JP2003093045A - 有用変換微生物 - Google Patents
有用変換微生物Info
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- JP2003093045A JP2003093045A JP2001293575A JP2001293575A JP2003093045A JP 2003093045 A JP2003093045 A JP 2003093045A JP 2001293575 A JP2001293575 A JP 2001293575A JP 2001293575 A JP2001293575 A JP 2001293575A JP 2003093045 A JP2003093045 A JP 2003093045A
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】微生物を利用するバイオトランスフォーメーシ
ョンによって、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩から、高い
変換率かつ類縁化合物の極めて少ない状態でプラバスタ
チンを得る。 【解決手段】選択的かつ高い変換率でＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を水酸化する能力を有する微生物ノカルディ
ア属に属するノカルディア・ノバＧＳ９３２５２株、ま
たはサッカロスリックス属に属するサッカロスリックス
・ムタビリスＧＳ００４１２株の培養液中に、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩を添加することにより効率的にプラ
バスタチンを製造する方法。
ョンによって、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩から、高い
変換率かつ類縁化合物の極めて少ない状態でプラバスタ
チンを得る。 【解決手段】選択的かつ高い変換率でＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を水酸化する能力を有する微生物ノカルディ
ア属に属するノカルディア・ノバＧＳ９３２５２株、ま
たはサッカロスリックス属に属するサッカロスリックス
・ムタビリスＧＳ００４１２株の培養液中に、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩を添加することにより効率的にプラ
バスタチンを製造する方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物もしくは微
生物酵素の作用によりＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩（式
１）を変換して効率良くプラバスタチンを製造する方法
に関する。
生物酵素の作用によりＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩（式
１）を変換して効率良くプラバスタチンを製造する方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩は、ＨＭＧ
−ＣｏＡレダクターゼを阻害することにより、コレステ
ロールの生合成を低下せしめ、強力な血清コレステロー
ルの低下作用を示す事が知られている。一方、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩のヒドロキシル化誘導体のいくつか
は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの競合的インヒビター
として、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩よりも効果的であ
ることが知られており、その代表的な１つがプラバスタ
チンである。ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩のヒドロキシ
ル化は、種々の真菌類および細菌類、例えばノカルジア
属放線菌（特公平３−７１１１６号）、ストレプトマイ
セス カルボフィラス（特公平７−２４５７９号）によ
り可能であることが報告されている。また、ヒドロキシ
ル化はＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を含有する培地で該
微生物を培養するか、あるいは該微生物を培養回収後そ
の菌体、または菌体抽出物を用いてＭＬ−２３６Ｂナト
リウム塩を変換する手法が主に用いられている。
−ＣｏＡレダクターゼを阻害することにより、コレステ
ロールの生合成を低下せしめ、強力な血清コレステロー
ルの低下作用を示す事が知られている。一方、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩のヒドロキシル化誘導体のいくつか
は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの競合的インヒビター
として、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩よりも効果的であ
ることが知られており、その代表的な１つがプラバスタ
チンである。ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩のヒドロキシ
ル化は、種々の真菌類および細菌類、例えばノカルジア
属放線菌（特公平３−７１１１６号）、ストレプトマイ
セス カルボフィラス（特公平７−２４５７９号）によ
り可能であることが報告されている。また、ヒドロキシ
ル化はＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を含有する培地で該
