BR112012024338A2

BR112012024338A2 - formas sólidas de (r)-1(2,2-diflúorbenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-n-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1h-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida

Info

Publication number: BR112012024338A2
Application number: BR112012024338-1A
Authority: BR
Inventors: Ali Keshavarz-Shokri; Tim Edward Alcacio; Elaine Chungmin Lee; Yuegang Zhang; Mariusz Krawiec; Beil Zhang
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date: 2010-03-25
Filing date: 2011-03-25
Publication date: 2020-09-01
Also published as: CN102892764B; JP2018048207A; AU2016208341B2; IL257542A; JP6913623B2; EP4253381A2; SI2826776T1; JP6326570B2; US20110251253A1; PL2826776T3; JP2020094068A; EP3835297C0; DK2826776T3; LTPA2021508I1; MX347804B; NZ602665A; EP3181561B1; HRP20230661T1; JP6964702B2; AU2011230508A1

Abstract

  FORMAS SÓLIDAS DE (R)-1-(2,2-DIFLUORBENZO[D][1,3]DIOXOL-5-IL)-N-(1-(2,3-DIIDROXIPROPIL)-6-FLÚOR-2-(1-HIDRÓXI-2-METILPROPAN-2-IL)-1H-INDOL-5-IL) CICLOPROPANOCARBOXAMIDA, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E DISPERSÕES SÓLIDAS COMPREENDENDO AS MESMAS, PROCESSO DE PREPARAÇÃO E USOS DAS MESMAS, E KIT COMPREENDENDO AS MESMAS. A presente invenção se refere às formas sólidas de (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (composto 1) na forma substancialmente cristalina (Forma A) ou forma amorfa, composições farmacêuticas das mesmas e usos das mesmas.

Description

Relatório descerítivo da Patente de Invenção para: “FORMAS SÓLIDAS DE (R)-1(2,2-DIFLÚORBENZO[D] [1,3] DIOXOL-5-IL)-N-(1- (2, 3-DIHIDROXIPROPIL) -6-FLÚOR-2- (1-HIDROXI-2-METILPROPAN-2- IL) - LH-INDOL-5-IL) CICLOPROPANOCARBOXAMIDA” .

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO À presente invenção se refere às formas de estado sólido, por exemplo, formas cristalinas e amorfas, de (R)- 1-(2,2-difluorbenzo(d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-diidroxi propil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol- 5-il)ciclopropanocarboxamida, composições farmacêuticas das mesmas e aos métodos com estas.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO CETR é um canal aniônico mediado por cAMP/AIP que é expresso em uma variedade de tipos celulares, incluindo às células epiteliais secretórias e de absorção, onde regula o fluxo de ânion através da membrana, bem como a atividade de outros canais iônicos e proteínas. Nas células epiteliais, o funcionamento normal de CFTR é essencial para a manutenção do transporte de eletrólito em todo o corpo, incluindo o tecido respiratório e digestivo. CFTR é composto por cerca de 1.480 aminoácidos que codificam uma proteina constituída de uma repetição em série de domínios transmembrana, cada uma contendo seis hélices transmembrana e um domínio de lígação de nucleotideo. Os dois domínios

. 2 transmembrana estão ligados por um domínio-(R) regulatório, grande, polar com multiplos sítios de fosforilação que regulam a atividade do canal e o tráfego celular. O gene que codifica CFTR foi identificado e seguenciado (vide Cregory, R. oO. e col., (1990) Nature 347:382-386; Rich, D. P. é col., (1990) Nature 3S47:358-262) tRiordan, d. E. e col., (1989) Seience 245:1066-1073). Um defeito nesse gene provoca mutações em CFTR, resultando em fibrose cística ("CF"), a doença genética fatal mais comum nos seres humanos. A fibrose cística afeta aproximadamente uma em cada 2.500 crianças nos Estados Unidos. Entre a população geral dos Estados Unidos, até 10 milhões de pessoas carregam uma única cópia do gene defeituoso, sem efeitos nocivos aparentes. Em contraste, os indivíduos com duas cópias do gene associado a CF sofrem com os efeitos debilitantes e fatais da CF, incluindo doença pulmonar & crônica.

Em pacientes com fibrose cística mutações em CETR endogenamente expressas no epitélio respiratório levam à reduzida secreção apical de ânions, provocando um desequilíbrio no transporte de íons e fluidos. A diminuição resultante no transporte dos àânions contribui para o aumento do acúmulo de muco no pulmão e das infecções microbianas associadas que, em última análise, provocam a

. 3 morte em pacientes com CF.

Além das doenças respiratórias, pacientes com CF normalmente sofrem de problemas gastrointestinais e insuficiência pancreática que, se não tratados, resultam em morte.

Além disso, a maioria dos homens com ribrose cística são inférteis e a fertilídade é diminuída em mulheres com fibrose cística.

Em contraste com os efeitos severos das duas cópias do gene associado à CF, indivíduos com uma única cópia do gene associado à CF exibem resistência aumentada à cólera e à desidratação resultante de diarréia, talvez explicando a frequência relativamente alta do gene de CF na população.

A análise da sequência do gene CFTR dos cromossomos de CF revelou uma variedade de mutações causadoras de doenças (Cutting, 6. R. e col., (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. e col., (1990) Cell 61:863:870; e Kerem, B-S. e col., (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S e col., (1990) Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

EUA 87:8447-8451). Até o momento, mais de 1.000 mutações causadoras de doenças no gene de CF foram identificadas, como reportado pela literatura científica e médica.

A mutação mais prevalecente é uma eliminação de fenilalanina na posição 508 da sequência de aminoácidos de CEIR, e é geralmente referida como AEFSOS- CFTR.

Esta mutação ocorre em aproximadamente 70% dos casos de fibrose cística e está associada a uma doença grave.

. 4 Outras mutações incluem a R117H e G551D.

A eliminação do resíduo 508 em AF508-CFTR impede que a proteína nascente se dobre corretamente. Isto resulta na incapacidade da proteína mutante de deixar o RE e seguir S para a membrana plasmática. Como resultado, o número de canais presentes na membrana é muito menor que o observado nas células que expressam CFTR do tipo selvagem. Além do tráfego prejudicado, a mutação resulta na abertura defeituosa do canal. Em conjunto, o reduzido número de canais na membrana e a abertura defeituosa resultam no transporte reduzido de ânions através de epitélios, levando ao transporte defeituoso de íons e fluido. (Quinton, P.M. (1990) FASEB J. 4d: 2709-2727), Estudos mostraram, contudo, que os números reduzidos de AF5O8-CFTR na membrana são funcionais, ainda que inferiores aos de CFIR de tipo selvagem. (Dalemans e col., (1991). Nature Lond. 354: 526- 528; Denning e col., supra; Pasyk e Foskett (1995) J. Cell. Biochem. 270: 12347-50). Além de AFSO8-CFTR, outras mutações causadoras de doenças em CFTR que resultam em tráfego, síntese e/ou abertura de canal defeituosos podem ser suprarreguladas ou infrarreguladas para alterar à secreção de ânion e modificar a progressão e/ou gravidade da doença.

Apesar de CFTR transportar uma variedade de moléculas

. 5 além dos ânions, é evidente que este papel (o transporte de ânions) representa um elemento em um importante mecanismo de transporte de ions e água através do epitélio, Os outros elementos incluem o canal de Na* epitelial, ENaC, co- transportador Na'/2Cl /K', bomba Na'-K'-ATPase e os canais de K' da membrana basolateral, que são responsáveis pela captação de cloreto na célula.

Esses elementos trabalham em conjunto para realizar o transporte direcional através do epitélio pela sua expressão seletiva e localização dentro da célula.

A absorção de cloreto é realizada pela atividade coordenada de ENaC e CFTR presentes na membrana apical e pela bomba Na*-K'"-ATPase e canais de Cl” expressos na superfície basolateral da célula.

O transporte ativo secundário de 45 cloreto a partir do lado lumínal conduz ao acúmulo de cloreto intracelular, que pode, então, deixar passivamente a célula através dos canais de Cl, resultando em um transporte vetorial.

A disposição do co-transportador Na*/2C1"/K', bomba Na'-K'-ATPase e dos canais de K* da membrana basolateral na superfície basolateral e CETR no lado luminal coordenam a secreção de cloreto via CFTR no lado luminal.

Uma vez que a água provavelmente nunca é transportada ativamente por si mesma, seu fluxo através do epitélio depende de diminutos gradientes osmóticos

. 6 transepiteliais gerados pelo fluxo em massa de sódio e cloreto.

Como discutido acima, acredita-se que àa eliminação do resíduo 508 em AF508-CFTR impede que a proteína nascente se dobre corretamente, resultando na incapacidade desta proteína mutante de deixar o RE e seguir para a membrana plasmática.

Como resultado, quantidades insuficientes da proteína madura estão presentes na membrana plasmática e o transporte de cloreto nos tecidos epiteliais é significativamente reduzido.

Na verdade, este fenômeno celular de processamento defeituoso do retículo endoplasmático (RE) dos transportadores de cassete de ligação ao ATP (ABC) pelo maquinário do RE mostrou ser a base fundamental, não só para a doença CF, mas também para uma grande variedade de outros doenças isoladas e hereditárias.

As duas formas nas quais o maquinário do RE pode funcionar errado são tanto pela perda de acoplamento à exportação de proteínas do RE, que conduz à degradação, ou pelo acúmulo no RE dessas proteínas defeituosas/mal dobradas [Aridor M, e col., Nature Med., 5(7) pp 745-751 (1999); Shastry, B.S., e col., Neurochem.

International, 43, pp 1-7 (2003); Rutishauser, J., e col., Swiss Med Wkly, 132, pp 211-222 (2002); Morello, JP e col., TIPS, 21, pp. 466-469 (2000); Bross P., e col., Human Mut., 14, pp. 186-

. y 198 (1999)].

(R) -1- (2, 2-difluorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3- dihidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)- lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida é divulgada no Pedido de Patente US Publicado US20090131492 (dita publicação sendo incorporada ao presente documento em sua totalidade) como um modulador da atividade de CHIR e, assim, útil no *tratamento de doenças mediadas por CEFIR, tal como fibrose cística. Permanece, entretanto, à necessidade de formas sólidas estáveis do referido composto que possam ser prontamente utilizadas em composições farmacêuticas adequadas para uso na terapêutica.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção se refere às formas sólidas de (R)=1-(2,2-diflúor-benzo[di [1,3] dioxo!-5-11)-N-(1-(2,3-di- hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH- indol-5-il)ciclopropanocarboxamida (doravante "Composto 1"), que possui a estrutura abaixo: o N ED St ISOS Fo F te

OH oH Composto 1.

. 8 O composto 1 e as composições farmaceuticamente aceitáveis do mesmo são úteis para tratar ou diminuir oa gravidade das doenças mediadas por CFTR como, por exemplo, fibrose cística. Em um aspecto, o Composto 1 está em uma forma substancialmente cristalina e livre salina denominada Forma À, como descrito e caracterizado neste documento. Em outro aspecto, o Composto 1 está em uma forma amorfa, tal como descrito e caracterizado neste documento. As propriedades de um sólido relevantes para a sua eficácia Como um fármaco podem ser dependentes da forma do sólido. Por exemplo, em uma substância de fármaco, a variação na forma sólida pode levar a diferenças nas propriedades, como ponto de fusão, taxa de dissolução, absorção oral, biodisponibilidade, resultados toxicológicos e até mesmo resultados de ensaio clínico.

Os processos aqui descritos podem ser usados para preparar as composições desta invenção, compreendendo a Forma A ou forma amorfa do Composto 1, ou ambas, àAs quantidades e as características dos componentes utilizados nos processos são como descritos neste documento.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 é um padrão de difração de pó de raios-x do Composto 1.

A Figura 2 é um traçado da calorimetria diferencial de

. 9 varredura (DSC) do Composto 1.

A Figura 3 é um gráfico de análise termogravimétrica (TGA) do Composto 1.

A Figura 4 é um padrão de difração de pó de raios-X calculado à partir de um cristal único do Composto 1 Forma A.

A Figura 5 é um padrão real de difração de pó de raios-x do Composto 1 Forma A, preparado pela técnica de suspensão (2 semanas) com DCM como solvente.

A Figura 6 é um traçado de calorimetria diferencial de WwWarredura (DSC) do Composto 1 Forma À.

A Figura 7 é um padrão real de difração de pó de raios-x do Composto 1 Forma A, preparado pelo método de evaporação rápida a partir de acetonitrila.

A Figura 8 é um padrão real de difração de pó de raios-x do Composto 1 Forma A, preparado pelo método de anti-solvente usando EtOAc e heptano.

A Figura 9 é uma imagem conformacional do Composto 1 Forma A, com base na análise de raios-X de cristal único.

A Figura 10 é uma imagem conformacional mostrando a ordem de empacotamento do Composto 1 Forma A.

A Figura 11 é um espectro de RMN “C de estado sólido (rotação de 15,0 KH2) do Composto 1 Forma À.

A Figura 12 é um espectro de RMN **F de estado sólido

: 10 (rotação de 12,5 KHz) do Composto 1 Forma A.

A Figura 13 é um padrão de difração de pó de raios-x do Composto 1 forma amorfa, a partir do método de rotaevaporação de evaporação rápida.

A Figura 14 é um traçado de calorimetria diferencial de varredura modulada (MDSC) do Composto 1 forma amoria, preparado pelo método de rotaevaporação de evaporação rápida.

A Figura 158 é um gráfico de anátise termogravimétrica 40 (TGA) do Composto 1 forma amorfa, preparado pelo método de rotaevaporação de evaporação rápida.

A Figura 16 é um padrão de difração de pó de raios-x do Composto 1 forma amorfa, preparado por métodos de atomização.

A Figura 17 é um traçado de calorimetria diferencial de varredura modulada (MDSC) do Composto 1 forma amorfa, preparado por métodos de atomização.

A Figura 18 é um espectro de RMN **C de estado sólido (rotação de 15,0 KHz) do Composto 1 forma amorfa.

A Figura 19 é um espectro de RMN **F de estado sólido (rotação de 12,5 KHz) do Composto 1 forma amorfa.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições Como aqui utilizado, as seguintes definições devem ser

. 11 aplicadas, salvo indicação em contrário.

O termo "CEIR", como usado na presente invenção, significa regulador de condutância transmembrana de fibrose cística ou uma mutação do mesmo, capaz de regular a atividade, incluindo, mas não limitado, a AF508 CFTR e G551D CFTR (ver, por exemplo, http: //www.genet.sickkids.on.ca/cftr/, para mutações de CFTR) .

Como aqui utilizado, o termo "amorfo" se refere às formas sólidas que consistem em disposições desordenadas de moléculas e que não possuem um retículo cristalino distinguível.

Como aqui utilizado, "cristalino" se refere aos compostos ou composições onde as unidades estruturais são dispostas em padrões ou retículos geométricos fixos, de modo que os sólidos cristalinos tenham ordem rígida de longo alcance. As unidades estruturais que constituem a estrutura cristalina podem ser átomos, moléculas ou íons. Os sólidos cristalinos apresentam pontos de fusão definidos.

O termo "modulação", como usado na presente invenção, significa aumento ou diminuição, por exemplo, da atividade, por uma quantidade mensurável.

O termo "quimicamente estável", como usado neste

. 12 documento, significa que a forma sólida do Composto 1 não se decompõe em um ou mais compostos químicos diferentes quando submetida às condições especificadas, por exemplo, 40ºC/75% de umidade relativa, por um período específico de tempo, por exemplo, de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 1 semana, 2 semanas, ou períodos mais longos. Em algumas concretizações, menos de 25% da forma sólida do Composto 1 se decompõe, em algumas concretizações, menos de cerca de 20%, menos de cerca de 15%, menos de cerca de 10%, menos de cerca de 5%, menos de cerca de 3%, menos de cerca de 1%, menos de cerca de 0,5% da forma do Composto 1 se decompõe sob as condições especificadas. Em algumas concretizações, nenhuma quantidade detectável da forma sólida do Composto 1 se decompõe.

O termo "fisicamente estável", como usado neste documento, significa que a forma sólida do Composto 1 não se altera em uma ou mais diferentes formas físicas do Composto 1 (por exemplo, diferentes formas sólidas conforme medido por XRPD, DSC, eto.) quando submetida à condições específicas, por exemplo, 40ºC/75% de umidade relativa, por um período específico de tempo, por exemplo, de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 1 semana, 2 semanas, ou períodos mais longos. Em algumas concretizações, menos de 25% da forma sólida do Composto 1 se altera em uma ou mais diferentes formas

. 143 físicas quando submetido a condições específicas. Em algumas concretizações, menos de cerca de 20%, menos de cerca de 15%, menos de cerca de 108, menos de cerca de 5%, menos de cerca de 3%, menos de cerca de 18, menos de cerca de 0,5% da forma sólida do Composto 1 se altera em uma ou mais formas físicas diferentes do Composto 1 quando submetido a condições específicas. Em algumas concretizações, nenhuma quantidade detectável da forma sólida do Composto 1 se altera em uma ou mais formas sólidas fisicamente diferentes do Composto 1.

Como aqui utilizada, a frase "Composto 1 substancialmente amorfo” é usada de modo intercambiável com as frases "Composto 1 amorfo," "Composto 1 amorfo substancialmente isento de Composto 1 cristalino" e "(R)-l- (2,2-diflúor-benzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di- hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H- indol-5-il)ciclopropanocarboxamida substancialmente amorfa." Em algumas concretizações, o Composto Tl substancialmente amorfo tem menos de cerca de 30% de Composto 1 cristalino, por exemplo, menos de cerca de 30% do Composto 1 oristalino, por exemplo, menos de cerca de 25% do Composto 1 cristalino, menos de cerca de 20% do Composto 1 cristalino, menos de cerca 15% do Composto 1 cristalino, menos de cerca de 10% do Composto 1 cristalino,

- 14 menos de cerca de 5% do Composto 1 cristalino, menos de cerca de 2% do Composto 1 cristalino.

Como aqui utilizada, a frase “Composto 1 Forma A substancialmente cristalina” é usada de modo intercambiável comas frases “Composto 1 Forma A” e “Composto 1 Forma A cristalino substancialmente isento de Composto 1 amorfo." Em algumas concretizações, Composto 1 Forma A substancialmente cristalino tem menos de cerca de 30% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, por exemplo, menos de cerca de 30% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, por exemplo, menos de cerca de 25% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, menos de cerca de 20% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, menos de cerca de 15% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, menos de cerca de 10% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, menos de cerca de 5% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas, menos de cerca de 2% do Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas.

Em algumas concretizações, o Composto 1 Forma A substancialmente cristalino possui menos de cerca de 1% de Composto 1 amorfo ou outras formas sólidas.

O termo "substancialmente isento" (como na frase "substancialmente isento da forma X"), quando se referindo a uma forma sólida designada do Composto 1 (por exemplo,

- 15 uma forma amorfa ou cristalina descrita neste documento) significa que há menos de 20% (em peso) da(s) forma(s) ou co-forma(s) designada(s) (por exemplo, uma forma cristalina ou amorfa do Composto 1) presente(s), mais preferencialmente, há menos de 10% (em peso) da(s) forma(s) designada(s) presente(s), mais preferencialmente, há menos de 5% (em peso) da(s) formais) designada(s) presente(s) e, mais preferencialmente, há menos de 1% (em peso) da(s) forma(s) designada(s) presente(s).

O termo "substancialmente puro", quando se refere a uma forma sólida designada do Composto 1 (por exemplo, uma forma sólida amorfa ou cristalina descrita neste documento) significa que a forma sólida designada contém menos de 20% (em peso) de componentes residuais, como forma(s) ou cor forma(s) cristalina(s) polimórfica(s) ou isomórfica(s) alternada(s) do Composto 1. É preferível que uma forma sólida substancialmente pura do Composto 1 contenha menos de 10% (em peso) das formas cristalinas polimórfica ou isomórfica alternadas do Composto 1, mais preferencialmente menos de 5% (em peso) das formas cristalinas polimórfica ou isomórfica alternadas do Composto 1, e mais preferencialmente menos de 1% (em peso) das formas cristalinas polimórfica ou isomórfica alternadas do Composto 1.

. 16

Como aqui utilizado, uma “dispersão” se refere a um sistema disperso em que uma substância, a fase dispersa, é distribuída, em unidades discretas, em uma segunda substância (a fase ou veículo contínuo). O tamanho da fase S dispersa pode variar Consideravelmente (por exemplo, de partículas coloidais de dimensão nanométrica até vários mícrons em tamanho). Em geral, as fases dispersas podem ser sólidos, líquidos ou gases.

No caso de uma dispersão sólida, as fases dispersa e contínua são ambas sólidas.

Em aplicações farmacêuticas, uma dispersão sólida pode incluir Um fármaco cristalino (fase dispersa) em um polímero amorro (fase contínua) ou, alternativamente, um fármaco amorfo (fase dispersa) em um polímero amorfo (fase contínua). Em algumas concretizações, uma dispersão sólida amorfa inclui 19 o polímero que constitui a fase dispersa e o fármaco constitui a fase contínua.

Em algumas concretizações, a dispersão incluí. o Composto 1 amorfo ou o Composto 1 substancialmente amorfo.

O termo "dispersão sólida amorfa" geralmente se refere a uma dispersão sólida de dois ou mais componentes, deraltmente um fármaco e polímero, porém possivelmente contendo outros componentes, como tensoativos Ou outros excipientes farmacêuticos, onde o Composto 1 é amorfo ou substancialmente amorfo (por exemplo, substancialmente

. 17 ásento do Composto 1 cristalino), e a estabilidade física e/ou dissolução e/ou solubilidade do fármaco amorfo é melhorada pelos outros componentes.

Como aqui utilizado, os termos “cerca de” e s “aproximadamente”, quando usados juntamente com doses, quantidades ou porcentagem em peso dos ingredientes de uma composição ou uma forma de dosagem significam uma dose, quantidade ou porcentagem em peso, que é reconhecido por Uma pessoa versada na técnica, para fornecer um efeito farmacológico equivalente àquele obtido da dose, quantidade ou porcentagem em peso especificados.

Especificamente, O termo "cerca de” ou "aproximadamente" significa um erro aceitável para um valor particular, conforme determinado por uma pessoa versada na técnica, que depende, em parte de como o valor é medido ou determinado.

Em certas concretizações, o termo "cerca de" ou "aproximadamente" significa dentro de 1, 2, 3 ou 4 desvios padrão.

Em certas concretizações, o termo "cerca de" ou "aproximadamente" significa dentro de 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 899, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1% ou 0,05% de um determinado valor ou faixa.

As abreviaturas "MTBE" e "DCM" significam éter metil- t-butílico e diclorometano, respectivamente.

A abreviatura "XRPD" representa difração de pó de

. 18 raios-x.

