MX2015004307A - Formulacion acuosa esteril inyectable basada en acido hialuronico entrelazado y en hidroxiapatita para uso estetico. - Google Patents

Abstract

El objetivo de la presente invención es una formulación acuosa estéril inyectable, lista para utilizar, resorbible, utilizada para propósitos estéticos como un gel viscoelástico, cohesivo, particulado que comprende i) ácido hialurónico entrelazado, o una de sus sales, a una concentración de entre 1% y 4% (masa/volumen); el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, y ii) hidroxiapatita, a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen), dicha hidroxiapatita está en forma de partículas con un tamaño promedio menor de o igual a 200 µm, dicha formulación acuosa estéril inyectable tiene propiedades viscoelásticas tales que tan d a la frecuencia de 1 Hz es menor de o igual a 0.60.

Description

FORMULACION ACUOSA ESTERIL INYECTABLE BASADA EN ACIDO HIALURÓNICO ENTRELAZADO Y EN HIDROXIAPATIA PARA USO ESTETICO CAMPO DE LA INVENCION El objeto de la presente invención es una formulación acuosa estéril lista para utilizar, resorbible, inyectable utilizada para propósitos estéticos como un gel viscoelástico cohesivo particulado que comprende i) ácido hialurónico entrelazado, o una de sus sales, a una concentración de entre 1% y 4% (masa/volumen); el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva y ii) hidroxiapatita, a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen), dicha hidroxiapatita está en forma de partículas con un tamaño promedio menor de o igual a 200 pm; dicha formulación acuosa estéril inyectable tiene propiedades viscoelásticas, tales que tan d a la frecuencia de 1 Hz es menor de o igual a 0.60.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El envejecimiento es un fenómeno natural con el cual se confronta cualquier individuo. Este está inevitablemente acompañado por una reducción en la actividad celular del cuerpo humano.

Los signos más visibles de la edad aparecen en el rostro: la piel se hace flácida y aparecen las primeras arrugas. Se han desarrollado muchas soluciones para intentar desacelerar la aparición de estos signos de la edad o para reparar signos ya establecidos.

Entre estas soluciones, se puede mencionar una téenica que consiste en inyectar en o bajo la piel las denominadas sustancias de relleno, estas sustancias pueden ser resorbibles o no resorbibles in vivo. El papel de estas sustancias es llenar las porciones colapsadas creando volumen en o bajo la piel, para tratar porciones diferentes del cuerpo, en particular el rostro. Mediante este efecto mecánico, la piel se vuelve a tensar y las arrugas se alisan, llevando a una apariencia más joven del área tratada.

Entre las denominadas sustancias de relleno resorbibles, se puede mencionar al ácido hialurónico entrelazado (HA) (también llamado "HA estabilizado") utilizado en estética dérmica. Este se inyecta en o bajo la dermis con el fin de llenar las arrugas o restaurar el volumen de diversas áreas del cuerpo durante un periodo de varios meses. Este tiene la ventaja de tener muy pocos efectos secundarios posteriores a la inyección y complicaciones extremadamente raras a largo plazo. Por otro lado, en el caso de una mala inyección, el practicante tiene la posibilidad de corregir su tratamiento inyectando una solución de hialuronidasas (enzimas especificas de HA), una solución que va a degradar el producto basado en HA entrelazado que se inyectó previamente. Las inyecciones de HA entrelazado, debido a su desaparición gradual (resorción del polímero en los tejidos con el tiempo) se tienen que repetir a intervalos regulares, generalmente de 6 a 12 meses, con el fin de mantener la eficiencia del tratamiento. El ácido hialurónico no entrelazado por sí mismo tiene un tiempo de residencia corto en la piel (un tiempo de vida media de menos de una semana), éste es degradado in vivo por diversos factores tales como degradación por radicales, enzimática, térmica y mecánica. Es realmente el entrelazamiento lo que permite que éste incremente en forma significativa su tiempo de vida media desacelerando la cinética de degradación del ácido hialurónico de conformidad con los factores descritos anteriormente, permitiendo de esta manera la eficiencia del tratamiento estético que puede alcanzar cerca de 12 meses.

En todo el mundo se está llevando a cabo investigación científica intensiva con el fin de desarrollar tratamientos basados en ácido hialurónico que tenga desempeño reforzado con el tiempo. Notablemente el objetivo es tener productos capaces de ser degradados con menos rapidez con el fin de retener un efecto estético óptimo a través de un periodo tan largo como sea posible, al tiempo que se retiene un nivel muy alto de seguridad de los productos inyectados.

