CN100469867C

CN100469867C - 蛹虫草液体静置培养方法

Info

Publication number: CN100469867C
Application number: CNB2006100104824A
Authority: CN
Inventors: 孟黎明
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-09-01
Filing date: 2006-09-01
Publication date: 2009-03-18
Anticipated expiration: 2026-09-01
Also published as: CN1923998A

Abstract

蛹虫草液体静置培养方法，其工艺流程包括液体培养基配制，培养基的分装、灭菌、接菌，菌丝体培养，菌丝体转色、原基分化，子实体生长、采收、干制。装有液体培养基的菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃养菌室内静置培养，7～10天菌丝长满液面，即得蛹虫草菌；提高温度至20～22℃，加强光照，8～10天后菌丝由白色转为桔黄色，菌丝扭结形成瘤突起物，分化形成原基；在封口膜上开透气小孔，增大透气量，蛹虫草子实体逐渐伸长，顶部膨大，少量子囊孢子开始出，开始采收；及时放入恒温箱中，烘干即可。具有节约大量粮食，降低生产成本，生产工艺简单，有利于工厂化生产；生产周期短的优点。

Description

蛹虫草液体静置培养方法

技术领域

本发明属生物技术领域，具体涉及蛹虫草的培养技术。

背景技术

蛹虫草，俗称北虫草，属子囊菌纲、肉座目、麦角菌科虫草属，广泛分布世界各地，在我国主要分布于北方，以东北三省为主。蛹虫草具有与冬虫夏草相似的药用价值，故药典中又记载为“北冬虫夏草”，具有滋肺补肾、止血化痰的功效，用于调补身体，治疗贫血、肺结核、肺气肿、肾功能衰竭，神经衰弱等多种疾病，近年来通过大量药理试验证明，还有降压、降脂的作用，临床常用于心律失常，此外蛹虫草中的有效成分虫草素具有抗癌、抑菌、增强免疫力的功能，因此倍受国内研究人员的关注。由于生态环境的破坏及人们无节制的采挖，野生资源越来越少，目前已濒临灭绝边缘，为实现该物种的可持续利用，开展人工培育迫在眉睫。蛹虫草菌为兼性寄生菌，其生长基质及生态环境较一般食用菌特殊，在自然条件下是由蛹虫草菌以子囊孢子或菌丝体侵染鳞翅目、鞘翅目或半翅目蛹或虫体，借助虫体内营养萌发生长，在蛹或虫体内形成菌核，地下越冬，每年8-9月，气温稳定，降水量充足，光照适宜时，在虫体胸部发育长出棍棒状桔红色的子实体伸出地表，是一种虫与菌的结合体。经过多年研究，我国学者首先对蛹虫草进行分离，获得了成功，并利用桑蚕、柞蚕及黄粉虫为寄主，实现了人工繁育，以后又在米饭培养基上获得人工繁育的成功。目前对蛹草虫实行人工栽培的方式有二种，一种是从野外采集桑蚕、柞蚕的活蛹，经表面消毒后进行人为创伤，并立即将创伤的活蛹在无菌环境中移入长满蛹虫草菌丝体的瓶内，在20℃左右条件下全黑暗培养28天，待感染菌丝的蛹长满菌丝后进行散射光刺激，菌丝转色，60天后长出子座，整个生长过程近90天；另一种是应用大米、蚕蛹粉、营养液进行灭菌、接菌、黑暗培养25天，然后进行散射光刺激，3-10天后菌丝体完成转色，10-15天后形成原基长出子座，整个生长过程近60天。这两种培育方法前者由于是使用活蛹作为培养基，蛹在培养过程中感染率比较低，30％左右，产量低下。后者采用米饭作为培养基质进行培养则需大量粮食，生产成本较高，且产量、质量不稳定。

发明内容

本发明的目的是提供一种生产成本低，生产工艺简单，生产周期短，产量、质量稳定的蛹虫草液体静置培养方法。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

其工艺流程如下：

1、液体培养基配制：去皮马铃薯190～220g切片，加入10～15g蚕蛹粉、800～1000毫升水，沸腾后煮20～30分钟，用纱布过滤取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g，再加水至1000毫升，pH7；

2、液体培养基的分装、灭菌、接菌：选择透明的玻璃瓶或塑料瓶(250毫升)，每瓶放入100～120毫升的培养基，用牛皮纸或聚丙烯膜封口，在高压灭菌器中，压力1.2～1.3kg/cm²，温度121～122℃下灭菌30分钟，待菌瓶冷却后，在无菌条件下接入蛹虫草菌，每瓶接入量1～2毫升。

3、菌丝体培养：菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃养菌室内静置培养，室内湿度保持在55～60％，7～10天菌丝长满液面，即得蛹虫草菌。