微生物を培養するか、あるいは該微生物を培養回収後そ
の菌体、または菌体抽出物を用いてＭＬ−２３６Ｂナト
リウム塩を変換する手法が主に用いられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、従来か
ら知られている方法では、プラバスタチンへの変換率が
低く、またプラバスタチン以外の類縁化合物が副次的に
多く産生し、以後のプラバスタチン精製の大きな障害と
なる欠点があった。
ら知られている方法では、プラバスタチンへの変換率が
低く、またプラバスタチン以外の類縁化合物が副次的に
多く産生し、以後のプラバスタチン精製の大きな障害と
なる欠点があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、プラバス
タチンを効率良く製造する方法について鋭意検討した結
果、土壌中よりノカルディア・ノバ (Nocardia nova)Ｇ
Ｓ９３２５２株、およびサッカロスリックス・ムタビリ
ス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２株の２株
の放線菌を得た。これらの微生物の培養液中にＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩を添加して培養することにより、こ
れらの微生物が、高い収率でＭＬ−２３６Ｂナトリウム
塩をプラバスタチンに変換し、かつ類縁化合物の少ない
状態でプラバスタチンが得られることを見出し、本発明
を完成するに至った。
タチンを効率良く製造する方法について鋭意検討した結
果、土壌中よりノカルディア・ノバ (Nocardia nova)Ｇ
Ｓ９３２５２株、およびサッカロスリックス・ムタビリ
ス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２株の２株
の放線菌を得た。これらの微生物の培養液中にＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩を添加して培養することにより、こ
れらの微生物が、高い収率でＭＬ−２３６Ｂナトリウム
塩をプラバスタチンに変換し、かつ類縁化合物の少ない
状態でプラバスタチンが得られることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明は、ノカルディア・ノバ
(Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株、またはサッカロス
リックス・ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ
００４１２株の培養液中にＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩
を添加し、プラバスタチンを蓄積せしめることを特徴と
する。
(Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株、またはサッカロス
リックス・ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ
００４１２株の培養液中にＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩
を添加し、プラバスタチンを蓄積せしめることを特徴と
する。
【０００６】本発明に使用する菌としては、発明者らに
よって新たに分離され、ノカルディア・ノバ (Nocardia
nova)ＧＳ９３２５２株、およびサッカロスリックス・
ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２
株と名付けられた株であるが、当該菌株は以下に示すよ
うな菌学的性質を有する。
よって新たに分離され、ノカルディア・ノバ (Nocardia
nova)ＧＳ９３２５２株、およびサッカロスリックス・
ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２
株と名付けられた株であるが、当該菌株は以下に示すよ
うな菌学的性質を有する。
【０００７】１．ＧＳ９３２５２株
（１）寒天培地での生育：寒天培地（イースト・スター
チ培地）に生育したコロニーは橙色を呈し、コロニーは
ウエットである。 （２）細胞壁組成： Ａ１γタイプ （３）主要脂肪酸組成： 15:0 ISO 31%, 17:1 CIS 9
10%, 17:0 10METHYL9% ＭＩＤＩデータベースにて該
当株なし。 （４）１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列： Ｍｉｃｒｏｓｅｑ
データベースによる照合の結果、ノカルディア・ノバ
(Nocardia nova)と９９．６％の相同性。 ２．ＧＳ００４１２株 （１）寒天培地での生育：寒天培地（イースト・スター
チ培地）に生育したコロニーは白色を呈し、生育はやや
遅く、気菌糸形成が見られる。 （２）細胞壁組成： Ａ１γタイプ （３）主要脂肪酸組成： 15:0 ISO 27%, 16:0 ISO 1
5% ＭＩＤＩデータベースにて該当株なし。 （４）１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列： Ｍｉｃｒｏｓｅｑ
データベースによる照合の結果、サッカロスリックス・
ムタビリス（Saccharothrix mutabilis）と９５．６％
の相同性。
チ培地）に生育したコロニーは橙色を呈し、コロニーは
ウエットである。 （２）細胞壁組成： Ａ１γタイプ （３）主要脂肪酸組成： 15:0 ISO 31%, 17:1 CIS 9
10%, 17:0 10METHYL9% ＭＩＤＩデータベースにて該
当株なし。 （４）１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列： Ｍｉｃｒｏｓｅｑ