Existen otras sustancias de relleno resorbibles en el mercado dermo-estético. Se pueden mencionar, por ejemplo, productos que contienen hidroxiapatita de calcio. Estas partículas están suspendidas en una fase acuosa la cual puede contener un polímero tal como carboximetilcelulosa, un derivado de celulosa. Los productos de esta familia se inyectan en o bajo la dermis con el fin de llenar las arrugas o restaurar el volumen de diversas áreas del cuerpo y en particular del rostro. Estos muestran un alto nivel de biocompatibilidad, lo cual justifica la ausencia de una prueba de alergia antes de la inyección. Para estos productos, se han reportado muy pocos efectos secundarios o complicaciones y se observa una duración de eficiencia del orden de 12 meses o más. Desde el punto de vista de resorción, la fase acuosa se retira rápidamente del área tratada y las partículas de hidroxiapatita son degradadas y metabolizadas por los macrófagos con el paso del tiempo.

También se ha descrito una estimulación de la producción endógena de colágena por parte de las partículas de hidroxiapatita para estos productos inyectados en los tejidos de la piel.

Por desgracia, estos productos tienden a migrar, como se describe en varias publicaciones científicas. Esta migración plantea un problema debido a que induce pérdida prematura del efecto estético (menos biomaterial en el área corregida) y potencialmente podría inducir efectos secundarios (las partículas se pueden concentrar notablemente en ciertas porciones más o menos a una distancia del área a ser tratada (debido a los esfuerzos mecánicos a los cuales se somete el biomaterial) e inducir localmente las denominadas áreas duras.

En este contexto es importante hacer disponible a los practicantes formulaciones que tengan propiedades mecánicas remarcables adaptadas para inyecciones para propósitos cosméticos y/o estéticos que tengan un tiempo de vida incrementado en los tejidos, que estén listas para usar, y que no tengan las deficiencias descritas anteriormente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a una formulación acuosa, estéril, bioresorbible e inyectable, utilizada para propósitos estéticos, como un gel viscoelástico cohesivo, particulado que comprende i) ácido hialurónico entrelazado o una de sus sales, a una concentración de entre 1% y 4% (masa/volumen); la masa molecular del ácido hialurónico o una de sus sales, está entre 2.5 x 105 Da y 4 x 106 Da, el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, y ii) hidroxiapatita, a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen), dicha hidroxiapatita está en forma de partículas con un tamaño promedio menor de o igual a 200 ym; dicha formulación acuosa estéril inyectable tiene propiedades viscoelásticas de modo tal que tan d a la frecuencia de 1 Hz es menor de o igual a 0.60.

De conformidad con otro objetivo, la presente invención se refiere a un método para preparar una formulación acuosa estéril, inyectable, que comprende los pasos que consisten de: a) preparar una primera mezcla que comprende por lo menos 1% a 4% en peso de ácido hialurónico entrelazado o de una de sus sales, formando enlaces covalentes entre las cadenas de dichos biopolímeros por medio de moléculas bifuncionales o polifuncionales, el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, b) purificar dicha primera mezcla, c) después agregar hidroxiapatita a una concentración comprendida entre 5% a 60% (masa/volumen) dispersándola homogéneamente en el gel basado en ácido hialurónico entrelazado, d) poner el gel obtenido de esta manera en una forma lista para utilizar, e) esterilizar el producto con calor húmedo.

También de conformidad con otro aspecto, la presente invención se refiere a un kit de preferencia en forma de una jeringa que contiene la formulación como se describió anteriormente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 representa fotografías de la comparación de los geles B', X, y de la formulación basada en CMC e hidroxiapatita, de conformidad con las pruebas descritas en el ejemplo 2.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención que se describe a continuación tiene el objetivo de proponer una formulación acuosa, estéril, inyectable, bioresorbible novedosa utilizada para propósitos cosméticos y estéticos y que tiene propiedades específicas de viscoelasticidad, de llenado y de desempeño a largo plazo. Esta formulación se caracteriza porque está en forma de un gel viscoelástico cohesivo particular que comprende i) ácido hialurónico entrelazado, o una de sus sales, a una concentración de entre 1% y 4% (masa/volumen), el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, y ii) hidroxiapatita, a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen), dicha hidroxiapatita está en forma de partículas con un tamaño promedio menor de o igual a 200 pm; dicha formulación acuosa, estéril inyectable tiene propiedades viscoelásticas de modo tal que tan d a la frecuencia de 1Hz es menor de o igual a 0.60.

De manera bastante sorpresiva, se ha observado que esta formulación tiene la capacidad remarcable de generar volumen en tejidos a largo plazo, por medio de sinergia entre el ácido hialurónico entrelazado y las partículas de hidroxiapatita, de conformidad con las condiciones de la invención.

