JP2002524514A - タンパク質製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水性保存剤、およびニコチンアミドを含有する安定な可溶性製剤に関し、この貯蔵安定性を有する可溶性製剤は種々の用途の医薬品として使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【技術分野】

本発明はヒト医薬に適用するペプチドおよびタンパク質化合物の分野に属する
。詳細には、本発明は、ニコチンアミドおよび疎水性保存剤などを含む可溶性の
安定なペプチドおよびタンパク質製剤の調製に関する。

【０００２】

【背景技術】

ニコチンアミドは医薬製剤における広く認識された賦形剤ではない。例えば、
Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd ed., A Wade & P. Weller, Eds.
(1994)にはニコチンアミドが賦形剤として記載されていない。しかし、ニコチ
ンアミドは、難溶性の非タンパク質の低分子量化合物の溶解性を高めることが知
られている。そのような低分子量化合物には例えば、特定のピペラジドおよびピ
ペラジノ化合物[Fawzi, et al., J. Pharmaceut. Sci. 69:104-106 (1980)]、抗
癌性のヌクレオシドアナログ[Truelove, et al., Int. J. Pharmaceutics 19:17
-25 (1984)]、パラセタモール[Hamza, et al., Drug Dev. Industr. Pharmacy 1
1:1577-1596 (1985)]、ジアゼパム、グリセオフルビン、プロゲステロン、１７
β−エストラジオールおよびテストステロン[Rasool, et al., J. Pharmaceut.
Sci. 80:387-393 (1991)]、フェノチアジン誘導体、モリシジン（moricizine）[
Hussain, et al., J. Pharmaceut. Sci. 82:77-79 (1993)]、およびリボフラジ
ン[Coffman, et al., J. Pharmaceut. Sci. 85:951-954 (1996)]などがある。

【０００３】 これら文献の製剤では、ニコチンアミドは明らかに屈水化剤（hydrotropic ag
ent）として機能し、ニコチンアミドを高濃度で加えた場合に他の溶質の溶解性
を増大させている。この屈水性現象は、難溶性物質の溶液に別の溶質を加えると
溶解性が低いほうの物質が沈殿する通常の溶解挙動とは正反対の現象である。

【０００４】 インスリンおよびニコチンアミド、要すれば保存剤を含有する混合物は既にJo
rgensenの米国特許第５，３８２，５７４号に記載されている。この製剤は注射
部位からインスリンの即時吸収を促進すると報告されている。Jorgensenはこの
製剤安定性に対するニコチンアミドの効果は何ら記載していない。さらに、この
明細書には具体的に、リン脂質などの既知の安定化剤を加えて製剤を安定化すべ
きであると推奨されていることから、ニコチンアミドの効果は観察も認知もされ
ていないと思われる。また、ニコチンアミド単独によって得られるインスリン安
定性に対する効果も何ら記載していない。

【０００５】 ペプチドおよびタンパク質製剤における分子相互作用は複雑であるが、その理
由は、保存剤、緩衝剤、イオン強度、ｐＨ、温度および他の賦形剤などの種々の
因子が絡んでいるからであり、これらを協調させることで製品の規制要件を満た
す製造、輸送および保存に適した比較的安定な製剤を製造しなければならない。
ある種のペプチドまたはタンパク質分子は複雑であり、またペプチドまたはタン
パク質が保存剤を含有する製剤にて凝集し沈殿する傾向にあることから、各因子
が凝集を引き起こす役割は不確かである。この複雑さおよび凝集の傾向を考慮す
ると、比較的低分子の分子に対する屈水化剤としてのニコチンアミドの効果を記
載している従来技術からも、また皮下注射によりインスリンを見かけ上吸収させ
るニコチンアミドの能力からも、疎水性保存剤を含有するペプチドおよびタンパ
ク質製剤の安定性に対するニコチンアミドの効果は予測できるものではない。

【０００６】 従って、本発明は医薬として有用なペプチドおよびタンパク質の物理的安定性
を疎水性保存剤の存在下に増大させる条件を提示するものであり、そして商品化
でき、多くの用途を有する可溶性医薬品を種々のヒト疾患の処置に応用すること
を可能にするものである。

【０００７】

【発明の概要】

本発明は、医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水性保存剤および
ニコチンアミドを含有する安定な可溶性製剤に関する。 本発明はさらに、ペプチドまたはタンパク質、疎水性保存剤およびニコチンア
ミドを混合して上記製剤を調製することを特徴とする、かかる製剤の調製方法に
関する。

【０００８】

【詳しい説明および実施の形態】

本明細書に記載し特許請求している本発明の目的に照らし、以下の用語および
略語は次の意味を有する。

【０００９】 「投与」−本発明の製剤を必要としている哺乳動物の体内に移送させる効果を
有する活動。投与は通常の知識を有する医師が有効であると知っているあらゆる
経路によって行うことができる。腸管外投与とは通常、滅菌シリンジまたは注入
ポンプなどの他、機械的装置によって体内に投与される注射剤の投与形態として
医学論文では理解されている。腸管外投与の局所経路には静脈内、筋肉内、皮下
および腹腔内の投与経路があるが、これらに限定されない。

