WO2008029763A1

WO2008029763A1 - Émulsion grasse de prostaglandine, son procédé de fabrication, son procédé de stabilisation et agent émulsifiant

Info

Publication number: WO2008029763A1
Application number: PCT/JP2007/067133
Authority: WO
Inventors: Satomi Kamiya; Tomonori Uchida; Hideto Yoshida; Yasutaka Inoue; Noboru Yamada; Kenichi Kajihara
Original assignee: Q.P. Corporation; Towa Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2006-09-05
Filing date: 2007-09-03
Publication date: 2008-03-13
Also published as: KR101411758B1; CN101511367B; CN101511367A; RU2470644C2; RU2009112547A; EP2065043A1; JP5193870B2; ATE549014T1; US20100112066A1; EP2065043B1; TW200817423A; JPWO2008029763A1; US8334321B2; TWI403515B; KR20090064526A; EP2065043A4

Description

明細書

プロスタグランジン脂肪乳剤およびその製造方法、ならびにその安定化方法および乳化剤

技術分野

[0001] 本発明は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れたプロスタグランジン脂肪乳剤およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤に関する。

背景技術

[0002] プロスタグランジンは、二重結合を 3— 5個有する必須脂肪酸から合成される生理活性物質であり、炎症 '痛み'腫れの調整、血圧機能'心機能'胃腸機能の調整、消化酵素の分泌調整、腎機能調節、血液凝固、血小板凝集、アレルギー反応、神経伝達、各種ホルモンの産生等に関与している。

[0003] プロスタグランジン El (PGE1)製剤の一形態として、静脈注射用の脂肪乳剤が開発され (例えば、特公平 1— 57094号公報、特公平 1— 57096号公報、特開 2001 — 10958号公報参照）、市販されているものもある。

[0004] しかしながら、現在市販されている PGE1脂肪乳剤は低温 (例えば 5°C以下）で遮光して保存しなければならず、また、低温で保存したとしても品質保証期間が短い（例えば 5°C X 1年間）。その理由としては、有効成分である PGE1が化学的に不安定であること力 S挙げられる。例えば、 PGE1脂肪乳剤は、保存時に凍結しないよう留意する必要があるため、 5°Cで保存する場合、厳密な温度管理が必要である。このように、現在市販されている PGE1脂肪乳剤は、厳密な温度管理下で保存する必要があり、保存中の品質管理が難しい。そこで、 PGE1の安定性を高める検討が種々なされてきたが（例えば、特公平 8— 18989号公報、特開平 4— 338333号公報参照）、その効果は充分なものとは言い難かった。また、脂肪乳剤の安定性を高めるための検討につレヽても fiわれてレヽる力 S (f列え (ま、、特表 2005— 500366号公幸、 WO2004/5 2354号公報参照）、プロスタグランジン脂肪乳剤についての記載は一切なされていない。 [0005] このような状況に鑑みて、有効成分（プロスタグランジン）の安定性および乳化安定性に優れたプロスタグランジン脂肪乳剤の開発が求められている。

発明の開示

[0006] 本発明は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れた、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤を提供する。

[0007] 本発明の一態様に係るプロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤は、を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 85 : 15〜99. 7 : 0. 3である。

[0008] 上記脂肪乳剤において、？じ 0カ 5 : 5〜99. 7 : 0. 3であること力 Sできる。この場合、？じ 0カ 7 : 3〜99. 5 : 0. 5であること力 Sできる。

[0009] 上記脂肪乳剤において、ホスファチジルエタノールァミン (PE)を実質的に含有しないこと力 Sでさる。

[0010] 上記脂肪乳剤において、 PGの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数 12— 18個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることができる。

[0011] 上記脂肪乳剤において、 PGが卵黄由来であることができる。

[0012] 上記脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸又はその塩を実質的に含有しないことができる。

[0013] 上記脂肪乳剤において、遊離ォレイン酸を実質的に含有しないことができる。

[0014] 上記脂肪乳剤において、前記リン脂質 1質量部に対して、 0. 015質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩をさらに含有することができる。また、上記脂肪乳剤において、前記リン脂質 1質量部に対して、 0. 15質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有することができる。この場合、前記遊離高級脂肪酸が遊離ォレイン酸であること力 Sでさる。

[0015] 上記脂肪乳剤において、前記リン脂質中の PCの含有量および PGの含有量の合計が 95%以上であることができる。

[0016] 上記脂肪乳剤において、静脈内注射用であることができる。

[0017] 上記脂肪乳剤において、プロスタグランジンがプロスタグランジン E1またはその誘導体であることができる。

[0018] 上記脂肪乳剤において、プロスタグランジンがプロスタグランジン Elであることができる。

[0019] この場合、平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 70%以上であることができる。

[0020] また、この場合、平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 80%以上であることができる。

[0021] また、この場合、平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 85%以上であることができる。

[0022] また、この場合、平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 20°Cにて 2力月保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 80%以上であることができる。

[0023] また、この場合、平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 5°Cにて 1年間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 80%以上であることができる。

[0024] 本発明の一態様に係る脂肪乳剤の製造方法は、を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 85 : 15〜99. 7 : 0. 3である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤を調製する工程を含む。

[0025] 上記脂肪乳剤の製造方法では、前記調整する工程にお!/、て、上記脂肪乳剤の pH を 4〜7に調整することができる。

[0026] 上記脂肪乳剤の製造方法では、前記調整する工程にお!/、て、上記脂肪乳剤の pH を 4· 5〜6· 5に調整すること力 Sできる。

[0027] 本発明の一態様に係るプロスタグランジンの安定化方法は、

プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、 PC : PGが 85 : 1

5-99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しない乳化剤を使用することを含む。

[0028] 本発明の一態様に係る脂肪粒子の安定化方法は、

プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、 PC : PGが 85 : 1 5-99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しない乳化剤を使用することを含む。

[0029] 本発明の一態様に係る乳化剤は、 PC : PG力 5 : 15〜99. 7 : 0. 3であり、かつ、 P Eを実質的に含有しないリン脂質よりなり、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤に用いる。

[0030] 上記脂肪乳剤によれば、ホスファチジルコリン (PC)およびホスファチジルグリセ口ール（PG)を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC： PG)が 85： 1 5-99. 7 : 0. 3であることにより、有効成分（プロスタグランジン）の安定性および乳化安定性の両方に優れている。このため、市販のプロスタグランジン脂肪乳剤と比較して、保存期間の延長および/または保存温度範囲の拡大が可能である。例えば、後述する実施例の結果より、 PGE1脂肪乳剤の品質保証期間（5°C X 1年)を 2年程度に延長したり、保存温度範囲を 10°C程度に拡大できる可能性がある。これにより、保存中の品質管理がより容易である。また、上記脂肪乳剤によれば、従来技術と同様に、脂肪粒子の粒子径が小さくかつ均一であることにより、病変部位に効率よく薬剤を集積できるため、少量でも優れた有効性を発揮することができる。