Desde un punto de vista mecánico, las partículas de hidroxiapatita (con un comportamiento sólido: fuerte elasticidad y viscosidad insignificante) refuerzan de manera considerable la elasticidad del gel y por lo tanto su capacidad para generar volumen induciendo fuerza/presión significativas en los tejidos con el fin de corregir el área defectuosa a ser tratada.

El ácido hialurónico entrelazado por sí mismo provee propiedades de viscoelasticidad, es decir, elasticidad pero también viscosidad con lo cual es posible tener consistencia de gel que se acerca a la de los tejidos y por lo tanto compensa de esta manera la elasticidad muy fuerte y la ausencia de viscosidad provista por las partículas de hidroxiapatita. Esto brinda la posibilidad de tener un producto que se integra en los tejidos en una manera mucho más homogénea (el paciente siente menos al producto al tocar), menos traumático para los tejidos (fuerte limitación de inflamación después de la inyección) y menos dolorosa después de la inyección.

Por otro lado, el ácido hialurónico entrelazado bajo las condiciones de la invención, permite reducción considerable en la migración de las partículas de hidroxiapatita, partículas que son retenidas dentro del gel, debido a la fuerte cohesividad aportada por el ácido hialurónico entrelazado de un tipo cohesivo (ácido hialurónico entrelazado que tiene baja cinética de resorción). Esta fuerte limitación de la migración brinda la posibilidad de tener un gel con una capacidad formadora de volumen mejorada a largo plazo y capaz de reducir los efectos secundarios tales como la aparición de las denominadas áreas duras, sentidas por el paciente.

El ácido hialurónico es un polisacárido que consiste de la repetición de unidades del disacárido glucuronato y N-acetil-glucosamina. Este está ampliamente distribuido entre los tejidos conectivo, epitelial y nervioso en humanos así como en animales. Es uno de los componentes principales de la matriz extracelular. Este contribuye de manera significativa a la proliferación y migración de las células. Se encuentra de manera notable en una concentración sustancial en el humor acuoso, liquido sinovial, piel y en el cordón umbilical.

Entre las sales preferidas del ácido hialurónico de conformidad con la invención, se pueden mencionar las sales de ácido hialurónico con un catión, por ejemplo una sal monovalente o divalente tal como la sal de sodio, potasio, magnesio, calcio, manganeso. Las sales de sodio son las más particularmente preferidas.

De conformidad con la invención el ácido hialurónico, o una de sus sales, está en una forma entrelazada. Este entrelazamiento se obtiene formando enlaces covalentes entre las cadenas de dicho biopolimero por medio de moléculas bifuncionales o polifuncionales, el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, también llamada estructura monofásica.

La naturaleza cohesiva del gel basado en ácido hialurónico entrelazado es una característica específica principal y requerida de la invención. El gel no se debe dispersar rápidamente cuando se introduce también en agua, como lo haría un gel con una naturaleza no cohesiva llamado un gel "bifásico" (tipo de gel basado en ácido hialurónico entrelazado el cual no es capaz de mantener las partículas de hidroxiapatita y por lo tanto evitar la migración). El ejemplo 2 representa esta diferencia entre un gel cohesivo y un gel no cohesivo.

La presente invención en términos generales comprende una concentración de ácido hialurónico entrelazado, o de una de sus sales, entre 1% y 4% (masa/volumen), de preferencia entre 1% y 3% (masa/volumen). De conformidad con una alternativa particularmente preferida, la concentración de ácido hialurónico entrelazado, o de una de sus sales, está entre 1.5% y 2.5% (masa/volumen). De manera alternativa, la concentración de ácido hialurónico entrelazado, o de una de sus sales, puede estar entre 1.5% y 3% (masa/volumen) o 1% y 2.5% (masa/volumen).

De manera conveniente, la formulación acuosa de conformidad con la invención comprende ácido hialurónico, o una de sus sales, cuya masa molecular de preferencia está entre 2.5 x 105 Da y 4 x 106 Da. De conformidad con una alternativa particularmente preferida, esta masa molecular está entre 1 x 106 Da y 3 x 106 Da. De manera alternativa, la masa molecular está entre 1 x 106 Da y 2.5 x 106 Da, o 2.5 x 105 Da o 3 x 106 Da.

La hidroxiapatita es una especie mineral de la familia de fosfatos, de la fórmula (Ca5(P04)3(OH), usualmente escrita como Cai0(P04)6(OH)2 con el fin de subrayar el hecho de que la red de la estructura cristalina comprende dos moléculas. La hidroxiapatita pertenece a la familia cristalográfica de las apatitas, compuestos isomorfos que tienen la misma estructura hexagonal. Este compuesto ha sido utilizado como un biomaterial durante muchos años en diversos productos de especialidad médica.

