BG64676B1 - МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА HMG-CoA РЕДУКТАЗНИ ИНХИБИТОРИ С ВИСОКА ЧИСТОТА - Google Patents
МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА HMG-CoA РЕДУКТАЗНИ ИНХИБИТОРИ С ВИСОКА ЧИСТОТА Download PDFInfo
- Publication number
- BG64676B1 BG64676B1 BG105348A BG10534801A BG64676B1 BG 64676 B1 BG64676 B1 BG 64676B1 BG 105348 A BG105348 A BG 105348A BG 10534801 A BG10534801 A BG 10534801A BG 64676 B1 BG64676 B1 BG 64676B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- mobile phase
- hmg
- column
- coa reductase
- fractions
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/351—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom not condensed with another ring
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
- B01D15/422—Displacement mode
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
- C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C67/52—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до нов промишлен метод за изолирането на HMG-СоА редуктазни инхибитори, като се използва изместваща хроматография. По него се получават HMG-СоА редуктазни инхибитори с повишени чистота и добиви, с понижени производствени цени и с подобрен екологичен баланс.
Description
(54) МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА HMGСоА РЕДУКТАЗНИ ИНХИБИТОРИ С ВИСОКА ЧИСТОТА
Област на техниката
Ловастатин, правастатин, симвастатин, мевастатин, аторвастатин и техни производни и аналози са известни като HMG-CoA редуктазни инхибитори и се използват като противохиперхолестеролемични вещества. Повечето от тях се получават чрез ферментация, като се използват микроорганизми от различни видове, идентифицирани като видове, принадлежащи към родовете Aspergillus, Monascus, Nocardia, Amycolatopsis, Mucor или Penicillium, някои се получават чрез обработване на ферментационните продукти, като се използва методът на химическия синтез или те са продукти от общ химически синтез.
Чистотата на активния компонент е важен фактор за производството на невредим и ефективен фармацевтичен препарат, по-специално ако фармацевтичният продукт трябва да бъде вземан за по-дълъг срок, основаващ се на лечението или предотвратяването на високо плазмен холестерол. Акумулирането на примесите от фармацевтичните препарати с по-ниска чистота може да причини странични ефекти по време на медикаментозното лечение.
Изобретението се отнася до нов промишлен метод за изолирането на HMG-CoA редуктазни инхибитори, Като се използва т. нар. изместваща хроматография. Използване на изобретението дава възможност да се получат HMG-CoA редуктазни инхибитори с висока чистота, с високи добиви, по-ниски производствени цени и подходящ екологичен баланс.
Предшестващо състояние на техниката
Методите за изолирането и пречистването на противохиперхолестеролемични вещества са описани в по-ранни патенти, които включват различни комбинации от екстракционни, хроматографски, лактонизационни и кристализационни методи. Чистотата на получения краен продукт чрез тези процедури е съобразена с USP стандарти, но добивите на желания продукт са относително ниски. В допълнение, те изискват както големи количества органични разтворители, така и голямо оборуд ване, подходящо за тези количества.
Методът за изолиране, описан във WO1992/016276, осигурява разтвора за получаване на HMG-CoA редуктазни инхибитори с чистота по-голяма от 99.5 % при използването на промишлено HPLC (високо ефективна течна хроматография) оборудване. Съгласно WO 1992/016276 суровият HMG-CoA редуктазен инхибитор с чистота > 85% се разтваря в органичен разтворител или в разтвор на органичен разтворител и вода. След това сместа се буферира до pH между 2 и 9 и се поставя в HPLC колоната. След като се събере максимумът от интересуващия ни редуктазен инхибитор, част от разтворителя се отделя и се добавя вода или алтернативно се отделят две трети от разтворителната смес и HMG-CoA редуктазен инхибитор кристализира. Накрая чистотата на получения продукт по този метод е наймалко 99.5% с добив около 90%.
Методът, описан във WO1992/016276, дава възможност да се получат HMG-CoA редуктазни инхибитори с висока чистота, с относително високи добиви. Недостатъкът на този метод с конвенционалните хроматографски колони е относително малките количества от веществото, подавано през HPLC колоната. Малките проби за захранване на колоната са свързани с повторения на операциите за изолиране по такъв начин, че да се получат достатъчни количества от желаното вещество, и следователно се използва голямо количество от разтворители, което води до по-високи производствени цени.
Методът на изместващата хроматография, основата на настоящото изобретение, не се различава съществено от по-рано използваните хроматографски методи.
