CN101411321B - 一种人工饲养烟粉虱的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人工饲养烟粉虱的方法，属于昆虫饲养技术领域。该方法提出了用于人工饲养烟粉虱的饲料配方及应用该饲料进行饲养的方法，包括：烟粉虱卵的采集与消毒；人工全营养饲料液的配制；饲养容器的制备及饲养等步骤。实现了全年室内人工饲养烟粉虱的目的，可获得生物型、龄期、状态等较为一致的各龄虫，克服了以往从自然发生地采集虫源，所带来的易受不同寄主植物、生物型、生长状态及龄期等的影响，导致实验结果存在差异的缺陷，保证了实验试虫的标准化。本方法可用于对烟粉虱的生物学特性及高效防治技术的实验研究。
Description
技术领域
本发明涉及昆虫饲养技术领域，尤其涉及一种人工饲养烟粉虱的方法。
背景技术
烟粉虱Bemisia tabaci(6ennadius)属同翅目(Homoptera)，粉虱科(Aleyrodidae)。原产于热带、亚热带地区，广泛分布于全球90多个国家和地区，是棉花、蔬菜和园林花卉等600余种寄主植物的主要害虫之一(刘树生等，2005)。烟粉虱主要通过直接吸食植物汁液、分泌蜜露招致霉菌污染叶面影响光合作用、传播植物病毒和诱导作物产生非正常生理反应等为害植物的正常生长(Davidson等，2000)，其中，其诱发植物病毒病所造成的危害比其它危害要严重得多(冯兰香等，2001)，受其危害所造成的粮食和经济作物损失可达30-100％(Brown，1994)。烟粉虱可分成多种生物类型，其中，B型烟粉虱具有寄主植物广、取食量大、蜜露分泌多、产卵量高，繁殖率强和传毒能力强等生物学特点(Rybicki等，1999)，从而决定了B型烟粉虱对寄主植物的危害更为严重，极易爆发成灾，对蔬菜、花卉及棉花等经济作物构成了严重威胁。
B型烟粉虱在温室、大棚蔬菜，如番茄、黄瓜、甜瓜等作物上猖獗危害，个别基地由于其密度过大而出现绝收现象(王振中等，1999)。在北京郊区，2000年对黄瓜、茄子、甜瓜和西葫芦等的危害损失严重时可达7成以上(胡敦孝，2000)。部分地区棉花上B型烟粉虱密度高，棉花、棉絮布满蜜露，纤维受到严重污染，煤污病也十分严重。近年来，随着B型烟粉虱的大量发生，由烟粉虱传播的双生病毒已在多个国家和地区作物上造成毁灭性危害，且有逐年加重的趋势(Moffat，1999；张芝利等，2001；纠敏等，2006)。B型烟粉虱在我国南北方已造成严重危害，并有进一步加重和扩散的趋势，同时，由于该虫的大面积为害，化学农药的使用量大幅增加，对食品安全和蔬菜、花卉等的出口创汇造成了障碍。
因此，大力开展对烟粉虱的生物学特性及高效防治技术的研究，已成为植物保护技术领域的当务之急。但在以往研究过程中所采用的烟粉虱虫源均系来源于该虫的自然发生地，故一方面易受该虫不同寄主植物和不同生长状态及不同龄期等的影响，易导致实验结果的差异；另一方面在该虫的非自然繁殖危害期时，则又取不到虫源而导致实验的停顿。因此，寻找一种通过人工饲养烟粉虱的方法，以提供统一的试验虫源，是本技术领域迫切希望解决的问题。但有关人工饲养烟粉虱的饲料配方及其饲养方法尚未见有报道。
发明内容
本发明目的是，针对以往烟粉虱的实验虫源主要采集于该虫的自然发生地，由于质量、标准不统一，导致实验结果的差异和在该虫的非自然繁殖危害期时，则又取不到虫源而导致实验停顿等的缺陷，研究提供一种用于人工饲养烟粉虱的饲料配方及其饲养方法，使在周年内均可获得生物型、龄期、状态较为一致的虫源，实现试虫的标准化。
本发明目的通过以下技术方案得以实现。
一种人工饲养烟粉虱的方法，该方法按以下步骤进行：
(1)烟粉虱卵的采集：从棉花、甘蓝、瓜类等易受烟粉虱危害植物上采集已有较多即将孵化呈暗色虫卵的叶片，先把该叶片置于10％的漂白粉溶液或0.5％次氯酸钠溶液中浸泡2-3分钟，再经3％硫代硫酸钠溶液除去余氯后用蒸馏水清洗，并用长嘴吸管吹、打以把虫卵从叶片上冲洗下来；
