WO2006022301A1 - 生理活性ペプチド液状製剤 - Google Patents

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Masaru Matsumoto
Masako Matsumoto
Takeshi Hanada
Naomi Wakabayashi
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Daiichi Asubio Pharma Co., Ltd.
Kangawa, Kenji
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Definitions

  • the present invention relates to a liquid preparation having improved bioavailability when a physiologically active peptide or physiologically active protein is administered, and a method for improving the same.
  • bioactive peptides or bioactive protein preparations such as RH derivatives, parathyroid hormones, and corticotropin derivatives are on the market as pharmaceuticals.
  • these compounds are inactive due to degradation by proteases in the gastrointestinal tract and are therefore difficult to develop as oral preparations, most of them being administered parenterally, mainly injections.
  • As a pharmaceutical form As a pharmaceutical form.
  • the bioavailability BA in the present invention refers to the rate (biological availability, EBA: extent of bioavailability) at which a drug in an administered preparation reaches the systemic blood.
  • Darelin is an endogenous growth hormone secretagogue (GHS) for growth hormone secretagogue receptor (GHS-R), a bioactive peptide isolated and purified from the stomach of rats in 1999 ( Non-patent document 1). Later, from vertebrates other than rats, such as humans, mice, pigs, eagle birds, eels, rushes, horses, hidges, force el, Darrelin with similar primary structure has been isolated or deduced from cDNA. These structural formulas are shown in Table 1. Besides those listed here, darrelin such as cats and goats have been isolated.
  • GSS n -octanoyDFLSPEHQRVQRKESKKPPAKLQPR Rat (Rat): GSS (n octanoyDFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR
  • GSS GSS (n -octanoyDFLSPEHQKAQRKESKKPPAKLQPR mouse (Mouse): GSS (n -octanoyDFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR Breakfast grayed (Porcine): GSS (n- octanoyDFLSPEHQKVQQRKESKKPAAKLKPR ⁇ Shi (Bovine): GSS (n octanoyDFLSPEHQKLQRKEAKKPSGRLKPR hits di (Ovine): GSS (n octanoyDFLSPEHQKLQRKEPKKPSGRLKPR I j (Canme): GSS (n-octanoyDFLSPEHqKLqqRKESKKPFAKLQPR Unagi (Eel): GSS (n-octnoyl) FLSPSQRPQGKDKKPPRV-NH 2
  • Nickel GSS (n -octanoyDFLSPTYKNIQQQKGTRKPTAR
  • GLT n -octanoyDFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNMN Tilapia: GSS (nc ctanoyl) FLSPSQKPqNKVKSSRI-NH 2
  • the side chain hydroxyl group of the serine residue (S) or threonine residue (T) at position 3 is acylated with a fatty acid such as octanoic acid or decanoic acid.
  • a peptide having a specific structure and having a hydrophobic modification structure It also has the activity of increasing intracellular calcium ion concentration by binding to growth hormone secretagogue receptor.
  • These darelins have potent growth hormone secretion-promoting activity and have been elucidated to function in the regulation of growth hormone secretion, and are interested in the physiological role of darrelin and its application to pharmaceuticals ( Patent Document 1).
  • natural darrelin is generally referred to as darrelin! /.
  • darrelin endogenous to these animals and darrelin derivatives in which a partial structure of ghrelin is substituted or deleted, or darrelin analogs are also used for the treatment of each disease and the like. Expected as an agent.
  • Darelin derivative is a hydrophobic modification structure of darrelin, in which otanoyl group (C)
  • natural darrelin which is inherent in each animal, has a hydrophobic modification structure and a peptide main chain that is linked by an ester bond, which is linked via an ester, ether, thioether, amide, or disulfide bond. Becomes a darrelin derivative (Patent Document 1).
  • Mdlvaine buffer (mixed with aqueous solution of taenoic acid and aqueous solution of ninatrihydrogen phosphate), Britton-Robinson buffer (aqueous solution of phosphoric acid 'acetic acid' boric acid and water) Tests on the stability of darrelin in aqueous solutions in aqueous citrate buffer, glycine hydrochloride buffer, and acetate buffer. It is described that the stability of the aqueous solution of darrelins can be ensured by setting the pH range of the aqueous solution of darrelins to a range of 2 to 7 regardless of the type of buffer used. The dynamics in the case of doing so have not been studied at all.
  • peptide proteins are generally unstable in aqueous solutions.
  • Patent Document 1 International Publication No. WO01Z07475
  • Patent Document 2 International Publication WO03Z097083
  • Patent Document 3 Japanese Patent Publication No. 2004-514651
  • Patent Document 4 Japanese Patent Publication No. 63-40166
  • Patent Document 5 Patent No. 2643426
  • Patent Document 6 Special Table 2004-522803
  • Patent Document 7 Japanese Patent Publication No. 2-19092
  • Patent Document 8 Japanese Patent Publication No. 5-24129
  • Patent Document 9 Patent No. 3120987
  • Non-patent literature l Kojima et al .: Nature, 402 ⁇ , 656-660, 1999
  • Non-Patent Document 2 Tokihiro et al .: J. Pharm. Pharmacol, 52 ⁇ , 911-917, 2000 Disclosure of Invention
  • Darelins are physiologically active peptides, and therefore, when administered as pharmaceuticals, parenteral agents and, among them, injections are conceivable without being affected by proteases and the like. Even in the case of injections, in the case of subcutaneous injection, it is necessary to be able to guarantee the absorption of the drug from the injection site and the transfer into the blood. However, peptide preparations are generally considered to have a low BA when administered by subcutaneous injection, and it is difficult to design a preparation as an injection.
  • the factors that affect the BA rate generally include the effect of the administration site force and the transfer efficiency and transfer rate to nearby peripheral blood. These include physicochemical properties that determine the diffusion of drugs in body fluids such as molecular weight, pKa and fat solubility, tissue penetration, and penetration of biological membranes, and the histological and physiological properties of the applied site. ! /, Due to the inherent nature of the drug and administration site.
  • the present invention secures BA as a drug of a physiologically active peptide or physiologically active protein containing darrins and provides a more effective liquid preparation, and a physiologically active peptide or physiological activity containing darerins It is an object of the present invention to provide a method for improving BA when a protein-dissolved aqueous solution is injected subcutaneously.
  • darrelin and various adjuvants that can be used for injections were administered together, and BA was confirmed.
  • mannitol as an isotonic agent
  • urea as a solubilizing agent
  • sodium acetate buffer pH 4.0
  • PH4.0 sodium acetate buffer
  • the BA was found to rise significantly.
  • BA can be controlled by adjusting the type, concentration, pH, and the like of the acidic solution.
  • the effect of improving BA differs depending on the type of acidic solution, which means that it is not only the effect of controlling the pH value of darrelin preparations or darrelin solutions!
  • BA is remarkably increased by administering darrelin together with a polar organic liquid during subcutaneous injection.
  • BA is higher than when an acidic liquid is administered alone to ghrelin and when a polar organic liquid is administered alone with darrin. I found out.
  • BA is significantly increased by administering with acidic solution and saccharide or polar organic liquid and saccharide when subcutaneous injection of darrelin.
  • the effect of raising these BAs is not limited to darrelin, but by administering an acidic liquid and / or a polar organic liquid and / or a sugar together to a bioactive peptide or bioactive protein preparation.
  • the BA was found to rise significantly.
  • Acidic fluidity The above components containing one or a combination of two or more of acetic acid, lactic acid, phosphoric acid, glycine, succinic acid, hydrochloric acid, propionic acid, butyric acid, benzoic acid, or their salt strength group ( Liquid preparation according to 1);
  • Acidic liquid power Liquid preparation comprising as an ingredient acetic acid, lactic acid, propionic acid, butyric acid, Z or phosphoric acid or a combination of two or more of these salt strength groups;
  • a liquid preparation comprising a physiologically active peptide or physiologically active protein as an active ingredient and containing a polar organic liquid;
  • liquid preparation according to any one of (1) to (7) above, which comprises a physiologically active peptide or a physiologically active protein as an active ingredient and contains a polar organic liquid;
  • the polar organic liquid is one or a combination of two or more of the group consisting of benzyl alcohol, ethanol, phenol, tert-butanol, chlorobutanol, N-methyl 2-pyrrolidone, dimethylformamide, and dimethylsulfoxide.
  • Bioactive peptide or bioactive protein strength Darrelins human guru force-like peptide 1 (hGLP-1), human atrial natriuretic peptide (hANP), human adrenomedullin, human parathyroid hormone (hPTH (1-34 )), A liquid preparation according to any one of the above (1) to (19), which is a kind selected from human insulin cartridges;
  • liquid preparation according to the above (25), wherein the liquid preparation for injection is a preparation for subcutaneous injection or a preparation for intramuscular injection;
  • bioavailability as a drug containing a bioactive peptide or bioactive protein containing dalerins as an active ingredient is ensured, and a more effective liquid preparation is provided.
  • the darrelins in the present invention are endogenous growth hormone secretagogues (GHS) and are peptides having an activity to increase intracellular calcium ion concentration and an activity to induce growth hormone secretion. .
  • GGS growth hormone secretagogues
  • a part of the amino acids is equivalent to the ghrelin in which insertion, removal, substitution and Z or addition are performed.
  • a peptide of darrelin derivative exhibiting biological activity.
  • natural darrelin inherent in each of these animals such as human, rat, pig, chicken, eel, rush, horse, hidge, elbow, rainbow trout, or nu-derived darrelin.
  • the darrelin derivative is preferably a peptide having the same activity as that of the native darelin inherent in each of these animals, and is, for example, acylated and modified with a fatty acid having 4 to 12 carbon atoms other than the otatanyl group at the serine position.
  • human darrelin is most preferably used.
  • the darellins may include a free salt form of a free peptide.
  • Free peptides and their salts can be converted into each other by conventional methods.
  • the free peptide When the free peptide is converted into a pharmacologically acceptable salt, for example, the free peptide can be reacted with an inorganic acid or an organic acid.
  • inorganic acids such as carbonates, bicarbonates, hydrochlorides, sulfates, nitrates and borates; for example, succinates, acetates, propionates, And salts with organic acids such as trifluoroacetate.
  • inorganic bases such as alkali metals such as sodium and potassium, alkaline earth metals such as calcium and magnesium, or organic bases such as organic amines such as triethylamine, basic amino acids such as arginine, etc.
  • organic bases such as organic amines such as triethylamine, basic amino acids such as arginine, etc.
  • the peptide may form a metal complex compound (for example, a copper complex, a zinc complex, etc.).
  • the origin of darellins is not particularly limited.
  • the production method is not limited to conventional methods, such as chemical synthesis methods, semi-chemical synthesis methods, genes, and the like. Although it is obtained by a recombination method, a production method combining them as appropriate, or by extracting vital force, it may be a deviation. For example, it can be obtained by the method described in Patent Document 1.
  • the concentration of darrelins in the liquid preparation provided by the present invention is not particularly limited as long as it can be provided as a pharmaceutical product.
  • the lower limit may be any concentration that can be dissolved in an aqueous solution as long as it is a concentration that exhibits a medicinal effect as a pharmaceutical product.
  • the content of the preparation is generally about 0.03 nmol / mL to about 15 mol / mL, more preferably about 0.03 nmolZmL to about 6 molZmL.
  • the acidic liquid is a compound having a carboxyl group, and is acetic acid, lactic acid, citrate, hydrochloric acid, propionic acid, butyric acid, benzoic acid, sulfuric acid, nitric acid, hydrofluoric acid, carbonic acid, Examples include bicarbonate, darconic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, methanesulfonic acid, malic acid, trifluoroacetic acid, and salts thereof. Or this An acidic liquid containing a component that is one kind or a combination of two or more kinds of the salt power group is included.
  • an acidic solution containing one or a combination of two or more of acetic acid, lactic acid, phosphoric acid, glycine, citrate, hydrochloric acid, propionic acid, butyric acid, benzoic acid, or a group consisting of these salts is preferable. More preferably, an acidic solution containing as an ingredient acetic acid, lactic acid, propionic acid, butyric acid and Z or phosphoric acid or a combination of two or more of these salt groups is used.
  • the concentration of the acidic solution is not particularly limited, and may be any concentration as long as it has an effect of increasing BA. It is 1 mM to LOOOmM, and more preferably 10 to 500 mM.
  • an aqueous solution having a buffering capacity can be used as an acidic solution that preferably has a small pH fluctuation of the aqueous solution during storage.
  • the pH of the buffer is preferably in the range of 3.0 to 7.0.
  • the pH of the liquid formulation after addition of the buffer solution is maintained by the buffer solution, but depending on the concentration of the buffer solution and specific circumstances, the pH may be around 0.1 to 0.2. Yes, but it is within the scope of this invention.
  • specific buffers include acetate buffer (including sodium acetate buffer and ammonium acetate buffer), lactate buffer, phosphate buffer (including sodium phosphate buffer). ), Glycine hydrochloride buffer, citrate buffer (including sodium taenoate buffer), citrate monophosphate buffer (including Mcllvaine buffer), phosphate-acetic acid-borate buffer (including Examples include Britton-Robinson buffer, phthalate buffer, and propionate buffer. These buffers can be used alone or in combination. In the present invention, acetate buffer, butyrate buffer, propionate buffer, lactate buffer, and Z or phosphate buffer are particularly preferably used.
  • a pH adjusting agent can be used in addition to the buffer solution described above.
  • pH regulators include hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, boric acid, carbonic acid, bicarbonate, darconic acid, sodium hydroxide, potassium hydroxide, aqueous ammonia, citrate, monoethanol.
  • Examples thereof include noramine, lactic acid, acetic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, malic acid, propionic acid, trifluoroacetic acid, and salts thereof.
  • the BA force at the time of subcutaneous injection is higher than that when the acidic liquid alone is used, and the BA is added by the polar organic liquid containing alcohols. It has been found that there is an effect of increasing the absorption or adjusting the absorption pattern.
  • Injections must always be sterile, and preservatives or preservatives may be added, especially when intended for split use.
  • the additive used for such a purpose include benzyl alcohol, chlorobutanol, phenol, and paraoxybenzoic acid esters.
  • Injectables may be painful when administered, and soothing agents may be added.
  • Additives used for this purpose include benzyl alcohol, chlorobutanol, phenol, or local anesthetics such as pro-power-in and xylocaine.
  • Patent Document 4 discloses an injectable preparation containing a medicinal component, benzyl alcohol or a similar compound as a pain relieving agent, and cyclodextrin. Benzyl alcohol relieves pain at the time of injection, and benzyl alcohol or its related compounds are used to prevent hemolytic action of benzyl alcohol on erythrocytes.
  • alcohols are added as preservatives, preservatives, soothing agents, etc.
  • a polar organic liquid containing alcohols is added together with an acidic liquid, It has been found that the liquid formulation of darrelin has the effect of further increasing the BA. Such knowledge was first discovered by the present inventors and is very specific.
  • Examples of such alcohols used in the present invention include, for example, benzyl alcohol, chlorobutanol, phenol, methanol, ethanol, propanol, butanol, isopropanol, 2-butanol, isobutanol, crezomono, m—Crezo Monore, black mouth Cresol, paraoxybenzoates (methylparaben, ethylparaben, etc.), inositol, propylene glycol, butylene glycol, cetanol, stearyl alcohol, hexinoredecanol, hexanetrionore, behe-norenoreconole, laurinorenoreconole Lanolin alcohol, glycerol (glycerin), ethylene glycol, jetylene glycol, diethyleneglycolole monobutinole ether, diethyleneglycololemonomethinoreethenole, mentorenore, bonoreno
  • N-methyl-2-pyrrolidone, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, and methylparaben can be used in the same manner as polar organic liquids that raise BA as in the case of alcohols.
  • polar organic liquids can be used alone or in combination.
  • the amount of the polar organic liquid in the present invention is a concentration having the above-described effect, and can be appropriately set within a range that does not cause a problem during the production or long-term storage of the drug of the present invention.
  • the concentration of the solution when administered is 0.001 to 80% (wZv), preferably 0.1 to 20% (wZv).
  • additives can be added to the liquid preparation of the present invention depending on the purpose.
  • additives include, for example, isotonic agents such as sodium chloride and mannitol; preservatives such as sodium benzoate; antioxidants such as sodium bisulfite, sodium pyrosulfite and ascorbic acid.
  • a painless glaze such as lidocaine hydrochloride and mepril hydrochloride can be appropriately selected and used.
  • a liquid preparation containing a bioactive peptide containing darrelins or a bioactive protein as an active ingredient with improved BA in the case of an injection, for example, various additives can be selected and used in consideration of osmotic pressure, solubility, hypoallergenicity, antiseptic effect and adsorption inhibiting effect.
  • the liquid preparation in the present invention is a preparation used for a parenteral administration method. More details Alternatively, injections, infusions, nasal preparations and the like can be mentioned. Examples of the injection include intravenous injection, subcutaneous injection, intradermal injection, intramuscular injection, intravenous drip injection, etc. Among them, subcutaneous injection, intramuscular injection, and the like are the BAs targeted by the present invention. The most effective improvement
  • the liquid preparation provided by the present invention can be produced by a production method commonly used in pharmaceutics.
  • a bioactive peptide or bioactive protein containing darrelins as a drug substance provided as a lyophilized product is dissolved in purified water, while a buffer solution and other additives are dissolved in purified water.
  • these drug substance solutions and additive solutions are mixed, and after appropriate steps such as sterilization filtration, they are dispensed into ampoules, vials, etc. to prepare formulations containing darrins as active ingredients. Obtainable.
  • preparations that are soluble at the time of use in a form that an injection can take This is a dosage form suitable when it is difficult to ensure stability over a long period of time in a solution.
  • One of the forms of the present invention is a drug that is dissolved at the time of use and becomes a liquid preparation containing a bioactive peptide or bioactive protein containing the darrelin of the present invention as an active ingredient.
  • the use-dissolving type drug is, for example, a solid composition obtained by appropriately selecting the above-mentioned various additives according to the purpose and adding the necessary amount to daleleins supplied as a solid composition such as a powder product.
  • aqueous solution containing a product or darrins containing a product or darrins
  • a liquid composition added with a necessary amount is dried to obtain a solid composition.