A abreviatura "DSC" significa calorimetria diferencial de varredura.

A abreviatura "TGA" significa análise termogravimétrica.

Salvo disposição em contrário, as estruturas descritas neste documento também se destinam a incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou conformacionais)) da estrutura; por exemplo, as configurações R e S para cada centro assimétrico, isômeros de dupla ligação (2) e (E), e isôêmeros conformacionais (Z) e (E). Portanto, os isômeros estereoquímicos individuais, bem como as misturas enantioméricas, diastereoméricas e geométricas (ou conformacionais) dos presentes compostos estão dentro do escopo da invenção. Todas as formas tautoméricas do : Composto 1 estão incluídas neste documento. Por exemplo, O Composto 1 pode existir como tautômeros, ambos os quais sendo incluídos neste documento: AS e i eo F N ou e 'oH | 20 Além disso, a menos que seja indicado de outra forma,

. 19 as estruturas descritas neste documento também se destinam a incluir compostos que diferem apenas quanto à presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, o Composto 1, em que um ou mais átomos de hidrogênio São substituídos por deutério ou trítio, ou um ou mais átomos de carbono são substituídos por um carbono enriquecido com 1c ou "Cc, estão dentro do escopo da presente invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíticas, sondas em ensaios biológicos ou compostos com perfil terapêutico melhorado.

Em um aspecto, a invenção representa (R) -1- (2,27 diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxi propil)-6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-11) =IH-indol— 5-il)ciclopropanocarboxamida, caracterizado como a Forma cristalina A.

Em outra concretização, a Forma A é caracterizada por um ou mais picos em 19,3 a 19,7 graus, 21,5 a 21,9 graus e 16,9 a 17,3 graus em uma aifração de pó de raios-X obtida utilizando radiação alfa de Cu-K. Em outra concretização, a Forma A é caracterizada por um ou mais picos em cerca de 19,5, 21,7 e 17,1 graus. Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 20,2 a 20,6 graus. Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 20,4 graus. Em outra

. 20 concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 18,6 a 19,0 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 18,8 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 24,5 à 24,9 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 24,7 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 9,8 a 10,2 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 10,0 graus.

Em outra concretização, à Forma A &é adicionalmente caracterizada por um pico em 4,8 a 5,2 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 5,0 graus.

Em outra concretização, à FOrma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 24,0 a 24,4 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 24,2 graus.

Em outra concretização, à Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em 18,3 à 18,7 graus.

Em outra concretização, a Forma A é adicionalmente caracterizada por um pico em cerca de 18,5 graus.

Em outra concretização, a Forma A é caracterizada por um padrão de difração substancialmente semelhante ao da Figura 4. Em outra concretização, a Forma A é caracterizada

. 21 por um padrão de difração substancialmente semelhante ao da Figura 5. Em outro aspecto, à invenção apresenta una Forma cristalina de (R)-l-(2,2-difiúorbenzo([d] [1,3] dioxol-5-11)- N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-flúor-2-(l1-hidróxi-2-metil- propan-2-il)-l1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida com um sistema de cristal monoclínico, um grupo espacial C2 e as seguintes dimensões de célula unitária a = 21,0952(16) À, a ” = 90º, b = 6,6287(5) À, B = 95,867(6)º, c = 17,7917(15) À e 30 y= 90".

Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição farmacêutica que compreende à Forma À e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em outra concretização, à composição farmacêutica compreende — ainda um agente terapêutico adicional. Em outra concretização, Oo agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador de CFIR ou um agente nutricional.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um processo de preparação da Forma A que compreende a suspensão de (R)-l- (2, 2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxi propil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol- 5-il)ciclopropanocarboxamida em um solvente por um período

. 22 de tempo eficaz. Em outra concretização, O solvente é acetato de etila, diclorometano, MTBE, acetato de isopropila, água/etanol, água/acetonitrila, água/metanol ou água/álcool isopropílico. Em outra concretização, O período de tempo eficaz é de 24 horas a 2 semanas. Em outra concretização, o período de tempo eficaz é de 24 horas a 1 semana. Em outra concretização, o período de tempo eficaz é de 24 horas a 72 horas.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um processo de preparação da Forma A que compreende a dissolução de (R)-1- (2,2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2, 3-di-hidroxi propil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol- 5-il) ciclopropanocarboxamida em um solvente e evaporação do solvente. Em outra concretização, o solvente é acetona, acetonitrila, metanol ou álcool isopropílico.

Em outro aspecto, a invenção representa um processo de preparação da Forma A que compreende dissolver (R)-1-(2,2- diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxi propil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol- 5-il)ciclopropanocarboxamida em um primeiro solvente e adicionar um segundo solvente em que (R)>-1-12,2-diflúor- benzo[d] [1,3] dioxol-5-il) -N- (1- (2, 3-di-hidroxipropil)-6- Elúor-2- (I-hidróxi-a-metilpropanraril)-lH-indol-b-iljciclo propanocarboxamida não seja solúvel. Em outra

. 23 concretização, o primeiro solvente é acetato de etila, etanol, álcool dAsopropílico ou acetona. Em outra concretização, o segundo solvente é heptano ou água. Em outra concretização, a adição do segundo solvente é feita durante a agitação da solução do primeiro solvente e (R)-1- (2, 2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-S-il)-N=(1-(2,3-0i- hidroxipropil)-6-flúor-2-(l1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH- indol-5-il)ciclopropano carboxamida. Em outro aspecto, a invenção representa um sólido substancialmente amorfo de (R)-1-(2,2-diflúorbenzo(d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-il)ciclopropano carboxamida. Em outra concretização, a (R)-l-(2,2-diflúor benzo[d] [1,3] dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6- flúor-2-(l1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclo propanocarboxamida amorfa compreende menos de cerca de 5% de (R) -1- (2, 2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3- di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)- lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida cristalina.

Em outro aspecto, a invenção representa uma composição farmacêutica que compreende à (R)-l-(2, -diflúor-benzo [d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2- (l-hidróxi-2-metilpropan-2a»il)-lH-indol-S-il)jeiclopropano carboxamida amorfa e um veículo farmaceuticamente

. 24 aceitável. Em outra concretização, a composição farmacêutica compreende ainda um agente terapêutico adicional. Em outra concretização, o agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente antiinflamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

Em outro aspecto, a invenção representa um processo de preparação da (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[a)[1,3]dioxo1l-5-11)- N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metil- propan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa, que compreende à dissolução de (R)-1-(2,2-diflúor-benzofd] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropano carboxamida em um solvente adequado e a remoção do solvente por rotaevaporação. Em outra concretização, Oo solvente é metanol.

Em outro aspecto, a invenção representa uma dispersão sólida que compreende a (R)-1-(2,2-diflúorbenzold] [1,3] dioxoi-S-=il)-N-(1-(2,3-di-hidrokxipropil)-G-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-IH-indol-5-i11) eiclopropano carboxamida amorfa e um polímero. Em outra concretização, o polímero é hidroxipropilmetilcelulose (HPMC). Em outra concretização, o polímero é acetato succinato de

. 25. hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS).

Em outra concretização, o polímero está presente em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso. Em outra concretização, o polímero está presente em uma quantidade de 30t em peso a 60% em peso. Em outra concretização, o polímero está presente em uma quantidade de cerca de 49,5% em peso.

Em outra concretização, a (R)=1-(2,2- aiflúcrbenzo[0] [1,3] dioxol=5-il)-N-(1-(2,3-di- hidroxipropil)=-6-fluúor-2m(I-hidróxi-2ometilpropan-2-11)=10- dándol-5-il1)ciclopropano Carboxamida está presente em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso. Em outra concretização, a (R)-l-(2,2"diflúor benzolal[1,3]dioxol-5- 41) N=-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-G6-flúor-2-(I-hidróxi-cao metilpropan-r2-il)=lH-indol-S-iljciclo propanocarboxamida está presente em uma quantidade de 30% em peso a 60% em peso. Em outra concretização, a (R) -1-(2,2- diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxi propil)-t-fluor-2-(I-hidróxi-2-metilpropan-2-11) =lH2indol> 5-il)ciclopropanocarboxamida está presente em uma quantidade de cerça de 50% em peso.

Em outra concretização, a dispersão sólida compreende ainda um tensoativo. Em outra concretização, o tensoativo é lauril sulfato de sódio. Em outra concretização, o

- 26 tensoativo está presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 5% em peso. Em outra concretização, o tensoativo está presente em uma quantidade de cerca de 0,5% em peso.

Em outra concretização, o polímero é acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS) na quantidade de 49,5% em peso, o tensoativo é lauril sulfato de sódio na quantidade de 0,5%, em peso, e à (R)-l-(2,2-diflúorbenzo [d] [1, 3] dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropano carboxamida está presente na quantidade de 50% em peso.

Em outro aspecto, a invenção representa uma composição farmacêutica que compreende a dispersão sólida e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em outra concretização, a composição farmacêutica compreende ainda um agente terapéutico adicional. Em outra concretização, o agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeceioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

Em outro aspecto, à invenção representa um processo de preparação de (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[(d] [1,3]dioxol-5-il)- N-(1- (2, 3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metil propan-2-il)-l1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa que compreende a atomização de (R) -1- (2, 2-diflúor-

. 27 benzo[dj [1,3] diokol-S-11)-N=-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6- flúor-2- (1-hidróxi-2-metil-propan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclo propanocarboxamida. Em outra concretização, O processo compreende combinar (R) -1- (2, 2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di- hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H- indol-5-il)ciclopropanocarboxamida e um solvente adequado e, a seguir, atomiízar a mistura para obter (R)-1-(2,2- difiúorbenzo[d][1,3]dioxol-5-1il)-N=-(1-12,3-di-hidroxi propil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH-indol- 5-1il) ciclopropanocarboxamida amorfa. Em outra concretização, o solvents é um Álcool. Em outra concretização, O solvente é metanol.

Em outra concretização, O processo compreende: a) formar uma mistura compreendendo (R)=1-(2,2- diflúorbenzo([d] [1,3] dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-di-hidroxi propil1)-e-tlinor-2m (I-nhidróxi-2 metilpropan-2-11)-1H-indol- S5=-il)ciclopropano carboxamida, um polímero e um solvente; e b) atomizar a mistura para formar uma dispersão sólida.

Em outra concretização, o polimero é acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS) . Em outra concretização, o polímero está em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso da dispersão sólida. Em outra concretização, o polímero está em uma quantidade de 49,5%

. 28 em peso da dispersão sólida. Em outra concretização, O solvente é metanol. Em outra concretização, a mistura compreende ainda um tensoativo. Em outra concretização, o tensoativo é lauril sulfato de sódio (SLS). Em outra concretização, o tensoativo está presente em uma quantidade de 0,1% em peso até 5% em peso da dispersão sólida. Em outra concretização, o tensoativo está presente em uma quantidade de 0,5% em peso da dispersão sólida.

Em outra concretização, o polímero é acetato succinato de hidroxipropilmetiloslulose (HPMCAS) na quantidade de cerca de 49,5% em peso da dispersão sólida, o solvente é metanol e a mistura compreende ainda lauril sulfato de sódio em uma quantidade de cerca de 0,5% em peso da dispersão sólida.

Em outro aspecto, a invenção representa um método de tratamento de uma doença mediada por CFTR em um indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz da Forma A de (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[d] [1,3] dioxol- 5-1il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2- metilpropan-2-il)-lH-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa ou a dispersão sólida de (R) -1- (2, 2-diflúor benzo[d] [1, sS)dioxol-5-11)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6- Elnor-2- (1-hidróxi-2-metil-propan-2-i1)-lH-indol-5S-il)ciclo propanocarboxamida amorfa.

. 29

Em outra concretização, a doença mediada por CFTR é selecionada de fibrose cística, asma, DPOC induzida por fumo, bronquite crônica, rinossinusite, constipação, pancreatite, insuficiência pancreática, infertilidade masculina causada por ausência bilateral congênita de vasos deferentes (CBAVD), doença pulmonar branda, pancreatite idiopática, aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA), doença hepática, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de coagulação-fibrinólise,

deficiência de proteína C, angioedema hereditário tipo 1, deficiências de processamento de lipídios, hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, doença de célula I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses,

Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes meilitus, nanismo de Laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo

1, hipertireoidismo congênito, ostengênese imperfeita,

hiporibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurofiseal, DI nefrogênica, síndrome de Charcot-Marie-Tooth, doença de Perlizaeus- Merzbacher, doenças neurodegenerativas, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose Jaáteral

. 30 amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, distúrbios neurológicos de poliglutamina diversos, Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinhal e bulbar, dentatorrubro palidolusiana, distrofia miotônica, encefalopatias espongiformes, doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido ao defeito de processamento de proteína príon), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco, doença de Sjogren, osteoporose, Ostepopenita, sindrome de Gorham, canalopatias de cloreto, miotonia congênita (formas de Thomson e Becker), síndrome de Bartter tipo III, doença de Dent, hipereclepsia, epilepsia, hipereclepsia, doença de armazenamento lisossomal, síndrome de Angelman, discinesia ciliar primária (PCD), distúrbios hereditários da estrutura e/ou Eunção dos cílios, PCD com situs inversus (também conhecida como síndrome de Kartagener), PCD sem situs inversus ou aplasia ciliar.

Em outra concretização, a doença mediada por CFTR é fibrose cística.

Em outra concretização, o indivíduo tem receptor transmembrana de fibrose cística (CFTR) com uma mutação AF508. Em outra concretização, o indivíduo tem receptor transmembrana de fibrose cística (CEFTR) com uma mutação R117H, Em outra concretização, o indivíduo tem receptor transmembrana de fibrose cística (CFTR) com uma mutação G551D.

» 31 Em outra concretização, a composição farmacêutica compreende administração de um agente terapêutico adicional.

Em outra concretização, o agente terapêutico é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti- dnftlamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

Em outro aspecto, a invenção representa um kit que compreende a Forma A, a (R)-1-(2,2-diflúorbenzo(d] [1,3] dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-di-hidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropano carboxamida amorfa ou a dispersão sólida que compreende (R) -1-(2,2-diflúor-benzo[d] [1,3] dioxol-Sril)-N-(1-(2,3-di- hidroxipropil)-6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-lH- indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa e instruções para uso do mesmo.

Métodos de Preparação do Composto 1 Forma A e da Forma Amorfa O Composto 1 é o ponto de partida e, em uma concretização, ele pode ser preparado por acoplamento de uma porção de cloreto de ácido com uma porção amina de acordo com os Esquemas 1-4.

. 32 Esquema 1. Síntese da porção de cloreto de ácido.

1. Redução F. 1. SOCL, DO o O ——. nO F leo 2. NaOH F Lo 2. HO F Ma 1, NaCN

2. HO NaOH Bro, se q— Re qa PEA, = DELA EE SO, Konx FO e Joe Esquema 2. Síntese alternativa da porção de cloreto de ácido. Pa(dba)», -Bu,P —— POA + dos A e Ev 1a,PO,, Fo PoE Tolueno, H20, 70 ºC & HO3N, DMSO, 15% Aa E EO ro NaOH F ON Bu,NBr

1. Nºa0H

2. HCl sock, AAA —— — O,

. 33 Esquema 3, Síntese da porção amina. n oH K, HC! puro 1)M9 205 ! | 2) BROCHZCI | W

TMS TMS TMS

K fx os HAN. Br N. AD e IDO rio, pró F NH mOAc F NH — 2. Ho PYSVC Tso? Non

DA IH; HN IN: OBn| (MeCN)LPACI ISOD PA(OAS)2 F H F te or OBn oBnN Esquema 4. Formação do Composto 1. Es)

F H OH r , ISOQD E ” EN; tolueno Fo >? N E, Hz Pd 'oH Neon oH Composto 1 Métodos para a Formação do Composto 1 Forma A Em uma concretização, a Forma A é preparada pela

. 34 suspensão do Composto 1 em um solvente apropriado durante um período de tempo eficaz. Em outra concretização, Oo solvente apropriado é acetato de etila, diclorometano, MTBE, acetato de isopropila, várias proporções de soluções água/etanol, várias proporções de soluções água/acetonitrila, várias proporções de soluções água/metanol ou várias proporções de soluções água/álcool isopropílico. Por exemplo, várias proporções de soluções água/etanol incluem água/etanol 1:9 (vol/vol), água/etanol 40 1:1 (vol/vol) e água/etanol 9:1 (vol/vol). Várias proporções de soluções água/acetonitrila incluem água/acetonitrila 1:9 (vol/vol), água/acetonitrila 1:1 (vol/vol) e úágua/acetonitrila S9:1 (vol/vol). Várias proporções de soluções água/metanol incluem água/metanol 1:9 (vol/vol), água/metanol 1:1 (vol/vol) e água/metanol 9:1 (vol/vol). Várias proporções de soluções água/álcool Ssopropálico incluem água/álcool isopropílico 1:9 (vol/vol), água/álcool isopropílico 1:1 (vol /vol) e água/álcool isopropílico 9:1 (vol/vol).

Geralmente, cerca de 40 mg do Composto 1 é suspenso em cerca de 1,5 ml de um solvente apropriado (concentração alvo de 26,7 mg/ml) em temperatura ambiente, durante um período de tempo eficaz. Em algumas concretizações, O período de tempo eficaz é de cerca de 24 horas até cerca de

.: 35 2 semanas. Em algumas concretizações, o período de tempo eficaz é de cerca de 24 horas até cerca de 1 semana. Em algumas concretizações, o período de tempo eficaz é de cerca de 24 horas até cerca de 72 horas. Os sólidos são, a seguir, coletados.

Em outra coneretização, a Forma A é preparada pela dissolução do Composto 1 em um solvente apropriado e, em seguida, evaporação do solvente. Em uma concretização, O solvente apropriado é um em que o Composto 1 tem uma 120 solubilidade maior que 20 moa/ml. Por exemplo, estes solventes incluem acetonitrila, metanol, etanol, álcool isopropílico, acetona e similares.

Em geral, o Composto 1 é dissolvido em um solvente apropriado, filtrado e, a seguir, separado para evaporação lenta ou evaporação rápida. Um exemplo de evaporação lenta é a cobertura de um recipiente, como um frasco, 3 compreendendo a solução do Composto 1 com parafilme com um furo no mesmo. Um exemplo de evaporação rápida é deixar um recipiente, como um frasco, compreendendo a solução do Composto 1 descoberta. Os sólidos são, a seguir, coletados.

Em outro aspecto, a invenção representa um processo de preparação da Forma A que compreende dissolver o Composto 1 e<mM UM primeiro solvente e adicionar um segundo solvente em que o Composto 1 tem solubilidade ruim (solubilidade < 1

. 36 mg/ml). Por exemplo, o primeiro solvente pode ser um solvente em que o Composto 1 tem mais de 20 mg/ml de solubilidade, por exemplo, em acetato de etila, etanol, álcool isopropílico ou acetona. O segundo solvente pode ser, por exemplo, heptano ou água.

Em geral, o Composto 1 é dissolvido no primeiro solvente e filtrado para remover quaisquer cristais primários. O segundo solvente é adicionado lentamente durante agitação. Os sólidos são precipitados e coletados por filtração.

Métodos de Preparação do Composto 1 Amorfo A partir do Composto 1 ou do Composto 1 Forma A, a forma amorfa do Composto 1 pode ser preparada por métodos de rotaevaporação ou de atomização.

A dissolução do Composto 1 em um solvente apropriado, como metanol, e a rotaevaporação do metanol para deixar uma espuma produz o Composto 1, forma amorfa. Em algumas concretizações, um banho-maria aquecido é usado para acelerar a evaporação.

O Composto 1 forma amorfa também pode ser preparado a partir do Composto 1 Forma A usando métodos de atomização. A atomização é um processo que converte uma alimentação líquida em uma forma particulada seca. Opcionalmente, um processo de secagem secundário, tal como secagem em leito

. 37 fluidizado Ou Secagem à vácuo pode ser utilizado para reduzir os solventes residuais até níveis farmaceuticamente aceitáveis. Tipicamente, a atomização envolve o contato com uma suspensão ou solução líquida altamente dispersa, e um volume suficiente de ar quente para produzir evaporação e secagem das gotículas de líquido. A preparação a ser atomizada pode ser qualquer solução, suspensão bruta, suspensão, dispersão coloidal ou pasta que pode ser atomizada usando o aparelho de atomização selecionado. Em um procedimento padrão, a preparação é atomizada em uma corrente de ar quente filtrado que evapora o solvente e transporta o produto seco para um coletor (por exemplo, um ciclone). O ar utilizado é, à seguir, extrusado com o solvente ou, alternativamente, o ar utilizado é enviado para um condensador para capturar e reciclar potencialmente o solvente. Tipos comercialmente disponíveis do aparelho : podem ser usados para realizar a atomização. Por exemplo, atomizadores comerciais são fabricados por Buchi Ltd. And Niro (por exemplo, a linha PSD de atomizadores fabricados por Niro) (ver US 2004/0105820; US 2003/0144257).

! A atomização tipicamente emprega cargas sólidas de material de cerca de 3% a cerca de 30% em peso (isto é, fármaco e excipientes), por exemplo, de cerca de 4% a cerca de 20% em peso, preferencialmente pelo menos cerca de 10%.

. 38

Em geral, o limite superior de cargas sólidas é regido pela viscosidade (por exemplo, a capacidade de bombear) a solução resultante e a solubilidade dos componentes na solução.

Em geral, a viscosidade da solução pode determinar o tamanho da partícula no produto de pó resultante.

Técnicas e métodos para a atomização podem ser encontrados em Perry's Chemical Engineering Handbook, 6º Ed., R.

H.

Perry, D.

W.

Green & J.

O.

Maloney, eds.), McGraw-Hill book co. (1984); e em Marshall "Atomization and 20 Sprav-Dcying" 50, Chem.

Eno.

Prog.

Monogr.

Series 2 (1954). Em geral, a atomização é realizada com uma temperatura de entrada de cerca de 60ºC a cerca de 200ºC, por exemplo, de cerca de 95ºC a cerca de 185ºC, de cerca de 110ºC a cerca de 182ºC, de cerca de 96ºC a cerca de 180ºC, por exemplo, cerca de 145ºC.

A atomização é geralmente realizada com uma temperatura de saída de cerca de 30ºC a cerca de 90ºC, por exemplo, de cerca de 40ºC à ceérca de 80ºC, de cerca de 45ºC a cerca de 80ºC, por exemplo, cerca de 75ºC.

A taxa de fluxo de atomização é geralmente de cerca de 4 Kg/h a cerca de 12 Kg/h, por exemplo, de cerca de 4,3 Kg/h a cerca de 40,5 Kg/h, por exemplo, de cerca de 6 Kg/h ou cerca de 10,5 Kq/h.