La presente invención por lo general comprende una concentración de partículas de hidroxiapatita comprendida entre 5 a 60% (masa/volumen), de preferencia entre 10 a 50% (masa/volumen), de preferencia entre 20 a 40% (masa/volumen) y el tamaño promedio de las partículas de hidroxiapatita es menor de o igual a 200 mm de preferencia menor de 50 mm, de preferencia mayor de 10 pm.

Se ha observado que las propiedades de viscosidad y de elasticidad de la formulación de conformidad con la invención son óptimas cuando el parámetro tan delta o tan d, correspondiente a la relación [módulo de viscosidad G''/módulo elástico G'] a la frecuencia de 1 Hz, es menor de o igual a 0.60, de preferencia menor de o igual a 0.58. En efecto, se demuestra que la naturaleza elástica de la formulación de conformidad con la invención, con relación a su viscosidad, debe ser lo suficientemente grande para que sea capaz de evitar la sedimentación de las partículas de hidroxiapatita. Por lo tanto, se observa que por debajo de 0.60, las partículas de hidroxiapatita tienden a sedimentar con el tiempo. Esta sedimentación implica obtener una formulación no homogénea basada en partículas de hidroxiapatita, lo cual no es satisfactorio para el acto de inyectar la formulación a través de una aguja (bloqueo de la aguja) por un lado y para la seguridad y desempeño de la formulación en el área de inyección (por ejemplo, generación de las denominadas áreas duras en los tejidos de la piel) por el otro.

En términos generales, la medición de la elasticidad (G') y de la relación de viscosidad con respecto a elasticidad (tan delta=G''/G') se efectúa mediante un barrido de frecuencia de 0.01 a 100 Hz por medio de un reómetro con una geometría plana de 40 mm, un espacio de aire de 1,000 mm y una temperatura de análisis de 25°C.

Como se muestra en el ejemplo 2, la cohesividad de la formulación de conformidad con la invención es un elemento importante pero también se requiere que la naturaleza viscoelástica de esta última sea apropiada para: - evitar la sedimentación de las partículas de hidroxiapatita con el tiempo dentro de su contenedor y - evitar tener un producto que se separe en dos fases (partículas de hidroxiapatita y gel de ácido hialurónico entrelazado) durante la inyección y/o en el área de inyección, con lo cual se generan zonas heterogéneas en el área tratada.

Otro objetivo de la invención es tener un mejor tiempo de vida útil en comparación con formulaciones de la téenica antecedente. Este tiempo de vida útil más adecuado del efecto estético se obtiene a través de la capacidad del ácido hialurónico entrelazado de mantener a largo plazo las partículas de hidroxiapatita en el área de inyección y de la capacidad de las partículas de hidroxiapatita de impartir propiedades mecánicas/reológicas remarcables a largo plazo. Por lo tanto, habrá menos necesidad de renovar las inyecciones con la formulación de conformidad con la invención, la ganancia en tiempo de vida útil en una situación clínica probablemente sea de varios meses.

También es importante especificar que la presencia de partículas de hidroxiapatita radio-opacas provee una ventaja para el gel debido a que éstas pueden ser localizadas fácilmente por el practicante mediante radiografía durante y/o después de la inyección.

Por otro lado, la capacidad de las partículas de hidroxiapatita de estimular la producción endógena de colágena es un elemento importante de la invención. La resorción lenta del producto en los tejidos se verá acompañada por la producción de colágena (generación de volumen y elasticidad), lo cual brindará la posibilidad de participar en el desempeño del tratamiento a largo plazo.

La posibilidad dada al practicante de inyectar una solución de hialuronidasas para corregir su inyección y degradar al ácido hialurónico entrelazado que constituye al producto también da una ventaja a la invención. Sin embargo esta inyección no permite la aceleración de la resorción de las partículas de hidroxapatita: por lo tanto no hay una degradación completa del producto dentro de los tejidos.

La presente invención por lo tanto consiste de una formulación, como se describió anteriormente, utilizada para llenar y/o restaurar volúmenes y/o remplazar tejidos biológicos, en particular i) restaurar volúmenes del rostro (mejillas, barbillas, pómulos, sienes,...), ii) restaurar volúmenes del cuerpo (glúteos, mamas, manos,...), iii) restaurar volúmenes de la cara en pacientes con V1H afectados por lipodistrofia facial.

La formulación de conformidad con la invención generalmente se utiliza como tal pero no se excluye que se agreguen a la misma por lo menos algún otro aditivo (diferente de aquellos mencionados anteriormente) y/o por lo menos un ingrediente activo.

De manera conveniente, la formulación de conformidad con la invención es "una formulación lista para usar", debido a que el(la) practicante no tiene que mezclar por sí mismo(a) el ácido hialurónico entrelazado y una solución de hidroxiapatita, justo antes de la inyección.