Изместващата хроматография се основава на съревнованието на компонентите от пробата, захранваща колоната за активните места на неподвижната фаза. Индивидуалните компоненти от пробата се изместват един друг, подобно на влак, избутвач (средство за избутване), който има много голям афинитет към неподвижната фаза и се движи зад захранващата проба на самата колона, като откарва компонентите от разделянето на пробата в отделни зони, които се движат със същата скорост както избутвана. Концентрирането на индивидуалните компоненти се осъществява едновременно с пречистването.
Принципът на изместващата хроматография е относително стар и е добре известен от 1943 г., но е въведен в практиката по-късно през 1981 г. поради липсата на ефективни колони (Cs. Horvat et al., J. Cromatogr., 215 (1981) 295; J. Cromatogr., 330 (1985) 1; J. Cromatogr., 440 (1988) 157). Тези доклади, цитирани тук, описват аналитично и препаративно разделяне и пречистване на биологично активни пептиди и полимиксинови антибиотици (полипептиди), като се използва реверсирана фаза при колоните с високо ефективна течна хроматография за начина на изместване. За полимиксинови октадецил силикагелови колони 250 х 4.6 mm, размер на частицата 5 цт, се използват 10 % ацетонитрил във вода като подвижна фаза и различни тетраалкиламониеви халогениди като избутващо средство.
Неотдавнашни изследвания в областта на изместващата хроматография (S. М. Cramer et al., Enzym Microb. Technol., 11 (1989) 74; Prep. Chromatogr., 1 (1988) 29; J. Cromatpgr., 394 (1987) 305; J. Cromatogr., 439 (1988) 341; J. Cromatogr., 454 (1988) 1 (theoretic optimisation); A. Felinger et al., 609 (1992) 35 (theoretic optimisation), всички доклади въведени тук по пътя на цитиране, са използвали подобни колони; подвижната фаза е метанол във фосфатен буфер, избутващото средство е 2-(2-Ьбутоксиетокси)етанол (ВЕЕ) в ацетонитрил и натриев ацетат. Като проби са използвани различни пептиди, протеини и антибиотика цефалоспорин С.
Патенти US 5,043,423 (27.08.1991) и ЕР 416.416, съответно, описват метод за пречистване на известни нискомолекулни (под 1000 Da) пептиди (в частност, туфтсин и негови синтетични производни) с изместваща йонно-обменна хроматография, където като неподвижна фаза се използва катионно обменна смола, пренасящият разтвор е вода или разредени разтвори на различни силни киселини, и като изместващо средство се използва триетилентетра амониева сол в различни концентрации. В патентна заявка US 08/875,422, все още непубликувана, е описано използването на изместваща хроматография за изолирането и пречистването на ванкомицин.
Понякога е трудно да се получи активното вещество с висока чистота в едър мащаб, като много технологии, приложими в лабораторен мащаб, не са достатъчно икономич ни при едромащабни производствени операции, за да се оправдае използването им или не се среща екологичният критерий. Горните факти принуждават индустрията да търси нови технологии, които да осигуряват както висококачествен продукт, така и икономично и екологично приложимо производство. Настоящото изобретение разрешава недостатъците на известните методи и дава възможност да се получат чисти HMG-CoA редуктазни инхибитори и, допълнително, пречистващ метод per se, неизразходващ време, за да осигури високи добиви, използващ малки количества от разтворители. Методът е благоприятен за природата; в допълнение, той не изисква условия за пространство и енергия и така дава възможност за икономично едро мащабно производство.
Техническа същност на изобретението
Изобретението осигурява метод за пречистването на HMG-CoA редуктазни инхибитори, при който се използва изместваща хроматография. Това е най-малко един от етапите на метода за пречистването на суровия HMGCoA редуктазен инхибитор, включващ изместваща хроматография.
HMG-CoA редуктазен инхибитор, който се пречиства, е избран от групата, включваща, например, мевастатин, правастатин, ловастатин, симвастатин, флувастатин и аторвастатин. Избраният инхибитор може да бъде в лактонова форма или под формата на киселина или нейна сол, за да бъде пречистен посредством изместваща хроматография.
Изместващата хроматография, характерна за метода от настоящото изобретение, за предпочитане включва следните етапи:
a) довеждане в необходимото състояние на хроматографската колона в подходяща подвижна фаза;
b) захранване със суровия HMG-CoA редуктазен инхибитор, разтворен в мобилната фаза;
c) въвеждане на средството за избутване, за да се измести HMG-CoA редуктазния инхибитор от колоната; и
d) получаване на пречистения HMG-CoA редуктазен инхибитор.
Пречистеният HMG-CoA редуктазен инхибитор за предпочитане се получава чрез:
dl) събиране на фракциите, и d2) анализиране на фракциите с аналитична HPLC и обединяване на фракциите в зависимост от качеството на чистотата.