(2)烟粉虱卵的消毒：用无菌滤纸过滤收集步骤(1)冲洗下来的烟粉虱卵，将该卵用70％酒精消毒1min后，立即用无菌蒸馏水冲洗除去酒精后，备用；
(3)人工全营养饲料液的配制：包括，
1)基础饲料液的配制：其组分与各组分的重量百分比含量为：酵母提取物5％、蔗糖10％，用蒸馏水补足至100％后，经搅拌溶解后即成基础饲料液；
2)全营养饲料液的配制：在1)基础饲料液中按mg/ml添加以下各组分，经搅拌后，用3Mol/L的KOH溶液调pH值至7.0，并用滤膜过滤灭菌即成人工全营养饲料液；
添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 1.2~5、甘氨酸Gly 0.5~2、谷氨酸Glu 2~8、精氨酸Arg 0.2~4、丝氨酸Ser 0.05~3、酪氨酸Tyr 0.01~2、苏氨酸The 1~4、缬氨酸Val 0.5~3.6、半胱氨酸Cys 0.05~2、天(门)冬氨酸Asp 0.5~6、组氨酸His 0.05~3、亮氨酸Leu 1~4、异亮氨酸Iso 0.5~5、赖氨酸Lys 1~4、脯氨酸Pro 0.05~3、蛋氨酸Met 0.05~2、苯基丙氨酸Phe 0.05~2、色氨酸Try 0.01~2；②维生素类：维生素C 0.2~0.8、硫胺素0.01~0.04、肌醇0.1~0.4、氯化胆碱0.05~0.2、烟酸0.05~0.2、泛酸钙0.02~0.08、叶酸0.01~0.04、盐酸吡哆醇0.01~0.04、核黄素0.01~0.04、生物素0.0002~0.0008；③无机盐：KH2PO4 1~3、MgCl2·6H2O 0.5~2、FeCl3·6H2O 0.01~0.05、CaCl2·2H2O 0.01~0.04、ZnCl20.001~0.01、CuCl2·2H2O 0.001~0.005、MnCl2·4H2O 0.002~0.008；
(4)饲养容器的制备及其饲养方法：以玻璃培养皿或塑料盒的上口沿作为框架，先用膜拉紧封口作为底膜，滴上步骤(3)人工全营养饲料液100-200微升后，在其上方拉一层
膜作为覆盖膜；再将步骤(2)消毒烟粉虱卵用大吸管吸至覆盖膜上，用无菌滤纸吸去多余水分，在卵边放置1-2个湿棉球以保湿，并盖上一个形状及口径大小与底部框架容器相匹配的透明塑料容器，并在该上、下容器连接处用一条消毒过的
膜作环周封住；或将该接有烟粉虱卵的框架容器放进一稍大的，底部存有1-2cm灭菌水层的透明容器内，并在该透明容器的上口沿用
膜封口；然后放进25℃、光周期为14:10的生化培养箱中培养，定期检查发育进度和存活情况，并每隔3-5天在无菌条件下用针筒更换一次人工全营养饲料液直至烟粉虱饲养结束。
所述的一种人工饲养烟粉虱的方法，在所述1)基础饲料液中按mg/ml添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 1.2、甘氨酸Gly 2、谷氨酸Glu 2、精氨酸Arg 4、丝氨酸Ser 0.05、酪氨酸Tyr 2、苏氨酸The 1、缬氨酸Val 3.6、半胱氨酸Cys 2、天(门)冬氨酸Asp 0.5、组氨酸His 3、亮氨酸Leu 4、异亮氨酸Iso5、赖氨酸Lys 1、脯氨酸Pro 3、蛋氨酸Met 0.05、苯基丙氨酸Phe 0.05、色氨酸Try 2；②维生素类：维生素C 0.8、硫胺素0.01、肌醇0.1、氯化胆碱0.05、烟酸0.05、泛酸钙0.08、叶酸0.01、盐酸吡哆醇0.01、核黄素0.01、生物素0.0002；③无机盐：KH2PO4 1、MgCl2·6H2O 0.5、FeCl3·6H2O 0.01、CaCl2·2H2O 0.01、ZnCl2 0.001、CuCl2·2H2O 0.001、MnCl2·4H2O 0.002。
本发明的有益效果：
(1)通过对本发明所提出的用于人工饲养烟粉虱的饲料配方及其饲养方法的实施，实现了室内、周年人工饲养烟粉虱的目的，可获得生物型、龄期、状态等较为一致的各龄虫，克服了以往从自然发生地采集虫源，所带来的易受不同寄主植物、生物型、生长状态及龄期等的影响，导致实验结果易存在差异的缺陷，保证了实验试虫的标准化；