  • solid compositions can be used after being dissolved in a solvent such as water.
  • Solvents other than water may be included as long as they are acceptable as pharmaceuticals. For example, ethanol, 2-propanol or the like can be used.
  • a physiologically active peptide or physiologically active protein containing darrelins when provided as a solid composition, a saccharide can also be used. It was also found that the bioactive peptide containing darrelins or the bioactive protein BA further increases when added with an acidic solution and Z or a polar organic liquid.
  • saccharides used include monosaccharides such as mannitol, glucose, fructose, inositol, sorbitol, and xylitol, and disaccharides include sucrose, lactose, maltose, and trehalose.
  • saccharides used include monosaccharides such as mannitol, glucose, fructose, inositol, sorbitol, and xylitol, and disaccharides include sucrose, lactose, maltose, and trehalose.
  • Starch dextran
  • Examples include pullulan, alginic acid, hyaluronic acid, pectinic acid, phytic acid, phytin, chitin, and chitosan.
  • dextrins examples include a-cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, dextrin, hydroxypropyl starch, and hydroxyxyl starch
  • examples of cellulose include methylcellulose, ethinoresenololose, hydroxye and the like.
  • Examples include chinorecenolose, hydroxypropenorescenellose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, and the like. These saccharides can be used alone or in combination.
  • mannitol sucrose
  • glucose particularly preferably used.
  • cyclodextrins are particularly preferably used.
  • Cyclodextrins have been reported to increase by the addition of repulsive sulfobutyl ether ⁇ -cyclodextrin derivatives (j8-CyDs) in rats during subcutaneous injection of insulin. 2).
  • cyclodextrins can be added together with pharmaceuticals to improve the solubility of soft water-soluble substances and improve the storage stability of pharmaceuticals.
  • Patent Document 6 discloses a preparation containing an interferon polypeptide and a sulfoalkyl ether cyclodextrin.
  • a sulfoalkyl ether tercyclodextrin derivative is a storage stabilizer for the pharmaceutical composition. It is used as a characteristic that the biological activity of interferon polypeptide is retained! /
  • Patent Document 7 discloses a nasal administration preparation containing a physiologically active polypeptide and cyclodextrin
  • Patent Document 8 discloses a vaginal administration preparation containing a physiologically active polypeptide and cyclodextrin.
  • nasal or vaginal dosage forms have been developed as non-injectable preparations that have improved gastrointestinal absorption, because bioactive polypeptides are hydrolyzed by enzymes in the digestive tract or digestive tract wall. It is.
  • Cyclodextrins are used as absorption promoters for physiologically active polypeptides.
  • Patent Document 9 discloses a method for soluble and stable protein such as interferon using j8- and ⁇ -cyclodextrins. None of these documents suggest or disclose that the physiologically active peptide or physiologically active protein of the present invention is increased in the administration by subcutaneous injection.
  • These saccharides can be used alone or in combination.
  • the amount of saccharides in the present invention is a concentration having the above-described effects, and does not cause a problem during production or long-term storage of the drug of the present invention, or the viscosity of the solution is a problem during production or administration. It can be set as appropriate within the range that does not cause the problem.
  • the concentration in the solution at the time of administration is preferably in the range of 0.1 to 20% (WZV).
  • the physiologically active peptide or physiologically active protein further includes darrelins such as darrelin, ghrelin derivatives or darelin analogues, human glucuron-like peptide 1 (hG LP-1), human atrial natriuretic peptide. (hANP), human adrenomedullin, human parathyroid hormone (hPTH (l-34)), and liquid preparations that are human insulin, by adding acidic liquid, polar organic liquid, saccharide, etc. , Confirmed that the BA rose significantly.
  • darrelins administration by subcutaneous injection will not provide a medical effect, and only a plasma concentration will be obtained.
  • bioactive peptides or bioactive proteins the present invention provides a new administration. A form is ensured.
  • a buffer solution having a ⁇ value in parentheses was prepared using 5 ⁇ glycine hydrochloride buffer solution, 1M lactate buffer solution, 0.06 ⁇ propionate buffer solution and 0.0. ⁇ -butyrate buffer solution, respectively.
  • Ammonium acetate (molecular weight 77.08) 7. 71 g of purified water was added to make lOOmL, which was adjusted to pH 4.0 by adding 1 M hydrochloric acid. Purified water was added to this solution to make 200 mL. (6) 0.5M acetate buffer (pH 4.0):
  • Acetic acid (Molecular weight 60. 05) 6. Add Olg-powdered water to make lOOmL, and add 1M sodium hydroxide to pH 4.0. Purified water was added to this solution to make 200 mL.
  • Sodium dihydrogen phosphate dihydrate (molecular weight 156.01) 15. Purified water was added to 60 g to make 100 mL, and 1M hydrochloric acid was added to adjust the pH to 4.0. Purified water was added to this solution to make 200 mL.
  • Sodium dihydrogen phosphate dihydrate (molecular weight 156. 01) 15. Purified water was added to 60 g to make 100 mL, and 1M sodium hydroxide was added to adjust the pH to 5.0. Purified water was added to this solution to make 200 mL.
  • Chenic acid monohydrate (Molecular weight 210.14) 10.51 g of purified water was added to prepare 51 mL of taoic acid aqueous solution. Further, purified water was added to 14.71 g of trisodium citrate (molecular weight 294. 10) to prepare lOOmL of trisodium citrate aqueous solution. Aqueous citrate solution and trisodium citrate aqueous solution were mixed to adjust the pH to 4.0.
  • Purified water was added to 51 g of glycine (molecular weight 75. 07) to make lOOmL, and 1M hydrochloric acid was added to adjust the pH to 4.0. Purified water was added to this solution to make 200 mL.
  • Lactic acid (molecular weight 90.08) 45.04g Koji refined water was added to make 250mL, and 1M sodium hydroxide was added to adjust the pH to 4.0. Purified water was added to this solution to make 500 mL.
  • Propionic acid (molecular weight 74.08) 2. Add 22g of purified water to make 250mL, and add 1M sodium hydroxide to PH4.0. Purified water was added to this solution to make 500 mL.
  • Butyric acid (Molecular weight 88.11) 2. Add 64g of purified water to make 250mL, and add 1M sodium hydroxide to pH 4.0. Purified water was added to this solution to make 500 mL. [0063] A preparation containing human darrelin to a concentration shown in Table 3 below, using the above buffer solution or a solution obtained by appropriately diluting the above buffer solution as an acidic solution, or dissolving other additives 6-33, 51-59, 73 and 81-97 were prepared.
  • Ratio 2 Experiments with ⁇ 1 ⁇ -and subcutaneous fistula-shots in rats
  • Formulations 2 and 3 prepared in Comparative Example 1 were intravenously or subcutaneously administered to rats, and plasma concentrations were measured.
  • Subcutaneous administration was also performed using rats in which a polyethylene tube had been previously inserted into the femoral artery.
  • Formulation 3 was administered at a dose volume of lmLZkg using a syringe and a 26G needle from the back of the back, and blood was inserted into the femoral artery before administration and 5, 10, 20, and 30 minutes after administration. Collected.
  • Plasma concentration of darrelin was measured by the radioimmunoassay (RIA) method using an anti-ghrelin antibody. That is, after adding an anti-ghrelin antibody to a plasma sample, [ 125 I-Tyr 29 ] darelin was added to cause a competitive reaction. The secondary antibody was added thereto to precipitate darrelin bound to the anti-ghrelin antibody, and after separation of the supernatant, the radioactivity in the precipitated fraction was measured with a ⁇ -counter (manufactured by Packer Donnet).
  • RIA radioimmunoassay
  • the anti-ghrelin antibody used here recognizes darelin and does not recognize desacyldarelin (an inactive substance in which the octanol group is dissociated).
  • this measurement method is a measurement method that specifically detects active darrelin.
  • the resulting plasma darrelin concentration transition is shown in FIG.
  • the resulting force shown in Fig. 1
  • the maximum plasma concentration (Cmax) and the time to reach the maximum plasma concentration (Tmax) were determined as pharmacokinetic parameters.
  • the outer threshold value (C) at time 0 was calculated. More blood
  • the area under the serum concentration curve was calculated by the trapezoidal method, and the bioavailability (bioavailability: BA) was determined from this value.
  • the results are shown in Table 6. These values are average values obtained from 3 rats in each group.
  • the AUC when formulation 2 was administered intravenously at a dose of 10 gZkg was 205.98 ng'min ZmL
  • formulation 3 was dosed at 50 gZkg.
  • the AUC when administered subcutaneously was 25.72 ng 'min ZmL. Therefore, the BA of human darrelin when dissolved in 5% (wZv) mannitol aqueous solution was calculated to be 2.5%.
  • Formulations 34, 6 and Formulation 7 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. The results are shown in Fig. 2. The pharmacokinetic parameters are shown in Table 7 below.
  • the BAs of Formulation 6 and Formulation 7 were 22.9% and 35.3%, respectively.
  • the BA significantly increased to 9 to 14 times that of the 5% (w Zv) mannitol aqueous solution regardless of the pH of the buffer solution.
  • Formulations 7, 8, 9, 10, and 11 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 8 below.
  • the BAs of Formulations 7 8 9 10 and 11 were 35.3% 20.9% 7.0% 8.9% and 16.3%, respectively. In other words, BA was remarkably increased with respect to the 5% (wZv) mannitol aqueous solution, regardless of the buffer solution of any component having a pH of 4.0.
  • Example 4 Sputum kinetic test by subcutaneous injection in rats (effect of acid solution concentration)
  • Formulations 12 13 14 and 15 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 9 below.
  • the BAs of formulations 12 13 14 and 15 were 34.0% 28.1% 13.8% and 4.8%, respectively. That is, when the sodium acetate concentration in the acidic solution (pH 4.0) is 0.01M 0.5M, the BA is higher than the 5% (wZv) mannitol aqueous solution at any concentration.
  • Real test column 5 Subcutaneous acupuncture-shot test using rats (effect of DH of liquid formulation) Formulations 13, 16 and 17 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and plasma was obtained. The medium concentration was measured by the RIA method. The pharmacokinetic parameters are shown in Table 10 below.
  • the BAs of Formulations 13, 16 and 17 were 28.1%, 16.6% and 9.1%, respectively.
  • Formulations 18, 19, 20, 21, 22, and 23 were administered subcutaneously in a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and plasma concentrations were measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 11 below.
  • the BAs of Formulations 18, 19, 20, 21, 22 and 23 were 17.7%, 8.0%, 5.3%, 1 5.0%, 10.6% and 5.4%, respectively. That is, when using an acidic phosphate buffer (pH 4.0-5.0), the BA is higher than that of 5% (wZv) mannitol aqueous solution.
  • Formulations 14, 30, 81, 82, and 86 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 12 below.
  • the BA of Formulations 14, 30, 81, 82 and 86 were 13.8%, 25.2%, 25.8%, 13.8% and 22.5%, respectively.
  • Formulation 14 contains an acidic liquid and saccharides but does not contain alcohols.
  • Formulation 30 has the same acidic solution and saccharides as Formulation 14 and contains benzyl alcohol as an alcohol.
  • the formulation 30 has twice the BA of Formulation 14 and is more BA than the formulation without alcohols. Turned out to be expensive. In addition, the BA was found to be high regardless of the type and concentration of alcohol.
  • Example 8 Subcutaneous fistula using rats. Spider kinetic test by shooting (effect of white concentration)
  • Formulations 24, 13 and 25 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. The results are shown in FIG. 3, and the pharmacokinetic parameters are shown in Table 13 below.
  • the BAs of formulations 24, 13 and 25 were 38.2%, 28.1% and 19.4%, respectively.
  • the BA was higher than that of the 5% (wZv) mannitol aqueous solution. It was done.
  • preparations 13 and 25 in which sucrose was further added as a saccharide to preparation 24 containing only the acidic solution, BA further increased. It was also found that T1Z2 is prolonged when sucrose is added.
  • Example 9 Dynamic test of rats by subcutaneous injection in rats (Influence of sugar streets in sugar streets)
  • Formulations 35, 53, 84 and 85 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 14 below. [0109] Table 14: Pharmacokinetic parameters of darreline preparations administered to rats subcutaneously (effects of sugar type)
  • the BAs of formulations 35 53 84 and 85 were 3.0% 22.4% 21.3% and 8.7%, respectively.
  • Formulation 35 containing only sucrose showed a low strength of 3.0% although the BA increased.
  • BA was higher than that of 5% (wZv) mannitol aqueous solution even when the addition conditions of the acidic solution and alcohol were matched and the type of sugar was changed.
  • sucrose and glucose were found to be more effective than dextran 70.
  • Formulation 8797 was administered subcutaneously at a dose of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 15 below.
  • Table 15 Pharmacokinetic parameters of darreline preparations administered to rats subcutaneously (effects of using saccharides or cyclodextrins)
  • Formulations 87 to 97 all showed high BA.
  • Formulation 53 using sucrose as a saccharide had 22.4% BA and formulation 84 using glucose 21.3%. However, when cyclodextrins were used as saccharides, BA was also high.
  • Example 11 Subcutaneous fistula in rats. Spider kinetics test by injection (effect of ghrelin dose)
  • Formulations 26, 13, 27 and 28 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2. That is, the doses of gredin are 10, 50, 250 and 2,000 gZkg. Blood was collected in the same manner as in Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. The results are shown in FIGS. 4 and 5. The pharmacokinetic parameters are shown in Table 16 below.
  • the AUC of preparations 26 13 27 and 28 were 49.28 ng, min. ZmL 289.90 ng-min Zm les 1580.28 ⁇ 8 ⁇ min Zm les and 15050.59 ng 'min ZmL, respectively, and BA was 23.9% 28.1% 30.7% and 36.5%.
  • BA was 23.9% 28.1% 30.7% and 36.5%.
  • Example 12 Pharmacokinetic study by subcutaneous injection in rats (effect of addition of benzyl alcohol)
  • Formulations 13 14 29 and 30 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 17 below.
  • the BAs for formulations 13 14 29 and 30 were 28.1% 13.8% 39.3% and 25.2%, respectively. That is, the sodium acetate buffer that is an acidic solution is mixed with alcohols. When 1% (w / v) benzyl alcohol is added, the BA is the same as when benzyl alcohol is not added, regardless of whether the sodium acetate concentration is 0.1M or 0.03M. It was confirmed that benzyl alcohol, an alcohol, has an effect of improving BA of ghrelin.
  • Example 13 Subcutaneous fistula in rats. Spider kinetic test by injection (effect of ghrelin concentration)
  • Formulations 30 and 31 were administered subcutaneously as in Comparative Example 2.
  • the dosage volume was 1 mL Zkg for Formulation 30 and LZkg for Formulation 31 (when a dose of 50 / z LZkg was administered, a syringe with a microphone (SGE) was used). That is, both doses of darrelin are the same at 50 gZ kg.
  • Blood collection was performed in the same manner as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 18 below.
  • the BAs of Formulations 30 and 31 were 25.2% and 23.2%, respectively, which were almost equivalent. In other words, it was confirmed that the absorption improvement effect of sodium acetate buffer and benzyl alcohol was maintained regardless of the concentration and dose volume of darrelin.
  • Example 14 Subcutaneous pharyngeal test using rats (Shading effect of i3 ⁇ 4 acid buffer solution Preparations 31 and 32 were administered subcutaneously at a dose volume of 50 LZkg. That is, the dose of darrelin was 50 / z Blood was collected in the same manner as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method, and the pharmacokinetic parameters are shown in Table 19 below.
  • the BAs for Formulations 31 and 32 were 23.2% and 43.2%, respectively.
  • an acidic solution either 5% (w Zv) of a buffer solution in which an aqueous sodium acetate solution was adjusted to pH 4.0 with hydrochloric acid or a buffer solution in which acetic acid was adjusted to PH 4.0 with sodium hydroxide solution
  • BA was higher than that of mannitol aqueous solution, and that BA increased regardless of the components of the acidic solution.
  • Formulations 32 51 52 and 53 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 20 below.
  • Table 20 Pharmacokinetic parameters of darrelin formulations administered subcutaneously to rats (effect of acetate buffer concentration and pH)
  • the BAs for formulations 32 51 52 and 53 were 23.2% 22.8% 18.0% and 22.4%, respectively.
  • Formulations 32 and 51 to 53 are formulations in which benzyl alcohol, which is an alcohol that raises BA, and sucrose, which is a saccharide, are added. 79 formulations containing benzyl alcohol and sucrose are higher in acidic solutions, alcohols and saccharides than BA14.2% Shown to show BA.
  • Example 16 Subcutaneous fistulae using rats. Dynamic behavior test by injection (effect of other acid solutions)
  • Formulation 54 59 was administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 21 below.
  • Table 21 Pharmacokinetic parameters of darrelin formulations administered subcutaneously to rats (effect of other acidic solutions)
  • the BA of Formulations 54 59 and 73 were 19.9% 17.3% 22.3% 19.8% 2 6. 6% 23.2% and 14.3%, respectively.
  • Formulations 54 to 59 were prepared by adding benzyl alcohol, which is an alcohol that increases BA, and saccharose, a saccharide. It was found that the formulation containing benzil alcohol and sucrose had a BA higher than 14.2% acidic solution and the formulation containing alcohols and saccharides showed a high BA. In addition, BA increased regardless of the components of the acidic solution.
  • Real column 17 Subcutaneous moxibustion using rats. Tests and experiments on the kinetics of radioactivity by shooting (effects of alcoholic sugar sugar when no acid solution is included)
  • Formulation 7880 was administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 22 below.
  • the BA of formulation 78 80 was 8.3% 14.2% 16.9%, respectively.
  • the BA of Formulation 35 containing only sucrose is 3.0, and it can be seen that the BA is increased by adding alcohols without containing an acidic solution.
  • Example 18 Subcutaneous sputum in rats. Test of kinetics of sputum by shooting (effect of alcohols without acid solution)
  • Preparations 60 63 71 and 72 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mLZkg in the same manner as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 23 below.