След като бъде получен HMG-CoA редуктазният инхибитор, хроматографската колона може да бъде регенерирана чрез промиване на колоната със смес алкохол/вода, за да се отмие средството за избутване (изместване).
Получените по описания начин HMG-CoA редуктазни инхибитори след това се изолират от подвижната фаза съгласно методите, известни от състоянието на техниката, например чрез лиофилизиране или, за предпочитане, чрез кристализация, за да се получат в лактонова форма, кисела форма или тяхната солева форма (за предпочитане соли на алкални или алкалоземни метали).
Фракциите, съдържащи значителен процент HMG-CoA редуктазни инхибитори, в допълнение с примеси, могат да бъдат отново подложени на метода, за да се получи превишаване на общия добив от 95 %.
Използваната неподвижна фаза е обратна (реверсивна) фаза, където са подходящи природни (силикагел с алкални вериги с различна дължина) или синтетични (С-18 или С-8 органични) неподвижни фази. За предпочитане се използва синтетична омрежена полимерна матрица от стирол и дивинилбензен. Размерът на частицата на неподвижната фаза е подходящо да бъде от 3 до 20 μπι, за предпочитане между 7 и 15 μπι.
Използваната подвижна фаза за предпочитане се избира от вода, разтвор ацетонитрил/ вода и водни разтвори на низши (за предпочитане С,-С4) алкохоли, буферирани разредени разтвори на органични, халогенирани органични или неорганични киселини, например, мравчена, оцетна, пропионова, солна, борна, фосфорна, карбонова или сярна киселини с катиони на алкални метали, с амоняк или с амини. Вода и водни разтвори с ацетонитрил и специално с метанол или етанол са специално предпочитани, и съдържанието на органичния разтворител във водните разтвори за предпочитане е 80% или по-малко, повече се предпочита 45% или по-малко и специално 30% или помалко. Тъй като токсичният метанол в подвижната фаза може да бъде заместен с по-малко токсичния етанол, или може да бъде най-малко специално заместен с вода при добри резултати, отделянето на отпадъчни разтворители е по-просто, затова настоящото изобретение се отбелязва като подобрение в сравнение със състоянието на техниката, преценявайки от екологичен аспект.
pH на използваната подвижна фаза се предпочита да бъде между 4.5 и 10.5, повече се предпочита между 6.5 и 8, и специално около 7. Скоростта на потока на подвижната фаза през колоната е подходящо да бъде регулирана, за да се простира между 1.5 и 30 ml/(min cm2), за предпочитане между 3 и 15 ml/(min cm2). В момента, когато средството за избутване се въвежда в хроматографската колона чрез смесване с подвижната фаза, скоростта на потока е за предпочитане да се регулира, за да се простира между 1.5 и 15 ml/(min cm2), за предпочитане между 3 и 10 ml/(min cm2), понеже по-високите скорости причиняват разреждането на пробите за събиране, и също разделянето става по-лошо.
Подходящо средство за избутване е съединение, което има amphiphilic структура, такова като повърхностно активно вещество, детергент и други подобни. Примери за средство за избутване (изместване) са алкохоли с дълги вериги, карбоксилни киселини с дълги вериги, амониеви соли с дълги алкилни вериги, естери на ароматни дикарбоксилни киселини, оксо- и диоксоалкохоли, полиалкилен полигликолови етери такива като диетилен гликол моно-(или ди)алкилетери, полиарил или полиалкилен полиарилови етери такива като Triton® Х-100, и др. Терминът “дълга верига” означава алкилова верига, която е най-малко С4-верига, за предпочитане наймалко С10-верига и повече за предпочитане най-малко С|4-верига или по-дълга.
Концентрацията на средството за избутване в подвижната фаза е подходящо да бъде регулирана в обхвата 1 до 35 %, за предпочитане от 2 до 20 % и специално от 7 до 14 %.
В предпочитания случай за контролиране на качеството на чистотата в отмитите индивидуални фракции от хроматографската колона, аналитичният HPLC метод, насочен към анализиране на HMG-CoA редуктазните инхибитори, може да бъде осъществен, както е описано в следващото изложение.
Пробата за анализ се разрежда 100 пъти с подвижната фаза, съдържаща 20 mM воден разтвор на NH4HCO3 с ацетонитрил (съотношението на ацетонитрила се регулира така, че факторът на задържане при анализа да е между 5 и 10). 10 μΐ от тази проба се поставя в колона Hypersil ODS (Hypersil, the United Kingdom), размер на частицата 3 μπι, размер на колоната 50 х 4.6 mm) за високо ефективна течна хроматография. Колоната се промива с подвижната фаза при скорост на потока 2 ml/ min. Абсорбцията се измерва при 235 шп. HPLC чистотата на пробата се изчислява от съотношението между повърхностите на индивидуалните пикове в хроматограмата.