Por lo tanto, la formulación también puede comprender uno o varios materiales cerámicos. Estos materiales por lo general se seleccionan a partir del grupo que comprende fosfato tricálcico, carbonato de calcio y sulfato de calcio, o una combinación de varios de sus materiales cerámicos.

La formulación de conformidad con la invención también puede comprender uno o varios anestésicos, que se seleccionan a partir del grupo que comprende lidocaina sola o en combinación con adrenalina, procaina, etidocaina sola o en combinación con adrenalina, articaina sola o en combinación con adrenalina, mepivacaina, pramocaina, quinisocaina, o una o varias de las sales de estos anestésicos. De conformidad con una alternativa particularmente preferida, el anestésico seleccionado es clorhidrato de lidocaina. La presencia de un anestésico en la formulación de conformidad con la invención tiene un beneficio importante para mejorar el confort de paciente durante y después de la inyección.

De conformidad con otra modalidad particular de la invención, la formulación de conformidad con la invención también puede comprender además uno o varios antioxidantes, tales como los antioxidantes de la familia de los polioles. El antioxidante se puede seleccionar a partir del grupo de polioles que comprenden sorbitol, glicerol, manitol o propilenglicol.

De conformidad con otro objeto, la presente invención se refiere a un método para preparar una formulación acuosa estéril, inyectable que comprende los pasos de: a) preparar una primera mezcla que comprende por lo menos 1% a 4% en peso de ácido hialurónico entrelazado o una de sus sales, formando enlaces covalentes entre las cadenas de dicho biopolimero por medio de moléculas bifuncionales o polifuncionales, el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, b) purificar dicha primera mezcla, c) agregar después hidroxiapatita en una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen) dispersándola homogéneamente en el gel basado en ácido hialurónico entrelazado, d) convertir el gel obtenido de esta manera en una forma lista para utilizar, e) esterilizar el producto con calor húmedo.

La esterilización de la formulación de conformidad con el paso e) se logra con calor húmedo. Un experto en la téenica sabrá cómo seleccionar un ciclo de esterilización con calor (temperatura y duración del ciclo de esterilización) apropiado para estilizar su producto. Por ejemplo, se pueden utilizar los siguientes ciclos de esterilización con calor húmedo: 131°C, 1 min/130°C, 3 min/125°C, 7 minutos/121°C, 20 minutos.

De conformidad con otro objetivo, la presente invención se refiere a un kit de preferencia en forma de una jeringa que contiene la formulación como se describió anteriormente .

La presente invención también se refiere a un kit en forma de un contenedor diferente a una jeringa tal como una ampolleta o un frasco que contiene la formulación como se describió anteriormente.

El inventor demuestra en los siguientes ejemplos que la formulación de conformidad con la invención basada en HA entrelazado debe tener propiedades especificas, de manera notable propiedades de cohesividad. Si esto no es el caso (véase en los ejemplos con HA no entrelazado o con HA entrelazado que no tiene la estructura reclamada), las partículas de hidroxiapatita no van a ser retenidas de manera apropiada dentro de la matriz y por lo tanto se podrían difundir de manera relati amente fácil fuera del gel, lo cual implica una pérdida de volumen en el área tratada (es decir, una pérdida de eficiencia) y posibles complicaciones ya que esta migración causa problemas de seguridad.

La invención se ilustra a continuación en una manera no limitativa con los siguientes ejemplos 1 a 4.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Preparación de un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva Paso 1 Se agregan 3.5 gramos de hialuronato de sodio de peso molecular 2.6 MDa a hidróxido de sodio al 1% (30.5 g). La mezcla se deja homogenizar durante 1 hora 30 minutos. Se agregan a la mezcla 420 miligramos de éter butanodiol-diglicidílico (BDDE), la mezcla se homogeniza, se cierra y después se coloca en un baño de agua a 50°C durante 2 horas. La mezcla se neutraliza después agregando 7.5 g de HCl 1N.

El gel se purifica durante 24 horas mediante diálisis con una solución fisiológica iso-osmolar que tiene pH neutro (celulosa regenerada, limite de separación: masa molecular = 60 kDa) para obtener una concentración de ácido hialurónico de 25 mg/ml (2.5%). Esta después se homogeniza en una mezcladora de cuchillas convencional durante 1 hora 30 minutos (=gel Al/124 g).

Por último el gel se puede desgasificar, cargar en jeringas de vidrio de 2 mi y esterilizar utilizando un autoclave de vapor a 130°C durante 3 minutos (-gel A/gel viscoelástico de una denominada estructura cohesiva o monofásica).

