WO2016026237A1

WO2016026237A1 - 一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法

Info

Publication number: WO2016026237A1
Application number: PCT/CN2014/092751
Authority: WO
Inventors: 曹莉; 韩日畴
Original assignee: 广东省昆虫研究所
Priority date: 2014-08-20
Filing date: 2014-12-02
Publication date: 2016-02-25
Also published as: US20160345554A1; US10412941B2; JP2017504353A; CN104322451B; CN104322451A; JP6143246B2

Abstract

一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，该方法主要包括：选用合适消毒液体表消毒蝙蝠蛾卵，然后将消毒好的卵放置于无菌的腐殖土中；以胡萝卜作为蝙蝠蛾幼虫的饲料，对胡萝卜进行消毒和饲喂检测，培养幼虫至获得雌雄蛹；鉴别蝙蝠蛾雌雄蛹，将雌雄蛹置于不同的培养温度中，雄蛹的培养温度低于雌蛹，温差为2-6℃，获得同步羽化的雌雄成虫；将羽化的雌雄成虫放置于成虫笼中，成虫笼中还放置有模拟植物，以供成虫交配和落脚，保持湿度80％以上，并施以50-100Lux的微光促进成虫的活动和交配，成虫交配后产卵，提高卵的受精机会和孵化率。本方法克服现有技术中蝙蝠蛾低海拔人工饲养过程中的污染、幼虫存活率低、雌雄蛹发育不一致、成虫交配机会低等问题。

Description

一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法

技术领域：

本发明属于昆虫养殖领域，具体涉及一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法。

背景技术：

冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis,异名Cordyceps sinensis)是我国最具特色的生物资源，隶属子囊菌门(Ascomycota)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、线虫草科(Ophiocordycipitaceae)、虫草属(Ophiocordyceps)，国内主要产于西藏、青海、云南、四川、甘肃等海拔3000米以上的雪山高寒山区。正宗的药用冬虫夏草是中国被毛孢(Ophiocordyceps sinensis)真菌感染寄主昆虫-蝙蝠蛾幼虫，并使其僵化，在适宜条件下感菌僵虫生长，形成具有虫(僵虫)草(真菌子实体)复合形态的结构。

冬虫夏草是我国药食同源佳品，具有“补肺、强肾、益精气、理诸虚百损”等众多功效。现代医学则把冬虫夏草视作天然免疫调节剂，是呵护人体健康的“天然大复方”。冬虫夏草可产生多种具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射及免疫调节等功能的生理活性物质，在医药、食品以及现代生物技术等方面具有广泛的应用，尤其在我国传统滋补品市场中占有非常重要的地位，一直被国民推崇和信赖，并在日本、韩国、东南亚国家和美国等国际市场热销。

资源的枯竭、需求的旺盛和政策的保护导致其市场价格飞涨。野生冬虫夏草已被列为国家二级保护物种。为了保护青藏高原生态、虫草资源，让冬虫夏草更好地为人类健康服务，唯一选择是人工培育。

冬虫夏草真菌的寄主昆虫蝙蝠蛾(鳞翅目蝙蝠蛾科Hepialidae)的人工繁殖是冬虫夏草人工培育的重要环节。据报道的蝙蝠蛾昆虫超过60种，分布于云南、西藏、四川、青海和甘肃。蝙蝠蛾为全变态昆虫，生活周期包括卵、幼虫、蛹和成虫阶段。最适宜的生长土壤为高寒草甸和高寒灌木丛土。尽管不同地区的蝙蝠蛾种类的生活史不同，但是总体来说有规律性。每年6-8月份蛹羽化成成虫，雌雄虫交配后，雌虫立即将卵散产于附近草丛中或灌丛植被中，一般每只雌蛾产卵 200-800粒。蝙蝠蛾幼虫在自然土壤中营隧道式生活，杂食性，主要以植物嫩根为食；幼虫期漫长，一般经过900-1300天7-9龄的生长发育期才能化蛹，且具有明显的世代交替现象；每年10月至次年4月冻土期蝙蝠蛾幼虫在土壤中处于休眠状态。每年5月下旬蝙蝠蛾幼虫开始形成蛹,蛹期经过1-3个月后羽化为成虫。在自然环境中蝙蝠蛾昆虫完成整个世代的周期受到种类、地理分布、食物、植被、土壤结构、温度、湿度和自然天敌等多种生态因子的综合控制。