След завършване на хроматографията, за предпочитане неподвижната фаза се регенерира, например като се използва подвижната фаза с 20 до 100 % воден разтвор на низш алкохол.
Изобретението се илюстрира със следните примери, които не го ограничават.
Примери за изпълнение на изобретението
Пример 1. Сурова натриева сол на правастатин (1.0 g, HPLC чистота 88 %, анализ 85 %) се разтваря в 10 ml от подвижната фаза А (дестилирана вода), pH се нагласява на 7 с 0.2М воден разтвор на NaOH и се филтрува. Колоната се уравновесява с подвижна фаза А. Пробата, получена по гореописания начин се подава в колона Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 μπι, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза в съдържаща 7 % диетиленгликол монобутилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 шп и се събират 0.5 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml 70 % метанол. Получените фракции се анализират чрез описания HPLC аналитичен метод. Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции (7 ml) HPLC чистотата е
99.8 %.
Пример 2. Сурова натриева сол на правастатин (0.4 g, HPLC чистота 88 %, анализ 85 %) се разтваря в 5 ml от подвижната фаза А (дестилирана вода), pH се нагласява на 7 с 0.2М воден разтвор на NaOH и се филтрува. Колоната се уравновесява с подвижна фаза А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Kromasil 100 С-18 (ЕКА Chemicals AB, Sweden), размер на частицата μιη, размер на колоната 200 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 7 % Triton Х-100 в подвижна фаза А при скорост на потока 1 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 0.5 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Получените фракции се анализират чрез гореописания HPLC аналитичен метод. Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции (3 ml) HPLC чистотата е 99.7 %.
Пример 3.0.6 g от суровата натриева сол на правастатин се разтварят в 5 ml дестилирана вода. Използва се технологията, описана в пример 1, с изключването на използваната подвижна фаза (30 % воден разтвор на метанол) и се получават обединените фракции с HPLC чистота 99.8 %.
Пример 4. Методът, описан в пример 3, се повтаря, при което концентрацията на средството за избутване (изместване) в подвижната фаза е 14 %. В обединените фракции съгласно критерия, описан в пример 1, HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 5. Правастатин лактон (0.4 g, HPLC чистота 85 %) се разтваря в 33 ml от подвижната фаза А, съдържаща 45 % метанол. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А. Пробата, получена по гореописания начин, се подава в колона Grom-Sil 120-ODS НЕ (Crom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 цт, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза н съдържаща 2 % диетиленгликолдибутилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm, и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml 70 % метанол.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.7 %.
Пример 6. Правастатин лактон (0.3 g, HPLC чистота 85 %) се разтваря в 80 ml от подвижната фаза А, съдържаща 30 % метанол. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Licrosphere RP 18, размер на частицата 12 μπι, размер на колоната 200 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фа5
646Ί6 за в съдържаща 5 % диетиленгликолмоно-пхексилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 235 nm и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml 90 % метанол. Получените фракции се анализират по описания HPLC аналитичен метод.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 7. Правастатин лактон (0.3 g, HPLC чистота 85 %) се разтваря в 25 ml от подвижната фаза А, съдържаща 35 % ацетонитрил. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Licrospher RP 18, размер на частицата 12 цт, размер на колоната 200 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 1 % диетиленгликолдибутилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/ min. Абсорбцията се измерва при 235 nm и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml 90 % метанол. Получените фракции се анализират по гореописания HPLC аналитичен метод.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 8. Методът, описан в пример 7, се повтаря, при което подвижната фаза В е 0.85 % диетилфталат в подвижната фаза А.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 9. Симвастатин лактон (0.42 g, HPLC чистота 87 %) се разтваря в 6 ml 66 % ацетонитрил и се хидролизира с 1.2 mmol натриев хидроксид. Ацетонитрилът се отделя pH се регулира на 7 с разредена Н3РО4. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А, съдържаща 14 % метанол. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11цт, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 6.1 % диетиленгликолмоно-п-хексилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 0.5 ml фракции с първоначално увеличаване на абсор бцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол.
Фракциите с чистота >99.5% се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 10. Симвастатин лактон (0.5 g, HPLC чистота 87 %) се разтваря в 20 ml от подвижната фаза, съдържаща 70 % метанол. Колоната се уравновесява с подвижната фаза
А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 цт, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза в съдържаща 3 % деканова киселина н подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 0.75 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол. Получените фракции се анализират по описания метод. Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.7 %.
