RO121116B1

RO121116B1 - Procedeu pentru obţinerea inhibitorilor reductazei hmg-coa

Info

Publication number: RO121116B1
Application number: ROA200100289A
Authority: RO
Inventors: Rok Grahek; Dusan Milivojevic; Andrej Bastarda
Original assignee: Lek Pharmaceutical And Chemical Company D.D.
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1999-09-17
Publication date: 2006-12-29
Also published as: SK20022000A3; IL142056A; IS5886A; PL200336B1; CN1318063A; HRP20010045B1; RS49996B; DE69922519T2; AU5528499A; DE69922519D1; ATE284396T1; KR20010099584A; NZ509582A; JP3795755B2; JP2002526486A; EP1114040A1; US6695969B1; YU81800A; RU2235098C2; SI20072A

Abstract

Invenţia se referă la un procedeu la scară industrială, pentru obţinerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA, utilizaţi ca agenţi antihipercolesterolemici, cu puritate mai mare de 99,7%, prin metoda cromatografiei de deplasare. Procedeul pentru obţinerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA, conform invenţiei, prevede că cel puţin una dintre etapele procedeului de purificare a inhibitorilor reductazei HMG-CoA în stare brută include cromatografia de deplasare, care implică utilizarea unuiagent de deplasare pentru deplasarea inhibitorului şi care conduce la obţinerea inhibitorului reductazei HMG-CoA cu o puritate HPLC mai mare de 99,7%.

Description

Invenția se referă la un procedeu de obținere a inhibitorilor de reductază HMG-CoA, de înaltă puritate, utilizați ca agenți antihipercolesterolemici.

Lovastatin-ul, Pravastatin-ul, Simvastatin-ul, Mevastatin-ul, Atorvastatin-ul și derivații și analogii acestora sunt cunoscuți ca inhibitori ai reductazei HMG-CoA, și sunt folosiți ca agenți antihipercolesterolemici. Majoritatea acestora sunt produși prin fermentare, folosind microorganisme de diferite specii, identificate ca specii aparținând genului Aspergillus, monascus, Nocardia, Amycollatopsis, Mucor sau Penicillium, altele sunt obținute prin tratarea produșilor de fermentație, folosind metoda sintezei chimice sau sunt produși de sinteză chimică totală.

Puritatea ingredientului activ este un factor important pentru fabricarea unui produs farmaceutic, eficient și sigur. Puritatea avansată a unui produs este importantă, în special dacă produsul farmaceutic trebuie să fie administrat pe o perioadă lungă, așa cum este cazul în tratamentul sau prevenirea hipercolesterolemiei. Acumularea în organism a impurităților din produsele farmaceutice cu puritate inferioară poate produce efecte secundare, în timpul tratamentului medical.

Procedeele pentru izolarea și purificarea agenților antihipercolesterolemici cunoscute includ o varietate de combinații de metode de extracție, cromatografie, lactonizare și cristalizare. Puritatea produsului final, obținut prin aceste procedee, este în conformitate cu standardele, dar randamentele în produsul dorit sunt relativ scăzute. în plus, acestea necesită atât cantități mari de solvenți organici, cât și echipament adecvat pentru aceste cantități.

Astfel, este cunoscut un procedeu de izolare, care asigură obținerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA cu puritate mai mare de 99,5%, cu utilizarea echipamentului industrial de cromatografie de lichid de înaltă performanță (HPLC). Conform cu WO 92/16276, inhibitorul reductazei HMG-CoA brut, cu o puritate mai mare sau egală cu 85%, se dizolvă într-un solvent organic sau într-o soluție de solvent organic și apă. Amestecul este apoi tamponat la un pH între 2 și 9, și se introduce într-o coloană HPLC. După colectarea fracției corespunzătoare pic-ului de interes al inhibitorului reductazei HMG-CoA, o parte din solvent se îndepărtează și se adaugă apă, sau alternativ, două treimi din amestecul de solvent suntîndepărtate și inhibitorul reductazei HMG-CoA este cristalizat. La sfârșit, puritatea produsului obținut prin acest procedeu este de cel puțin 99,5%, cu un randament de aproximativ 90% (WO 92/16276).