在蝙蝠蛾昆虫人工饲养过程中，饲料质量、病原污染、幼虫存活率低、雌雄蛹发育期不一致、成虫交配机会不高等是关键的制约因素。

发明内容：

本发明的目的是提供一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法。

本发明的冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、卵期管理：取蝙蝠蛾成虫产下的卵，进行体表消毒，杀灭细菌和控制真菌，然后将消毒好的卵放置于无菌的腐殖土中；

卵期管理的最关键步骤是将成虫产下的卵进行体表消毒。合适的消毒液可清除卵体表的有害微生物，提高孵出幼虫的存活率。优选方法是将卵用无菌水清洗若干次后，再用消毒液消毒3-6分钟，再用无菌水清洗若干遍。所述的消毒液是在1000ml无菌水中加入150ml 4mol的NaOH溶液，50ml次氯酸钠(活性氯含量为≥7.5％)。本消毒方法既可杀灭细菌也可控制真菌。

本发明使用的昆虫培养介质是市购的腐殖土。腐殖土不含重金属污染，不仅具有良好的保湿作用，还可作为饥饿幼虫的取食物质。腐殖土的含水量一般为40％，本发明使用的腐殖土优选含水量为35-45％。腐殖土加入培养容器中(塑料瓶、玻璃瓶等)，经过高压消毒后(121℃，30-60分钟)可用于蝙蝠蛾昆虫的饲养。经消毒液消毒的卵置于上述腐殖土中。根据培养容器的体积加入不同量的腐殖土和昆虫卵，一般为每克腐殖土加入1粒卵。

b、幼虫期管理：以胡萝卜作为蝙蝠蛾幼虫的饲料，对胡萝卜进行消毒和饲喂检测，确保饲喂的胡萝卜是对蝙蝠蛾幼虫无害，获得雌雄蛹；

对幼虫有害的胡萝卜主要源于生产过程的残留农药，以及在生产和运输过程中可能携带的病原微生物，如白僵菌Beauveria bassiana、绿僵菌Metarhizium anisopliae、扩张拟青霉Penicillium expansum、虫草棒束孢Isaria farinosa和假单胞菌Pseudomonas sp.等。不管是检测农药残留还是病原微生物，优选方法是将无菌水清洗、体积分数75％乙醇水溶液清洗的胡萝卜切块后每根(或每批)取样饲喂蝙蝠蛾幼虫至少2天，检测胡萝卜是否对幼虫具有致死作用，其余胡萝卜低温保存待用；如果取样的胡萝卜未对幼虫产生危害，则低温保存的胡萝卜可用于饲喂幼虫。利用75％乙醇体表消毒胡萝卜在一定程度上减少病原菌、特别是细菌的数量。利用饲喂检测方法可避免有害胡萝卜对蝙蝠蛾幼虫的危害，提高幼虫存活率。

c、蛹期管理：鉴别蝙蝠蛾雌雄蛹，将雌雄蛹置于不同的培养温度中，即雄蛹的培养温度低于雌蛹，温差为2-6℃，从而使雄蛹的发育变缓、与雌蛹发育同步；

保证雌雄蛹同步羽化是蛹期管理的关键。同期羽化的雌雄虫是成功交配的前提条件。同时进入蛹期的雌雄蛹的羽化时间不一致，雄蛹的羽化时间一般早于雌蛹。本发明提供的方法是在正确鉴别蝙蝠蛾雌雄蛹的基础上，将雌雄蛹置于不同的培养温度中，即雄蛹的培养温度一般低于雌蛹，使雄蛹的发育变缓、与雌蛹发育同步。不同蝙蝠蛾种类的雌雄温度差不同，一般为2-6℃。

d、成虫期管理：将羽化的雌雄成虫放置于成虫笼中，成虫笼中还放置有模拟植物，以供成虫交配和落脚，保持湿度80％以上，并施以50-100Lux的微光促进成虫的活动和交配，成虫交配后产卵，收集卵。

