WO2021182575A1 - 白血球濃縮分離デバイス、血液採取容器及び白血球の分離方法 - Google Patents
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Abstract
Description
上記白血球濃縮分離デバイスは、上記容器本体内に収容された血球分離材を備える。上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された血球分離材を備える。上記血球分離材の25℃での比重は、1.075以上1.093以下である。上記血球分離材としては、血球分離用組成物、及び血球分離用冶具等が挙げられる。血球分離材の作製が容易であることから、上記血球分離材は、上記血球分離用組成物であることが好ましい。
上記血球分離用組成物は、遠心分離時に白血球と赤血球との間に移動して隔壁を形成する組成物である。また、上記血球分離用組成物は、遠心分離後に白血球層に赤血球が混入することを防止する目的で用いられる。上記血球分離用組成物は、チクソトロピー性を有することが好ましく、チクソトロピー性を有するゲル状組成物であることがより好ましい。上記白血球濃縮分離デバイスにおいて、上記血球分離用組成物は、上記容器本体の底部に収容されていてもよく、内壁面上に配置されていてもよい。本発明の効果をより一層効果的に発揮する観点から、上記血球分離用組成物は、上記容器本体の底部に収容されていることが好ましい。上記血液採取容器において、上記血球分離用組成物は、上記血液採取容器本体の底部に収容されていてもよく、内壁面上に配置されていてもよい。本発明の効果をより一層効果的に発揮する観点から、上記血球分離用組成物は、上記血液採取容器本体の底部に収容されていることが好ましい。
上記「25℃で流動性を有する」とは、25℃での粘度が500Pa・s以下であることを意味する。
上記無機微粉末としては、微粉末シリカ、酸化チタン粉末、酸化亜鉛粉末、炭酸カルシウム粉末、アルミナ粉末、ガラス微粉末、タルク粉末、カオリン粉末、ベントナイト粉末、チタニア粉末、及びジルコニウム粉末等が挙げられる。
上記血球分離用組成物は、本発明の効果を損なわない限り、上述した成分以外の他の成分を含んでいてもよい。上記血球分離用組成物は、例えば、上記他の成分として、有機ゲル化剤、熱可塑性エラストマー、ポリアルキレングリコール、シリコーンオイル、補助溶媒、酸化防止剤、着色剤及び水等を含んでいてもよい。上記他の成分はそれぞれ、1種のみが用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記血球分離用組成物の25℃での比重は、1.075以上1.093以下である。上記血球分離用組成物の25℃での比重は、好ましくは1.077以上、より好ましくは1.082以上、好ましくは1.090以下、より好ましくは1.088以下である。上記比重が上記下限以上及び上記上限以下であると、白血球の回収率がより一層高く、赤血球の混入量がより一層少ない検体を良好に得ることができる。
上記血球分離用冶具は、遠心分離時に白血球と赤血球との間に移動して隔壁を形成する冶具である。また、上記血球分離用冶具は、遠心分離後に白血球層に赤血球が混入することを防止する目的で用いられる。
上記構成A1を備える白血球濃縮分離デバイスは、上記容器本体内に収容された赤血球凝集剤を備える。上記構成A2を備える血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された赤血球凝集剤を備える。上記赤血球凝集剤として、従来公知の赤血球凝集剤を用いることができる。上記赤血球凝集剤は、1種のみが用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記構成B1を備える白血球濃縮分離デバイスは、上記容器本体内に収容された浸透圧調整剤を備える。上記構成B2を備える血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された浸透圧調整剤を備える。上記浸透圧調整剤として、従来公知の浸透圧調整剤を用いることができる。上記浸透圧調整剤は、1種のみが用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記白血球濃縮分離デバイスは、上記容器本体内に収容された抗凝固剤を備えることが好ましい。上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された抗凝固剤を備えることが好ましい。上記抗凝固剤として、従来公知の抗凝固剤を用いることができる。上記抗凝固剤は、1種のみが用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記白血球濃縮分離デバイスは、上記容器本体内に収容された酸化防止剤を備えることが好ましい。上記血液採取容器は、上記血液採取容器本体内に収容された酸化防止剤を備えることが好ましい。上記酸化防止剤を備えることにより、上記白血球濃縮分離デバイス及び上記血液採取容器を放射線滅菌する際の変性を効果的に抑えることができる。上記酸化防止剤として、従来公知の酸化防止剤を用いることができる。上記酸化防止剤は、1種のみが用いられてもよく、2種以上が併用されてもよい。