Deși metoda prezentată în WO 92/16276 dă posibilitatea obținerii inhibitorilor reductazei HMG-CoA de înaltă puritate, cu randamente relativ ridicate, dezavantajul metodei față de coloanele cromatografice convenționale îl constituie cantitățile relativ mici de substanță încărcată în coloana HPLC. Probele mici, alimentate în coloană, sunt legate de numărul crescut de repetări ale operațiilor de izolare, pentru a se obține cantități suficiente de substanță dorită și, ca urmare, cantitatea mare de solvenți, folosită, duce la costuri de producție mai înalte.

Cromatografia de deplasare se bazează pe competiția componentelor probei alimentate în coloană, pentru pozițiile active de pe faza staționară. Componentele individuale ale probei deplasează unul pe altul ca un teren, agentul de deplasare, având afinitate foarte ridicată pentru faza staționară și venind în urma probei alimentate de-a lungul coloanei, produce separarea componentelor probei, în zone cu un compartiment care se deplasează cu aceeași viteză ca și agentul de deplasare. Concentrarea componentelor individuale este efectuată simultan cu purificarea.

Principiul metodei cromatografiei de deplasare este relativ vechi, cum se cunoaște din 1943, dar s-a introdus în practică în 1981, din cauza lipsei coloanelor eficiente (Compus. Horvath ș.a., J. Chromatogr., 215 (1981) 295; J. Chromatogr., 330 (1995) 1; J. Chromatogr.,

RO 121116 Β1

440 (1988) 157). Aceste lucrări, incluse în prezenta invenție prin referință, descriu separarea 1 analitică și preparativă și purificarea peptidelor active biologic și a antibioticelor polimixin (polipeptide), folosind coloane de cromatografie de înaltă performanță cu fază inversă, ope- 3 rate în manieră de deplasare. Pentru Coloanele cu polimixin octadecil silicagel de

250 x 4,6 mm, dimensiunea particulei de 5 pm, s-a folosit ca fază mobilă 10% acetonitril în 5 apă și diferite halogenuri de tetraalchilamoniu ca agent de deplasare.

în cercetări recente în domeniul cromatografiei de deplasare (S. M. Cramer ș.a., 7

Enzyme Microb. Technol., 11 (1989) 74; Prep. Chromatogr., 1 (1988) 29; J. Chromatogr.,

394 (1987) 305; J. Chromatogr., 439 (1988) 341; J. Chromatogr., 454 (1988) 1 (optimizare 9 teoretică); A. Felingerș.a., J. Chromatogr., 609 (1992) 35 (optimizare teoretică), toate lucrările fiind incluse ca referință, s-au folosit coloane similare; faza mobilă fiind metanol în tam- 11 pon fosfat, agentul de deplasare 2-(2-t-butoxietoxi)etanol (BEE) în acetonitril și acetat de sodiu. Ca probe, s-au folosit diferite peptide, proteine și antibioticul cefalosporină C. 13

Este cunoscută metoda de purificare a unor peptide cu masă moleculară scăzută (sub 1000 daltoni) (în special, tuftsin și derivați sintetici ai acestuia) prin cromatografie cu 15 schimb ionic cu deplasare, în care faza staționară folosită a fost rășină schimbătoare de cationi, solventul transportor fiind apa sau soluții diluate ale unei varietăți de acizi tari și agentul 17 de deplasare folosit fiind sarea trietilentetraamoniu la diferite concentrații. în cererea de brevet US 08/875422, nepublicată, este descrisă utilizarea cromatografiei de deplasare 19 pentru izolarea și purificarea vancomicinei (US 5043423 (27.08.1991) și EP 416416).