【００１０】 「アルキルパラベン」とは、Ｃ_１−Ｃ_４アルキルパラベンまたはそれらの混合
物を意味する。好ましくは、アルキルパラベンはメチルパラベン、エチルパラベ
ン、またはブチルパラベンである。 「クレゾール」とはメタ−クレゾール、オルト−クレゾール、パラ−クレゾー
ル、クロロ−クレゾール、またはそれらの混合物を意味する。

【００１１】 「疎水性保存剤」とは、医薬製剤に投与されると抗−微生物剤として機能する
疎水性化合物を意味する。腸管外製剤は、商品化でき多くの用途を有する製品と
して、保存活性のためのガイドラインに適合しなければならない。腸管外製剤と
して有効であり当業界にて許容されている既知の疎水性保存剤の中には、アルキ
ルパラベン、フェノール性保存剤、ベンジルアルコール、クロロブタノールおよ
びそれらの種々の混合物がある。WALLHAUSER, K.-H., DEVELOP. BIOL. STANDARD
. 24, pp.9-28 (Basel, S. Krager, 1974)を参照。

【００１２】 「等張化剤」とは、適当な張性を製剤に付与することで細胞膜に正味の水流が
透過しないようにする、生理学的に寛容な化合物を意味する。この目的には既知
濃度のグリセリンなどの化合物が通常使用される。他の可能な等張化剤には、Ｎ
ａＣｌなどの塩、およびデキストロース、マンニトールおよびスクロースなどの
糖類がある。

【００１３】 「ニコチンアミド」とは式：

【化１】 で示される化合物を意味する。

【００１４】 「製薬的に許容される緩衝剤」−製剤のｐＨは生理的に許容される緩衝剤、例
えば限定的ではないが酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム
、酒石酸ナトリウム、ＴＲＩＳまたは塩基性アミノ酸、例えばヒスチジン、リジ
ンもしくはアルギニンなどによって緩衝化することができる。他の製薬的に許容
される緩衝剤は当業者に知られている。緩衝剤の選択とその濃度は当業者ならば
行うことができる。 「フェノール性保存剤」とはフェノールおよびクレゾールを意味する。

【００１５】 「可溶性」とは視覚的に認知できる凝集タンパク質が比較的認められない状態
を意味する。製剤におけるタンパク質の凝集の程度は製剤の濁度を測定すること
により推定できる。製剤の濁度が大きくなるほど、製剤中のタンパク質の凝集の
程度が大きくなる。濁度の測定は通常、比濁計によって行い、比濁分析濁度単位
（ＮＴＵ，Nephalometric Turbidity Units）にて測定する。 「安定な」−「安定」な製剤とは、タンパク質またはペプチドが保存条件下に
長期間、溶けたままである製剤である。

【００１６】 「処置」とは本明細書では、疾患、症状または障害と闘う目的で患者を管理し
面倒することであり、本発明製剤を投与して症状または合併症の発現を予防する
ことで、その症状または合併症を緩和し、または疾患、症状または障害を取り除
くことを含む。本明細書では、処置には美容目的にタンパク質を投与することが
含まれる。美容目的とは、哺乳動物の体重を管理し体型を改善することを目的と
する。

【００１７】 本発明は１つの態様として、疎水性保存剤、ニコチンアミドおよび医薬として
有用なペプチドまたはタンパク質を含有する製剤に関し、これは天然ホルモンお
よび機能的アナログ（インスリンおよびインスリンアナログおよびレプチンおよ
びレプチンアナログは除く）、天然サイトカイン類および機能的アナログ、可溶
性タンパク質ワクチン、ならびに抗体およびすべての形態の抗体断片を含有する
ものと規定できる。

【００１８】 以下に医薬として有用なペプチドおよびタンパク質を列記するが、これは本発
明を説明するものであり、本発明に適合する医薬として有用なペプチドおよびタ
ンパク質の限定を意図するものでない： オキシトシン、バソプレッシン、副腎
皮質刺激ホルモンホルモンおよびそれらのアナログ、上皮成長因子、血小板誘導
成長因子、プロラクチン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン、成長
ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、グルカゴン、ＧＬＰ−１関連化合物、
ＩＬ−２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１５、α、β、γ−インターフェロン、ガストリ
ン テトラガストリン、ペンタガストリン、ウロガストリン、セクレチン、カル
シトニン、エンケファリン類、エンドルフィン類、アンジオテンシン類、甲状腺
刺激ホルモン放出ホルモン、腫瘍壊死因子、神経成長因子、顆粒球コロニー刺激
因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因
子、レニン、ブラジキニン、バシトラシン類、ポリミキシン類、コリスチン類、
チロシジン、グラミシジン類。

【００１９】 本明細書において「Ｉ群ポリペプチド」と規定する、より好ましい医薬として
有用なペプチドおよびタンパク質は、アシル化インスリン類、具体的にはインス
リンＢ鎖のＬｙｓのイプシロンアミノ基におけるＣ_６−Ｃ_２０アシル化体、特に
Ｃ１４アシル化Ｌｙｓ^Ｂ２８Ｐｒｏ^Ｂ２９ヒトインスリン、哺乳動物成長ホルモ
ン、成長ホルモン放出ホルモン、ＧＬＰ−１関連化合物、赤血球祖先ホルモン（
ＥＰＯ）、副甲状線ホルモンおよび断片、特に米国特許第４，０８６，１９６号
および第５，２０８，０４１号に記載されるもの、β−リポタンパク質、繊維芽
細胞成長因子−８およびアナログ、オステオプロテグリン−２および３、インタ
ーロイキン−１０および１５およびそれらのアナログ、血管上皮成長因子、およ
び濾胞[卵胞]刺激ホルモン（ＦＳＨ）および変異体などである。

