WO2005074943A1

WO2005074943A1 - Ｅｄ−７１製剤

Info

Publication number: WO2005074943A1
Application number: PCT/JP2005/001749
Authority: WO
Inventors: Hisakazu Katsuki; Masaki Shibata; Kazunori Muramatsu; Akihiko Mizutani; Tsuyoshi Yamauchi; Kouji Suzuki
Original assignee: Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 2004-02-06
Filing date: 2005-02-07
Publication date: 2005-08-18
Also published as: CN1938034B; US20070129340A1; KR101166394B1; EP1714656A1; HK1144179A1; EP1714656B8; JPWO2005074943A1; KR20070003904A; CN101721708A; EP1714656A4; CN101721708B; JP2012072169A; HK1101139A1; ES2638836T8; JP5529104B2; JP4921794B2; CN1938034A; EP1714656B1; ES2638836T3

Abstract

　本発明の目的は、室温保存下で生成するＥＤ−７１の主分解物であるタキステロール体およびトランス体の生成を抑制することができる製剤を提供することである。　本発明により、（（５Ｚ，７Ｅ）−（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−ヒドロキシプロポキシ）−９，１０−セココレスタ５，７，１０（１９）−トリエンー１，３，２５−トリオール、油脂、および、抗酸化剤を含む製剤が提供される。

Description

明細書

ED - 71製剤

技術分野

[0001] 本発明は、 (5Z, 7E) - (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）—9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール（以下、「ED— 71」とも称する）を含有する製剤に関する。また、 ED— 71のトランス型異性体である（5E, 7E) - (1R , 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ— 5, 7, 10 (19)—トリェン -1, 3, 25—トリオール (以下、「トランス体」とも称する）にも関する。

背景技術

[0002] (5Z, 7E) -(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールは、中外製薬株式会社により開発された骨形成作用を有する活性型ビタミン Dの合成誘導体であり、骨粗鬆症治療薬として

3

現在臨床試験中の薬物である（Bone, Vol. 30 (4) , 582—588, 2002)。

[0003] ED— 71の製剤化においては、公知のビタミン D誘導体と同様に、ソフトカプセル剤などの製剤化手法を利用しうる。公知のビタミン D誘導体製剤については、例えば、 1 a , 25—ジヒドロキシコレカルシフエロールを含有する医薬組成物に 0. 01— 5重量⁰ /₀ のトコフエロール類を添カ卩することにより、 l a , 25—ジヒドロキシコレカルシフエロールを安定に保つことができるとの報告（特開平 6— 87750)、アルファカルシドールを含有するソフトカプセル剤に dl— α—トコフエロールとジブチルヒドロキシトルエンを 1： 1 の重量比で、抗酸化剤の総量として 0. 005%以上添加することにより、アルファカルシドールの保存安定性を向上させることが可能であるとの報告 (特開平 5— 4925)などがある。し力しながら、これらは何れも、ビタミン D類の分解物の生成を抑制できるかにつ、ては触れられて!/、なかった。

[0004] 厚生労働省発行のガイドライン（ICH Harmonized Tripartite Guideline (Impurities in New Drug Products, Q3B(R), ICH Steering Committee, 2003)によると、製剤中のある分解物の含量が 1%を越える場合は、その分解物の安全性を確認することが必須条件とされている。したがって、薬物の製剤化に際しては、製剤中の各分解物の含量がそれぞれ 1 %を越えないことが重要となる。

[0005] したがって、 ED-71の製剤化に際しても、単に有効成分である ED-71の保存安定性を向上させるだけではなぐ主分解物の生成を抑制することも実務上重要となる発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 本発明は、 ED— 71の分解物の生成を抑制しうる製剤化処方を提供することを目的とする。

課題を解決するための手段

[0007] 本発明者らは、上述の問題点を解決するために鋭意検討を重ねた結果、 ED— 71 の油脂中における主分解物力下記の構造式で表される ED— 71のタキステロール型異性体：

[0008] [化 1]

(6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ— 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール:以下、「タキステロール体」とも記する）、および、下記の構造式で表される ED-71のトランス体： [0010] [化 2]

