CN102696555B - 一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法 - Google Patents
一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法，包括以下步骤：1）人工捕获雌蝙蝠蛾收集受精虫卵；2）卵期的人工管理；3）初孵幼虫的人工饲养管理；4）幼虫的人工接种染菌；5）幼虫放归自然饲养；6）虫草的出产；本发明提供的冬虫夏草培殖方法将人工捕获雌蝙蝠蛾收集受精虫卵、卵期的人工管理、初孵幼虫的人工饲养管理、幼虫的人工接种染菌等步骤在全人工条件下进行，相比现有野生培殖具有的优势为蝙蝠娥幼虫的产卵、孵化以及幼虫接种染菌人为可控，不仅是提高了蝙蝠娥幼虫成活率和感染率，更重要的是室内人工培殖为规模化生产创造了条件。
Description
技术领域
本发明涉及一种真菌种植技术，更具体的说涉及半野生人工培殖冬虫夏草的方法。
技术背景
虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]别名虫草、冬虫草、夏草冬虫。根据最近的分类系统，冬虫夏草隶属于真菌界(Fungi)、子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌纲(Ascomycetes)、粪壳菌亚纲(Sordariomycetidae)、肉座菌目、麦角菌科(Clavicipifaceae)、虫草属（Cordyceps)。是麦角菌科真菌冬虫夏草菌[Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.]寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。人工繁殖和饲养蝙蝠娥幼虫是冬虫夏草人工培育的重要环节。迄今报道的蝙蝠蛾昆虫超过60种，其中云南20种，西藏17种，四川12种，青海9种，甘肃9种。蝙蝠蛾幼虫为杂食昆虫，在土壤中营隧道式穴居生活，以植物嫩根为食物。不同种类的蝙蝠蛾在生物学和生态学上虽然有一定的差异，但其特点是需要经历较漫长的幼虫期，并具有明显的世代交替现象，蝙蝠蛾具有典型的垂直分布特征，其分布下限在纬度偏南地区海拔3000m,而在纬度偏北地区海拔2500m；分布上限为海拔5100m；最适合的生长海拔3600-5000m；最适宜的生长土壤为高寒草甸和高寒灌木丛土。由于蝙蝠蛾完成一个生命周期需经历卵、幼虫、蛹、成虫四个阶段，在每年10月至次年4月冻土期蝙蝠蛾幼虫在土壤中处于休眠状态，蝙蝠蛾幼虫需要经历6-8龄的生长发育期才能化蛹，具体因种类而异，如玉树蝙蝠蛾幼虫需要996天，康定蝙蝠蛾越1000天，贡嘎蝙蝠蛾875-1040天，而且终年可以在土中找到不同龄期的蝙蝠蛾幼虫。每年5月下旬部分蝙蝠蛾幼虫形成蛹，6-8月羽化成成虫。成虫多在羽化季节期间17-20时羽化，交配后的雌蛾立即边扑边动将卵散产于附近草丛中或灌丛植被中，一般每只雌蛾产卵500粒左右。自然环境中蝙蝠蛾属昆虫的繁育受到生态地理分布、食物、植被、土壤结构、温度、湿度和自然天敌等多种生态因子的综合制约控制，蝙蝠蛾幼虫在自然环境中的繁育速率已成为制约青藏高原冬虫夏草产量的关键因素。
中国专利申请（公开号：CN19700734A）公开了一种冬虫夏草的生产方法，中国专利申请（公开号：CN1970733A）公开了一种在蝠蛾圈养场培育冬虫夏草的方法，中国专利申请（公开号：CN1948456A）公开了一种提高青藏高原冬虫夏草产量的方法，中国专利申请（公开号：CN19484757A）公开了一种提高青藏高原冬虫夏草产量的方法，所述四种方法公开的就似乎内容均为在青藏高原野生环境下改造环境建立温棚圈养蝙蝠娥幼虫，增加圈养区域成虫或幼虫的数量，以提高蝙蝠蛾幼虫的存活率，在蝙蝠蛾幼虫发育至6-8龄时，通过向整个圈养场地施用染菌孢液的方式，对蝙蝠蛾幼虫进行感染，蝙蝠蛾幼虫完全感染去掉温湿保护设置让其恢复到自然温湿。整个冬虫夏草的生长过程都在同一地域中进行。据专利申请文件公开的数据，该方法蝙蝠蛾幼虫从1龄生长发育至6-8龄仅需要365-380天；最终冬虫夏草的感染成功率能够达到50%左右。