A taxa de fluxo de asimentação é geralmente de cerca de 3 Kg/h a cerca de 10 Kg/h, por exemplo, de cerca de 3,5 Kg/h a cerca de 9,0 Kg/h, por exemplo, de cerca de 8 Kg/h

. 39 ou cerca de 7,1 Kg/h.

A razão de atomização é geralmente de cerca de 0,3 a 1,7, por exemplo, de cerca de 0,5 a 1,5, por exemplo, de cerca de 0,8 ou cerca de 1,5. A remoção do solvente pode requerer uma etapa de secagem subsequente, tal como secagem em bandeja, secagem em leito fluidiízado (por exemplo, de cerca de temperatura ambiente a cerca de 100ºC), secagem a vácuo, secagem por microondas, secagem em tambor giratório ou secagem bicônica à vácuo (por exemplo, de cerca de temperatura ambiente a cerca de 200”C). Em uma concretização, a dispersão sólida é seca em deito fluidizado.

Em um processo, o solvente inclui um solvente volátil, por exemplo, um solvente com um ponto de ebulição menor do que cerca de 100ºC.

Em algumas concretizações, o solvente inclui uma mistura de solventes, por exemplo, uma mistura de solventes voláteis ou uma mistura de solventes voláteis e não voláteis.

Onde misturas de solventes são utilizadas, a mistura pode incluir um ou mais solventes não voláteis, por exemplo, onde o solvente não volátil está presente na mistura em menos de cerca de 15%, por exemplo, menos de cerca de 12%, menos de cerca de 10%, menos de cerca de 8%, menos de cerca de 5%, menos de cerca de 3% ou menos de cerca de 2%.

. 40

Solventes preferidos são aqueles solventes em que O Composto 1 tem uma solubilidade de pelo menos cerca de 10 mg/ml, (por exemplo, de pelo menos cerca de 15 mg/ml, 20 mg/ml, 25 mg/ml, 30 mg/ml, 35 mg/ml, 40 mg/ml, 45 mg/ml, 50 mg/ml, ou mais). Os solventes mais preferenciais incluem aqueles onde o Composto 1 tem uma solubilidade de pelo menos cerca de 20 mg/ml.

Solventes exemplares que poderiam ser testados incluem acetona, ciclo-hexano, diclorometano, N,N-dimetilacetamida (DMA), N, N-dimetilformamida (DMF), 1,3-dimetil-2- amidazolidinona (DMT), dimetilsulfóxido (DMSO), dioxano, acetato de etila, éter etílico, ácido acético glacial (HAC), metiletilcetona (MEK), N-metil-2-pirrolidona (NMP), éter metil-tere-butílico (MTBE), tetraidrofurano (THF), pentano, acetonitrila, metanol, etanol, álcool isopropílico, acetato isopropílico e tolueno.

Co-solventes exemplares incluem acetona/DMSO, acetona/DMF, acetona/água, MEK/água, THF/água, dioxano/água.

Em um sistema de dois solventes, os solventes podem estar presentes em cerca de 0,18 àa cerca de 99,9%. Em algumas concretizações preferenciais, a água é um co-solvente com acetona, onde a água está presente de cerca de 0,1% a cerca de 15%, por Gexemplo, de cerca de 9% à cerca de 11%, por exemplo, cerca de 10%. Em algumas concretizações preferenciais, a água é

. 41 Um consolvente com MEK, onde à água está presente de cerca de 0,1% a cerca de 15%, por exemplo, de cerca de 9% a cerca de 11%, por exemplo, cerca de 10%. Em algumas concretizações, a solução de solvente anciui três solventes. Por exemplo, acetona e água podem ser misturados com um terceiro solvente, como DMA, DMF, DMI, DMSO ou HAc. Em exemplos onde o Composto 1 amorfo é um componente de uma dispersão sólida amorfa, solventes preferenciais dissolvem tanto o Composto 1 quanto o polímero. Solventes adequados incluem aqueles descritos acima, por exemplo, MEK, acetona, água, metanol e misturas dos mesmos.

O tamanho de partícula e à Talxa de temperatura de secagem podem ser modificados para preparar uma dispersão sólida ótima. Como seria percebido pelos versados na técnica, um tamanho de partícula pequeno poderia resultar em uma melhor remoção de solvente. Os depositantes verificaram, no entanto, que partículas menores podem resultar em partículas leves que, em algumas circunstâncias, não fornecem dispersões sólidas ótimas para o processamento adiante, tal como compactação. Em temperaturas mais elevadas, pode ocorrer cristalização ou degradação química do Composto 1. Em temperaturas mais baixas, uma quantidade suficiente do solvente pode não ser removida. Os métodos da presente invenção fornecem um

, 42 tamanho de partícula ótimo e uma temperatura de secagem ótima.

Em geral, o tamanho de partículas é tal que D10 (pm) é menor do que cerca de 5, por exemplo, menor do que cerca de 4,5, menor do que cerca de 4,0 ou menor do que cerca de 3,5, D50 (pm) é em geral menor do que cerca de 17, por exemplo, menor do que cerca de 16, menor do que cerca de 15, menor do que cerca de 14, menor do que cerca de 13, e D90 (pum) é em geral menor do que cerca de 175, por exemplo, menor do que cerca de 170, menor do que cerca de 170, menor do que cerca de 150, menor do que cerca de 125, menor do que cerca de 100, menor do que cerca de 90, menor do que cerca de 80, menor do que cerca de 70, menor do que cerca de 60 ou menor do que cerca de 50. Em geral, a densidade aparente das partículas atomizadas é de cerca de 0,08 g/ce até cerca de 0,20 g/cc, por exemplo, de cerca de 0,10 até cerca de 0,15 Q/CC, por exemplo, de cerca de 0,11 g/cc ou cerca de 0,14 g/cc.

A densidade socada das partículas atomizadas geralmente varia de cerca de 0,08 g/cc a cerca de 0,20 g/cc, por exemplo, de cerca de 0,10 a cerca de 0,15 g/cc, por exemplo, cerca de 0,11 g/cc ou cerca de 0,14 g/cc, para 10 pancadas; de 0,10 g/cc a cerca de 0,25 g/ce, por exemplo, de cerca de 0,11 a cerca de 0,21 g/cc, por exemplo, cerca de 0,15 g/cc, cerca de 0,19 g/cc ou cerca de

. 43 0,21 g/cc para 500 pancadas; 0,15 g/cc a cerca de 0,27 g/cc, por exemplo, de cerca de 0,18 a cerca de 0,24 g/cc, por exemplo, cerca de 0,18 g/cc, cerca de 0,19 g/cc, cerca de 0,20 g/cc ou cerca de 0,24 g/cc para 1250 pancadas; e 0,15 g/cc a cerca de 0,27 g/cc, por exemplo, de cerca de 0,18 a cerca de 0,24 d/ce, por exemplo, cerca de 0,18 g/co, cerca de 0,21 g/cc, cerca de 0,23 g/cc ou cerca de 0,24 d/ce para 2500 pancadas.

Polímeros As dispersões sólidas incluindo o Composto 1 amorfo e um polímero (ou veículo em estado sólido) também estão incluídas na presente invenção. Por exemplo, o Composto 1 está presente como um composto amorfo, como um componente de uma dispersão sólida amorfa. A dispersão sólida amorfa geralmente inclui o Composto 1 e um polímero. Polímeros exemplificadores incluem polímeros celulósicos, como HPMC ou HPMCAS e polímeros contendo pirrolidona, como PVP/VA. Em algumas concretizações, a dispersão sólida amorfa inclui um ou mais excipientes adicionais, como um tensoativo.

Em uma concretização, um polímero é capaz de se dissolver em meio aquoso. A solubilidade dos polímeros pode ser independente do pH ou dependente do pH. A última inclui um ou mais polímeros entéricos. O termo “polímero entérico” se refere à um polímero preferencialmente solúvel no

: 44 ambiente menos ácido do intestino, em relação ao ambiente mais ácido do estômago, por exemplo, um polímero que é insolúvel em meio aquoso ácido, porém solúvel quando o pH estiver acima de 5-6. Um polímero apropriado deve ser quimicamente e biologicamente inerte, Para melhorar a estabilidade física das dispersões sólidas, a temperatura de transição vítrea (T,) do polímero deve ser a mais alta possível.

Por exemplo, polímeros preferenciais apresentam uma temperatura de transição vítrea pelo menos águal Ou maior do que a temperatura de transição vítrea do fármaco (isto é, do Composto 1). Outros polímeros preferenciais têm uma temperatura de transição vítrea que está dentro de cerca de .10 à cerca de 15"C do fármaco (isto é, do Composto 1). Exemplos de temperaturas de transição vítrea adequadas dos polímeros incluem, pelo menos cerca de 90ºC, pelo menos cerca de 95ºC, pelo menos cerca de 100ºC, pelo menos cerca de 105ºC; pelo menos cerca de 110ºC, pelo menos cerca de 115ºC, pelo menos cerca de 120ºC, pelo menos cerca de 125ºC, pelo menos cerca de 130ºC, pelo menos cerca de 1235ºC, pelo menos cerca de 140"C, pelo menos cerca de 145"C, peto menos cerca de 150ºC, pelo menos cerca de 155ºC, pelo menos cerca de 160ºC, pelo menos cerca de 165ºC, pelo menos cerca de 170ºC ou pelo menos cerca de 175ºC (conforme medido sob condições secas). Sem desejar se

. 45 ater à teoria, acredita-se que o mecanismo subjacente é que um polímero com uma T, maior geralmente tem mobilidade molecular menor em temperatura ambiente, que pode ser um fator crucial na estabilização da estabilidade física da dispersão sólida amorfa, Adicionalmente, a higroscopicidade dos polímeros deve ser a mais baixa possível, por exemplo, menor do que cerca de 10%. Para fins de comparação neste pedido, a higroscopicidade de um polímero ou composição é 140 caracterizada em cerca de 60% de umidade relativa, Em algumas concretizações preferidas, o polímero tem menos de cerca de 10% de absorção de água, por exemplo, menos de cerca de 9%, menos de cerca de 8%, menos de cerca de 7%, menos de cerca de 6%, menos de cerca de 5%, menos de cerca de 4%, menos de cerca de 3% ou menos de cerca de 2% de absorção de água.

A higroscopicidade também pode afetar a estabilidade física das dispersões sólidas.

Geralmente, a umidade adsorvida nos polímeros pode reduzir bastante a T, dos polímeros, bem como as dispersões sólidas resultantes, o que reduzirá ainda mais a estabilidade física das dispersões sólidas conforme descrito acima.

Em uma concretização, o polímero é um ou mais polímero(s) solúvel/solúveis em água, ou polímero(s) parcialmente solúvel/solúveis em água.

Polímeros solúveis

- 46 ou parcialmente solúveis em água incluem, mas não estão limitados, aos derivados de celulose (por “exemplo, hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), hidroxipopilcelulose (HPC)) ou etilcelulose; polivinilpirrolidonas (PVP); polietilenoglicóis (PEG); álcoois polivinílicos (PVA); acrilatos, tais como polimetacrilato (por exemplo, Cudragito E); ciclodextrinas (por exemplo, p»rciclodextrina) e copolímeros e seus derivados, incluindo, por exemplo, PVP-VA (polivinilpirrolidona-acetato de vinila).

Em algumas concretizações, o polímero é hidroxgipropil metilcelulose (HPMC), tal como HPMC ESO0, HPMCEIS ou HPMC60SH50.

Como discutido na presente invenção, o polímero pode ser um polímero entérico dependente de pH. Tais polímeros entéricos dependentes de pH incluemyá mas não estão Jimitados, aos derivados de celulose (por exemplo, acetato ftalato de celulose (CAP)), ftalatos de hidroxipropil-metil celulose (HPMCP), acetato succinato de hidroxipropil-metil celulose (HPMCAS), carboximetilcelulose (CMC) ou um sal dos mesmos (por exemplo, um sal de sódio como (CMC-Na)); acetato trimelitato de celulose (CAT), acetato ftalato de hidroxipropilcelulose (HPCAP), acetato ftalato de hidroxipropilmetil-celulose (HPMCAP) e acetato ftalato de metilcelulose (MCAP) ou polimetacrilatos (por exemplo,

- 47 Eudragito S). Em algumas concretizações, o polímero é o acetato succinato de hidroxipropilmetil-celulose (HPMCAS). Em algumas concretizações, o polímero é o acetato succinato de hidroxipropilmetil-celulose grau HG (HPMCAS-HG).

Em ainda outra concretização, o polímero é um copolímero de polivinilpirrolidona, por exemplo, copolímero de avinil-pirrolidona/acetato de vinila (PVP/VA), *m concoretizações onde O Composto 1 forma uma dispersão sólida com um polímero, por exemplo, com um polímero HPMC, HPMCAS ou PVP/VA, a quantidade de polímero em relação ao peso total da dispersão sólida varia de cerca de 0,1% até 99% em peso. A menos que seja especificado de Qqutra forma, as porcentagens de fármaco, polímero e outros excipientes, como descrito em uma dispersão, são dadas em porcentagens em peso. A quantidade de polímero é geralmente pelo menos cerca de 20% e, preferencialmente, pelo menos cerca de 30%, por exemplo, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45% ou cerca de 50% (por exemplo, 49,5%). A quantidade é tipicamente de cerca de 99% ou menos, e preferencialmente de cerca de 80% ou menos, por exemplo, de cerca de 75% ou menos, cerca de 70% ou menos, cerca de 65% ou menos, cerca de 60% ou menos ou cerca de 558 Ou Menos, Em uma concretização, o polímero está presente em uma quantidade de até cerca de 50% do peso

. 48 total da dispersão (e ainda mais especificamente, entre cerca de 40% é 50%, como cerca de 49%, cerca de 49,5% ou cerca de 50%). HPMC e HPMCAS estão disponíveis em uma variedade de graus de ShinEtsu, por exemplo, HPMCAS está disponível em inúmeras variedades, incluindo AS-LF, AS-MF, AS-HF, AS-LG, AS-MG e AS-HG.

Cada um desses graus varia com a substituição percentual de acetato e succinato, Em algumas concretizações, o Composto | e o polímero estão presentes em quantidades aproximadamente iguais, por exemplo, cada polímero e fármaco compreendem cerca de metade do peso percentual da dispersão.

Por exemplo, oO polímero está presente em cerca de 49,5%, e o fármaco está presente em cerca de 50%. Em algumas concretizações, o Composto 1 e O polímero combinados representam de 1% a 20% p/p do teor de sólidos totais da dispersão não sólida antes da atomização.

Em algumas —“concretizações, o Composto 1 e o polímero combinados representam de 5% a 15% p/p do teor de sólidos totais da dispersão não sólida antes da atomização.

Em algumas concretizações, 6 Composto 1 &é oO polímero combinados representam cerca de 11% p/p do teor de sólidos totais da dispersão não sólida antes da atomização.

Em algumas concretizações, a dispersão inclui adicionalmente outros ingredientes menores, como um

- 49 tensoativo (por exemplo, SLS). Em algumas concretizações, O tensoativo está presente em menos de cerca de 10% da dispersão, por exemplo, menos de cerca de 9%, menos de cerca de 8%, menos de cerca de 7%, menos de cerca de 6%, menos de cerca de 5%, menos de cerca de 4%, menos de cerca de 3%, menos de cerca de 2%, cerca de 1% ou cerca de 0,5%. Em concretizações incluindo um polímero, o polímero deve estar presente em uma quantidade eficaz para estabilizar a dispersão sólida.

A estabilização inclui inibir eu prevenir a cristalização do Composto 1. Tal estabilização inibiria a conversão do Composto 1 da forma amorfa pare àa forma eristalina.

Por exemplo, o polímero poderia evitar que pelo menos uma porção (por exemplo, cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 158, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerça de 70%, cerca de. 75%, ou mais) do Composto 1 se convertesse de uma forma amorfa para uma forma cristalina.

A estabilização pode ser medida, por exemplo, medindo a temperatura de transição vítrea da dispersão sólida, medindo a taxa de relaxamento do material amorfo ou medindo a solubilidade ou a biodisponibilidade do

Composto 1. Polímeros adequados para uso em combinação com o

. 50 Composto 1, por exemplo, para formar uma dispersão sólida, tal como uma dispersão sólida amorfa, devem ter uma ou mais das seguintes propriedades: A temperatura de transição vítrea do polímero deve ter uma temperatura que não seja menor do que cerca de 10 a 15ºC da temperatura de transição vítrea do Composto 1. Preferencialmente, a temperatura de transição vítrea do polímero é maior do que a temperatura de transição vítrea do Composto 1 e, em geral, ela é pelo menos 50ºC maior do que a temperatura de armazenamento desejada do produto do fármaco.

Por exemplo, pelo menos cerca de 100ºC, pelo menos cerca de 105ºC, pelo menos cerca de 110ºC, pelo menos cerca de 120ºC, pelo menos cerca de 130ºC, pelo menos cerca de 140ºC, pelo menos cerca de 150ºC, pelo menos cerca de 160ºC, pelo menos cerca de 160ºC, ou maior.

O polímero deve ser relativamente não higroscópico.

Por exemplo, o polímero deve, quando armazenado sob condições pádrão, absorver menos de cerca de 10% de água, por exemplo, menos de cerca de 9%, menos de cerca de 8%, menos de cerca de 7%, menos de cerca de 6% ou Menos de cerca de 5%, menos de cerca de 4% ou menos de cerca de 3% de água, Preferencialmente, O polímero estará, quando armazenado sob condições padrão, substancialmente isento de água de absorção.

. 51 O polímero deve apresentar solubilidade semelhante ou melhor em solventes adequados para processos de atomização em relação àquele do Composto 1. Em concretizações preferidas, o polímero irá dissolver em um ou mais dos mesmos solventes ou sistemas de solvente como o Composto 1. É preferível que o polímero seja solúvel em pelo menos um solvente sem hidroxila, como cloreto de metileno, acetona ou uma combinação dos mesmos.

O polímero, quando combinado com o Composto 1, por exemplo, em uma dispersão sólida ou em uma suspensão líquida, deve aumentar a solubilidade do Composto 1 em meio aquoso e fisiologicamente relativo tanto em relação à solubilidade do Composto 1 na ausência de polímero ou em relação à solubilidade do Composto 1 quando combinado com um polímero de referência.

Por exemplo, o polímero pode aumentar a solubilidade do Composto lamorfo pela redução da quantidade do Composto 1 amorfo que se converte no Composto 1 cristalino, seja a partir de uma dispersão sólida amorfa ou de uma suspensão líquida.

O polímero deve diminuir a taxa de relaxamento da substância amorfa.

O polímero deve aumentar a estabilidade física e/ou quimica do Composto 1. O polímero deve melhorar a capacidade de fabricação do

. 52 Composto 1. O polímero deve melhorar uma ou mais das propriedades de manuseio, administração ou armazenamento do Composto 1. O polímero não deve interagir desfavoravelmente com outros componentes farmacêuticos, por exemplo, excipientes.

A adequabilidade de um polímero candidato (ou outro componente) pode ser testada usando Os métodos de atomização (ou outros métodos) descritos aqui para formar uma composição amorfa.

A composição candidata pode ser comparada em termos de estabilidade, resistência à formação de cristais ou outras propriedades, e em comparação com uma preparação de referência, por exemplo, uma preparação de Composto 1 amorfo puro Ou Composto 1 cristalino, Por exemplo, uma composição candidata poderia ser testada para determinar se ela inibe o tempo para o início da cristalização fMediada por solvente ou a conversão percentual em um determinado momento, sob condições controladas, por pelo menos 50%, 75%, 100% ou 110%, bem como a preparação de referência, ou uma composição candidata poderia ser testada para determinar se ela apresenta melhor biodisponibilidade ou solubilidade em relação ao Composto 1 cristalino.

Tensoativos Uma dispersão sólida ou outra composição pode incluir

- 53 um tensoativo.

Um tensoativo ou mistura de tensoativo poderia, em geral, diminuir a tensão interfacial entre a dispersão sólida e o meio aquoso.

Um tensoativo ou mistura de tensoativos apropriados também pode melhorar à solubilidade e biodisponibilidade aquosa do Composto 1 de uma dispersão sólida.

Os tensoativos para uso juntamente com a presente invenção incluem, mas não estão limitados, aos ésteres de ácido graxo de sorbitano (por exemplo, SpansO), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano (por exemplo, Tweens6O), lauril sulfato de sódio (SLS), dodecil —benzenossulfonato de sódio (SDBS), dioctil sulfosuccinato de sódio (Docusato), sal sódico do ácido dioxicólico (DOSS), monoestearato de sorbitano, triestearato de sorbitano, brometo de hexadecil-trimetil amônio (HTAB), N-lauroilsarcosina sódica, oleato de sódio, miristato de sódio, estearato de sódio, palmitato de Sódio, Gelucire 44/14, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), vitamina E, d-alfa-tocoferil, succinato de polietilenoglicol 1000 (TPGS), lecitina, PM 677-692, ácido glutâmico monossódico mono-hidratado, labrasol, glicerídeos caprílico/cáprico de PEG 8, transcutol, éter dietilenoglicol monoetílico, Solutol HST1S, polietilenoglicol/hidroxiestarato, ácido taurocólico, Pluronic F68, Pluronic F108 e Pluronic F127 (ou quaisquer

- 54 outros copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno (Pluronics&) ou glicerídeos poliglicolizados saturados (Gelucirso)). Exemplo específico de tais tensoativos que podem ser utilizados juntamente com esta invenção incluem, mas não estão limitados, a Span 65, Span 25, Tween 20, Capryol 90, Pluronic F108, lauril sulfato de sódio (SLS), vitamina E TPGS, pluronics e copolímeros. SLS é geralmente preferido.

A quantidade do tensoativo (por exemplo, SLS) em relação ao peso total da dispersão sólida pode estar entre 0,1 e 15%. Preferencialmente, ela é de cerca de 0,5% a cerca de 10%, mais preferencialmente de cerca de 0,5 a cerca de 5%, por exemplo, de cerca de 0,5 a 4%, de cerca de 0,5 a 3%, de cerca de 0,5 a 2%, de cerca de 0,5 a 1% ou cerca de 0,5%.

Em certas concretizações, a quantidade do tensoativo em relação ao peso total da dispersão sólida é de pelo menos cerca de 0,1%, preferencialmente de cerca de 0,5%. Nessas concretizações, o tensoativo poderia estar presente em uma quantidade de não mais de cerca de 15%, e preferencialmente não mais de cerca de 12%, cerca de 11%, cerca de 10%, cerca de 9%, cerca de 8%, cerca de 7%, cerca de 6%, cerca de 5%, cerca de 4%, cerca de 3%, cerca de 2% ou cerca de 1%. Uma concretização em que o tensoativo está

- 55 em uma Quantidade de cerca de 0,5% em peso é preferida, Os tensoativos (ou outros componentes) candidatos podem ser testados quanto à adequabilidade para utilização na invenção de uma forma similar àquela descrita para o teste de polímeros.