  • BA of formulation 60 63 71 and 72 is BA of formulation 34 in saline solution % 10% (W / V) Preparation of sucrose aqueous solution 35
  • the BA of 3.0% is 3.0%, while it is almost higher. It has been shown that BA can be increased by adding alcohols without adding acidic solution.
  • Formulations 64 68 70 and 74 76 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 24 below.
  • Table 24 Pharmacokinetic parameters of darrelin formulations administered subcutaneously to rats (effects of polar organic liquids other than alcohols when no acidic liquid is included)
  • BA of formulation 64 68 70 74 76 is BA of formulation 34 in saline solution 5.
  • Example 20 Subcutaneous sputum in rats. Sputum kinetic test by experiment (N-methyl-2-pyrrolidone) Sound)
  • Formulations 83 and 65 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and plasma concentrations were measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 25 below.
  • Table 25 Pharmacokinetic parameters of darrelin preparations administered subcutaneously to rats (effect of N-methyl 2-pyrrolidone)
  • the BAs of Formulations 83 and 65 were very high at 65.7% and 57.4%, respectively.
  • the BA of the formulation 83 containing an acidic solution is higher than that of the formulation 65 containing no acidic solution.
  • the effect of increasing the BA by N-methyl-2-pyrrolidone is superior even when used alone. BA rises.
  • Intramuscular administration was performed using rats in which a polyethylene tube had been previously inserted into the femoral artery, as in subcutaneous administration.
  • Formulations 3 and 13 were administered at a dose volume of lmLZkg into the thigh muscle using a syringe and 26G needle.
  • Blood collection was performed in the same manner as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. The result is shown in FIG.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 26 below.
  • the BA for intravenous administration when products 3 and 13 are administered intramuscularly is 10. 9% and 28.5%. That is, when sodium acetate buffer was added, BA increased 2.6-fold with respect to 5% (wZv) mannitol aqueous solution, and intramuscular administration had the effect of improving absorption as well as subcutaneous administration. It was shown that there is.
  • Formulations 5 and 33 were administered subcutaneously to force-quizzed monkeys and plasma concentrations were measured.
  • Formulation 1 was intravenously administered to power quizzes and plasma concentrations were measured.
  • the administration solution was administered at a dose volume of 2 mLZkg, using a syringe and a 26G injection needle (both from Thermonet) in the forearm scalp vein.
  • Plasma was separated. Immediately, 1Z10 volume of 1N hydrochloric acid was added to the plasma, mixed, and stored at 80 ° C until measurement.
  • the concentration of ghrelin in plasma was determined using Active Ghrelin ELISA Kit (Mitsubishi Chemical Corporation,
  • This measurement method like the RIA method, is a measurement method that specifically detects active darrelin.
  • Fig. 7 shows the change in plasma darrelin concentration. From the results in the figure, Cmax and Tmax were obtained as pharmacokinetic parameters. Furthermore, AUC is calculated by the trapezoidal method,
  • Table 27 Pharmacokinetic parameters of darrelin formulations administered intravenously or subcutaneously to force-quizzed monkeys
  • the BAs for intravenous administration when formulations 5 and 33 were administered subcutaneously were 4.9% and 12.8%, respectively.
  • BA sodium acetate buffer containing 1% (WZV) benzyl alcohol was added, BA increased 2.6 times compared to 5% (wZv) mannitol aqueous solution.
  • WZV sodium acetate buffer containing 1%
  • benzyl alcohol was also shown to have an effect of improving darelin absorption in the power-quizzed monkey.
  • Example 23 Plasma growth hormone raising action in rats of ghrelin preparation
  • the dosing solution is administered at a dose volume of 50 LZkg using a syringe and a 26G needle (both from Terumo), subcutaneously from the back, and before the administration and at 5, 10, 20, 30, 60 minutes after administration. Blood was collected from a polyethylene tube inserted into the artery. Immediately add 1Z 100 volumes of EDTA 2Na 2H 2 O solution to the blood, then centrifuge to separate the plasma and use it for measurement.
  • the plasma GH concentration was measured by the radioimmunoassay (RIA) method using Rat growth hormone (rGH) [ 12 3 ⁇ 4 assay system (Amersham Biosciences Inc .: Cat. No. RPA551). The resulting plasma GH concentration transition is shown in FIG. These values are average values obtained from 3 rats in each group.
  • the plasma GH concentration after subcutaneous administration of Formulation 4 slightly increased compared to the pre-dose value (113 ngZmL), and reached 5 minutes after administration.
  • the value (208 ⁇ gZmL) was shown.
  • the plasma GH concentration when formulation 31 was administered subcutaneously was After 20 minutes, the peak value (316 ngZmL) was shown, which was 3.3 times the pre-dose value (96 ngZmL).
  • the plasma GH-elevating effect after administration of darrelin preparation was found to be more effective with the preparation using sodium acetate and benzyl alcohol.
  • Formulations 37, 39, 41 and 98 to 102 were administered subcutaneously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 28 below.
  • Formulations 36, 38 and 40 were administered intravenously at a dose volume of 1 mLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. BA was calculated from these values.
  • the plasma concentration of rat darrelin was measured by the same method as human darrelin.
  • the plasma concentration of human darrelin and Desotatanol was measured by the radioimmunoassay (RIA) method using an anti-ghrelin antibody. . That is, after adding an anti-ghrelin antibody to a plasma sample, [ 125 I-Tyr] darelin (13-28) was added to cause a competitive reaction. A secondary antibody was added thereto to precipitate darrelin bound to the anti-grelin antibody, and after separation of the supernatant, the radioactivity in the precipitated fraction was measured with a ⁇ -counter (manufactured by Packard).
  • the anti-ghrelin antibody used here is a measurement method that recognizes ghrelin and desotathanol body equally.
  • Table 28 Pharmacokinetic parameters of darrelins administered subcutaneously to rats
  • Examples of darellins include rat darrelin, des-one otanoyl (removed otatanyl group of serine side chain at position 3 of human darellin), and [L-2-aminododecanoic acid 3 ] human darellin as well as human ghrelin.
  • rat darrelin des-one otanoyl (removed otatanyl group of serine side chain at position 3 of human darellin)
  • [L-2-aminododecanoic acid 3 ] human darellin as well as human ghrelin.
  • Real row 25 Subcutaneous scissors in rats. Tests and experiments by shooting (effects of needles on other cattle active peptides and proteins)
  • Formulations 43, 45, 47, 49, 50, 103-107 were administered subcutaneously at a dose volume of 1 mL / kg as in column 2 for it comparison, and plasma concentrations were measured by the RIA method.
  • the pharmacokinetic parameters are shown in Table 29 below.
  • Formulations 42, 44, 46 and 48 were administered intravenously at a dose volume of lmLZkg as in Comparative Example 2, and the plasma concentration was measured by the RIA method. BA was calculated from these values.
  • the plasma concentration of human parathyroid hormone (134) was measured by the radioimmunoassay (RIA) method using an anti-PTH antibody. That is, after anti-PTH antibody was added to the plasma sample, [ 125 I-Tyr34] PTH (l-34) was added for competitive reaction. A secondary antibody was added thereto to precipitate PTH ( 1-34 ) bound to the anti-PTH antibody, and after separation of the supernatant, the radioactivity in the precipitated fraction was measured with a spear counter (manufactured by Packard).
  • RIA radioimmunoassay
  • Plasma concentration measurement of human glucagon-like peptide 1 is based on Glucagon-like Pept Measurement was carried out by the Enzymno assay (E LISA) method using ide-1 (Active) ELISA Kit (LINCO Research Inc.).
  • the concentration of human adrenomedullin in plasma was measured by the radioimmunoassay (RIA) method using AM mature Rashionogi (Shionogi Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • Insulin 'Ria beads II (Yamasa Soy Sauce Co., Ltd.) is used for the concentration in human insulin plasma.
  • hANP human atrial natriuretic peptide
  • Peptides include rat darrelin, desacyl human derelin (des-otatanyl body from which the otatanyl group of the serine side chain at position 3 of human darellin is removed), [L-2-aminododecanoic acid 3 ] human darrelin, human glucagon-like peptide L OiGLP-1), human atrial natriuretic peptide (hANP), human adrenomedullin, human parathyroid hormone (hPTH (l-34)), and human insulin, as in the case of darrins, in the case of preparations containing saccharides, alcohols and acidic solutions, It was obvious that BA increased significantly.
  • Example 1 Preparation of a medical composition containing human ghrelin with controlled cocoon
  • a pharmaceutical composition was prepared as an aqueous solution with a benzyl alcohol concentration of about 1% (w / v). The pH of this aqueous solution was measured and found to be pH 4.0.
  • a bioactive peptide (bioavailability: BA) as a drug of a bioactive peptide or bioactive protein containing darrelins is ensured, and a more effective liquid preparation is provided. Furthermore, it is possible to provide a method for improving BA when subcutaneously injecting an aqueous solution in which a physiologically active peptide containing darrelins or a physiologically active protein is dissolved.
  • the present invention provides the fact that BA is lower than when administered by intravenous injection.
  • a liquid preparation of a bioactive peptide or bioactive protein containing darrelins can maintain an effective blood concentration of the bioactive peptide or bioactive protein containing darrelins even when administered by subcutaneous injection. And its medical value is tremendous.
  • FIG. 1 A graph showing changes in plasma concentration when human darrelin is dissolved in 5% (wZv) mannitol aqueous solution and intravenously or subcutaneously administered to rats (Comparative Example 2).
