CN112673890B - 一种降低生态繁育冬虫夏草砷及重金属含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于通过微生物修复降低土壤污染培育优质冬虫夏草技术领域，具体涉及一种利用羊肚菌降低生态繁育冬虫夏草砷及重金属超标的方法。将冬虫夏草和羊肚菌套种，利用羊肚菌和冬虫夏草的生长特性相似，羊肚菌对砷及重金属的吸收能力强等特点，从土壤中富集重金属，从而降低冬虫夏草全草中的砷及重金属含量。

Description

一种降低生态繁育冬虫夏草砷及重金属含量的方法

技术领域

本发明涉及通过微生物修复降低土壤污染繁育优质冬虫夏草技术领域，具体涉及一种利用羊肚菌降低生态繁育冬虫夏草砷及重金属超标的方法。

背景技术

冬虫夏草是麦角菌科真菌冬虫夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种名贵滋补中药材，具有调节免疫系统功能，抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老等功效。近年随着人们生活水平的提高，保健观念不断增强，冬虫夏草的消费量逐年增加，但野生冬虫夏草普遍存在重金属超标问题。例如对45个不同市售来源的冬虫夏草样品测定其As、Hg、Pb、Cd、Cu等重金属含量，在45个样品中，As含量超标率达到100％，Hg含量超标率也达到70％，其他3种重金属均未检出超标现象。长期食用冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片等产品会造成砷汞的过量摄入，并可能在人体内蓄积，存在较高风险。

野生冬虫夏草重金属超标是同其复杂的生活史密切相关的，冬虫夏草生活史须经历无性阶段和有性阶段，此过程绝大多数时间都是在土壤中完成的，因此土壤是造成冬虫夏草重金属超标的主要来源之一。现有的生态繁育冬虫夏草项目同野生虫草一样，同样采用高原土壤作为冬虫夏草寄主昆虫的生境，故生态繁育冬虫夏草仍存在重金属超标的风险。目前降低繁育冬虫夏草重金属的方法是对冬虫夏草表皮进行酸化，再用纯水冲洗掉酸化分解出来的重金属，但这种方法对冬虫夏草处理，可能会破坏冬虫夏草的完整性和品质。从冬虫夏草的生长环境出发，治理土壤重金属污染，会更利于保护冬虫夏草的品质。

土壤重金属污染治理和恢复的难度较大，目前土壤修复的方式主要有物理修复、化学修复、农业修复和生物修复等，生物修复又包括植物修复和动物修复以及微生物修复，其中国内外利用蕈菌修复土壤重金属的污染研究较多，发现蕈菌对重金属有较强的耐受和富集能力，蕈菌可以通过直接吸收空气中漂浮的重金属或通过菌丝体累积土壤基质中的重金属。

羊肚菌(Morchella deliciosa Fr.)，喜低温蕈菌，隶属真菌界，子囊菌门，子囊菌纲，盘菌目，羊肚菌科，羊肚菌属，又名草笠竹，属于喜冷凉型食(药)用菌，是一种珍贵的食用菌和药用菌。

发明内容

本发明的目的在于提供一种修复土壤污染来降低生态繁育冬虫夏草中重金属超标的方法。本发明的目的通过以下技术方案来实现：

采用羊肚菌作为土壤重金属尤其是砷离子的主要富集材料，充分利用羊肚菌与冬虫夏草生长环境相似都喜低温，且能在土壤中生长，生长周期较短，栽培技术成熟，羊肚菌富集重金属能力尤其对砷富集具有偏好性等特点，在繁育冬虫夏草的生境中同时栽培羊肚菌，并通过分批培养采收羊肚菌，不断稀释土壤及水分当中的重金属，从而与冬虫夏草寄主及寄主饲料形成竞争，直到虫草出土，测定未经过羊肚菌处理和经过羊肚菌处理的冬虫夏草重金属含量，以及处理前后背景土壤的重金属含量。

本发明具体提供一种羊肚菌和冬虫夏草套种方法。

优选的，在底层铺一层3-5cm的灭菌的第一腐殖土，将第一饲料置于所述第一腐殖土层上，将羊肚菌菌块均匀置于第一饲料上，覆盖第一腐殖土2-8cm，在腐殖土表层播植冬虫夏草寄主卵，控制第一培养条件培养。

羊肚菌成熟后收割羊肚菌，分离出孵化的冬虫夏草寄主虫以及第一饲料，收集剩余部分混合均匀灭菌后得到第二腐殖土，分离出的第一饲料形成第二饲料，分离出的冬虫夏草寄主虫侵染处理。在底层铺一层3-5cm的第二腐殖土，其上铺放第二饲料，再覆盖第二腐殖土2-8cm，接入已侵染处理的冬虫夏草寄主虫，控制第二培养条件继续培养直至冬虫夏草长出子座并成熟。

