BR112015007772B1

BR112015007772B1 - formulação aquosa estéril injetável contendo ácido hialurônico reticulado e de hidroxiapatita para uso estético

Info

Publication number: BR112015007772B1
Application number: BR112015007772A
Authority: BR
Inventors: Gavard Molliard Samuel
Original assignee: Anteis Sa
Priority date: 2012-10-08
Filing date: 2013-09-24
Publication date: 2020-05-05
Also published as: CA2887316C; CN104703582A; RU2015115974A; JP2015536911A; MX2015004307A; EP2903589A2; WO2014056722A3; IL237848A0; TW201427708A; CA2887316A1; AU2013329751A1; IL237848B; CN104703582B; ZA201501697B; EP2903589B1; SG11201502743PA; US20180193232A1; PL2903589T3; US20150257989A1; KR101773989B1

Abstract

resumo formulação aquosa estéril injetável, kit e método de fabricação da mesma a presente invenção refere-se a uma formulação aquosa estéril injetável, pronta para uso, reabsorvível, utilizada para fins cosméticos, na forma de gel viscoelástico coesivo particulado compreendendo i) ácido hialurônico reticulado ou um de seus sais, a uma concentração entre 1% e 4% (massa/volume); a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, e ii) hidroxiapatita, a uma concentração de entre 5% a 60% (massa/volume), a referida hidroxiapatita estando sob a forma de partículas de tamanho médio menor que ou igual a 200 µm; a referida formulação aquosa estéril injetável tendo propriedades viscoelásticas tais que tand à frequência de 1 hz é inferior ou igual a 0,60.

Description

FORMULAÇÃO AQUOSA ESTÉRIL INJETÁVEL CONTENDO ÁCIDO HIALURÔNICO

RETICULADO E DE HIDROXIAPATITA PARA USO ESTÉTICO

CAMPO DA INVENÇÃO [0001] A presente invenção refere-se a uma formulação aquosa estéril injetável, pronta para uso, reabsorvível, utilizada para fins cosméticos, na forma de gel viscoelástico coesivo particulado compreendendo i) ácido hialurônico reticulado ou um de seus sais, a uma concentração entre 1% e 4% (massa/volume); a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, e ii) hidroxiapatita, a uma concentração de entre 5% a 60% (massa/volume), a referida hidroxiapatita estando sob a forma de partículas de tamanho médio menor que ou igual a 200 pm; a referida formulação aquosa estéril injetável tendo propriedades viscoelásticas tais que Tanõ à frequência de 1 Hz é inferior ou igual a 0,60.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0002] O envelhecimento é um fenômeno natural que todo indivíduo enfrenta. Ele é inevitavelmente acompanhado por uma diminuição na atividade celular do corpo humano.

[0003] Os sinais mais visíveis da idade aparecem na face: a pele se afrouxa e as primeiras rugas aparecem. Muitas soluções foram desenvolvidas para tentar retardar o aparecimento destes sinais de idade ou reparar os sinais já instalados.

[0004] Entre estas soluções, pode-se mencionar uma técnica que envolve a injeção dentro ou sob a pele de substâncias denominadas preenchedoras, estas substâncias podem ser

2/23 absorvíveis ou não absorvíveis in vivo. O papel destas substâncias é preencher as partes colapsadas, criando um volume dentro ou debaixo da pele, para o tratamento de diferentes partes do corpo, especialmente da face. Por este efeito mecânico, a pele é retensionada e as rugas são suavizadas, levando a uma aparência mais jovem da área tratada.

[0005] Entre as substâncias de preenchimento reabsorvíveis conhecidas pode-se citar o ácido hialurônico (AH) reticulado (também chamado “AH estabilizado”) utilizado em dermocosmética. É injetado dentro ou debaixo da derme para preencher as rugas ou restaurar o volume em diferentes áreas do corpo, durante um período de vários meses. Ele tem a vantagem de ter muito poucos efeitos colaterais e pós injeção e complicações extremamente raras no longo prazo. Por outro lado, em caso de má injeção, o praticante tem a oportunidade de corrigir o seu tratamento por injeção de uma solução de hialuronidase (enzimas específicas do AH), solução que irá degradar o produto à base de AH reticulado previamente injetado. As injeções de AH reticulado, devido ao seu desaparecimento gradual (reabsorção do polímero no tecido ao longo do tempo), devem ser repetidas em intervalos regulares, geralmente entre 6 e 12 meses, a fim de manter a eficácia do tratamento. O ácido hialurônico não reticulado, por sua vez, tem um curto tempo de residência na pele (meia-vida de menos de uma semana), é degradado ín vivo por diversos fatores, tais como a degradação por radicais, enzimática, térmica e mecânica. É então a reticulação que aumenta significativamente a sua meia-vida, retardando a cinética de degradação do ácido

3/23 hialurônico de acordo pelos fatores descritos acima, garantindo assim uma eficácia do tratamento cosmético por até cerca de 12 meses.