成虫期管理的关键是促进雌雄虫的交配和雌虫顺利产卵。本发明采取的措施是利用植物状塑料制品，辅以微光(50-100Lux)促进成虫的活动和交配。

本发明提供的冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法可有效克服现有技术中蝙蝠蛾低海拔人工饲养过程中的污染、幼虫存活率低、雌雄蛹发育不一致、成虫交配机会低等问题，为冬虫夏草的规模化生产提供有效技术。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

本发明使用的蝙蝠蛾是采自云南剑川无钩蝠蛾(Thitarodes jianchuanensis)、四川贡嘎蝠蛾(Thitarodes gonggansis)、西藏和青海虫草钩蝠蛾(Thitarodes armoricanus)。

(1)卵期管理

于50ml玻璃瓶中加入10克含水量约为35-45％的市购腐殖土(特利夫公司播种用基质，白泥碳705)，高压消毒(121℃,60分钟)，置于9-16℃下冷却待用。

于低温(9-16℃)下，将蝙蝠蛾成虫于室内所产的卵收集在无菌塑料离心管(50ml)中，每管含约2万粒卵；将卵倒入无菌100目纱网中，以无菌水轻柔冲洗虫卵至少3遍；将装有虫卵的纱网置于200ml消毒液中消毒3-6分钟(根据不同蝙蝠蛾种类)，将纱网从消毒液中取出后分别以无菌水冲洗虫卵至少3遍；将消毒卵以每瓶10粒的量加入装有腐殖土的培养瓶中，根据培养容器的体积加入不同量的腐殖土和虫卵，一般为每克(含水量为35-45％)腐殖土加入1粒卵。置于9-16℃下观察卵的孵化。经过35-40天后，卵孵化，幼虫在腐殖土表面和其中活动。所述的消毒液是将15ml 4M NaOH溶液和5ml次氯酸钠溶液(活性氯含量≥7.5％)加入100ml无菌水中混合均匀而得到的。

取样(约30粒卵)加入LB(胰蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 5g，琼脂18g，pH＝7.2,加水至1000mL)和PPDA(葡萄糖20g，马铃薯200g，蛋白胨10g，KH₂PO₄3g，MgSO₄·7H₂O 1.5g，VB₁0.02g，琼脂粉15g，H₂O 1000mL，自然pH)培养基上，15℃和25℃各培养25天后，检查消毒效果；同时，将虫卵置于灭菌的9cm培养皿中(根据不同虫卵加入无菌水的滤纸保湿)16℃孵化，经过30-45天计算孵化率。结果证明，本发明使用的消毒液可有效杀灭卵体表的微生物，于LB和PPDA培养基上，15℃和25℃培养45天后均未见微生物生长；卵表消毒未影响卵的孵化率，消毒和未消毒卵的孵化率无显著差异。

(2)幼虫期管理

蝙蝠蛾进入幼虫期后，于腐殖土上加入新鲜胡萝卜作为幼虫饲料。一般每四周添加一次饲料。根据幼虫的龄期和发育情况，每培养瓶中每次加入约1-10克新鲜胡萝卜。

在饲喂过程中，幼虫经常被胡萝卜携带的病原菌感染，或被残留的化学农药中毒。因此，使用的胡萝卜须无农药残留，也未携带对幼虫有害的病原微生物。

为了保证胡萝卜的质量，本发明除了以无菌水清洗、然后以体积分数75％乙醇消毒待使用的胡萝卜，最主要的方法是将上述无菌水清洗，再以体积分数75％乙醇消毒待使用的胡萝卜经切块后，每根(或每批)取样饲喂少量蝙蝠蛾幼虫至少2天，检测胡萝卜是否对幼虫具有致死作用。其余胡萝卜置于4℃冰箱中待用。如果测试的胡萝卜未对幼虫产生危害，置于4℃冰箱中的胡萝卜方可使用。与使用未检测胡萝卜相比，这一步骤可有效检测所使用胡萝卜的质量，极大地降低由于农药残留和有害微生物导致的幼虫死亡率，幼虫存活率可提高30％。