Paso 2. Preparación del gel de conformidad con la invención En 100 g del gel Al, se agregan 42.9 g de hidroxiapatita fosfocálcica Caio(P04)6(OH)2, cuyas partículas tienen un tamaño de grano promedio entre 30 y 50 micrómetros y después el gel se homogeniza en una mezcladora convencional con cuchillas durante 1 hora 30 minutos (= gel Bl/142.9 g).

Por último el gel se puede desgasificar, cargar en jeringas de vidrio de 2 mi y esterilizar utilizando un autoclave de vapor a 130°C durante 3 minutos (=gel B).

El gel es particulado, cohesivo, viscoelástico.

En efecto, este último tiene apariencia de un gel viscoelástico (éste tiene propiedades de elasticidad G' y viscosidad G''/ véase más adelante) tiene fuerte cohesividad (véase ejemplo 2) y contiene partículas de hidroxiapatita.

La concentración de ácido hialurónico del gel es 17.5 mg/ml (1.75%) (prueba con carbazol, método de la Farmacopea Europea). Por otro lado, el pH (7.15) y la osmolaridad (315 mOsm/kg) del gel son valores fisiológicos.

El gel se puede inyectar fácilmente a través de una aguja: se requiere una fuerza de 26.3 N para empujar el gel a través de una aguja de 1 de calibre 21, considerando una velocidad de empuje de 12.5 mm/minuto.

Los geles D y B se caracterizan desde un punto de vista mecánico/reológico: el reómetro utilizado para efectuar estas caracterizaciones es un AR2000 (TA Instruments) con una geometría plana de 40 mm, un espacio de aire de 1,000 micrómetros y una temperatura de análisis de 25°C.

Una medición de la elasticidad (G') y de la relación de viscosidad con respecto a la elasticidad (tan delta=G' ' /G') se efectúa utilizando un barrido de frecuencia de 0.1 a 100 Hz.

Se efectúa una comparación de los parámetros a 1 Hz.

Se observa que el producto B tiene una elasticidad significativamente más alta que la del producto A. Los valores tan delta de cada uno de los productos A y B, sin embargo, son relativamente cercanos: el gel B retiene una naturaleza sustancialmente viscosa, a pesar de la presencia de las partículas de hidroxiapatita (las cuales por sí mismas tienen elasticidad elevada y viscosidad insignificante). Esta elasticidad más fuerte, en combinación con la fuerte cohesividad del producto de conformidad con la invención, provee una capacidad mejorada del producto para generar volumen en los tejidos.

Una medición de la fuerza normal inducida por el gel a ser analizado se efectúa comprimiendo la muestra entre la paca de Peltier y la geometría para un espacio de aire de 1,500 micrómetros y una cantidad de gel de 1.4 g.

Se puede observar que el producto B tiene una elasticidad y una fuerza normal inducida significativamente más fuertes que la del producto A.

Esta elasticidad más fuerte, combinada con la fuerte cohesividad del gel de conformidad con la invención, provee una mejor capacidad del producto para generar volumen en los tejidos.

EJEMPLO 2 Importancia de la denominada estructura cohesiva del gel basado en HA entrelazado-comparación El gel Al (de una denominada estructura cohesiva o monofásica) descrito en el ejemplo 1 se dializa con una solución fisiológica iso-osmolar que tiene pH neutro (celulosa regenerada, limite de separación: masa molecular = 60 kDa) con el fin de obtener una concentración de ácido hialurónico de 20 mg/ml (2%).

Después se agrega hidroxiapatita de calcio en el gel para obtener una concentración de 200 mg/ml (20%) y después se efectúa el mezclado con una espátula (2 minutos para 5 g de gel).

El gel obtenido de esta manera después se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 20 minutos (=gel B' de conformidad con la invención).

El gel comercial Resylane® Perlane® (lote 11363-1) basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una estructura no cohesiva o bifásica, cuya concentración de ácido hialurónico es 20 mg/ml (2%), se dopa con 200 mg/ml (20%) de hidroxiapatita de calcio mezclando con una espátula (2 minutos para 5 g de gel).

El gel obtenido de esta manera se esteriliza después en el autoclave a 121°C durante 20 minutos (=gel X)- El gel Al y el gel Restylane® Perlane® se comparan de conformidad con la siguiente prueba: En matraces de 30 mi que contienen 5 mi de agua purificada, se introduce 1 mi de gel Al en el matraz 1 y 1 mi de gel Restylane® Perlane® se introduce en el matraz 2. Después de cerrar los matraces, ambos matraces se mezclan manualmente durante 5 segundos.