上述方法中，第一腐殖土为连续栽培2茬以上羊肚菌的腐殖土。

上述方法中，腐殖土的灭菌方法为高压蒸汽和加热灭菌，具体是采用0.15MPa，121℃的高压蒸汽灭菌30min，然后烘箱50-90℃，过夜。

上述方法中，冬虫夏草寄主卵为蝙蝠蛾虫卵。

上述方法中，第一饲料为蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜或菊芋等块根。

上述方法中，侵染处理中的侵染材料包含子囊孢子40-100个/ml，分生孢子20-70个/ml，菌丝体0.1-1mg/ml。

上述方法中，由于冬虫夏草和羊肚菌的生长特性相似，所述第一培养条件和第二培养条件为土壤湿度为40-70％，培养温度为6-18℃，同时的，培养需给予光照刺激，光照时间4-12小时每天。

上述方法中，为了羊肚菌更好的生长充分吸收土壤中重金属，将羊肚菌菌丝体掰成3-7cm大小菌块。

上述方法中，为了获得第一腐殖土，可采用包含如下步骤的方法栽培羊肚菌：菌种制备、室内栽培和后续处理步骤。

菌种的制备：木屑、麸皮、磷肥、石膏、腐殖土和水混合拌好，拌好后堆积发酵，用聚乙烯塑料袋装料，灭菌，即可接入羊肚菌菌种，采用两头接种法，封好袋口，培养至菌丝满袋后脱袋得羊肚菌菌棒即可栽培。

室内栽培：每层床面上覆盖3-5cm的腐殖土，铺平后将上述菌棒逐个掰成3-7cm大小菌块铺在腐殖土上，再覆盖腐殖土2-8cm，控制培养条件进行培养。

后续处理：羊肚菌成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的栽培。

重复上述步骤2次及以上，获得第一腐殖土。

任选的，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将50％-85％木屑、15％-40％麸皮、0.3％-2％磷肥、0.3％-2％石膏、1％-5％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.1-1:1.6，堆积发酵后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋得羊肚菌菌棒；

2)在腐殖土上铺放脱袋的羊肚菌菌棒，覆盖腐殖土，维持土壤含水量，培养温度6-18℃，光照每天4-12小时，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的栽培；

4)重复上述步骤2次及以上，获得第一腐殖土。

任选的，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将60％-85％木屑、10％-35％麸皮、0.5％-1.5％磷肥、0.5％-1.5％石膏、1％-5％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.2-1:1.5，堆积发酵后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋；

2)在腐殖土上铺放脱袋的羊肚菌菌棒，覆盖腐殖土，维持土壤含水量，控制培养温度6-18℃，光照每天4-12小时，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的栽培；

4)重复上述步骤4次及以上，获得第一腐殖土。

任选的，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将75％木屑、20％麸皮、1％磷肥、1％石膏、3％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.3，堆积发酵20天后，装料100℃条件下灭菌8小时，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋；

2)将羊肚菌菌棒分割成3-7cm的菌块，在腐殖土上铺放所述菌块，覆盖腐殖土，维持土壤含水量，控制培养温度6-18℃，光照每天4-12小时，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的栽培；

4)重复上述步骤5次，获得第一腐殖土。上述羊肚菌和冬虫夏草套种方法所取得的有益效果是，冬虫夏草中砷及重金属含量要比直接采用虫草原地的腐殖土繁育的冬虫夏草或野生冬虫夏草中的砷及重金属含量都明显降低。

土壤中砷及重金属含量采用原子荧光法GB/T 22105-2008测定。

羊肚菌和冬虫夏草砷及重金属含量采用电感耦合等离子体质谱法测定。

重金属是指汞、铅、铜等。

本发明的优点：

本发明在繁育冬虫夏草时以羊肚菌作为重金属的生物富集器，充分利用了两者生长特性相似，温度湿度光照要求相似，各自对重金属富集能力不同，尤其是羊肚菌对砷及重金属的富集能力好的特点，在繁育冬虫夏草的同时套种羊肚菌，通过分批采收，不断稀释土壤及水分当中的重金属，从而降低冬虫夏草的重金属含量。经过羊肚菌处理的土壤繁育出的冬虫夏草，相比单独繁育的冬虫夏草，其砷及重金属含量明显降低。