発明を実施するための最良の形態

[0031] 以下、本発明の一実施形態に係るプロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤（以下、「プロスタグランジン脂肪乳剤」または単に「脂肪乳剤」ともいう。）およびその製造方法、ならびにその安定化方法および該安定化方法で使用される乳化剤について説明する。なお、本実施形態において、「％」は「質量％」を、「部」は「質量部」を意味する。

[0032] 1.脂肪乳剤

本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、プロスタグランジン (有効成分）、リン脂質 (乳化剤）、油基材、および水を含む乳化物 (水中油型乳剤)である。すなわち、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、脂肪粒子が水中に分散された乳化物であり、該脂肪粒子においては、リン脂質を含む膜の内側にプロスタグランジンおよび油基材が主に包含されて!/、る。

[0033] 本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤における各成分の含有量は、プロスタグランジンが 0. 2-100 ^ g/mL,油基材が脂肪乳剤の全量に対して 5〜50%であり、また、リン脂質が油基材に対し 1〜50%である。

[0034] また、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤は、必要に応じて、高級脂肪酸、等張化剤、抗酸化剤、 pH調整剤をさらに含有することができる。

[0035] さらに、本実施形態に係る脂肪乳剤の pHは 4〜7であることが好ましぐ pHが 4. 5 〜6. 5であることがより好ましい。本実施形態に係る脂肪乳剤において、 pHが 4未満であると乳化安定性が低下することがあり、一方、 pHが 7を超えると、有効成分の安定性が低下することがある。

[0036] 以下、本実施形態に係る脂肪乳剤を構成する各成分について説明する。

[0037]

プロスタグランジンは、プロスタン酸を基本骨格として有する化合物の総称であり、その環構造により、 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G、 H、 I等に分類されている。上述したように、プロスタグランジンは生理活性物質であり、例えば、平滑筋刺激、炎症、アレルギー、細胞の分泌 ·凝集 ·遊走、細胞増殖、神経伝達などにおいて細胞情報伝達物質として機能する。より具体的には、プロスタグランジンはその種類によって、子宮筋および摘出小腸等の平滑筋収縮作用、降圧作用、昇圧作用、抗脂肪分解作用、胃液分泌の阻止作用、中枢神経系への作用、血小板粘着性の減少作用、血小板凝集抑制作用、血栓作成阻止作用、表皮増殖作用、角質化刺激作用等の生理学的作用を有する。

[0038] 本実施形態に係る脂肪乳剤に含まれるプロスタグランジンとしては、 PGA1、 PGB1 、 PGD2、 PGE1、 PGE2、 PGF1 a、 PGF2 a、 PGI2およびこれらの誘導体が挙げられ、 PGE1およびその誘導体であることが好ましい。ここで、誘導体としてはアルキルエステルが好適である（例えば特許第 2602964号参照）。

[0039] 中でも PGE1は例えば、血管拡張、血圧降下、腎血流量増大、ナトリウム利尿、レニン分泌促進、エリスロポエチン分泌促進、血小板凝集阻害、気管支拡張、子宮収縮、腸管運動亢進、胃 ·腸の縦走筋収縮、胃 ·腸の輪状筋弛緩、胃酸分泌抑制、胃粘膜保護作用、免疫抑制作用、末梢交感神経終末からのノルェピネフリン遊離抑制等の作用を有する。したがって、本実施形態に係る PGE1を含有する脂肪乳剤は例えば、慢性動脈閉塞症における四肢潰瘍ならびに安静時疼痛の改善、進行性全身性硬化症および全身性エリテマトーデスにおける皮膚潰瘍の改善、糖尿病における皮膚潰瘍の改善、振動病における末梢血行障害に伴う自覚症状の改善ならびに末梢循環 '神経'運動機能障害の回復、動脈管依存性先天性心疾患における動脈管の開存および経上腸間膜動脈性門脈造影における造影能の改善に用いることができ

[0040] 1. 2.リン脂質

本実施形態に係る脂肪乳剤で使用されるリン脂質は、ホスファチジルコリン (PC)およびホスファチジルグリセロール (PG)を含む。また、リン脂質は、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニゥム塩などの薬学的に許容しうる塩であってもよい。

[0041] PCとしては、卵黄レシチン、大豆レシチン、ある!/、は公知の方法にて合成、半合成により得られたレシチン等が挙げられる。中でも卵黄レシチンが好ましぐリン脂質含量が高められた精製卵黄レシチン、さらには、 PEを実質的に含有しない高度精製卵黄レシチンが好ましい。

[0042] 尚、精製卵黄レシチンは医薬品添加物規格に、高度精製卵黄レシチンは医薬品添加物事典（日本医薬品添加剤協会編）に準ずる。精製卵黄レシチン中には、通常 12〜； 18%程度の PEが含まれる。

[0043] 本実施形態に係る脂肪乳剤は、 PEを実質的に含有しないことが好ましい。 PEを実質的に含有しない脂肪乳剤は、高度精製卵黄レシチン、または合成、半合成により得られたレシチンをリン脂質として使用することにより製造することができる。

[0044] リン脂質が PEを実質的に含有しないことは、例えば、以下の方法により確認することができる。すなわち、リン脂質を 10% (w/v)となるよう、クロ口ホルム'メタノール混合溶液に溶解させた溶液を、シリカゲル薄層板の下端部に 10 ^ Lチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロ口ホルム：メタノール：水 = 65： 25： 4)を用いて展開し、乾燥させる。その後、ニンヒドリン試薬を噴霧し、 120°Cで約 10分間加熱した時、同様にチャージした PE標準液で検出されるスポットの部位に発色を認めな!/、場合、リン脂質が PEを実質的に含有しないと判定する。

[0045] PGは、化学合成により製造されたものであってもよいし、植物または細菌から抽出されたものであってもよいし、あるいは、公知の方法（生化学実験講座 3 脂質の化学、 294— 295頁、東京化学同人、 1974年）にしたがって、大豆や卵黄由来のレシチンを原料としてグリセロールの存在下でホスホリパーゼ Dを作用させることにより調製されたものであってもよ!/、。

[0046] PGの脂肪酸残基には、一般的に、直鎖状または分岐状の炭素数 12— 22個の飽和または不飽和脂肪酸残基が存在するが、本実施形態に係る脂肪乳剤においては、 PGの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数 12— 18個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることが好ましぐ直鎖状の炭素数 16— 18個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれることがより好ましレ、。

[0047] 上記範囲の炭素数を有する脂肪酸残基を含む PGを使用することにより、特に、卵黄レシチン由来の PCを使用する場合、 PCの脂肪酸の鎖長と PGの脂肪酸の鎖長とが同程度となり、より安定化された脂肪乳剤が得られると推察される。

[0048] 化学合成の PGは例えば、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジォレオイル

トイルォレオイルホスファチジルグリセロールのうち少なくとも 1種であることができる。また、天然由来の PGにおいては、由来物質特有の脂肪酸残基を有する PGを用いること力 Sできる。中でも、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、大豆レシチン由来の PGまたは卵黄レシチン由来の PGが好ましぐ有効成分の安定性の向上および生体適合性の面から、卵黄レシチン由来の PGがさらに好ましい。