自1970年代末，申请人即开展了冬虫夏草人工培殖的研究，先后承担“七五”、“八五”国家重点科技攻关项目“冬虫夏草人工培殖研究”课题中，确立了室内人工培殖冬虫夏草的模式后，继而又承担了“九五”国家重点科技攻关项目“西藏那曲冬虫夏草半野生抚育及开发研究”，且获得了重大突破——首次在西藏那曲海拔4700多米的藏北高原，培殖出了半野生抚育的冬虫夏草，从而确立了冬虫夏草半野生抚育的新模式。“十一五”期间承担国家科技支撑计划项目“冬虫夏草人工培殖关键技术优化研究”，在四川康定又对半野生抚育新模式的关键技术进行了优化，进一步提高了产量，简化了操作环节，且降低了成本。
发明内容
针对现在技术存在问题，本发明提供了一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法，包括以下步骤：
1）人工捕获雌蝙蝠蛾收集受精虫卵；
人工捕获蝙蝠蛾的时间为成虫羽化季节每日17时至21时半，在产地收集，具体操作：工作人员在产地静止不动，仔细观察，会见有雄蛾在2～4米低空飞舞，雌哦因体胖笨重加之又怀有满腹卵粒，因此只能在地表草丛间攀爬，不断振翅散发雌性激素招引雄哦交尾，如见有雄蛾飞向某一草丛间，1～5分钟后去那里观察，就可见到雌雄成虫已开始交尾，待其交尾2～6分钟后遂将其轻轻移入事先准备好的培养皿内，让其继续交尾，直到交尾完毕自然脱落，交尾结束。将交配结束的雌哦轻轻捉入垫有滤纸的清洁培养皿内，温度控制在5～13℃左右，1～2分钟后雌哦开始产卵，自产卵开始计时每2～4小时收集卵粒一次，每次收集后需将卵粒保持湿润，温度以6～16℃为宜，每雌蛾收卵4～6次后基本产完。将几次收集的卵粒集中，去掉雌哦产卵时断裂的粼片和其他杂物后，用清水洗净，完成受精卵的收集。
2）卵期的人工管理；
所述2）卵期的人工管理为：整个阶段卵在与水接触的保湿条件下进行的。
所述2）卵期的人工管理为：卵摊放在始终保持湿润滤纸的培养皿内，每皿200～800粒，盖上皿盖，根据幼虫胚胎发育情况可分为前、中、后期三个阶段的变温培养，前期15天左右，每天早上8点至晚上8点，温度6～12℃，夜晚8点～次日早8点，温度6～8℃； 中期20天左右，每天早上8点至晚上8点，温度11～13℃，夜晚8点～次日早8点，温度7～9℃，后期15天左右，每天早上8点至晚上8点，温度12～16℃，夜晚8点～次日早8点，温度10±3℃。每个阶段结束时均需用洁净水清洗卵粒，清洗后用干净滤纸吸干卵粒表面水分，再放入新布置铺有湿润滤纸的皿内保湿培养。
3）初孵幼虫的人工饲养管理；
4）幼虫的人工接种染菌；
所述步骤4）幼虫的人工接种染菌为：当蝙蝠蛾幼虫生长到3-4龄时，对蝙蝠蛾幼虫进行接种染菌。
所述接种染菌为：用含有中国被毛孢的菌液，喷洒幼虫体表，连续喷洒2～4次，每次间隔1～3h，继续在养虫室内饲养。
5）幼虫放归自然饲养；
所述步骤5）所述幼虫放归自然饲养为：幼虫的人工接种染菌后，检测蝙蝠蛾幼虫感菌率达55～95%时，将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养。
所述将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养为：在适合蝙蝠蛾幼虫生长的自然环境中，切割出上底面大于下底面的台型土块，在切割出方台型土块的坑中放置蝙蝠蛾幼虫饲料和蝙蝠蛾幼虫生长的基质，并放上经过步骤4）所述接种感染的蝙蝠蛾幼虫后，并将台型土块放置回原位置。