  • FIG. 2 is a graph showing changes in plasma concentration when human darrelin is dissolved in sodium acetate buffer and administered subcutaneously to rats (Example 2).
  • FIG. 3 Changes in plasma concentration when human darrelin was dissolved in 0.1M sodium acetate buffer (pH 4.0) supplemented with 0-20% (wZv) sucrose and administered subcutaneously to rats. (Example 7).
  • FIG. 4 is a graph showing changes in plasma concentration when ghrelin is administered subcutaneously at a dose of 2,000 g / kg of 10, 50, and 250 ghrelin (Example 8). In this case, 0.1 M sodium acetate buffer (PH4.0) and 10% (wZv) sucrose are added.
  • FIG. 5 A graph showing the relationship between AUC and the dose when rat is administered subcutaneously at a dose of 2,000 g / kg of ghrelin at 10, 50, 250! ).
  • FIG. 6 is a graph showing changes in plasma concentration when human darrelin is dissolved in 5% (wZv) mannitol aqueous solution or sodium acetate buffer and administered intramuscularly to rats (Example 1).
  • FIG. 7 is a graph showing changes in plasma concentration when human darrelin is dissolved in a 5% (wZv) mannitol aqueous solution or sodium acetate buffer and administered intravenously or subcutaneously to force-quills (Example 13). ).
  • FIG. 8 is a graph showing changes in plasma concentration of growth hormone when human darrelin is dissolved in 5% (wZv) mannitol aqueous solution or sodium acetate buffer and administered subcutaneously to rats (Example 14).

Abstract

　グレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とする薬剤としての生物学的利用率（バイオアベイラビリティ；ＢＡ）を確保し、より有効な液状製剤を提供すること、及びグレリン類等を溶解した水溶液を皮下注射した際のＢＡを改善する方法を提供することであり、グレリン類らを溶解した水溶液を皮下注射した際のＢＡを改善する方法の提供であり、グレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、酢酸、乳酸、リン酸、グリシン、クエン酸、塩酸、プロピオン酸、酪酸、安息香酸又はこれらの塩からなる群の１種または２種以上の組み合わせを成分とする酸性液及び／又は、アルコール類及び／又はＮ－メチル－２－ピロリドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メチルパラベンからなる群の１種または２種以上の組み合わせを成分とする極性有機液体を含有することを特徴とする液状製剤である。

Description

明 細 書
生理活性ペプチド液状製剤
技術分野
[0001] 本発明は、生理活性ペプチドあるいは生理活性タンパク質を投与した際の生物学 的利用率を改善した液状製剤、およびその改善方法に関する。
背景技術
[0002] 現在、インスリン、成長ホルモン、心房性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン、 LH
RH誘導体、副甲状腺ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン誘導体などの種々の生理 活性ペプチドあるいは生理活性タンパク質製剤が、医薬品として販売されている。し 力しながら、これらの化合物は、消化管内のプロテアーゼによる分解で不活性ィ匕され ることから、経口投与製剤としての開発は困難であり、そのほとんどが非経口投与とし て、主に注射剤としての製剤形態で臨床的に供されている。
[0003] 注射剤の場合、疾病の治療として連続投与、長期投与を行う場合には、そのたび 毎に患者は通院して投与を受けることとなり、患者には負担が大きい。したがって、注 射剤でも、患者が自分で投与できる皮下注射の形態が望まれている。しかし、皮下注 射にて投与した場合は、皮下力もの吸収過程でプロテアーゼ等による分解をうけるた め、静脈内注射にて投与した場合に比べると生物学的利用率 (バイオアベイラビリテ ィ；以下 BAと、う)が低くなると 、う問題点がある。
[0004] そのため、皮下注射による投与では、静脈内投与時よりも多量の薬剤量及び Z又 は投与回数を増やすことが必要とされているのが現状であり、患者への負担が大きな ものとなっている。本発明における生物学利用率 BAとは、投与された製剤中の薬物 が体循環血液中に到達する割合（生物学的利用率、 EBA: extent of bioavailability) をいう。
[0005] ダレリンは、成長ホルモン分泌促進因子レセプター（GHS— R)に対する内因性成 長ホルモン分泌促進因子 (GHS)であり、 1999年にラットの胃から単離精製された 生理活性ペプチドである (非特許文献 1)。その後、ラット以外の脊椎動物、例えばヒト 、マウス、ブタ、 -ヮトリ、ゥナギ、ゥシ、ゥマ、ヒッジ、力エル、 -ジマス、ィヌからも、類 似した一次構造を有するダレリンが単離され、あるいは cDNAから推定されている。こ れらの構造式を表 1に示す。また、ここに列記する以外に、ネコ、ャギなどのダレリン が単離されている。
[0006] [表 1]
ヒ 卜（Human) ： GSS( n-octanoyl)FLSPEHQRVQQRKESKKPPAKLQPR
： GSS(n -octanoyDFLSPEHQRVQRKESKKPPAKLQPR ラ ッ ト（Rat) ： GSS(n octanoyDFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR
： GSS(n -octanoyDFLSPEHQKAQRKESKKPPAKLQPR マウス（Mouse) ： GSS(n -octanoyDFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR ブグ (Porcine) ： GSS(n- octanoyDFLSPEHQKVQQRKESKKPAAKLKPR ゥシ (Bovine) ： GSS(n octanoyDFLSPEHQKLQRKEAKKPSGRLKPR ヒ ッジ (Ovine) ： GSS(n octanoyDFLSPEHQKLQRKEPKKPSGRLKPR ィヌ (Canme) ： GSS(n -octanoyDFLSPEHqKLqqRKESKKPFAKLQPR ゥナギ（Eel) ： GSS(n- octanoyl)FLSPSQRPQGKDKKPPRV-NH2
ニジマ ス （Trout) ： GSS(n- octanoyl)FLSPSQKFQVRQGKGKFFRV-NH2
： GSS(n -octanoyl)FLSPSqKPqGKGKPPRV-NH2
ニヮ ト リ（Chicken) ： GSS(n -octanoyDFLSPTYKNIQQQKGTRKPTAR
： GSS(n -octanoyDFLSPTYKNIQQQKDTRKPTAR
： GSS(n -octanoyDFLSPTYKNiqqqKDTRKPTARLH ゥシガエル（Bullfrog) GLT(n-o ctanoyDFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNM
： GLT(n -decanoyDFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNM
： GLT(n -octanoyDFLSPADMQKIAERQSQNKLRHGNMN テラ ピア（Tilapia) ： GSS(n-c ctanoyl)FLSPSQKPqNKVKSSRI-NH2
ナマズ（Catfish) ： GSS(n- 3ctanoyl)FLSPTQKPQNRGDRKPPRV-NH2
： GSS(n -octanoyDFLSPTQKPqNRGDRKPPRVG
ゥマ (E quine) ： GSS(n -butanoyDFLSPEHHKVQHRKESKKPPAKLKPR
(上記表 1中において、アミノ酸残基は、 IUPACまたは IUCの一文字標記により表し ている。）
[0007] これら各動物に内在する天然型ダレリンは、 3位のセリン残基（S)あるいはスレオ- ン残基 (T)の側鎖水酸基がオクタン酸、デカン酸などの脂肪酸によりァシル化された 特異的な構造を有するペプチドであり、疎水性修飾構造を有する。また、成長ホルモ ン分泌促進因子レセプターに結合することによって、細胞内のカルシウムイオン濃度 を上昇させる活性を有する。これらダレリンは、強力な成長ホルモン分泌促進活性を 有し、成長ホルモン分泌の調節に機能することが解明されており、ダレリンの生理活 性的役割と、医薬品への適用に関して興味がもたれている (特許文献 1)。なお、本 発明では天然型ダレリンを総称してダレリンと!/、う。 [0008] また、これら各動物に内在する天然型ダレリンと該グレリンの一部構造を置換あるい は欠失させたダレリン誘導体、或いはダレリン類似体 (特許文献 3)なども、各疾病等 の治療剤として期待されて ヽる。
ダレリン誘導体とは、ダレリンの疎水性修飾構造において、オタタノィル基 (C )では
8 なぐへキサノィル基 (C )、デカノィル基 (C )、ドデカノィル基 (C )等の炭素原子
6 10 12
数 2〜20、好ましくは炭素原子数 4〜12程度の脂肪酸による修飾構造のものや、さら に分枝構造を有する脂肪酸や不飽和脂肪酸による修飾構造、また、フ ニルプロピ ォニル基などの芳香環を含む修飾構造や、ァダマンタン骨格を持つ修飾構造等に 置換されているものをいう。また、これら各動物に内在する天然型のダレリンは、疎水 性修飾構造とペプチド主鎖はエステル結合により結合している力 エステル、エーテ ル、チォエーテル、アミドまたはジスルフイド結合を介して結合しているものもダレリン 誘導体となる (特許文献 1)。
[0009] ダレリン、ダレリン誘導体或いはダレリン類似体力 なるダレリン類の医薬品への適 用は非常に期待されて ヽるが、 ヽまだ具体的に医薬組成物として製剤設計されてお らず、体内での動態にっ 、ては未知の部分が多 、。
ダレリン類は医薬組成物としては、特許文献 2において、ダレリン類の水溶液の安 定性に及ぼす pHの影響、ダレリン類の疎水性修飾構造の分解を抑制する方法等に 関して報告されている。これによると、ダレリン類を含有する水溶液の安定な pHは 2 〜7の範囲であり、この pHの調節には、 pH調節剤や緩衝液を用いて行うことができ ることが記載されている。また、保存中における水溶液の pHの変動が小さい方が好 ましいため、緩衝能を有する緩衝液であることが好ましぐそのような緩衝液として、グ リシン塩酸緩衝液、酢酸緩衝液、クェン酸緩衝液、乳酸緩衝液、リン酸緩衝液、タエ ン酸—リン酸緩衝液、リン酸 酢酸 ホウ酸緩衝液、フタル酸緩衝液が挙げられてい る（特許文献 2 : pi 1、 5〜14行)。
[0010] また、実施例にお!、ても、 Mdlvaine緩衝液 (タエン酸水溶液とリン酸水素ニナトリウ ム水溶液を混合したもの）、 Britton-Robinson緩衝液（リン酸 '酢酸'ホウ酸水溶液と水 酸ィ匕ナトリウム水溶液を混合したもの）、クェン酸緩衝液、グリシン塩酸緩衝液、酢酸 緩衝液におけるダレリンの水溶液中での安定性についての試験が記載されている。 いずれの種類の緩衝液を用いても、ダレリン類水溶液の pHの範囲を 2〜7の範囲と することにより、ダレリン類の水溶液での安定性を確保できることが記載されているが 、体内に投与した場合の動態については、全く検討されていない。
医薬組成物を考えた場合、ペプチド蛋白は一般に水溶液中では不安定であるため
、投与するまでの安定性をいかに確保する力も重要な課題であるが、投与に際して 最も有効な製剤を設計することは、更に重要な課題である。
[0011] 特許文献 1：国際公開 WO01Z07475号公報
特許文献 2：国際公開 WO03Z097083号公報
特許文献 3：特表 2004 - 514651号公報
特許文献 4：特公昭 63— 40166号公報
特許文献 5：特許第 2643426号
特許文献 6：特表 2004 - 522803号公報
特許文献 7：特公平 2 - 19092号公報
特許文献 8：特公平 5 - 24129号公報
特許文献 9：特許第 3120987号
非特許文献 l : Kojimaら： Nature, 402卷、 656- 660頁、 1999年
非特許文献 2 : Tokihiroら： J. Pharm. Pharmacol, 52卷、 911-917頁、 2000年 発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0012] ダレリン類は生理活性ペプチドであるので、医薬品として投与する場合、プロテア ーゼ等の影響を受けな 、非経口投与剤が、そしてその中でも注射剤が考えられる。 注射剤にあっても、皮下注射の場合には、注射部位からの薬物の吸収、そして血中 への移行を保証できることが必要となる。しかしながら、一般にペプチド製剤は、皮下 注射による投与の場合、 BAが低いとされており、注射剤としての製剤設計は困難で ある。
現在は、ダレリン類の各薬理効果に対する有効量は、薬物の投与量に対する薬理 効果を指標として、模索されている状況である。薬物治療を合理的かつ安全に遂行 するためには、薬物の血中濃度を調節できることが必要であり、薬物の吸収に大きく 係る製剤技術を確保する必要がある。
[0013] そこで、まずダレリン類のうち、ダレリンを皮下注射剤として投与した場合の BAにつ いて、ラットおよびサルを用いて確認したところ、他のペプチド製剤の BAは他の薬剤 に比して低ぐ一般に 20%力も 40%程度であると言われているのに対して、ダレリン の BAはラットで 5%程度であり、サルにおいては 3%程度と著しく低いことがわ力つた 。この事実についても初めて確認した。
BA率の変動要因としては、一般には、まず投与部位力 その近傍の末梢血への 移行効率や移行速度の影響が考えられる。これらは、薬物の分子量、 pKaや脂溶性 などの体液中、組織中での拡散や生体膜の透過を決定する物理化学的特性や、投 与された部位の組織学的形態や生理的特性と!/、つた薬物と投与部位の固有の性質 によるものである。
[0014] BAが低い場合、治療のために必要な血漿中有効濃度を確保するためには、投与 量及び Z又は投与回数を多くしなければならず、それは患者にとっては大きな負担 となるため、 BAを上げる製剤技術が必要とされる。
[0015] したがって本発明は、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク 質の薬剤としての BAを確保し、より有効な液状製剤を提供すること、およびダレリン 類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を溶解した水溶液を皮下注 射した際の BAを改善する方法を提供することを課題とする。
課題を解決するための手段
[0016] 力かる課題を解決するために、本発明者らはダレリン類の注射による投与後の血中 濃度について詳細に検討を行った。
まず、ダレリンと、注射剤に用いることができる各種補助剤とを共に投与し、 BAにつ いて確認した。等張化剤としてマン-トール、あるいは溶解補助剤として尿素、あるい は緩衝液として酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 0)などをダレリンに添加してラットに皮 下注射したところ、酢酸ナトリウム緩衝液 (PH4. 0)は BAが 35. 3%と非常に上がつ たが、それ以外はほとんど変化せず、最も高くて尿素で 3. 4%であった。
次に、酸性液の種類を変え、同様に BAを測定したところ、一様に BAが上がること を確認した。 その結果、ダレリンは、これを皮下注射する際に酸性液と共に投与することによって
、 BAが顕著に上昇することを見出した。
[0017] また酸性液の種類や濃度、 pH等を調整することによって BAを制御することができ ることを見出した。酸性液の種類により BAの改善の効果が異なることも見出し、これ は、ダレリン製剤或いはダレリン溶液における pHの値を制御することによる効果だけ ではな!/、ことを意味して 、る。
[0018] 更に、ダレリンを皮下注射する際に極性有機液体と共に投与することによって、 BA が顕著に上昇することを見出した。
[0019] また、ダレリンと酸性液と極性有機液体を共に投与した場合、酸性液を単独でグレリ ンに単独で投与した場合及び極性有機液体を単独でダレリンと共に投与した場合に 比べ、 BAは上昇することを見出した。
[0020] また、ダレリンを皮下注射する際に酸性液と糖類、或いは極性有機液体ほかと糖類 と共に投与することによって、 BAが顕著に上昇することを見出した。
[0021] 更に、これらの BAを上昇させる効果は、ダレリンにとどまらず、生理活性ペプチドあ るいは生理活性タンパク質の製剤に酸性液及び/又は極性有機液体及び/又は糖 類を共に投与することによって、 BAが顕著に上昇することを見出した。
[0022] したがって、本発明の具体的態様を示せば、以下のようになる。
(1)生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、酸性液を含有す る液状製剤；
(2)酸性液力 酢酸、乳酸、リン酸、グリシン、クェン酸、塩酸、プロピオン酸、酪酸、 安息香酸またはこれらの塩力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とす る上記（1)に記載の液状製剤；
(3)酸性液力 酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸及び Z又はリン酸またはこれらの塩 力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とする上記（1)に記載の液状 製剤；
(4)液状製剤の pHが 3. 0から 7. 0の範囲であることを特徴とする上記（1)または（2) に記載の液状製剤；
(5)酸性液の濃度が 1〜： LOOOmMである上記（1)〜（3)のいずれかに記載の液状 mm-,
(6)酸性液の濃度が 10〜500mMである上記（1)〜（3)の 、ずれかに記載の液状 製剤；
(7)酸性液が、 pH3. 0〜7. 0の範囲である酸緩衝液であることを特徴とする上記（1 )〜（6)の 、ずれか一項に記載の液状製剤；
である。
また、本発明は別の態様として、
(8)生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、極性有機液体を 含有することを特徴とする液状製剤；
(9)生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、極性有機液体を 含有することを特徴とする上記（1)〜（7)の ヽずれかに記載の液状製剤；
(10)極性有機液体力 アルコール類及び Z又は N—メチル—2—ピロリドン、ジメチ ルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メチルパラベンからなる群の 1種または 2種以 上の組み合わせを成分とする上記（8)または（9)に記載の液状製剤；
(11)極性有機液体が、ベンジルアルコール、エタノール、フエノール、 tert—ブタノ一 ル、クロロブタノール、 N—メチル 2—ピロリドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルス ルホキシドカもなる群の 1種または 2種以上の組み合わせである上記（8)または（9) に記載の液状製剤；
(12)極性有機液体の濃度が 0. 001-80% (wZv)である上記（8)〜（11)のいず れかに記載の液状製剤；
(13)極性有機液体の濃度が 0. 1〜10% (wZv)である上記（8)〜（11)のいずれか に記載の液状製剤；
(14)更に糖類を含有することを特徴とする上記（1)〜（7)のいずれかに記載の液状 製剤；
(15)更に糖類を含有することを特徴とする上記（8)〜（12)のいずれかに記載の液 状製剤；
(16)更に極性有機液体及び糖類を含有することを特徴とする上記（1)〜（7)のいず れかに記載の液状製剤； (17)糖類がマン-トール、白糖、ブドウ糖、シクロデキストリン類力 なる群の 1種また は 2種以上の組み合わせである上記（14)〜（16)の 、ずれかに記載の液状製剤；
(18)糖類がシクロデキストリン類であることを特徴とする上記（14)〜（17)のいずれ かに記載の液状製剤；
(19)糖類の濃度が 0. 1〜20% (w/v)である上記（14)〜（18)のいずれかに記載 の液状製剤；
である。
[0024] また、より具体的な本発明は、
(20)生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質力 ダレリン類、ヒトグル力ゴン様 ペプチド一 1 (hGLP- 1)、ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド (hANP)、ヒトアドレノメ デュリン、ヒト副甲状腺ホルモン (hPTH (1-34) )、ヒトインスリンカゝら選択される一種で ある上記（1)〜（19)のいずれかに記載の液状製剤；
(21)生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質力 ダレリン類である上記（1)〜（ 19)のいずれかに記載の液状製剤；
(22)ダレリン類が、ダレリンである上記（1)〜（19)の 、ずれかに記載の液状製剤；
(23)ダレリンカ、ヒトダレリンである上記（1)〜（19)のいずれかに記載の液状製剤；
(24)ダレリン類の濃度が、 0. 03ηπιοΐΖπΛ〜15 /ζ ΐηοΐΖπΛであることを特徴とす る上記（1)〜（19)のいずれかに記載の液状製剤；
(25)液状製剤が、注射用液状製剤であることを特徴とする上記（1)〜（24)の ヽず れかに記載の液状製剤；