[0049] 本実施形態に係る脂肪乳剤においては、リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 8 5 : 15-99. 7 : 0. 3である。 PC： PGが上記範囲にあることにより、有効成分の安定性および乳化安定性の両方を向上させることができる。 PGが上記範囲を超えると、保存中の PGE1の安定性に悪影響を及ぼすため、好ましくない。また、 PC : PGは 90 : 10—99. 7 : 0. 3であるのカ好まし <、 95 : 5〜99. 7 : 0. 3であるのカより好まし <、 9 7 : 3—99. 5 : 0. 5であるのがさらに好ましい。

[0050] また、有効成分の化学的安定性を向上させる点において、リン脂質中の PCの含有量および PGの含有量の合計は 95%以上であるのが好ましぐ 98%以上であることがより好ましい。 [0051] リン脂質としては、上述の PCおよび PG以外のリン脂質（例えば、スフインゴミエリンングリコール、およびホスファチジルポリエチレングリコール並びにこれらのリゾ体、リゾ PC、リゾ PGの内の少なくとも 1種）を 5%未満含んでいてもよい。また、天然由来のリン脂質には、リン脂質以外に、トリグリセロール、コレステロール等の成分を 5%未満含んでいてもよい。

[0052] 1. 3.油基材

本実施形態に係る脂肪乳剤で使用される油基材としては、例えば、大豆油、ゴマ油、ナタネ油、サフラワー油、ォリーブ油、ヒマシ油、コーン油、綿実油、米油、ヒマヮリ油、グレープシード油、小麦胚芽油などの植物油や、中鎖脂肪酸トリグリセリド（MCT )が挙げられる。植物油は精製植物油であることが好ましい。

[0053] 1. 4.高級脂肪酸

本実施形態に係る脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸は乳化補助剤としての機能を有する。すなわち、本実施形態に係る脂肪乳剤において、遊離高級脂肪酸を含有することにより、乳化安定性を高めることができる。本発明において、「遊離高級脂肪酸」とは、カルボン酸をいい、「遊離高級脂肪酸の塩」とは、遊離高級脂肪酸の薬学的に許容しうる塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシゥム塩などのアルカリ土類金属塩)の形態の高級脂肪酸をいう。「遊離高級脂肪酸又はその塩」には、油基材である植物油やリン脂質を構成する脂肪酸エステルの形態のものを含まない。また、ここで、含有される遊離高級脂肪酸は、油基材である植物油やリン脂質に含まれる遊離高級脂肪酸を含まないものとする。

[0054] 高級脂肪酸は、直鎖状または分岐状の炭素数 6— 22個（好ましくは 12— 20個）の飽和または不飽和脂肪酸である。高級脂肪酸としては、例えば、ォレイン酸、ステアリン酸、リノール酸、パルミチン酸、リノレン酸、ミリスチン酸が挙げられ、ォレイン酸が好ましい。

[0055] 本実施形態に係る脂肪乳剤は、有効成分の安定性および乳化安定性に優れて!/、るため、遊離の高級脂肪酸又はその塩 (例えば遊離ォレイン酸）が実質的に含有されていなくてもよい。高級脂肪酸又はその塩を含有する場合、リン脂質 1部に対して 0 . 15部以下であることが好ましぐ 0. 01 5部以下であることがより好ましい。高級脂肪酸の含有量カ^ン脂質 1部に対して 0. 15部を超えると、有効成分の安定性が低下する場合がある。高級脂肪酸の含有量カ^ン脂質 1部に対して 0. 015部以下である場合、有効成分の安定性を維持しつつ、優れた乳化安定性を得ることができる。なお、「遊離高級脂肪酸を実質的に含有しなレ、」とは、あくまでも配合目的で添加されることがないことをいい、例えば、油基材である植物油またはリン脂質の分解により生じた遊離高級脂肪酸や、意図しない混入により含有される遊離高級脂肪酸を除くものとする。

[0056] 脂肪乳剤が遊離ォレイン酸を実質的に含有しないことは、例えば、以下の方法により確言忍すること力 Sでさる。

[0057] 脂肪乳剤 lmLに対し、エタノール lmL、ジェチルエーテル 0. 5mL、および石油ェ一テル 0. 5mLを加えて攪拌する。これを遠心分離した上層を採取し、窒素により溶媒を留去する。得られた油相成分を 10% (w/v)となるように溶解したクロ口ホルム- メタノール混合溶液 2 ^ Lを、シリカゲル薄層板の下端部にチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロ口ホルム:メタノール:水 = 65： 25 : 4)を用いて展開し、乾燥させる。その後、 50% (w/w)硫酸を噴霧し、約 120°Cで 30分間加熱した後、同様にチヤージしたォレイン酸標準液で検出されるスポットの部位に発色を認めな!/、場合、脂肪乳剤が遊離ォレイン酸を実質的に含有しないと判定する。

[0058] 本実施形態に係る脂肪乳剤が、 PEおよび/または遊離の高級脂肪酸 (例えば遊離ォレイン酸)を実質的に含有しないことにより、該脂肪乳剤に含まれる成分の数を少なくすることができ、かつ、有効成分の安定性をより高めることができる。

[0059] 1. 5.その他の成分

本実施形態に係る脂肪乳剤では必要に応じて、等張化剤 (例えば、グリセリン、ブドゥ糖、塩化ナトリウム）、抗酸化剤（例えば、ァスコルビン酸およびその塩、安息香酸、クェン酸およびその塩、ジブチルヒドロキシァニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、 a トコフエロール、 D ソルビトール）、 pH調整剤（水酸化ナトリウム、塩酸、各種リン酸塩)を含有してレ、てもよレ、。

[0060] 1. 6.製造方法本発明の一実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の製造方法は、ホスファチジルコリン (PC)およびホスファチジルグリセロール (PG)を含むリン脂質を含有し、 P C : PG力 85 : 15〜99. 7 : 0. 3、好ましく (ま 90： 10〜99. 7 : 0. 3、より好ましく (ま 95： 5-99. 7 : 0. 3、さらに好ましくは 97 : 3〜99. 5 : 0. 5であるリン月旨質を酉己合して月旨月方乳剤を調製する工程を含む。上記脂肪乳剤を調製する工程は、より具体的には、プロスタグランジン (有効成分）、上記リン脂質 (乳化剤）、油基材、および水を乳化させる工程を含む。

[0061] PCと PGの配合方法としては、 PCと PGを油基材または水に混合および均質化しておき、そこへ水または油基材を加えて乳剤を調製すればよぐ油基材中で均質化することが好ましい。

[0062] 例えば、所定量の油基材 (例えば大豆油）に、リン脂質 (PCおよび PG)、プロスタグランジン（例えば PGE1)、およびその他の添加剤（例えばグリセリン）などを常用のホモジナイザーにて混合および均質化し、次いで、これに必要量の水を加えた後、前記ホモジナイザーで再び均質化を行って水中油型乳剤に変換することにより、本実施形態に係る脂肪乳剤を製造することができる。