上記容器本体及び上記血液採取容器本体の形状としては、特に限定されないが、有底の管状容器であることが好ましい。
上記白血球濃縮分離デバイス及び上記血液採取容器は、栓体を備えることが好ましい。上記栓体として、従来公知の栓体を用いることができる。上記栓体は、容器本体の開口又は血液採取容器本体の開口に、気密的かつ液密的に取付けることが可能な素材、形状からなる栓体であることが好ましい。上記栓体は、採血針が刺通され得るように構成されていることが好ましい。
上記血液採取容器は、採血管であることが好ましい。上記血液採取容器本体は、採血管本体であることが好ましい。
本発明に係る白血球の分離方法は、上述した血液採取容器を用いた白血球の分離方法であって、上記血液採取容器内に血液を採取する工程と、上記血液が採取された上記血液採取容器を遠心分離する工程とを備える。上記白血球の分離方法は、血液から白血球を分離する方法である。上記白血球の分離方法は、血液から白血球を濃縮分離する方法である。
本発明に係る白血球濃縮分離システムは、所定量の血液由来試料が採取され、上記血液由来試料中に存在する白血球を濃縮分離するための白血球濃縮分離システムであって、25℃での比重が1.075以上1.093以下である血球分離材を備え、以下の構成A3、又は、構成B3を備える。
(メタ)アクリル系樹脂:
アクリル酸-2-エチルヘキシルとアクリル酸ブチルとをアゾ系重合開始剤の存在下で溶液重合法によりラジカル重合させ、25℃で流動性を有する(メタ)アクリル酸エステル系樹脂を得た。
石油樹脂(イーストマンケミカル社製「リガライトS5090」)
ジシクロペンタジエン樹脂1(コロン社製「スコレッツSU500」)
ジシクロペンタジエン樹脂2(コロン社製「スコレッツSU90」)
トリメリット酸エステル(ベンゼンポリカルボン酸アルキルエステル誘導体、DIC社製「モノサイザーW700」)
親水性シリカ(微粉末シリカ、日本アエロジル社製「200CF」)
疎水性シリカ(微粉末シリカ、日本アエロジル社製「R974」)
酸化チタン粉末(石原産業社製「A-100」)
シリコーンオイル(東レダウコーニング社製「SF8410」)
有機ゲル化剤(新日本理化社製「ゲルオールD」)
1-メチル-2-ピロリドン(補助溶媒)
表1,2に記載の配合割合で、25℃で流動性を有する有機成分と無機微粉末とその他の成分とを混合し、チクソトロピー性を有する血球分離用組成物A~Hを作製した。
デキストラン(重量平均分子量200000)
ヒドロキシエチルデンプン含有液(ニプロ社製「HES40」、重量平均分子量約40万のヒドロキシエチルデンプンを6w/v%の濃度で含有する水溶液)
ポリエチレングリコール(PEG 6K、富士フィルム和光純薬社製)
塩化ナトリウム
グルコース
エチレンジアミン四酢酸二カリウム塩二水和物(EDTA2K・2H2O)
アスコルビン酸ナトリウム
赤血球凝集剤、浸透圧調整剤、及び抗凝固剤を、水に溶解して、混合液を得た。得られた混合液の配合成分の種類及び配合量を表3に示す。なお、得られた混合液の浸透圧は血液と等張に調整されている。
血球分離用組成物の種類、並びに赤血球凝集剤、抗凝固剤、酸化防止剤及び浸透圧調整剤の配合量を表3~7のように変更したこと以外は、実施例1と同様にして、血液採取容器を作製した。なお、表中、ヒドロキシエチルデンプン含有液の配合量は、ヒドロキシエチルデンプンの含有量ではなく、ヒドロキシエチルデンプン含有液(市販品)の配合量で示した。また、得られた混合液の浸透圧は、血液と等張、もしくは高張に調整されている。
抗凝固剤を、水に溶解して、混合液を得た。
血球分離用組成物の種類を表7のように変更したこと以外は、比較例1と同様にして、血液採取容器を作製した。
(1)血球分離用組成物の25℃での比重
得られた血球分離用組成物1滴を、比重を0.002の間隔で段階的に調整した25℃の食塩水中に順次滴下し、食塩水中における浮沈により比重を測定した。
得られた血液採取容器に生理食塩水4mLを添加した。添加後、転倒混和して、生理食塩水で水溶性成分を溶解し、浸透圧測定用溶液を得た。得られた浸透圧測定用溶液の浸透圧を、浸透圧計(アークレイ社製「OM-6060」)を用いて、氷点降下法により測定した。