(26)注射用液状製剤が、皮下注射用製剤あるいは筋肉内注射用製剤であることを 特徴とする上記 (25)に記載の液状製剤；
である。
[0025] さらに本発明は、より具体的な態様として、
(27)ダレリン類を有効成分とし、酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸及び Ζ又はリン酸 からなる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とする酸性液を含有し、且つ、 ベンジルアルコール、エタノール、フエノール、 tert—ブタノール、 N—メチルー 2—ピ 口リドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドからなる群の 1種または 2種以上 の組み合わせである極性有機液体を含有し、 pHが 3. 0〜7. 0である液状製剤； (28)ダレリン類を溶解した水溶液に酸性液および極性有機液体を添加したことを特 徴とするダレリン類の生物学的利用率を改善する方法；
である。
発明の効果
[0026] 本発明により、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有 効成分とする薬剤としての生物学的利用率 (バイオアベイラビリティ： BA)を確保し、 より有効な液状製剤が提供される。
さらに、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を溶解した 水溶液を皮下注射した際の BAを改善する方法が提供される。
したがって、例えば皮下投与では医療上有効な血漿濃度が得られないとされてい た、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質の血中濃度を維 持しうることができるものであり、その医療上の価値は多大なものである。
発明を実施するための最良の形態
[0027] 以下に、本発明が提供するダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タ ンパク質を有効成分として含有する液状製剤、および BAの改善方法について、その 詳細を説明する。
[0028] 本発明におけるダレリン類は、内因性の成長ホルモン分泌促進因子（GHS)であり 、細胞内のカルシウムイオン濃度を上昇させる活性、および成長ホルモンの分泌を誘 導する活性を有するペプチドである。本発明においては、これら各動物に内在する 天然型ダレリンおよび該グレリンのペプチド主鎖におけるアミノ酸配列において、その 一部のアミノ酸が挿入、除去、置換及び Z又は付加等している該グレリンと同等の生 理活性を示すダレリン誘導体のペプチドを 、う。
[0029] また、本発明では、ヒト、ラット、ブタ、ニヮトリ、ゥナギ、ゥシ、ゥマ、ヒッジ、力エル、二 ジマス、またはィヌ由来のダレリンなど、これら各動物に内在する天然型ダレリンが好 ましく用いられる。ダレリン誘導体では、好ましくは、これら各動物に内在する天然型 ダレリンと同様の活性を有するペプチドで、例えば 3位のセリンの位置にオタタノィル 基ではなぐ炭素原子数 4〜12の脂肪酸によりァシル化修飾されている誘導体或い は 3位のセリン側鎖のオタタノィル基を除去したデス一オタタノィル体が用いられる。 さらに、本発明の液状製剤の投与対象者がヒトであるときは、ヒトダレリンが最も好ま しく用いられる。
[0030] また、ダレリン類は、遊離のペプチドのほ力 塩の形態のものを含むことができる。
遊離のペプチドとその塩は、慣用の方法により相互に変換可能である。遊離のぺプ チドを、薬理的に許容できる塩とする場合には、例えば、遊離ペプチドを無機酸ある いは有機酸と反応させることにより行うことができる。このような塩としては、例えば、炭 酸塩、重炭酸塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、ホウ酸塩等の無機酸との塩;例えば、コ ハク酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トリフルォロ酢酸塩等の有機酸との塩が挙げら れる。
[0031] さらに、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カルシウム、マグ ネシゥム等のアルカリ土類金属、または有機塩基、例えば、トリェチルァミン等の有機 アミン類、アルギニン等の塩基性アミノ酸類等などとの塩を挙げることができる。また、 該ペプチドは、金属錯体ィ匕合物 (例えば、銅錯体、亜鉛錯体等)を形成してもよい。
[0032] また、ダレリン類について、その起源は特に限定されるものではなぐその製法につ いても天然の原料から単離する以外に、常法による化学合成法、半化学合成法、遺 伝子組換え法、もしくはそれらを適宜組合せた製造法、または生体力 抽出などによ り得られたものの 、ずれであってもよ ヽ。例えば特許文献 1に記載される方法により 得ることができる。
[0033] 本発明が提供する液状製剤におけるダレリン類の濃度は、医薬品として提供できる 範囲であれば特に限定されない。すなわち、下限としては、医薬品として薬効を示す 濃度であればよぐ上限としては、水溶液中で溶解できる濃度であればよい。好ましく は、一般的に利用されている製剤含有量である 0. 03nmol/mL〜15 mol/mL 程度、より好ましくは 0. 03nmolZmL〜6 molZmL程度の範囲とすればよい。
[0034] 本発明が提供する液状製剤において、酸性液はカルボキシル基を有する化合物 であり、酢酸、乳酸、クェン酸、塩酸、プロピオン酸、酪酸、安息香酸、硫酸、硝酸、ホ ゥ酸、炭酸、重炭酸、ダルコン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸 、リンゴ酸、トリフルォロ酢酸、またはこれらの塩などを挙げることができる。またはこれ らの塩力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせである成分を含む酸性液を含 有させる。好ましくは、酢酸、乳酸、リン酸、グリシン、クェン酸、塩酸、プロピオン酸、 酪酸、安息香酸またはこれらの塩力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成 分とする酸性液が好ましい。更に好ましくは、酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸及び Z 又はリン酸またはこれらの塩力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分と する酸性液を用いる。
[0035] 酸性液の濃度は特に限定されず、 BAを上げる効果を有する濃度であればよぐ 1 mM〜： LOOOmMであり、より好ましくは 10〜500mMである。
[0036] ダレリン類の安定性を考慮した場合、保存中における水溶液の pHの変動が小さい ほうが好ましぐ酸性液として、緩衝能を有する水溶液、すなわち緩衝液を用いること ができる。その場合、緩衝液の pHは、 3. 0〜7. 0の範囲がよい。緩衝液を添加した 後の液状製剤の pHは、緩衝液により pHは維持されるが、緩衝液の濃度や特異的な 状況下においては、 pHは 0. 1乃至 0. 2程度前後する場合もありうるが、それも本発 明の範囲内である。
[0037] 好まし 、具体的な緩衝液としては、酢酸緩衝液 (酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸アンモ -ゥム緩衝液を含む）、乳酸緩衝液、リン酸緩衝液 (リン酸ナトリウム緩衝液を含む）、 グリシン塩酸緩衝液、クェン酸緩衝液 (タエン酸ナトリウム緩衝液を含む）、クェン酸一 リン酸緩衝液（マクイルバイン（Mcllvaine)緩衝液を含む）、リン酸—酢酸—ホウ酸緩 衝液（ブリットン—ロビンソン（Britton-Robinson)緩衝液を含む）、フタル酸緩衝液、プ ロピオン酸緩衝液が挙げられる。これらの緩衝液を 1種あるいは複数を組合せて使用 することができる。本発明においては、特に、酢酸緩衝液、酪酸緩衝液、プロピオン 酸緩衝液、乳酸緩衝液及び Z又はリン酸緩衝液が好ましく用いられる。
[0038] 液状製剤の pHiま、 3. 0〜7. 0の範囲力 ^よ!ヽ。より好ましく ίま、 ρΗ4. 0〜7. 0の範 囲である。 pHが 3. 0より小さい場合も、 ΒΑを上げる効果はある力 液状製剤、特に 注射剤の場合、痛みなどの問題があり、好ましくない。
この液状製剤の pHの調節には、前述の緩衝液のほか、例えば pH調節剤を用いる ことができる。このような pH調節剤としては、塩酸、硫酸、硝酸、ホウ酸、炭酸、重炭 酸、ダルコン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水、クェン酸、モノエタ ノールァミン、乳酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、メタンスルホン酸 、リンゴ酸、プロピオン酸、トリフルォロ酢酸、またはこれらの塩などを挙げることができ る。
[0039] さらに本発明においては、 pH緩衝液のほかに、極性有機液体を添加することが出 来る。本発明においては酸性液のほかに極性有機液体を添加することにより、皮下 注射時の BA力 酸性液単独を用いた時以上の BAになり、アルコール類を含む極性 有機液体の添カ卩により BAを上昇させる効果、あるいは吸収パターンを調節する効果 があることを見出した。
[0040] 注射剤は常に無菌であることが必要であり、特に分割使用を目的とする場合に、保 存剤または防腐剤が添加されることがある。このような目的で使用される添加剤として 、ベンジルアルコール、クロロブタノール、フエノール、パラォキシ安息香酸エステル 類などが挙げられる。
[0041] また、注射剤はその投与時に疼痛を伴う場合があり、無痛化剤が添加されることが ある。このような目的で使用される添加剤として、ベンジルアルコール、クロロブタノ一 ル、フエノール、あるいはプロ力イン、キシロカインなどの局所麻酔剤が挙げられる。 例えば、特許文献 4には、薬効成分のほか、疼痛緩和剤としてのベンジルアルコー ル又はその類縁ィ匕合物と、シクロデキストリンを含有する注射剤が開示されている。 ベンジルアルコールは、注射時の疼痛を緩和し、ベンジルアルコール又はその類縁 化合物は、ベンジルアルコールによる赤血球に対する溶血作用を防止するために用 いられている。
[0042] 一般的に、アルコール類は、保存剤、防腐剤、無痛化剤などとして添加されるもの であるが、本発明においては、アルコール類を含む極性有機液体を酸性液と共に投 与すると、ダレリンの液状製剤の BAをさらに上昇させる効果があることが判明した。か 力る知見は本発明者らによって初めて見出されたものであり、極めて特異的なもので ある。
[0043] 本発明で用いられるこのようなアルコール類としては、例えば、ベンジルアルコール 、クロロブタノ一ノレ、フエノーノレ、メタノーノレ、エタノーノレ、プロパノーノレ、ブタノーノレ、ィ ソプロパノーノレ、 2—ブタノ一ノレ、イソブタノーノレ、クレゾ一ノレ、 m—クレゾ一ノレ、クロ口 クレゾール、パラォキシ安息香酸エステル類 (メチルパラベン、ェチルパラベン等）、 イノシトール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、セタノール、ステアリルアル コーノレ、へキシノレデカノーノレ、へキサントリオ一ノレ、ベへ-ノレァノレコーノレ、ラウリノレア ノレコーノレ、ラノリンアルコール、グリセロール（グリセリン）、エチレングリコール、ジェチ レングリコール、ジエチレングリコーノレモノブチノレエーテル、ジエチレングリコーノレモノ メチノレエーテノレ、メントーノレ、ボノレネオ一ノレ、マノレトーノレ、ェチノレマノレトーノレ、オイゲノ ール、ゲラ-オール、チモール、ジイソプロパノールァミン、ジエタノールァミン、トロメ タモールなどが挙げられる。本発明において、好ましく用いられるのは、ベンジルァ ルコール、エタノール、フエノール、 tert ブタノールまたはクロロブタノールである。
[0044] また、アルコール類と同様に BAを上昇させる極性有機液体として、 N—メチルー 2 ピロリドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、メチルパラベンを同様に 用!/、ることができる。
[0045] これらの極性有機液体は、 1種あるいは複数種を組合せて使用することもできる。本 発明における極性有機液体の量は、上述した効果を有する濃度であって、かつ、本 発明の薬剤の製造時や長期保存時に問題を生じない範囲で適宜設定できる。例え ば、投与時に溶液とした際の濃度が 0. 001〜80% (wZv)、好ましくは 0. 1〜20% (wZv)の範囲が望ましい。
[0046] その他、本発明の液状製剤においては、目的に応じて各種の添加剤を添加するこ とができる。そのような添加剤としては、例えば、塩ィ匕ナトリウム、マン-トールなどの 等張化剤;安息香酸ナトリウムなどの防腐剤;亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリ ゥム、ァスコルビン酸などの抗酸化剤；塩酸リドカイン、塩酸メプリル力インなどの無痛 ィ匕剤などを、適宜選択し使用することができる。
また、本発明によれば、 BAが改善された、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或い は生理活性タンパク質を有効成分として含有する液状製剤が提供されるが、さらに、 製剤ごとに必要な要件である、例えば注射剤であれば、浸透圧、溶解性、低刺激性 、防腐効果および吸着抑制効果などを考慮して、各種添加剤を選択して使用するこ とがでさる。
[0047] 本発明における液状製剤とは、非経口投与方法に用いられる製剤である。更に詳 しくは、注射剤、輸液、経鼻剤などが挙げられる。注射剤としては、静脈内注射、皮下 注射、皮内注射、筋肉内注射、点滴静脈注射などが挙げられるが、中でも、皮下注 射、筋肉内注射などは、本発明の目的とするところの BAの改善効果が最も得られる
[0048] 本発明により提供される液状製剤の製造は、製剤学上慣用される製造法によって 行うことができる。例えば、凍結乾燥品として提供される原薬としてのダレリン類を含 む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を精製水により溶解し、一方で、緩 衝液およびその他の添加剤を精製水で溶解する。その後、これらの原薬溶解液およ び添加剤溶解液を混合し、適宜、滅菌濾過などの工程を施した後、アンプルやバイ アル等に分注してダレリン類を有効成分とする製剤を得ることができる。
[0049] また、注射剤のとり得る形態に用時溶解型の製剤がある。これは溶液中で長期間に わたる安定性の確保が困難な場合に適した剤型である。用時に本発明のダレリン類 を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とする液状製剤とな る、用時溶解型の薬剤も本発明の 1つの形態である。用時溶解型の薬剤は、例えば 、粉末品等の固体組成物として供給されるダレリン類に、目的に応じて前述の各種添 加剤を適宜選択し、必要量添加して得られた固形組成物、あるいは、ダレリン類を含 有する水溶液に、目的に応じて前述の各種添加剤を適宜選択し、必要量添加した 液体組成物を乾燥することにより固体組成物として得る。これら固体組成物を、用時 、水などの溶媒に溶解して使用することができる。水以外の溶媒は医薬品として許容 される範囲であれば、含まれていても良い。例えば、エタノール、 2—プロパノール等 を用いることができる。
[0050] 本発明では、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を固 形組成物として提供される場合に、糖類を用いることもできる。そして、酸性液及び Z 又は極性有機液体と共に添加することにより、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或 いは生理活性タンパク質の BAが更に上昇することを見出した。
[0051] 用いられる糖類としては、単糖類としては、マンニトール、ブドウ糖、果糖、イノシトー ル、ソルビトール、キシリトールなどが挙げられ、二糖類として、白糖 (スクロース）、乳 糖、マルトース、トレハロースなどが挙げられ、多糖類として、デンプン、デキストラン、 プルラン、アルギン酸、ヒアルロン酸、ぺクチン酸、フィチン酸、フィチン、キチン、キト サンなどが挙げられる。また、デキストリン類として、 a—シクロデキストリン、 β—シク ロデキストリン、 γ—シクロデキストリン、デキストリン、ヒドロキシプロピルスターチ、ヒド ロキシェチルスターチなどが挙げられ、セルロース類として、メチルセルロース、ェチ ノレセノレロース、ヒドロキシェチノレセノレロース、ヒドロキシプロピノレセノレロース、ヒドロキシ プロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどが挙げられる。 これらの糖類は、 1種或 、は複数種を組合せて使用することもできる。
本発明においては、特にマン-トール、白糖、ブドウ糖、シクロデキストリン類が好ま しく用いられる。特にシクロデキストリン類が好ましく用いられる。
[0052] シクロデキストリン類については、インスリンの皮下注射時のラットにおける ΒΑ力 ス ルホブチルエーテル βシクロデキストリン誘導体（ j8— CyDs)を添加することにより、 上昇することが報告されて ヽる (非特許文献 2)。
シクロデキストリン類については、医薬品と共に添加されることによって軟水溶性物 質の溶解性の改善、医薬品の保存安定性の改善が図られることはよく知られている。
[0053] 特許文献 6には、インターフェロンポリペプチドとスルホアルキルエーテルシクロデ キストリンを含有する製剤が開示されている力 この製剤において、スルホアルキルェ 一テルシクロデキストリン誘導体は製剤組成物の保存安定化剤として用いられており 、インターフェロンポリペプチドの生物活性が保持されることを特徴として！/、る。
[0054] 特許文献 7には、生理活性ポリペプチドとシクロデキストリンとを含有する経鼻投与 製剤が、特許文献 8には、生理活性を有するポリペプチドとシクロデキストリンとを含 有する膣投与製剤が開示されている。いずれも、生理活性を有するポリペプチドが消 化管内あるいは消化管壁の酵素により加水分解を受けるため、消化管吸収性を高め た、非注射製剤として経鼻投与製剤或いは膣投与製剤を開発したものである。シクロ デキストリンは、生理活性ポリペプチドの吸収促進剤として用いられて 、る。
[0055] 特許文献 9には、 j8—及び γ —シクロデキストリン類によるインターフェロンなどのタ ンパク質の可溶ィ匕及び安定ィ匕方法が開示されている。これらのいずれの文献も、本 発明の生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質の皮下注射による投与の際の Β Αを上昇させることを示唆或いは開示するものではな 、。 [0056] これらの糖類は、 1種あるいは複数種を組合せて使用することができる。本発明に おける糖類の量は、上述した効果を有する濃度であって、かつ、本発明の薬剤の製 造時や長期保存時に問題を生じない範囲内、或いは液剤の粘度が製造或いは投与 時に問題を生じない範囲内で適宜設定できる。例えば、投与時に溶液とした際の濃 度が 0. 1〜20% (WZV)の範囲が望ましい。
[0057] 本発明では、更に、生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質がダレリン、グレリ ン誘導体或いはダレリン類似体などのダレリン類、ヒトグル力ゴン様ペプチド 1 (hG LP— 1)、ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド (hANP)、ヒトアドレノメデュリン、ヒト副甲 状腺ホルモン (hPTH(l-34))、ヒトインスリンである液状製剤に酸性液、極性有機液 体、糖類などを添加することによって、皮下注射投与においても、その BAが顕著に 上昇することを確認した。特にダレリン類のように、皮下注射による投与では、医学的 な効果が得られな 、であろう血漿濃度しか得られな ヽ生理活性ペプチド或 ヽは生理 活性タンパク質においては、本発明は新たな投与形態を確保するものである。
実施例
[0058] 以下に本発明について実施例を説明することにより、さらに詳細に説明する。ただ し、本発明はこれらの例により限定されるものでない。
[0059] 本実施例において使用する主な略号は、それぞれ以下の意味を有する。また、用 いた試験法と機器は、特に記載しない限り以下に記載のものを使用した。
[使用機器]
(A) pH測定
機器:株式会社堀場製作所製 カスタニー LAB pHメーター F-22
(B)ラジオィムノアッセィ（RIA)
機器： Packard Instruments製 γ—カウンター COBRA- II
(C)ェンザィムィムノアッセィ（ELISA)
機器： Molecular Devices Corporation製 マイクロプレートリーダー
[0060] 比!^列 ί :ヒトグレリン 含有する製剤の調製 Π )
5% (wZv)マン-トール水溶液、生理食塩水または 10% (wZv)白糖水溶液に、 下記表 2示す濃度になるようにヒトダレリンを溶解して、製剤 1〜5及び 34〜35を調製 した。
[0061] [表 2]
Figure imgf000018_0001
[0062] ¾施例 ί：ヒトグレリン 含有する製剤の調製 (2)
以下に示す方法で、 0. 5Μ酢酸ナトリウム緩衝液、 0. 5Μ酢酸アンモ -ゥム緩衝液 、 0. 5Μ酢酸緩衝液、 0. 5Μリン酸ナトリウム緩衝液、 0. 5Μクェン酸緩衝液、 0. 5 Μグリシン塩酸緩衝液、 1M乳酸緩衝液、 0. 06Μプロピオン酸緩衝液及び 0. 06Μ η—酪酸緩衝液にっ 、て、括弧内の ρΗ値を有する緩衝液をそれぞれ調製した。
(1) 0. 5Μ酢酸ナトリウム緩衝液 (ρΗ7. 0) :
酢酸ナトリウム（分子量 82. 03) 8. 20gに精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M 塩酸をカ卩えて PH7. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。
(2) 0. 5M酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 0) :
酢酸ナトリウム（分子量 82. 03) 8. 20gに精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M 塩酸をカ卩えて PH4. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。
(3) 0. 5M酢酸ナトリウム緩衝液 (pH5. 0) :
酢酸ナトリウム（分子量 82. 03) 8. 20gに精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M 塩酸をカ卩えて PH5. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。
(4) 0. 5M酢酸ナトリウム緩衝液 (pH6. 0) :