[0063] PCと PGは別々に配合しても、同時に配合してもよレ、。また、 PCの一部を酵素反応によって PGとし、これを使用してもよく、 PCまたは PGの精製工程中に、 PGまたは P Cを含有する粗精製物やこれらの精製品等を添加し、？じ^0が85 : 15〜99. 7 : 0. 3の比率になるように混合したものから精製して得られたリン脂質を使用してもよい。卵黄由来の PCと PGを使用する場合、卵黄中の PCを酵素反応により PGとし、 PCと P Gと力 5 : 15〜99. 7 : 0. 3の比率になるように卵黄液を混合してからリン脂質の精製を行い、これを使用してもよい。

[0064] 製造上の都合によっては、本実施形態に係る脂肪乳剤に安定化剤、等張化剤、 p H調整剤などの添加剤を加えてもよい。また、得られた脂肪乳剤にろ過処理、加熱処理（高温加熱処理など）をさらに施してもよい。

[0065] また、本実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の製造方法にお!/、て、 pHを好ましくは 4〜7 (より好ましくは 4. 5〜6· 5)に調整する工程を含むことができる。本実施形態に係る脂肪乳剤において、 pHが 4未満であると乳化安定性が低下することがあり、一方、 pHが 7を超えると、有効成分の安定性が低下することがある。

[0066] さらに、本発明の一実施形態に係る脂肪乳剤の製造方法は、上記脂肪乳剤の pH を 4〜7に調整した後、該脂肪乳剤を気密または密封容器に入れて、所定温度にて高温加熱処理を所定時間行う工程をさらに含むことができる。上記高温加熱処理によって、有効成分 (プロスタグランジン)の分解を抑制しつつ、上記脂肪乳剤の滅菌を行うこと力 Sできる。ここで、上記高温加熱処理は高圧蒸気加熱滅菌処理またはスプレ一式加熱滅菌処理であるのが好ましレ、。

[0067] 上記高圧蒸気加熱滅菌処理またはスプレー式加熱滅菌処理の温度および時間はそれぞれ、 110〜； 140°Cおよび 0. 5〜30分間であることが好ましい。例えば、上記高圧蒸気加熱処理を 127°Cで 1分間相当行うことができる。 127°C、 1分間相当とは、 F値に換算すると約 9〜； 10となり、微生物の死滅を目的とした加熱条件の一例であ

0

[0068] 上記製造方法にて得られた脂肪乳剤は、乳化安定性のみならず、有効成分 (プロスタグランジン）の安定性に優れている。例えば、上記高温加熱処理後の脂肪乳剤は、上記高温加熱処理前の脂肪乳剤と比較して、プロスタグランジンの残存率が 70 %以上であり、好ましくは 80%以上であり、より好ましくは 85%以上である。

[0069] 1. 7.安定化方法および乳化剤

本発明の一実施形態に係るプロスタグランジン脂肪乳剤の安定化方法は、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、？じ^0が85 : 15〜99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む。さらに、本発明の一実施形態に係る乳化剤は、プロスタグランジン脂肪乳剤に使用され、 P C : PG力 5 : 15〜99. 7 : 0. 3であり、かつ PEを実質的に含有しないリン脂質よりなる。このような乳化剤としては、例えば、上記 PC : PGの比率で PGを含有させた、上述した高度精製卵黄レシチンが挙げられる。

[0070] 1. 8.用途および特性

本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、ホスファチジルコリン (PC)およびホスファチジルグリセロール（PG)を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC： PG)力 5 : 15〜99. 7 : 0. 3であることにより、例えばォレイン酸などの遊離脂肪酸が実質的に含有されていなくても、乳化安定性を維持しつつ、有効成分 (プロスタグランジン)の安定性を高めることができる。さらに、本実施形態に係る脂肪乳剤によれば

、 PEを実質的に含有しないことにより、有効成分 (プロスタグランジン)の安定性をさらに高めることができる。

[0071] 本実施形態に係る脂肪乳剤は、静脈内注射用として使用することができる。この場合、本実施形態により得られた脂肪乳剤の pHを調整した後、アンプルやバイアル、プレフィルドシリンジ容器などの気密または密封容器に充填し、高温加熱処理などを施すことができる。

[0072] また、本実施形態に係る脂肪乳剤の平均粒子径は 300nm以下であることが好ましく、 150〜250nmの範囲内であることがより好ましい。平均粒子径がこれより大きい場合、脂肪乳剤の乳化系が不安定となることがある。また、特に静脈内に投与した場合には、 150nmより小さい場合は、炎症部位（特に末梢血管内壁）やマクロファージに集積する速度が遅延し、投与後の生理活性の発揮が不十分となる可能性がある。

[0073] また、本実施形態に係る脂肪乳剤は、平均粒子径は 300nm以下であり、プロスタグランジンが PGE1であって、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後の PGE1の残存率が 70%以上であることが好ましぐ 80%以上であることがより好ましぐ 85%以上であることがさらに好ましい。さらに 20°Cにて 2力月間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 70%以上であることが好ましぐ 80%以上であることがより好ましぐ 85%以上であることがさらに好ましい。さらに 5°Cにて 1年間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 80%以上であることが好ましぐ 85%以上であることがより好ましぐ 9 0%以上であることがさらに好ましい。本発明において、脂肪乳剤の 40°C X 7日間の保存は、脂肪乳剤の長期保存安定性を評価するための試験である（例えば特開平 4 — 338333号公報参照）。また、 20°C X 2力月間の保存も同様に、本実施形態に係る脂肪乳剤の長期保存安定性を評価するための試験である（例えば ICHガイドライン Q1A参照）。

[0074] 本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、 PCおよび PGを含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)を 85 : 15〜99. 7 : 0. 3であることにより、有効成分である PGE1の保存安定性が優れており、かつ、配合される他の添加剤を制限したり、脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を増大させたり、脂肪乳剤中の脂肪粒子の粒度分布のばらつきを生じさせたりすることがない。また、本実施形態に係る脂肪乳剤によれば、従来技術と同様に、脂肪粒子の粒子径が小さくかつ均一であることにより、病変部位に効率よく薬剤が集積し、少量でも優れた有効性を発揮する。

[0075] ここで、保存後の脂肪乳剤中の PGE1の残存率（％)は、 HPLC (高速液体クロマトグラフ）法にて、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量と、保存後の該脂肪乳剤中の PGE1の含有量とを測定し、得られた高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量と、保存した後の該脂肪乳剤中の PGE1の含有量とに基づいて、以下の式（1)により算出される。また、 HPLC法による脂肪乳剤中の PGE1の含有量の詳しい測定方法は、後述する実施例に記載された通りである。

[0076] [数 1]

P G E 1の残存 (% ) ― 保存後の脂肪乳剤中の P G E 1の含有量（g )

高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の P G E 1の含有量（g )