其中所述适合蝙蝠蛾幼虫生长的自然环境应选择在向阳、光照充足、日照时间长（每天应达到5～10小时以上）、土壤通透性好，土壤微团聚体的联结比较疏松，腐殖植含量丰富，植被复盖度应在30%～90%，且幼虫能取食的植物种类至少应有3～15种。
所述将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养为：切割适合蝙蝠蛾幼虫生长高寒草甸的草皮土层；草皮土层为上底面大于下底面的台型土块，切割出来台型土块的侧面应为梯形，具体尺寸为：梯形的上底：长、宽分别为10cm×8cm、下底的长、宽分别为8cm×6cm、台型土块的高为6 cm；台型土块取出后，去掉下底面容易掉落的石子和土粒后放置备用；在已取出台型土块的坑中再向下挖一长、宽、高分别8cm×6cm×5cm小区，在小区内放入长、宽、高分别为8cm×6cm×4.9cm已备好的幼虫饲料和基质，并在其上放入上述接种健康幼虫5～20头，待幼虫入土虫体掩蔽后盖上台型土块，用细土填满草皮层四周的缝隙并浇水保墒。
步骤3）和5）饲养蝙蝠蛾幼虫的饲料为红薯和人参果中的任意一种或两种的混合物。
6）虫草的出产。
其中，所述步骤1）至步骤4）是在人工室内环境中进行。
本发明涉及的蝙蝠娥幼虫为蝠蛾（Hepialua biruensis. Sp.nov、贡嘎蝠蛾(Hepialus gonggaensis S.Q.Fu＆ T.F.Fuang ) 、石渠产冬虫夏草寄主蝠蛾（Hepialus sp）、小金产冬虫夏草寄主蝠蛾（Hepialus sp）、虫草蝠蛾，门源蝠蛾（Hepialus minyuancus）、斜脉蝠蛾（Hepialus oblifurcns ）、玉树蝠蛾，拉脊蝠蛾（Hepialus lagii Yan）中的任意一种。
本发明的有益技术效果是：本发明提供的冬虫夏草培殖方法将人工捕获雌蝙蝠蛾收集受精虫卵、卵期的人工管理、初孵幼虫的人工饲养管理、幼虫的人工接种染菌等步骤在全人工条件下进行，相比现有野生培殖具有的优势为蝙蝠娥幼虫的产卵、孵化以及幼虫接种染菌人为可控，不仅是提高了蝙蝠娥幼虫成活率和感染率，更重要的是室内人工培殖为规模化生产创造了条件。
具体实施方式
实施例1 蝙蝠娥幼虫的人工孵化和饲养
蝙蝠娥幼虫成虫羽化季节每日17时至21时半，在产地收集，具体操作：工作人员在产地静止不动，仔细观察，会见有雄蛾在2～4米低空飞舞，雌哦因体胖笨重加之又怀有满腹卵粒，因此只能在地表草丛间攀爬，不断振翅散发雌性激素招引雄哦交尾，如见有雄蛾飞向某一草丛间，1～5分钟后去那里观察，就可见到雌雄成虫已开始交尾，待其交尾2～6分钟后遂将其轻轻移入事先准备好的培养皿内，让其继续交尾，直到交尾完毕自然脱落，交尾结束。将交配结束的雌哦轻轻捉入垫有滤纸的清洁培养皿内，温度控制在5～13℃左右，1～2分钟后雌哦开始产卵，自产卵开始计时每2～4小时收集卵粒一次，每次收集后需将卵粒保持湿润，温度以6～16℃为宜，每雌蛾收卵4～6次后基本产完产卵。将几次收集的卵粒集中，去掉雌蛾产卵时断裂的粼片和其他杂物后，用清水洗净，完成受精卵的收集。卵摊放在始终保持湿润滤纸的培养皿内，每皿200～800粒，盖上皿盖，根据幼虫胚胎发育情况可分为前、中、后期三个阶段的变温培养，前期15天左右，白天（每天早上8点至晚上8点，下同），温度6～12℃，夜间（晚8点～次日早8点，下同），温度6～8℃；中期20天左右，白天温度11～13℃，夜间温度7～9℃，后期15天左右，白天温度12～16℃范围，夜间温度10℃左右。每个阶段结束时均需用洁净水清洗卵粒，清洗后用干净滤纸吸干卵粒表面水分，再放入新布置铺有湿润滤纸的皿内保湿培养。