Este cunoscut un procedeu de purificare a inhibitorilor de reductază HMG-CoA, prin 21 cromatografia de lichid de înaltă performanță, pentru a conduce la un produs cu o puritate de cel puțin 99,5% (EP 0578723), fără utilizarea unui agent de deplasare. 23

De asemenea, este cunoscut un procedeu de purificare a inhibitorilor de reductază HMG-CoA, prin metoda cromatografiei HPLC și cromatografiei de eluare, fără utilizarea unui 25 agent de deplasare (US 4231938).

Este cunoscută o metodă de purificare a compușilor cu greutate moleculară mică, cu 27 structură peptidică sau pseudopeptidică, prin cromatografie de deplasare, în care faza staționară este mai întâi echilibrată cu un solvent cunoscut ca agent de transport cu afinitate 29 redusă pentru faza staționară și care are capacitatea de a dizolva componentele amestecului, care urmează a fi separate sau purificate (EP 0416416). 31

Dezavantajul acestei metode îl constituie randamentul cromatografie care este de 85%.33

Este cunoscut un procedeu de separare a unui amestec de componente dizolvate într-un purtător, prin cromatografie de deplasare, utilizând un agent de deplasare cunoscut, 35 cu afinitate mare pentru faza staționară (EP 0754083).

De asemenea, este cunoscut efectul de deplasare în cromatografia multicomponente,37 care se întâlnește în trei metode cromatografice, respectiv frontal, prin eluare și deplasare, care utilizează concentrații mari și volume mari de probe (AIChE Journal, 36 (1990), nr. 8,39 pag. 1156...1161).

Este dificilă uneori obținerea pe scară mare, a substanței active de înaltă puritate, 41 deoarece multe tehnologii aplicabile la scară de laborator nu sunt suficient de economice în producția pe scară mare, pentru a justifica utilizarea acestora sau tehologiile nu satisfac 43 criteriile impuse pe protecția mediului. Cele menționate impun căutarea unor noi tehnologii, care să asigure atât un produs de calitate înaltă, cât și o producție acceptabilă economic și 45 ecologic.

Problema tehnică, pe care o rezolvă invenția, constă în obținerea inhibitorilor 47 reductazei HMG-CoA de înaltă puritate, la scară industrială.

RO 121116 Β1

Astfel, invenția de față se referă la un procedeu pentru obținerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA, care prevede că cel puțin una dintre etapele procedeului de purificare a inhibitorilor reductazei HMG-CoA în stare brută include cromatografia de deplasare, care implică utilizarea unui agent de deplasare, pentru deplasarea inhibitorului și care conduce la obținerea inhibitorului reductazei HMG-CoA, cu o puritate HPLC mai mare de 99,7%.

Prezenta invenție a rezolvat dezavantajele procedeelor cunoscute din brevetele anterioare și din alte documente din literatură, deoarece permite obținerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA puri și, în plus, procedeul de purificare ca atare nu este consumator de timp, permițând obținerea de randamente ridicate, prin folosirea unor cantități mici de solvent.

Inhibitorul reductazei HMG-Coa care trebuie purificat este, de exemplu, ales din grupa care conține Mevastatin, Pravastatin, Lovastatin, Simvastatin, Fluvastatin și Atorvastatin. Inhibitorul ales poate fi sub formă de lactonă sau sub formă de acid sau sare a acestuia, pentru a fi purificat prin cromatografie de deplasare.

Cromatografia de deplasare, fiind caracteristică pentru procedeul prezentei invenții, include, de preferință, următoarele etape:

a) condiționarea unei coloane cromatografice, cu o fază mobilă adecvată;

b) alimentarea inhibitorului reductazei HMG-CoA brut, dizolvat în faza mobilă;

c) introducerea agentului de deplasare pentru a deplasa inhibitorul reductazei HMG-CoA din coloană și

d) obținerea inhibitorului reductazei HMG-CoA purificat care este de preferință obținut, prin:

d1) colectarea fracțiilor și d2) analiza fracțiilor prin HPLC analitic și comasarea fracțiilor în funcție de gradul de puritate.