[0077] 1. 9.投与形態

本実施形態に係る脂肪乳剤は、非経口の投与経路にてヒトまたはヒト以外の哺乳類に投与されるのが好ましぐ静脈内注射（点滴静脈内注射を含む）により投与されることがより好ましい。例えば、 0. 2〜； 100 g/mLのプロスタグランジンを含む本実施形態に係る脂肪乳剤をそのまま、または輸液に混和して、静脈内注射により投与すること力 Sでさる。

[0078] 2.実施例

以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。

[0079] 2. 1.評価方法

本実施例にお!/、て、脂肪乳剤中の PGE 1の含有量および脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径は以下の方法によって測定された。

[0080] 2. 1. 1. PGE1の含有量脂肪乳剤中の PGE1の含有量は、脂肪乳剤を SEP— PAKC カートリッジ (ウォー

18

ターズ社製）で前処理し、ポストカラム法による HPLC法により測定された。操作条件は以下の通りとした。

検出器：紫外部吸光光度計 (測定波長： 278nm)

カラム：ォクタデシノレシリノレイヒシリカゲノレ (内径 4mm、長さ 15cm)

カラム温度：約 60°C

移動相： ρΗ6· 3の l/150mol/L リン酸塩緩衝液 ·ァセトニトリル混液（3 : 1) 移動相の流量： lmL/min

(ポストカラム反応条件）

反応液： lmol/L 水酸化カリウム溶液

流量： 0. 5mL/min

反応コイル：内径約 0· 5mm、長さ約 10mのテフロン（商標名）チューブ反応温度：約 60°C

[0081] 2. 1. 2.脂肪粒子の平均粒子径

脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径は、 N4PLUSサブミクロン粒度分布測定装置 (ベックマン ·コールター（株)製）にて測定された。

[0082] 2. 1. 3.脂肪乳剤中の PEの検出

脂肪乳剤 lmLに対し、エタノール lmL、ジェチルエーテル 0. 5mL、石油エーテル 0. 5mLを加えて攪拌する。これを遠心分離した上層を採取し、窒素により溶媒を留去する。得られた油相成分を 20% (w/v)となるように溶解したクロ口ホルム'メタノール混合溶液 20 Lを、シリカゲル薄層板の下端部にチャージする。この薄層板を展開溶剤（クロ口ホルム:メタノール:水 =65 : 25 : 4)を用いて展開し、乾燥させる。その後、ニンヒドリン試薬を噴霧し、約 120°Cで 10分間加熱した時、同様にチャージした PE標準液で検出されるスポットの部位に、発色を認めない場合、脂肪乳剤が PEを実質的に含有しないと判定する。

[0083] 2. 2.実施例 1

油基材として大豆油 50g、リン脂質として卵黄レシチン PC— 98N (キューピー（株）製，ホスファチジルコリンの純度 98. 8%,前述のリン脂質中の PE検出方法にて PE が検出されなかったもの） 8. 82gおよびジパルミトイルホスファチジルグリセロール（日本油脂 (株)製） 0. 18gをホモミキサーにて分散し、均質化した。これにプロスタグランジン E1 3. 5mgを添加した後、日本薬局方濃グリセリン 11. 05gを溶解させた注射用水を添加して混合し、全量を 500gとして粗乳化液を得た。次に、上記粗乳化液をマントンガウリン型ホモジナイザー（APV社製）にて 600kgf/cm²の加圧下で 15回通液して、実施例 1の脂肪乳剤（平均粒子径 193nm、 213nm)を得た。この脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を測定し、かつ、脂肪乳剤中の PGE1の含有量を算出した。

[0084] 得られた脂肪乳剤中の PGE1の含有量 (調製直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量)を表 1および表 2に、脂肪乳剤の脂肪粒子の平均粒子径 (調製直後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径）を表 3および表 4にそれぞれ示す。

[0085] 次に、得られた脂肪乳剤を孔径 0. 45 a mのメンブレンフィルターにてろ過し、水酸化ナトリウム水溶液にて ρΗ5· 0、 5. 5 (2サンプル）、 6. 0に調整して 2mLアンプルに分注した後、高温加熱処理として 110°Cで 5分間スプレー式加熱滅菌処理を行った。次いで、該アンプルを開封して、この脂肪乳剤中の PGE1の残存率 (加熱直後の脂肪乳剤中の PGE1の残存率)を算出し、かつ、脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径 (加熱直後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径)を測定した。その結果を表 1ないし表 4にそれぞれ示す。

[0086] なお、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の PGE1の残存率は、上述した脂肪乳剤中の PGE1の含有量の測定方法にしたがって、高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量を測定し、調製直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量に対する高温加熱処理直後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量の比（％)として算出した。

[0087] さらに、高温加熱処理後のアンプルを 40°Cにて 7日間保存した後、該アンプルを開封して、 40°C X 7日間保存後の脂肪乳剤中の PGE1の含有量を測定し、式（1)に基づいて、 40°C X 7日間保存後の脂肪乳剤中の PGE1の残存率を算出した。また、 40 °C X 7日間保存後の脂肪乳剤中の脂肪粒子の平均粒子径を測定した。その結果を表 1ないし表 4にそれぞれ示す。また、実施例 1の脂肪乳剤中から、 PEは検出されなかった。 [0088] なお、実施例 1、 2、 4 6および比較例 2、 3、 6においては、 pHを 5. 0に調整した場合、実施 ί列 1、 2、 4、 7、 9、 10、 12および匕較 ί列 1—4、 6、 7ίこおレヽて (ま、 pHを 5· 5に調整した場合、ならびに、実施例 1、 3、 7、 8、 11および比較例 3、 5においては、 pHを 6. 0に調整した場合の結果を示している（表 1ないし表 4参照）。

[0089] また、実施例 1—12および比較例 1—7において、 PCの使用量は、リン脂質（卵黄レシチン）の使用量に PCの純度（0. 988 = 98. 8%)を乗じて算出したものである。

[0090] さらに、表 1および表 2において、「ォレイン酸（質量部）」は、リン脂質 1質量部に対するォレイン酸の含有量 (質量部）を示して!/、る。

[0091] 2. 3.実施例 2

実施例 1の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 55gとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を 0. 45gとした以外は、実施例 1と同様の方法により、実施例 2の脂肪乳剤（平均粒子径 222nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 0および 5. 5に調整した。

[0092] 実施例 2および後述する実施例 3— 12および比較例 1 7の脂肪乳剤について、実施例 1の脂肪乳剤と同様の方法にて、高温加熱処理および 40°C X 7日間の保存を行い、それぞれの場合における脂肪乳剤中の PGE1の残存率および脂肪粒子の平均粒子径をそれぞれ測定した。その結果を表 1ないし表 4に示す。実施例 2の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0093] 2. 4.実施例 3