【００２０】 本明細書における濾胞[卵胞]刺激ホルモン「ＦＳＨ」はそれが組換え的に生産
されようと単離されたものであろうと、および濾胞[卵胞]刺激ホルモン変異体「
ＦＳＨ変異体」は、当業界にて広く知られている。本明細書におけるＦＳＨは全
長の成熟タンパク質として産生されるＦＳＨを意味し、組換え的に生産されよう
と単離されたものとを問わず、これにはヒトＦＳＨ即ち「ｈＦＳＨ」が含まれる
がそれに限定されない(Shome B., et al., J. Prot. Chem., 7:325-339, 1988; Saxena B.B. and Rathnam P., J. Biol. Chem., 251:993-1005, 1976; Watkins,
et al., DNA, 6:205-212, 1987; Shome B. and Parlow A.F., J. Clin. Endocr
inol. Metab., 39(1):203-205, 1974; and Beck, et al., DNA, 4:76, 1985; U.
S. 5,405,945, and U.S. 5,639,640を参照、それぞれは引用によって本明細書に
包含される)。さらに、種々のＦＳＨ変異体が当業者に知られており、また認識
されている(Shome, J. Clin. Endocrin. Metab 39:187 (1974); Saxena, J. Bio
l Chem 251(4):993-1005 (1976); 1978; Sairam et al., Biochem J 197:541 (1
981);を参照、さらにClosset Eur. J. Biochem. 86:115-120; Fujiki, J. Biol.
Chem. 253:5363-5368 (1978); Sairam, Biochem. J. 197:541-552 (1981)を参
照、これらは引用によって本明細書に包含される）。従来からあるＦＳＨβサブ
ユニットはＳａｃｅｎａ配列および、（ａ）進化論的に保存されたアミノ酸およ
び（ｂ）周知かつ特性化されている配列決定における誤りに関するSairamの論評
に関連する一部類（genus）の配列を含んでいるであろう。さらに、従来同定さ
れているアミノ酸を、（ｉ）化学的に類似したアミノ酸または（ｉｉ）進化論的
に保存されたアミノ酸と置換しても、ｈＦＳＨβサブユニットに含まれるＦＳＨ
ヘテロダイマーの生物活性に認知し得る影響を与えないことは当業者であれば、
理解されよう。

【００２１】 具体的には、Ｓａｘｅｎａ ｈＦＳＨ配列に関するSairamのコンメンタリーお
よび機能的ＦＳＨ分子間に同定されたアミノ酸置換に関するSairamの論評には、
従来技術の一部類のＦＳＨβ鎖配列が規定されている。詳細には、1981年Sairam
の文献にはSaxenaら、Shomeら、ClossetらおよびFujikiらによる文献に引用され
ている保存アミノ酸配列が同定されている。Sairam,Biochem J 197:541,551(198
1)。従来技術では、（１）SaxenaのＦＳＨβ鎖配列のほうがShomeのそれよりも
優位であることが証明され、（２）カルボキシ末端不均一性が議論され、（３）
該ホルモンの活性に必須でない異種間の相違によって影響される分子部分が説明
され、そして（４）種間および３つのヒト糖タンパク質ホルモンであるＦＳＨ、
ＬＨおよびＴＳＨのβ鎖間のホモロジーから導かれる指標に的を絞っている。

【００２２】 Ｃ末端不均一性は、ブタＦＳＨ−ｓのそれ以外はすべて報告されており、そこ
ではグルタミン酸はＣ末端残基のみである。２７位に関し、Saxenaは１つのトリ
プトファン残基についてこの位置を割り当て、それはＦＳＨ−Ｂでは２４位のト
リプトファンであるが、すべての従来の種間にて証明されている進化論的保存に
て支持されることも見出した。４４および４６位に関し、Saxenaは４４位の残基
はリジンの代わりにアルギニン、４６位はアルギニンの代わりにリジンであるべ
きと示している。ブタ、ウマおよびヒツジの配列も進化論的圧力を反映して４４
位にアルギニンが保存されている。２１、２２および４４位の３つの位置の変異
は立体化学的に保存され、または進化論的に保存（ホモローガス）された置換で
あり、それぞれ生物活性を示す。

【００２３】 Sairam、ShomeおよびClossetの文献はそれぞれ、２１−２２位のイソロイシン
セリン残基を開示しており、Saxenaはロイシン、スレオニンを、そしてFugikiは
イソロイシン、スレオニンをこれらの位置として開示している。これらの開示事
項はそれぞれ、進化論的保存の置換のみならず、構造的保存の置換である。Sair
am、Shome、ClossetおよびFujikiそれぞれに開示されているアスパラギン酸とSa
xena、ClossetおよびSairamに開示されているアスパラギンとの間の４１位の変
異は２つの進化論的に保存された残基に関連し、それぞれ生物活性を与える。保
存的置換および進化論的に保存された置換に関するこれら開示は当業者に、ｈＦ
ＳＨ−Ｂ鎖部類（genus）に属される明確なＦＳＨβ鎖変異体を与えるものであ
る。