[0006] Uma pesquisa científica intensiva é realizada em todo o mundo para desenvolver tratamentos à base de ácido hialurônico que tenham um melhor desempenho ao longo do tempo. O objetivo é principalmente ter produtos capazes de deteriorar-se menos rapidamente para manter o efeito estético ideal pelo maior período de tempo possível, mantendo um elevado nível de segurança dos produtos injetados.

[0007] Existem outras substâncias de preenchimento reabsorvíveis no mercado da dermocosmética. Pode-se citar, por exemplo, os produtos que contêm partículas de hidroxiapatita de cálcio. Estas partículas são suspensas numa fase aquosa podendo conter um polímero tal como carboximetilcelulose, um derivado da celulose. Os produtos desta família são injetados para dentro ou debaixo da derme para preencher as rugas ou restaurar o volume em diferentes áreas do corpo, especialmente da face. Eles têm um elevado nível de biocompatibilidade, o que justifica a ausência de um teste de alergia antes da injeção. Para esses produtos, poucos efeitos colaterais ou complicações são relatados e uma eficiência duradoura da ordem de 12 meses ou mais é observada. Do ponto de vista da reabsorção, a fase aquosa é eliminada rapidamente da área tratada e as partículas de hidroxiapatita são degradados e metabolizado por macrófagos ao longo do tempo.

[0008] Uma estimulação da produção endógena de colágeno pelas partículas hidroxiapatita é também descrita para estes produtos injetados no tecido cutâneo.

4/23 [0009] Estes produtos têm infelizmente uma tendência a migrar, tal como descrito em várias publicações científicas. Esta migração é um problema porque conduz a uma perda prematura do efeito estético (menos biomaterial na área corrigida) e pode causar efeitos secundários (em especial, as partículas podem se concentrar em algumas partes mais ou menos distantes da área de tratamento (devido às tensões mecânicas às quais o biomaterial é submetido) e induzir localmente as chamadas áreas duras).

[0010] Neste contexto, é importante disponibilizar aos praticantes formulações que possuam excelentes propriedades mecânicas adequadas para injeções para fins cosméticos e/ou estéticos tendo longevidade aumentada em tecidos, prontas para uso, e que não apresentem a desvantagens descritas acima.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0011] A presente invenção refere-se a uma formulação aquosa estéril injetável e biorreabsorvível, utilizada para fins cosméticos, na forma de gel viscoelástico coesivo particulado compreendendo i) ácido hialurônico reticulado ou um de seus sais, a uma concentração entre 1% e 4% (massa/volume); a massa molecular do ácido hialurônico ou de um de seus sais estando na faixa entre 2,5 x 105 Da e 4 x 106 Da, a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, e ii) hidroxiapatita, a uma concentração de entre 5% a 60% (massa/volume), a referida hidroxiapatita estando sob a forma de partículas de tamanho médio menor que ou igual a 200 pm; a referida formulação aquosa estéril injetável tendo

5/23 propriedades viscoelásticas tais que Tanõ à frequência de 1 Hz é menor que ou igual a 0,60.

[0012] De acordo com outro objeto, a presente invenção refere-se a um método de preparação de uma formulação aquosa estéril injetável, que compreende as etapas de: a) preparar uma primeira mistura que compreende, pelo menos, 1% a 4% em peso de ácido hialurônico reticulado ou de um de seus sais, através da formação de ligações covalentes entre as cadeias do referido biopolímero com a ajuda de moléculas bi- ou polifuncionais, a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, b) purificar a referida primeira mistura, c) subsequentemente, adicionar hidroxiapatita a uma concentração na faixa entre 5% a 60% (massa/volume) dispersando-a homogeneamente no gel à base de ácido hialurônico reticulado, d) pôr o gel assim obtido em uma forma pronta para uso, e) esterilizar o produto em calor úmido.

[0013] Também de acordo com outro objeto, a presente invenção refere-se a um kit, de preferência sob a forma de uma seringa contendo a formulação, conforme descrito acima.

BREVE DESCRIÇÃO DO DESENHO [0014] A figura 1 representa a comparação de imagens dos géis Β', X e da formulação à base de CMC e hidroxiapatita, de acordo com o ensaio descrito no Exemplo 2.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0015] A invenção descrita abaixo tem como objetivo propor uma nova formulação aquosa estéril injetável biorreabsorvível

6/23 usada para fins cosméticos e estéticos e apresentando propriedades específicas de viscoelasticidade, de preenchimento e de desempenho em longo prazo. Esta formulação é caracterizada pelo fato de estar na forma de gel viscoelástico coesivo particulado compreendendo

i) ácido hialurônico reticulado, ou um de seus sais, em uma concentração na faixa entre 1% e 4% (massa/volume); a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, e ii) hidroxiapatita, a uma concentração na faixa entre 5% a 60% (massa/volume), a referida hidroxiapatita estando sob a forma de partículas de tamanho médio inferior ou igual a 200 pm;

a referida formulação aquosa estéril injetável tendo propriedades viscoelásticas tais que Tanõ à frequência de 1 Hz é inferior ou igual a 0,60.