Después de 10 segundos, se observa que el gel Restylane® Perlane® se ha disgregado/dispersado completamente, formando una multitud de partículas en la solución acuosa. Por lo tanto el gel Restylane® Perlane® tiene en efecto una denominada estructura no cohesiva o bifásica (el gel se dispersa rápidamente en la solución acuosa) .

Sin embargo, el gel Al, siempre está en forma de una "bola de gel" en la solución acuosa. Por lo tanto éste tiene en efecto una denominada estructura cohesiva o monofásica (el gel no se dispersa rápidamente en la solución acuosa, tiene fuerte cohesividad, a diferencia del gel Restylane® Perlane®).

El gel B' de conformidad con la invención y el gel X se comparan de conformidad con la siguiente prueba (véase figura 1): En un matraz de 30 i de plástico que contiene 5 mi de agua purificada, se introduce 1 i del gel B' en el matraz y 1 mi de gel X en el matraz 2. Después de cerrar los matraces, ambos matraces se mezclan durante 5 segundos, manualmente.

Después de 10 segundos se observa que el gel X se ha disgregado/dispersado completamente, formando una multitud de partículas en la solución acuosa. El gel X tiene una estructura viscoelástica, particulada, no cohesiva. Esta no corresponde a las características del gel de conformidad con la invención. En la práctica médica para un uso en estética, este último se difundirá/migrará alrededor del área inyectada.

El gel B', por sí mismo, siempre está en forma de una "bola de gel" en la solución acuosa. Este por lo tanto tiene en efecto una estructura cohesiva particulada la cual dentro del alcance de la práctica médica para uso en estética dará la posibilidad de no difundirse/migrar alrededor del área inyectada, y por lo tanto evitará complicaciones relacionadas con la migración de las partículas de hidroxiapatita en los tejidos pero también tendrá mejor desempeño a largo plazo del producto debido a que el gel inyectado será capaz de mantener su capacidad de generar volumen en los tejidos a través de un periodo largo, en vista de la ausencia de migración del biomaterial desde el área tratada.

EJEMPLO 3 Importancia de la viscoelasticidad del gel de conformidad con la Invención-Comparación Sea C un gel preparado de conformidad con el mismo procedimiento (pasos 1 y 2) como el descrito en el ejemplo 1 introduciendo 200 mg de BDDE en lugar de 420 mg.

Sea D un gel preparado de conformidad con el mismo procedimiento (pasos 1 y 2) como el descrito en el ejemplo 1 introduciendo 290 mg de BDDE en lugar de 420 mg.

El gel C se caracteriza desde un punto de vista mecánico/reológico. El reómetro utilizado para efectuar las caracterizaciones reológicas es un AR2000 (TA Instruments) con una geometría plana de 40 mm, un espacio de aire de 1000 micrómetros y una temperatura de análisis de 25°C.

Se efectúa una medición de la relación viscosidad a elasticidad (tan delta=G'' /G' ) realizando un barrido de frecuencia desde 0.01 a 100 Hz.

Se efectúa una comparación de los parámetros a 1 Hz.

Se observa que las partículas de hidroxiapatita tienden a sedimentar con el tiempo (un fenómeno que es bien observado cuando una muestra se transfiere a la centrífuga) para el gel C, lo cual no se observa para el gel D.

Esta sedimentación implica obtener productos basados en partículas de hidroxiapatita no homogéneas, lo cual no es satisfactorio para el acto de inyectar el gel a través de una aguja (bloqueo de la aguja) pero tampoco para la seguridad y el desempeño del producto en el área de inyección (riesgos significativos de complicaciones tales como por ejemplo la generación de las denominadas áreas duras en los tejidos de la piel).

Como se muestra en el ejemplo 2, la cohesividad del gel de conformidad con la invención es significativa pero también es requerido que la naturaleza viscoelástica de esta última sea apropiada para: - evitar la sedimentación de las partículas de hidroxiapatita con el tiempo dentro de su contenedor, - evitar tener un producto que se separe en 2 fases (partículas de hidroxiapatita y gel de ácido hialurónico entrelazado) durante la inyección y/o en el área de inyección, con lo cual se generan zonas heterogéneas, en el área tratada.

La naturaleza elástica del gel (con relación a su viscosidad) debe ser por lo tanto, suficientemente grande para que sea capaz de evitar la sedimentación de las partículas.

EJEMPLO 4 Comparación del gel de conformidad con la invención con soluciones de la téenica antecedente a) Formulación basada en HA no entrelazado y en hidroxiapatita Como se describe en la literatura, el ácido hialurónico no entrelazado, in vivo, tiene un tiempo de vida de menos de una semana.