【００２４】 医薬として有用なペプチドおよびタンパク質のさらに好ましいものはＧＬＰ−
１関連化合物および天然の哺乳動物成長ホルモンである。 本発明におけるより好ましいペプチドはグルカゴン様ペプチド−１、そのアナ
ログおよび本明細書にて規定される誘導体である。

【００２５】 上述のペプチドおよびタンパク質の水溶性共重合体および重合共役体も本発明
の範囲に属し、これには例えば、ポリエチレングリコール、エチレングリコール
／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラ
ン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキサン
、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリ
アミノ酸（ホモ重合体またはランダムもしくは非ランダム共重合体共重合体のい
ずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレ
ングリコール、プロピレングリコールホモ重合体ポリプロピレンオキシド／エチ
レンオキシド共重合体、ポリオキシエチレン化ポリオール類、ポリスチレンマレ
エートおよびポリビニルアルコールがある。ポリエチレングリコール プロピオ
ンアルデヒドが好ましい。

【００２６】 「ＧＬＰ−１」なる用語は、その配列および構造が当業界にて周知のヒトグル
カゴン様ペプチド−１を意味する。米国特許第５，１２０，７１２号を参照のこ
と（これは引用によって本明細書に包含される）。ヒトＧＬＰ−１には２つの天
然型、ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨおよびＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２があり
、これらは必要な場合のみ区別するものとする。

【００２７】 「ＧＬＰ−１アナログ」なる用語は、ＧＬＰ−１と比較して１つまたはそれ以
上のアミノ酸置換、欠失、逆位、または付加を有する分子として規定される。多
くのＧＬＰ−１アナログが当業界にて知られており、例えば、ＧＬＰ−１（７−
３４）およびＧＬＰ−１（７−３５）、ＧＬＰ−１（７−３６）、Ｖａｌ^８−Ｇ
ＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｎ^９−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｄ−Ｇｌｎ^９−Ｇ
ＬＰ−１（７−３７）、Ｔｈｒ^１６−Ｌｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７−３７）、お
よびＬｙｓ^１８−ＧＬＰ−１（７−３７）などがある。好ましいＧＬＰ−１アナ
ログはＧＬＰ−１（７−３４）およびＧＬＰ−１（７−３５）であり、これらは
米国特許第５，１１８，６６６号に記載されており、これは引用によって本明細
書に包含される。

【００２８】 「ＧＬＰ−１誘導体」なる用語は、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アナログのア
ミノ酸を有しているが、さらに１つまたはそれ以上のアミノ酸側鎖基、α−炭素
原子、末端アミノ基または末端カルボン酸基に化学的修飾を有している分子とし
て規定される。化学的修飾には、化学的部分の付加、新たな結合の創製、および
化学的部分の除去等があるが、これらに限定されない。アミノ酸側鎖基の修飾に
は、リジンｅ−アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジンもしくはリジンの
Ｎ−アルキル化、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸のカルボン酸基のアルキ
ル化、およびグルタミンもしくはアスパラギンの脱アミド化があるが、これらに
限定されない。末端アミノの修飾には、デス−アミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−
ジ−低級アルキル、およびＮ−アシル修飾があるが、これらに限定されない。末
端カルボキシ基の修飾には、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミドお
よび低級アルキルエステル修飾があるが、これらに限定されない。さらに、１つ
またはそれ以上の側鎖基または末端基はタンパク質化学の当業者に知られている
保護基によって保護することができる。アミノ酸のα−炭素はモノ−またはジ−
メチル化してもよい。

【００２９】 「ＧＬＰ−１分子」なる用語は、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログまたはＧＬ
Ｐ−１誘導体を意味する。 ＧＬＰ−１アナログの別の好ましいものは、式：

【化２】 で示されるアナログ、およびその製薬的に許容される塩である［式中、Ｒ_１はＬ
−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、２−アミノヒスチジ
ン、ｂ−ヒドロキシヒスチジン、ホモヒスチジン、α−フルオロメチルヒスチジ
ン、およびα−メチルヒスチジンからなる群から選ばれ、ＸはＡｌａ、Ｇｌｙ、
Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、およびα−メチル−Ａｌａからなる群から選ばれ、Ｙ
はＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、ＳｅｒおよびＧｌｙからなる群から選ばれ
、ＺはＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、ＳｅｒおよびＧｌｙからなる群から選
ばれ、そしてＲ_２はＮＨ_２およびＧｌｙ−ＯＨのからなる群から選ばれる。ただ
し、Ｒ_１がＨｉｓ、ＸがＡｌａ、ＹがＧｌｕおよびＺがＧｌｕである場合、Ｒ_２ はＮＨ_２でなければならない。］。

【００３０】 本発明にかかるＧＬＰ−１化合物のさらに好ましいものは、ＷＯ９１／１１４
５７（米国特許第５，５４５，６１８号、引用により本明細書に包含される）に
記載されており、それは実質的に、以下に示す群から選ばれる少なくとも１つの
修飾を有するＧＬＰ−１（７−３４）、ＧＬＰ−１（７−３５）、ＧＬＰ−１（
７−３６）またはＧＬＰ−１（７−３７）またはそれらのアミド体およびそれら
の製薬的に許容される塩からなる： （ａ）２６位および／または３４位のリジンにおけるグリシン、セリン、システ
イン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、
イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、または
Ｄ−リジンとの置換；または３６位のアルギニンにおけるグリシン、セリン、シ
ステイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリ
ン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、リジンまたはＤ
−アルギニンとの置換；および