[0016] Assim, de forma bastante surpreendente, verificou-se que esta formulação tem uma notável capacidade de criar volume nos tecidos, em longo prazo, graças a uma sinergia entre o ácido hialurônico reticulado e as partículas de hidroxiapatita, de acordo com as condições da presente invenção.

[0017] De um ponto de vista mecânico, as partículas de hidroxiapatita (de comportamento sólido: forte elasticidade e viscosidade insignificante) reforçam consideravelmente a elasticidade do gel e, assim, sua capacidade de criar volume através da indução de força/pressão significativa nos tecidos para corrigir a área deficiente a ser tratada.

7/23 [0018] O ácido hialurônico reticulado, por sua vez, traz as propriedades de viscoelasticidade, isto é, de elasticidade, mas também de viscosidade que permite ter uma consistência de gel que se aproxima daquela dos tecidos e, assim, neutraliza a elasticidade muito forte e a falta de viscosidade trazida pelas partículas de hidroxiapatita. Isso permite dispor de um produto que se integra no tecido de forma muito mais homogênea (o paciente sente menos o produto à palpação), menos traumática para os tecidos (forte limitação da inflamação pósinjeção) e menos dolorosa à injeção.

[0019] Além disso, o ácido hialurônico reticulado, nas condições da presente invenção, irá reduzir consideravelmente a migração das partículas de hidroxiapatita, partículas que são retidas no seio do gel, devido à forte coesividade fornecida pelo ácido hialurônico reticulado de natureza coesiva (ácido hialurônico reticulado tendo uma fraca cinética de reabsorção). Esta forte limitação da migração permite dispor de um gel com uma capacidade melhorada de fazer volume em longo prazo e reduz os efeitos secundários, tais como o surgimento das chamadas áreas duras, sentidas pelo paciente.

[0020] O ácido hialurônico é um polissacárido composto por unidades repetidas de dissacarídeo de glicuronato e de Nacetil-glicosamina. Ele é amplamente distribuído entre os tecidos conjuntivos, epiteliais e nervosos em seres humanos como em animais. É um dos principais componentes da matriz extracelular. Ele contribui significativamente para a proliferação e migração de células. Em particular, é encontrado em concentrações elevadas no humor aquoso, fluido sinovial, pele e cordão umbilical.

8/23 [0021] Ent re os sais de ácido hialurônico preferidos de acordo com a invenção, pode-se citar os sais de ácido hialurônico, com um cátion, por exemplo, um sal mono- ou bivalente, tais como os sais de sódio, potássio, magnésio, cálcio, manganês. Os sais de sódio são particularmente preferidos.

[0022] De acordo com a invenção, o ácido hialurônico ou um de seus sais, está numa forma reticulada. Esta reticulação é obtida através da formação de ligações covalentes entre as cadeias do referido biopolímero com a ajuda de moléculas biou polifuncionais, a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, também chamada de monofásica.

[0023] A natureza coesiva do gel à base de ácido hialurônico reticulado é uma especificidade importante e necessária para a invenção. O gel não se desintegra rapidamente quando introduzido em água, como o faz um gel de natureza não coesiva, também chamado de gel bifásico (tipo de gel à base de ácido hialurônico reticulado não sendo capaz de manter as partículas de hidroxiapatita e, portanto, evitar a migração). O Exemplo 2 evidencia a diferença entre um gel coesivo e um gel não coesivo.

[0024] A presente invenção compreende em geral uma concentração de ácido hialurônico reticulado, ou de um de seus sais, de 1% a 4% (massa/voluma), de preferência entre 1% e 3% (massa/volume). De acordo com uma forma de realização particularmente preferida, a concentração de ácido hialurônico reticulado, ou de um de seus sais, está na faixa entre 1,5% a 2,5% (massa/volume). Alternativamente, a concentração de ácido

9/23 hialurônico reticulado, ou de um de seus sais, estar na faixa entre 1,5% a 3% (massa/volume), ou 1% a 2,5% (massa/volume).

[0025] Vantajosamente, a formulação aquosa da presente invenção compreende ácido hialurônico, ou um de seus sais, cuja massa molecular está de preferência na faixa entre 2,5 x 10 Da e 4 x 10 Da. De acordo com uma concretização particularmente preferida, esta massa molecular está na faixa entre 1 x 10⁶ Da e 3 x 10⁶ Da. Alternativamente, a massa molecular está na faixa entre 1 x 10⁶ Da e 2,5 x 10⁶ Da, ou 2,5 x 10⁵ Da e 3 x 10⁶ Da.

[0026] A hidroxiapatita é uma espécie mineral da família dos fosfatos, de fórmula Ca5(PO4)3(OH), geralmente escrita Ca10(PO4)6(OH)2 para destacar o fato de que a unidade celular da estrutura cristalina contém duas moléculas. A hidroxiapatita pertence à família cristalográfica das apatitas, compostos isomorfos tendo uma mesma estrutura hexagonal. Este composto é utilizado como um biomaterial há muitos anos em diferentes especialidades médicas.