具体实施方式

为能进一步解释本发明的特征、技术手段以及所达到的具体目的、功能，解析本发明的优点与方案，结合以下具体实施方式对本发明的详述进行进一步地解释。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容后，本领域技术人员可以对本发明做各种修改和改动，这些等价形式同样落于本发明所要求保护的范围内。

采集虫草源地腐殖土，过10目筛，高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％，采用原子荧光法GB/T 22105-2008测定背景土壤中砷及汞、铅等重金属含量，测得各自含量As为13.60mg/kg，Hg为0.036mg/kg，Pb为16.69mg/kg。

实施例1：羊肚菌在砷超标土壤中对重金属离子的吸收

1)砷超标土壤的配制采用亚砷酸钠将背景土壤中砷含量设置为120mg/kg(国标<40mg/kg)

2)菌种制备配方：木屑75％、麸皮20％、磷肥1％、石膏1％、腐殖土3％；料水比1:1.3，拌好后堆积发酵20天，含水量60％。采用17×33cm聚乙烯塑料袋装料，每袋500-600克，在100℃条件下灭菌8小时，即可接入菌种。采用两头接种法，封好袋口，置于22-25℃温度下培养30天。菌丝满袋后5-6天，即可栽培。

3)室内栽培洁净区温度6-18℃，光照每天4-12小时，每层床面上覆盖4cm的超标土壤，铺平后将脱去塑料袋的菌棒逐个掰成5cm大小菌块铺在床上，每平方米床面可用菌袋2个。覆土5cm，维持土壤含水量40-70％。

4)羊肚菌菇成熟后采收，按单次亩产鲜菇180kg计算，子实体采用电感耦合等离子体质谱法《中国药典》2010版附录测定砷含量为215mg/kg，年均采收5-6次，一年后对砷的平均富集量是193.5g，土壤砷去除率可达50％以上。

实施例2：利用羊肚菌和冬虫夏草套种竞争背景土壤中重金属离子

1)将木屑61％、麸皮30％、磷肥2％、石膏2％、腐殖土5％混合，加水，料水比1:1.2，拌好后堆积发酵20天，含水量60％。采用17×33cm聚乙烯塑料袋装料，每袋600克，在100℃条件下灭菌8小时，即可接入羊肚菌菌种。采用两头接种法，封好袋口，置于23℃温度下培养30天。菌丝满袋后5-6天，即可栽培。

2)每层床面上覆盖3cm的腐殖土，铺平后将脱去塑料袋的羊肚菌菌棒逐个掰成6cm大小菌块铺在床上，覆土4cm，维持土壤含水量40-70％，洁净区温度6-18℃，光照每天6小时。

3)羊肚菌成熟后开始采收，收集腐殖土继续用于下一茬羊肚菌的培养，重复上述步骤2)，直至得到栽培了4茬羊肚菌的腐殖土，高温高压和加热灭菌后即为第一腐殖土。

4)每层床面上覆盖3cm的第一腐殖土，其上是蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜或菊芋等块根，同时将6cm大小的羊肚菌菌块均匀置于饲料块根之上，覆土4cm，蝙蝠蛾虫卵播植于表土层之上，维持土壤含水量40-70％。

5)将成熟后的套种羊肚菌收割，挑出蝙蝠蛾虫以及蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜或菊芋等块根，收集剩余部分混合均匀高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％的第二腐殖土，将蝙蝠蛾虫侵染处理；每层床面上覆盖3cm的第二腐殖土，其上重铺上述饲料块根，覆盖第二腐殖土4cm，接入侵染处理的蝙蝠蛾幼虫。

6)控制洁净区温度6-18℃，光照每天6小时，培养直至冬虫夏草出土。

实验中设定了单独种植的冬虫夏草的对照组(相同培养条件下用背景土壤种植的冬虫夏草)，野生组(虫草源地野生的冬虫夏草)，分别测定了对照组、野生组、本实施例处理组中冬虫夏草的重金属含量以及产量，如表1。处理组的冬虫夏草砷及重金属含量明显低于对照草和野生草。

表1虫草重金属含量及产量

实施例3：利用羊肚菌和冬虫夏草套种竞争背景土壤中重金属离子

1)将木屑65％、麸皮30％、磷肥0.5％、石膏0.5％、腐殖土4％混合，加水，料水比1:1.5，拌好后堆积发酵20天，含水量60％。采用17×33cm聚乙烯塑料袋装料，每袋600克，在100℃条件下灭菌8小时，即可接入羊肚菌菌种。采用两头接种法，封好袋口，置于25℃温度下培养30天。菌丝满袋后5-6天，即可栽培。