După ce s-a obținut inhibitorul reductazei HMG-CoA purificat, coloana cromatografică poate fi regenerată prin spălarea coloanei cu amestec de alcool/apă pentru a elua agentul de deplasare.

Inhibitorii reductazei HMG-CoA, obținuți în modul descris, sunt apoi separați din faza mobilă, conform metodelor cunoscute din stadiul tehnicii, de exemplu, prin Iiofilizare sau, de preferință, prin cristalizare, pentru a obține forma lactonică, forma acidă sau cea de sare (de preferință, săruri alcaline sau alcalino-pământoase) a acestora. Fracțiile care conțin un procent considerabil de inhibitori ai reductazei HMG-CoA, pe lângă impurități, pot fi supuse din nou procedeului, conducând la un randament final care depășește 95%.

Faza staționară, folosită, este inversă când sunt adecvate faze staționare naturale (silicagel cu catene alchil de diferite lungimi) sau sintetice (C-18 sau C-8 organice). De preferință, se folosește o matrice de polimer sintetic, reticulat, de stiren și divinilbenzen. Mărimea adecvată a particulei fazei staționare este de la 3 la 20 pm, de preferință, între 7 și 15 pm.

Faza mobilă, folosită, este aleasă, de preferință, dintre apă, soluție acetonitril/apă și soluții apoase ale alcoolilor inferiori (de preferință, C.|-C₄), soluții diluate, tamponate, ale acizilor organici halogenați sau ale acizilor anorganici, de exemplu, acizi: formic, acetic, propionic, clorhidric, boric, fosforic, carbonic sau sulfuric, cu cationi ai metalelor alcaline, cu amoniac sau cu amine. Sunt preferate, în mod deosebit, apa și soluțiile apoase, cu acetonitril și, în special, cu metanol sau etanol, și conținutul de solvent organic, din soluțiile apoase, este de preferință 80% sau mai mic, mai preferat, 45% sau mai mic și, în special, 305 sau mai mic. Deoarece metanolul toxic din faza mobilă poate fi înlocuit cu etanol, care este mai puțin toxic, sau poate fi cel puțin parțial înlocuit cu apă, cu rezultate bune, îndepărtarea solvenților reziduali este mai simplă, motiv pentru care prezenta invenție constituie o îmbunătățire remarcabilă din punct de vedere ecologic, comparativ cu stadiul cunoscut.

RO 121116 Β1

Valoarea pH-ului fazei mobile, folosit, este de preferință între 4,5 și 10,5, mai preferat, 1 între 6,5 și 8 și, în special, în jurul valorii 7. Debitul fazei mobile prin coloană este ajustat să fie între 1,5 și 30 ml /(min/cm²), de preferință, între 3 și 15 ml/(min/cm²). în momentul intra- 3 ducerii agentului de deplasare în coloana cromatografică, pentru a fi amestecat cu faza mobilă, debitul este de preferință ajustat să fie între 1,5 și 15 ml/(min/cm²) și, în special, între 5 3 și 10 ml/(min/cm²), deoarece debite mai mari produc dilatarea probelor care trebuie colectate și se îngreunează și separarea. 7

Agentul de deplasare, adecvat, este un compus cu o structură amfifilică, cum ar fi agenții activi de suprafață, detergenții ș.a. Exemple de agent de deplasare sunt alcoolii cu 9 catenă lungă, acizii carboxilici cu catenă lungă, săruri de alchil amoniu cu catenă lungă, esteri ai acizilor dicarboxilici aromatici, oxo- și dioxo-alcooli, poliaril sau polialchilen poliaril 11 eteri ca Triton®X-100 etc. Termenul de „catenă lungă reprezintă o catenă alchil, având cel puțin o catenă C₄, de preferință, cel puțin o catenă C₁₀ și, mai preferat, cel puțin o catenă C₁₄ 13 sau mai lungă.

Concentrația agentului de deplasare în fază mobilă este ajustată în mod adecvat de 15 la 1 la 35%, de preferință, de la 2 la 20% și, în special, de la 7 la 14%.