在卵的后期，应密切关注幼虫孵化，一经发现开始孵化，就应及时将卵带滤纸从培养皿中取出，用清洁干滤纸吸收部分水分，使其保持半湿润状态，便于初孵幼虫轻松自如爬行。与此同时，应作好养虫室的清洁卫生并风干，
用300～800PPm的次氯气酸钠溶液消毒处理后，关闭门窗，待养虫前1～3小时打开门窗通气；养虫盒清水洗净后烘干水分，用洁净薄膜包装封存备用；以珠牙蓼、园穗蓼、人参果、红萝卜和红薯作为饲料，要求新鲜洁净（采用2天以内采回的）为佳，洗尽泥沙，去除须根叶片、木质老化及腐烂变质部分，清水洗净，滤干水分后加工成黄豆般大小的粒状封存待用；本发明幼虫饲料还涉及小大黄、黄芪类及红薯、胡罗卜等代饲料。培养基质采用腐殖质含量高、呈黑褐色的高山草甸土，采回后晒干碾细、过筛（4～16目的筛孔）、加水拌湿（含量35%～50%）、装袋（25×30CM的塑料袋内）、封扎袋口、55～85℃左右温度消毒50～90分钟后，置室温备用。
幼虫临孵化前，将饲料、基质装于养虫盒内：饲料（珠牙蓼与园穗蓼按1比1.5搭配拌匀）、基质按1比1配置拌匀，每盒装饲料0.8～1.2kg。待幼虫孵出后应在20～60分钟内让其自行进入养虫盒内入土藏身，每盒投放幼虫200～600头，待幼虫全部入驻基质取食后，在养虫盒的表面再轻轻掩盖一层过筛后的基质，使盒面没有饲料露出，盖好盒盖，放入8～16℃养虫室内饲养，在饲养过程中，应注意保持好养虫盒内湿度和减少挪动。
室内饲养所用饲料为天然饲料珠芽蓼、圆穗蓼和人参果的地下部分及人工代饲料红薯、胡萝卜等；在蝙蝠蛾卵的末期，将事先准备好的饲料与基质装入养虫内，见幼虫开始将孵化的当天，即将其消毒处理吸干表面水分后，均匀轻轻撒播于盒内，放进养虫室饲养，让其在盒内幼虫孵化后取食。每盒投放蝙蝠卵600粒（幼虫孵化率为85.6%）饲养到幼虫进入4龄后，统计成活率，结果如下表1所示。
表1 蝙蝠蛾幼虫室内饲养阶段幼虫成活情况表
表1中数据表明，幼虫的成活率与饲料的种类有密切关系，红薯和人参果对饲养初孵虫是最优选的饲料。
实施例2 接种蝙蝠娥幼虫的野外培殖
用含有中国被毛孢的菌液，喷洒实施例1饲养的蝙蝠娥幼虫体表，连续喷洒2～4次，每次间隔1～3h，继续在养虫室内饲养。在经检查幼虫感菌率达55～95%左右时，即可从室内移到事先选好的种植基地饲养。在适合冬虫夏草野外生长的环境中选择3块无差别地块。分别作为饲养地块Ⅰ，饲养地块Ⅱ和饲养地块Ⅲ。
在饲养地块Ⅰ中，用专制刀具切割草皮层。切割出来草皮层的侧面应为梯形，具体尺寸为：梯形的上底：长、宽分别为10cm×8cm、下底的长、宽分别为8cm×6cm、梯形的高为6 cm，草皮层取出后，轻轻去掉下底面容易掉落的石子和土粒后放置备用。在已取出草皮层下面再向下挖一长、宽、高分别8cm×6cm×5cm小区，每平方米面积内，制成这样的小区4~9个，在小区内放入长、宽、高分别为8cm×6cm×4.9cm已备好的幼虫饲料和基质，饲料与基质放好后，在其上放入上述接种健康幼虫5～20头，待幼虫入土虫体掩蔽后轻轻盖上梯形的草皮层，用细土填满草皮层四周的缝隙后浇足水分。
在饲养地块Ⅱ中，用刀俱在地表刺出不规则的、纵横交错的小沟曲20～30条/平方米，沟深0.5～3.5cm、宽1.8～5.6cm，小沟曲刺好后，先向沟内投放事先准备好的饲料少许，接着再投放幼虫，每平方米内投放幼虫60～180头，投放结束5～15分钟后即向沟曲内撒播湿润细土将沟曲填满，并喷适量水分保湿。
在饲养地块Ⅲ中，用刀俱在地表刺出直径10～25厘米、深3～5厘米的圆形小坑12～30个/平方米，在每个坑内先投放少许饲后，再投放幼虫5～10条，投放结束5～15分钟后，即向小坑内撒湿润细土填平，并喷适量水分保湿。