【００３１】 （ｂ）３１位のトリプトファンにおける酸化−耐性アミノ酸との置換；および （ｃ）１６位のバリンにおけるチロシンとの、１８位のセリンにおけるリジンと
の、２１位のグルタミン酸におけるアスパラギン酸との、２２位のグリシンにお
けるセリンとの、２３位のグルタミンにおけるアルギニンとの、２４位のアラニ
ンにおけるアルギニンとの、および２６位のリジンにおけるグルタミンとの、少
なくとも１つの置換；および

【００３２】 （ｄ）８位のアラニンにおけるグリシン、セリンまたはシステインとの；９位の
グルタミン酸におけるアスパラギン酸、グリシン、セリン、システイン、スレオ
ニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン
、ロイシン、メチオニンまたはフェニルアラニンとの；１０位のグリシンにおけ
るセリン、システイン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、ア
ラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニンまたはフェニルアラニン
との；および１５位のアスパラギン酸におけるグルタミン酸との、少なくとも１
つの置換；および

【００３３】 （ｅ）７位のヒスチジンにおけるグリシン、セリン、システイン、スレオニン、
アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイ
シン、メチオニンまたはフェニルアラニン、またはヒスチジンのＤ−もしくはＮ
−アシル化もしくはアルキル化体との置換； ここに、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）における置換では、置換
されるアミノ酸はＤ体であってもよく、７位に置換されるアミノ酸はＮ−アシル
化またはＮ−アルキル化体であってもよい。

【００３４】 本発明にかかるさらなる別のＧＬＰ−１分子はＷＯ９８／０８８７１に記載さ
れており、それにはＮ−末端またはＣ−末端アミノ酸に結合している、アルキル
基またはオメガカルボン酸を有する基である脂肪親和性置換分がある。

【００３５】 酵素、ジペプチジル−ペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ ＩＶ）は前記ＧＬＰ−１の
観察される迅速なインビボ失活[Mentlein, R., et al., Eur. J. Biochem., 214
:829-835 (1993)を参照]に関与している可能性があるので、ＤＰＰ ＩＶの活性
から保護してＧＬＰ−１アナログおよび誘導体を投与するのが好ましく、Ｇｌｙ^８ −ＧＬＰ−(７−３６)ＮＨ_２、Ｖａｌ^８−ＧＬＰ−１(７−３７)ＯＨ、α−メ
チル−Ａｌａ^８−ＧＬＰ−１(７−３６)ＮＨ_２、およびＧｌｙ^８−Ｇｌｎ^２１−
ＧＬＰ−１(７−３７)ＯＨまたはその製薬的に許容される塩を投与するのが、よ
り好ましい。

【００３６】 米国特許第５，１８８，６６６号にて特許請求されている分子を本発明におい
て使用するのが好ましい（これは引用によって本発明に包含される）。このよう
な分子はアミノ酸配列：

【化３】 ［式中、ＸはＬｙｓおよびＬｙｓ−Ｇｌｙから選ばれる］で示されるペプチド、
および該ペプチドの誘導体からなる群から選択される（ここに、該ペプチドは該
ペプチドの製薬的に許容される酸付加塩、該ペプチドの製薬的に許容されるカル
ボン酸塩、該ペプチドの製薬的に許容される低級アルキルエステル、およびアミ
ド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキルアミドから選ばれる該ペプチドの
製薬的に許容されるアミドの中から選ばれる）。

【００３７】 本発明にて使用されるＧＬＰ−１分子の別の好ましいものは米国特許第５，５
１２，５４９号に記載されている、一般式１：

【化４】 ［式中、Ｒ^１は４−イミダゾプロピオニル、４−イミダゾアセチル、または４−
イミダゾ−ａ、ジメチルアセチルであり、Ｒ^２はＣ_６−Ｃ_１０非分枝状アシルま
たは不存在であり、Ｒ^３はＧｌｙ−ＯＨまたはＮＨ_２であり、ＸａａはＬｙｓま
たはＡｒｇである］で示される化合物および製薬的に許容されるその塩であり、
これらは本発明にて使用することができる。

【００３８】 本発明にて使用される式１で示される化合物のうちより好ましいものは、Ｘａ
ａがＡｒｇであり、Ｒ^２がＣ_６−Ｃ_１０非分枝状アシルである化合物である。 さらに好ましい本発明にて使用される式１の化合物は、ＸａａがＡｒｇであり
、Ｒ^２がＣ_６−Ｃ_１０非分枝状アシルであり、Ｒ^３がＧｌｙ−ＯＨである化合物
である。 さらに、より好ましい本発明にて使用される式１の化合物は、ＸａａがＡｒｇ
であり、Ｒ^２がＣ_６−Ｃ_１０非分枝状アシルであり、Ｒ^３がＧｌｙ−ＯＨであり
、Ｒ^１が４−イミダゾプロピオニルである化合物である。 最も好ましい本発明にて使用される式１の化合物は、ＸａａがＡｒｇであり、
Ｒ^２がＣ８非分枝状アシルであり、Ｒ^３がＧｌｙ−ＯＨであり、Ｒ^１が４−イミ
ダゾプロピオニルである化合物である。