(2)本发明提供的人工饲料配方中，不含寄主植物的任何叶、花、果及提取物等，原材料来源广泛，不受地域、季节、天气等的影响，可实现全年度、全气候的人工饲养，保证了实验的需要；
(3)本发明饲养效果虽还不甚理想(见实施例7，表1)，但由于烟粉虱的产卵量很高，个体极微小，饲养成本很低，通过适量饲养，均可满足对试虫的需要。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明方法作进一步的详细描述，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。
实施例1：(基础饲料液的配制)
其组分与各组分的重量百分比含量为：酵母提取物5％、蔗糖10％，用蒸馏水补足至100％后，经搅拌、溶解后即成基础饲料液。
实施例2：(全营养饲料液的配制1)
在实施例1基础饲料液中按mg/ml添加以下各组分，经搅拌后，用3Mol/L的KOH溶液调pH值至7.0，并用滤膜过滤灭菌后即成人工全营养饲料液；
添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 1.2、甘氨酸Gly 2、谷氨酸Glu 2、精氨酸Arg 4、丝氨酸Ser 0.05、酪氨酸Tyr 2、苏氨酸The 1、缬氨酸Val 3.6、半胱氨酸Cys 2、天(门)冬氨酸Asp 0.5、组氨酸His 3、亮氨酸Leu 4、异亮氨酸Iso 5、赖氨酸Lys 1、脯氨酸Pro 3、蛋氨酸Met 0.05、苯基丙氨酸Phe 0.05、色氨酸Try 2；②维生素类：维生素C 0.8、硫胺素0.01、肌醇0.1、氯化胆碱0.05、烟酸0.05、泛酸钙0.08、叶酸0.01、盐酸吡哆醇0.01、核黄素0.01、生物素0.0002；③无机盐：KH2PO4 1、MgCl2·6H2O 0.5、FeCl3·6H2O 0.01、CaCl2·2H2O 0.01、ZnCl2 0.001、CuCl2·2H2O 0.001、MnCl2·4H2O 0.002。
实施例3：(全营养饲料液的配制2)
在实施例1基础饲料液中按mg/ml添加以下各组分，经搅拌后，用3Mol/L的KOH溶液调pH值至7.0，并用滤膜过滤灭菌即成人工全营养饲料液；
添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 3.1、甘氨酸Gly 1.3、谷氨酸Glu5、精氨酸Arg 2.1、丝氨酸Ser 1.5、酪氨酸Tyr 1、苏氨酸The 2.5、缬氨酸Val2、半胱氨酸Cys 1、天(门)冬氨酸Asp 3.2、组氨酸His 1.6、亮氨酸Leu 2.5、异亮氨酸Iso 2.7、赖氨酸Lys 2.5、脯氨酸Pro 1.5、蛋氨酸Met 1、苯基丙氨酸Phe 1、色氨酸Try 1；②维生素类：维生素C 0.5、硫胺素0.025、肌醇0.25、泛酸钙0.05、氯化胆碱0.1、叶酸0.025、烟酸0.1、盐酸吡哆醇0.025、核黄素0.025、生物素0.0005；③无机盐：KH2PO4 2、MgCl2·6H2O 1.25、CaCl2·2H2O 0.025、CuCl2·2H2O 0.0025、FeCl3·6H2O 0.03、MnCl2·4H2O 0.005、ZnCl2 0.005。实施例4：(全营养饲料液的配制3)
在实施例1基础饲料液中按mg/ml添加以下各组分，经搅拌后，用3Mol/L的KOH溶液调pH值至7.0，并用滤膜过滤灭菌即成人工全营养饲料液；