在上述三块饲养地块中，幼虫投放入土3个月以内，凡出太阳的晴天，每天应浇水1～2次；半年以内如距地表5～10cm地温超过20℃时，应用遮阳网遮蔽部分阳光；除大雪复盖和雨天外，每天下午5时～次日上午10盖上塑料薄保温保湿，其余时间（上午10～下午5时）揭开薄膜确保草皮层上的植被有充足的光照。此外，应建好网围栏，凡投放幼虫的基地绝对禁止牲畜的践踏。
据统计，在上述三块饲养地块中，草皮层下开区投放幼虫成活率60%～90%；自投放幼虫之日起680～900余天后就会产出第一批冬虫夏草。在饲养地块Ⅰ中，采用在草皮层下开区投放幼虫，每平方米最高可产冬虫夏草16株，平均每平方米可达12株；在饲养地块Ⅱ中，采用所述草皮上刺沟投放幼虫，最高平均每平方米可产虫草12株，平均每平方米产虫草达8株；在饲养地块Ⅲ中采用所述草皮上刺圆坑投放幼虫，最高平均每平方米可产虫草13株，平均每平方米产虫草达9株。综合考虑采用在草皮层下开区投放幼虫，是最优选的方法。
Claims (2)
1.一种半野生人工培殖冬虫夏草的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）人工捕获雌蝙蝠蛾收集受精虫卵；
2）卵期的人工管理；
3）初孵幼虫的人工饲养管理；
4）幼虫的人工接种染菌；
5）幼虫放归自然饲养；
6）虫草的出产；
所述步骤1）至步骤4）是在人工室内环境中进行；
所述步骤4）幼虫的人工接种染菌为：当蝙蝠蛾幼虫生长到3-4龄时，对蝙蝠蛾幼虫进行接种染菌；
所述接种染菌为：用含有中国被毛孢的菌液，喷洒幼虫体表，连续喷洒2～4次，每次间隔1～3h，继续在养虫室内饲养；
所述步骤5）所述幼虫放归自然饲养为：幼虫的人工接种染菌后，检测蝙蝠蛾幼虫感菌率达55～95%时，将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养；
所述将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养为：在适合蝙蝠蛾幼虫生长的自然环境中，切割出上底面大于下底面的台型土块，在切割出方台型土块的坑中放置蝙蝠蛾幼虫饲料和蝙蝠蛾幼虫生长的基质，并放上经过步骤4）所述接种感染的蝙蝠蛾幼虫后，并将台型土块放置回原位置；
所述将蝙蝠蛾幼虫从室内移到种植基地饲养为：切割适合蝙蝠蛾幼虫生长高寒草甸的草皮土层；草皮土层为上底面大于下底面的台型土块，切割出来台型土块的侧面应为梯形，具体尺寸为：梯形的上底的长、宽分别为10cm×8cm、下底的长、宽分别为8cm×6cm、台型土块的高为6 cm；台型土块取出后，去掉下底面容易掉落的石子和土粒后放置备用；在已取出台型土块的坑中再向下挖一长、宽、高分别8cm×6cm×5cm小区，在小区内放入长、宽、高分别为8cm×6cm×4.9cm已备好的幼虫饲料和基质，并在其上放入上述接种健康幼虫5～20头，待幼虫入土虫体掩蔽后盖上台型土块，用细土填满草皮层四周的缝隙并浇水保墒；
步骤3）和5）饲养蝙蝠蛾幼虫的饲料为红薯和人参果中的任意一种或两种的混合物；
所述2）卵期的人工管理为：整个阶段卵在与水接触的保湿条件下进行的。
2.根据权利要求1所述的半野生人工培殖冬虫夏草的方法，其特征在于：所述2）卵期的人工管理为：卵摊放在始终保持湿润滤纸的培养皿内，每皿200～800粒，盖上皿盖，根据幼虫胚胎发育情况可分为前、中、后期三个阶段的变温培养，前期15天左右，每天早上8点至晚上8点，温度6～12℃，夜晚8点～次日早8点，温度6～8℃；中期20天左右，每天早上8点至晚上8点，温度11～13℃，夜晚8点～次日早8点，温度7～9℃，后期15天左右，每天早上8点至晚上8点，温度12～16℃，夜晚8点～次日早8点，温度10±3℃；每个阶段结束时均需用洁净水清洗卵粒，清洗后用干净滤纸吸干卵粒表面水分，再放入新布置铺有湿润滤纸的皿内保湿培养。
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