Por lo tanto, un solución de HA no entrelazado con hidroxiapatita no es de interés debido a que el ácido hialurónico no entrelazado será resorbido muy rápidamente y no permitirá evitar la migración de las partículas de hidroxiapatita a largo plazo. b) Formulación acuosa de hidroxiapatita Se prepara una solución acuosa de hidroxiapatita (SI) (30% de hidroxiapatita fosfocálcica que tiene un tamaño de grano comprendido entre 30 y 50 micrómetros en una solución fisiológica iso-osmolar y que tiene pH neutro).

En un matraz de plástico de 30 mi que contiene 5 i de agua purificada, se introduce 1 mi de solución SI. Se observa dispersión inmediata de las partículas de hidroxiapatita en el matraz.

A diferencia de la formulación de conformidad con la invención, la solución SI es incapaz de mantener las partículas de hidroxiapatita en el área de inyección a largo plazo. c) Formulación basada en CMC e hidroxiapatita (véase figura 1) Se prepara una formulación acuosa de carboximetilcelulosa (CMC) y de hidroxiapatita (S3) (30% de hidroxiapatita fosfocálcica que tiene un tamaño de grano comprendido entre 30 y 50 micrómetros, y 2% de CMC a 250,000 Da en una solución fisiológica iso-osmolar que tiene un pH neutro).

En un matraz de plástico de 30 i que contiene 5 mi de agua purificada, se introduce 1 mi de la formulación S3. Después de cerrar el matraz, el matraz se mezcla manualmente durante 5 segundos.

Después de 10 segundos, se observa que la formulación S3 se disgrega/dispersa completamente como una multitud de partículas en la solución acuosa.

A diferencia de la formulación de conformidad con la invención, la formulación S3 es incapaz de mantener las partículas de hidroxiapatita en el área de inyección a largo plazo.

Claims (17)

REIVINDICACIONES

1.- Una formulación acuosa estéril inyectable, utilizada para propósitos estéticos, en forma de un gel viscoelástico cohesivo particulado que comprende i) ácido hialurónico entrelazado, o una de sus sales a una concentración de entre 1% y 4% (masa/volumen); el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, y ii) hidroxiapatita a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen), dicha hidroxiapatita está en forma de partículas con un tamaño medio menor de o igual a 200 pm; dicha formulación acuosa estéril inyectable tiene propiedades viscoelásticas tales que tan d a la frecuencia de 1 Hz es menor de o igual a 0.60.

2.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la masa molecular del ácido hialurónico, o de una de sus sales, está entre 2.5 x 105 Da y 4 x 106 Da.

3.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque la formulación se ha esterilizado con calor húmedo.

4.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la concentración del ácido hialurónico entrelazado o de una de sus sales, está entre 1% y 3% (masa/volumen), de preferencia entre 1.5% y 2.5% (masa/volumen).

5.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la concentración de hidroxiapatita está entre 10 y 50% (masa/volumen) de preferencia entre 20% y 40% (masa/volumen).

6.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el tamaño promedio de las partículas de hidroxiapatita es menor de o igual a 50 mm y mayor de o igual a 10 pm.

7.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la formulación también comprende uno o varios materiales cerámicos.

8.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la formulación comprende además uno o varios anestésicos.

9.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque dichos uno o varios anestésicos se seleccionan a partir del grupo que comprende lidocaina sola o en combinación con adrenalina, articaina sola o en combinación con adrenalina, mepivacaina, pramocaina, quinisocaina, o una o varias de las sales de estos anestésicos.

10.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el anestésico es clorhidrato de lidocaina.

11.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la formulación comprende además uno o varios antioxidantes.

12.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque dichos uno o varios antioxidantes se seleccionan a partir de la familia de polioles.

13.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque los polioles comprenden sorbitol, glicerol, manitol o propilenglicol.

14.- La formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque es utilizada para llenar y/o restaurar volúmenes y/o remplazar tejidos biológicos .

15.- Un kit caracterizado porque comprende la formulación acuosa estéril inyectable de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.

16.- El kit de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque está en forma de una jeringa, una ampolleta o un matraz.

17.- Un método para elaborar una formulación acuosa estéril inyectable que comprende los pasos: a) preparar una primera mezcla que comprende por lo menos 1% a 4% en peso de ácido hialurónico entrelazado o de una de sus sales, formando enlaces covalentes entre las cadenas de dicho biopolimero por medio de moléculas bifuncionales o polifuncionales, el entrelazamiento efectuado brinda la posibilidad de obtener un gel basado en ácido hialurónico entrelazado que tiene una denominada estructura cohesiva, b) purificar dicha mezcla, c) agregar después hidroxiapatita a una concentración de entre 5% y 60% (masa/volumen) dispersándola homogéneamente en el gel basado en ácido hialurónico entrelazado, d) convertir el gel obtenido de esta manera en una forma lista para utilizar, e) esterilizar el producto con calor húmedo.