Usos, Formulação e Administração Composições farmaceuticamente aceitáveis Em outro aspecto da presente invenção, composições farmaceuticamente aceitáveis são fornecidas, em que estas composições compreendem o Composto 1 Forma A ou o Composto 1 amorfo, tal como descrito neste documento, e, Opcionalmente, compreendem um veículo, adjuvante Ou transportador —* farmaceuticamente aceitável.

Em certas concretizações, estas composições compreendem ainda, opcionalmente, um ou mais agentes terapêuticos adicionais.

Como descrito acima, as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção compreendem adicionalmente um carreador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável que, como usado aqui, inclui quaisquer e todos os solventes, diluentes ou outro veículo, dispersão ou adjuvantes de suspensão líquidos, agentes ativos de superfície, agentes isotônicos, agentes espessantes ou emulsificantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubrificantes e similares, conforme é adequado para a forma

: 56 de dosagem particular desejada.

Remington's Pharmaceutical Sciences, Décima-Sexta “Edição, E.

W.

Martin (Mack Publishing Co., Easton, PA., 1980) divulga vários veículos usados na formulação de composições farmaceuticamente aceitáveis e técnicas conhecidas para o preparo das mesmas.

Exceto na medida em que qualquer meio veículo convencional seja incompatível com os compostos da invenção, tal como pela produção de qualquer efeito biológico indesejável ou, de outro modo, interagindo de forma deletéria cOm qualquer/quaisquer outro(s) componente(s) da composição farmaceuticamente aceitável, seu uso é contemplado como estando dentro do escopo desta invenção.

Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados, aos trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, Jeciítina, proteínas séricas, tal como a albumina de soro humano, substâncias tamponantes como fosfatos, glicina, ácido sórbico ou sorbato de potássio, misturas de glicerídeos parciais dos ácidos graxos vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinilpirroLidona, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-

. 57 polioxipropileno, lanolina, açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, tais como amido de milho e amido de batata; celulose e seus derivados, tais como carboximetilcelulose sódica, etilcelulose e acetato de celulose; tragacanto em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras de supositório; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão; óleo de cártamo; óleo de sésamo; óleo de oliva; óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tais como propilenoglicol ou polietilenogiicol; ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; ágar; agentes tamponadores, como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água livre de pirogênio; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico e soluções tampão de fosfato, bem como outros lubrificantes compatíveis atóxicos, como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, bem como agentes corantes, agentes de liberação, agentes de revestimento, edulcorantes, flavorizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem estar presentes na composição, de acordo com a avaliação do formulador.

Usos dos Compostos e Composições Farmaceuticamente Aceitáveis Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece um

. 58 método de tratamento de uma condição, doença ou distúrbio implicado por CFTR. Em certas concretizações, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma condição, doença ou distúrbio implicado por uma deficiência da atividade de CFTR, o método compreendendo administrar uma composição que compreende uma forma de estado sólido do Composto 1 Forma A ou do Composto 1 amorfo descrito neste documento a um indivíduo, preferencialmente a um mamífero em necessidade do mesmo.

Uma “doença mediada por CEIR', tal Como aqui utilizada, é uma doença selecionada de fibrose cística, asma, DPOC induzida por exposição à fumaça, bronquite crônica, rinossinusite, constipação, pancreatite, insuficiência pancreática, infertilidade masculina causada por ausência bilateral congênita de vasos deferentes (CBAVD), doença pulmonar branda, . pancreatite idiopática, í aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA), doença hepática, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de coagulação-fibrinólise, deficiência de proteína C, angioedema hereditário tipo 1, deficiências de processamento de lipídios, hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, doença de célula I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar

.: 59 tipo IT poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo de Laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo 1, hipertireoidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurofiseal, DI nefrogênica, doença de Charcot>-Marie-Tooth, doença de Perlizaeus- Merzbacher, doenças neurodegenerativas, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, distúrbios neurológicos de poliglutamina diversos, Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinhal e bulbar, dentatorubro-palidolusiana, distrofia miotônica, encefalopatias espongiformes, doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido ao defeito de processamento de proteína príon), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco, doença de Sjogren, osteoporose, osteopenia, síndrome de Gorham, canalopatias de cloreto, miotonia congênita (formas de “Thomson e Becker), síndrome de Bartter tipo III, doença de Dent, hipereclepsia, epilepsia, hipereclepsia, doença de armazenamento lisossomal, síndrome de Angelman, discinesia ciliar primária (PCD), distúrbios hereditários da estrutura e/ou função dos cílios, PCD com situs inversus (também

. 60 conhecida como síndrome de Kartagener), PCD sem situs inversus ou aplasia ciliar. Em certas moalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma doença mediada por CFTR em um ser humano que compreende a etapa de administrar ao dito ser humano uma quantidade eficaz de uma composição que compreende o Composto 1 Forma A ou o Composto 1 amorfo descrito neste documento.

De acordo com uma concretização alternativa preferida, a presente invenção fornece um método de tratamento de fibrose cística em um ser humano que compreende a etapa de administrar ao dito ser humano uma composição que compreende o Composto 1 Forma A ou o Composto 1 amorfo descrito neste documento.

De acordo com a invenção, uma “quantidade eficaz” do Composto 1 Forma A ou Composto 1 amorfo ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos é aquela quantidade eficar para o tratamento ou redução da gravidade de qualquer uma das doenças citadas acima.

O Composto 1 Forma À ou o Composto 1 amorfo, ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos pode ser administrada usando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para o tratamento ou redução da gravidade de uma ou mais das doenças citadas acima.

- 61

Em certas concretizações, O Composto 1 Forma A Ou O Composto 1 amorf£o descrito no presente documento, ou Uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos, é útil para o tratamento ou redução da gravidade da fibrose cística em pacientes que apresentam atividade CFTR residual na membrana apical do epitélio respiratório e não respiratório.

A presença de atividade CEIR residual na superfície epitelial pode ser prontamente detectada usando métodos conhecidos na técnica, por exemplo, técnicas eletrofisiológicas, bioquímicas ou histoquímicas padrão.

Tais métodos identificarem a atividade CFTR usando técnicas eletrofisiológicas in vivo ou ex vivo, medição das concentrações de Cl” no suor ou saliva, ou técnicas bioquímicas ou histoquímicas ex vivo para monitorar a densidade da superfície celular.

Com o uso de tais métodos, a atividade CFTR residual pode ser prontamente detectada em pacientes heterozigotos ou homozigotos para uma variedade de mutações diferentes, incluindo pacientes homozigotos ou heterozigotos para a mutação mais comum, AF508, bem como outras mutações, tais como a mutação G551D, ou à mutação

R117H.

Em uma concretização, o Composto 1 Forma A, ou O Composto 1 amorfo aqui descrito ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos é útil no tratamento

. 62 ou redução da gravidade da fibrose cística em pacientes dentro de determinados genótipos que exibem atividade CFTR residual, por exemplo, mutações de classe III (regulação ou passagem prejudicada), mutações de classe IV (condutância alterada) ou mutações de classe V (síntese reduzida) (Lee R. Choo-Kang, Pamela L., Zeitlin, Type I, II, III, IV, and V cystic fibrosis Tansmembrane Conductance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinion in Pulmonary Medicine 6:521 - 529, 2000). Outros genótipos de pacientes que apresentam atividade CFTR residual incluem pacientes homozigotos para uma dessas classes ou heterozigotos com qualquer outra classe de mutações, incluindo mutações de classe I, mutações de classe II ou uma mutação que não tem classificação.

Em uma concretização, o Composto 1 Forma A, ou O Composto 1 amorfo aqui descrito, ou uma composição farmaceuticamente aceitável do mesmo, é útil no tratamento ou redução da gravidade da fibrose cística em pacientes com certos fenótipos clínicos, por exemplo, um fenótipo clínico de moderado a brando que tipicamente se correlaciona com a quantidade de atividade CFTR residual na membrana apical do epitélio. Tais fenótipos incluem pacientes apresentando insuficiência pancreática ou pacientes diagnosticados com pancreatite idiopática e ausência bilateral congênita de

. 63 vasos deferentes, ou doença pulmonar branda.

A quantidade exata necessária irá variar de indivíduo para indivíduo, dependendo da espécie, idade e condição geral do indivíduo, da gravidade da infecção, do agente particular, do seu modo de administração e similares. Os compostos da invenção são preferencialmente formulados na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A expressão "forma de dosagem unitária”, tal como utilizada na presente invenção, refere- se a uma unidade fisicamente discreta do agente adequado para o paciente à ser tratado. Será compreendido, no entanto, que o uso diário total dos compostos é eomposições da presente invenção será decidido pelo clínico responsável, dentro do escopo da boa avaliação médica. O 125 nível de dose eficar específica para qualquer paciente ou organismo particular irá depender de vários fatores, incluindo o distúrbio sendo tratado e a gravidade do distúrbio; a atividade do composto específico utilizado; a composição específica utilizada; a idade, o peso corporal, o estado de saúde geral, sexo e dieta do paciente; o tempo de administração, a via de administração e a taxa de excreção do composto específico empregado; a duração do tratamento; medicamentos usados em combinação ou ao mesmo tempo com o composto específico utilizado, e fatores

: 64 semelhantes bem conhecidos nas técnicas médicas. O termo "paciente" ou "indivíduo", como usado na presente invenção, significa um animal, preferencialmente um mamífero, e mais preferencialmente um ser humano.

Ss As composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção podem ser administradas aos seres humanos e outros animais por via oral, retal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, via tópica (como por meio de pós, unguentos ou gotas), via bucal, como um spray nasal ou oral, ou similar, dependendo da gravidade da infecção sendo tratada. Em certas concretizações, os compostos da invenção podem ser administrados por via oral ou por via parenteral em níveis de dosagem de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 50 mg/Kg e, preferencialmente, de cerca de 1 mg/Kg a cerca de 25 mg/Kg de peso corporal do indivíduo por dia, uma ou mais vezes por dia, para obter o efeito terapêutico desejados Em certas concretizações, a quantidade de dosagem do Composto 1 Forma A ou do Composto 1 amorfo na forma de dosagem unitária é de 100 mg a 1.000 mo. EM Outra concretização, a quantidade de dosagem do Composto 1 Forma A ou do Composto 1 amorfo é de 200 mg a 900 mg. Em outra concretização, a quantidade de dosagem do Composto 1 Forma A ou do Composto 1 amorfo é de 300 mg a 800 mg. Em outra concretização, a quantidade de dosagem do Composto 1 Forma

. 65 A ou do Composto 1 amorfo é de 400 mg a 700 mg. Em outra concretização, a quantidade de dosagem do Composto 1 Forma A ou do Composto 1 amorfo é de 500 mg a 600 mg. Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com a técnica conhecida usando agentes de dispersão ou umidificantes e agentes de suspensão adequados. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução, suspensão ou emulsão injetável estéril em um diluente ou solvente atóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Dentre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser utilizados estão a água, solução de Ringer, U.S.P. e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente utilizados como um meio solvente ou de suspensão. Para esta finalidade, pode ser utilizado qualquer óleo fixo brando, incluindo mono ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, os ácidos graxos, tais como o ácido oleico, são utilizados na preparação dos injetáveis.

As formulações injetáveis podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias, ou pela incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersas em água estéril ou outro meio

- 66 injetável estéril antes do uso.

Composições para administração retal ou vaginal são preferencialmente supositórios, que podem ser preparados pela mistura dos compostos desta invenção com excipientes ou veículos não irritantes adequados, tais como manteiga de cacau, polietilenoglicol ou uma cera de supositório, que são sólidos em temperatura ambiente, porém líquidos em temperatura corporal e, portanto, derretem no reto ou na cavidade vaginal e liberam o composto ativo.

Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós e grânulos. Em tais formas de dosagem sólidas, 0 composto ativo é misturado com pelo menos um excipiente ou veículo inerte farmaceuticamente aceitável, como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou a) cargas ou diluentes, tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, b) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil- pirrolidona, sacarose e acácia, Cc) umectantes, tais como glicerol, d) agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido alginico, certos silícatos e carbonato de sódio, e) agentes retardadores de solução, tais como parafina, £) aceleradores de absorção, tais como compostos de amônio

- 67 quaternário, g) agentes umectantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico e moncoestearato de glicerol, h) absorventes, tais como caulim e argila bentonita e i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e misturas dos mesmos.

No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tamponantes.

Composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser utilizadas como cargas em cápsulas gelatinosas moles e duras usando tais excipientes como lactose ou açúcar do leite, bem como polietilenoglicóis de alto peso molecular e similares.

As formas de dosagem sólida dos comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e camadas, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica.

Eles podem, opcionalmente, conter agentes opacificantes e também podem ser de uma composição em que eles liberam o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, em uma determinada parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada.

Exemplos de composições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras.

Composições sólidas de um tipo semelhante também podem ser Utilizadas

- 68 como cargas em cápsulas gelatinosas moles e duras usando tais excipientes, como lactose ou açúcar do leite, bem como os polietilenoglicóis de alto peso molecular e similares.

Os compostos ativos também podem estar em uma forma microencapsulada com um ou mais excipientes, conforme mencionado acima.

As formas de dosagem sólida dos comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e camadas, tais como revestimentos entéricos, revestimentos de controle de liberação e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formulação farmacêutica.

Em tais formas de dosagem sólida, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte como sacarose, lactose ou amido.

Tais formas de dosagem também podem compreender, como é prática normal, substâncias adicionais diferentes dos diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes de compactação e outros adjuvantes de compactação, tais como estearato de magnésio e celulose microcristalina.

No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes.

Eles podem, opcionalmente, conter agentes opacificantes e também podem ser de uma composição que libera o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, em uma determinada parte do trato intestinal, opcionalmente, de uma forma retardada.

Exemplos

. 69 de composições de incorporação que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras.

Será também observado que o Composto 1 Forma A ou Composto 1 amorfo aqui descrito, ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos, pode ser utilizado em terapias de combinação, isto é, o Composto 1 Forma A ou o Composto 1 amorfo pode ser administrado ao mesmo tempo com, antes de ou subsequente a um ou mais outros procedimentos terapêuticos ou médicos desejados.

A combinação particular de terapias (terapêuticas ou procedimentos) para utilizar em um regime de combinação levará em conta a compatibilidade dos terapêuticos e/ou procedimentos desejados e o efeito terapêutico desejado a ser alcançado.

Será também percebido aque as terapias ntilizadas podem alcançar um efeito desejado para o mesmo distúrbio (por exemplo, um composto da invenção pode ser administrado ao mesmo tempo com outro agente usado para tratar o mesmo distúrbio), ou eles podem alcançar diferentes efeitos (por exemplo, o controle de quaisquer efeitos adversos). Como aqui utilizado, os agentes terapêuticos adicionais que são normalmente administrados para tratar ou prevenir uma doença ou Condição particular são conhecidos como "apropriados para a doença ou condição sendo tratada".

: 70 Em uma concretização, o agente adicional é selecionado de um agente mucolítico, um broncodilatador, um antibiático;, um agente anti-infeccioso, um agente anti- inflamatório, um modulador de CFTR diferente de um composto da presente invenção, ou um agente nutricional. Em uma concretização, o agente adicional é o ácido 3- (6- (1- (2, 2-di flúorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il) ciclopropano carboxamido) -3-met ilpiridin-2-il)benzoico. Em outra concretização, o agente adicional é N-lS-hidróxi=2,4- diterc-butil-fenil)-4-oxo-lH-quinolino-3-carboxamida. Em outra concretização, o agente adicional é selecionado da Tabela 1. Tabela 1.

FALA II CE E | ; | = | r | a | Ai | LD | X. dos) ER | a to x | R

. 71 REL cc IE ED gg AAA ESA Ds 5 ...P—— O oo a me

À | 9oiR |, duto Em outra concretização, o agente adicional é qualquer combinação dos agentes acima. Por exemplo, a composição pode compreender o Composto 1, ácido 3-(6-(1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3] dioxol-5-il)ciclopropanocarboxamido)-3- metilpiridin-2-il)benzoico e N-(5-hidróxi-2,4-diterc-butil- fenil)-4-oxo-lH-quinolino-3-carboxamida. Em outro exemplo, a composição pode compreender o Composto 1, N-(5-hidróxi- 2, (-diterc-butil-fenili) -4-oxo-lH-quinolino-3-carboxamida e qualquer um dos compostos da Tabela 1, isto é, os compostos 1 a 14 da Tabela 1, ou qualquer combinação dos mesmos. Em uma concretização, o agente terapêutico adicional é um antibiótico. Antibióticos exemplificadores úteis no presente documento incluem tobramicina, incluindo pó

. 72 inalável de tobramicina (TIP), azitromicina, aztreonam, incluindo a forma de aerossol de aztreonam, amicacina, incluindo as formulações lipossomais da mesma, ciprofloxacino, incluindo as suas formulações adequadas para administração por inalação, levoflaxacino, incluindo as formulações de aerossol do mesmo, e combinações de dois antibióticos, por exemplo, fosfomicina e tobramicina.

Em outra concretização, oO agente adicional é um mucolítico. Mucolíticos exemplificadores úteis na presente invenção incluem Pulmozyme€6.

Em Outra conerstização, O agente adicional é um broncodilatador. Broncodilatadores exemplificadores incluem albuterol, sulfato de metaprotenerol, acetato de pirbuterol, salmeterol ou sulfato de tetrabulina.

Em outra concretização, o agente adicional é eficaz na restauração do líquido da superfície das vias aéreas do pulmão. Tais agentes melhoram oO movimento de sal para dentro e para fora das células, permitindo que o muco nas vias aéreas do pulmão seja mais hidratado e, portanto, depurado mais facilmente. Tais agentes exemplificadores incluem salina hipertônica, denufosol tetrassódico ([[1(3SS, 5R) -5- (4-amino-2-oxopirimidin-1-il) -3-hidroxioxolan-2-il] Inetóxi-hicdroxifosforil1] [[[(2R,3S,4R,5R)-5-12,4-dioxo pirimidin-1-1il)-3, 4-di-hidroxioxolan-2-il]metóxi-hidroxi

. 73 fosforil]oxi-hidroxifosforil]hidrogenofosfato) ou bronquitol (formulação inalada de manitol).

Em outra concretização, o agente adicional é um agente anti-inflamatório, isto é, um agente que pode reduzir a inflamação nos pulmões. Tais agentes exemplificadores úteis na presente invenção incluem ibuprofeno, ácido docosa- hexanoico (DHA), sildenafil, glutationa inalada, pioglitazona, hidroxicloroquina ou sinvastatina.

Em outra concretização, o agente adicional é um modulador de CFTR diferente do Composto 1 Forma I, isto é, um agente que tem o efeito de modulação da atividade CFTR. Tais agentes exemplificadores incluem atalureno ("PTC1240"; ácido —3-[5-(2-fluorfenil)-1,2,4-oxadiazol-3-il]benzoico), sinapultida, lancovutida, depelestat (um inibidor da elastase de neutrófilo humano recombinante), cobiprostona (ácido 7-1 (2R,4aR,5R,7aR)-2-[(38)-1,1-diflúor-3- metilpentil]-2-hidróxi-6-oxo-octa-hidrociclopenta [b]piran- 5-illheptanoico) e N-(S-hidróxi-2, 4-diterc-butil-fenil)-4- oxo-lH-quinolino-3-carboxamida.

Em outra concretização, o agente adicional é um agente nutricional. Agentes nutricionais exemplificadores incluem pancrelipase (substituto da enzima pancreática), incluindo Pancrease6, PancreacarbO0, Ultrase& ou Creonô, Liprotomase6& (anteriormente —“Trizytek6), Aquadeks6 ou inalação de

. 74 glutationa. Em uma concretização, o agente nutricional adicional é pancrelipase.

Em outra concretização, o agente adicional é um composto selecionado de gentamicina, curcumina, ciclofosfamida, 4-fenilbutirato, miglustat, felodipina, nimodipina, filoxina B, geniesteína, apigenina, moduladores de cAMP/CGMP como rolipram, sildenafila, milrinona, tadalafila, amrinona, isoproterenol, salbutamol e almeterol, desoxiespergualina, inibidores de HSP 90, inibidores de HSP 70, inibidores de proteossoma, como epoxomicina, lactacistina, etc.

Em outra concretização, O agente adicional é um composto divulgado em WO 2004028480, WO 2004110352, WO 2005094374, WO 2005120497 ou WO 2006101740.

Em outra concretização, O agente adicional é um derivado de benzo(c)quinolizínio que apresenta atividade de modulação da CFTR ou um derivado de benzopirano que apresenta atividade de modulação de CFTR.

Em outra concretização, oO agente adicional é um composto divulgado em US7202262, US6992096, US20060148864, US20060148863, US20060035943, US20050164973, WO2006110483, WO2006044456, WO2006044682, WO2006044505, WO2006044503, WO2006044502 ou WO2004091502.

Em outra concretização, o agente adicional é um composto divulgado em WO2004080972, WO2004111014, WO2005035514, WO2005049018, WO2006099256, WO2006127588 ou WO2007044560. Estas combinações são úteis para tratar as doenças S divulgadas neste documento, incluindo fibrose cística.

Estas combinações também são úteis para os kits descritos neste documento.

A quantidade de agente terapêutico adicional presente nas composições desta invenção não será maior do Qque à quantidade Que normalmente seria administrada em UMa composição que compreende um agente terapêutico como o único agente ativo.

Preferencialmente, a quantidade de agente terapêutico adicional nas composições atualmente divulgadas irá variar de cerca de 50% a 100% da quantidade normalmente presente em uma composição que compreende oO referido agente como o único agente terapeuticamente ativo.

O Composto 1 Forma A e a forma amorfa aqui descritos, ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos, também podem ser incorporados em composições para revestimento de um dispositivo médico implantável, tal como uma prótese, válvulas artificiais, enxertos vasculares, endopróteses expansíveis e cateteres.

Por conseguinte, a presente invenção, em outro aspecto, inclui uma composição para revestimento de um dispositivo implantável "que

: 76 compreende o Composto 1 Forma A e/ou a forma amorfa descritos neste documento ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e em classes e subclasses na presente invenção, e um veículo adequado para o revestimento do dito dispositivo implantável.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção inclui um dispositivo implantável revestido com uma composição que compreende o Composto 1 Forma A e/ou a forma amorfa aqui descritos ou uma composição farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e um veículo adequado para o revestimento do dito dispositivo implantável.

Revestimentos adequados e a preparação geral dos dispositivos implantáveis revestidos são descritos nas Patentes Us 6,099,562; 5,886,026 e 5,304,121. os revestimentos são materiais poliméricos tipicamente biocompatíveis, tais como polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenoglicol, ácido polilático, etileno acetato de vinila e misturas dos mesmos.