[0027] A presente invenção compreende em geral uma concentração de partículas de hidroxiapatita entre 5 a 60% (massa/volume), de preferência entre 10 a 50% (massa/volume), de preferência entre 20 a 40% (massa/volume) e o tamanho médio das partículas de hidroxiapatita é inferior ou igual a 200 pm, de preferência inferior a 50 μη, de preferência superior a 10pm.

[0028] Observou-se que as propriedades de viscosidade e de elasticidade da formulação de acordo com a invenção são ideais quando o parâmetro Tan delta ou Tanõ, correspondente à relação [módulo viscoso G/módulo elástico G'] à frequência de 1 Hz, é

10/23 inferior ou igual a 0, 60, de preferência inferior ou igual a 0,58. De fato, demonstrou-se que a natureza elástica da formulação de acordo com a invenção, no que diz respeito à sua viscosidade, deve ser suficientemente grande para evitar a sedimentação das partículas de hidroxiapatita. Assim, observou-se que, acima de 0,60, as partículas de hidroxiapatita tendem a sedimentar ao longo do tempo. Esta sedimentação envolve a obtenção de uma formulação de partículas à base de hidroxiapatita não homogênea, o que não é satisfatório, em primeiro lugar, para a ação de injeção da formulação através da agulha (entupimento agulha) e, em segundo lugar, para a segurança e o desempenho da formulação na área de injeção (por exemplo, a criação das chamadas áreas duras no tecido da pele).

[0029] Em geral, a medição da elasticidade (G') e da razão entre a viscosidade e a elasticidade (Tan delta = G/G') é realizada efetuando-se uma varredura de frequências de 0,01 Hz

a 100 Hz com a ajuda	de	um reômetro com uma	geometria plana	de
40 mm,	uma diferença	de	1000	micrômetros e	uma temperatura	de
análise	de 25°C.
[0030]	Como mostrado	no	Exemplo 2,	a coesividade	da

formulação de acordo com a invenção é um elemento importante, mas também é necessário que a natureza viscoelástica desta seja adequada a fim de:

- evitar a sedimentação ao longo do tempo das partículas de hidroxiapatita dentro de seu recipiente, e

- evitar ter um produto que irá separar-se em duas fases (partículas de hidroxiapatita e gel de ácido hialurônico

11/23 reticulado) durante a injeção e/ou no local da injeção, criando, assim, heterogeneidades na área tratada.

[0031] A invenção também tem como objetivo proporcionar uma maior durabilidade ao longo do tempo em comparação com as formulações do estado da técnica. Esta melhoria da durabilidade do efeito cosmético é obtida graças à capacidade do ácido hialurônico reticulado de manter no longo prazo as partículas de hidroxiapatita na área da injeção e das partículas de hidróxiapatite de conferir propriedades mecânicas/reológicas notáveis no longo prazo. Será, portanto, menos frequentemente necessário renovar as injeções com a

formulação	da invenção, o ganho	na longevidade	clínica	sendo
provavelmente de vários meses.
[0032] É	também importante	notar que a	presença	das
partículas	de hidroxiapatita,	radio-opacas,	confere	uma

vantagem ao gel uma vez que pode ser facilmente localizado pelo praticante por radiografia durante e/ou após a injeção.

[0033] Por outro lado, a capacidade das partículas de hidroxiapatita de estimular a produção endógena de colágeno é um elemento importante da invenção. A reabsorção lenta do produto nos tecidos será acompanhada pela produção de colágeno (criação de volume e elasticidade), que vai permitir participar no desempenho do tratamento no longo prazo.

[0034] A possibilidade de o praticante injetar uma solução de hialuronidases para corrigir sua injeção e degradar o ácido hialurônico reticulado componente do produto também proporciona uma vantagem para a invenção. Esta injeção, no entanto, não permite acelerar a reabsorção das partículas de

12/23 hidroxiapatita: logo, não há degradação completa do produto no interior dos tecidos.

[0035] Portanto, a presente invenção consiste em uma formulação, como descrito acima, utilizada para o preenchimento e/ou restauração de volumes e/ou substituição de tecidos biológicos, particularmente i) a restauração dos volumes do rosto (bochechas, queixo, maçãs do rosto, têmporas...), ii) restauração dos volumes do corpo (nádegas, seios, mãos...), iii) restauração dos volumes faciais entre pacientes com HIV que sofrem de lipodistrofia facial.

[0036] A formulação de acordo com a invenção é geralmente utilizada como tal, mas não se exclui que possa ser adicionado pelo menos um aditivo (com exceção dos mencionados acima) e/ou pelo menos um princípio ativo.

[0037] Vantajosamente, a formulação da invenção é uma “formulação pronta para uso porque o praticante não precisa ele mesmo misturar o ácido hialurônico reticulado e uma solução de hidroxiapatita imediatamente antes da injeção.