Пример 11. Симвастатин лактон (0.5 g, HPLC чистота 87 %) се разтваря в 20 ml от подвижната фаза, съдържаща 60 % ацетонитрил. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120-ODS НЕ (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 цт, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 2 % тетракис(децил)амониев бромид в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 12. Ловастатин лактон (0.5 g, HPLC чистота 87 %) се разтваря в 60 ml 75 % метанол. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А, съдържаща 70 % метанол. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 цт, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съ държаща 70 % метанол и 4.5 % деканова киселина в подвижна фаза А при скорост на потока 4.5 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол. Получените фракции се анализират по описания HPLC аналитичен метод.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.9 %.
Пример 13. Ловастатин лактон (0.42 g, HPLC чистота 87 %) се разтваря в 8 ml 50 % ацетонитрил и се хидролизира с 1.5 mmol натриев хидроксид. Ацетонитрилът се отделя pH се регулира на 7 с разредена Н3РО4. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А, съдържаща 14 % метанол. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 μπι, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 6.7 % диетиленгликолмоно-п-хексилетер в подвижна фаза А при скорост на потока 1 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 0.25 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол.
Получените фракции се анализират по метода, описан в пример 9. Фракциите с чистота > 99.5 % се обединяват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Пример 14. Мевастатин лактон (0.5 g, HPLC чистота 85 %) се разтваря в 150 ml от подвижната фаза А, съдържаща 70 % метанол. Колоната се уравновесява с подвижната фаза А. Пробата, получена по описания начин, се подава в колона Grom-Sil 120-ODS НЕ (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germany), размер на частицата 11 μιη, размер на колоната 250 х 10 mm. Колоната се промива с подвижната фаза В, съдържаща 4.5 % деканова киселина в подвижна фаза А при скорост на потока 6 ml/min. Абсорбцията се измерва при 260 nm и се събират 1 ml фракции с първоначално увеличаване на абсорбцията. Когато сигналът намалее, колоната се промива с 25 ml метанол.
Получените фракции се анализират по гореописания HPLC аналитичен метод.
Фракциите с чистота > 99.5 % се обеди няват. В обединените фракции HPLC чистотата е 99.8 %.
Claims (25)
- Патентни претенции1. Метод за получаване на HMG-CoА редуктазни инхибитори, характеризиращ се с това, че един от етапите на метода за пречистването на HMG-CoA редуктазните инхибитори включва хроматографско изместване, в което е въвлечено използване на средство за избутване при изместването на HMG-CoA редуктазния инхибитор.
- 2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че HMG-CoA редуктазният инхибитор е избран от групата, включваща мевастатин, правастатин, ловастатин, симвастатин, флувастатин и аторвастатин.
- 3. Метод съгласно претенция 1 или 2, характеризиращ се с това, че HMG-CoA редуктазният инхибитор е в лактонова форма или под формата на киселина или нейна сол.
- 4. Метод съгласно всяка една от претенциите 1 до 3, характеризиращ се с това, че хроматографското изместване включва следните етапи:a) довеждане в необходимото състояние на хроматографската колона с подвижна фаза;b) захранване с HMG-CoA редуктазен инхибитор, разтворен в мобилната фаза;c) въвеждане на средството за избутване, за да се измести HMG-CoA редуктазният инхибитор от колоната; иd) получаване на пречистения HMG-CoA редуктазен инхибитор.
- 5. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че пречистеният HMGCoA редуктазен инхибитор се получава чрез:dl) събиране на фракциите, и d2) анализиране на фракциите посредством аналитична HPLC и обединяване на фракциите в зависимост от качеството на чистотата.
- 6. Метод съгласно претенция 4 или 5, характеризиращ се с това, че хроматографското изместване по-нататък включва следващия етап:e) регенериране на хроматографската колона чрез промиване на колонота със смес алкохол/вода, за да се отмие средството за избутване.
- 7. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че подвижната фаза е избрана от групата разтворители, включваща вода, разтвори ацетонитрил/вода или водни разтвори на нисши алкохоли, както и буферирани 5 разредени разтвори на органични, халогенирани органични или неорганични киселини с катиони на алкални метали, с амоняк или с амини.
- 8. Метод съгласно претенция 7, харак- 10 теризиращ се с това, че подвижната фаза е което и да е от вода, разтвор ацетонитрил/вода или воден разтвор на нисши алкохоли.
- 9. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че pH на използваната 15 подвижна фаза е между 4.5 и 10.5.
- 10. Метод съгласно претенция 9, характеризиращ се с това, че pH на използваната подвижна фаза е между 6.5 и 8.
- 11. Метод съгласно претенция 10, харак- 20 теризиращ се с това, че pH на използваната подвижна фаза е 7.
- 12. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че скоростта на потока на подвижната фаза през хроматографската коло- 25 на е между 1.5 и 30 ml/(min cm2).