データベースによる照合の結果、ノカルディア・ノバ
(Nocardia nova)と９９．６％の相同性。 ２．ＧＳ００４１２株 （１）寒天培地での生育：寒天培地（イースト・スター
チ培地）に生育したコロニーは白色を呈し、生育はやや
遅く、気菌糸形成が見られる。 （２）細胞壁組成： Ａ１γタイプ （３）主要脂肪酸組成： 15:0 ISO 27%, 16:0 ISO 1
5% ＭＩＤＩデータベースにて該当株なし。 （４）１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列： Ｍｉｃｒｏｓｅｑ
データベースによる照合の結果、サッカロスリックス・
ムタビリス（Saccharothrix mutabilis）と９５．６％
の相同性。
【０００８】以上の結果より、ＧＳ９３２５２株はノカ
ルディア・ノバ (Nocardia nova)、ＧＳ００４１２株は
サッカロスリックス・ムタビリス(Saccharothrix mutab
ilis)と同定した。
ルディア・ノバ (Nocardia nova)、ＧＳ００４１２株は
サッカロスリックス・ムタビリス(Saccharothrix mutab
ilis)と同定した。
【０００９】本発明に使用する株は、上記ＧＳ９３２５
２株、ＧＳ００４１２株はもとより、その人工変異株あ
るいは自然変異株も、本変換能力を有するものであれ
ば、使用可能である。ＧＳ９３２５２株、ＧＳ００４１
２株の人工変異株は、例えば紫外線照射、コバルト６０
照射、または化学変異誘発剤等により容易に得ることが
出来る。また、遺伝子工学的な手法により、本変換能力
を他の微生物に導入することも可能である。
２株、ＧＳ００４１２株はもとより、その人工変異株あ
るいは自然変異株も、本変換能力を有するものであれ
ば、使用可能である。ＧＳ９３２５２株、ＧＳ００４１
２株の人工変異株は、例えば紫外線照射、コバルト６０
照射、または化学変異誘発剤等により容易に得ることが
出来る。また、遺伝子工学的な手法により、本変換能力
を他の微生物に導入することも可能である。
【００１０】ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩からプラバス
タチンへの変換培養は、プラバスタチンへの変換反応が
進行する任意の条件が選択可能である。培養方法として
は、通常の放線菌類の培養法が利用可能であるが、液体
培地を用い、振盪培養あるいは攪拌培養による方法が好
ましい。また、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩と微生物の
生育に必要な炭素源、窒素源、ビタミン類、ミネラル類
以外に、プラバスタチンへの変換反応を助長する添加剤
を、培養中に用いても良い。好ましい培養温度は、１８
℃から５０℃、より好ましくは２５℃から３３℃であ
る。
タチンへの変換培養は、プラバスタチンへの変換反応が
進行する任意の条件が選択可能である。培養方法として
は、通常の放線菌類の培養法が利用可能であるが、液体
培地を用い、振盪培養あるいは攪拌培養による方法が好
ましい。また、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩と微生物の
生育に必要な炭素源、窒素源、ビタミン類、ミネラル類
以外に、プラバスタチンへの変換反応を助長する添加剤
を、培養中に用いても良い。好ましい培養温度は、１８
℃から５０℃、より好ましくは２５℃から３３℃であ
る。
【００１１】本発明は、ノカルディア・ノバ (Nocardia
nova)ＧＳ９３２５２株、またはサッカロスリックス・
ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２
株によるプラバスタチンへの変換の如何なる変換率をも
含み、好ましくは３０％以上、より好ましくは６０％以
上であるが、８０％以上であることが最も好ましい。
nova)ＧＳ９３２５２株、またはサッカロスリックス・
ムタビリス(Saccharothrix mutabilis)ＧＳ００４１２
株によるプラバスタチンへの変換の如何なる変換率をも
含み、好ましくは３０％以上、より好ましくは６０％以
上であるが、８０％以上であることが最も好ましい。
【００１２】変換培養により生成したプラバスタチンは
多くの場合精製される。精製とは、文字通り完全に単一
化することも意味するが、培養液の濃縮、沈殿化、有機
溶媒による抽出、クロマトグラフィー（薄層クロマトグ
ラフィー、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィー）、および乾燥などの工程を経たものも含
む。
多くの場合精製される。精製とは、文字通り完全に単一
化することも意味するが、培養液の濃縮、沈殿化、有機
溶媒による抽出、クロマトグラフィー（薄層クロマトグ
ラフィー、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィー）、および乾燥などの工程を経たものも含
む。
【００１３】
【実施例】以下に本発明を実施例により詳細に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
【００１４】
【実施例１】下記の表１に示した組成の培地１００mLを
含有する５００mL容三角フラスコ２０本にノカルディア
・ノバ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、３
０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時間後に
ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を最終濃度で０．５mg/mL
になるように添加して、更に５日間３０℃、２１０r.p.