[0038] Assim, a formulação pode ainda compreender um ou mais materiais cerâmicos. Estes materiais são geralmente selecionados a partir do grupo que compreende o fosfato tricálcico, carbonato de cálcio e sulfato de cálcio, ou uma combinação de vários destes materiais cerâmicos.

[0039] A formulação da invenção pode também compreender um ou mais anestésicos, selecionados dentre o grupo compreendendo lidocaína sozinha ou em combinação com adrenalina, procaína, etidocaína sozinha ou em combinação com adrenalina, articaína sozinha ou em combinação com adrenalina, mepivacaína, pramocaína, quinisocaína, ou um ou mais sais destes

13/23 anestésicos. De acordo com uma concretização particularmente preferida, o anestésico escolhido é o cloridrato de lidocaína. A presença de um anestésico na formulação da presente invenção tem um grande interesse em melhorar o conforto do paciente durante e após a injeção.

[0040] De acordo com outra concretização da invenção, a formulação de acordo com a invenção também pode ainda compreender um ou mais antioxidantes, tais como antioxidantes da família dos polióis. O antioxidante pode ser selecionado a partir do grupo de polióis compreendendo sorbitol, glicerol, manitol ou propileno glicol.

[0041] De acordo com outro objeto, a presente invenção refere-se a um método de fabricação de uma formulação aquosa estéril injetável, que compreende as etapas de: a) preparar uma primeira mistura que compreende, pelo menos, 1% a 4% em peso de ácido hialurônico reticulado ou de um de seus sais, através da formação de ligações covalentes entre as cadeias do referido biopolímero com a ajuda de moléculas bi- ou polifuncionais, a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, b) purificar a referida primeira mistura, c) subsequentemente adicionar hidroxiapatita a uma concentração na faixa entre 5% e 60% (massa/volume) dispersando-a homogeneamente no gel à base de ácido hialurônico reticulado,

d) pôr o gel assim obtido em forma pronta para uso, e) esterilizar o produto com calor úmido.

[0042] A esterilização da formulação de acordo com a etapa

e) é realizado em calor úmido. Os versados na técnica saberão selecionar um ciclo de esterilização por calor (temperatura e

14/23 duração do ciclo de esterilização) adequado para a esterilização do produto. Por exemplo, os seguintes ciclos de esterilização com calor úmido podem ser utilizados: 131°C, 1 min / 130°C, 3 min / 125°C, 7 min / 121°C, 20 min.

[0043] De acordo com outro objeto, a presente invenção refere-se a um kit, de preferência sob a forma de uma seringa contendo a formulação tal como descrita acima.

[0044] A presente invenção refere-se também a um kit na forma de um recipiente diferente de uma seringa, como uma ampola ou frasco, contendo a formulação tal como descrita acima.

[0045] O inventor mostrou nos seguintes exemplos que a formulação da presente invenção à base de AH reticulado deve ter propriedades específicas, em particular coesividade. Se este não for o caso (ver exemplos com AH não reticulado ou um AH reticulado não tendo a estrutura reivindicada), as partículas de hidroxiapatita não são mantidas de forma

adequada	dentro da matriz	e, portanto,	podem	difundir-se
relativamente facilmente para fora	do gel,	o que	implica	uma
perda de	volume na área	tratada	(isto	é, uma perda	de
eficiência) e complicações	devido a esta	migração	resultando
em problemas de segurança.
[0046]	A invenção será	agora	ilustrada a	título	não
limitante	pelos seguintes Exemplos 1	a 4:

15/23

EXEMPLOS

Exemplo 1

Preparação de um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva [0047] Etapa 1: 3,5 g de hialuronato de sódio de peso molecular de 2,6 MDa são adicionados a soda a 1% (30,5 g) . A mistura é deixada para homogeneização durante 1h30. 420 mg de éter de butanodiol diglicidílico (BDDE) são adicionados à mistura que é homogeneizada, fechada e, em seguida, colocada em banho-maria a 50°C durante 2h. A mistura é então neutralizada pela adição de 7,5 g de HCl 1N.

[0048] O gel foi purificado por diálise durante 24 horas com uma solução fisiológica iso-osmolar e com um pH neutro (celulose regenerada, limite de separação: massa molecular = 60 kDa) a fim de se obter uma concentração de ácido hialurônico, de 25 mg/mL (2,5%). Em seguida, é homogeneizado em um misturador convencional de lâminas durante 1h30 (= gel A1/124 g).

[0049] O gel pode ser finalmente desgaseificado, preenchido em de seringas de vidro de 2 mL e esterilizado a vapor em autoclave a 130°C durante 3 minutos (= gel A / gel viscoelástico de estrutura dita coesiva ou monofásica).