- 13. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че скоростта на потока на сместа подвижна фаза/средство за избутване през хроматографската колона е между 3 и 30 15 ml/(min cm2).
- 14. Метод съгласно претенция 6, характеризиращ се с това, че неподвижната фаза се регенерира с 20 до 100 % воден разтвор на нисши алкохоли след завършване на хроматогра- 35 фията.
- 15. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че неподвижната фаза е реверсивна фаза.
- 16. Метод съгласно претенция 15, харак- 40 теризиращ се с това, че неподвижната фаза е природна реверсивна фаза, като силикагел с алкидни вериги с различни дължини.
- 17. Метод съгласно претенция 15, характеризиращ се с това, че неподвижната фаза е както С-18, така и С-8.
- 18. Метод съгласно претенция 15, характеризиращ се с това, че неподвижната фаза е синтетична напречно-свързана полимерна матрица.
- 19. Метод съгласно претенция 18, характеризиращ се с това, че напречно-свързаната полимерна матрица е кополимер на стирола и дивинилбензена.
- 20. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че размерът на частицата от неподвижната фаза е между 3 и 20 μ m.
- 21. Метод съгласно претенция 20, характеризиращ се с това, че размерът на частицата от неподвижната фаза е между 7 и 15рт.
- 22. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че средството за избутване е избрано от групата, включваща алкохоли с дълга верига, карбоксилни киселини с дълга верига, алкил амониеви соли с дълга верига, естери на ароматни дикарбоксилни киселини, оксо- и диоксо-алкохоли, полиалкилен полигликолови етери и полиарилови или полиалкилен полиарилови етери.
- 23. Метод съгласно претенция 4, характеризиращ се с това, че концентрацията на средството за избутване в подвижната фаза е между 1 и 35 %.
- 24. Метод съгласно претенция 23, характеризиращ се с това, че концентрацията на средството за избутване в подвижната фаза е между 2 и 20 %.
- 25. Използване на метода съгласно всяка една от претенциите 1 до 24 за получаване на HMG-CoA редуктазен инхибитор с HPLC чистота, надминаваща 99.7 %.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SI9800241A SI20072A (sl) | 1998-09-18 | 1998-09-18 | Postopek za pridobivanje inhibitorjev HMG-CoA reduktaze |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BG105348A BG105348A (bg) | 2001-11-30 |
BG64676B1 true BG64676B1 (bg) | 2005-11-30 |
Family
ID=20432332
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BG105348A BG64676B1 (bg) | 1998-09-18 | 2001-03-16 | МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА HMG-CoA РЕДУКТАЗНИ ИНХИБИТОРИ С ВИСОКА ЧИСТОТА |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6695969B1 (bg) |
EP (1) | EP1114040B1 (bg) |
JP (1) | JP3795755B2 (bg) |
KR (1) | KR100607608B1 (bg) |
CN (1) | CN1186335C (bg) |
AT (1) | ATE284396T1 (bg) |
AU (1) | AU766630B2 (bg) |
BG (1) | BG64676B1 (bg) |
CA (1) | CA2343645A1 (bg) |
DE (1) | DE69922519T2 (bg) |
HR (1) | HRP20010045B1 (bg) |
HU (1) | HUP0102997A2 (bg) |
IL (2) | IL142056A0 (bg) |
IS (1) | IS2149B (bg) |
NZ (1) | NZ509582A (bg) |
PL (1) | PL200336B1 (bg) |
RO (1) | RO121116B1 (bg) |
RS (1) | RS49996B (bg) |
RU (1) | RU2235098C2 (bg) |
SI (1) | SI20072A (bg) |
SK (1) | SK285868B6 (bg) |
WO (1) | WO2000017182A1 (bg) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7141602B2 (en) * | 1998-09-18 | 2006-11-28 | Lek Pharmaceuticals D.D. | Process for obtaining HMG-CoA reductase inhibitors of high purity |
SI20305A (sl) * | 1999-08-06 | 2001-02-28 | LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. | Kristali natrijeve soli pravastatina |
HUP9902352A1 (hu) * | 1999-07-12 | 2000-09-28 | Gyógyszerkutató Intézet Kft. | Eljárás pravasztatin mikrobiológiai előállítására |
RU2002114072A (ru) * | 1999-11-30 | 2004-07-20 | Биогал Джиоджисзерджиар РТ (HU) | Способ выделения соединений статина из ферментационного бульона |