m.で回転振とう培養した。
含有する５００mL容三角フラスコ２０本にノカルディア
・ノバ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、３
０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時間後に
ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を最終濃度で０．５mg/mL
になるように添加して、更に５日間３０℃、２１０r.p.
m.で回転振とう培養した。
【００１５】
【表１】 培地組成
【００１６】培養終了時の培養液中のプラバスタチン濃
度をＨＰＬＣで定量したところ、約０．３８mg/mL であ
り、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩からの変換率は約７５
％であった。
度をＨＰＬＣで定量したところ、約０．３８mg/mL であ
り、ＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩からの変換率は約７５
％であった。
【００１７】培養終了後の変換培養液をろ過し、得られ
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ３に調整した。ｐＨ調
整したろ液約２Lを酢酸エチル約１Lで３回抽出し、酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、ろ過濃縮し１
Lとして、触媒量のトリフルオロ酢酸を添加してラクト
ン化した。次にラクトン化した酢酸エチル層を５％炭酸
水素ナトリウム溶液１Lで洗浄し、酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、減圧乾固した。この乾固物を
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、プラバス
タチンのラクトン体を含む画分を分取した。得られた画
分をさらに逆相のＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC
18 UG120）にて分離分取し、プラバスタチンのラクトン
体を４８２mg得た。なお、精製中の類縁体含量は極めて
微量であり、精製には何ら支障は認められなかった。
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ３に調整した。ｐＨ調
整したろ液約２Lを酢酸エチル約１Lで３回抽出し、酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水後、ろ過濃縮し１
Lとして、触媒量のトリフルオロ酢酸を添加してラクト
ン化した。次にラクトン化した酢酸エチル層を５％炭酸
水素ナトリウム溶液１Lで洗浄し、酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、減圧乾固した。この乾固物を
シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、プラバス
タチンのラクトン体を含む画分を分取した。得られた画
分をさらに逆相のＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC
18 UG120）にて分離分取し、プラバスタチンのラクトン
体を４８２mg得た。なお、精製中の類縁体含量は極めて
微量であり、精製には何ら支障は認められなかった。
【００１８】
【実施例２】サッカロスリックス・ムタビリス(Sacchar
othrix mutabilis)ＧＳ００４１２株を用いて、実施例
１と同様に操作してプラバスタチンのラクトン体を４５
３mg得た。実施例１と同じく類縁体含量は微量であっ
た。
othrix mutabilis)ＧＳ００４１２株を用いて、実施例
１と同様に操作してプラバスタチンのラクトン体を４５
３mg得た。実施例１と同じく類縁体含量は微量であっ
た。
【００１９】
【実施例３】実施例１に示す培地組成の培地５０mLを含
有する５００mL容三角フラスコ１本にノカルディア・ノ
バ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、温度３
０℃、撹拌数２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時
間後に下記の表２に示した組成の培地２．５Lを含む５L
ジャーファーメンターに植菌し（植菌量２％）、温度３
０℃、撹拌数２５０r.p.m.、通気量０．８v/v/mで撹拌