[0011] ( (5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスタ— 5 , 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール）であることを見出した。そして、 ED— 71 含有油状製剤において、抗酸化物質を添加することにより、これら分解物の生成を抑制できることを見出し、本発明を完成させた。

[0012] すなわち、本発明によれば、（1) (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプ口ポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール；（2) 油脂;および (3)抗酸化剤を含む製剤が提供される。

[0013] 上記製剤において、（5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9 , 10 セココレスタ 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 25—トリオールの分解物の生成が抑制されることが好ましい。 (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )-9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェン— 1, 3, 25—トリオールの分解物は、 6 E—（1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）一9, 10—セココレスタ一 5 (10) , 6, 8 (9) トリェンー 1, 3, 25—トリオールおよび Zまたは（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2 —(3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスター 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 2 5—トリオールであってもよい。 (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）— 9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 25—トリオールの分解物が、6E—（1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスタ— 5 (10) , 6, 8 (9) トリェンー 1, 3, 25—トリオールおよび（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3— ヒドロキシプロポキシ ) 9, 10 セココレスター 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 25 トリオールであること力好ましい。

[0014] あるいは、上記製剤において、（5Z, 7E) - (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェン— 1, 3, 25—トリオールの、 6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスタ— 5 (10) , 6, 8 ( 9) トリェンー 1 , 3, 25—トリオールおよび Zまたは（5E, 7E) -(1R, 2R, 3R)— 2— ( 3—ヒドロキシプロポキシ ) 9, 10 セココレスター 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 25— トリオールへの分解が抑制されることが好ま U、。

[0015] 上記製剤にお!、て、抗酸化剤が、 dl— a—トコフエロール、ジブチルヒドロキシトルェン、ブチルヒドロキシァ-ソール、没食子酸プロピル力選ばれる 1種であることが好ましく、 dl— a トコフエロールであることが更に好まし！/、。

[0016] 上記製剤が、油状製剤であることが好ましぐソフトカプセル剤、ハードカプセル剤または油状液剤（特には、ソフトカプセル剤）であることが好ま、。

[0017] 上記製剤において、（5Z, 7E) - (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9 , 10 セココレスタ 5, 7, 10 (19) 卜リエンー 1, 3, 25 卜リ才ーノレ力 S油月旨に対して 0. 000001— 0. 01重量⁰ /₀含まれ、抗酸ィ匕剤力 S油月旨に対して 0. 0001— 12重量⁰ /₀含まれることが好ましヽ。

[0018] さらに、本発明の別の側面によれば、 ED-71のトランス型異性体である、 (5E, 7E )— (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ— 5, 7, 10 (1 9)—トリェンー 1 , 3, 25—トリオールが提供される。

発明の効果

[0019] 本発明の ED-71製剤により、 ED-71の分解物の生成を抑制しうる製剤化処方を提供することが可能である。トランス体は、 ED— 71の製剤分析における標準品としても、また、種々のビタミン D系化合物の合成原料としても使用可能である。

図面の簡単な説明

[0020] [図 1]40°CZ75%RH下で 33日間放置後の薬液の UV— HPLCクロマトグラフ（265 nm)を不す。

[図 2]40°CZ75%RH下で 33日間放置後の薬液の RI— HPLCクロマトグラフを示す発明を実施するための最良の形態

[0021] 以下、本発明のより具体的な態様、並びに本発明を実施するための方法につき説明する。

[0022] (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスタ— 5 , 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール (ED— 71)は、下記の構造式で表される化合物である。

[0023] [化 3]

[0024] ED— 71は、例えば特開平 10— 72432号に記載された方法に従い、 (1R, 2R, 3R )—2— (3—ヒドロキシプロボキシ）コレスタ— 5, 7 ジェン 1, 3, 25—トリオールを出発物質として、紫外線照射及び熱異性化反応後、逆相 HPLCで精製し、濃縮後、酢酸ェチルで結晶化させることにより得ることができる。