Os revestimentos podem ser opcionalmente revestidos por um revestimento do topo adequado de fluorsilicone, polissacarídeos, polietilenoglicol, fosfolipídios ou combinações dos mesmos, para conferir características de liberação controlada na composição.

Para que aàa invenção aqui descrita possa ser compreendida de modo mais global, os exemplos a seguir são

. 7 estabelecidos. Deve ser compreendido que estes exemplos são apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados como limitantes desta invenção, sob qualquer aspecto.

EXEMPLOS Métodos e Materiais Calorimetria Diferencial de Varredura Modulada (MDSC) e Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC) A calorimetria diferencial de varredura modulada (MDSC) foi usada para testar a temperatura de transição vítrea da forma amorfa e da dispersão atomizada de um composto. A Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC) foi usada para determinar o ponto de fusão dos materiais cristalinos e fazer distinção entre diferentes polimorfos. Os dados foram coletados utilizando um calorímetro diferencial de varredura TA DSC Q2000 (TA Instruments, New Castle, DE). O instrumento foi calibrado com índio. Amostras de aproximadamente 1-5 mg foram pesadas em cadinhos herméticos de alumínio, que foram tampados usando tampas com um orifício. Para MDSC, as amostras foram analisadas de -20ºC até 220ºC com taxa de aquecimento a 2ºC/minuto com + 1ºC de modulação a cada 60 segundos. Para DSC, as amostras foram analisadas de 25 C a 220“C à uma taxa de aquecimento de 10ºC/min. Os dados foram coletados pelo programa Thermal Advantage Q Series" (versão:

. 7B

2.7.0.380) e analisados pelo programa Universal Analysis (versão: 4.4A, build: 4.4.0.5) (TA Instruments, New Castle, DE). XRPD (Difração de Pó de Raios-x) A difração de pó de raios-x foi usada para caracterizar a forma física dos lotes até então produzidos e para caracterizar diferentes polimorfos identificados. Os dados de XRPD de um composto foram coletados em um difratômetro de pó de raios-X PANalytical X'pert Pro (Alimelo, Holanda). O padrão XRPD foi registrado em temperatura ambiente com radiação de cobre (1,54060 A). O raio-x foi gerado usando um tubo selado de Cu a 45 kV, 40 mA com um filtro de supressão de níquel KB. O feixe incidente ótico foi composto por uma fenda de divergência variável para assegurar um comprimento iluminado constante sobre a amostra e sobre o feixe difratado lateral; utilizou-se um detector de estado sólido linear rápido com comprimento ativo de 2,12 graus 2 teta medido no modo de varredura. A amostra de pó foi embalada na área entalhada recuada de um suporte de silicone de fundo zero e à rotação foi realizada para obter melhores dados estatísticos. Uma varredura simétrica foi medida de 4 a 40 graus 2 teta, com um tamanho de fase de 0,017 grau e um tempo de fase de varredura de 15,5 segundos. O programa de coleta de dados é

. 79 o X'pert Data Collector (versão 2.2e). O programa de análise de dados é tanto o X'pert Data Viewer (versão 1.2d) ou X'pert Highscore (versão: 2.2 c). Análise termogravimétrica (TGA) TGA foi usada para investigar a presença de solventes residuais nos lotes caracterizados e identificar à temperatura em que ocorre a decomposição da amostra. Os dados de TGA foram coletados em um Analisador Termogravimétrico TA Q500 (TA Instruments, New Castle, DE).

Uma amostra com peso de aproximadamente 2 -S mg foi analisada de 25ºC a 300ºC a uma taxa de aquecimento de 10ºC/min. Os dados foram coletados pelo programa Thermal Advantage Q Series" (versão: 2.5.0.255) e analisados pelo programa Universal Analysis (versão: 4.4A, build: 4.4.0.5) (TA Instruments, New Castle, DE).

Determinação da Estrutura de Cristal Único do Composto 1 Forma À Os dados de difração foram obtidos no difratômetro Bruker Apex II equipado com tubo selado de fonte de Cu Ka e um detector de CCD Apex II. A estrutura foi resolvida e refinada usando o programa SHELK (Sheldrick, G., Acta Cryst., (2008) AG64, 112-122). Com base nas estatísticas de intensidade e ausências sistemáticas, a estrutura foi resolvida e retínada no grupo espacial 02. À configuração

. 80 absoluta foi determinada utilizando difração anômala.

O parâmetro de Flack refinou para 0,00 (18), indicando que o modelo representa o enantiômero correto [(R)]. RMN de Estado Sólido RMN de estado sólido foi realizada em um espectrômetro de calibre largo Bruker-Biospin de 400 MHz equipado com uma sonda HFX Bruker-Biospin de 4 mm.

As amostras foram embaladas em rotores de ZrO, de 4mm e giradas sob condição de rotação de ângulo mágico (MAS) com velocidade de rotação de 12,5 KHz.

O tempo de relaxamento do próton £oi primeiramente medido utilizando o experimento de relaxamento de recuperação de saturação *H MAS Ti para configurar o atraso de reciclagem adequado do experimento MAS de polarização cruzada (CP)de "C.

O tempo de contato de CP do experimento CPMAS de carbono foi definido como sendo de 2 ms.

Um pulso de próton CP com inclinação linear (de 50% até 100%) foi utilizado.

O emparelhamento de Hartmann-Hahn foi otimizado na amostra de referência externa (glicina). O espectro MAS de flúor foi registrado com desacoplamento de próton.

A sequência de desacoplamento TPPM15 foi usada com a intensidade do campo de aproximadamente 100 kHz para aquisições tanto de *C quanto 15, Vitrided (hidreto de bis(2-metoxietóxi)alumínio de

: 81 sódio [ou NaAlHs(OCHaCHXOCHs)>]l, solução 65% em peso em totueno) foi comprado de Aldráich Chemicals. O ácido 2,2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-carboxílico foi adquirido junto a Saltigo (uma afiliada da Lanxess Corporation). Em qualquer outro local no presente pedido onde um nome de um composto pode não descrever Corretamente à estrutura do composto, a estrutura substitui o nome e determina. Síntese do Composto 1 Porção Ácida Síntese de (2,2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)-metanol.

1. Vitride (2 equiv) PRCH, (10 vol) R e 2. NaOH aq. 10% (p/p) (4 equiv) VOL r Ao 86-92% rendimento Fl oH o ácido 2,2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-carboxílico comercialmente disponível (1,0 eq) é suspenso em tolueno (10 vol). Vitrideo (2 eq) é adicionado através do funil de adição em uma taxa para manter a temperatura em 15-25ºC. No final da adição, a temperatura é elevada até 40ºC durante 2 h, a seguir NaOH aq. 10% (p/p) (4,0 eq.) é cuidadosamente adicionado através do Eunil de adição, mantendo a temperatura em 40-50ºC. Após agitar durante mais 30 minutos, as camadas são separadas à 40ºC. A fase orgânica é

. 82 resfriada até 20ºC e, em seguida, ela é lavada com água (2 x 1,5 vol.), seca (NaãiSOsl, filtrada e concentrada para fornecer (2,2-diflúor-l,3-benzodioxol-5-il)-metanol bruto, que é usado diretamente na etapa seguinte. Síntese de 5-clorometil-2,2-diflúor-1l,3-benzodioxol. 1, SOCL, (1.5 equiv) DMAFP (0.01 equiv) MTBE (5 vol)

2. água (4 vol) E O AA or 82-100% rendimento — F O À (2, 2-Diflúor-1,3-benzodioxol-5-1l)-metanol (1,0 eq.) é dissolvido em MTIBE (5 vol). Uma quantidade catalítica de DMAP (1% em mol) é adicionada e SOCl, (1,2 eq) é adicionado através do funil de adição. O SOCl, é adicionado à uma taxa para manter àa temperatura no rTeator em 15-25ºC. A temperatura é aumentada para 30"C durante 1 hora e, à seguir, ela é resfriada até 20ºC, em seguida água (4 vol.) é adicionada através do funil de adição, mantendo a

15. temperatura abaixo de 30 C. Após agitar durante mais 230 minutos, as camadas são separadas. A camada orgânica é agitada e NaOH aq. 10% (p/v) (4,4 vol) é adicionado, Após agitar durante 15 a 20 minutos, as camadas são separadas. A fase orgânica é a seguir seca (Na;S0'), filtrada e concentrada para fornecer S5-clorometil-2,2-diflúor-1,3- benzodioxol bruto, que é usado diretamente na etapa

. 83 seguinte.

Síntese de (2,2-diflúor-l,3-benzodioxol-5-il)-aceto nitrila. 1. NaCN (1,4 equiv) DMSO (3 vol) 30-40ºC DATA ã MrBe ca vo) XT Fo 95-100% rendimento rw " Uma solução de S-clorometil-2,2-diflúor-1,3- benzodioxol (1 eq) em DMSO (1,25 vol) é adicionada a uma suspensão de NaCN (1,4 eq) em DMSO (3 vol), mantendo a temperatura entre 30 e 40ºC. A mistura é agitada durante 1 hora, em seguida água (6 vol) é adicionada, seguido por MTBE (4 vol), Após agitar durante 30 min, as camadas são separadas. A camada aquosa é extraída com MTBE (1,8 vol). As camadas orgânicas combinadas são lavadas com água (1,8 145 vol), secas (Na2SO4), filtradas & concentradas para fornecer (2, 2-di flúor-1, i-benzodioxol-S-il)-acetonitrila bruta (95%), que é usada diretamente na etapa seguinte. RMN 4H (500 MHz, DMSO) 5 7,44 (br s, 1H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,22 (dd, J= 8,2, 1,8 Hz, 1H), 4,07 (s, 2H).

Síntese de (2,2-ditflúorl,s-benzodioxol-S-il)-l1-etil acetato-acetonitrila o Pd(dba)», rBuP o. o PRI f soda NazPO,, Pos, Tolueno, H2O, 70 ºC en

: 84 Um reator foi purgado com nitrogênio e carregado com 900 ml de tolueno. O solvente foi desgaseificado através de pulverização com nitrogênio durante não menos do que 16 h.

o reator Nas;POs foi, a seguir, carregado com Nas&FO,. (155,7 gg, 249,5 mmol), seguido por bis (dibenzilideno acetona)paládio (0) (7,28 g, 12,66 mmol). Uma solução a 10% p/p de terc-butilfosfina em hexanos (51,23 g, 25,32 mmol) foi carregada durante 10 min a 23ºC, a partir de um funil de adição purgado com nitrogênio. A mistura foi deixada agitar durante 50 min, em cujo momento 5-bromo-2,2-diflúor- 1,3-benzodioxol (75 g, 316,5 mmol) foi adicionado durante 1 min. Após agitação durante mais 50 min, a mistura foi carregada com cianoacetato de etila (71,6 g, 633,0 mmol) durante 5 min, seguido por água (4,5 MI) em uma porção. À mistura foi aquecida a 70ºC durante 40 min e analisada por HPLC a cada 1-2 h para a conversão percentual do reagente ao produto. Após a completa conversão ser observada (tipicamente 100% de conversão após 5-8 h), a mistura foi resfriada a 20-25ºC e filtrada através de um bloco de Celite, O bloco de Celite foi rinsado com tolueno (2 x 450 ml) e os orgânicos combinados foram concentrados a 300 ml sob vácuo a 60-65ºC. O concentrado foi carregado com 225 ml de DMSO e concentrado sob vácuo a 70-80ºC até a destilação ativa do solvente cessar. A solução foi resfriada a 20-25ºC

. $5 e diluída a 900 ml com DMSO na preparação para a Etapa 2. RMN H (500 MHz, CDCls) 3 7,16 = 7,10 (mM, 2H), 7,03 (d, Je $,2 Hz, 1H), 4,63 (Ss, 11), 4,19 (lh, 2H), 1,23 (tt, Jd = 7,1 H2, SH). Sintese de (2:2-Giflúor-l,3-oenzodioxol-5-il)j-aceto nitrila,. POA, HOCI3N, Del. Fo oE O DMSO,95%€ FO S

CN A solução em DMSO de (2,2-diflúor-1,3-benzodioxol-5- il) -1-etilacetato-acetonitrila de cima foi carregada com HCl 3N (617,3 ml, 1,85 mol) durante 20 min, mantendo uma temperatura interna < 40ºC. A mistura foi a seguir aquecida até 750 durante 1 h e analisada por HPLC à cada 1-2h quanto à % de conversão. Quando uma conversão > 99% foi observada (tipicamente após 5-6 h), a reação foi resfriada até 20-25ºC e extraída com MTBE (2 x 525 ml), com tempo suficiente para permitir a completa separação de fases durante as extrações. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com NaCl 5% (2 x 375 ml). A solução foi, a seguir, transferida para o equipamento apropriado para uma destilação à vácuo à 1,5-2,9 Torr (200-333,3 Pa) que foi equipado com um frasco receptor resfriado. A solução foi concentrada sob vácuo a < 60ºC para remover os solventes.

. 86 (2, 2-diflúor-1,3-benzodioxol=S-il)-acetonitrila foi, em seguida, destilada a partir do óleo resultante a 125-130ºC (temperatura do forno) e a 1,5-2,0 Torr (200-266,6 Pa). (2,2-Diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)-acetonitrila foi isolada como um óleo claro com 66% de rendimento a partir de 5- bromo-2,2-diflúor-1,3-benzodioxol (2 etapas) e com uma pureza de HPLC de 91,5% ASC (corresponde a um ensaio p/p de 95%). RMN '*H (500 MHz, DMSO) 3 7,44 (br s, 1H), 7,43 (df, 3 = 8,4 Hz, 1H), 7,22 (dd, J= 8,2, 1,8 Hz, 1H), 4,07 (s, 2H). Síntese de (2,2-diflúor-l1,3-benzodioxol-5-il)-ciclo propanocarbonitrila 1-bromo-2-cloroetano (1,5 equiv) KOH 50% (5,0 equiv) Oct, NBr (0.02 equiv) DD a O E o en Fo o 88-100% rendimento Uma mistura de (2, 2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)- acetonitrila (1,0 eq), KOH aquoso 50% em peso (5,0 eq), 1- bromo-2-cloroetano (1,5 eq) e OctáNBr (0,02 eq) é aquecida a 70ºC durante 1 h.

A mistura reacional é resfriada e, a seguir, é desenvolvida com MTBE e água.

A fase orgânica é lavada com água e salina, em seguida, o solvente é removido para fornecer (2, 2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclo propanocarbonitrila.

RMN (500 MHz, DMSO) & 7,43 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,40 (df, J = 1,9 Hz, 1H), 7,30 (dd, JD = 8,4,

: 87 1,9 H>, 1H), 1,75 (m, 28), 1,53 (1, 2H). Síntese do ácido 1-(2,2-0diflúor-l,3-benzodioxol-5-11)- ciclopropanocarboxiílico.

1. NaOH 6M (8 equiv) EtOH (5 vol), 80ºC O, 2. Mis olcalálna (1 aqui) AAA Fo ON F OH

3. MTBE (10 vol) ácido cítrico 109% (8 vol) 699% rendimento (2, 2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclopropano carbonitrila é hidrolisada com NaOH 6M (8 equiv) em etanol (5 vol.) a 80ºC de um dia para o outro. A mistura é resfriada até a temperatura ambiente e etanol é evaporado sob vácuo. O resíduo é ressuspenso em água e MTBE, HCl 1M foi adicionado e as camadas são separadas. A camada de MTBE foi, a seguir, tratada com diciclo-hexilamina (0,97 equiv). A suspensão é resfriada a 0ºC, filtrada & lavada COM heptano para fornecer o sal de DCHA correspondente. O sal é ressuspenso em MTBE e ácido cítrico a 10% e agitado até todos os sólidos se dissolverem. As camadas são separadas e a camada de MTBE foi lavada com água e salina. A troca do solvente para heptano seguido por filtração fornece o ácido 1-12,2-diflúor-l,3-benzodioxo1-5=11) =cielopropano carboxílico após secagem em estufa a vácuo a 50ºC de um dia para o outro. EST-MS mn/z Calc. 242,04, encontrado 241,58 IM+1)*: RMN CH (500 MHz, DMSO) & 12,40 (ds, 1H), 7,40 (A, =

: 88 1,6 Hz, 1H), 7,30 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,17 (dd, Je 8,3, 1,7 Hz, 1H), 1,46 (m, 2H), 1,17 (m, 2H). Porção Amina Síntese de 2-bromo-5-flúor-4-nitroanilina. “O NBS “O ; F NH2 nDIr F NH> Um Erasco foi carregado com 3-Flúor-i-nitroanilina (1,0 equiv) seguido por acetato de etila (10 vol) e agitado para dissolver todos os sólidos.

N-bromossuccinimida (1,0 equiv) foi adicionada em porções para manter a temperatura interna de 22ºC.

No final da reação, a mistura reacional foi concentrada em vácuo em um rotaevaporador.

O resíduo foi suspenso em água destilada (5 vol) para dissolver e remover —“succinimida. (A succinimida também pode ser removida pelo processamento com água). A água foi decantada e o sólido foi suspenso de um dia para o outro em 2 propanol (5 vol). A suspensão resultante toi filtrada e à massa úmida foi lavada com 2-propanol, seca em estufa à vácuo a 50ºC de um dia para o outro com drenagem de N, até peso constante ser alcançado.

Um sólido marrom claro amarelado foi isolado (50% de rendimento, 97,5% de ASC). Outras impurezas foram um regioisômero de bromo (1,4% ASC) e um aduto dibromo (1,1% ASC). RMN 4 (500 MHz, DMSO) 3

- s9 8,19 (1 H, d, J = 8,1 Hz), 7,06 (br. s, 2 H), 6,64 (d, 1 H, J= 10,3 Hz). Síntese de sal de tosilato de 4-amônio-2-bromo-5- fluoranilina benzilglicolado. nº Poçom cat, ZA(CIO,),-2H,0 o "A tolueno, 80º ne Da F NH2 = 2) HE, PUSYC Fr NH IPAc 1.º po 3) TSOH-H,O 'oBnN

DCM Um frasco completamente seco sob N27 foi carregado com o seguinte: peneiras moleculares de 4A em pó ativado (50% em peso com base em 2-bromo-5-flúor-4-nitroanilina), 2-7 bromo-5-flúor-4-nitroanilina (1,0 equiv), perclorato de zinco di-hidratado (20% em mol) e tolueno (8 vol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente não mais do que 30 min. Por fim, éter (R)-benzilglicidílico (2,0 equiv) em tolueno (2 vol) foi adicionado em fluxo constante. A reação foi aquecida até 80ºC (temperatura interna) e agitada durante aproximadamente 7 horas ou até 2-bromo-5-flúor-4- nitroanilina ser < 5% da ASC. A reação foi resfriada até temperatura ambiente e Celite (50% em peso) foi adicionado, seguido por acetato de etila (10 vol). A mistura resultante foi filtrada para

: 90 remover o Celite e as peneiras, e lavada com acetato de etila (2 vol). O filtrado foi lavado com solução de cloreto de amônio (4 vol., 20% p/vi. À camada orgânica foi lavada com solução de bicarbonato de sódio (4 vol. x 2,5% p/V). À camada orgânica foi concentrada sob vácuo em um rotaevaporador. A suspensão resultante foi dissolvida em acetato de isopropila (10 vol) e essa solução foi transferida para um hidrogenador de Buchi.

O hidrogenador foi carregado com 5% em peso de PLIS)/CO (1,5% em mol) e a mistura foi agitada sob Nr a 30ºC (temperatura interna). A reação foi lavada com N, seguido por hidrogênio. A pressão do hidrogenador foi ajustada para 1 Bar de hidrogênio e a mistura foi agitada rapidamente (> 1200 rpm). No final da reação, O catalisador foi filtrado através de um bloco de Celite e lavado com diclorometano (10 vol). O filtrado foi concentrado em vácuo. Qualquer acetato de isopropila remanescente foi sequestrado com diclorometano (2 vol) e concentrado em um rotaevaporador até à secura, O resíduo resultante foi dissolvido em diclorometano (10 vol). Ácido p-toluenossulfônico mono-hidratado (1,2 equiv) foi adicionado e agitado de um dia para o outro. o produto foi filtrado e lavado com diclorometano (2 vol) e seco por sucção. A massa úmida foi transferida para

. 91 bandejas de secagem e em uma estufa à vácuo, e foi seca a 45ºC com drenagem de N; até o peso constante ser atingido.

Sal de tosilato de 4-amônio-2-bromo-S-fluoroanilina benzilglicolado foi isolado como um sólido esbranquiçado.

A pureza quiral foi determinada como sendo > 97% ee.

Síntese de (3-cloro-3-metilbut-l-inil)trimetilsilano.

Pa HCl puro PD. oH Cc TMS' 2% TNS Álcool propargílico (1,0 equiv) foi carregado em um recipiente.

Ácido clorídrico aquoso (37%, 3,75 vol) foi adicionado e à agitação foi iniciada, Durante a dissolução do álcool sólido, observou-se uma modesta endotermia (5- 6ºC). À mistura resultante foi agitada de um dia para O outro (16 h), lentamente se tornando vermelho escura.

Um recipiente encamisado de 30 1 é carregado com água (5 vol) que foi, a seguir, resfriado até 10ºC.

A mistura reacional é transferida lentamente para a água por vácuo, mantendo a temperatura interna da mistura abaixo de 25'C.

Hexanos (> vol.) são adicionados e a mistura resultante é agitada durante 0,5 h.

As fases foram decantadas e a fase aquosa (pH < 1) foi removida por drenagem e descartada.

A fase orgânica foi concentrada em vácuo usando um rotaevaporador, fornecendo o produto como óleo vermelho.

. 92 Síntese de (4- (benzilóxi)-3,3-dimetilbut-1-inil) trimetilsilano.

Pa 1. Mg 2 Cl ? TMS 2. BROCHXC! Tms OoBn Método A o Todos os descritores de equivalentes e volume nesta parte são baseados em uma reação de 250 g.

Aparas de magnésio (69,5 g, mol 2,86 mol, 2,0 equiv) foram carregadas em um reator com 4 gargalos de 3 1 e agitadas com um agitador magnético sob nitrogênio durante 0,5 h.

O reator foi imerso em um banho de água gelada.

Uma solução de cloreto de propargila (250 g, 1,43 mol, 1,0 equiv) em THF (1,8 1, 7,2 vol) foi adicionada lentamente ao reator, com agitação, até que foi observada uma exotermia inicial (-10ºC). A formação do reagente de Grignard foi confirmada por IPC usando espectroscopia de RMN *H.

Uma vez que a exotermia diminuiu, o restante da solução foi adicionado lentamente, mantendo a temperatura do lote < 15ºC.

A adição exigiu > 3,5 h.