培養を行った。培養開始から２日後にＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を最終濃度で０．５mg/mLになるように添加
して、更に３日間培養した。培養終了後に得られた培養
液中のプラバスタチン濃度をＨＰＬＣ分析により定量し
たところ、約０．３７mg/mLであり、ＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩からの変換率で約７４％であった。
有する５００mL容三角フラスコ１本にノカルディア・ノ
バ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、温度３
０℃、撹拌数２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時
間後に下記の表２に示した組成の培地２．５Lを含む５L
ジャーファーメンターに植菌し（植菌量２％）、温度３
０℃、撹拌数２５０r.p.m.、通気量０．８v/v/mで撹拌
培養を行った。培養開始から２日後にＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を最終濃度で０．５mg/mLになるように添加
して、更に３日間培養した。培養終了後に得られた培養
液中のプラバスタチン濃度をＨＰＬＣ分析により定量し
たところ、約０．３７mg/mLであり、ＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩からの変換率で約７４％であった。
【００２０】
【表２】 培地組成
【００２１】培養終了後、変換培養液をろ過し、得られ
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ３に調整した。ｐＨ調
整したろ液約２．２Lを酢酸エチル約２Lで２回抽出し、
その後飽和食塩水４Lで洗浄した。酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、ろ過後濃縮し１Lとして、触
媒量のトリフルオロ酢酸を添加してラクトン化した。次
に、ラクトン化した酢酸エチル層を５％炭酸水素ナトリ
ウム溶液１Lで２回洗浄し、酢酸エチル層を無水硫酸ナ
トリウムで脱水後、減圧乾固した。この乾固物をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーに供し、プラバスタチン
のラクトン体を含む画分を分取した。得られた画分をさ
らに逆相のＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC18 UG1
20）にて分離分取し、プラバスタチンのラクトン体を４
３３ｍｇ得た。
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ３に調整した。ｐＨ調
整したろ液約２．２Lを酢酸エチル約２Lで２回抽出し、
その後飽和食塩水４Lで洗浄した。酢酸エチル層を無水
硫酸ナトリウムで脱水後、ろ過後濃縮し１Lとして、触
媒量のトリフルオロ酢酸を添加してラクトン化した。次
に、ラクトン化した酢酸エチル層を５％炭酸水素ナトリ
ウム溶液１Lで２回洗浄し、酢酸エチル層を無水硫酸ナ
トリウムで脱水後、減圧乾固した。この乾固物をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーに供し、プラバスタチン
のラクトン体を含む画分を分取した。得られた画分をさ
らに逆相のＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC18 UG1
20）にて分離分取し、プラバスタチンのラクトン体を４
３３ｍｇ得た。
【００２２】
【実施例４】実施例１に示す培地組成の培地５０mLを含
有する５００mL容三角フラスコ１本にノカルディア・ノ
バ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、温度３
０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時間後に
実施例３と同様の培地組成の培地２．５Lを含む５Lジャ
ーに植菌し（植菌量２％）、温度３０℃、撹拌数２５０
r.p.m.、通気量０．８v/v/mで撹拌培養を行った。培養
開始から２日後にＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を最終濃
度で０．５mg/mLになるように添加して、更に４日間撹
拌培養した。この間、グルコース濃度を１％、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩濃度が０．５mg/mLになるようにフ