[0025] 本発明に用いる「抗酸化剤」としては、亜硝酸塩 (例えば亜硝酸ナトリウム）、亜硫酸塩 (例えば亜硫酸ナトリウム、乾燥亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム）、チォ硫酸塩 (例えばチォ硫酸ナトリウム）、アルファチォグリセリン、 1, 3—ブチレングリコール、チォグリコール酸およびその塩 (例えばチォグリコール酸ナトリウム）、チォリンゴ酸塩 (例えばチオリンゴ酸ナトリウム）、チォ尿素、チォ乳酸、ェデト酸塩 (例えばェデト酸ナトリウム）、ジクロルイシァヌール酸塩 (例えばジクロルイシァヌール酸カリウム）、クェン酸、システィン及びその塩 (例えば塩酸システィン）、ベンゾトリァゾール、 2—メルカプトべンズイミダゾール、エリソルビン酸およびその塩（例えばエリソルビン酸ナトリウム）、ァスコルビン酸およびそのエステル化合物（例えば L— ァスコルビン酸ステアリン酸エステル、パルミチン酸ァスコルビン酸）、リン脂質（例えば大豆レシチン）、金属キレート剤およびその塩 (例えば、エチレンジァミン四酢酸、エチレンジァミン四酢酸カルシウム-ナトリウム、エチレンジァミン四酢酸-ナトリウム）、酒石酸およびその塩 (例えばロッシエル塩）、ポリフエロール類 (例えばカテキン）、グルタチオン、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシァ-ソール、没食子酸プ口ピル、天然ビタミン E、酢酸トコフエロール、濃縮混合トコフエロール、トコフエロール同族体（例えば d α トコフエロール、 dl α トコフエロール、 5, 8—ジメチルトコール、 7, 8—ジメチル卜コール、 δ—メチル卜コール、 5, 7, 8—卜リメチルトコ卜リエノール、 5, 8—ジメチルトコトリェノール、 7, 8—ジメチルトコトリェノール、 8—メチルトコトリェノール )などが挙げられ、これらを単独で或いは 2種以上を組み合わせて用いることができる。この中でも、酢酸トコフエロール、ジブチルヒドロキシトレン、天然ビタミン E、 dl α— トコフエロール、 d ひ—トコフエロール、濃縮混合トコフエロール、パルミチン酸ァスコルビン酸、 L—ァスコルビン酸ステアリン酸エステル、ブチルヒドロキシァ-ソール、没食子酸プロピル力選ばれる 1種が好ましぐ dl α—トコフエロール、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシァ-ソール、没食子酸プロピルから選ばれる 1種がより好ましく、 dl— a トコフエロールが特に好まし！/、。

[0026] 本発明に用いられる「油脂」としては、中鎖脂肪酸トリグリセリド (以下、「MCT」とも記す）、トリカプリリン、カプロン酸、力プリル酸、力プリン酸、ォレイン酸、リノール酸、リノレン酸、植物油等が挙げられる。ここで、植物油としては、ヤシ油、ォリーブ油、菜種油、落下生油、コーン油、大豆油、綿実油、ぶどう油、紅花油等が挙げられる。これらのうち、不飽和脂肪酸を含んでいない、 MCT、トリカプリリン、カプロン酸、カプリル酸、力プリン酸が好ましぐ MCTが特に好ましい。

[0027] 本発明において「ED-71の分解物」とは、 ED-71を油状製剤として保存した際に検出される主要な分解物をいい、具体的には ED— 71のタキステロール体および ED —71のトランス体等である。

[0028] ED— 71のタキステロール体は、タキステロール骨格を有する下記の構造式で表される化合物であり、その化学名は 6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ） -9, 10—セココレスタ一 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェン一 1, 3, 25—トリオール）である。 [0029] [化 4]

[0030] タキステロール体は、例えば特開平 10— 72432号に記載された方法に従って合成することができ、或いは次の方法でも合成することができる。すなわち、（1R, 2R, 3R )—2— (3—ヒドロキシプロボキシ)ーコレスタ— 5, 7—ジェン 1, 3, 25—トリオールを出発物質として、そのテトラヒドロフラン溶液を低温、アルゴン雰囲気下、紫外線照射後、逆相 HPLCで精製し、濃縮乾固することにより、タキステロール体を得ることができる。