4、菌丝体转色、原基分化：提高温度至20～22℃，加强光照，光照强度在500～600lux，每天光照10h，8～10天后菌丝由白色转为桔黄色，菌丝扭结形成瘤突起物，分化形成原基。

5、子实体生长、采收：形成原基后，在封口膜上开透气小孔，增大透气量，室内湿度80～85％，光照强度控制在800～1000lux，温度在20～22℃，蛹虫草子实体逐渐伸长，长至6～8cm时，顶部膨大，少量子囊孢子开始出，开始采收。采收时，用剪刀从子实体根部剪取，清除杂质，并在1小时内及时放入恒温箱中，温度控制在30～45℃，6～8小时，烘干即可。

本发明的的技术效果是：蛹虫草菌为兼性寄生菌，其生长发育对光照、温度、水分、通气等自然条件要求较为严格，若获得优质高产的蛹虫草，首先应满足其生长发育所需的营养条件及环境，此项发明是根据蛹虫草菌丝生长发育所需的环境及营养条件进行培养，即在液体培养基中加入蛹虫草生长时所需的氮源、碳源和微量元素，并在不同的生长阶段进行温度、光照的控制，促进蛹虫草菌丝扭结，子座的形成，有利于子实体生长。该方法简便易行，在菌丝体培养及子实体形成过程中，采用静置培养的方式，具有以下几个优点：(1)节约大量粮食，降低生产成本近1/5；(2)省去常规液体菌种培养过程中，利用摇床进行摇动，促进菌丝发酵的过程，生产工艺简单，有利于工厂化生产；(3)从接种到采收为40天，生产周期缩短1/3～1/2。

附图说明

附图为本发明工艺流程方框图。

具体实施方式

本发明具体实施例：

1、液体培养基配制：去皮马铃薯200g切片，加入10g蚕蛹粉、800～1000毫升水，沸腾后煮30分钟，用四层纱布过滤取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g，再加水至1000毫升，pH7；

2、液体培养基的分装、灭菌、接菌：选择透明的玻璃瓶(250毫升)，每瓶放入100毫升的培养基，用聚丙烯膜封口，在高压灭菌器中，压力1.2kg/cm²，温度121℃下灭菌30分钟，待菌瓶冷却后，在无菌条件下接入蛹虫草菌，每瓶接入量1毫升。

4、菌丝体转色、原基分化：提高温度至20～22℃，加强光照，光照强度在500～600lux，每天光照10h，10天后菌丝由白色转为桔黄色，菌丝扭结形成瘤突起物，分化形成原基。

5、子实体生长、采收：形成原基后，在封口膜上开7～10个透气小孔，增大透气量，室内湿度80～85％，光照强度控制在800～1000lux，温度在20～22℃，蛹虫草子实体逐渐伸长，长至6～8cm时，顶部膨大，少量子囊孢子开始出，开始采收。采收时，用剪刀从子实体根部剪取，清除杂质，并在1小时内及时放入恒温箱中，温度控制在30～45℃，6～8小时，烘干即可。

Claims

1、蛹虫草液体静置培养方法，其工艺流程包括液体培养基配制，培养基的分装、灭菌、接菌，菌丝体培养，菌丝体转色、原基分化，子实体生长、采收、干制，其特征在于，(a)液体培养基配制：配制1000毫升的液体培养基，用去皮马铃薯190～220g切片，加入10～15g蚕蛹粉、800～1000毫升水，沸腾后煮20～30分钟，用纱布过滤取汁，然后加入蔗糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g，再加水至1000毫升，pH7；(b)液体培养基的分装、灭菌、接菌：选择透明的玻璃瓶或塑料瓶250毫升，每瓶放入100～120毫升的培养基，用牛皮纸或聚丙烯膜封口，在高压灭菌器中，压力1.2～1.3kg/cm²，温度121～122℃下灭菌30分钟，待菌瓶冷却后，在无菌条件下接入蛹虫草菌，每瓶接入量1～2毫升；(c)菌丝体培养：菌瓶接菌后，放入遮光、18～20℃养菌室内静置培养，室内湿度保持在55～60％，7～10天菌丝长满液面，即得蛹虫草菌；(d)菌丝体转色、原基分化：提高温度至20～22℃，加强光照，光照强度在500～6001ux，每天光照10h，8～10天后菌丝由白色转为桔黄色，菌丝扭结形成瘤突起物，分化形成原基；(e)子实体生长、采收：形成原基后，在封口膜上开透气小孔，增大透气量，室内湿度80～85％，光照强度控制在800～10001ux，温度在20～22℃，蛹虫草子实体逐渐伸长，长至6～8cm时，顶部膨大，少量子囊孢子开始出，开始采收；采收时，用剪刀从子实体根部剪取，清除杂质，并在1小时内及时放入恒温箱中，温度控制在30～45℃，6～8小时，烘干即可。