CA2394200C (en) * | 1999-12-14 | 2006-10-03 | Biogal Gyogyszergyar Rt. | Novel forms of pravastatin sodium |
JP2003525935A (ja) | 2000-03-03 | 2003-09-02 | ビオガル ジョジセルジャール アール テー. | 低下したレベルの二量体不純物を伴うロバスタチン及びシンバスタチンの精製方法 |
US6936731B2 (en) | 2000-10-05 | 2005-08-30 | TEVA Gyógyszergyár Részvénytársaság | Pravastatin sodium substantially free of pravastatin lactone and epi-pravastatin, and compositions containing same |
CZ20031166A3 (cs) * | 2000-10-05 | 2004-04-14 | Biogal Gyogyszergyar Rt | Sodná sůl pravastatinu, která v podstatě neobsahuje pravastatin lakton a epi-pravastatin a kompozice na její bázi |
US20050215636A1 (en) * | 2000-10-05 | 2005-09-29 | Vilmos Keri | Pravastatin sodium substantially free of pravastatin lactone and EPI-pravastatin, and compositions containing same |
KR100407758B1 (ko) * | 2001-08-27 | 2003-12-01 | 씨제이 주식회사 | 스타틴의 제조에 있어서 락톤화 방법 |
JP2003093045A (ja) * | 2001-09-26 | 2003-04-02 | Godo Shusei Co Ltd | 有用変換微生物 |
KR100435078B1 (ko) * | 2002-02-08 | 2004-06-09 | 종근당바이오 주식회사 | 심바스타틴의 정제방법 |
CA2521276A1 (en) * | 2003-04-01 | 2004-10-14 | Ranbaxy Laboratories Limited | Fermentation process for the preparation of pravastatin |
US6978908B2 (en) * | 2003-09-15 | 2005-12-27 | Gerber Products Company | Drinking vessel with adjustable handles |
PT1641447E (pt) * | 2003-11-24 | 2008-12-10 | Teva Gyogyszergyar Zartkoeruee | Método de purificação da pravastatina |
ES2239533B1 (es) * | 2004-03-01 | 2006-12-16 | Ercros Industrial, S.A. | Procedimiento para la obtencion de compactina. |
MX2007003652A (es) * | 2004-09-28 | 2009-02-16 | Teva Pharma | Proceso para preparar formas de calcio de atorvastatina sustancialmente libre de impurezas. |
CN102043030A (zh) * | 2009-10-22 | 2011-05-04 | 北京万全阳光医学技术有限公司 | 一种用高效液相色谱法测定烟酸辛伐他汀缓释片有关物质的方法 |
CN102621238A (zh) * | 2011-02-01 | 2012-08-01 | 北京北大维信生物科技有限公司 | 一种测定HMG-CoA还原酶抑制剂浓度的方法 |
CN105985244A (zh) * | 2015-02-04 | 2016-10-05 | 北京北大维信生物科技有限公司 | 化合物、其分离方法、合成方法及用途 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0416416A1 (en) * | 1989-09-04 | 1991-03-13 | SCLAVO S.p.A. | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure |
WO1992016276A1 (en) * | 1991-03-13 | 1992-10-01 | Merck & Co., Inc. | PROCESS FOR PURIFICATION OF HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4231938A (en) * | 1979-06-15 | 1980-11-04 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
AU661996B2 (en) * | 1991-03-14 | 1995-08-17 | Kabushiki Kaisha Ace Denken | Stock control system |
US5420024A (en) * | 1993-05-11 | 1995-05-30 | Merck & Co., Inc. | Process for synthesis of acylated HMG-CoA reductase inhibitors from a lactone diol precursor using Candida cylindracea |
US5427686A (en) * | 1994-04-05 | 1995-06-27 | Sri International | Process for separating material from mixture using displacement chromatography |
EP0877089A1 (en) * | 1997-05-07 | 1998-11-11 | Gist-Brocades B.V. | HMG-CoA reductase inhibitor preparation process |
-
1998
- 1998-09-18 SI SI9800241A patent/SI20072A/sl not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-09-17 NZ NZ509582A patent/NZ509582A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-09-17 CN CNB998110760A patent/CN1186335C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-17 CA CA002343645A patent/CA2343645A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-17 DE DE69922519T patent/DE69922519T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-17 EP EP99941797A patent/EP1114040B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-17 PL PL345883A patent/PL200336B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-09-17 RS YUP-818/00A patent/RS49996B/sr unknown
- 1999-09-17 RU RU2001108381/04A patent/RU2235098C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-09-17 AT AT99941797T patent/ATE284396T1/de active