[0031] ED— 71のトランス体は、 5—6位の二重結合がトランス配置である下記の構造式で表される化合物であり、その化学名は（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）—9, 10—セココレスタ— 5, 7, 10 (19) トリェンー 1, 3, 25—トリオールである。

[0032] [化 5]

[0033] 上述したように、薬物の製剤化に際しては、有効成分の各分解物の含量がそれぞれ 1%を越えないことが重要となる。

[0034] 本発明者らの検討によると、 ED— 71を MCTに溶解した溶液をソフトカプセルに内封した製剤を、「室温」の上限温度である 30°Cで 12ヶ月保存した場合、タキステロ一ル体およびトランス体の生成量はいずれも 1%を越えたことから (後記の表 2— 3参照 )、 ED-71の製剤化に際しては、これら主分解物の生成を抑制することが必要である。つまり、 ED— 71製剤の実用化に際しては、単に ED— 71の分解を防ぐだけではなく、特に、タキステロール体およびトランス体への分解を防ぐことが重要である。

[0035] タキステロール体およびトランス体は逆相液体クロマトグラフィーにより検出し、測定波長 265nmにおける吸光度を測定することにより、これらの存在を確認することができる。

[0036] ED— 71の分解物の生成が抑制されている状態としては、室温、遮光下で 12ヶ月保存時のタキステロール体およびトランス体の生成量がそれぞれ 1%以下であることが好ましく、 0. 3%以下であることがより好ましぐ 0. 1%以下であることが特に好ましい

[0037] 本発明において「油状製剤」とは、薬物を油脂に溶解した溶液を、経口投与が可能な剤形に製剤化したものをいう。

[0038] 本発明にお、て利用可能な油状製剤としては、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、油状液剤等が挙げられる。 [0039] ソフトカプセル剤とは、ゼラチン等のフィルム形成成分を主成分とする皮膜に、薬物を油脂に溶解した配合液を封入したものをいう。ソフトカプセル剤の製法は、滴下法やロータリー.ダイ法等のソフトカプセルの製造が可能な製法であれば、ずれを用いてもよい。滴下法とは、カプセルの芯となる物質をカプセルの皮膜となる物質と同時にノズル力冷却液中へ滴下する際、界面張力によって二相液流が液滴となり、それが冷却されて皮膜が硬化しカプセルとなることを利用した方法である。ロータリー'ダィ法とは、 2本の向かい合って回転する形成ローラーを連続したシート (ゼラチン等のゲル形成成分を含有するシート）が通過し、ローラーによってシートからカプセル形成体が押し抜かれ、同時に充填物は両方の押抜片の間に注入され、かつ押抜片の端部は熱作用により、相互に溶接され、シームソフトカプセルを形成する方法である。ビタミン D類のソフトカプセル剤およびその製造方法としては、例えば、国際公開公報 WOOl/15702^-,国際公開公報 WO02Z13755号、国際公開公報 WO03Z09 4897号、国際特許出願 PCTZJP03Z07885号などに記載されたものを挙げることができる。

[0040] ハードカプセル剤とは、ゼラチン等のフィルム形成成分を主成分とするキャップとボディー力もなる殻カプセルに、薬物を含有する溶液を充填し、溶液が漏れないよう〖こキャップとボディーの重合部にゼラチン液等を塗りシールを施したものである。

[0041] ソフトカプセル剤およびハードカプセル剤の皮膜は、フィルム形成成分、可塑剤、遮光剤等からなり、これらを配合したものである。

[0042] フィルム形成成分には、各種ゼラチン等の動物由来成分であっても、各種水溶性高分子等の非動物由来成分であってもよぐこれら成分を任意の割合で 1種以上配合して用いることができる。動物由来成分とは、アルカリ処理ゼラチン、酸処理ゼラチン、化学修飾ゼラチン等が挙げられる。化学修飾ゼラチンとしては、その修飾様式は特に限定されないが、ゼラチンのァミノ基とコハク酸、フタル酸、酢酸等の物質を反応させて製造したものを用いることができる。化学修飾ゼラチンに用いるゼラチンはアルカリ処理ゼラチンでも酸処理ゼラチンであってもよい。非動物由来成分としては、寒天、カラギーナン、アルギン酸などの海藻力抽出される多糖類、ローストビーンガム、グァーガム、タマリンドガム、カシアガム、タラビーンガムなどの植物種子より得られる多糖類、アラビアガム、トラガントガム、アーモンドガム、ダムソンガムなどの植物が分泌する多糖類、ぺクチン、ァラビノガラタタン、ダルコマンナンなどの植物力も抽出される多糖類、ジエランガム、キサンタンガム、プルラン、デキストラン、カードランなどの微生物から得られる多糖類、結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど繊維素粘質物などが挙げられる。