în realizarea preferată de control al calității purității în fracțiile individuale, eluate din 17 coloana cromatografică, se poate folosi o metodă HPLC analitică pentru inhibitorii reductazei HMG-CoA de analizat, în modul descris în continuare. Proba de analizat se diluează de 100 19 ori cu faza mobilă care conține 20 mM soluție apoasă de NH₄HCO₃ cu acetonitril (proporția de acetonitril este ajustată, astfel că factorul de retenție a analitului este între 5 și 10). O 21 cantitate de 10 pl din probă se introduce în coloana Hypersil ODS (Hypersil, Regatul Unit, mărimea particulei 3 pm, dimensiunea coloanei 50 x 4,6 mm) pentru cromatografia lichidă 23 de înaltă performanță. Coloana se spală cu faza mobilă la un debit de 2 ml/min. Absorbanta se măsoară la 235 nm. Puritatea HPLC a probei se calculează din raportul dintre suprafețele 25 pic-urilor individuale din cromatogramă.

După terminarea cromatografiei, faza staționară este de preferință regenerată, de 27 exemplu, folosind faza mobilă, cu soluție apoasă de la 20 la 100% alcool inferior.

Invenția prezintă următoarele avantaje:29

- obținerea la scară industrială a inhibitorilor reductazei HMG-CoA, cu atingerea unei purități care depășește puritățile atinse în procedeele prezentate în stadiul tehnicii;31

- obținerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA cu înaltă puritate, cu randamente ridicate, cu costuri de producție scăzute și cu un echilibru ecologic adecvat;33

- procedeul de obținere a inhibitorilor reductazei HMG-CoA cu înaltă puritate este ușor de realizat și nu necesită spații mari de desfășurare și consumuri energetice ridicate, 35 permițând astfel o producție economică, la scară mare.

Se dau, în continuare, 14 exemple de realizare a invenției.37

Exemplul 1. Sarea de sodiu brută a Pravastatinei (1,0 g, puritate HPLC 88%, analiză 85%) se dizolvă în 10 ml fază mobilă A (apă distilată), pH-ul se ajustează la 7, cu soluție 39 apoasă 0,2M NaOH și se filtrează. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul descris se alimentează în coloana Grom-Sil 120-ODSHE (Gram Analytic + HPLC 41 Gmbh, Germania), mărimea particulei 11 pm, dimensiunea coloanei 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, conținând 7% dietilenglicol monobutileter în faza mobilă A, la 43 debitul de 4,5ml/min. Se măsoară absorbanta la 260 nm și se colectează fracții de 0,5 ml cu o creștere inițială în absorbantă. Când scade semnalul, se spală coloana cu 25 ml metanol 45 70%. Fracțiile obținute se analizează prin metoda analitică HPLC, descrisă mai sus. Fracțiile cu o puritate L 99,5% se comasează. în fracțiile comasate (7 ml), puritatea HPLC a fost de 47 99,8%.

RO 121116 Β1

Exemplul 2. Sarea de sodiu brută a Pravastatinei (0,4 g, puritate HPLC 88%, analiză 85%) se dizolvă în 5 ml fază mobilă A (apă distilată), pH-ul se ajustează la 7, cu soluție apoasă 0,2M de NaOH și se filtrează. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul descris se alimentează pe coloana Kromasil 100 C-18 (EKA Chemicals AB, Suedia), mărimea particulei 10 pm, dimensiunea coloanei 200 x 10 nm. Coloana se spală cu faza mobilă B, conținând 7% Triton X-100 în faza mobilă A, la debitul de 1 ml/min. Se măsoară absorbanta la 260 nm și se colectează fracții de 0,5 ml, cu o creștere inițială în absorbantă. Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate (3 ml), puritatea HPLC a fost de 99,7%.

Exemplul 3.0,6 g sare de sodiu brută a Pravastatinei se dizolvă în 5 ml apă distilată. Se folosește protocolul descris în exemplul 1, cu excepția fazei mobile folosită (soluție metanolică apoasă 30%) și se obțin fracțiile comasate, cu o puritate HPLC de 99,8%.