- 1999-09-17 WO PCT/IB1999/001553 patent/WO2000017182A1/en active IP Right Grant
- 1999-09-17 KR KR1020017000044A patent/KR100607608B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-09-17 IL IL14205699A patent/IL142056A0/xx active IP Right Grant
- 1999-09-17 US US09/720,952 patent/US6695969B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-17 RO ROA200100289A patent/RO121116B1/ro unknown
- 1999-09-17 JP JP2000574092A patent/JP3795755B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-09-17 SK SK2002-2000A patent/SK285868B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-09-17 AU AU55284/99A patent/AU766630B2/en not_active Ceased
- 1999-09-17 HU HU0102997A patent/HUP0102997A2/hu unknown
-
2001
- 2001-01-16 HR HR20010045A patent/HRP20010045B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 IS IS5886A patent/IS2149B/is unknown
- 2001-03-16 BG BG105348A patent/BG64676B1/bg unknown
- 2001-03-18 IL IL142056A patent/IL142056A/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0416416A1 (en) * | 1989-09-04 | 1991-03-13 | SCLAVO S.p.A. | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure |
US5043423A (en) * | 1989-09-04 | 1991-08-27 | Sclavo S.P.A. | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide or pseudo-peptide structure |
WO1992016276A1 (en) * | 1991-03-13 | 1992-10-01 | Merck & Co., Inc. | PROCESS FOR PURIFICATION OF HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RO121116B1 (ro) | 2006-12-29 |
KR20010099584A (ko) | 2001-11-09 |
IS2149B (is) | 2006-10-13 |
SI20072A (sl) | 2000-04-30 |
JP2002526486A (ja) | 2002-08-20 |
SK285868B6 (sk) | 2007-10-04 |
HUP0102997A2 (hu) | 2001-12-28 |
HRP20010045A2 (en) | 2001-12-31 |
EP1114040B1 (en) | 2004-12-08 |
KR100607608B1 (ko) | 2006-08-02 |
RU2235098C2 (ru) | 2004-08-27 |
NZ509582A (en) | 2003-10-31 |
AU766630B2 (en) | 2003-10-23 |
SK20022000A3 (sk) | 2001-08-06 |
HRP20010045B1 (en) | 2005-08-31 |
DE69922519T2 (de) | 2005-12-08 |
ATE284396T1 (de) | 2004-12-15 |
IL142056A0 (en) | 2002-03-10 |
AU5528499A (en) | 2000-04-10 |
RS49996B (sr) | 2008-09-29 |
IS5886A (is) | 2001-03-12 |
YU81800A (sh) | 2003-02-28 |
US6695969B1 (en) | 2004-02-24 |
JP3795755B2 (ja) | 2006-07-12 |
IL142056A (en) | 2006-08-01 |
CA2343645A1 (en) | 2000-03-30 |
CN1186335C (zh) | 2005-01-26 |
DE69922519D1 (de) | 2005-01-13 |
WO2000017182A1 (en) | 2000-03-30 |
EP1114040A1 (en) | 2001-07-11 |
BG105348A (bg) | 2001-11-30 |
PL345883A1 (en) | 2002-01-14 |
CN1318063A (zh) | 2001-10-17 |
PL200336B1 (pl) | 2008-12-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
BG64676B1 (bg) | МЕТОД ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА HMG-CoA РЕДУКТАЗНИ ИНХИБИТОРИ С ВИСОКА ЧИСТОТА | |
US20070032549A1 (en) | Process for obtaining HMG-CoA reductase inhibitors of high purity | |
Mullett et al. | Multidimensional on-line sample preparation of verapamil and its metabolites by a molecularly imprinted polymer coupled to liquid chromatography–mass spectrometry | |
RU2001108381A (ru) | Способ получения ингибиторов hmg-coa-редуктазы с высокой степенью чистоты | |
CN1275975A (zh) | 柠檬酸酯的生产方法 | |
EP1638990B1 (en) | Removal of lipopolysaccharides from protein- lipopolysaccharide complexes by nonflammable solvents | |
KR100582620B1 (ko) | 고순도의 HMG-CoA 환원효소 억제제 획득방법 | |
US20080312447A1 (en) | Process for Isolation of Crystalline Tacrolimus | |
CN1196356A (zh) | 制备默诺霉素a的方法 | |
CZ2001137A3 (cs) | Způsob získání inhibitorů HMG-CoA reduktázy vysoké čistoty | |
RU2091388C1 (ru) | Способ получения стероидных эфиров | |
CN101290308A (zh) | 一种高效液相色谱法分离分析阿魏酸丁酸甘油酯的方法 | |
CN1281596C (zh) | 制备4-氧代四氢吡喃-2-酮的方法 | |
WO2004111255A1 (en) | Ion-exchange filtration of fermentation broth | |
KR20040028303A (ko) | 의사(擬似)이동마루식 크로마토그래피에 의한 광학 분할에있어서의 광학 이성체와 용매와의 회수 방법 및 용매의순환 사용 방법 |