2)每层床面上覆盖5cm的腐殖土，铺平后将脱去塑料袋的羊肚菌菌棒逐个掰成3cm大小菌块铺在床上，覆土6cm，维持土壤含水量40-70％，洁净区温度6-18℃，光照每天10小时。

3)羊肚菌成熟后开始采收，收集腐殖土继续用于下一茬羊肚菌的培养，重复上述步骤2)，直至得到栽培了5茬羊肚菌的腐殖土，高温高压和加热灭菌后即为第一腐殖土。

4)每层床面上覆盖5cm的第一腐殖土，其上是蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜、菊芋等块根，同时将3cm大小的羊肚菌菌块均匀置于饲料块根之上，覆土6cm，蝙蝠蛾虫卵播植于表土层之上，维持土壤含水量40-70％。

5)收割成熟的套种羊肚菌，挑出蝙蝠蛾虫以及饲料块根，收集剩余部分混合均匀高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％的第二腐殖土，每层床面上覆盖5cm的第二腐殖土，其上重铺上述饲料块根，覆盖第二腐殖土6cm，接入侵染处理的蝙蝠蛾幼虫。

6)控制洁净区温度6-18℃，光照每天10小时，培养直至冬虫夏草出土。

实验中设定了单独繁育的冬虫夏草的对照组(用背景土壤繁育的冬虫夏草)，野生组(虫草源地野生的冬虫夏草)，分别测定了对照组、野生组、本实施例处理组中冬虫夏草的重金属含量以及产量，如表2。处理组的冬虫夏草砷及重金属含量明显低于对照草和野生草。

表2虫草重金属含量及产量

实施例4：利用羊肚菌和冬虫夏草套种竞争背景土壤中重金属离子

1)将木屑75％、麸皮20％、磷肥1％、石膏1％、腐殖土3％混合，加水，料水比1:1.3，拌好后堆积发酵20天，含水量60％。采用17×33cm聚乙烯塑料袋装料，每袋500克，在100℃条件下灭菌8小时，即可接入羊肚菌菌种。采用两头接种法，封好袋口，置于25℃温度下培养30天。菌丝满袋后5-6天，即可栽培。

2)每层床面上覆盖4cm的腐殖土，铺平后将脱去塑料袋的羊肚菌菌棒逐个掰成5cm大小菌块铺在床上，覆土5cm，维持土壤含水量40-70％，洁净区温度6-18℃，光照每天8小时。

3)羊肚菌成熟后开始采收，收集腐殖土继续用于下一茬羊肚菌的培养，重复上述步骤2)，直至得到栽培了5茬羊肚菌的腐殖土，高温高压和加热灭菌后即为第一腐殖土。

4)每层床面上覆盖4cm的第一腐殖土，其上是4cm的蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜、菊芋等块根，同时将5cm大小的羊肚菌菌块均匀置于饲料块根之上，覆土5cm，蝙蝠蛾虫卵播植于表土层之上，维持土壤含水量40-70％。

5)收割成熟的套种羊肚菌，挑出蝙蝠蛾虫以及饲料块根，收集剩余部分混合均匀高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％的第二腐殖土，每层床面上覆盖4cm的第二腐殖土，其上重铺上述饲料块根，覆盖第二腐殖土5cm，接入侵染处理的蝙蝠蛾幼虫。

6)控制洁净区温度6-18℃，光照每天8小时，培养直至冬虫夏草出土。

实验中设定了单独繁育的冬虫夏草的对照组(用背景土壤繁育的冬虫夏草)，野生组(虫草源地野生的冬虫夏草)，分别测定了对照组、野生组、本实施例处理组中冬虫夏草的重金属含量以及产量，如表3。处理组的冬虫夏草砷及重金属含量明显低于对照草和野生草。

表3虫草重金属含量及产量

实施例5：利用羊肚菌和冬虫夏草套种竞争背景土壤中重金属离子

1)每层床面上覆盖4cm的腐殖土，其上是4cm的蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜、菊芋等块根，将5cm大小的羊肚菌菌块均匀置于饲料之上，覆土5cm，蝙蝠蛾虫卵播植于表土层之上，维持土壤含水量40-70％，洁净区温度6-18℃，光照每天8小时。

2)将成熟的套种羊肚菌收割，挑出蝙蝠蛾虫以及饲料块根，收集剩余部分混合均匀高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％的第二腐殖土，将蝙蝠蛾幼虫侵染处理。

3)每层床面上覆盖4cm的第二腐殖土，将步骤2)挑出的饲料块根置于第二腐殖土之上，同时将新一批5cm大小的羊肚菌菌块均匀置于所述饲料块根之上，覆土5cm，接入侵染处理过的蝙蝠蛾幼虫。控制洁净区温度6-18℃，光照每天8小时。