Exemplul 4. Metoda descrisă în exemplul 3 se repetă, în care concentrația agentului de deplasare în faza mobilă este de 14%. în fracțiile comasate, conform criteriului descris în exemplul 1, puritatea HPLC este de 99,8%.

Exemplul 5. Pravastatin lactona (0,4 g, puritate HPLC 85%) se dizolvă în 33 ml fază mobilă A care conține 45% metanol. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul de mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei de 11 pm, dimensiunea coloanei 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 2% dietilenglicolbutileter în faza mobilă A, la un debit de 4,5 ml/min. Se măsoară absorbanta la 260 nm și fracții de 1 ml se colectează, cu o creștere inițială a absorbantei. La scăderea semnalului, coloana se spală cu 25 ml metanol 70%.

Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC este de 99,7%.

Exemplul 6. Pravastatin lactona (0,3 g, puritate HPLC 85%) se dizolvă în 80 ml fază mobilă A, care conține 30% metanol. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul de mai sus se alimentează într-o coloană Licrosphere RP 18, mărimea particulei 12 pm, dimensiunea coloanei 200 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 5% dietilenglicolmono-n-hexileter în faza mobilă A, la un debit de 4,5 ml/min. Se măsoară absorbanta la 235 nm și fracții de 1 ml se colectează, cu o creștere inițială a absorbantei. La scăderea semnalului, coloana se spală cu 25 ml metanol 90%. Fracțiile obținute se analizează prin metoda analitică HPLC, descrisă mai sus.

Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC este de 99,8%.

Exemplul 7. Pravastatin lactona (0,3 g, puritate HPLC 85%) se dizolvă în 25 ml fază mobilă A, care conține 35% acetonitril. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul de mai sus se alimentează într-o coloană Licrosphere RP 18, mărimea particulei 12 pm, dimensiunea coloanei 200 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 1% dietilenglicolbutileter în faza mobilă A, la debit de 4,5 ml/min. Se măsoară absorbanta la 235 nm și fracții de 1 ml se colectează, cu o creștere inițială în absorbantă. La scăderea semnalului, coloana se spală cu 25 ml metanol 90%. Fracțiile obținute se analizează prin metoda analitică HPLC, descrisă mai sus.

Exemplul 8. Se repetă metoda descrisă în exemplul 7, în care faza mobilă B este 0,85 dietilftalat în faza mobilă A.

RO 121116 Β1

Exemplul 9. Simvastatin lactona (0,42 g, puritate HPLC 87%) se dizolvă în 6 ml 1 acetonitril 66% și se hidrolizează cu 1,2 mmol hidroxid de sodiu. Acetonitrilul se îndepărtează și pH-ul se ajustează la 7, cu H₃PO₄ diluat. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A, care 3 conține 14% metanol. Proba obținută în modul de mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic+ HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, 5 dimensiunea coloanei 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 6,7% dietilenglicolmono-n-hexileter în faza mobilă A, la debit de 4,5 ml/min. Se măsoară absor- 7 banta la 260 nm și fracții de 0,5 ml se colectează, cu o creștere inițială în absorbantă. La scăderea semnalului, coloana se spală cu 25 ml metanol. 9

Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC este de 99,8%. 11

Exemplul 10. Simvastatin lactona (0,5 g, puritate HPLC 87%) se dizolvă în 20 ml fază mobilă, care conține 70% metanol. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba 13 obținută în modul de mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, dimensiunea coloanei 15 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 3% acid decanoic în faza mobilă A, la un debit de 4,5 ml/min. Se măsoară absorbanta la 260 nm și fracții de 0,75 ml 17 se colectează, la o creștere inițială a absorbantei. La scăderea semnalului, coloana se spală 25 ml metanol. 19

Fracțiile obținute se analizează prin metoda descrisă anterior. Fracțiile cu o puritate >99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea este de 99,7%. 21