実施例 1の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 7. 65gとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの代わりに、卵黄リン脂質を精製し得られた P Cをグリセロールの存在下でホスホリパーゼ D処理して調製された PG (以下卵黄由来 PG)を 1. 35g用い、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を 127°C、 1分間とした以外は、実施例 1と同様の方法により、実施例 3の脂肪乳剤（平均粒子径 229η m)を得た。この卵黄由来 PGの脂肪酸残基の組成中、炭素数 16が 35%、炭素数 18 力 S57%であった。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 6. 0に調整した。実施例 3の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。また、実施例 3で得られた脂肪乳剤は、例えば後述する実施例 8, 11で得られた脂肪乳剤と比較して、加熱直後の有効成分 (PG El)の残存率が低いことから、 PGの添加量が増加すると、加熱後の有効成分の安定性に悪影響を及ぼす傾向があると考えられる。

[0094] 2. 5.実施例 4

実施例 1の脂肪乳剤において、大豆油にォレイン酸 0. 6gを加える以外は、実施例

1と同様の方法により、実施例 4の脂肪乳剤（平均粒子径 226nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 0に、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調整した。実施例 4の脂肪乳剤中から、 PEは検出されなかった。

[0095] 2. 6.実施例 5

実施例 1の脂肪乳剤において、大豆油にォレイン酸 1. 2gを加える以外は、実施例

1と同様の方法により、実施例 5の脂肪乳剤（平均粒子径 210nm)を得た。得られた脂肪乳剤の pHは 5. 0であった。実施例 5の脂肪乳剤中から、 PEは検出されなかつた。

[0096] 2. 7.実施例 6

実施例 2の脂肪乳剤において、大豆油にォレイン酸 1. 2gを加える以外は、実施例 2と同様の方法により、実施例 6の脂肪乳剤（平均粒子径 230nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 0に調整した。実施例 6の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0097] 2. 8.実施例 7

実施例 3の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 82gとし、卵黄由来 PGの配合量を 0. 18gとし、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を 11 0°C、 5分間とした以外は、実施例 3と同様の方法により、実施例 7の脂肪乳剤（平均粒子径 218nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 5に、水酸化ナトリウム水溶液にて 6. 0に調整した。実施例 7の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0098] 2. 9.実施例 8

実施例 3の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 91gとし、卵黄由来 PGの配合量を 0. 09gとした以外は、実施例 3と同様の方法により、実施例 8 の脂肪乳剤（平均粒子径 197nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 6. 0 に調整した。実施例 8の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0099] 2. 10.実施例 9 実施例 8の脂肪乳剤において、大豆油にォレイン酸 0. 12gを加える以外は、実施例 8と同様の方法により、実施例 9の脂肪乳剤（平均粒子径 217nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調整した。実施例 9の脂肪乳剤中から、 PEは検出されなかった。

[0100] 2. 11.実施例 10

実施例 8の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 955gとし、卵黄由来 PGの配合量を 0. 045gとした以外は、実施例 8と同様の方法により、実施例 10の脂肪乳剤（平均粒子径 198nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 5に調整した。実施例 10の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0101] 2. 12.実施例 11

実施例 8の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 973gとし、卵黄由来 PGの配合量を 0. 027gとした以外は、実施例 8と同様の方法により、実施例 11の脂肪乳剤（平均粒子径 195nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 6. 0に調整した。実施例 11の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。実施例 11 で得られた脂肪乳剤は、加熱後の平均粒子径が約 50nm程度増大して!/、ることから、加熱安定性に若干劣ると考えられる力油相の分離は確認されず、有効成分 (PG E1)の安定性にも優れていた。

[0102] 2. 13.実施例 12

実施例 2の脂肪乳剤にお!/、て、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの代わりに、大豆リン脂質をグリセロールの存在下でホスホリパーゼ D処理して調製された PG (以下大豆由来 PG)を用い、さらにアンプル分注後の高温加熱処理条件を 127°C、 1分間とした以外は、実施例 2と同様の方法により、実施例 12の脂肪乳剤（平均粒子径 227nm)を得た。この大豆由来 PGの脂肪酸残基の組成中、炭素数 16が 14%、炭素数 18が 78%であった。 pHは、希塩酸にて 5. 5に調整した。実施例 12の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0103] 2. 14.比較例 1

実施例 5の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 9. Ogとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を Ogとした以外は、実施例 5と同様の方法により、比較例 1の脂肪乳剤（平均粒子径 214nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調整した。比較例 1の脂肪乳剤中から、 PEは検出されなかつた。

[0104] 2. 15.比較例 2

実施例 1の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 9. Ogとし、ジパルミトイルホスファチジルグリセロールの配合量を Ogとした以外は、実施例 1と同様の方法により、比較例 2の脂肪乳剤（平均粒子径 189nm)を得た。 pHは、希塩酸で 5 . 0に、水酸化ナトリウム水溶液で 5. 5に調整した。比較例 2の脂肪乳剤中から、 PE は検出されな力た。

[0105] 2. 16.比較例 3

比較例 1の脂肪乳剤において、アンプル分注後の高温加熱処理条件を 127°C、 1 分間とした以外は、比較例 1と同様の方法により、比較例 3の脂肪乳剤（平均粒子径 216nm)を得た。 pHは、希塩酸にて 5. 0に、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5および 6. 0に調整した。比較例 3の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0106] 2. 17.比較例 4

実施例 12の脂肪乳剤において、大豆由来 PGの代わりに、卵黄リン脂質を精製し得られた PCを Lーセリンの存在下でホスホリパーゼ D処理して調製された卵黄ホスファチジルセリン (以下卵黄由来 PS)を用いる以外は、実施例 12と同様の方法により、比較例 4の脂肪乳剤（平均粒子径 221nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調整した。比較例 4の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0107] 2. 18.比較例 5

実施例 8の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 8. 991gとし、卵黄 PGの配合量を 0. 009gとした以外は、実施例 8と同様の方法により、比較例 5の脂肪乳剤（平均粒子径 192nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液で 6. 0に調整した。比較例 5の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。なお、比較例 5の脂肪乳剤は、加熱後に分離が確認されたため、 PGE1の定量および保存試験を行わなかつた。

[0108] 2. 19.比較例 6 比較例 1の脂肪乳剤において、卵黄レシチン PC— 98Nの配合量を 7gとし、卵黄レシチン PL— 100M (キューピー（株）製， PE含量： 15· 8%) 2gを加える以外は、比較例 1と同様の方法により、比較例 6の脂肪乳剤（平均粒子径 195nm)を得た。 pH は、希塩酸にて 5. 0に、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調製した。リン脂質中の PE含量は 3. 5%であり、比較例 6の脂肪乳剤中から PEが検出された。

[0109] 2. 20.比較例 7

実施例 12の脂肪乳剤において、大豆由来 PGの代わりに、ジパルミトイルホスファチジン酸を用いる以外は、実施例 12と同様の方法により、比較例 7の脂肪乳剤（平均粒子径 238nm)を得た。 pHは、水酸化ナトリウム水溶液にて 5. 5に調整した。比較例 7の脂肪乳剤中から、 PEは検出されな力、つた。

[0110] [表 1]

調製直後加熱直後 40°C x 7曰間保存後

PGE1 PGE1 ォレイン酸 PGE1 PGE1 PGE1

PC : PG H 残存率残存率 (質量部） ( ^i /mL) g mL)