A mistura verde escura resultante foi decantada em uma garrafa com tampa de 2 1. Todos os descritores de equivalentes e volume nesta parte são baseados em uma reação de 500 g.

Um reator de 22 1 foi carregado com uma solução de éter benzilclorometílico (95%, 375 g, 2,31 mol, 0,8 equiv) em THF (1,5 L, $ vol). O

. 93 reator foi imerso em um banho de água gelada.

Dois dos quatro lotes de reagente de Grignard preparados acima foram combinados e, em seguida, adicionados lentamente à solução de éter benzilclorometílico através de um funil de adição, mantendo a temperatura do lote abaixo de 25ºC.

A adição exigiu 1,5 h.

A mistura reacional foi agitada de um dia para o outro (16 h). Todos os equivalentes e descritores de volume nesta parte são baseados em uma reação de 1 Kg.

Uma solução de cloreto de amônio a 15% foi preparada em um reator encamisado de 30 1 (1,5 Kg em 8,5 Kg de água, 10 vol). A solução foi resfriada a 5ºC.

As duas misturas de reação de Grignard acima foram combinadas e, em seguida, transferidas para a solução de cloreto de amônio através de um frasco coletor.

Uma exotermia foi observada nesta supressão, que foi realizada em uma taxa de modo a manter a temperatura interna abaixo de 25ºC.

Uma vez terminada a transferência, a temperatura da camisa do recipiente foi ajustada a 250. Hexanos (Bs 1, 8 vol) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 0,5 h.

Depois de se decantar as fases, a fase aquosa (pH 9) foi removida por drenagem e descartada.

A fase orgânica restante foi lavada com água (2 1, 2 vol). A fase orgânica foi concentrada em vácuo usando um rotaevaporador de 22 1, fornecendo o produto bruto como um

- 94 óleo laranja.

Método B Aparas de magnésio (106 g, 4,35 mol, 1,0 eq) foram carregadas em um reator de 22 1 e, em seguida, suspensas em

5. THF (760 ml, 1 vol), O frasco foi resfriado em um banho de água gelada, de modo que a temperatura do lote atingisse 2ºC. Uma solução de cloreto de propargila (760 g, 4,35 mol, 1,0 equiv) em THF (4,5 1, 6 vol) foi adicionada lentamente ao reator. Depois de 100 ml serem adicionados, a adição foi interrompida e à mistura foi agitada até uma exotermia à 13ºC ser observada, indicando a iniciação do reagente de Grignard. Uma vez que a exotermia diminuiu, outros 500 ml de solução de cloreto de propargila foram adicionados lentamente, mantendo a temperatura do lote < 20ºC. A formação do reagente de Grignard foi confirmada por IPC usando espectroscopia de RMN ih. O restante da solução de cloreto de propargila foi adicionado lentamente, mantendo a temperatura do lote < 20ºC. A adição exigiu - 1,5 h. A solução verde escura resultante foi agitada durante 0,5 h. A formação do reagente de Grignard foi confirmada por IPC usando espectroscopia de RMN 'H. Éter benzil clorometílico puro foi carregado ao funil de adição do reator &, em seguida, adicionado gota a gota no reator, mantendo à temperatura do lote abaixo de 25ºC. A adição exigiu 1,0 h.

. 95 A mistura reacional foi agitada de um dia para o outro. O processamento e a concentração aquosa foram realizados usando o mesmo procedimento e quantidades relativas de materiais como no Método A, para fornecer o produto como um óleo laranja. Síntese de 4-benzilóxi-3,3-dimetilbut-l1-ino.

KOH

A EX e Br — genem2 oBn etapas Um reator encamisado de 30 1 foi carregado com metanol (6 vol.), que foi, a seguir, resfriado a 5ºC. Hidróxido de potássio (85%, 1,3 equiv) foi adicionado ao reator. Uma exotermia de 15 a 20ºC foi observada conforme o hidróxido de potássio se dissolvia. A temperatura de encamisamento foi definida a 25ºC. Uma solução de 4-benzilóxi-3,3- dimetil-l-trimetilsililbut-l-ino (1,0 equiv) em metanol (2 vol.) foi adicionada e a mistura resultante foi agitada até a conclusão da reação, conforme monitorado por HPLC. O tempo reacional típico a 25ºC é de 3 a 4 h. A mistura reacional é diluída com água (8 vol) e, em seguida, agitada durante 0,5 h. Hexanos (6 vol) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 0,5 h. As fases foram deixadas decantar e àa fase aduosa (pH 10-11) foi removida por drenagem e descartada. A fase orgânica foi lavada com uma

: 96 solução de KOH (85%, 0,4 equiv) em água (8 vol), seguido por água (8 vol). A fase orgânica foi, a seguir, concentrada usando um rotaevaporador, fornecendo o material do título como um óleo amarelo-laranja.

A pureza típica deste material está na faixa de 80% com essencialmente uma única impureza presente.

RMN *H (400 MHz, CsDs) 3 7,28 (d, 2 H, J = 7,4 Hz), 7,18 (t, 2 H, J = 7,2 Hz), 7,10 (d, 1H, J= 7,2 Hz), 4,35 (s, 2 H), 3,24 (s, 2 H), 1,91 (s, 1 H), 1,25 (s, 6 H). Síntese de 4-amino-2-(4-benzilóxi-3,3-dimetilbut-1- inil)-5-fluoranilina benzilglicolada. o n HAN Br ZE XD . F NH Ec e ;oH Pd(0Ac), F NH TsO dppb K2COs ;oH oBnm — MeCN oBnN Sal de tosilato de 4-amônio-2-bromo-S-fluoranilina benzilglicolada foi liberado da base pela agitação do sólido em EtOAC (5 vol) e solução saturada de NaHCOs (5 vol) até a camada orgânica límpida ser obtida.

As camadas resultantes foram separadas e a camada orgânica foi lavada com solução saturada de NaHCO; (5 vol), seguido por salina e concentradas sob vácuo para obter sal de tosilato de do amônio-2-bromo-5-fluoranilina benzilglicolada como um óleo.

. 97 A seguir, um trasco foi carregado com sal de tosilato de 4-amônio-2-bromo-5-fluoranilina benzilglicolada (base livre, 1,0 equiv), Pd(OAc) (4,0% em mol), dppb (6,0% em mol) e K;CO0; em pó (3,0 equiv) e agitado com acetonitrila (6 vol) em temperatura ambiente.

A mistura reacional resultante foi desgaseificada durante aproximadamente 30 min por borbulhamento em N7 com vazão.

A seguir, 4- benzilóxi-s, i-dimetilbut-l1-ino (1,1 equiv) dissolvido em acetonitrila (2 vol) foi adicionado em um fluxo rápido e aquecido a 80 CC e agitado até o sal de tosilato de 4d- amônio-2-bromo-5-fuoranilina ser completamente consumido.

A suspensão reacional foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada através de um bloco de Celite e lavada com acetonitrila (2 vol). O filtrado foi concentrado sob vácuo e o resíduo foi redissolvido em EtOAC (6 vol). A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução de NH.Cl (20% p/v, 4 vol) e salina(6 vol). A camada orgânica resultante foi concentrada para produzir um óleo marrom e usada como tal na reação seguinte.

Síntese de 5-amino-2-(2-benzilóxi-l,1-dimetiletil)-6- fluorindol N-benzilglicolado. oBn A (MCCNLPACL — gn E Oque Fr NH MeCN F N TC To 'oBn 'oBn

: 98

O óleo bruto de 4-amino-2-(4-benzilóxi-3,3-dimetilbut- d=inii)-S-fluoranilina foi dissolvido em acetonitrila (6 vol) e (MeCN).PdCly (15% em mol) foi adicionado em temperatura ambiente.

A mistura resultante foi —desgaseificada usando N7 com vazão durante aproximadamente 30 min.

A seguir, a mistura reacional foi agitada a 80ºC, sob cobertura de N, de um dia para o outro.

A mistura reacional foi resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de um bloco de Celite e a massa foi lavada 140 com acstonitrila (1 vol). O filtrado resultante foi concentrado sob vácuo e redissolvido em EtOAc (5 vol). Deloxano-II THP (5% em peso com base no rendimento teórico de 5-amino-2-(2-benzilóxi-l,1-dimetiletil)-6-fluorindol N- benzilglicolado) foi adicionado e misturado em temperatura ambiente de um dia para o outro.

A mistura foi, a seguir, filtrada através de um bloco de sílica (profundidade de 2,5 polegadas, filtro de diâmetro de 6 polegadas) e lavada com EtoAc (4 vol). O filtrado foi concentrado para fornecer um resíduo marrom escuro, e usado como tal na reação seguinte.

Repurificação de 5-amino-2-(2-benzilóxi-l,1-dimetil etil)-6-fluorindol N-benzilglicolado bruto: O 5-amino-2-(2-benzilóxi-l,1-dimetiletil)-6-fluorindol N-benzilglicolado bruto foi dissolvido em diclorometano (> 1,5 vol) e filtrado através de um bloco de sílica usando

. 99 inicialmente 30% de EtOAc/heptano, onde as impurezas foram descartadas. A seguir, o bloco de sílica foi lavado com 50% de EtOAc/heptano para isolar 5-amino-2-(2-benzilóxi-l1,1- dimetiletil)-6-fluorindol N-benzilglicolado até uma ligeira cor ser observada no filtrado. Este filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o óleo marrom, que cristalizou em repouso em temperatura ambiente. RMN H (200 Milz, DMSO) & 7,368-7,34 (m, 4 H), 7,32-7,23 (Mm, 6 H), /,21 (d, 1 H, J = 12,8 Hz), 6,77 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 6,06 (s, 1 H), 5,13 (d, 1H, J= 4,9 Hz), 4,54 (s, 2 H), 4,46 (br. s, 2 H), 4,45 (s, 2 H), 4,33 (df, 1 H, J= 12,4 Hz), 4,09-4,04 (m, 2 H), 3,63 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 3,56 (d, 1H, J = 9,2 Hz), 3,49 (dd, 1H, J = 9,8, 4,4 Hz), 3,43 (dd, 1H, J = 9,8, 5,7 Hz), 1,40 (s, 6H). Síntese do Composto 1 Síntese do Composto 1 protegido com benzila. O SOCh F.

H; F. 2 TODO F > o De F———>Y 'oBN DCM

. 100 | o ST ÉS LIC o > o oBn

Ácido 1-(2,2-diflúor-1,3-benzodioxol-5-il)-ciclo

5 .propanocarboxílico (1,3 equiv) foi suspenso em tolueno (2,5 vol, com base em ácido 1-(2,2-diflúor-l,3-benzodioxol-5-

il) -ciclopropanocarboxílico) e a mistura foi aquecida a 60ºC.

SOCl2 (1,7 equiv) foi adicionado através do funil de adição.

A mistura resultante foi agitada durante 2 horas.

O tolueno e o excesso de SOCl, foram removidos por destilação usando rotaevaporador.

Tolueno adicional (2,5 vol., com base no ácido d1-(2,2-difihor-1,S-benzodioxol=-5-11)- ciclopropanocarboxílico) foi adicionado e novamente destilado.

O cloreto de ácido bruto foi dissolvido em diclorometano (2 vol) e adicionado através do funil de adição a uma mistura de 5S-amino-2-(2-benzilóxi-l1,1- dimetiletil)-6-fluorindol N-benzilglicolado (1,0 equiv) e trietilamina (2,0 equiv) em diclorometano (7 vol), mantendo 0-3ºC (temperatura interna). A mistura resultante foi agitada a 0ºC durante 4 horas e, em seguida, aquecida à temperatura ambiente de um dia para o outro.

Água destilada

(5 vol.) foi adicionada à mistura reacional e ela foi agitada por não mais que 30 min. e as camadas foram separadas.

A fase orgânica foi lavada com K2CO; 20% em peso

. 101 (4 vol. x 2), seguido por uma lavagem com salina(4 vol.) e concentrada para fornecer o Composto 1 protegido com benzila bruto, como um óleo marrom espesso, que foi adicionalmente purificado usando filtração em bloco de sílica.

Filtração em bloco de sílica gel: O Composto 1 protegido com benszila bruto foi dissolvido em acetato de etila (3 vol), na presença de carvão ativado Darco-G (10% em peso, com base no rendimento teórico do Composto 1 protegido com benzila) e agitado em temperatura ambiente de um dia para o outro. A esta mistura foi adicionado heptano (3 vol) e filtrado através de um bloco de sílica gel (2x peso do Composto 1 protegido com benzila bruto). O bloco de sílica foi lavado com acetato de etila/heptano (1:1, 6 vol)l, ou até que pouca eor fosse detectada no filtrado. O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o Composto 1 protegido com benzila como um óleo marrom avermelhado viscoso e usado diretamente na etapa seguinte.

Repurificação: O Composto 1 protegido com benzila foi redissolvido em diclorometano (1 vol, com base no rendimento teórico do Composto 1 protegido com benzila) e carregado em um bloco de sílica gel (2 x peso do Composto 1 protegido com benzila bruto). O bloco de sílica foi lavado com diclorometano (2 vol., com base no rendimento teórico

. 102 do Composto 1 protegido com benzila) e o filtrado foi descartado. O bloco de sílica foi lavado com 30% de acetato de etila/heptano (5 vol.) e o filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o Composto 1 protegido com benzila como um óleo laranja avermelhado viscoso e usado diretamente na etapa seguinte. Síntese do Composto 1.

SET TOC Fo or N TE nã THF Br 30% em 4 etapas oH Fo o; NE oH Método A Um autoclave de 20 1 foi lavado três vezes com gás nitrogênio e, em seguida, carregado com paládio em carbono (Evonik E 101 N/W, 5% de Pd, 60% de umidade, 200 9, 0,075 mol, 0,04 equiv). O autoclave foi, a seguir, lavado com nitrogênio três vezes. Uma solução de Composto 1 protegido com benzila bruto (1,3 Kg,-1,9 mol) em THF (8 1, 6 vol) foi adicionada ao autoclave por meio de sucção. O recipiente foi tampado e, a seguir, lavado três vezes com gás

. 103 nitrogênio. Com agitação suave, o recipiente foi lavado três vezes com gás hidrogênio, evacuando para a atmosfera por diluição com nitrogênio. O autoclave foi pressurizado a 3 Bar (300000 Pa) com hidrogênio e a taxa de agitação foi aumentada para 800 rpm. Rápida absorção de hidrogênio foi observada (dissolução). Uma vez diminuída a absorção, O recipiente foi aquecido a 50ºC.

Por motivo de segurança, o termostato foi desligado no final de cada dia de trabalho. O recipiente foi pressurizado a 4 Bar (400000 Pa) com hidrogênio e, a seguir, isolado do tanque de hidrogênio.

Após 2 dias completos de reação, mais PA/C (60 q, 0,023 mol, 0,01 equivi foi adicionado à mistura. Isto foi feito por lavagem três vezes com gás nitrogênio e, em seguida, adicionando o catalisador através da porta de adição de sólidos. A retomada da reação foi feita como antes. Após 4 dias completos, a reação foi considerada completa por HPLC pelo desaparecimento não apenas do material de partida, mas também do pico correspondente a um intermediário mono-benzilado.

A mistura reaciona! foi filtrada através de um bloco de Celite. O recipiente e a massa filtrada foram lavados com THF (2 l, 1,5 vol). O bloco de Celite foi, a seguir, umedecido com água, e a massa foi descartada adequadamente.

. 104 O filtrado combinado e a lavagem de THF foram concentrados usando um rotaevaporador, fornecendo o produto bruto como um óleo preto, 1 Ko.

Os equivalentes e volumes na purificação seguinte baseiam-se em 1 Kg de material bruto, O óleo preto bruto foi dissoivido em acetato de etila-heptano 1:1. A mistura foi carregada em um bioco de sílica gel (1,5 Ko, 1,5 equiv. em peso) em um funil poroso, que foi saturado com acetato de etila-heptano 1:1. O bloco de sílica foi lavado primeiramente com acetato de etila-heptano 1:1 (6 1, 6 vol) e, em seguida, com acetato de etila puro (14 1, 14 vol). O eluente foi coletado em 4 frações, que foram analisadas por HPLC.

Os equivalentes e volumes na purificação a seguir baseiam-se em 0,6 Kg de material bruto.

A fração 3 foi concentrada por rotaevaporação para fornecer uma espuma marrom (600 g) e, em seguida, redissolvida em MTBE (1,8 1, 3 vol). A solução marrom escura foi agitada de um dia para o outro em temparatura ambiente, durante O que à cristalização ocorreu.

Heptano (55 ml, 0,1 vol) foi adicionado e a mistura foi agitada de um dia para o outro.

A mistura foi filtrada usando um funil de Buchner e a massa filtrada foi lavada com MTBE-heptano 3:1 (900 ml, 1,5 vol). A massa filtrada foi seca em ar durante 1 h e, a seguir,

. 1405 seca a vácuo em temperatura ambiente durante 16 h, fornecendo 253 g de VXc-661 como um sólido esbranquiçado.

Os equivalentes e volumes na purificação seguinte baseiam-se em 1,4 Kg de material bruto.

As frações 2 e 3 da filtração em sílica gel acima, bem como o material de uma reação anterior, foram combinados e concentrados para fornecer 1,4 Kg de um óleo preto.

A mistura foi ressubmetida à filtração em sílica gel (1,5 Kg de sílica gel, eluído com 3,5 1, 2,3 vol. de acetato de etila-heptano 140 1:1, à seguir 9 1, 6 vol. de acetato de etila puro) descrito acima, que mediante concentração, forneceu um sólido espumoso marrom claro (390 g). Os equivalentes e volumes na purificação seguinte baseiam-se em 390 g de material bruto.

O sólido marrom claro foi insolúvel em MTBE, deste modo foi dissolvido em metanol (1,2 1, 3 vol). Usando um reator Morton de 4 1, equipado com uma cabeça de destilação de longo trajeto, a mistura foi concentrada por destilação até 2 vol.

MTBE (1,2 1, 3 vol.) ser adicionado e a mistura foi novamente concentrada por destilação até 2 vol.

Uma segunda porção de MTBE (1.6 l, 4 vol.) foi adicionada e a mistura foi novamente concentrada por destilação até 2 vol.

Uma terceira porção de MTBE (1,2 1, 3 vol.) foi adicionada e a mistura foi novamente concentrada por destilação até 3 vol.

: 106 A análise do destilado por CG revelou que ele consiste de - 6% de metanol. O rermostato foi configurado em 48ºC (abaixo da temperatura de ebulição do azeótropo de MTBE-metanol, que é S52ºC). À mistura foi restriada a 20'C durante 2 h, durante cujo tempo uma recristalização relativamente rápida ocorreu. Depois de agitar a mistura durante 2 h, heptano (20 ml, 0,05 vol.) foi adicionado e a mistura foi agitada de um dia para o outro (16 h). A mistura foi filtrada usando um funil de Buchner e a massa filtrada foi lavada com MTBE:heptano 3:1 (800 ml, 2 vol.). A massa filtrada foi seca ao ar durante 1 h e, a seguir, seca a vácuo em temperatura ambiente durante 16 h, fornecendo 130 gq de Composto 1 como um sólido esbranquiçado.

Método B O Composto 1 protegido com benzila foi dissolvido e davado com THF (3 vol) para remover Qualquer solvente residual remanescente. O Composto 1 protegido com benzila foi redissolvido em THF (4 vol) e adicionado ao hidrogenador contendo 5% em peso de Pd/C (2,5% em mol, 60% de umidade, Degussa E5 E101 NN/W). A temperatura interna da reação foi ajustada a 50ºC e lavada com N,7 (x5) seguido de hidrogênio (x3). A pressão do hidrogenador foi ajustada a 3 Bar (300000 Pa) de hidrogênio e a mistura foi agitada rapidamente (> 1100 rpm). No final da reação, o catalisador

: 107 toi filtrado através de um bloco de Celite e lavado com THF (1 vol). O filtrado foi concentrado em vácuo para obter um resíduo marrom espumoso. O resíduo resultante foi dissolvido em MTBE (95 vol.) e sotução de HC1 0,5 N (2 vol.) S e água destilada (1 vol) foram adicionados. A mistura foi agitada por não menos que 30 min. e as camadas resultantes foram separadas. A fase orgânica foi lavada com solução de K2CO;z 10% em peso (2 vol x 2), seguido por uma lavagem com salina. A camada orgânica foi adicionada a um frasco contendo sílica gel (25% em peso), Deloxan-THP II (5% em peso, 75% de umidade) e NazSO, e agitada de um dia para O outro. A mistura resultante foi filtrada através de um bloco de Celite e lavada com 10% de THF/MTBE (3 vol). O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o Composto 1 bruto como uma espuma marrom claro pálida.

Recuperação do Composto 1 do líquido mãe: Opção A.

Filtração em bloco de sílica gel: O líquido mãe foi concentrado sob vácuo para obter uma espuma marrom, dissolvida em diclorometano (2 vol) e filtrada através de um bloco de sílica (3 x peso do Composto 1 bruto). O ploco de sílica foi lavado com acetato de etila/heptano (1:1, 13 vol.) e o filtrado foi descartado. O bloco de sílica foi lavado com 10% de THF/acetato de etila (10 vol.) e o filtrado foi concentrado sob vácuo para fornecer o Composto

: 108 1 como uma espuma marrom claro pálida. O procedimento de cristalização acima foi feito para isolar o Composto 1 remanescente. Recuperação do Composto 1 do líquido mãe: Opção B.

Cromatografia em Coluna de sílica gel: após cromatografia em sílica gel (50% de acetato de etila/hexanos a 100% de acetato de etila), o composto desejado foi isolado como espuma marrom claro pálida. O procedimento de cristalização acima foi feito para isolar o Composto 1 remanescente.

A Figura 1 mostra um padrão de difração de pó de raios-x do Composto 1. Um traçado de DSC do Composto 1 é mostrado na Figura 2. O traçado de DSC na Figura 2 indica que o Composto 1 não é uma fase sólida pura. Existe um pico extra em 119ºC em comparação com o Composto 1 Forma À (ver Figura 6). Um traçado de TGA do Composto 1 é mostrado na Figura 3.

O Composto 1 também pode ser preparado por uma das várias rotas sintéticas divulgadas nos pedido de patente US publicado US20090131492, incorporado neste documento por referência.

Síntese do Composto 1 Forma À Método de suspensão Para EtoAC, MTBE, acetato de isopropila ou DCM, cerca

. 109 de 40 mg do Composto 1 foi adicionado a um frasco juntamente com 1-2 ml de qualquer um dos solventes acima.

A suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h por 2 semanas e o Composto 1 Forma À foi coletado por centrifugação dessa suspensão (com filtro). A Figura 5 divulga um padrão XRPD do Composto 1 Forma A obtido por esse método com DCM como solvente.