添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 5、甘氨酸Gly 0.5、谷氨酸Glu 8、精氨酸Arg 0.2、天(门)冬氨酸Asp 6、半胱氨酸Cys 0.05、蛋氨酸Met 2、组氨酸His 0.05、亮氨酸Leu 1、异亮氨酸Iso 0.5、脯氨酸Pro 0.05、赖氨酸Lys 4、苯基丙氨酸Phe 2、丝氨酸Ser 3、苏氨酸The 4、色氨酸Try 0.05、酪氨酸Tyr 0.05、缬氨酸Val 0.5；②维生素类：维生素C 0.2、肌醇0.4、泛酸钙0.02、氯化胆碱0.2、叶酸0.04、烟酸0.2、盐酸吡哆醇0.04、核黄素0.04、硫胺素0.04、生物素0.0008；③无机盐：KH2PO4 3、MgCl2·6H2O 2、CuCl2·2H2O 0.005、FeCl3·6H2O0.05、MnCl2·4H2O 0.008、ZnCl2 0.01、CaCl2·2H2O 0.04。
实施例5：(人工饲养烟粉虱方法1)
该方法按以下步骤进行：
(1)烟粉虱卵的采集：从棉花植株上采集已有较多即将孵化呈暗色虫卵的叶片，先把该叶片置于10％的漂白粉溶液中浸泡2-3分钟，再经3％硫代硫酸钠溶液除去余氯后用蒸馏水清洗，并用长嘴吸管吹、打以把虫卵从叶片上冲洗下来；
(2)烟粉虱卵的消毒：用无菌滤纸过滤收集步骤(1)冲洗下来的烟粉虱卵，将该卵用70％酒精消毒1min后，立即用无菌蒸馏水冲洗除去酒精后，备用；
(3)以实施例2产品为人工全营养饲料液；
(4)饲养容器的制备及其饲养方法：以8厘米玻璃培养皿的上口沿作为框架，先用膜拉紧封口作为底膜，滴上实施例2配制的人工全营养饲料液100微升后，在其上方拉一层
膜作为覆盖膜；再将步骤(2)消毒烟粉虱卵用大吸管吸至覆盖膜上，用无菌滤纸吸去多余水分，在卵边放置2个湿棉球以保湿，并盖上一个口径8厘米的透明塑料杯，在皿、杯连接处用一条消毒过的膜作环周封住；然后放进25℃、光周期为14:10的生化培养箱中培养，经定期检查发育进度和存活情况，并每隔3-5天在无菌条件下，先持空针筒将针头刺入覆盖膜下吸出剩余的饲料液后，再注入新鲜的饲料液，并用无菌封口膜封住洞口，直至烟粉虱饲养至成虫。
实施例6：(人工饲养烟粉虱方法2)
本例以一10厘米×7厘米的塑料盒作为框架，先用膜拉紧封口作为底膜，滴上实施例3配制的人工全营养饲料液200微升后，在其上方拉一层膜作为覆盖膜；再将步骤(2)消毒后烟粉虱卵用大吸管吸至覆盖膜上，用无菌滤纸吸去多余水分；再将该小塑料盒放入一15厘米×10厘米，底部存有1.5cm深无菌水的大塑料盒中，并用膜封住大盒的上口以保湿，其余管理方法同实施例5。
实验例7：(不同饲料人工饲养烟粉虱的效果对比试验)
2008年5-6月，在浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所昆虫实验室的无菌室内，以实施例1、2、3、4产品为饲料，以实施例6为饲养方法进行烟粉虱人工饲养，得实验数据如下(见表1)；从实验结果可见，除实施例1的基础饲料液，可能因饲料配方不完全，营养不全面，导致幼虫不能长至成虫外，其余实施例2、3、4的全营养饲料液其幼虫均有部分能长至成虫，取得一定的饲养效果。由于烟粉虱的产卵率极高，卵型、食量又极小，饲养成本很低，在全年任何时候通过适量饲养，均可满足对试虫的需要。
表1 不同饲料人工饲养烟粉虱的饲养效果
| 处理 | 卵 | 1龄 | 2龄 | 3龄 | 4龄 | 伪蛹 | 成虫 |
| 实施例1 | 163 | 72 | 46 | / | / | / | / |
| 实施例2 | 146 | 71 | 44 | 37 | 29 | 24 | 11 |
| 实施例3 | 180 | 104 | 86 | 61 | 53 | 44 | 31 |
| 实施例4 | 194 | 117 | 84 | 46 | 33 | 19 | 16 |
Claims (2)
1.一种人工饲养烟粉虱的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：
(1)烟粉虱卵的采集：从棉花、甘蓝、瓜类易受烟粉虱危害植物上采集已有较多即将孵化呈暗色虫卵的叶片，先把该叶片置于10％的漂白粉溶液或0.5％次氯酸钠溶液中浸泡2-3分钟，再经3％硫代硫酸钠溶液除去余氯后用蒸馏水清洗，并用长嘴吸管吹、打以把虫卵从叶片上冲洗下来；