[0050] Etapa 2: preparação do gel da invenção. Em 100 g do gel A1 foi adicionado 42,9 g de hidroxiapatita fosfato de cálcio Ca10(PO4)6(OH)2, em que as partículas têm um tamanho médio de partícula entre 30 e 50 micrômetros e o gel foi homogeneizado num misturador convencional de lâminas por 1h30

16/23 (= gel B1/142,9 g) . O gel pode ser finalmente desgaseificado, preenchido em seringas de vidro de 2 mL e esterilizado a vapor

em autoclave	a 13	0°C	durante 3 minutos	= gel B).
[0051] O	gel	é	viscoelástico	coe	sivo particulado.	Com
efeito, ele	está	sob	a forma de um	gel	viscoelástico (que	tem
propriedades	de	elasticidade G'	e	viscosidade G /	ver

abaixo), possuindo uma forte coesividade (ver Exemplo 2) e contendo partículas de hidroxiapatita.

[0052] A	concentração de	ácido	hialurônico	no gel é	de
17,5 mg/mL	(1,75%)	(dosagem por	carbazol,	método	da
Farmacopeia	Europeia)	. Por	outro	lado, o pH	(7,15) e	a

osmolaridade (315 mOsm/kg) do gel são fisiológicos.

[0053] O gel é facilmente injetável através de uma agulha: uma força de 26,3 N é necessária para empurrar o gel através de uma agulha 21G 1 1/2, considerando-se uma velocidade de impulso de 12,5 mm/minuto.

[0054] Géis A e B são caracterizados de um ponto de vista mecânico/reológico: o reômetro usado para realizar essas caracterizações é um AR2000 (TA Instruments) com uma geometria plana de 40 mm, uma diferença de 1000 micrômetros e uma temperatura de análise de 25°C.

[0055] Uma medida de elasticidade (G') e da razão entre a viscosidade e a elasticidade (Tan delta = G/G') é efetuada executando-se uma varredura de frequências de 0,01 Hz a 100 Hz. Uma comparação dos parâmetros é realizada a 1 Hz.

Gel	G'(1 Hz) em Pa	Tan delta (1 Hz)
A	184	0,25
B	381	0,29

17/23 [0056] Note-se que o produto B tem uma elasticidade significativamente superior à do produto A. A Tan delta dos dois produtos A e B, por sua vez, está relativamente próxima: o gel B conserva uma natureza viscosa significativa, apesar da presença de partículas de hidroxiapatita (elas possuem uma alta elasticidade e viscosidade desprezível). Esta maior elasticidade, em combinação com a forte coesividade do produto de acordo com a invenção, confere uma melhor capacidade do produto de criar volume nos tecidos.

[0057] Uma medida da força normal induzida pelo gel a ser testado é realizada pela compressão da amostra entre o plano de Peltier e a geometria para um espaço de 1500 micrômetros e uma quantidade de gel de 1,4 g.

Gel	Força normal (N)
A	0, 86
B	1, 47

[0058] Note-se que o produto B possui uma elasticidade e força normal induzida significativamente mais forte do que o produto A.

[0059] Est a maior elasticidade, em combinação com a forte coesividade do gel de acordo com a invenção, confere uma melhor capacidade do produto de criar o volume nos tecidos.

18/23

Exemplo 2

Importância da estrutura dita coesiva do gel à base de AH reticulado - Comparação [0060] O gel A1 (de estrutura coesiva ou monofásica) descrito no Exemplo 1 foi dialisado com uma solução fisiológica iso-osmolar e tendo um pH neutro (celulose regenerada, limite de separação: massa molecular = 60 kDa), a fim de se obter uma concentração de ácido hialurônico de 20 mg/mL (2%).

[0061] Hidroxiapatita de cálcio foi então adicionada ao gel a fim de se obter uma concentração de 200 mg/mL (20%) e uma mistura com uma espátula foi efetuada (2 minutos para 5 g de gel).

[0062] O gel assim obtido foi então submetido a autoclave a 121°C durante 20 minutos (= gel B' de acordo com a invenção).

[0063] O gel comercial Restylane® Perlane® (lote 11363-1) à

base de ácido	hialurônico	reticulado	de estrutura dita não
coesiva ou bifásica, cuja	concentração	de ácido hialurônico	é
de 20 mg/mL (	2%) foi	dopado com	200 mg/mL	(20%)	de
hidroxiapatita	de cálcio,	misturando	com uma	espátula	(2
minutos para 5 g	de gel).
[0064] O gel	resultante	foi então submetido a	autoclave	a
121°C durante 20	minutos (=	gel X) .

[0065] O gel A1 e o gel Restylane® Perlane® foram comparados de acordo com o seguinte teste:

[0066] Em frascos de plástico de 30 mL contendo 5 mL de água purificada, foi introduzido 1 mL de gel A1 no frasco 1 e 1 mL de gel Restylane® Perlane® no frasco 2. Depois de fechar os

19/23 frascos, misturou-se manualmente os 2 frascos durante 5 segundos.

[0067] Após 10 segundos, observa-se que o gel Restylane® Perlane® desintegrou-se/dispersou-se completamente sob a forma de uma multiplicidade de partículas na solução aquosa. O gel Restylane® Perlane® possui, assim, uma estrutura dita não coesiva ou bifásica (o gel se dispersa rapidamente na solução aquosa).

