/v％-9w/v％，所述海藻糖的浓度为5.5w/v％-10w/v％。
  6. 根据权利要求5所述的水性药物组合物，其中，所述蔗糖的浓度为5w/v％、6w/v％、7w/v％、8w/v％或9w/v％；
    或所述海藻糖的浓度为5.5w/v％、6.6w/v％、7.7w/v％、8.0w/v％或10w/v％。
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述表面活性剂的浓度为0.01w/v％-0.2w/v％。
  8. 根据权利要求7所述的水性药物组合物，其中，所述表面活性剂选自聚山梨醇酯20，所述的聚山梨醇酯20的浓度为0.01w/v％、0.03w/v％、0.05w/v％、0.07w/v％、0.1w/v％或0.2w/v％。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的水性药物组合物，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；优选地，所述pH为5.5、5.8、6.0、6.1、6.2或6.4。
  10. 根据权利要求1-9中任一项所述的水性药物组合物，其包含浓度为100-180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％-9w/v％的蔗糖或5.5w/v％-10w/v％的海藻糖、0.01w/v％-0.2w/v％的聚山梨酯20、0-100mM的L-盐酸精氨酸或0-40mM的氯化钠，所述水性药物组合物的pH为5.0-7.0。
  11. 根据权利要求1-9中任一项所述的水性药物组合物，其包含浓度为100-180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％-7w/v％的蔗糖或5.5w/v％-7.7w/v％的海藻糖、0.01w/v％-0.2w/v％的聚山梨酯20、40-80mM的L-盐酸精氨酸或0-40mM的氯化钠，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4。
  12. 一种水性药物组合物，选自：
    水性药物组合物A包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物B包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物C包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物D包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物E包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物F包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物G包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物H包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物I包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物J包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物K包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物L包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物M包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物N包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物O包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物P包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物Q包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物R包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物S包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物T包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物U包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物V包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物W包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物X包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物Y包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.01w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物Z包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.05w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZA包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZB包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZC包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZD包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZE包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZF包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZG包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZH包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZI包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZJ包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZK包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZL包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZM包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZN包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZO包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZP包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZQ包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZR包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZS包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZT包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZU包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZV包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZW包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZX包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZY包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.01w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物ZZ包含：浓度为125mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.05w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AA包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AB包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AC包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AD包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AE包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AF包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AG包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AH包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AI包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AJ包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AK包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AL包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和60mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AM包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AN包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AO包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AP包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AQ包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AR包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和70mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AS包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AT包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AU包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7w/v％的蔗糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AV包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5.5w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AW包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、6.6w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AX包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、7.7w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和80mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AY包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.01w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物AZ包含：浓度为180mg/mL的VEGF受体融合蛋白、5w/v％的蔗糖、0.05w/v％的聚山梨酯20和50mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    水性药物组合物BA包含：浓度为114.3mg/mL的VEGF受体融合蛋白、8w/v％的海藻糖、0.03w/v％的聚山梨酯20和20mM的L-盐酸精氨酸，其中，所述水性药物组合物的pH为5.5-6.4；
    优选地，所述VEGF受体融合蛋白为阿柏西普。
  13. 根据权利要求1-9中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述VEGF结合分子包含两条多肽，每条多肽包含VEGFR1的免疫球蛋白样结构域2和VEGFR2的免疫球蛋白样结构域3。
  14. 根据权利要求1-9中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述VEGF结合分子选自贝伐单抗、雷珠单抗、阿柏西普或康柏西普。
  15. 根据权利要求14所述的水性药物组合物，其中，所述VEGF结合分子为阿柏西普。
  16. 根据权利要求1-15中任一项所述的水性药物组合物，其中，所述水性药物组合物在2-8℃下稳定持续至少6个月、12个月或24个月；或所述水性药物组合物在25℃±2℃下稳定持续至少1个月、3个月或6个月。
  17. 一种冻干制剂，其由权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物经冻干获得，或者所述冻干制剂经复溶后获得权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物。
  18. 一种递送装置，其包含权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物或复溶后的权利要求17所述的冻干制剂。
  19. 根据权利要求18所述的递送装置，所述递送装置为预填充的注射器。
  20. 一种治疗由VEGF介导的眼部疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物或权利要求18或19所述的递送装置；优选地，所述施用的部位是玻璃体内。
  21. 权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物或权利要求18或19所述的递送装置在制备治疗由VEGF介导的眼部疾病或障碍的药物组合物中的用途。
  22. 根据权利要求20所述的方法或权利要求21所述的用途，其中，所述眼部疾病或障碍包括眼部新生血管性疾病或血管原性眼病。
  23. 根据权利要求22所述的方法或用途，其中，所述眼部疾病或障碍包括新血管性老年性黄斑变性年龄相关性黄斑变性、黄斑水肿、视网膜静脉阻塞后的黄斑水肿、视网膜静脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞、糖尿病性黄斑水肿、脉络膜新生血管、虹膜新生血管、新生血管性青光眼、青光眼的手术后纤维化、增生性玻璃体视网膜病变、视盘新血管形成、角膜新生血管形成、视网膜新生血管形成、玻璃体新生血管形成、角膜翳、翼状胬肉、血管性视网膜病、糖尿病性视网膜病变、非增殖性糖尿病性视网膜病和/或增殖性糖尿病性视网膜病。
  24. 一种向受试者递送VEGF结合分子的方法，包括向所述受试者施用权利要求1-16中任一项所述的水性药物组合物或权利要求18或19所述的递送装置的步骤；优选地，所述施用的部位是玻璃体内。
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