(2)烟粉虱卵的消毒：用无菌滤纸过滤收集步骤(1)冲洗下来的烟粉虱卵，将该卵用70％酒精消毒1min后，立即用无菌蒸馏水冲洗除去酒精后，备用；
(3)人工全营养饲料液的配制：包括，
1)基础饲料液的配制：其组分与各组分的重量百分比含量为：酵母提取物5％、蔗糖10％，用蒸馏水补足至100％后，经搅拌溶解后即成基础饲料液；
2)全营养饲料液的配制：在1)基础饲料液中按mg/ml添加以下各组分，经搅拌后，用3Mol/L的KOH溶液调pH值至7.0，并用滤膜过滤灭菌即成人工全营养饲料液；
添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 1.2～5、甘氨酸Gly 0.5～2、谷氨酸Glu 2～8、精氨酸Arg 0.2～4、丝氨酸Ser 0.05～3、酪氨酸Tyr 0.01～2、苏氨酸The 1～4、缬氨酸Val 0.5～3.6、半胱氨酸Cys 0.05～2、天门冬氨酸Asp 0.5～6、组氨酸His 0.05～3、亮氨酸Leu 1～4、异亮氨酸Iso 0.5～5、赖氨酸Lys 1～4、脯氨酸Pro 0.05～3、蛋氨酸Met 0.05～2、苯基丙氨酸Phe 0.05～2、色氨酸Try 0.01～2；②维生素类：维生素C 0.2～0.8、硫胺素0.01～0.04、肌醇0.1～0.4、氯化胆碱0.05～0.2、烟酸0.05～0.2、泛酸钙0.02～0.08、叶酸0.01～0.04、盐酸吡哆醇0.01～0.04、核黄素0.01～0.04、生物素0.0002～0.0008；③无机盐：KH2PO4 1～3、MgCl2·6H2O 0.5～2、FeCl3·6H2O 0.01～0.05、CaCl2·2H2O 0.01～0.04、ZnCl20.001～0.01、CuCl2·2H2O 0.001～0.005、MnCl2·4H2O 0.002～0.008；
(4)饲养容器的制备及其饲养方法：以玻璃培养皿或塑料盒的上口沿作为框架，先用
膜拉紧封口作为底膜，滴上步骤(3)人工全营养饲料液100-200微升后，在其上方拉一层膜作为覆盖膜；再将步骤(2)消毒烟粉虱卵用大吸管吸至覆盖膜上，用无菌滤纸吸去多余水分，在卵边放置1-2个湿棉球以保湿，并盖上一个形状及口径大小与底部框架容器相匹配的透明塑料容器，并在该上、下容器连接处用一条消毒过的
膜作环周封住；或将该接有烟粉虱卵的框架容器放进一稍大的，底部存有1-2cm灭菌水层的透明容器内，并在该透明容器的上口沿用
膜封口；然后放进25℃、光周期为14:10的生化培养箱中培养，定期检查发育进度和存活情况，并每隔3-5天在无菌条件下用针筒更换一次人工全营养饲料液直至烟粉虱饲养结束。
2.按权利要求1所述的一种人工饲养烟粉虱的方法，其特征在于在所述1)基础饲料液中按mg/ml添加的组分包括：①氨基酸：丙氨酸Ala 1.2、甘氨酸Gly 2、谷氨酸Glu 2、精氨酸Arg 4、丝氨酸Ser 0.05、酪氨酸Tyr 2、苏氨酸The 1、缬氨酸Val 3.6、半胱氨酸Cys 2、天门冬氨酸Asp 0.5、组氨酸His3、亮氨酸Leu 4、异亮氨酸Iso 5、赖氨酸Lys 1、脯氨酸Pro 3、蛋氨酸Met 0.05、苯基丙氨酸Phe 0.05、色氨酸Try 2；②维生素类：维生素C 0.8、硫胺素0.01、肌醇0.1、氯化胆碱0.05、烟酸0.05、泛酸钙0.08、叶酸0.01、盐酸吡哆醇0.01、核黄素0.01、生物素0.0002；③无机盐：KH2PO4 1、MgCl2·6H2O 0.5、FeCl3·6H2O 0.01、CaCl2·2H2O 0.01、ZnCl2 0.001、CuCl2·2H2O 0.001、MnCl2·4H200.002。
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