【００３９】 米国特許第５，７０５，４８３号にて特許請求されているＶａｌ^８−ＧＬＰ−
１（７−３７）ＯＨまたはその製薬的に許容される塩（これは引用により本明細
書に包含される）を本発明にて使用することはより好ましい。

【００４０】 本発明にて有用なＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログまたはＧＬＰ−１誘導体を
製造する方法は当業界にて周知であり、タンパク質化学または生化学の分野の当
業者であれば容易に行える。本発明にて使用される活性化合物またはその前駆物
質のアミノ酸部分は、固相合成化学、天然供給源からのＧＬＰ−１分子の精製ま
たは組換えＤＮＡ法のいずれかによって調製することができる。通常の合成有機
化学的手法により、ＧＬＰ−１誘導体のアルキル化およびアシル化を行うことが
できる。

【００４１】 「ＧＬＰ−１関連化合物」なる用語はＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログまたは
ＧＬＰ−１誘導体の定義に包含されるあらゆる化合物を意味する。 製剤の安定性に対するニコチンアミドの予期しない効果が、本発明の製剤を調
製しその濁度をニコチンアミドを欠く対照の濁度を比較することにより証明され
た。

【００４２】 本発明の腸管外製剤は、通常の溶解および混合手法によって調製することがで
きる。製剤学分野の当業者であれば、医薬として有用なペプチドまたはタンパク
質、疎水性保存剤およびニコチンアミドの添加順序は得られる製剤の安定性を損
なう事無く変動させることが理解できよう。

【００４３】 本発明の１つの態様では、ニコチンアミドを精製したペプチドまたはタンパク
質溶液に加え、次いで固体状での化学的または物理的安定性に悪影響を与えない
よう凍結乾燥すればよい。疎水性保存剤を含有しニコチンアミドを含有する希釈
液によって再構成する際には、製剤中に存在するニコチンアミドのおかげでタン
パク質製剤は物理的に優れた安定性を示す。逆に言えば、本発明の安定な製剤は
、測定した精製凍結乾燥タンパク質を水に溶解し、次いで測定した容量のニコチ
ンアミドおよび疎水性保存剤溶液を所望の濃度を与えるに充分な量加えることに
よって調製することができる。等張化剤または製薬的に許容される緩衝剤などの
任意の化合物も加えることができる。製剤のｐＨは例えば塩酸または水酸化ナト
リウム溶液によって調整できる。本発明の製剤は調製されれば、一般に投与前に
滅菌濾過する。本発明の製剤は当業者に容易に分かる他の多くの方法によっても
調製することができる。例えば、成分を一緒にする方法および条件、ｐＨの調整
に使用する酸または塩基のタイプ、および製剤の滅菌方法は当業者によって適宜
最適化される。

【００４４】 本発明製剤にて使用される疎水性保存剤およびニコチンアミドは、ヒトに投与
するための規則要件を満たす充分な品質で市販されているものから容易に入手可
能である。

【００４５】 本発明の製剤は要すれば、医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水
性保存剤およびニコチンアミドのほかに他の成分を含有することができる。例え
ば、Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）
、Ｔｗｅｅｎ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、
Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、プ
ルロニックＦ６８（ポリオキシエチレン ポリオキシプロピレンブロック共重合
体）、およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような可溶化剤を製剤に加え
て、要すれば凝集を抑えることができる。これらの添加剤はポンプまたはプラス
チック容器を製剤の投与に使用する際には特に有用である。製薬的に許容される
界面活性剤もさらにタンパク質の凝集を減少させる。等張化剤、好ましいグリセ
リンも可溶性腸管外製剤に加えることができる。等張化剤の濃度は腸管外製剤に
て当業者に知られている範囲であるが、好ましくは約１−２５ｍｇ／ｍｌ、より
好ましくは約８−１６ｍｇ／ｍｌまたは約１６ｍｇ／ｍｌ−約２５ｍｇ／ｍｌで
あり、さらに好ましくは約１６ｍｇ／ｍｌである。製薬的に許容される緩衝剤も
ｐＨの制御のために加えることができる。

【００４６】 上述のように、本発明は、医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水
性保存剤およびニコチンアミドを含有する可溶性製剤を提供する。好ましくは、
ニコチンアミドの濃度は０．０１−２モル濃度である。他の好ましいニコチンア
ミド濃度の範囲は０．０５モル濃度−１．５モル濃度、０．１モル濃度−１．０
モル濃度、０．１モル濃度−０．５モル濃度、０．５モル濃度−１．０モル濃度
、および０．１５モル濃度−０．２５モル濃度の範囲である。製剤にニコチンア
ミドを加えると、特定の保存剤の存在下にペプチドおよびタンパク質が溶液中に
残り、タンパク質の凝集が比較的無くなった多目的用途の腸管外製剤が得られる
。