ィード培養を行った。その結果、培養終了後に得られた
培養液中のプラバスタチン濃度をＨＰＬＣ分析により定
量したところ、約１．１mg/mLであり、ＭＬ−２３６Ｂ
ナトリウム塩からの変換率で約７３％であった。
有する５００mL容三角フラスコ１本にノカルディア・ノ
バ (Nocardia nova)ＧＳ９３２５２株を植菌し、温度３
０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培養し、４８時間後に
実施例３と同様の培地組成の培地２．５Lを含む５Lジャ
ーに植菌し（植菌量２％）、温度３０℃、撹拌数２５０
r.p.m.、通気量０．８v/v/mで撹拌培養を行った。培養
開始から２日後にＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を最終濃
度で０．５mg/mLになるように添加して、更に４日間撹
拌培養した。この間、グルコース濃度を１％、ＭＬ−２
３６Ｂナトリウム塩濃度が０．５mg/mLになるようにフ
ィード培養を行った。その結果、培養終了後に得られた
培養液中のプラバスタチン濃度をＨＰＬＣ分析により定
量したところ、約１．１mg/mLであり、ＭＬ−２３６Ｂ
ナトリウム塩からの変換率で約７３％であった。
【００２３】培養終了後、変換培養液をろ過し、得られ
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ４に調整した。ｐＨ調
整したろ液約３．３LをダイヤイオンHP-20（三菱化成社
製）に吸着させ、水洗後、アセトン/０．２N ＮａＯＨ
＝５０/５０で溶出し、アセトンをエバポレーターで留
去し、ｐＨ８．０に調整後濃縮した。再びトリフルオロ
酢酸でｐＨ４に調整し、酢酸エチル２Lで２回抽出し、
飽和食塩水４Lで洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナ
トリウムで脱水、ろ過後濃縮し１Lとして、触媒量のト
リフルオロ酢酸を添加してラクトン化した。次にラクト
ン化した酢酸エチル層を５％炭酸水素ナトリウム溶液１
Lで２回洗浄し、酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで
脱水後、減圧乾固した。この乾固物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィーに供し、プラバスタチンのラクトン
体を含む画分を分取した。得られた画分をさらに逆相の
ＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC18 UG120）にて分
離分取して、プラバスタチンのラクトン体を１３４７ｍ
ｇ得た。
たろ液をトリフルオロ酢酸でｐＨ４に調整した。ｐＨ調
整したろ液約３．３LをダイヤイオンHP-20（三菱化成社
製）に吸着させ、水洗後、アセトン/０．２N ＮａＯＨ
＝５０/５０で溶出し、アセトンをエバポレーターで留
去し、ｐＨ８．０に調整後濃縮した。再びトリフルオロ
酢酸でｐＨ４に調整し、酢酸エチル２Lで２回抽出し、
飽和食塩水４Lで洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナ
トリウムで脱水、ろ過後濃縮し１Lとして、触媒量のト
リフルオロ酢酸を添加してラクトン化した。次にラクト
ン化した酢酸エチル層を５％炭酸水素ナトリウム溶液１
Lで２回洗浄し、酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで
脱水後、減圧乾固した。この乾固物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィーに供し、プラバスタチンのラクトン
体を含む画分を分取した。得られた画分をさらに逆相の
ＨＰＬＣカラム（資生堂 CapcellpakC18 UG120）にて分
離分取して、プラバスタチンのラクトン体を１３４７ｍ
ｇ得た。
【００２４】
【実施例５】実施例１に示す培地組成の培地１００mLを
含有する５００mL容三角フラスコ２０本にノカルディア
・ノバＧＳ９３２５２株を植菌し、３０℃、２１０r.p.
m.で回転振とう培養し、４８時間後にＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を最終濃度で０．５mg/mLになるように添加
して更に５日間、３０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培
養した。
含有する５００mL容三角フラスコ２０本にノカルディア
・ノバＧＳ９３２５２株を植菌し、３０℃、２１０r.p.