(3)蛹期管理

幼虫于9-13℃下，云南蝠蛾经过136-263天，四川经过256-545天，青海蝠蛾经过214-660天，从7-9龄后进入蛹期。雄蛹普遍偏小，雌蛹大小不一。雌雄蛹的区别特征在于蛹最末体节腹面的裂缝和突起。肉眼观察蛹的尾部末节，可看到末节腹面中心线两侧具两条深色弧线，雄蛹在肛门和弧线之间有两个明显的黑点，雌蛹在弧线中间明显有一条垂直的裂缝线，如图1-A、1-B、1-C所示，其中图1-A为雄蛹末节形态特征；图1-B为雌蛹末节形态特征，图1-3雌雄蛹个体大小对比，手绘示意简图如图2所示。

由于雄蛹的羽化时间一般早于雌蛹。为了控制雌雄蛹同步羽化，保证雌雄虫成功交配，将刚化蛹的雄蛹置于10℃，而雌蛹置于13℃下。雌雄蛹基本上同时羽化。在9-13℃下，云南蝠蛾蛹期一般为34-42天，四川蝠蛾一般为35-45天，青海蝠蛾一般为38-50天。

(4)成虫期管理

成虫笼的准备：市购婴儿蚊帐(体积＝104cm×50cm×50cm)，清洗后晾干；成虫笼底部加入已灭菌的棉布，便于收集所产的虫卵。

9-13℃下，蛹羽化为成虫后，先鉴别雌雄虫，然后按照雌雄比为1:1的方式加到成虫笼中，每个成虫笼加入100-200头。于成虫笼中加入经紫外线过夜照射的塑料花供成虫交配和落脚。必要时以加湿器将湿度保持80％以上；以15W灯光提供散射光(光强50-100Lux)有利于成虫飞翔、展翅、交配。可能由于成虫交配机会的增多，雌虫卵的受精机会也增大，因此，卵的孵化率同比提高30-50％。

成虫交配后，雌虫开始产卵。注意及时收集虫卵(最初为乳白色，3-5小时后变为黑色)，收集卵的时间最好为产后的8-10小时，置于含适当湿度的无菌滤纸的培养皿(直径＝9cm)中。不同种类的蝙蝠蛾雌虫产量数量不等，一般为每雌虫200-800粒。

Claims

一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、卵期管理：取蝙蝠蛾卵，进行体表消毒，杀灭细菌和控制真菌，然后将消毒好的卵放置于无菌的腐殖土中；

b、幼虫期管理：以胡萝卜作为蝙蝠蛾幼虫的饲料，对胡萝卜进行消毒和饲喂检测，确保饲喂的胡萝卜对蝙蝠蛾幼虫无害，获得雌雄蛹；

c、蛹期管理：鉴别蝙蝠蛾雌雄蛹，将雌雄蛹置于不同的培养温度中，雄蛹的培养温度低于雌蛹，温差为2-6℃，从而使雄蛹的发育变缓、与雌蛹发育同步，获得同步羽化的雌雄成虫；

d、成虫期管理：将羽化的雌雄成虫放置于成虫笼中，成虫笼中还放置有模拟植物，以供成虫交配和落脚，保持湿度80％以上，并施以50-100Lux的微光促进成虫的活动和交配，成虫交配后产卵，收集卵。
根据权利要求1所述的冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，其特征在于，所述的步骤a的体表消毒是将卵用无菌水清洗若干次后，再用消毒液消毒3-6分钟，滤出再用无菌水清洗若干遍；所述的消毒液是在每1000ml无菌水中加入150ml 4mol的NaOH溶液，50ml次氯酸钠(活性氯含量为≥7.5％)；所述的腐殖土为含水量35-45％的腐殖土。
根据权利要求1所述的冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，其特征在于，所述的步骤b的对胡萝卜进行消毒和饲喂检测是将无菌水清洗、体积分数75％乙醇水溶液消毒过的胡萝卜切块后取样饲喂蝙蝠蛾幼虫至少2天，检测胡萝卜是否对幼虫具有致死作用，其余胡萝卜低温保存待用；如果取样的胡萝卜未对幼虫产生危害，则低温保存的胡萝卜可用于饲喂幼虫。
根据权利要求1所述的冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法，其特征在于，所述的模拟植物为植物状塑料制品。