【００４７】 単独にてまたは組合わせて使用されるフェノール性保存剤が本発明製剤に使用
できる好ましい保存剤である。他の好ましい保存剤はアルキルパラベン保存剤で
ある。ベンジルアルコールおよび安息香酸は別の好ましい保存剤である。さらに
好ましい保存剤は単独にてまたは組合わせて使用されるフェノールおよびｍ−ク
レゾールである。組合せて使用する場合、製剤中のフェノールとｍ−クレゾール
のモル比は３：１から１：３の比率が好ましく、その際保存剤の総濃度は約１ｍ
ｇ／ｍｌ−１０ｍｇ／ｍｌが好ましい。保存剤の濃度は保存効果を維持するに必
要とされる濃度であり、それは保存剤の種類、その溶解性、および製剤の温度や
ｐＨなど他の変動要素によって変わってくる。一般には、必要とされる保存剤の
量は例えばWALLHAUSER, K.-H., DEVELOP. BIOL. STANDARD. 24, pp.9-28 (Basel
, S. Krager, 1974) を参照して決定することができる。

【００４８】 一般には、医薬として有用なペプチドまたはタンパク質の濃度は、使用するタ
ンパク質またはペプチドの薬理に応じて約０．０１−約１００ｍｇ／ｍｌとする
ことができる。例えば、ヒト成長ホルモンの濃度は約０．２５ｍｇ／ｍｌ−約４
０ｍｇ／ｍｌである。好ましくは、この濃度は約０．２５ｍｇ／ｍｌ−２５ｍｇ
／ｍｌである。より好ましい濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１０ｍｇ／ｍｌであ
る。他の好ましい濃度範囲は約０．５ｍｇ／ｍｌ−約１５ｍｇ／ｍｌである。

【００４９】 ＧＬＰ−１関連分子の濃度は約０．０１ｍｇ／ｍｌ−１０ｍｇ／ｍｌの範囲で
あり、好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌ−約５ｍｇ／ｍｌであり、より好ましくは
約０．２５ｍｇ／ｍｌ−約１ｍｇ／ｍｌである。より好ましい濃度は約０．５ｍ
ｇ／ｍｌ−約１．０ｍｇ／ｍｌである。

【００５０】 本発明製剤における医薬として有用なペプチドまたはタンパク質の溶解性は製
剤の濁度が５０ＮＴＵ以下となるようなものである。より好ましくは、濁度が２
０ＮＴＵ以下である。最も好ましくは、濁度は１０ＮＴＵ以下である。

【００５１】 末梢の腸管外投与が好ましい。本発明に従って調製される製剤はシリンジ、注
射器、ポンプ、または腸管外投与として当業者に認知されている他の器具を用い
て投与することができる。特定の疾患を処置するために投与される本発明製剤の
量は、患者の性別、体重おｙび年齢、疾患の原因、投与経路およびバイオアベイ
ラビリティーおよび使用するペプチドまたはタンパク質の活性度など（これらに
限定されない）の多くの因子によって変動する。投与を間欠的に行う場合も、１
回の投与当たりの量は投与間隔、および製剤からのタンパク質のバイオアベイラ
ビリティーを考慮する。本発明製剤の投与は連続して行うことができる。所望の
臨床結果を得るために本発明製剤の投与量、投与速度あるいは頻度を決めるのは
、臨床の当業者の常識内である。

【００５２】 本発明は以下の実施例を参照して理解するのが良好である。以下の実施例は本
発明の特定の態様を代表するものであり、本発明の範囲を限定するものでない。

【００５３】実施例１ 以下の保存溶液を調製し、被検製剤の調製に用いた。 米国特許第５，７０５，４８３号に記載されているＶ^８−ＧＬＰ−１（７−３
７）ＯＨを組換え大腸菌において生合成し、ほぼ均質になるまで精製し、次いで
凍結乾燥した。凍結乾燥ペプチドの試料を、前もって５Ｎ ＮａＯＨにてｐＨ９
．０に調整しておいた水に溶解し、終濃度２ｍｇ／ｍｌとした。次いで、この貯
蔵溶液を１０％ＨＣｌを用いてｐＨ７．８に調整した。 １Ｍニコチンアミド水溶液 １００ｍＭリン酸ナトリウム水溶液、ｐＨ７．８ ２％フェノール（ｗ／ｖ）水溶液 ２％ｍ−クレゾール（ｗ／ｖ）水溶液 純品ベンジルアルコール 洗浄用の滅菌水。

【００５４】 以下に示すすべての製剤を、終濃度５ｍＭリン酸緩衝液および０．５ｍｇ／ｍ
ｌ Ｖ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨにて調製した。リン酸緩衝液、ニコチン
アミドおよびＶ^８−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ貯蔵溶液は使用前に０．２２μ
ｍフィルターにて濾過した。貯蔵溶液および試薬を、以下の製剤を得るのに適切
な比率で混合した。添加の順序は、保存剤、ニコチンアミド、緩衝剤、滅菌水お
よびＶ^８−ＧＬＰ−１であった。製剤の最終ｐＨをチェックし、要すればｐＨ７
．８に調整した。ＨＡＣＨ ２１００ＡＮ濁度測定器を用い、試料の清澄さを測
定した。

【００５５】

【表１】

【００５６】実施例２ ７０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に５ｍｇ／ｍｌでＧＬＰ−１（７−３７
）ＯＨを含む貯蔵溶液を調製し、０．２２μｍフィルターで滅菌濾過した。水で
１％ｍ−クレゾール貯蔵液を調製し、０．２２μｍフィルターで滅菌濾過した。
水で２Ｍニコチンアミド貯蔵溶液を調製し、０．２２μｍフィルターで滅菌濾過
した。これら貯蔵液を以下のようにして混合した：