m.で回転振とう培養し、４８時間後にＭＬ−２３６Ｂナ
トリウム塩を最終濃度で０．５mg/mLになるように添加
して更に５日間、３０℃、２１０r.p.m.で回転振とう培
養した。
【００２５】培養終了後、培養液をろ過し、そのろ液を
ダイヤイオンHP-20に吸着させ、水洗後、５０％アセト
ンでプラバスタチンナトリウム塩を含有する画分を溶出
し、凍結乾燥物として９３６mgを得た。これをＨＰＬＣ
（カラム：資生堂CapcellpakC18 UG120、４０％メタノ
ール）により分取し、プラバスタチンナトリウム塩とし
て８１mgを得た。
ダイヤイオンHP-20に吸着させ、水洗後、５０％アセト
ンでプラバスタチンナトリウム塩を含有する画分を溶出
し、凍結乾燥物として９３６mgを得た。これをＨＰＬＣ
（カラム：資生堂CapcellpakC18 UG120、４０％メタノ
ール）により分取し、プラバスタチンナトリウム塩とし
て８１mgを得た。
【００２６】
【発明の効果】本発明は、当該微生物の培養液中にＭＬ
−２３６Ｂナトリウム塩を添加することにより、高い収
率でＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩をプラバスタチンに変
換し、かつ類縁化合物の少ない状態でプラバスタチンを
得ることの出来る点で有用である。本発明により、高脂
血症治療剤として有用なプラバスタチンとその塩、およ
びラクトン体を効率よく生産することが可能になった。
−２３６Ｂナトリウム塩を添加することにより、高い収
率でＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩をプラバスタチンに変
換し、かつ類縁化合物の少ない状態でプラバスタチンを
得ることの出来る点で有用である。本発明により、高脂
血症治療剤として有用なプラバスタチンとその塩、およ
びラクトン体を効率よく生産することが可能になった。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (3)
- 【請求項１】次の構造式（１） 【化１】 で示されるＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を、次の一般式
（２） 【化２】 で示されるプラバスタチンに変換する活性を有するノカ
ルディア属またはサッカロスリックス属に属する微生物
であるノカルディア・ノバ (Nocardia nova)ＧＳ９３２
５２株、またはサッカロスリックス・ムタビリス(Sacch
arothrix mutabilis)ＧＳ００４１２株（ＦＥＲＭ Ｐ
−１８５３４）。 - 【請求項２】請求項１に記載する微生物の培養液中にＭ
Ｌ−２３６Ｂナトリウム塩を添加し、プラバスタチンを
製造する方法。 - 【請求項３】請求項１に記載する微生物由来であって、
式（１）で表されるＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩を式
（２）で表されるプラバスタチンに変換する活性を有す
る酵素源を含む反応液中にＭＬ−２３６Ｂナトリウム塩
を添加し、プラバスタチンを製造する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001293575A JP2003093045A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | 有用変換微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001293575A JP2003093045A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | 有用変換微生物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003093045A true JP2003093045A (ja) | 2003-04-02 |
Family
ID=19115333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001293575A Pending JP2003093045A (ja) | 2001-09-26 | 2001-09-26 | 有用変換微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003093045A (ja) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5889191A (ja) * | 1981-11-20 | 1983-05-27 | Sankyo Co Ltd | ３−ヒドロキシ−ｍｌ−２３６ｂ誘導体の製造法 |
| JPH07184670A (ja) * | 1993-10-22 | 1995-07-25 | Bristol Myers Squibb Co | ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ抑制剤およびその中間体の酵素ヒドロキシル化製造法 |
| WO2000017182A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Lek Pharmaceutical And Chemical Company D.D. | PROCESS FOR OBTAINING HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS OF HIGH PURITY |
| WO2000017150A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Lek Pharmaceutical And Chemical Company D.D. | NEW SALTS OF HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS |
-
2001
- 2001-09-26 JP JP2001293575A patent/JP2003093045A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5889191A (ja) * | 1981-11-20 | 1983-05-27 | Sankyo Co Ltd | ３−ヒドロキシ−ｍｌ−２３６ｂ誘導体の製造法 |
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| WO2000017182A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Lek Pharmaceutical And Chemical Company D.D. | PROCESS FOR OBTAINING HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS OF HIGH PURITY |
| WO2000017150A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Lek Pharmaceutical And Chemical Company D.D. | NEW SALTS OF HMG-CoA REDUCTASE INHIBITORS |
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