[0068] O gel A1, por sua vez, está sempre na forma de uma “bola de gel” na solução aquosa. Ele possui, portanto, uma estrutura dita coesiva ou monofásica (o gel não se dispersa rapidamente na solução aquosa, possui uma forte coesividade, ao contrário do gel Restylane® Perlane®).

[0069] O gel B' de acordo com a invenção e o gel X foram comparados de acordo com o seguinte teste (ver Figura 1): em frascos de plástico de 30 mL contendo 5 mL de água purificada,

foi introduzido 1 mL	de gel B'	no frasco 1 e	1 mL	de gel X	no
frasco 2. Depois de	fechar,	os 2 frascos	foram	misturados
manualmente durante 5	segundos.
[0070] Após 10	segundos,	observou-se	que	o gel	X

desintegrou-se/dispersou-se completamente sob a forma de uma multiplicidade de partículas na solução aquosa. O gel X possui uma estrutura viscoelástica não coesiva particulada. Ele não corresponde às características do gel de acordo com a

invenção.	Na prática médica para	uso cosmético, ele	irá
difundir/migrar no	local da injeção.
[0071]	O gel B',	por sua vez, está	sempre sob a	forma de	uma
bola de	gel” na	solução aquosa.	Ele possui,	assim,	uma
estrutura	coesiva	particulada que permitirá, no	contexto	da

20/23 prática médica para uso cosmético, não difundir/migrar no local injetado e, assim, evitar as complicações da migração de partículas de hidroxiapatita nos tecidos, mas também ter um melhor desempenho em longo prazo do produto, porque o gel injetado será capaz de manter a sua capacidade de criar o volume nos tecidos durante um longo período, devido à falta de migração do biomaterial da área tratada.

Exemplo 3

Importância da viscoelasticidade do gel de acordo com a invenção - Comparativo

[0072]	Seja C um	gel	preparado	de	acordo	com o mesmo
protocolo	(etapas	1	e 2)	conforme	descrito	no Exemplo 1,
introduzindo 200 mg	de	BDDE	em vez de	420	mg.
[0073]	Seja D um	gel	preparado	de	acordo	com o mesmo
protocolo	(etapas	1	e 2)	conforme	descrito	no Exemplo 1,
introduzindo 290 mg	de	BDDE	em vez de	420	mg.

[0074] O gel C é caracterizado a partir de um ponto de vista mecânico/reológico.

[0075] O reômetro usado para realizar as caracterizações reológicas é um AR2000 (TA Instruments) com uma geometria plana de 40 mm, um espaço de 1000 micrômetros e uma temperatura de análise de 25°C.

[0076] Uma medida da relação entre a viscosidade e a elasticidade (Tan delta = G/G') foi efetuada, executando-se uma varredura de frequências de 0,01 Hz a 100 Hz.

[0077] Uma comparação dos parâmetros foi realizada a 1 Hz.

21/23

Gel	Tan delta = G/G' (1 Hz)
C	0, 84
D	0,58

[0078] Constata-se que as partículas de hidroxiapatita tendem a sedimentar ao longo do tempo (um fenômeno bem observado pela passagem de uma amostra em centrífuga) para o gel C, o que não é observado para o gel D.

[0079] Est a sedimentação envolve a obtenção de produtos com base em partículas de hidroxiapatita não homogênea, o que não é satisfatório para a injeção do gel através da agulha (entupimento da agulha), mas também para a segurança e o

desempenho do	produto	na zona	injeção (alto	risco	de
complicações,	tais como	a criação	de chamadas áreas duras	no
tecido	da pele).
[0080]	Como	mostrado	no Exemplo	2, a coesividade	do gel	de
acordo	com a	invenção	é important	e, mas também é	necessário

que a natureza viscoelástica deste seja adequada a fim de:

- evitar a sedimentação ao longo do tempo das partículas de hidroxiapatita dentro de seu recipiente

- evitar ter um produto que irá separar-se em duas fases (partículas de hidroxiapatita e gel de ácido hialurônico reticulado) durante a injeção e/ou no local da injeção, criando, assim, heterogeneidades na área tratada.

[0081] A natureza elástica do gel (em relação à sua viscosidade) deve, portanto, ser suficientemente grande para evitar a sedimentação das partículas.

22/23

Exemplo 4

Comparação de um gel de acordo com a invenção com as soluções do estado da técnica

a) Formulação à base de AH não reticulado e hidroxiapatita [0082] Como descrito na literatura, ín vivo, o ácido hialurônico não reticulado tem uma meia-vida de menos de uma semana.