【表２】

【００５７】 すべての最終製剤は４．０ｍｌ容量で調製し、これらは１ｍｇ／ｍｌＧＬＰ−
１（７−３７）ＯＨ、１４ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、および保存剤とし
て０．３％ｍ−クレゾールを含んでいた。ニコチンアミドおよびタンパク質は常
に、保存剤の添加前に混合した。ＧＬＰ製剤は２５℃にて保存した。すべてのニ
コチンアミド含有製剤は、４日間にわたり１０ＮＴＵ以下と測定される良好な物
理的安定性を示した。ニコチンアミドを加えていないすべての製剤は６５ＮＴＵ
以上と測定された。

【００５８】実施例３ ２０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に２０ｍｇ／ｍｌでｈＧＨを含む貯蔵
液を調製し、０．２２μｍフィルターで滅菌濾過した。水で１．５％ｍ−クレゾ
ール貯蔵液を調製し、０．２２μｍフィルターで滅菌濾過した。これら貯蔵液を
以下のようにして混合した：

【表３】

【００５９】 すべての最終製剤は１０ｍｌ容量で調製し、これらは１０ｍｇ／ｍｌｈＧＨ、
１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）、および保存剤として０．３％ｍ−クレ
ゾールを含んでいた。ニコチンアミドおよびタンパク質は常に、保存剤の添加前
に混合した。得られた結果を図１に示す。ニコチンアミドを加えていない製剤は
２００ＮＴＵ値であり、これは使用した装置の検出限界であった。実際の値はお
そらくそれ以上である。 本発明の原理、好ましい態様および形態を本明細書にて説明してきた。しかし
、本願にて保護を求めようとしている発明はここに開示している特定の形態に限
定されず、これは限定的なものでなく、単なる説明だからである。当業者であれ
ば、本発明の範囲を逸脱することなく改変、変更を行うことができよう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 種々の濃度のニコチンアミドを含有する製剤におけるタンパク質
安定性の比較を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/22 Ａ６１Ｋ 37/02 Ａ６１Ｐ 3/10 37/28 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA12 BB11 CC29 CC30 DD22 DD26 DD30 DD37 DD41 DD45 DD60 FF15 FF36 GG45 GG46 4C084 AA01 AA02 AA03 AA17 BA44 CA18 CA53 CA59 DA01 DA12 DA14 DA19 DA22 DA23 DA24 DA25 DA43 DB01 DB06 DB07 DB08 DB09 DB14 DB21 DB22 DB23 DB26 DB28 DB29 DB31 DB32 DB34 DB35 DB38 DB41 DB53 DB54 DB55 DB56 DB59 MA05 MA17 MA55 MA66 NA02 NA03 ZB02 ZC03 ZC35

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水性保存剤
   およびニコチンアミドを含有する可溶性製剤。
2. 【請求項２】 医薬として有用なペプチドまたはタンパク質がＩ群ポリペプ
   チドから選ばれる、請求項１記載の可溶性製剤。
3. 【請求項３】 医薬として有用なペプチドまたはタンパク質がＧＬＰ−１（
   ７−３７）ＯＨ、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ_２、Ｇｌｙ^８ＧＬＰ−１（７−３
   ７）ＯＨ、Ｖａｌ^８ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ、およびＡｓｐ^８ＧＬＰ−１（
   ７−３７）ＯＨの中から選ばれる、請求項１または２記載の可溶性製剤。
4. 【請求項４】 医薬として有用なペプチドまたはタンパク質の濃度が０．０
   １ｍｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌの範囲にある、請求項１から３までのいずれ
   かに記載の可溶性製剤。
5. 【請求項５】 保存剤が、フェノール、クレゾール、アルキルパラベン、ベ
   ンジルアルコール、安息香酸、クロロブタノールおよびそれらの混合物の中から
   選ばれる、請求項１から４までのいずれかに記載の可溶性製剤。
6. 【請求項６】 保存剤が、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルパラベン、
   プロピルパラベン、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、またはそれらの混
   合物である、請求項１から５までのいずれかに記載の可溶性製剤。
7. 【請求項７】 ニコチンアミドの濃度が０．０１モル濃度以上であり、２．
   ０モル濃度以下である、請求項１から６までのいずれかに記載の可溶性製剤。
8. 【請求項８】 ニコチンアミドの濃度が０．１モル濃度以上であり、１．０
   モル濃度以下である、請求項１から７までのいずれかに記載の可溶性製剤。
9. 【請求項９】 等張化剤をさらに含有する、請求項１から８までのいずれか
   に記載の可溶性製剤。
10. 【請求項１０】 製薬的に許容される緩衝剤をさらに含有する、請求項１か
    ら９までのいずれかに記載の可溶性製剤。
11. 【請求項１１】 医薬として有用なペプチドまたはタンパク質、疎水性保存
    剤およびニコチンアミドを混合し、請求項１から１０までのいずれかに記載の可
    溶性製剤を製する、該請求項１から１０までのいずれかに記載の可溶性製剤を調
    製するための方法。
12. 【請求項１２】 哺乳動物における糖尿病を処置するための方法であって、
    該哺乳動物に請求項３記載の可溶性製剤を投与することを特徴とする方法。
13. 【請求項１３】 パッケージング材および、請求項１記載の製剤の溶液を含
    有するバイアルを含む製品であり、該パッケージング材がその溶液が糖尿病の処
    置に使用できる旨を表示するラベルを含んでいる製品。