Para soluções de EtOH/água, cerca de 40 mg do Composto 1 foi adicionado a três frascos separados.

No primeiro frasco, 1,35 ml de EtoH e 0,15 ml de água foram adicionados.

No segundo frasco, 0,75 ml de EtOH e 0,75 ml de água foram adicionados.

No terceiro frasco, 0,15 ml de EtOH e 1,35 ml de água foram adicionados.

Todos os três frascos foram agitados em temperatura ambiente durante 24 h.

Cada suspensão foi, a seguir, centrifugada separadamente (com filtro) para coletar o Composto 1 Forma A.

Para soluções de álcool isopropílico/água, cerca de 40 mg do Composto 1 foi adicionado a três frascos separados.

No primeiro frasco, 1,35 ml de álcool isopropílico e 0,15 ml de água foram adicionados.

No segundo frasco, 0,75 ml de álcool isopropílico e 0,75 ml de água foram adicionados.

No terceiro frasco, 0,15 ml de álcool isopropílico e 1,35 ml de água foram adicionados.

Todos os três frascos foram agitados em temperatura ambiente durante 24 h.

Cada

- 110 suspensão foi, a seguir, centrifugada separadamente (com filtro) para coletar o Composto 1 Forma A.

Para soluções de metanol/água, cerca de 40 mg do Composto 1 foi adicionado a um frasco. 0,5 ml de metanol e 1ml de água foram adicionados e a suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h.

A suspensão foi centrifugada (com filtro) para coletar o Composto 1, Forma A, Para acetonitrila, cerca de 50 mg do Composto 1 foi adicionado a um (frasco, juntamente com 2,0 ml de acetonitrila.

A suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h e o Composto 1 Forma A foi coletado por centrífuga (com filtro). Para soluções de acetonitrila/água, cerca de 50 mg do Composto 1 foi dissolvido em 2,5 ml de acetonitrila para E fornecer uma solução límpida após ultrassom.

A solução foi filtrada e 1 m) foi retirado para um frasco. 2,29 ml de água foi adicionado para fornecer uma suspensão turva.

A suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h e o Composto 1 Forma À foi coletado por centrífuga (com Tiltro). Método de Evaporação Lenta Cerca de 55 mg do Composto 1 foi dissolvido em 0,5 ml de acetona para fornecer uma solução límpida após

Ê 111 ultrassom. A solução foi filtrada e 0,2 ml foi retirado para um frasco. O frasco foi coberto com parafilme com um furo no mesmo e deixado em repouso. O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração. Método de Evaporação Rápida Para o álcool isopropílico, cerca de 43 mg do Composto 1 foi dissolvido em 2,1 ml de álcool isopropílico para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada em um frasco e foi deixada em repouso descoberta.

O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração.

Para o metanol, cerca de 58 mg do Composto 1 foi dissolvido em 0,5 ml de metanol para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada e 0,2 ml foi retirado para um frasco descoberto e deixado em repouso. O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração.

Para acetonitrila, cerca de 51 mg do Composto 1 foi dissolvido em 2,5 ml de acetonitrila para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada e metade da solução foi retirada para um frasco descoberto e deixada em repouso. O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração. A Figura 7 divulga um padrão XRPD do Composto 1 Forma A preparado por este método.

: 112 Método Anti-nsolvente Para EtOAc/heptano, cerca de 30 mg do Composto 1 foi dissolvido em 1,5 ml de EtOAC para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada e 2,0 ml de heptano foram adicionados à solução filtrada com agitação lenta. A solução foi agitada durante mais 10 minutos e deixada em repouso. O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração. A Figura 8 divulga um padrão XRPD do Composto 1 Forma A preparado por este método.

Para álcool isopropílico/água, cerca de 21 mg do Composto 1 foi dissolvido em 1,0 ml de álcool isopropílico para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada para fornecer 0,8 ml de solução. 1,8 ml de água foram adicionados durante agitação lenta. 0,2 ml de água foram adicionados para fornecer uma suspensão turva. A agitação foi interrompida durante 5 minutos para fornecer uma solução límpida. A solução foi agitada durante mais 2 minutos e deixada em repouso. O Composto 1 Forma A recristalizado foi coletado por filtração.

Para etanol/água, cerca de 40 mg do Composto 1 foi dissolvido em 1,0 ml de etanol para fornecer uma solução límpida após ultrassom. A solução foi filtrada e 1,0 ml de água foi adicionado. A solução foi agitada durante 1 dia em temperatura ambiente. O Composto 1 Forma A recristalizado

. 118 foi coletado por filtração.

Para acetona/água, cerca de 55 mg do Composto 1 foi dissolvido em 0,5 ml de acetona para fornecer uma solução dímpida após ultrassom. A solução foi filtrada e 0,2 ml foram retirados para um frasco. 1,5 ml de água foram adicionados e, a seguir, mais 0,5 ml de água foram adicionados para fornecer uma suspensão turva. A suspensão foi agitada durante 1 dia em temperatura ambiente. O Composto 1 Forma A foi coletado por filtração.

A Tabela 2 abaixo resume as diversas técnicas para formar o Composto 1 Forma A.

Tabela 2. mo eee e Veículo recristalização sólido

. 112 Um padrão de difração de raios-x, calculado a partir de uma estrutura de cristal único do Composto 1 Forma A, é mostrado na Figura 4. A Tabela 3 lista os picos calculados paraa Figura 1. Tabela 3. Classificação do pico

. 115

EE E a a rn a Poa Ed Lo a a Le Um padrão de difração de pó de raios-x real do Composto 1 Forma A é mostrado na Figura 5. A Tabela 4 lista os picos reais para a Figura 5. Tabelad, [Ee rece [ese Ângulo 28 [Graus] Intensidade Relativa [%] do pico

. 116

EL EA

FE EooO E

ELE EE AA

EH O traçado de DSC do Composto 1 Forma A é mostrado na Figura 6. O ponto de fusão para o Composto 1 Forma À ocorre em cerca de 172-178"C.

Ss Dados de cristal único foram obtidos para o Composto 1 Forma A, fornecendo detalhes adicionais sobre a estrutura cristalina, incluindo o tamanho do retículo e empacotamento.

Preparação do Cristal Cristais do Composto 1 Forma A foram obtidos por evaporação lenta de uma solução concentrada de metanol (10 mg/ml). Um cristal incolor do Composto 1 Forma A com

. 4117 dimensões de 0,20 x 0,05 x 0,05 mm foi selecionado, limpo usando óleo mineral, montado em um MicroMount e centralizado em um difratômetro Bruker APEXII.

Três lotes de 40 quadros separados no espaço recíproco foram obtidos para fornecer uma matriz de orientação e parâmerros de célula inicial.

Os parâmetros de célula final foram obtidos e refinados com base no conjunto de dados completo.

Experimental Um conjunto de dados de difração de espaço recíproco foi obtido a uma resolução de 0,83 À usando medidas de 0,5º com 30 s de exposição para cada quadro.

Os dados foram coletados em temperatura ambiente [295(2) K]. A integração das intensidades e o refinamento dos parâmetros da célula foram realizados utilizando o programa APEXII.

A observação do cristal após a coleta de dados não apresentou sinais de decomposição.

Tabela 5. Dados do Cristal para o Composto 1 Forma A

. 118 " E eeçS aee Fgm rare carrear e een Geometria: Todas as esds (exceto a esd no ângulo diédrico entre dois planos l.s.) são estimadas usando a matriz de covariância completa.

As esds da célula são levadas em consideração individualmente na estimativa de esds, em distâncias, ângulos e ângulos de torção; as correlações entre esds nos parâmetros da célula são usadas apenas quando elas são definidas por simetria do cristal.

Um tratamento aproximado (isotrópico) das esds da célula é usado para estimar esds envolvendo os planos 1l.s.

Tabela 6. Parâmetros de coleta de dados para o cristal do Composto 1 Forma A.

Fonte de radiação: tubo selado com foco pesa ET [| Coleta de dados: Apex II; refinamento da célula: Apex II; redução de dados: Apex II; programa(s) usado(s) para

: 119 resolver a estrutura: SHELXS97 (Sheldrick, 1990); programa(s) usado(s) para refinar a estrutura: SHELXL97 (Sheldrick, 1997); gráficos moleculares: Mercury; programa usado para preparar o material para publicação: publCIF.

Tabela 7. Parâmetros de refinamento para o cristal do Composto 1 Forma A.

Refinamento em F' tocal do sitio de hidrogênio: inferido a partir dos sítios vizinhos Matriz de quadrados mínimos: Átomos de H tratados por uma completa mistura de refinamento independente e restrito RIFº > 20 (F)] = 0,043 w = 1/[0º(FÍ) + (0,0821P) + AN o sao 443 parâmetros Correção de extinção: SHELXL, Fc* = KFc[1+0,001 x Fe'h'/ain(26)] =** 1 restrição Coeficiente de extinção: 0,00016 Pg O restrições Estrutura absoluta: Flack H D

FA

: 120 Tocal do sítio do átomo|Parâmetro Flack: 0,00 (18) primário: métodos diretos de invariância de estrutura Local do Sitio do átomo secundário: diferença do mapa de Fourier Refinamento: Refinamento de Fº contra TODAS as reflexões, O fator R WR ponderado e à adequação do ajuste S são baseados em Fº, fatores R convencionais R são baseados em EF, com EF ajustado como zero para Fº negativo. A expressão limiar de Fº > 2 sigma(Fo) é usada somente para calcular os fatores R (gt), etc. e não é relevante para a escolha das reflexões para refinamento. Fatores R baseados em Fº? são estatisticamente cerca de duas vezes tão grandes quanto aqueles baseados em F, e os fatores R baseados em TODOS os dados serão ainda maiores.

As imagens conformacionais do Composto 1 Forma A baseadas em uma análise de raios-X de cristal único são mostradas nas Figuras 9 e 10. Os grupos -OH terminais são ligados por meio de redes de ligação de hidrogênio para formar um agrupamento tetramérico com quatro moléculas adjacentes (Figura 10). O outro grupo hidroxila atua como um doador de ligação de hidrogênio para formar uma ligação de hidrogênio com um grupo carbonila de uma molécula

. 121 adjacente, A estrutura cristalina revela UM denso empacotamento das moléculas. O Composto 1 Forma A é monoclínico, O grupo espacial (O2, com as seguintes dimensões de célula unitária: a = 21,0952(16) À, b = 6,6287(5) À, c=17,7917(15) À, B = 95,867(6)º y= 90º.

Um espectro de RMN *C de estado sólido do Composto 1 Forma A é mostrado na Figura 11. A Tabela 8 fornece os deslocamentos químicos dos picos relevantes. Tabela 8.

Deslocamentos Químicos "C do Composto 1

SEE

EE For

CAE Co EE

, 122 o a o a as Er mene—

NNE Um espectro de RMN **F de estado sólido do Composto 1 Forma A é mostrado na Figura 12. Picos com um asterisco denotam bandas laterais de rotação. A Tabela 9 fornece os deslocamentos químicos dos picos relevantes. Tabela 9, Deslocamentos Químicos **F do Composto 1

FE

: 123 a at aee Síntese do Composto 1 Forma Amorta Método de rotaevaporação O Composto 1 forma amorfa também foi obtido através de rotaevaporação.

O Composto 1 (cerca de 10 g) foi dissolvido em 180 ml de MeOH e foi rotaevaporado em banho de 50ºC até formar uma espuma.

DSC (Figura 14) e XRPD (Figura 13) confirmaram a forma amorfa do Composto 1. A Figura 15 divulga um traçado de TGA do Composto 1 forma amorfa preparado por este método.

Método de Atomização 9,95 q de acetato succinato de hidroxipropil metilcelulose, grau HG (HPMCAS-HG) foram pesadas em um béquer de 500 ml, juntamente com 50 mg de lauril sulfato de sódio (SLS). MeOH (200 ml) foi misturado com O sólido, O material foi deixado sob agitação durante 4 h.

Para garantir a máxima dissolução, após 2 h de agitação a solução foi submetida ao ultrassom durante 5 minutos e, a seguir, ela continuou sendo agitada durante o restante das 2 bh.

Uma suspensão muito fina de HPMCAS permaneceu em solução.

No entanto, a observação visual determinou que nenhuma porção grudenta permaneceu nas paredes do

. 124 recipiente ou grudada no (fundo após inclinação do recipiente.

O Composto 1 Forma A (10 g) foi vertido no béquer de 500 ml e o sistema continuou sob agitação.

A solução foi atomizada usando os seguintes parâmetros: Descrição da Formulação: Composto 1 Forma A/ HPMCAS/SLS (50/49,5/0,5) Mini Atomizador Buchi T de entrada (ponto de ajuste) 145ºC T de saída (início) 750 q de saída (final) 55"C Pressão de nitrogênio 75 psi (517107 Pa) Aspirador 100% Bomba 35% Rotâmetro 40 mm Pressão do Filtro 65 mbar (6500 Pa) Temperatura do Condensador -3ºC Tempo de execução ah Cerca de 16 g do Composto 1 forma amorfa (80% de rendimento) foi recuperado.

O Composto 1 forma amorfa foi confirmado por XRPD (Figura 16) e DSC (Figura 27). Um espectro de RMN “C de estado sólido do Composto 1 Forma amorfa é mostrado na Figura 18. A Tabela 10 fornece os deslocamentos químicos dos picos relevantes.

. 125 Tabela 10.

Deslocamentos Químicos ““C do Composto 1 do Co —— o a A oa ço

REA DA Um espectro de RMN **F de estado sólido do Composto 1 forma amorfa é mostrado na Figura 19. Picos com um asterisco denotam bandas laterais de rotação. A Tabela 11

: 126 fornece os deslocamentos químicos dos picos relevantes. Tabela 11.

Deslocamentos Químicos **F do Composto 1

EE EA a r—— A Tabela 12 abaixo exibe dados analíticos adicionais parao Composto 1. Tabela 12. No. | LC/MS] LC/RT Compos| M+1 min to RMN 'H (400,0 MHz, CD;CN) d 7,69 (d, J =7,7 Hz, 1H), 7,44 (dy, J= 1,6 Hz, 1H), 7,39 (dd, J=1,7, 8,3 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,27 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,20 (dd, 9 = 12,0 Ho, 1H), 6,34 (5, 1H), 4,32 (dy, J = 6,8 Hz, 2H), 4,15-4,09 (m, 1H), 3,89 2 521,5 | 1,69 dd, J = 6,0, 11,5 Hz, 14), 3,63-3,52 (1, SH), 3,42 (dy, J = 4,6 Hz, 1H), 3,21 (dd, J = 6,2, 7,2 Hz, 1H), 3,04 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 1,59 (dd, JD = 3,8, 6,8 Hz, 2H), 1,44 (s, 3H), 1,33 (s, 3H) e 1,18 (dd, J = 3,7, 6,8 Hz, 2H) pom.

ENSAIOS

.: 127 Ensaios para Detecção e Medição das Propriedades de Correção de AF5SO8-CFTR dos Compostos Métodos óticos de potencial de membrana para análise das propriedades de modulação de AFSOS8-CFTR dos compostos O ensaio ótico de potencial de membrana utilizou sensores FRET sensíveis à voltagem descritos por Gonzalez e Tsien (ver Gonzalez, J.

E. e R.

Y.

Tsien (1995) “Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells” Biophys J 69(4): 1272-80, e Gonzalez, J.

E. e R.

Y.

Tsien (1997) “Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer" Chem Biol 4(4): 269-77) juntamente com instrumentos para medir as alterações de fluorescência, como o Leitor de Voltagem/Sonda ITônica (VIPR)] (ver Conzalez, J.

E., K.

Oades, e col. (1999) "Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets" Drug Discov Today 4(9): 4431-439). Esses ensaios sensíveis à voltagem têm como base a alteração na transferência de energia resssonante de fluorescência (FRET) entre o corante solúvel na membrana, sensível à voltagen DiSBACI(IS) e um fosfolipídeo fluorescente, CC2-DMPE, que é anexado ao lado externo da membrana plasmática e atua como um doador de FRET.

Alterações no potencial da membrana (Vn) fazem com que

. 128 DiSBAC>2(3) carregado negativamente seja redistribuído através da membrana plasmática e a quantidade de transferência de energia de CC2-DMPE se altere consequentemente. As alterações na emissão de fluorescência foram monitoradas empregando VIPR" II, aque é um manipulador de líquido e detector de fluorescente projetado para conduzir as varreduras com base em célula em placas de microtitulação de 96 ou 384 poços,

1. Identificação dos Compostos de Correção Para identificar moléculas pequenas que corrigem o defeito de tráfego associado com AF508-CFTR, um formato de ensaio de HTS de adição única foi desenvolvido. As células foram incubadas em meio isento de soro por 16 horas a 37ºC na presença ou ausência (controle negativo) do composto de teste. Como um controle positivo, células colocadas em placas de 384 poços foram incubadas por 16 horas a 27ºC para “correta temperatura” de AF508-CFTR. As células foram subsequentemente rinsadas 3 vezes com solução de Krebs Ringers e carregadas com os corantes sensíveis à voltagem.

Para ativar AF508-CFIR, 10 pnM de forscolina e o potencializador de CFTR, genisteína (20 uM), foram adicionados juntamente com meio isento de Cl” a cada poço. A adição de meio isento de Cl” promoveu efluxo de Cl” em resposta à ativação de AF5SO8-CFIR e a despolarização

. 129 resultante da membrana foi oticamente monitorada empregando os corantes sensores de voltagem com base em FRET.

2. Identificação dos Compostos Potencializadores Para identificar os potencializadores de AF5O8-CFTR, um formato de ensaio de HS de adição dupla foi desenvolvido. Durante a primeira adição, um meio isento de Cl” com ou sem composto de teste foi adicionado a cada poço. Após 22 segundos, uma segunda adição de meio isento de Cl” contendo 2 - 10 pM de forscolina foi realizada para ativar AFSO8-CFTR. A concentração extracelular de Cl” após ambas as adições foi de 28 mM, o que promoveu efluxo de Cl” em resposta à ativação de AF5O8-CFTR e a despolarização resultante de membrana foi oticamente monitorada empregando os corantes sensores de voltagem com base em FRET.

3. Soluções Solução de banho f$1: (em mM) NaCl 160, KCl 4,5, CaClz 2, MgCl2 1, HEPES 10, pH 7,4 com NaOH. Solução de banho isenta de cloreto: Sais de cloreto na Solução de banho *1 são substituídos com sais de gluconato. CC2-DMPE: Preparado como uma solução estoque de 10 mM em DMSO e armazenado em -20ºC. DiSBAC2(3): Preparado como uma solução estoque de 10 mM em DMSO e armazenado a -20ºC.

4. Cultura de Célula

: 130 Fibroblastos de camundongo NIH3T3 expressando AF508- CFTR estavelmente são empregados para medições óticas do potencial de membrana. As células são mantidas a 37ºC em CO, a 5% e umidade a 90% em meio Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 2 mM de glutamina, soro fetal bovino a 10%, 1 X NEAA, B-ME, 1 X pen/strep e 25 mM de HEPES em frascos de cultura de 175 cm. Para todos os ensaios óticos, as células foram semeadas em 30.000/poço em placas revestidas com matrigel de 384 poços e cultivadas por 2 horas a 37'C antes do cultivo à 27 C por 24 horas para o ensaio de potencializador. Para os ensaios de correção, as células foram cultivadas a 27ºC ou 37ºC com e sem compostos por 16 - 24 horas. Ensaios Eletrofisiológicos para Análise das Propriedades de Modulação de AF508-CFTR dos Compostos

1. Ensaio com Câmara de Ussing Experimentos — empregando câmara de Ussing foram realizados nas células epiteliais polarizadas expressando AF5O8-CFTR para caracterizar adicionalmente os moduladores AF5O8-CFTR identificados nos ensaios óticos. Células epiteliais FRTPS0-CTR crescidas nas inserções de cultura de célula Costar Snapwell foram montadas em uma câmara de Ussing (Physiologic Instruments, Inc., San Diego, CA) é às monocamadas foram continuamente colocadas em curto-circuito

. 131 contínuo empregando um sistema de "engate de voltagem" (Department of Bioengineering, University of Iowa, IA, e | Physiologic Instruments, InC., San Diego, CA). A resistência transepitelial foi medida por aplicação de um pulso de 2 mV. Sob estas condições, os epitélios FRT demonstraram resistências de 4 KQ/cm?º ou mais. As soluções foram mantidas a 27ºC e borbulhadas com ar. O potencial de ) ajuste do eletrodo e a resistência de fluido foram corrigidos empregando uma inserção isenta de célula. Sob estas condições, a corrente reflete o fluxo de Cl” através de AF5O8-CFITR expressa na membrana apical. O TIsc foi adquirido digitalmente empregando uma interface MP100A-CE e o programa AcqgKnowledge (v3,2,6; BIOPAC Systems, Santa Barbara, CA).

2. Identificação dos Compostos de Corrreção O protocolo típico empregou um gradiente de concentração de Cl” da membrana basolateral para a apical. De modo a ajustar essa gradiente, ringer normal foi empregado na membrana basolateral, considerando-se que NaCl apical foi substituído por gluconato de sódio equimolar (titulado para pH 7,4 com NaOH) para fornecer um grande gradiente de concentração de Cl” através do epitélio. Todos os experimentos foram realizados com monocamadas intactas. De modo a ativar completamente AF50O8-CFTR, forscolina (10

. 132 pM) e o inibidor de PDE, IBMX (100 pM) foram aplicados, seguido por adição do potencializador de CFTR, genisteína (50 pM). Conforme observado em outros tipos de células, a incubação em baixas temperaturas das células FRT expressando AF5O8-CFTR estavelmente aumenta a densidade funcional de CFTR na membrana plasmática. Para determinar a atividade dos compostos de correção, as células foram incubadas com 10 uM do composto de teste por 24 horas a 37'Ce foram subseauentemente lavadas 3x antes do registro. Ts: mediado por cAMP e genisteina nas células tratadas com composto foi normalizado para controles de 27º e 37ºC e expresso como atividade percentual. A pré-incubação das células com o composto de correção aumentou significativamente o Isc mediado por CAMP e genisteína em comparação com os controles a 37ºC.

3. Identificação dos Compostos Potencializadores O protocolo típico utilizou um gradiente de concentração de Cl” da membrana basolateral para apical. Para ajustar esse gradiente, ringer normal foi empregado na membrana basolateral e foi permeabilizado com nistatina (360 — no/mt), considerando-se que NaCl apical foi substituído por gluconato de sódio equimolar (titulado para pH 7,4 com NaOH) de modo a fornecer um grande gradiente de

. 133 concentração de Cl” através do epitélio. Todos os experimentos foram realizados 30 minutos após permeabilização com nistatina. Forscolina (10 pM) e todos os compostos de teste foram adicionados a ambos os lados das inserções de cultura de célula. A eficácia dos potencializadores de AFSOG-CEIR putativos foi comparada ao potencializador conhecido, genisteína.