酢酸ナトリウム（分子量 82. 03) 8. 20gに精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M 塩酸をカ卩えて PH6. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。
(5) 0. 5M酢酸アンモ-ゥム緩衝液 (pH4. 0) :
酢酸アンモ-ゥム（分子量 77. 08) 7. 71g〖こ精製水を加えて lOOmLとし、これ〖こ 1 M塩酸をカ卩えて pH4. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。 (6) 0. 5M酢酸緩衝液 (pH4. 0)：
酢酸（分子量 60. 05) 6. Olg〖こ精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M水酸化ナト リウムをカ卩えて pH4. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 200mLとした。
(7) 0. 5Mリン酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 0) :
リン酸二水素ナトリウム二水和物（分子量 156. 01) 15. 60gに精製水を加えて 100 mLとし、これに 1M塩酸を加えて pH4. 0とした。この溶液に精製水を加えて 200mL とした。
(8) 0. 5Mリン酸ナトリウム緩衝液 (pH5. 0) :
リン酸二水素ナトリウム二水和物（分子量 156. 01) 15. 60gに精製水を加えて 100 mLとし、これに 1M水酸化ナトリウムをカ卩えて pH5. 0とした。この溶液に精製水をカロ えて 200mLとした。
(9) 0. 5Mクェン酸緩衝液 (pH4. 0)：
クェン酸一水和物（分子量 210. 14) 10. 51gに精製水をカ卩えて lOOmLとしてタエ ン酸水溶液を調製した。また、クェン酸三ナトリウム (分子量 294. 10) 14. 71gに精 製水をカ卩えて lOOmLとしてクェン酸三ナトリウム水溶液を調製した。クェン酸水溶液 およびクェン酸三ナトリウム水溶液を混合して pH4. 0とした。
(10) 0. 5Mグリシン塩酸緩衝液 (pH4. 0) :
グリシン（分子量 75. 07) 7. 51gに精製水を加えて lOOmLとし、これに 1M塩酸を 加えて pH4. 0とした。この溶液に精製水を加えて 200mLとした。
(11) 1M乳酸緩衝液 (pH4. 0)：
乳酸（分子量 90. 08) 45. 04g〖こ精製水を加えて 250mLとし、これに 1M水酸化ナ トリウムを加えて pH4. 0とした。この溶液に精製水を加えて 500mLとした。
(12) 0. 06Mプロピオン酸緩衝液 (pH4. 0)：
プロピオン酸（分子量 74. 08) 2. 22g〖こ精製水を加えて 250mLとし、これに 1M水 酸ィ匕ナトリウムをカ卩えて PH4. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 500mLとした。
(13) 0. 06M n—酪酸緩衝液 (pH4. 0)：
酪酸（分子量 88. 11) 2. 64g〖こ精製水を加えて 250mLとし、これに 1M水酸化ナト リウムをカ卩えて pH4. 0とした。この溶液に精製水をカ卩えて 500mLとした。 [0063] 上記の緩衝液、または上記の緩衝液を適宜希釈した溶液を酸性液として用いて、 あるいは他の添加物を溶解して、下記表 3に示す濃度になるようにヒトダレリンを含有 する製剤 6〜33、 51〜59、 73及び 81〜97を調製した。
[0064] [表 3.1]
ヒ トグレリン
製剤 酸 性 液 の濃度 他の添加剤
No. (pH値） g'mij)
6 0.5M酢酸ナトリゥム緩衝液 (7.0) 50 なし
7 0.5M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 なし
8 0.5M酢酸ァンモニゥム緩衝液 (4.0) 50 なし
9 0.5Mクェン酸緩衝液 (4.0) 50 なし
1 0 0.5Mグリシン/塩酸緩衝液 (4.0) 50 なし
1 1 0.5Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 なし
1 2 0.5M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
1 3 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
1 4 0.03M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10°Z。(w/v)白糖
1 5 0.01M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
1 6 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (5.0) 50 10%(w/v)白糖
1 7 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (6.0) 50 10%(w/v)白糖
1 8 0.5Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
1 9 0.25Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
2 0 0.1Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 10%(w/v)白糖
2 1 0.5Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (5.0) 50 10°Z。(w/v)白糖
2 2 0.25Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (5.0) 50 10%(w/v)白糖
2 3 0.1Mリン酸ナトリゥム緩衝液 (5.0) 50 10%(w/v)白糖
2 4 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 なし
2 5 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50 20°Z。(w/v)白糖
2 6 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 10 10°Z。(w/v)白糖
2 7 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 250 10°Z。(w/v)白糖
2 8 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 2000 10%(w/v)白糖
10%(w/v)白糖/
2 9 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50
l%(w/v)ペンジノレアノレコーノレ
10%(w/v)白糖/
3 0 0.03M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 50
l%(w/v)ベンジルアルコール
10%(w/v)白糖/
3 1 0.03M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 1000
l%(w/v)ベンジノレアノレコーノレ
10%(w/v)白糖/
3 2 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 1000
l%(w/v)ベンジノレアノレコーノレ
10%(w/v)白糖/
3 3 0.03M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 2000
l%(w/v)ベンジノレアノレコーノレ
3.2] ヒ トグレリン
製剤 酸 性 液 の濃度 他の添加剤
No. (pH値） g
10%(w/v)白糖/
5 5 0.03M乳酸緩衝液 (4.0) 50
v/v)ベンジノレアノレコール
10%(w/v)白糖/
5 6 0.1M乳酸緩衝液 (4.0) 50
Wv)ベンジノレアノレコ —ル
10%(w/v)白糖/
5 7 0.5M乳酸緩衝液 (4.0) 50
v/v)ベンジノレアノレコ —ル
10%(w/v)白糖/
5 8 0.03Mプロピオン酸緩衝液 (4.0) 50
v/v)ベンシノレアノレコ —ル
10%(w/v)白糖/
5 9 0.03M n-酪酸緩衝液 (4.0) 50
v/v)ベンジノレアノレコール
7 3 16mM安息香酸 50 10°Z。(w/v)白糖
10% v/v)白糖 /0.1%(w/v)ベンジ
8 1 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
ノレアルコール
10%(w/v)白糖/
8 2 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
Figure imgf000022_0001
—ル
10% /v)白糖 /1 %(w/v)ベンジル
8 3 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
アル：コール/ 10%(w/v)N-メチル
-2-ピロリ ドン
10%(w/v)ブドウ糖
8 4 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
v/v)ベンジノレアノレコール
10<½(w/v)デキストラン 70/
8 5 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
l%(w/v)ベンジノレアノレコーノレ
10%(w/v)白糖/
8 6 0.03M酢酸緩衝液 (4.0) 50
0.5%(w/v)ク口ロブタノ —ル
10% (w /v)スノレホブチノレエーテノレ —シ -クロデキストリンナトリ
8 7 0.25M リン酸ナトリ ゥム緩衝液 (4.0) 50
ゥム ¾
(販売名 ： 力プチゾ Λ l%(w/v)スルホプチルェ -テル —シ -クロデキストリンナトリ
8 8 0.01 M酢酸ナトリ ゥム緩衝液 (4.0) 50
ゥム ife
〔販売名 ： 力プチゾノ -) l%(w/v)スルホプチルェ -テル —シ -クロデキストリンナトリ
8 9 0.1M酢酸ナ卜リ ゥム緩衝液 (4.0) 50
ゥム ife
〔販売名 ： 力プチゾノ -) l°/o(w/v)2-ヒ ドロキシプロピル-
9 0 0.1M酢酸ナトリ ゥム緩衝液 (4.0) 50
j3 -シクロデキストリン l%(w/v)スノレホブチノレエ1"ーテノレ
J3 -クロデキストリンナトリ
3.3] ヒ トグレリン
製剤 酸 性 液 の濃度 他の添加剤
No. (pH値） ( μ g/mL)
1 % (w /v)スノレホブチノレエーテノレ —シクロデキス トリナトリウ
9 2 0.1M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 1000
ム塩
(販売名 ：力プチゾル）
10% (w/v)スルホブチルエーテル —シク ロデキス トリ ンナ トリ
9 3 0.01M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 1000
ゥム塩
(販売名 ：力プチゾル）
10% (w/v)スルホプチ/レエーテル β—シク ロデキス トリ ンナ トリ
9 4 0.1M酢酸ナ トリゥム緩衝液 (4.0) 1000
ゥム塩
(販売名 ：力プチゾル）
1 % (w /ν)スルホブチルエーテル βーシクロデキス トリ ンナ トリ ゥム塩
9 5 0.03M酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 1000
(販売名 ：力プチゾル） / 10%(w/v)白糖
4%(w/v)スノレホブチノレエーテノレ β—シク ロデキス トリ ンナ トリ ゥム塩
9 6 0·〇3Μ酢酸ナトリゥム緩衝液 (4.0) 1000
(販売名 ：力プチゾル） 1 10%(w/v)白糖
10% (w/v)スルホブチルエーテル β—シク ロデキス トリ ンナ トリ ゥム塩
9 7 0.03Μ酢酸緩衝液 (4.0) 50
(販売名 ： 力プチゾル） / 1 % (w/v)ベンジルアルコール
[0067] 上記の緩衝液、または上記の緩衝液を適宜希釈した溶液を酸性液として用いて、 あるいは他の添加物を溶解して、下記表 4に示す濃度になるようにペプチド類を含有 する製剤 36〜50及び 98〜107を調製した。
[0068] [表 4.1]
製剤 ぺプチド類
No. ペプチド類の觀
溶 液 濃度
3 6 生理食塩水 ラッ トグレリン 20 g/mL
3 7 5%(w/v)マンニトール水溶液 ラッ トグレリン 50 g/mL ヒ トグレリン デス オタタノィル体
3 8 5%(w/v)マンニトール水溶液 10 g/mL ヒ トグレリン デス オタタノィル体
3 9 5%(w/v)マンニトール水溶液 50 g/mL
[L-2-アミノ ドデカン酸3]ヒ トグレリン
4 0 生理食塩水 20 g/mL
[L-2-アミノ ドデカン酸3]ヒ トグレリン
4 1 5%(w/v)マンニトール水溶液 50 g/mL ヒ トグルカゴン様ぺプチドー 1
4 2 生理食塩水 30 g/mL
(hGLP-1)
ヒ トグル力ゴン様ペプチド
4 3 5%(w/v)マンニトール水溶液 50 g/mL
(hGLP-1)
ヒ ト心房性ナトリゥム利尿ぺプチド
5%(w/v)マンニトール水溶液 100/i g/mL
(hANP)
ヒ ト心房性ナトリゥム利尿ぺプチド
5%(w/v)マンニトール水溶液 100/i g/mL
(hANP)
6 5%ブドウ糖水溶液 ヒ トアドレノメデュリン 75 g/mL
4 7 5%(w/v)マンニトール水溶液 ヒ トアドレノメデュリン 150/i g/mL ヒ ト副甲状腺ホルモン
4 8 生理食塩水 50 g/mL
(hPTH(l-34))
ヒ ト副甲状腺ホルモン
4 9 5%(w/v)マンニトール水溶液 50 g/mL
(hPTH(l-34))
5 0 5%(w/v)マンニトール水溶液 ヒ トインスリン 50 g/mL 4.2]
製剤 ぺプチド類
No. 溶 液 ぺプチド類の種類 濃度
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
9 8 10%(w/v)白糖/ ラッ トグレリン 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/ ヒ トグレリン デス オタタノィル体
9 9 50 g/mL
10%(w/v)白糖
10%(w/v)白糖/ ヒ トグレリン デス オタタノィル体
1 0 0 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
ヒ トグレリン デス オタタノィル体
1 0 1 10%(w/v)白糖/ 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
[L-2-アミノ ドデカン酸3]ヒ トグレリン
1 0 2 10%(w/v)白糖/ 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
ヒ トグルカゴン様ぺプチドー 1
1 0 3 10%(w/v)白糖/ (hGLP-1) 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
ヒ ト心房性ナトリゥム利尿ぺプチド
1 0 4 10%(w/v)白糖/ (hANP) 100 /i g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
1 0 5 10%(w/v)白糖/ ヒ トァドレノメデュリン 150 /i g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
ヒ ト副甲状腺ホルモン
1 0 6 10%(w/v)白糖/ (hPTH(l-34)) 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
0.03M酢酸緩衝液 (4.0)/
1 0 7 10%(w/v)白糖/ ヒ トインスリン 50 g/mL
l%(w/v)ベンジルアルコール
[0070] 酸性液を用いずに、他の添加物を溶解して、下記表 5に示す濃度になるようにヒトグ レリンを含有する製剤 60〜68、 70〜72、 74, 76及び 78〜80を調製した。
[0071] [表 5]
ダレ
製剤 糖 類 の濃度 他の添加剤
No. g/mL)
6 0 10°/0(w/v)白糖 50 1%(W/V)ェタ
6 1 10%(w/v)白糖 50 10%(w/v)ェタノ一ノレ
6 2 10%(w/v)白糖 50 20%(w/v)ェタノ一
6 3 10%(w/v)白糖 50 l%(w/v)tert-ブタノ 一ル
6 4 10%(w/v)白糖 50 l%(w/v)N-メチ - 2-ピロ
6 5 10%(w/v)白糖 50 10%(w/v)N-メチ - 2-ピロ リ ドン
6 6 10°/ w/v)白糖 50 20%(w/v)N-メチ 2-ピロ リ ドン
6 7 10%(w/v)白糖 50 10%(w/v)ジメ
6 8 10%(w/v)白糖 50 10%(w/v)ジメチノ ホキシ ド
7 0 10%(w/v)白糖 50 l%(w/v)ドデシル硫酸ナ ト リ ゥム（SDS)
7 1 10%(w/v)白糖 50 0.2%(w/v)
7 2 10%(w/v)白糖 50 l%(w/v) エ ノ 一ル
7 4 10%(w/v)白糖 50 0.2%(w/v)メチ パラベン
7 6 10%(w/v)白糖 50 l%(w/v)プ口 ピレンダリ
7 8 10%(w/v)白糖 50 0.1%(w/v) コー
7 9 10°/ w/v)白糖 50 l%(w/v)ベ コー
8 0 5%(w/v) 50 l%(w/v)
[0072] 以上の製剤に用いた医薬品添加物は、 日本薬局方に収載されているものについて は、その規格のものを使用した。
[0073] 比 列 2:ラットを用いた ^1泮— および皮下泮—射による 験
比較例 1で作製した製剤 2および 3をラットに静脈内投与または皮下投与し、血漿 中濃度を測定した。
試験系として、 7週齢の雄性 SD系ラット（日本チャールズ 'リバ一社製)各々 1群に 3 匹を実験に供した。静脈内投与は、予め大腿動脈にポリエチレンチューブ (ΡΕ— 50 、クレイ'アダムス社製)を挿入したラットを用いて実施した。製剤 2を 0.5mL/kgの 投与容量で、尾静脈より注射筒および 26Gの注射針 (ともにテルモ社製)を用いて投 与し、投与前、および投与後 1、 3、 5、 10、 20、 30、 60、 90分後に大腿動脈に挿入 したポリエチレンチューブより血液を採取した。
[0074] 皮下投与もまた、予め大腿動脈にポリエチレンチューブを挿入したラットを用いて実 施した。製剤 3を lmLZkgの投与容量で、背部皮下より注射筒および 26Gの注射針 を用いて投与し、投与前、および投与後 5、 10、 20、 30分後に大腿動脈に挿入した ポリエチレンチューブより血液を採取した。
それぞれの採取した血液には直ちに 1Z100容量の EDTA'2Na'2H O溶液およ び 1Z50容量の AEBSF溶液を添加後、遠心して血漿を分離した。血漿にはただち に 1Z10容量の 1N塩酸を添加、混合し、測定に供するまで— 80°Cで保管した。
[0075] ダレリンの血漿中濃度測定は、抗グレリン抗体を用いたラジオィムノアッセィ (RIA) 法により実施した。すなわち、血漿試料に抗グレリン抗体を加えたのち、 [125I-Tyr29 ]ダレリンを加えて競合反応させた。これに二次抗体を加えて抗グレリン抗体に結合し たダレリンを沈殿させ、上清分離後に沈殿画分中の放射能を γ —カウンター (パッカ 一ドネ土製)で測定した。なお、ここで用いた抗グレリン抗体は、ダレリン認識し、デスァ シルダレリン (ダレリンカゝらォクタノィル基が解離した不活性体)を認識しな!ヽ。すなわ ち本測定法は活性型ダレリンを特異的に検出する測定法である。
[0076] 得られた血漿中ダレリン濃度推移を図 1に示した。図 1に示した結果力 薬物速度 論的パラメータとして最高血漿中濃度 (Cmax)、最高血漿中濃度到達時間 (Tmax)を 求めた。静脈内投与においては、時間 0における外揷値 (C )を算出した。さらに血
0
漿中濃度曲線下面積 (AUC)を台形法にて算出し、この値より生物学的利用率 (バイ ォアベイラビリティ： BA)を求めた。その結果を表 6に示す。なお、これらの値は各群 3 匹のラットから得られた値の平均値である。
[0077] 表 6 :ダレリンの 5%マン-トール水溶液を添加した製剤をラットに静脈内投与または 皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ
[0078] [表 6]
Figure imgf000027_0001
[0079] 表中に示した結果力も判明するように、製剤 2を 10 gZkgの用量で静脈内投与し たときの AUCは 205. 98ng'分 ZmLであり、また製剤 3を 50 gZkgの用量で皮下 投与したときの AUCは 25. 72ng'分 ZmLであった。したがって、 5% (wZv)マン- トール水溶液に溶解時のヒトダレリンの BAは 2. 5%と算出された。
[0080] ¾ 列 2 :ラット 用いた皮下 ft射による靠物動能試,験 (酢酸ナトリウム緩衝液の効菜
1 製剤 34、 6および製剤 7を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し 、血漿中濃度を RIA法にて測定した。その結果を図 2に示した。また、薬物速度論的 パラメータを下記表 7に示した。
[0081] 表 7 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酢酸ナトリ ゥム緩衝液の効果）
[0082] [表 7]
Figure imgf000028_0001
[0083] 表中に示した結果力も判明するように、製剤 6および製剤 7の BAはそれぞれ 22. 9 %および 35. 3%であった。生理食塩水の溶液による製剤 34の BAが 5. 0%、 5% ( wZv)マン-トール水溶液による製剤 3の BAが 2. 5%に対して、驚くべきことに、 0. 5M酢酸ナトリウム緩衝液を添カロしたときの BAは、緩衝液の pHに関わらず、 5% (w Zv)マン-トール水溶液の場合に対して 9〜 14倍と顕著に上昇した。
[0084] ¾ 列 3 :ラット 用いた皮下 ft射による靠物動能試,験 (酴件液の成 >の影響)
製剤 7、 8、 9、 10および 11を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、 血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 8に示す。
[0085] 表 8：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酸性液成 分の影響）
[0086] [表 8] 投与容量 C m ax T m ax A U C B A 製剤 No. (mL/kg) (ng/mL) (分） (ng.分/ mL) ( %)
7 1 22.29 8.33 363.38 35.3