(%) (%) (a) (b) (c)

(b/a) (c/b)

5.0 6.78 92.9 5.69 83.9

7.29

5.5 6.71 92.0 5.76 85.9 実施例 1 0 98:2

5.5 5.37 94.3 4.68 87.2

5.69

6,0 5.31 93.2 4.68 88.3

5.0 5.88 96.1 4.77 81.2 実施例 2 0 95:5 6.12

5.5 5.88 96.1 4.99 85.1 実施例 3 0 85:15 6.0 6.60 4.08 61.9 2.91 71.3

5.0 5.75 90.6 4.76 82.7 実施例 4 0.067 98:2 6.35

5.5 5.75 90.6 4.72 82.0 実施例 5 0.133 98:2 5.0 7.57 6.76 89,3 5.09 75.3 実施例 6 0.133 95:5 5.0 6.94 6.30 90 S 4.47 71.0

5.5 6.13 92.3 5.55 90.5 実施例 7 0 98:2 6.64

6.0 6+02 90.6 5.58 92.7 実施例 β 0 99:1 6.0 7.02 5.90 84.0 5.32 90.2 実施例 9 0.0133 99:1 5.5 6.97 6.01 86.2 5.23 87.0 実施例 10 0 99,5:0.5 5.5 7.20 6.28 87.2 5.67 90.3 実施例 1 1 0 99.7:0.3 6.0 7.66 6.52 85.1 5.86 89.9 実施例 12 0 95:5 5.5 7.18 5.69 79.2 4.60 80.9 2]

3]

譌製直後加熱直後 40°CX7日間保存後 pH 平均粒子径標準偏差平均粒子径標準偏差平均粒子径標準偏差 (nm) (nm) (nm) (nm) (nm (nm;

5.0 211 82 200 66

193 86

5.5 214 88 213 88 実施例 1

5.5 211 63 212 72

213 32

6.0 212 78 213 82

5.0 218 80 225 78 実施例 2 222 68

5.5 219 55 220 85 実施例 3 6.0 229 56 226 70 230 74

5.0 225 88 229 50 実施例 4· 226 86

5.5 227 74 225 80 実施例 5 5.0 210 85 211 71 217 66 実施例 6 5.0 230 74 223 60 232 68

5.5 219 68 215 80 実施例 7 218 86

6.0 221 73 213 フ 8 実施例 8 6.0 197 81 198 60 196 82 実施例 9 5.5 217 77 221 71 211 フ 4 実施例 10 5.5 198 58 191 56 181 64 実施例 11 6.0 195 67 239 53 234 72 実施例 12 5.5 227 93 233 85 226 74 4]

調製直後加熱直後 40°C X 7日間保存後 pH 平均粒子径平均粒子径標準偏差平均粒子径標準偏差

(nm) (nm) (nm) (nm) nm) (nm) 比較例 1 5.5 214 33 21 9 47 219 63

731

5 0 315 423 195 比較例 2 189 69 (加熱後分離）

5.5 (加熱後分離、測定不能） 413 185

5.0 419 189 427 1 79 比較例 3 5.5 216 78 31 1 76 340 99

6.0 227 75 226 67 比較例 4 5.5 221 29 225 77 219 80

753

比較例 5 6.0 192 78 354 ― ―

(加熱後分離）

5.0 191 76 197 フ 2 比較例 6 195 70

5.5 187 68 186 71 比較例 7 5.5 238 53 239 65 238 66 なお、表 1 , 2において、「PC : PG」は、各脂肪乳剤に配合されるリン脂質中の PCと PGとの比を示す。

[0114] 表 1ないし表 4に示される結果より、実施例 1 12で得られた脂肪乳剤によれば、 P Cおよび PGを含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC： PG)が 85： 15-99. 7 : 0. 3であることにより、 40°C X 7日間保存後の PGE1の残存率が 70% 以上であり、さらには 80%以上、良好な条件下では 85%以上とすることができ、脂肪粒子の平均粒子径が 300mn以下であり、かつ、調製直後、加熱直後、および 40°C X 7日間の保存後のいずれの場合においても脂肪粒子の平均粒子径のばらつきが小さ力、つた。したがって、実施例 1— 12で得られた脂肪乳剤によれば、有効成分 (P GE1)の安定性および乳化安定性に優れてレ、る。

[0115] これに対して、比較例 1で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪乳剤と比較して、 40°C X 7日間保存後の脂肪乳剤の PGE1の残存率が大きく低下した。また、比較例 2で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪粒子と比較して、加熱直後および 40 °C X 7日間保存後の脂肪粒子の平均粒子径のばらつきが大きくなつた。さらに、比較例 2で得られた脂肪乳剤では、調製直後の脂肪粒子の平均粒子径と比較して、加熱直後および 40°C X 7日間保存後の脂肪粒子の平均粒子径が著しく大きくなり、製剤の分離も確認された。また、比較例 3で得られた脂肪乳剤では、 pH5. 0および 5. 5 では加熱直後に脂肪粒子が大きくなり、 pH6. 0では 40°C X 7日間保存後の PGE1 の残存率が低下していた。これらの理由としては、比較例 1— 3、 5で得られた脂肪乳剤では、リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 85 : 15〜99. 7 : 0. 3の範囲にないため、有効成分 (PGE1)の安定性および/または乳化安定性が低!/、ためであると理解できる。

[0116] また、 PGの代わりに PSを使用した比較例 4においては、加熱直後および 40°C X 7

日間保存後の乳化安定性は保たれていたが、 40°C X 7日間保存後の PGE1の残存率が著しく低下していた。同様に、 PGの代わりに PAを用いた比較例 7においても、加熱直後および 40°C X 7日間保存後の乳化安定性は保たれて!/、たが、 40°C X 7日間保存後の PGE1の残存率が著しく低下していた。このこと力、ら、 PGの代わりに、 PS または PAを用いた場合、乳化安定性は高いが、 PGE1の消長が大きくなることが理解される。

[0117] 比較例 6についても、リン脂質中に PEを含有することにより乳化安定性は高くなる

1S 比較例 1、 3に対して、 PGE1の消長が大きくなつていることが確認された。

[0118] 2. 21. 20°Cにて 2力月間保存後の結果

実施例 1、実施例 7および比較例 1で得られた脂肪乳剤（pH5. 5)を 20°Cの条件下で 2ヶ月間保存した。保存後の PGE1の残存率および平均粒子径を表 5および表 6 に示す。なお、 20°Cにて 2力月間保存した後の PGE1の残存率については、前述の式（1)により算出した。

[0119] 表 5および表 6の結果より、 20°Cにて 2力月保存した後においても、比較例 1で得られた脂肪乳剤に対して実施例 1で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分 (PGE1)の安定性が高レヽことが理解される。

[0120] [表 5] 調製直後加熱直後 20¾ 2カ月閡保存後才レイン PGE 1 PGE1

PGE 1 PGE1

PC -. PQ _PH 残存率，残存率

( μ g/ mし' ( u /mL

(%) (%) (%)