4. Soluções Solução basolateral (em mM): NaCl (135), CaCl; (1,2), MgCl, (1,2), KHPO: (2,4), KHPO, (0,6), ácido N-2- hidroxietilpiperazino-N' -2-etanossulfônico (HEPES) (10) e dextrose (10). A solução foi títulada a pH 7,4 com NaOH. Solução apical (em mM): À mesma que à soOoluÇÃãO basolateral com NaCl substituído com Gluconato de Na (135).

5. Cultura da Célula Células epiteliais de rato Fisher (FRT) expressando AF5OB8-CFTR (FRTºFS98-CMTR) foram empregadas para experimentos com câmera de Ussing para Os moduladores de AF5SOS-CETR putativos identificados a partir de nossos ensaios óticos. As células foram cultivadas nas inserções de cultura de célula Costar Snapwell e cultivadas por cinco dias a 37ºC e CO; a 5% em meio F-12 de Ham modificado por Coon suplementado com soro fetal de bezerro a 5%, penicilina 100 U/ml e estreptomicina 100 pg/ml. Antes do uso para

MN : 134 caracterização da atividade potencializadora dos compostos, as células foram incubadas a 27ºC por 16-48 horas para | corrigir a AF5OS8-CFTR. Para determinar a atividade dos compostos de correção, as células foram incubadas a 27ºC ou 37ºC come sem os compostos por 24 horas.

6. Registros de Células Inteiras A corrente macroscópica de AF5SO8-CFTR (Tarsos) nas células NIHITIS corrigidas por composto de teste e temperatura expressando estavelmente AFSOB-CFTR foi monitorada empregando o registro de célula inteira com trecho perfurado. Em resumo, os registros de "engate de voltagem" de Isrsos foram realizados à temperatura ambiente empregando um amplificador tipo "patch-clamp" Axopatch 200B (Axon Instruments Inc., Foster City, CA). Todos os registros foram adquiridos em uma frequência de amostragem de 10 KHz e filtrados em baixa passagem a 1 kHz. As pipetas tinham uma resistência de 5 a 6 MO quando preenchidas com à solução intracelular. Sob estas condições de registro, O potencial reverso calculado para Cl” (Em) em temperatura ambiente foi -26 WMV. Todos Os registros tinham uma resistência de selagem > 20 GQ e uma resistência em série < 15 MO. A geração de pulso, aquisição de dados e análise foram realizados empregando um PC equipado com uma interface Digidata 1320 A/D em conjunto com Clampex 8 (Axon

Instruments Inc.). O banho continha < 250 pl de salina e foi continuamente perfundido a uma taxa de 2 ml/min empregando um sistema de perfusão acionado por gravidade.

7. Identificação dos Compostos de Correção Ss Para determinar a atividade dos compostos de correção de modo a aumentar a densidade de AF50O8-CFTR funcional na membrana plasmática, nós empregamos as técnicas de registro de trecho perfurado descritas acima para medir a densidade da corrente após tratamento de 24 horas com os compostos de correção. Para ativar plenamente AF5O8-CFTR, 10 4uM de forscolina e 20 pM de genisteína foram adicionados às células. De acordo com nossas condições de registro, a densidade da corrente após incubação por 24 horas a 27ºC foi maior que aquela observada após 24 horas de incubação a 37ºC. Esses resultados são consistentes com os efeitos conhecidos de incubação em temperatura baixa na densidade de AF508-CFTR na membrana plasmática. Para determinar os efeitos dos compostos de correção na densidade de corrente de CFTR, as células foram incubadas com 10 puM do composto de teste por 24 horas a 37ºC e a densidade de corrente foi comparada aos controles de 27ºC e de 37ºC (% de atividade). Antes do registro, as células foram lavadas três vezes com meio de registro extracelular para remover qualquer composto de teste remanescente. A pré-incubação com 10 pm dos compostos de correção aumentou significativamente a corrente dependente de cAMP e genisteína em comparação aos controles a 3S7º'C.

8. Identificação dos Compostos Potencializadores > A capacidade dos potencializadores de AFSO8-CFTR em aumentarem a corrente macroscópica de Cl” em AF5SO8-CFTR (Tarsos) em células NIHSTS expressando AFSO8-CFTR estavelmente também foi investigada empregando técnicas de registro de trecho perfurado. os potencializadores identificados nos ensaios óticos incitaram um aumento dependente de dose na Tarsee com potência e eficácia semelhantes observadas nos ensaios óticos. Em todas as células examinadas, o potencial reverso antes e durante a aplicação do potencializador estava em torno de -30 mV, que é o Em calculado (-28 mV).

9.. Soluções Solução intracelular (em mM): Cs-aspartato (90), CsCl (50), MgCl> (1), HEPES (10) e 240 pg/ml de anfotericina-B (pH ajustado a 7,35 com CsOH).

Solução extracelular (em mM): N-metil-D-glucamina (NMDG)-=C1 (150), MgCl; (2), CaClo (2), HEBES (10) (pl ajustado a 7,35 com HCl).

10. Cultura de células Fibroblastos de camundongo NIRSTS expressando estavelmente AF5O08-CFTR são empregados para registros de célula integral. As células são mantidas a 37ºC em CO; a 5% e 90t da umidade em meio Eagle modificado por Dulbecco Suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro fetal bovino, 1X NEAA, B-ME, 1 X pen/strep e 25 mM de HEPES em frascos de cultura de 175 cm?. Para registros de célula integral, 2.500 - 5.000 células foram semeadas nas lâminas de vidro revestidas com poli-L-lisina e cultivadas por 24- 48 horas a 27'C antes do uso para testar a atividade dos potencializadores; e incubadas com ou sem o composto de correção a 37ºC para medir a atividade dos corretores.

11. Registros de Canal único As atividades de canal único de AF5SO8-CFTR corrigida em temperatura estavelmente expresssa em células NIH3T3 e as atividades dos compostos — potencializadores foram observadas empregando a passagem de membrana cortada de dentro para fora. Em resumo, os registros de "engate de voltagem" da atividade de canal único foram realizados em temperatura ambiente com um amplificador de "patch-clamp" Axopatch 200B (Axon Instruments Inc.). Todos os registros foram adquiridos em uma frequência de amostragem de 10 kHz e filtrados em baixa pasagem a 400 Hz. As pipetas de passagem foram fabricadas com vidro Corning Kovar Sealing 47052 (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL) e tinham uma resistência de 5-8 MO quando preenchidas com solução extracelular.

A AFSOS-CPIR foi ativada após excisão, por adição de 1 mM de Mg-ATP 2 75 nM de proteina cinase dependente de cAMP, subunidade catalítica (PKA; Promega Corp.

Madison, WI). Após estabilização da atividade do canal, a passagem foi perfundida empregando sistema de microperfusão acionado por gravidade.

O fluxo de entrada foi colocado adjacente à passagem, resultando na troca completa da solução dentro de 1-2 segundos.

De modo a manter a atividade de AF5O08-CFTR durante a perfusão rápida, o inibidor de fosfatase não específico F (10 MM NaF) foi adicionado à solução de banho.

Sob estas condições de registro, a atividade do canal permaneceu constante através de toda duração do registro de passagem (até 60 minutos). As correntes produzidas por movimento de carga positiva das soluções intra para extracelular (ânions movendo-se na direção oposta) são mostradas como correntes positivas.

O potencial de pipeta (V,) foi mantido em 80 mv.

A atividade do canal foi analisada a partir das passagens da membrana contendo É 2 canais ativos.

O número máximo de aberturas simultâneas determinou o número de canais ativos durante o curso de um experimento.

Para determinar a amplitude de corrente do canal único, os dados registrados de 120 segundos da atividade de AFOB8-CFTR foram filtrados "off-line" a 100 Hz e então empregados para construir os histogramas de amplitude de todos os pontos que foram ajustados com funções multigaussianas, empregando o programa Bio-Patch Analysis (Bio-Logic Comp. França). A corrente microscópica total e probabilidade aberta (P.) foram determinadas a partir de 120 segundos da atividade de canal. A P, foi determinada empregando o programa Bio-Patch ou à partir da relação P, = 1/1(N), onde 1 = corrente média, i = amplitude de corrente de canal único e N = número de canais ativos em passagem.

12. Soluções Solução extracelular (em mM): NMDG (150), ácido aspártico (150), CaCl, (5), MgCl, (2) e HEPES (10) (pH ajustado a 7,395 com base Tris).

Solução intracelular (em mM): NMDG-Cl (150), MgCl> (2), EGTA (5), TES (10) e base Tris (14) (pH ajustado a 7,395 com HCl).

13. Cultura de Célula Fibroblastos de camundongo NIH3T3 expressando estavelmente AF508-CFTR são empregados para registros "patch-clamp" de membrana cortada. As células são mantidas a 37ºC em CO, a 5% e 90% de umidade em meio Eagle modificado por Dulbecco suplementado com 2 mM de glutamina, 10% de soro fetal bovino, 1 X NEAA, B-ME, 1 X pen/strep e

25 mM de HEPES em frascos de oultura de 175 cm. Para registros de canal único, 2.500 - 5.000 células foram semeadas em lâminas de vidro revestidas com poli-L-lisina e cultivadas por 24-48 horas a 27ºC antes do uso.

Empregando os procedimentos descritos acima, a atividade, isto é, ECSOs, do Composto 1 foi medida e é mostrada na Tabela 13.

Tabela 13.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. (R)-1- (2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(1- (2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2- il) -1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida como Forma cristalina A caracterizada pelo fato de compreender: um ou mais picos em 19,3 a 19,7 graus, 21,5 a 21,9 graus e 16,9 a 17,3 graus em uma difração em pó de raios-X obtida utilizando radiação alfa de Cu-K.

2. Forma A, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de compreender um ou mais picos em cerca de 19,5, 21,7 e 17,1 graus.

3. Forma A, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de compreender adicionalmente um pico em 20,2 a 20,6 graus.

4, Forma A, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de compreender adicionalmente um ou mais de: um pico em cerca de 20,4 graus; um pico em 18,6 a 19,0 graus; um pico em cerca de 18,8 graus; um pico em 24,5 a 24,9 graus; um pico em cerca de 24,7 graus; um pico em 9,8 a 10,2 graus; um pico em cerca de 10,0 graus;

um pico em 4,8 a 5,2 graus; um pico em cerca de 5,0 graus; um pico em 24,0 a 24,4 graus; um pico em cerca de 24,2 graus; um pico em 18,3 a 18,7 graus; ou um pico em cerca de 18,5 graus.

5. Forma cristalina de (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropano carboxamida designada como Forma A caracterizada pelo fato de possuir um sistema cristalino monoclínico, um grupo espaçador C2 e as seguintes dimensões de célula unitária: a = 21,0952(16) À b = 6,6287(5) À c =17,7917(15) À a = 90º B = 95,867(6)* 7=90º.

6. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender a Forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de compreender ainda um agente terapêutico adicional, em que o agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

8. Processo de preparação da Forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 caracterizado pelo fato de compreender suspender (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida em um solvente durante um período de tempo eficaz; em que: o solvente é acetato de etila, diclorometano, MTBE, acetato de isopropila, água/etanol, água/acetonitrila, água/metanol ou água/álcool isopropílico; e o período de tempo eficaz é de 24 horas a 2 semanas.

9. Processo de preparação da Forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 caracterizado pelo fato de compreender dissolver (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida em um solvente e evaporar o solvente, em que o solvente é acetona, acetonitrila, metanol ou álcool isopropílico.

10. Processo de preparação da Forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 caracterizado pelo fato de compreender dissolver (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida em um primeiro solvente e adicionar um segundo solvente no qual (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1- hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida não é solúvel, em que: o primeiro solvente é acetato de etila, etanol, álcool isopropílico ou acetona; o segundo solvente é heptano ou água; e em que: a adição do segundo solvente é feita durante agitação da solução do primeiro solvente e (R)-1-(2,2-diflúorbenzo [d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida.

11. Sólido substancialmente amorfo de (R)-1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida caracterizado pelo fato de que compreende menos do que cerca de 5% de (R)-1-(2,2- diflúorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1l)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-

6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida cristalina.

12. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d][1,3]dioxol-5- il) -N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2- metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa como definida na reivindicação 11 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

13. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de compreender ainda um agente terapêutico adicional, em que o agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

14. Processo de preparação de (R) -1- (2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida amorfa como definida na reivindicação 11 caracterizado pelo fato de que compreende dissolver (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(1- (2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2- il) -1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida em um solvente adequado e remover o solvente por rotaevaporação, em que Oo solvente é metanol.

15. Dispersão sólida caracterizada pelo fato de compreender a (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d][1,3]dioxol-5-il)- N- (1- (2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2- metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa como definida na reivindicação 11 e um polímero; em que: o polímero é hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) ou acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS), e em que o polímero está presente em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso, de 30% em peso a 60% em peso, ou em cerca de 49,5% em peso.

16. Dispersão sólida, de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que (R)-1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida está presente em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso, ou de 30% em peso a 60% em peso ou de cerca de 50% em peso.

17. Dispersão sólida, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 ou 16, caracterizada pelo fato de compreender ainda um tensoativo, em que o tensoativo é lauril sulfato de sódio, que está presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 5% em peso ou de cerca de 0,5%

em peso.

18. Dispersão sólida, de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que o polímero é acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS) na quantidade de 49,5% em peso, o tensoativo é lauril sulfato de sódio na quantidade de 0,5% em peso e a (R)-1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-yl)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida está presente na quantidade de 50% em peso.

19. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender a dispersão sólida como definida em qualquer uma das reivindicações 15 a 18 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

20. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de compreender ainda um agente terapêutico adicional, em que o agente terapêutico adicional é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador de CFTR ou um agente nutricional.

21. Processo de preparação de (R)-1-(2,2-difluorbenzo [d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-l1H-indol-5-1il)

ciclopropanocarboxamida amorfa caracterizado pelo fato de que compreende secar por atomização (R) -1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida.

22. Processo, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que compreende combinar (R)-1l- (2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3- diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)- 1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida e um solvente adequado e, a seguir, secar a mistura por atomização para obter (R) -1- (2,2-difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N-(1- (2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2- metilpropan-2- il) -1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa, em que o solvente é um álcool, tal como metanol.

23. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 e 22, caracterizado pelo fato de que compreende: a) formar uma mistura compreendendo (R)-1-(2,2- difluorbenzo[d] [1,3]dioxol-5-1il)-N-(1-(2,3-diidroxipropil)- 6-flúor-2- (1-hidróxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-1il) ciclopropanocarboxamida, um polímero e um solvente; e b) secar a mistura por atomização para formar uma dispersão sólida, em que:

o polímero é acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS), que está presente em uma quantidade de 10% em peso a 80% em peso da dispersão sólida ou em uma quantidade de cerca de 49,5% em peso da dispersão sólida; e o solvente é metanol.

24. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 a 23, caracterizado pelo fato de que a mistura compreende ainda um tensoativo, tal como lauril sulfato de sódio (SLS), que está presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 5% em peso da dispersão sólida ou está em uma quantidade de cerca de 0,5% em peso da dispersão sólida.

25. Processo, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que o polímero é o acetato succinato de hidroxipropilmetilcelulose (HPMCAS) na quantidade de cerca de 49,5% em peso da dispersão sólida, o solvente é metanol e a mistura compreende ainda lauril sulfato de sódio em uma quantidade de cerca de 0,5% em peso da dispersão sólida.

26. Uso da forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença mediada por CFTR em um indivíduo, em que a doença é selecionada de fibrose cística, asma, DPOC induzida por exposição à fumaça, bronquite crônica, rinossinusite, constipação, pancreatite, insuficiência pancreática, infertilidade masculina causada por ausência bilateral congênita de vasos deferentes (CBAVD), doença pulmonar branda, pancreatite idiopática, aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA), doença hepática, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de coagulação- fibrinólise, deficiência de proteína (CC, angioedema hereditário tipo 1, deficiências de processamento de lipídios , hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, doença de célula I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo de Laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo 1, hipertireoidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurogênica, DI nefrogênica, doença de Charcot-Marie-Tooth, doença de Perlizaeus- Merzbacher, doenças neurodegenerativas, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, alguns distúrbios neurológicos de poliglutamina,

Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentatorubro palidolusiana, distrofia miotônica, encefalopatias espongiformes, doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido ao defeito de processamento de proteína príon), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco, doença de Sjogren, osteoporose, osteopenia, síndrome de Gorham, canalopatias de cloreto, miotonia congênita (formas de Thomson e Becker), síndrome de Bartter tipo III, doença de Dent, hipereclepsia, epilepsia, hiperecplexia, doença de armazenamento lisossomal, síndrome de Angelman, Discinesia Ciliar Primária (PCD), distúrbios hereditários da estrutura e/ou função dos cílios, PCD com situs inversus (também conhecida como síndrome de Kartagener), PCD sem situs inversus ou aplasia ciliar.

27. Uso, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a doença mediada por CFTR é selecionada de fibrose cística, DPOC, osteoporose ou enfisema.

28. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 ou 27, caracterizado pelo fato de que o indivíduo possui receptor transmembrana da fibrose cística (CFTR) com uma mutação AF508, ou uma mutação R117H, ou uma mutação G551D.

29. Uso da (R)-1-(2,2-difluorbenzo[d][1,3]dioxol-5- il) -N-(1-(2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2- metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa como definida na reivindicação 11 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença mediada por CFTR em um indivíduo, em que a doença é selecionada de fibrose cística, asma, DPOC induzida por exposição à fumaça, bronquite crônica, rinossinusite, constipação, pancreatite, insuficiência pancreática, infertilidade masculina causada por ausência bilateral congênita de vasos deferentes (CBAVD), doença pulmonar branda, pancreatite idiopática, aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA), doença hepática, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de coagulação-fibrinólise, deficiência de proteína C, angioedema hereditário tipo 1, deficiências de processamento de lipídios , hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, doença de célula I/pseudo-Hurler, mucopolissacaridoses, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo de Laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo 1, hipertireoidismo congênito, osteogênese imperfeita,

hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurogênica, DI nefrogênica, doença de Charcot-Marie-Tooth, doença de Perlizaeus- Merzbacher, doenças neurodegenerativas, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, alguns distúrbios neurológicos de poliglutamina, Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentatorubro palidolusiana, distrofia miotônica, encefalopatias espongiformes, doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido ao defeito de processamento de proteína príon), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco, doença de Sjogren, osteoporose, osteopenia, síndrome de Gorham, canalopatias de cloreto, miotonia congênita (formas de Thomson e Becker), síndrome de Bartter tipo III, doença de Dent, hipereclepsia, epilepsia, hiperecplexia, doença de armazenamento lisossomal, síndrome de Angelman, Discinesia Ciliar Primária (PCD), distúrbios hereditários da estrutura e/ou função dos cílios, PCD com situs inversus (também conhecida como síndrome de Kartagener), PCD sem situs inversus ou aplasia ciliar.

30. Uso, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que a doença mediada por CFTR é selecionada de fibrose cística, DPOC, osteoporose ou enfisema.

31. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 ou 30, caracterizado pelo fato de que o indivíduo possui receptor transmembrana da fibrose cística (CFTR) com uma mutação AF508, ou uma mutação R117H, ou uma mutação G551D.

32. Uso da dispersão sólida como definida na reivindicação 15 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença mediada por CFTR em um indivíduo, em que a doença é selecionada de fibrose cística, asma, DPOC induzida por exposição à fumaça, bronquite crônica, rinossinusite, constipação, pancreatite, insuficiência pancreática, infertilidade masculina causada por ausência bilateral congênita de vasos deferentes (CBAVD), doença pulmonar branda, pancreatite idiopática, aspergilose broncopulmonar alérgica (ABPA), doença hepática, enfisema hereditário, hemocromatose hereditária, deficiências de coagulação- fibrinólise, deficiência de proteína (CC, angioedema hereditário tipo 1, deficiências de processamento de lipídios , hipercolesterolemia familiar, quilomicronemia tipo 1, abetalipoproteinemia, doenças de armazenamento lisossomal, doença de célula I/pseudo-Hurler,

mucopolissacaridoses, Sandhof/Tay-Sachs, Crigler-Najjar tipo II, poliendocrinopatia/hiperinsulinemia, diabetes mellitus, nanismo de Laron, deficiência de mieloperoxidase, hipoparatireoidismo primário, melanoma, glicanose CDG tipo 1, hipertireoidismo congênito, osteogênese imperfeita, hipofibrinogenemia hereditária, deficiência de ACT, diabetes insipidus (DI), DI neurogênica, DI nefrogênica, doença de Charcot-Marie-Tooth, doença de Perlizaeus- Merzbacher, doenças neurodegenerativas, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, paralisia supranuclear progressiva, doença de Pick, alguns distúrbios neurológicos de poliglutamina, Huntington, ataxia espinocerebelar tipo I, atrofia muscular espinal e bulbar, dentatorubro palidolusiana, distrofia miotônica, encefalopatias espongiformes, doença de Creutzfeldt-Jakob hereditária (devido ao defeito de processamento de proteína príon), doença de Fabry, síndrome de Straussler-Scheinker, DPOC, doença do olho seco, doença de Sjogren, osteoporose, osteopenia, síndrome de Gorham, canalopatias de cloreto, miotonia congênita (formas de Thomson e Becker), síndrome de Bartter tipo III, doença de Dent, hipereclepsia, epilepsia, hiperecplexia, doença de armazenamento lisossomal, síndrome de Angelman, Discinesia Ciliar Primária (PCD), distúrbios hereditários da estrutura e/ou função dos cílios, PCD com situs inversus (também conhecida como síndrome de Kartagener), PCD sem situs inversus ou aplasia ciliar.

33. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a doença mediada por CFTR é selecionada de fibrose cística, DPOC, osteoporose ou enfisema.

34. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que o indivíduo possui receptor transmembrana da fibrose cística (CFTR) com uma mutação AF508, ou uma mutação R117H, ou uma mutação G551D.

35. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 34, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de um agente terapêutico adicional, em que o agente terapêutico é selecionado de um agente mucolítico, broncodilatador, um antibiótico, um agente anti-infeccioso, um agente anti-inflamatório, um potencializador do CFTR ou um agente nutricional.

36. Kit caracterizado pelo fato de que compreende a Forma A como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, a (R)-1-(2,2-diflúorbenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1- (2,3-diidroxipropil)-6-flúor-2-(1-hidróxi-2-metilpropan-2- il) -1H-indol-5-il)ciclopropanocarboxamida amorfa como definida na reivindicação 11, ou a dispersão sólida como definida na reivindicação 15, e instruções para uso do mesmo.