3名の血液を用意し、以下の工程を順に行った。
得られた血液採取容器の上記血液採取容器本体内に血液4mLを採取した。
血液採取容器を1500Gで15分間遠心分離した。
○:赤血球の混入率が2%以下
×:赤血球の混入率が2%を超える
○:白血球の回収率が40%以上
×:白血球の回収率が40%未満
2…血液採取容器本体
2a…内壁面
3…血球分離用組成物
4…混合液
4A…混合粉末
5…栓体
Claims (17)
- 所定量の血液由来試料が添加され、前記血液由来試料中に存在する白血球を濃縮分離するための白血球濃縮分離デバイスであって、
容器本体と、
前記容器本体内に収容された血球分離材とを備え、
前記血球分離材の25℃での比重が1.075以上1.093以下であり、
以下の構成A1、又は、構成B1を備える、白血球濃縮分離デバイス。
構成A1:前記容器本体内に収容された赤血球凝集剤を備える。
構成B1:前記容器本体内に収容された浸透圧調整剤を備え、前記白血球濃縮分離デバイスに添加される血液由来試料の所定量と等量の生理食塩水で、前記容器本体内に収容された水溶性成分を溶解して、浸透圧測定用溶液を得たときに、前記浸透圧測定用溶液の浸透圧が300mOsm/L以上500mOsm/L以下である。 - 所定量の血液が採取される血液採取容器であって、
血液採取容器本体と、
前記血液採取容器本体内に収容された血球分離材とを備え、
前記血球分離材の25℃での比重が1.075以上1.093以下であり、
以下の構成A2、又は、構成B2を備える、血液採取容器。
構成A2:前記血液採取容器本体内に収容された赤血球凝集剤を備える。
構成B2:前記血液採取容器本体内に収容された浸透圧調整剤を備え、前記血液採取容器に採取される血液の所定量と等量の生理食塩水で、前記血液採取容器本体内に収容された水溶性成分を溶解して、浸透圧測定用溶液を得たときに、前記浸透圧測定用溶液の浸透圧が300mOsm/L以上500mOsm/L以下である。 - 前記血球分離材が、チクソトロピー性を有する血球分離用組成物である、請求項2に記載の血液採取容器。
- 前記構成A2を備える、請求項2又は3に記載の血液採取容器。
- 前記赤血球凝集剤が、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン又はポリエチレングリコールである、請求項4に記載の血液採取容器。
- 前記デキストランの重量平均分子量が、50000以上である、請求項5に記載の血液採取容器。
- 前記構成B2を備える、請求項2又は3に記載の血液採取容器。
- 前記浸透圧測定用溶液の浸透圧が320mOsm/L以上360mOsm/L以下である、請求項7に記載の血液採取容器。
- 前記血球分離材の25℃での比重が1.082以上1.090以下であり、
前記浸透圧測定用溶液の浸透圧が320mOsm/L以上360mOsm/L以下である、請求項7又は8に記載の血液採取容器。 - 前記浸透圧調整剤が、塩化ナトリウム、又はグルコースである、請求項7~9のいずれか1項に記載の血液採取容器。
- 前記構成A2と前記構成B2とを備える、請求項2~10のいずれか1項に記載の血液採取容器。
- 前記血液採取容器本体内に収容された抗凝固剤を備える、請求項2~11のいずれか1項に記載の血液採取容器。
- 前記血液採取容器本体内に収容された酸化防止剤を備える、請求項2~12のいずれか1項に記載の血液採取容器。
- 前記酸化防止剤が、アスコルビン酸、又はアスコルビン酸の無機塩である、請求項13に記載の血液採取容器。
- 請求項1に記載の白血球濃縮分離デバイスを用いた白血球の分離方法であって、
前記白血球濃縮分離デバイスに血液由来試料を添加する工程と、
前記血液由来試料が添加された前記白血球濃縮分離デバイスを遠心分離する工程とを備える、白血球の分離方法。 - 請求項2~14のいずれか1項に記載の血液採取容器を用いた白血球の分離方法であって、
前記血液採取容器内に血液を採取する工程と、
前記血液が採取された前記血液採取容器を遠心分離する工程とを備える、白血球の分離方法。 - 所定量の血液由来試料が採取され、前記血液由来試料中に存在する白血球を濃縮分離するための白血球濃縮分離システムであって、
25℃での比重が1.075以上1.093以下である血球分離材を備え、
以下の構成A3、又は、構成B3を備える、白血球濃縮分離システム。
構成A3:赤血球凝集剤を備える。
構成B3:浸透圧調整剤を備え、前記血液由来試料の所定量と等量の生理食塩水で、前記血液由来試料と混合される水溶性成分を溶解して、浸透圧測定用溶液を得たときに、前記浸透圧測定用溶液の浸透圧が300mOsm/L以上500mOsm/L以下である。
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