Exemplul 11. Simvastatin lactona (0,5 g, puritate HPLC 87%) se dizolvă în 20 ml fază mobilă, care conține 60% acetonitril. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba 23 obținută în modul descris mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, dimensiunea coloanei 25 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 2% bromură de tetrakis(decil)amoniu în faza mobilă A, la debitul de 4,5 ml/min. Absorbanta se măsoară la 27 260 nm și se colectează fracții de 1 ml, cu o creștere inițială în absorbantă. Când semnalul scade, se spală coloana cu 25 ml metanol. 29

Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC este de 99,8%. 31

Exemplul 12. Lovastatin lactona (0,5g, puritate HPLC 87%) se dizolvă în 60 ml metanol 75%. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A, care conține 70% metanol. Proba 33 obținută în modul descris mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, dimensiunea coloanei 35 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 70% metanol și 4,5% acid decanoic în faza mobilă A, la debitul de 6 ml/min. Absorbanta se măsoară la 260 nm și se 37 colectează fracții de 1 ml, cu o creștere inițială în absorbantă. Când semnalul scade, se spală coloana cu 25 ml metanol. 39

Fracțiile obținute se analizează prin metoda analitică HPLC, descrisă mai sus.

Fracțiile cu o puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC 41 este de 99,9%.

Exemplul 13. Lovastatin lactona (0,42 g, puritate HPLC 87%) se dizolvă în 8 ml 43 acetonitril 50% și se hidrolizează cu 1,5 mmoli hidroxid de sodiu. Acetonitrilul se îndepărtează și pH-ul se ajustează la 7, cu H₃PO₄. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A, care 45 conține 14% metanol. Proba obținută în modul descris mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODSHE(Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, 47 dimensiunea coloanei 250 x 10 mm.

RO 121116 Β1

Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 6,7% dietilenglicolmono-n-hexileter în faza mobilă A, la debitul de 1 ml/min. Absorbanta se măsoară la 260 nm și se colectează fracții de 0,25 ml, cu o creștere inițială în absorbantă. Când semnalul scade, se spală coloana cu 25 ml metanol.

Fracțiile obținute se analizează prin metoda descrisă în exemplul 9.

Fracțiile cu puritate > 99,5% se comasează. în fracțiile comasate, puritatea HPLC este de 99,8%.

Exemplul 14. Mevastatin lactona (0,5 g, puritate HPLC 85%) se dizolvă în 150 ml fază mobilă A, care conține 70% metanol. Coloana se echilibrează cu faza mobilă A. Proba obținută în modul descris mai sus se alimentează într-o coloană Grom-Sil 120-ODS HE (Grom Analytic + HPLC GmbH, Germania), mărimea particulei 11 pm, dimensiunea coloanei 250 x 10 mm. Coloana se spală cu faza mobilă B, care conține 4,5% acid decanoic în faza mobilă A, la debitul de 6 ml/min.

Absorbanta se măsoară la 260 nm și se colectează fracții de 1 ml, cu o creștere inițială în absorbantă. Când semnalul scade, se spală coloana cu 25 ml metanol.

Fracțiile obținute se analizează prin metoda analitică, descrisă mai sus.

Exemplele care ilustrează procedeul prezentei invenții nu limitează invenția prezentată, așa cum este aceasta revendicată.

Claims

Revendicări

1. Procedeu pentru obținerea inhibitorilor reductazei HMG-CoA, caracterizat prin aceea că una dintre etapele procedeului de purificare a inhibitorilor reductazei HMG-CoA brute include cromatografia de deplasare, care implică utilizarea unui agent de deplasare, pentru deplasarea inhibitorului reductazei HMG-CoA și care conduce la obținerea inhibitorului reductazei HMG-CoA, cu o puritate HPLC mai mare de 99,7%.
2. Procedeu conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că inhibitorul reductazei HMG-CoA este ales din grupa formată din Mevastatin, Pravastatin, Lovastatin, Simvastatin, Fluvastatin și Atorvastatin.
3. Procedeu conform revendicării 1 sau 2, caracterizat prin aceea că inhibitorul reductazei HMG-CoA este în formă lactonică sau în formă de acid sau de sare a acestuia.
4. Procedeu conform cu oricare dintre revendicările 1 la 3, caracterizat prin aceea că cromatografia de deplasare include următoarele etape:

- condiționarea unei coloane cromatografice cu o fază mobilă,

- alimentarea inhibitorului reductazei HMG-CoA, dizolvat în faza mobilă,

- introducerea agentului de deplasare, pentru deplasarea inhibitorului reductazei HMG-CoA din coloană, și

- obținerea inhibitorului reductazei HMG-CoA, purificat.
5. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că inhibitorul reductazei HMG-CoA, purificat, este obținut prin:

d1) colectarea fracțiilor și d2) analiza fracțiilor prin HPLC analitic și comasarea fracțiilor, în funcție de calitate și puritate.
6. Procedeu conform revendicării 4 sau 5, caracterizat prin aceea că cromatografia de deplasare include și următoarea etapă:

e) regenerarea coloanei cromatografice prin spălarea coloanei cu amestec alcool/apă, pentru eluarea agentului de deplasare.

RO 121116 Β1
7. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că faza mobilă este 1 aleasă din grupul de solvenți format din apă, soluție acetonitril/apă sau soluții apoase de alcooli inferiori, precum și soluții diluate, tamponate de acizi organici, acizi anorganici halo- 3 genați sau anorganici, cu cationi ai metalelor alcaline, cu amoniac sau cu amine.
8. Procedeu conform revendicării 7, caracterizat prin aceea că faza mobilă este 5 apa, o soluție acetonitril/apă sau o soluție apoasă de alcooli inferiori.
9. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că pH-ul fazei mobile 7 folosit este între 4,5 și 10.
10. Procedeu conform revendicării 9, caracterizat prin aceea că pH-ul fazei mobile 9 este între 6,5 și 8.
11. Procedeu conform revendicării 10, caracterizat prin aceea că pH-ul fazei mobile 11 este 7.
12. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că debitul fazei mobile, 13 prin coloana cromatografică, este între 1,5 și 30 ml/(min/cm²).
13. Procedeu revendicării 4, caracterizat prin aceea că debitul amestecului fază 15 mobilă/agent de deplasare, prin coloana cromatografică, este între 3 și 15 ml/țmin/cm²).
14. Procedeu conform revendicării 6, caracterizat prin aceea că faza staționară este 17 regenerată după terminarea cromatografiei, cu soluție apoasă 20 la 100% alcooli inferiori.
15. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că faza staționară este 19 o fază inversă.
16. Procedeu conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că faza staționară 21 este o fază inversă, naturală, cum ar fi silicagel cu catene alchil de diferite lungimi.
17. Procedeu conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că faza staționară 23 este fie C-18, fie C-8.
18. Procedeu revendicării 15, caracterizat prin aceea că faza staționară este o 25 matrice de polimer sintetic reticular.
19. Procedeu revendicării 18, caracterizat prin aceea că matricea de polimer sintetic 27 reticular este un copolimer de stiren și divinilbenzen.
20. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că mărimea particulei 29 fazei staționare este între 3 și 20 pm.
21. Procedeu conform revendicării 20, caracterizat prin aceea că mărimea particulei 31 fazei staționare este între 7 și 15 pm.
22. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că agentul de de- 33 plasare este ales din grupul format din alcooli cu catenă lungă, acizi carboxilici cu catenă lungă, săruri de alchil amoniu cu catenă lungă, esteri ai acizilor dicarboxilici aromatici, oxo- 35 și dioxo-alcooli, polialchilen poliglicol eteri și poliaril sau polialchilenpoliaril eteri.
23. Procedeu conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că, concentrația 37 agentului de deplasare în faza mobilă este între 1 și 35%.
24. Procedeu conform revendicării 23, caracterizat prin aceea că, concentrația 39 agentului de deplasare în faza mobilă este între 2 și 20%.