[0083] Por conseguinte, uma solução não reticulada de AH com hidroxiapatita não é interessante porque o ácido hialurônico não reticulado será reabsorvido muito rapidamente e não vai ajudar a evitar a migração das partículas de hidroxiapatita em longo prazo.

b) Formulação aquosa de hidroxiapatita [0084] Uma solução aquosa de hidroxiapatita (S1) foi preparada (30% de hidroxiapatita fosfato de cálcio tendo uma granulometria na faixa entre 30 e 50 micrômetros em uma solução fisiológica iso-osmolar e possuindo um pH neutro).

[0085] Em um frasco de plástico de 30 mL contendo 5 mL de água purificada, foi introduzido 1 mL da solução S1. É observada imediata dispersão das partículas de hidroxiapatita no frasco.

[0086] Ao contrário da formulação da invenção, a solução S1 não é capaz de manter as partículas de hidroxiapatita no local de injeção em longo prazo.

23/23

c) Formulação de CMC e hidroxiapatita (ver Figura 1).

[0087] Uma formulação aquosa de carboximetilcelulose (CMC) e de hidroxiapatita (S3) foi preparada (30% de hidroxiapatita fosfato de cálcio tendo uma granulometria na faixa entre 30 e 50 micrômetros, e 2% de CMC a 250.000 Da, em uma solução fisiológica iso-osmolar e possuindo um pH neutro).

[0088] Em um frasco de plástico de 30 mL contendo 5 mL de água purificada, foi introduzido 1 mL da formulação S3. Depois de fechar o frasco, o frasco é misturado manualmente durante 5 segundos.

[0089] Após 10 segundos, observa-se que a formulação S3 se desagregou/dispersou completamente sob a forma de uma multiplicidade de partículas na solução aquosa.

[0090] Ao contrário da formulação segundo a invenção, a formulação S3 não é capaz de manter as partículas de hidroxiapatita no local de injeção em longo prazo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 ou 2 caracterizada pelo fato de que formulação foi esterilizada por calor úmido.

1. Formulação aquosa estéril injetável, usada para fins cosméticos, caracterizada por ser sob a forma de gel viscoelástico coesivo particulado compreendendo i) ácido hialurônico reticulado, ou um de seus sais, a uma

concentração na faixa entre 1% e 4% (massa/volume); a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, e ii) hidroxiapatita, a uma concentração na faixa entre 5% e 60% (massa/volume), a referida hidroxiapatita estando sob a forma de partículas de tamanho médio inferior ou igual a 200 pm;

Formulação aquosa estéril injetável de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que a massa molecular do ácido hialurônico ou de um de seus sais está na faixa entre 2,5 x 105 Da e 4 x10⁶ Da.

Formulação aquosa estéril injetável de acordo com as reivindicações

2/4 de um de seus sais, está na faixa entre 1% e 3% (massa/volume), de preferência entre 1,5% e 2,5% (massa/volume).

3/4 etidocaína sozinha ou em combinação com adrenalina, articaína sozinha ou em combinação com adrenalina, mepivacaína, pramocaína, quinisocaína, ou um ou mais dos sais destes anestésicos.

4/4

4. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a concentração de ácido hialurônico reticulado, ou

5. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a concentração de hidroxiapatita está na faixa entre 10 e 50% (massa/volume), de preferência entre 20% e 40% (massa/volume).

6. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o tamanho médio das partículas de hidroxiapatita é inferior ou igual a 50 pm e superior ou igual a 10 pm.

7. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a formulação compreende ainda um ou mais materiais cerâmicos.

8. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 7, caracterizada pelo fato de que a formulação compreende ainda um ou mais anestésicos.

9. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que um ou mais anestésicos são selecionados a partir do grupo que compreende lidocaína sozinha ou em combinação com adrenalina, procaína,

10. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o anestésico é o cloridrato de lidocaína.

11. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a formulação compreende ainda um ou mais antioxidantes.

12. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que um ou mais antioxidantes são selecionados a partir da família dos polióis.

13. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que os polióis incluem o sorbitol, o glicerol, o manitol ou o propileno glicol.

14. Formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 13, caracterizada por ser utilizada para o preenchimento e/ou restauração de volumes e/ou substituição de tecidos biológicos.

15. Kit caracterizado por conter a formulação aquosa estéril injetável de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14.

16. Kit de acordo com a reivindicação 15, caracterizado por estar sob a forma de uma seringa, ampola ou frasco.

17. Método de fabricação de uma formulação aquosa estéril injetável caracterizado por compreender as etapas de: a) preparar uma primeira mistura compreendendo, pelo menos, 1% a 4% em peso de ácido hialurônico reticulado ou um de seus sais, através da formação de ligações covalentes entre as cadeias do referido biopolímero utilizando moléculas bi- ou polifuncionais, a reticulação efetuada permitindo-se obter um gel à base de ácido hialurônico reticulado de estrutura dita coesiva, b) purificar a referida primeira mistura, c) subsequentemente adicionar a hidroxiapatita a uma concentração na faixa entre 5% e 60% (massa/volume) dispersando-a de forma homogênea no gel à base de ácido hialurônico reticulado, d) pôr o gel assim obtido na forma pronta para uso, e) esterilizar o produto com calor úmido.