4)再采收一次羊肚菌子实体，并将蝙蝠蛾虫和饲料块根挑出，将剩余部分均匀高压蒸汽灭菌和加热灭菌后统一调配成湿度40-70％的第三腐殖土，再次重复步骤3)，连续栽培6次羊肚菌后，待虫草出土，测定虫草重金属含量，其砷和重金属含量，以及冬虫夏草产量与实施例4相当。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (6)

1.一种降低生态繁育冬虫夏草中砷、汞和铅含量的方法，其特征在于将羊肚菌和冬虫夏草套种；其包括第一腐殖土的制备，所述第一腐殖土为对连续栽培2茬以上羊肚菌的腐殖土灭菌所得；所述腐殖土采集自虫草源地腐殖土；所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将木屑、麸皮、磷肥、石膏、腐殖土和水混合拌好，堆积发酵后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋后脱袋得羊肚菌菌棒；

2)所述羊肚菌菌棒掰块，铺放在腐殖土上，再覆盖腐殖土，维持土壤含水量进行培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的培养；

4)重复上述步骤2次及以上，获得第一腐殖土；

所述方法还包括如下步骤：

i)在第一腐殖土层上铺放第一饲料；所述第一饲料为蕨麻、小大黄、珠芽蓼、丹参、草石蚕、胡萝卜或菊芋植物块根；

ii)将羊肚菌菌块均匀置于所述第一饲料之上，所述羊肚菌菌块直径为3-7cm，再覆盖所述第一腐殖土，在第一腐殖土表层播植蝙蝠蛾虫卵，控制第一培养条件培养；所述第一培养条件为土壤含水量40-70％，温度6-18℃，光照时间4-12小时每天；

iii)待所述羊肚菌菌块上长出的羊肚菌成熟后，收割所述羊肚菌，分离出已孵化的蝙蝠蛾幼虫以及所述第一饲料，将剩余部分混合均匀灭菌形成第二腐殖土，分离出的第一饲料形成第二饲料，分离出的蝙蝠蛾幼虫侵染处理；

iv)在第二腐殖土层上铺放第二饲料，再覆盖所述第二腐殖土，将已侵染处理过的蝙蝠蛾幼虫置于其上，控制第二培养条件继续培养得冬虫夏草；所述第二培养条件为土壤含水量40-70％，温度6-18℃，光照时间4-12小时每天；

所述第一腐殖土层和所述第二腐殖土层的厚度为3-5cm，所述第一腐殖土和所述第二腐殖土的覆土厚度为2-8cm。

2.根据权利要求1所述的方法，所述侵染处理中的侵染材料包含子囊孢子40-100个/ml，分生孢子20-70个/ml，菌丝体0.1-1mg/ml。

3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将50％-85％木屑、15％-40％麸皮、0.3％-2％磷肥、0.3％-2％石膏、1％-5％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.1-1:1.6，堆积发酵后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋得羊肚菌菌棒；

2)所述羊肚菌菌棒掰块，铺放在腐殖土上，再覆盖腐殖土，控制培养条件，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的培养；

4)重复上述步骤2次及以上，获得第一腐殖土。

4.根据权利要求1-2任一项所述的方法，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将60％-85％木屑、10％-35％麸皮、0.5％-1.5％磷肥、0.5％-1.5％石膏、1％-5％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.2-1:1.5，堆积发酵后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋得羊肚菌菌棒；

2)所述羊肚菌菌棒掰块，铺放在腐殖土上，再覆盖腐殖土，维持土壤含水量40-70％，控制培养温度6-18℃，光照每天4-12小时，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的培养；

4)重复上述步骤4次及以上，获得第一腐殖土。

5.根据权利要求1-2任一项所述的方法，所述第一腐殖土通过如下步骤获得：

1)将75％木屑、20％麸皮、1％磷肥、1％石膏、3％腐殖土和水混合拌好，料水比为1:1.3，堆积发酵20天后，装料灭菌，接入羊肚菌菌种，封好袋口，置于22-25℃下培养至菌丝满袋，一段时间后脱袋得羊肚菌菌棒；

2)所述羊肚菌菌棒掰块，铺放在腐殖土上，再覆盖腐殖土，维持土壤含水量40-70％，控制培养温度6-18℃，光照每天4-12小时，培养；

3)羊肚菌子实体成熟开始采收，收集腐殖土灭菌继续用于下一茬羊肚菌的培养；

4)重复上述步骤5次，获得第一腐殖土。

6.一种通过权利要求1-5任一项所述的方法繁育所得冬虫夏草。