± 8.97 ± 2.89 ± 16.64 1.6
8 1 13.29 6.67 214.93 20.9
± 4.74 ± 2.89 ± 41. 1 ± 4.0
9 1 3.70 13.33 72.02 7.0
± 1.09 ± 5.77 ± 10.33 ± 1.0
1 0 1 6.12 6.67 91.68 8.9
± 3.60 ± 2.89 ± 76.6 ± 7.4
1 1 1 10.99 5.00 167.50 16.3
540 0.00 ± 61.11 ± 5.9
[0087] 製剤 7 8 9 10および 11の BAはそれぞれ 35.3% 20.9% 7.0% 8.9%お よび 16.3%であった。すなわち、 pHを 4.0としたいずれの成分の緩衝液を酸性液と して用いても、 BAは 5% (wZv)マン-トール水溶液に対して顕著に上昇していた。
[0088] 実施例 4：ラットを用いた皮下注射による蓉物動態試験 (酸件液の濃度の影響)
製剤 12 13 14および 15を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し 、血漿中濃度を RIA法にて測定した。その薬物速度論的パラメータを下記表 9に示し た。
[0089] 表 9：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酸性液の 濃度の影響）
[0090] [表 9]
Figure imgf000029_0001
製剤 12 13 14および 15の BAはそれぞれ 34.0% 28.1% 13.8%および 4 .8%であった。すなわち、酸性液 (pH4.0)中の酢酸ナトリウム濃度が 0.01M 0. 5Mの場合、いずれの濃度でも、 BAは 5% (wZv)マン-トール水溶液よりも高かつ [0092] 実窗列 5 :ラットを用いた皮下泮-射による 験 (液 製剤の DHの 響) 製剤 13、 16および 17を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、血 漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 10に示した。
[0093] 表 10：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (液状製剤 の pHの影響）
[0094] [表 10]
Figure imgf000030_0001
[0095] 製剤 13、 16および 17の BAはそれぞれ 28. 1%、 16. 6%および 9. 1%であった。
すなわち、酸性液である酢酸ナトリウム緩衝液 (0. 01M)の pHが 4. 0〜6. 0の場合 、 V、ずれも BAが 5% (w/v)マン-トール水溶液よりも高 、ことが示された。
[0096] 実施例 6：ラットを用いた皮下注射による蓉物動態試験 (リン酸緩衝液の濃度および Ό Ηの影響）
製剤 18、 19、 20、 21、 22および 23を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮 下投与し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 11 に示した。
[0097] 表 11：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (リン酸緩 衝液の濃度および pHの影響）
[0098] [表 11] 投与容量 C m ax T m ax A U C B A 製剤 No. (mL/kg) tng/mL) (分） (ng.分/ mL)
8.38 11.67 182.55 17.7
1 8 1
± 1.45 ± 7.64 ± 22.06 2.1
5.00 8.33 82.65 8.0
1 9 1
± 0.91 ± 2.89 ± 2.78 ± 0.3
3.36 5.00 54.11 5.3
2 0 1
± 1.66 ± 0.00 ± 25.62 ± 2.5
8.74 6.67 154.73 15.0
2 1 1
0.31 2.89 19.02 1.8
8.33 109.58 10.6
2 2 1
3.01 2.89 52.62 ± 5.1
3.16 6.67 55.23 5.4
2 3 1
1.26 2.89 ± 28.90 2.8
[0099] 製剤 18、 19、 20、 21、 22および 23の BAはそれぞれ 17.7%、 8.0%、 5.3%、 1 5.0%、 10.6%および 5.4%であった。すなわち、酸性液であるリン酸緩衝液 (pH 4.0〜5.0)を用いたときも、その BAは 5% (wZv)マン-トール水溶液よりも高値で めつに。
[0100] ¾ 列 7:ラット 用いた皮下 ft射による靠物動能試,験 (アルコール街の 街 §度 の謹
製剤 14、 30、 81、 82及び 86を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投 与し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 12に示 した。
[0101] 表 12:ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (アルコー ル類の種類と濃度の影響）
[0102] [表 12]
投与容量 C m ax T m ax A U C B A 製剤 No. (mL/kg) vng/mL) (分） (ng'分/ mL) %)
9.08 6.67 142.04 13.8
1 4 1
2.76 2.89 ± 32.17 3.1
15.99 5.00 259.89 25.2
3 0 1
3.66 0.00 ± 43. 8 4.2
13.94 10.00 265.31 25.8
8 1 1
± 5.21 ± 0.00 ± 104.94 ± 10.2
11.77 5.00 141.91 13.8
8 2 1
± 5.13 ± 0.00 ± 46.62 ± 4.5
14.30 6.67 231.96 22.5
8 6 1
1.50 ± 2.89 43.06 4.2 [0103] 製剤 14、 30、 81、 82および 86の BAはそれぞれ 13. 8%、 25. 2%、 25. 8%、 13 . 8%よび 22. 5%であった。製剤 14は、酸性液と糖類を含むが、アルコール類を含 まない製剤である。製剤 30は、製剤 14と同じ酸性液と糖類を含み、かつアルコール 類としてべンジルアルコールを含む製剤である力 製剤 14の BAの 2倍の BAを示し、 アルコール類を含まない製剤よりも BAは高くなることが判った。また、アルコール類 の種類及び濃度に関わらず、その BAは高くなることが判った。
[0104] 実施例 8：ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試験 (白》の濃度の影響)
製剤 24、 13および 25を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、 血漿中濃度を RIA法にて測定した。その結果を図 3に示し、薬物速度論的パラメータ を下記表 13に示した。
[0105] 表 13：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ（白糖の濃 度による影響）
[0106] [表 13]
Figure imgf000032_0001
[0107] 製剤 24、 13および 25の BAは、それぞれ 38. 2%、 28. 1%および 19. 4%であつ た。すなわち、酸性液である酢酸ナトリウム緩衝液に 0、 10および 20% (wZv)の白 糖を添カ卩したときの BAは、いずれも 5% (wZv)マン-トール水溶液よりも高いことが 示された。酸性液のみを含有する製剤 24に対して、糖類として白糖を更に添加した 製剤 13及び 25は、 BAが更に上昇した。また、白糖を添加した場合、 T1Z2が延長 されることが判った。
[0108] 実施例 9 :ラットを用いた皮下注射による蓉物動態試験 (糖街の糠街の影響)
製剤 35、 53、 84および 85を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与 し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 14に示し [0109] 表 14：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (糖類の種 類よる影響）
[0110] [表 14]
Figure imgf000033_0001
[0111] 製剤 35 53 84および 85の BAは、それぞれ 3. 0% 22. 4% 21. 3%および 8 . 7%であった。白糖のみを含む製剤 35は BAは上がるものの 3. 0%と低力つた。す なわち、酸性液及びアルコール類の添加条件を一致させ、糖類の種類を変更した場 合でも、 BAは、いずれも 5% (wZv)マン-トール水溶液よりも高いことが示された。 また、糖類のうち、白糖とブドウ糖が、デキストラン 70よりも効果が高いことが判った。
[0112] 実窗列 10 :ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試,験 (糖街のうち、シクロデキスト リン街を用いた場合の影響）
製剤 87 97を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、血漿中濃 度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 15に示した。
[0113] 表 15 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (糖類のう ち、シクロデキストリン類を用いた場合の影響）
[0114] [表 15]
投与容量 C max T max A U C B A 製剤 No. (mL/kg) (ng/mL) (分） (ng-分/ mL) (%)
10.87 23.33 257.40 25.0
8 7 1
± 2.07 土 5.77 土 34.41 土 3.3
8.29 10.00 356.44 34.6
8 8 1
± 1.10 ± 0.00 土 11.79 ± 1.1
18.64 10.00 857.01 83.2
8 9 1
± 1.79 ± 0.00 土 25330 土 24.6
18.82 10.00 861.52 83.6
9 0 1
± 4.04 ± 0.00 士 176.63 土 17.1
7.79 8.33 185.26 18.0
9 1 0.05
± 2.63 ± 2.89 ± 61.90 ± 6.0
27.69 8.33 671.73 65.2
9 2 0.05
± 7.03 ± 2.89 土 12202 ± 11 8
11.79 25.00 650.88 63.2
9 3 0.05
± 7.41 土 30.41 土 242.71 ± 23.6
17.21 25.00 977.79 94.9
9 4 0.05
± 8.52 土 30.41 土 208.78 ± 20.3
11.25 6.67 242.38 23.5
9 5 0.05
± 4.79 ± 2.89 土 11653 ± 11 3
19.65 5.00 511.84 49.7
9 6 0.05
± 3.04 ± 0.00 ± 66.67 ± 6.5
11.87 40.00 1078.71 104.7
9 7 1
± 1.34 土 17.32 ± 86.68 ± 8.4
[0115] 製剤 87ないし 97はいずれも高い BAを示した。糖類として白糖を用いた製剤 53の BAが 22.4%で、ブドウ糖を用いた製剤 84の BAが 21.3%あつたが、糖類としてシ クロデキストリン類を用いた場合も同様に高 、BAを示した。
[0116] 実施例 11:ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試験 (グレリンの投与量の影響)
製剤 26、 13、 27および 28を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与 した。すなわち、グレジンの投与量は 10、 50、 250および 2, 000 gZkgである。採 血は実施例 2と同様に実施し、血漿中濃度を RIA法にて測定し、その結果を図 4およ び 5に示した。また、薬物速度論的パラメータを下記表 16に示した。
[0117] 表 16:ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (ダレリンの 投与量の影響）
[0118] [表 16] 投与容量 C m ax T m ax A U G B A 製剤 No. (mL/kg) (ng/mL) (分） (ng'分/ mL)
2.41 10.00 49.28 23.9
2 6 1
0.18 ± 0.00 4.04 ± 2.0
16.47 6.67 289.90 28.1
1 3 1
± 2.82 ± 2.89 ± 57.30 ± 5.6
81.36 8.33 1580.28 30.7
2 7 1
± 19.6 ± 2.89 ± 351.83 ± 6.8
653.86 15.00 15050.59 36.5
2 8 1
96.82 ± 2720.50 ± 6.6
[0119] 製剤 26 13 27および 28の AUCはそれぞれ 49.28ng，分 ZmL 289.90ng- 分 Zmレ 1580.28η8·分 Zmレおよび 15050.59ng'分 ZmLであり、 BAはそ れぞれ 23.9% 28.1% 30.7%および 36.5%であった。すなわち、グレリンの投 与量を ΙΟ/zgZkgから 2, ΟΟΟ/zgZkgまで上げても、吸収に飽和は見られず、吸収
1+
改善効果が維持されることが確認された。
[0120] 実施例 12:ラットを用いた皮下注射による薬物動餱試験 (ベンジルアルコールの添加 の影響）
製剤 13 14 29および 30を、比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与 し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。その薬物速度論的パラメータ下記表 17に示 した。
[0121] 表 17:ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (ベンジル アルコールの効果）
[0122] [表 17]
Figure imgf000035_0001
製剤 13 14 29および 30の BAは、それぞれ 28.1% 13.8% 39.3%および 25.2%であった。すなわち、酸性液である酢酸ナトリウム緩衝液に、アルコール類と して 1% (w/v)のべンジルアルコールを添カ卩したときの BAは、酢酸ナトリウム濃度が 0. 1Mおよび 0. 03Mのいずれの場合でも、ベンジルアルコール非添カ卩の場合と比 ベて高値であり、アルコール類であるべンジルアルコールにグレリンの BAを改善する 効果があることが確認された。
[0124] 実施例 13 :ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試験 (グレリンの濃度の影響)
製剤 30および 31を比較例 2と同様に皮下投与した。投与容量は製剤 30では lmL Zkg、製剤 31では LZkgとした（50 /z LZkgの容量で投与するときにはマイク 口シリンジ（SGE社製)を使用した)。すなわち、ダレリンの投与量は両者とも 50 gZ kgで同じである。採血は比較例 2と同様に実施し、血漿中濃度を RIA法にて測定し た。その薬物速度論的パラメータを下記表 18に示した。
[0125] 表 18 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (ダレリンの 濃度の影響）
[0126] [表 18]
Figure imgf000036_0001
[0127] 製剤 30および 31の BAは、それぞれ 25. 2%および 23. 2%であり、ほぼ同等であ つた。すなわち、酢酸ナトリウム緩衝液およびべンジルアルコールの吸収改善効果は ダレリンの濃度や投与容量に関係なく維持されることが確認された。
[0128] 実施例 14：ラットを用いた皮下泮—射による 験 (i¾酸緩衝液調 去の影 製剤 31および 32を 50 LZkgの投与容量で皮下投与した。すなわちダレリンの 投与量は 50 /z gZkgである。採血は比較例 2と同様に実施し、血漿中濃度を RIA法 にて測定した。その薬物速度論的パラメータを下記表 19に示した。
[0129] 表 19 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酢酸緩衝 液調製方法の影響）
[0130] [表 19] 投与容量 u m x T m ax A U C B A 製剤 No. (mL/kg) Vng/mL) (分） (ng ·分 /mL) ( %)
21.19 6.67 238.83 23.2
3 1 0.05
1.47 ± 2.89 32.09 3.1
38.39 5.00 445.28 43.2
3 2 0.05
± 28.38 ± 0.00 ± 262.56 ± 25.5
[0131] 製剤 31および 32の BAは、それぞれ 23.2%および 43.2%であった。すなわち、 酸性液として、酢酸ナトリウム水溶液を塩酸で pH4.0に合わせた緩衝液、または酢 酸を水酸ィ匕ナトリウム溶液で PH4.0に合わせた緩衝液のいずれにおいても、 5% (w Zv)マン-トール水溶液と比べて高 、BAを示し、酸性液の成分に関わらず BAが上 昇することが判った。
[0132] ¾ 列 ί5:ラット 用いた皮下 ft射による靠物動能試,験 (酢酸緩衝液の影響)
製剤 32 51 52および 53を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し 、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 20に示した
[0133] 表 20：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酢酸緩衝 液の濃度と pHの影響）
[0134] [表 20]
Figure imgf000037_0001
製剤 32 51 52および 53の BAは、それぞれ 23.2% 22.8% 18.0%および 22.4%であった。製剤 32及び 51ないし 53は、 BAを上昇させるアルコール類である ベンジルアルコールと、糖類である白糖とを添加した製剤において、酸性液として酢 酸緩衝液を用いた製剤である力 V、ずれも製剤 79のべンジルアルコールと白糖を含 む製剤の BA14.2%より高ぐ酸性液とアルコール類と糖類を含有する製剤は高い BAを示すことが判った。
[0136] 実施例 16 :ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試験 (他の酸件液の影響)
製剤 54 59を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、血漿中濃度 を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 21に示した。
[0137] 表 21：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (他の酸性 液の影響）
[0138] [表 21]
Figure imgf000038_0001
[0139] 製剤 54 59及び 73の BAは、それぞれ 19. 9% 17. 3% 22. 3% 19. 8% 2 6. 6% 23. 2%及び 14. 3%であった。製剤 54ないし 59は、 BAを上昇させるアル コール類であるべンジルアルコールと、糖類である白糖戸を添カ卩した製剤において、 酸性液を用いた製剤である力 V、ずれも製剤 79のべンジルアルコールと白糖を含む 製剤の BA14. 2%より高ぐ酸性衝液とアルコール類と糖類を含有する製剤は高い BAを示すことが判った。また、酸性液の成分に関わらず BAは上昇した。
[0140] 実窗列 17：ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試,験 (酸件液を含まな 、場合のァ ルコール街 糖街による影響）
製剤 78 80を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、血漿中濃度 を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 22に示した。
[0141] 表 22：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酸性液を 含まな!/、場合のアルコール類と糖類の影響)
[0142] [表 22]
Figure imgf000039_0001
[0143] 製剤 78 80の BAは、それぞれ 8. 3% 14. 2% 16. 9%であった。白糖のみを 含む製剤 35の BAは 3. 0であり、酸性液を含有せずとも、アルコール類を添カ卩したこ とにより、 BAが上がっていることが判る。
[0144] 実施例 18：ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試,験 (酸件液を含まな 、場合のァ ルコール類の影響）
製剤 60 63 71及び 72を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し 、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 23に示した
[0145] 表 23 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酸性液を 含まな!/、場合のアルコール類の影響）
[0146] [表 23]
Figure imgf000039_0002
[0147] 製剤 60 63 71及び 72の BAは、生理食塩水の溶液による製剤 34の BAが 5. 0 % 10% (W/V)白糖水溶液による製剤 35の BAが 3. 0%であるのに対して、ほと んどが高くなつている。酸性液を添加せずとも、アルコール類の添加だけで、 BAは 上がることが示されている。
[0148] 実窗列 19：ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試,験 (酸件液を含まな 、場合のァ ルコール街以外の極件有機液体による影響）
製剤 64 68 70、 74 76を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与 し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 24に示し た。
[0149] 表 24：ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (酸性液を 含まない場合のアルコール類以外の極性有機液体による影響）
[0150] [表 24]
Figure imgf000040_0001
[0151] 製剤 64 68 70 74 76の BAは、生理食塩水の溶液による製剤 34の BAが 5.