(a) (b)

(b/a) (c/b) 実施例 1 0 98:2 5.5 5.69 5.37 94.3 4,97 実施例 7 0 98:2 5.5 6.64 6.13 92.3 5,59 91.1 比較例 1 0.133 100:0 5.5 7.20 6.32 87.8 4,36 69.1

[0121] [表 6]

0 ¾

[0122] 2. 22. 5°Cにて 6力月間保存後の結果

実施例 1、実施例 7および比較例 1で得られた脂肪乳剤 (pH5. 5)を 5°Cの条件下で 6力月間保存した。保存後の PGE1の残存率および平均粒子径を表 7および表 8に示す。なお、なお、 5°Cにて 6力月間保存した後の PGE1の残存率については、前述の式（1)により算出した。

[0123] 表 7および表 8の結果より、 5°Cにて 6力月間保存した後においても、比較例 1で得られた脂肪乳剤に対して実施例 1および 7で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分 (P

GE1)の安定性が高いことが理解される。

[0124] [表 7] 加熱直後 5°C X 6力月間保存後ォレイン PGE1

PGE1 PGE 1 PGE1

酸 PC : PG H 残存率

( g/mL) ( μ. g/mL) ( jU g mし)

(%) (%) (%)

(a) (b) (c)

(b/a) (c/b) 実施例 1 0 98:2 ！ 5.5 5.69 5.37 94.3 5.36 99.8 実施例 7 0 98:2 5.5 6.64 6.13 92.3 5.99 97.6 比較例 1 0.133 100:0 5,5 7.20 6.32 87.8 5.32 84.2

[0125] [表 8]

[0126] 2. 23. 5°Cにて 1年間保存後の結果

実施例 1、実施例 7および比較例 1で得られた脂肪乳剤 (pH5. 5)を 5°Cの条件下で 1年間保存した。保存後の PGE1の残存率および平均粒子径を表 9および表 10に示す。なお、なお、 5°Cにて 1年間保存した後の PGE1の残存率については、前述の式（1)により算出した。

[0127] 表 9および表 10の結果より、 5°Cにて 1年間保存した後においても、比較例 1で得られた脂肪乳剤に対して実施例 1および 7で得られた脂肪乳剤のほうが、有効成分 (P GE1)の安定性が高いことが理解される。

[0128] [表 9] 調製直後加熱直後 5 CX 1年間保存後ォレイン PGE1 PGE1

PGE1 PGE1 PGE1 酸 PC:PG pH 残存率残存率

( μ g/mL) ( U g/mL) (jU g/mL) (%) (%) (%)

(a) (b) (c)

(b/a) (c/b) 実施例 1 ひ 98:2 5.5 5. 5.37 94.3 5.13 95.6 実施例 7 0 98:2 5.5 6.64 6.13 92.3 5.60 91.4 比較例 1 0.133 100:0 5.5 7.20 6.32 87.8 4.71 74,5 10] 調製直後加熱直後 5°C x 1年間保存後 pH 平均粒子径キ ¾牵偏差平均粒子径平均粒子径標準偏差 tnm) (nm) (nm) (nm) (nm) 実施例 1 5.5 213 32 211 63 205 78 実施例 7 5.5 218 86 219 68 218 74 比較例 1 5.5 214 33 219 47 211 65

Claims

請求の範囲

[I] ホスファチジノレコリン (PC)およびホスファチジノレグリセロール (PG)を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 85 : 15〜99. 7 : 0. 3である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤。

[2] PC : PG力 5 : 5〜99. 7 : 0. 3である、請求項 1記載の脂肪乳剤。

[3] PC : PG力 7 : 3〜99. 5 : 0. 5である、請求項 2記載の脂肪乳剤。

[4] ホスファチジルエタノールァミン (PE)を実質的に含有しない、請求項 1乃至 3のいずれか 1項に記載の脂肪乳剤。

[5] PGの脂肪酸残基中に、直鎖状の炭素数 12— 18個の飽和または不飽和脂肪酸残基が含まれる、請求項 1乃至 4のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[6] PGが卵黄由来である、請求項 1乃至 5のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[7] 遊離高級脂肪酸又はその塩を実質的に含有しない、請求項 1乃至 6のいずれか 1 項に記載の脂肪乳剤。

[8] 遊離ォレイン酸を実質的に含有しない、請求項 1乃至 6のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[9] 前記リン脂質 1質量部に対して、 0. 015質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有する、請求項 1乃至 6のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[10] 前記リン脂質 1質量部に対して、 0. 15質量部以下の遊離高級脂肪酸又はその塩を含有する、請求項 9に記載の脂肪乳剤。

[I I] 前記遊離高級脂肪酸が遊離ォレイン酸である、請求項 9または 10に記載の脂肪乳剤。

[12] 前記リン脂質中の PCの含有量および PGの含有量の合計が 95%以上である、請求項 1乃至 11のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[13] 静脈内注射用である、請求項 1乃至 12のいずれか 1項に記載の脂肪乳剤。

[14] プロスタグランジンがプロスタグランジン E1またはその誘導体である、請求項 1乃至

13のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[15] プロスタグランジンがプロスタグランジン E1である請求項 1乃至 14のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤。

[16] 平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E1の残存率が 70%以上である、請求項 15記載の脂肪乳剤。

[17] 平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E 1の残存率が 80 %以上である、請求項 15記載の脂肪乳剤。

[18] 平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 40°Cにて 7日間保存した後のプロスタグランジン E 1の残存率が 85 %以上である、請求項 15記載の脂肪乳剤。

[19] 平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 20°Cにて 2力月保存した後のプロスタグランジン E 1の残存率が 80 %以上である、請求項 15記載の脂肪乳剤。

[20] 平均粒子径が 300nm以下であり、かつ、 5°Cにて 1年間保存した後のプロスタグランジン E 1の残存率が 80 %以上である、請求項 15記載の脂肪乳剤。

[21] ホスファチジノレコリン (PC)およびホスファチジノレグリセロール (PG)を含むリン脂質を含有し、該リン脂質中の PCと PGの比（PC : PG)が 85 : 15〜99. 7 : 0. 3である、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤を調製する工程を含む、請求項

1乃至 21のいずれ力、 1項に記載の脂肪乳剤の製造方法。

[22] 前記調整する工程において、上記脂肪乳剤の pHを 4〜7に調整する、請求項 22 記載の脂肪乳剤の製造方法。

[23] 前記調整する工程において、上記脂肪乳剤の pHを 4. 5〜6. 5に調整する、請求項 22記載の脂肪乳剤の製造方法。

[24] プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、 PC : PGが 85 : 1

5-99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む、プロスタグランジンの安定化方法。

[25] プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤において、 PC : PGが 85 : 1

5-99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しないリン脂質を使用することを含む、脂肪粒子の安定化方法。

[26] PC : PG力 5 : 15〜99. 7 : 0. 3であり、かつ、 PEを実質的に含有しないリン脂質よりなる、プロスタグランジンを有効成分として含有する脂肪乳剤に用いる乳化剤。