0% 10% (W/V)白糖水溶液による製剤 35の BAが 3. 0%であるのに対して、ほと んどが高くなつている。酸性液を添加せずとも、極性有機液体の添加だけで、 BAは 上がることが示されている。特に N—メチル 2—ピロリドンは、非常に BAが上がるこ とが半 ljつた。
[0152] 実施例 20：ラットを用いた皮下泮.射による蓉物動態試,験 (N メチル 2 ピロリドン による 響）
製剤 83と 65を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下投与し、血漿中濃度 を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 25に示した。
[0153] 表 25 :ダレリン製剤をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ (N—メチ ルー 2—ピロリドンによる影響）
[0154] [表 25]
Figure imgf000041_0001
[0155] 製剤製剤 83及び 65の BAは、それぞれ 65. 7%と 57. 4%と非常に高いものであつ た。酸性液を含まない製剤 65より、更に酸性液を含む製剤 83の BAの方が高ぐ N —メチルー 2—ピロリドンによる BAの上昇効果は単独でも優れている力 酸性液を添 加することで更に BAは上昇する。
[0156] 実窗列 21 :ラットを用いた 自^!泮—射による 験
筋肉内投与については、皮下投与と同様に、予め大腿動脈にポリエチレンチュー ブを挿入したラットを用いて実施した。製剤 3および 13を lmLZkgの投与容量で、 大腿部筋肉内に注射筒および 26Gの注射針を用いて投与した。採血は比較例 2と 同様に実施し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。その結果を図 6に示した。また、 薬物速度論的パラメータを下記表 26に示した。
[0157] 表 26 :ダレリン製剤をラットに筋肉内投与したときの薬物速度論的パラメータ (酢酸ナ トリウム緩衝液の効果）
[0158] [表 26]
Figure imgf000041_0002
製剤 3および 13を筋肉内投与したときの静脈内投与に対する BAは、それぞれ 10. 9%および 28. 5%であった。すなわち、酢酸ナトリウム緩衝液を添カ卩したときの BAは 、 5% (wZv)マン-トール水溶液に対して 2. 6倍に上昇し、筋肉内投与においても 皮下投与と同様に吸収改善効果があることが示された。
[0160] 実施例 22：力二クイザルを用いた薬物動餱試験
製剤 5および 33を力-クイザルに皮下投与し、血漿中濃度を測定した。また製剤 1 を力二クイザルに静脈内投与し、血漿中濃度を測定した。
試験系として、 4〜6才の雄性力-クイザル（中国産）を各群 3匹として、実験に供し た。投与溶液を 0. 2mLZbodyの投与容量で、背部皮下より注射筒および 26Gの注 射針 (ともにテルモ社製)を用いて投与した。
静脈内投与については、投与溶液を 2mLZkgの投与容量で、前腕橈側皮静脈内 に注射筒および 26Gの注射針（ともにテルモネ土製)を用いて投与した。
皮下および静脈内投与のいずれも、投与前、および投与後 5、 10、 15、 30、 40、 6 0、 90、 120分に前腕橈側皮静脈より血液を採取した。血液には直ちに 1Z100容量 の EDTA' 2Na' 2H O溶液および 1Z50容量の AEBSF溶液を添カ卩後、遠心して
2
血漿を分離した。血漿にはただちに 1Z10容量の 1N塩酸を添加、混合し、測定に 供するまで 80°Cで保管した。
[0161] 血漿中のグレリン濃度は、 Active Ghrelin ELISA Kit (株式会社三菱化学ャトロン，
Cat. No. MM- 401)を用いたェンザィムィムノアッセィ（ELISA)法で測定した。本測 定法は、 RIA法と同様、活性型ダレリンを特異的に検出する測定法である。
得られた血漿中ダレリン濃度の推移を図 7に示した。図の結果より、薬物速度論的 パラメータとして Cmax、 Tmaxを求めた。さらに AUCを台形法にて算出し、この値より
BAを求めた。その結果を下記表 27に示した。なお、これらの値は各群 3匹の力-ク ィザルカ 得られた値の平均値である。
[0162] 表 27 :ダレリン製剤を力-クイザルに静脈内投与または皮下投与したときの薬物速度 論的パラメータ
[0163] [表 27] 製剤 No. 投与 投与量 C。または Cmax Tmax AU C B A
投与経路 量 、μ g kg) (ng/mL) (分） (ng*分 /mU (%)
1 126.53 1290.83
静脈内投与 2mL kg 10
±27.67 ± 165.21
5 108 39.66 6.67 684.33 4.9
皮下投与 0.2mL/body
± 3 ±8.22 ±2.89 ± 47.00 ± 0.5
3 3 100 66.31 6.67 1586.10 12.8
皮下投与 0.2mL/body
± 14 ±9.68 ±2.89 ±646.73 ± 5.8
[0164] 製剤 5および 33を皮下投与したときの静脈内投与に対する BAは、それぞれ 4. 9% および 12. 8%であった。すなわち、 1% (WZV)のべンジルアルコールを含む酢酸 ナトリウム緩衝液を添カ卩したときの BAは、 5% (wZv)マン-トール水溶液の場合に 対して 2. 6倍に上昇し、力-クイザルにおいてもラットと同様に、ベンジルアルコール にはダレリンの吸収を改善させる効果があることが示された。
[0165] 実施例 23 :グレリン製剤のラットにおける血漿中成長ホルモン上昇作用
ラットにおけるダレリン投与後の血漿中成長ホルモン (GH)上昇作用について、製 剤 4および 31を用いて、以下のように検討した。
試験系として、 7週齢の雄性 SD系ラット（日本チャールズ 'リバ一社製） 3匹を 1群と して用い、予め大腿動脈にポリエチレンチューブ (PE— 50、クレイ'アダムス社製)を 挿入して実施した。
投与溶液を 50 LZkgの投与容量で、背部皮下より注射筒および 26Gの注射針（ ともにテルモ社製)を用いて投与し、投与前、および投与後 5、 10、 20、 30、 60分に 大腿動脈に挿入したポリエチレンチューブより血液を採取した。血液には直ちに 1Z 100容量のEDTA· 2Na· 2H O溶液を添加後、遠心して血漿を分離し、測定に供
2
するまで 80°Cで保管した。
[0166] 血漿中の GH濃度は、 Rat growth hormone (rGH)[12¾assay system (アマシャムバイ ォサイエンス株式会社: Cat. No. RPA551)を用いたラジオィムノアッセィ (RIA)法で 測定した。得られた血漿中 GHの濃度推移を図 8に示した。なお、これらの値は各群 3匹のラットから得られた値の平均値である。
[0167] 図中に示した結果からも判明するように、製剤 4を皮下投与したときの血漿中 GH濃 度は投与前値（113ngZmL)と比較してわずかに上昇し、投与 5分後に頂値（208η gZmL)を示した。これに対し、製剤 31を皮下投与したときの血漿中 GH濃度は投与 後 20分に頂値（316ngZmL)を示し、投与前値（96ngZmL)の 3. 3倍であった。こ のようにダレリン製剤投与後の血漿中 GH上昇作用は、酢酸ナトリウムおよびべンジ ルアルコ一ルを用 V、た製剤のほうが有効であることが判明した。
[0168] 実窗列 24 :ラットを用いた皮下泮-射による 験 (グレリン輸こ する 響)
製剤 37、 39、 41及び 98〜102を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で皮下 投与し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記表 28に 示した。製剤 36、 38、 40を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で静脈内投与し 、血漿中濃度を RIA法にて測定した。これらの値より BAを求めた。
[0169] なお、ラットダレリンの血漿中濃度はヒトダレリンと同様の方法で測定した力 ヒトダレ リン、デス一オタタノィル体の血漿濃度は、抗グレリン抗体を用いたラジオィムノアッセ ィ (RIA)法により実施した。すなわち、血漿試料に抗グレリン抗体を加えたのち、 [125 I—Tyr]ダレリン（13— 28)を加えて競合反応させた。これに二次抗体を加えて抗グ レリン抗体に結合したダレリンを沈殿させ、上清分離後に沈殿画分中の放射能を γ —カウンター (パッカード社製)で測定した。なお、ここで用いた抗グレリン抗体は、グ レリン及びデス オタタノィル体を同等に認識する測定法である。
[0170] また、アミノドデカン体ヒトダレリン (Adodダレリン）の血漿中濃度測定は、抗 Adodダレ リン抗体を用いたラジオィムノアッセィ (RIA)法により実施した。すなわち、血漿試料 に抗 Adodダレリン抗体を加えたのち、 1251標識抗体を加えて競合反応させた。これに 二次抗体をカ卩えて抗 Adodダレリン抗体に結合した Adodダレリンを沈殿させ、上清分 離後に沈殿画分中の放射能を γ カウンター (パッカード社製)で測定した。
[0171] 表 28 :ダレリン類をラットに皮下投与したときの薬物速度論的パラメータ
[0172] [表 28] 製剤 No. 投与容量 C max max AU C B A 投与方法 (mL kg (ng/mL) (分） (ng-分/ mL) (%)
3 6 188.34 478 静脈内投与 1 ±180.25 ±198
3 7 3.94 5.00 55.58 4.7 皮下投与 1 ±1.71 ±0.00 土 12.99 ±1.1
9 8 20.34 6.67 332.40 27.8 皮下投与 1 ±2.99 ±2.89 ±64.97 ±5.4
3 8 45.15 584.69 静脈内投与 1 ±4.04 ±71.77
3 9 24.79 16.67 636.02 21.7 皮下投与 1 ±5.56 ±5.77 ±139.77 ±4.8
9 9 44.35 16.67 1047.20 35.8 皮下投与 1 ±5.56 ±5.77 ±185.63 ±6.3
1 0 0 47.12 16.67 1212.94 41.5 皮下投与 1 ±4.39 ±5.77 ±91.19 ±3.1
1 0 1 52.67 16.67 1252.98 42.8 皮下投与 1 ±8.45 ±5.77 ±115.29 ±3.9
4 〇 154.65 2991.13 静脈内投与 1 ±10.13 ±173.15
4 1 6.67 20.00 291.67 3.9 皮下投与 1 ±3.30 ±10.00 ±124.33 ±1.7
1 0 2 52.27 10.00 2194.50 29.3 皮下投与 1 ±5.43 ±0.00 ±341.83 ±4.6
[0173] ダレリン類として、ラットダレリン、デス一オタタノィル体 (ヒトダレリン 3位のセリン側鎖 のオタタノィル基を除去）、 [L-2-アミノドデカン酸3]ヒトダレリンについても、ヒトグレリ ンと同様に、糖類、アルコール類を含む極性有機液体及び酸性液を添加した製剤の 場合、皮下注射における BAが著しく増加することがわ力つた。
[0174] 実窗列 25:ラットを用いた皮下泮.射による 試,験 (他の牛 活件ペプチド、タ ンパク皙に針する影響）
製剤 43、 45、 47、 49、 50、 103〜107を it較 f列 2と同様に lmL/kgの投与容量 で皮下投与し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。薬物速度論的パラメータを下記 表 29に示した。製剤 42、 44、 46、 48を比較例 2と同様に lmLZkgの投与容量で静 脈内投与し、血漿中濃度を RIA法にて測定した。これらの値より BAを求めた。
[0175] なお、ヒト副甲状腺ホルモン（1 34) (hPTH)の血漿中濃度測定は、抗 PTH抗体 を用いたラジオィムノアッセィ (RIA)法により実施した。すなわち、血漿試料に抗 PT H抗体をカ卩えたのち、 [125I— Tyr34]PTH(l— 34)をカ卩えて競合反応させた。これ に二次抗体を加えて抗 PTH抗体に結合した PTH (1— 34)を沈殿させ、上清分離後 に沈殿画分中の放射能を Ί カウンター (パッカード社製)で測定した。
[0176] ヒトグル力ゴン様ペプチド 1 (GLP— 1)の血漿中濃度測定は、 Glucagon-like Pept ide-1 (Active) ELISA Kit (LINCO Research Inc.)を用いたェンザィムィムノアッセィ（E LISA)法で測定した。
[0177] ヒトアドレノメデュリンの血漿中の濃度は、 AM matureリア シオノギ (塩野義製薬株 式会社)を用いたラジオィムノアッセィ (RIA)法で測定した。
[0178] ヒトインスリン血漿中の濃度は、インスリン'リアビーズ II (ャマサ醤油株式会社)を用
V、たラジオィムノアッセィ (RIA)法で測定した。
[0179] ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド (hANP)の血漿中の濃度は、シオノリア ANP (塩野 義製薬株式会社)を用いたラジオィムノアッセィ (RIA)法で測定した。
[0180] 表 29 :他の生理活性ペプチド、タンパク質をラットに皮下投与したときの薬物速度論 的パラメータ
[0181] [表 29]
Figure imgf000046_0001
ペプチド類として、ラットダレリン、デスァシルヒトダレリン（ヒトダレリン 3位のセリン側 鎖のオタタノィル基を除去したデス一オタタノィル体）、 [L— 2—アミノドデカン酸3]ヒト ダレリン、ヒトグル力ゴン様ペプチド一 l OiGLP- 1)、ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド (hANP)、ヒトアドレノメデュリン、ヒト副甲状腺ホルモン（hPTH(l- 34))、ヒトインスリンに ついても、ダレリン類と同様に、糖類、アルコール類及び酸性液を添加した製剤の場 合、皮下注射における BAが著しく増加することがわ力つた。
[0183] 製诰例 1 : ΌΗを調節したヒトグレリン含有の医蓉組成物の調製
ダレリンの一つである、ヒトダレリンを精製水に溶解してヒトダレリンの濃度が約 0. 15 /ζ πιοΐΖπ^ ( = 0. 5mg/mL)となる水溶液を調製した。この水溶液の pHを測定し ながら 0. 1M塩酸水溶液を少量カ卩え、最終 pHを 4. 0に調節し、ヒトダレリンを含有す る水溶液として、医薬組成物を得た。
[0184] 製诰例 2：ラットグレリンを酢酸緩衝液に溶解した医蓉組成物の調製
ダレリンの一つである、ラットダレリンを 0. 05M酢酸緩衝液 (pH4. 0)に溶解して、 ラットダレリンの濃度が約 0. 15 /ζ πιοΐΖπ^ ( = 0. 5mgZmL)となる水溶液としての 医薬組成物を調製した。この水溶液の PHを測定したところ、 pH4. 0であった。
[0185] 観告 ί列 3 :ヒトグレリンの の 製
グレリンの一つであるヒトグレリン及びべンジルアルコールを、 0. 05M酢酸緩衝液（ pH4. 0)〖こ溶解して、ヒトグレリンの濃度が約 0. 15 ^ πιο1/ιηΕ ( = 0. 5mg/mL) , ベンジルアルコールの濃度が約 1 % (w/v)となる水溶液としての医薬組成物を調製 した。この水溶液の pHを測定したところ、 pH4. 0であった。
[0186] 製;告例 4：ヒトグレリンの Hfe物の調製
ダレリンの一つであるヒトダレリン、ベンジルアルコール及び白糖を、精製水に溶解 して、ヒトグレリンの濃度が約 0. 15 μ
Figure imgf000047_0001
( = 0. 5mg/mL)、ベンジルアルコ ールの濃度が約 1 % (w/v)、白糖の濃度が 10% (w/v)となる水溶液としての医薬 組成物を調製した。この水溶液の pHを測定したところ、 pH4. 7であった。
[0187] 製造例 5：ヒトグレリンの医薬組成物の調製
グレリンの一つであるヒトグレリン、ベンジルアルコール及び白糖を、 0. 1M酢酸緩 衝液 (pH4. 0)に溶解した後、メスアップして、ヒトダレリンの濃度が約 0. 15 /z molZ mL ( = 0. 5mgZmL)、ベンジルアルコールの濃度が約 1 % (WZV)、白糖の濃度が 10% (w/v)となる水溶液としての医薬組成物を調製した。この水溶液の pHを測定 したところ、 ρΗ4. 0であった。 産業上の利用可能性
[0188] 以上記載のように、本発明により、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理 活性タンパク質の薬剤としての生物学的利用率 (バイオアベイラビリティ： BA)を確保 し、より有効な液状製剤が提供され、さらに、ダレリン類を含む生理活性ペプチド或い は生理活性タンパク質を溶解した水溶液を皮下注射した際の BAを改善する方法が 提供することができる。
一般に皮下投与による吸収過程では、生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク 質はプロテアーゼ等による分解をうけるため、静脈内注射にて投与した場合に比べる と BAが低くなることを考慮すると、本発明が提供するダレリン類を含む生理活性ぺプ チド或いは生理活性タンパク質の液状製剤は、皮下注射による投与であっても有効 なダレリン類を含む生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質の血中濃度を維持 しうることができるものであり、その医療上の価値は多大なものである。
図面の簡単な説明
[0189] [図 1]ヒトダレリンを 5% (wZv)マン-トール水溶液に溶解し、ラットに静脈内投与およ び皮下投与したときの血漿中濃度推移を表すグラフである (比較例 2)。
[図 2]ヒトダレリンを酢酸ナトリウム緩衝液に溶解し、ラットに皮下投与したときの血漿中 濃度推移を表すグラフである（実施例 2)。
[図 3]0. 1M酢酸ナトリウム緩衝液 (pH4. 0)に 0〜20% (wZv)の白糖を添カロした溶 液にヒトダレリンを溶解し、ラットに皮下投与したときの血漿中濃度推移を表すグラフ である（実施例 7)。
[図 4]グレリンを 10、 50、 250ある!/ヽ ίま 2, 000 g/kgの投与量でラット【こ皮下投与 したときの血漿中濃度推移を表すグラフである（実施例 8)。なお、 0. 1M酢酸ナトリウ ム緩衝液 (PH4. 0)及び 10% (wZv)白糖を添加した場合である。
[図 5]グレリンを 10、 50、 250ある!/ヽ ίま 2, 000 g/kgの投与量でラット【こ皮下投与 したときの投与量と AUCの関係を表すグラフである（実施例 8)。
[図 6]ヒトダレリンを 5% (wZv)マン-トール水溶液あるいは酢酸ナトリウム緩衝液に 溶解し、ラットに筋肉内投与したときの血漿中濃度推移を表すグラフである（実施例 1
2)。 [図 7]ヒトダレリンを 5% (wZv)マン-トール水溶液あるいは酢酸ナトリウム緩衝液に 溶解し、力-クイザルに静脈内投与あるいは皮下投与したときの血漿中濃度推移を 表すグラフである（実施例 13)。
[図 8]ヒトダレリンを 5% (wZv)マン-トール水溶液あるいは酢酸ナトリウム緩衝液に 溶解し、ラットに皮下投与したときの血漿中成長ホルモン濃度推移を表すグラフであ る（実施例 14)。

Claims

請求の範囲
[I] 生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、酸性液を含有する 液状製剤。
[2] 酸性液が、酢酸、乳酸、リン酸、グリシン、クェン酸、塩酸、プロピオン酸、酪酸、安 息香酸またはこれらの塩力 なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とする 請求項 1に記載の液状製剤。
[3] 酸性液が、酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸及び Z又はリン酸またはこれらの塩から なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とする請求項 1に記載の液状製剤
[4] 液状製剤の pHが 3. 0から 7. 0の範囲であることを特徴とする請求項 1または 2に記 載の液状製剤。
[5] 酸性液の濃度が 1〜： LOOOmMである請求項 1〜3のいずれか一項に記載の液状 製剤。
[6] 酸性液の濃度が 10〜500mMである請求項 1〜3のいずれか一項に記載の液状 製剤。
[7] 酸性液が、 pH3. 0〜7. 0の範囲である酸緩衝液であることを特徴とする請求項 1
〜6の 、ずれか一項に記載の液状製剤。
[8] 生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、極性有機液体を含 有することを特徴とする液状製剤。
[9] 生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質を有効成分とし、極性有機液体を含 有することを特徴とする請求項 1〜7のいずれか一項に記載の液状製剤。
[10] 極性有機液体が、アルコール類及び Z又は N—メチル—2—ピロリドン、ジメチルホ ルムアミド、ジメチルスルホキシド、メチルパラベン力 なる群の 1種または 2種以上の 組み合わせを成分とする請求項 8または 9に記載の液状製剤。
[II] 極性有機液体が、ベンジルアルコール、エタノール、フエノール、 tert—ブタノール
、クロロブタノール、 N—メチル 2—ピロリドン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホ キシドからなる群の 1種または 2種以上の組み合わせである請求項 8または 9に記載 の液状製剤。
[12] 極性有機液体の濃度が 0. 001〜80% (wZv)である請求項 8〜： L1のいずれか一 項に記載の液状製剤。
[13] 極性有機液体の濃度が 0. 1〜10% (WZV)である請求項 8〜： L1のいずれか一項 に記載の液状製剤。
[14] 更に糖類を含有することを特徴とする請求項 1〜7のいずれか一項に記載の液状 製剤。
[15] 更に糖類を含有することを特徴とする請求項 8〜12のいずれか一項に記載の液状 製剤。
[16] 更に極性有機液体及び糖類を含有することを特徴とする請求項 1〜7の ヽずれか 一項に記載の液状製剤。
[17] 糖類がマン-トール、白糖、ブドウ糖、シクロデキストリン類力もなる群の 1種または 2 種以上の組み合わせである請求項 14〜16のいずれか一項に記載の液状製剤。
[18] 糖類がシクロデキストリン類であることを特徴とする請求項 14〜 17のいずれか一項 に記載の液状製剤。
[19] 糖類の濃度が 0. 1〜20% (WZV)である請求項 14〜18のいずれか一項に記載の 液状製剤。
[20] 生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質力 ダレリン類、ヒトグルカゴン様ぺプ チドー 1 (hGLP— 1)、ヒト心房性ナトリウム利尿ペプチド (hANP)、ヒトアドレノメデュ リン、ヒト副甲状腺ホルモン (hPTH (1-34) )、ヒトインスリンカゝら選択される一種である 請求項 1〜19のいずれか一項に記載の液状製剤。
[21] 生理活性ペプチド或いは生理活性タンパク質力 ダレリン類である請求項 1〜19の
V、ずれか一項に記載の液状製剤。
[22] ダレリン類が、ダレリンである請求項 1〜19のいずれか一項に記載の液状製剤。
[23] ダレリンがヒトダレリンである請求項 1〜19のいずれか一項に記載の液状製剤。
[24] ダレリン類の濃度力 0. 03nmolZmL〜15 μ molZmLであることを特徴とする請 求項 1〜19のいずれか一項に記載の液状製剤。
[25] 液状製剤が、注射用液状製剤であることを特徴とする請求項 1〜24のいずれか一 項に記載の液状製剤。
[26] 注射用液状製剤が、皮下注射用製剤あるいは筋肉内注射用製剤であることを特徴 とする請求項 25に記載の液状製剤。
[27] ダレリン類を有効成分とし、酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸及び Z又はリン酸から なる群の 1種または 2種以上の組み合わせを成分とする酸性液を含有し、且つ、ベン ジルアルコール、エタノール、フエノール、 tert—ブタノール、 N—メチル 2—ピロリド ン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドからなる群の 1種または 2種以上の組 み合わせである極性有機液体を含有し、 pHが 3. 0〜7. 0である液状製剤。
[28] ダレリン類を溶解した水溶液に酸性液および極性有機液体を添加したことを特徴と するダレリン類の生物学的利用率を改善する方法。
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