[0043] 可塑剤としては、グリセリン、ソルビトール、マルトース、グルコース、マルチトース、蔗糖、キシリトール、マン-トール、エリスリトール、ポリエチレングリコール類 (分子量 4 00— 6000)等が挙げられ、本発明ではこれらの可塑剤を 1種以上使用することができる。

[0044] 遮光剤としては、酸化チタン、三二酸化鉄 (ベンガラ）、黄色三二酸化鉄、黄酸化鉄、酸化亜鉛等の金属酸化物、タルク、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、ケィ酸マグネシゥム、軽質無水ケィ酸等の無機化合物、カラメル、食用赤色 3号アルミニウムレーキ、食用黄色 4号アルミニウムレーキ、食用黄色 5号アルミニウムレーキ、食用緑色 3号アルミニウムレーキ、食用青色 2号アルミニウムレーキ、銅クロロフィリンナトリウム等の食用色素等であり、本発明ではこれらの非水溶性遮光剤を 1種以上使用することがでさる。

[0045] 「油状液剤」とは、薬物を含有する油状溶液を密封容器 (例えば、ガラス容器、ブラスチック容器やスティック包装容器等）に充填したものである。

[0046] 本製剤に用いる油脂の量は特に限定されないが、カプセル剤（ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤）については、 1カプセル当たり 50— 500mgであることが好ましく、 60— 250mgであることが特に好ましい。油状液剤の場合に用いる油脂の量としては、 1容器当たり 0. 5— 5gであることが好ましぐ 1一 3gであることが特に好ましい。

[0047] 製剤中に含まれる ED— 71含量は特に限定されないが、単位製剤当たりの ED— 71 量として 0. 05— 5 g含まれて!/ヽるもの力子ましく、 0. 5— 0. 75 /z g含まれて!/ヽるものが特に好ましい。これを油脂中 ED— 71濃度に換算すると、カプセル剤の場合は、 0. 00001重量％以上が好ましぐ 0. 0002重量％以上が特に好ましぐ 0. 01重量 %以下が好ましぐ 0. 00125重量％以下が特に好ましい。油状液剤の場合は、 0. 0 00001重量％以上が好ましぐ 0. 000017重量％以上が特に好ましぐ 0. 001重量 %以下が好ましぐ 0. 000075重量％以下であることが特に好ましい。

[0048] 抗酸化剤の油脂への配合量も特に限定されないが、抗酸化剤として使用可能な最大使用量以下の量 (例えば、医薬品添加物辞典 (薬事日報社， 2000)に記載されている承認前例の最大使用量以下、食品添加物公定書（日本食品添加物協会， 199 9)に記載されている使用制限量以下の量など）を通常用いることができる。

[0049] 中でも、 dl α—トコフエロールについては、カプセル剤の場合、油脂中に 0. 0001 重量％以上含まれていることが好ましぐ 0. 002重量％以上であることがより好ましく、 0. 01重量％以上であることが特に好ましぐ 12重量％以下含まれていることが好ましぐ 1重量％以下であることがより好ましぐ 0. 1重量％以下であることが特に好ましい。油状液剤の場合は、油脂中に 0. 0001重量％以上含まれていることが好ましく、 0. 002重量％以上であることがより好ましぐ 0. 01重量％以上であることが特に好ましぐ 1. 2重量％以下含まれていることが好ましぐ 1重量％以下であることがより好ましぐ 0. 1重量％以下であることが特に好ましい。ジブチルヒドロキシトルエン、プチルヒドロキシァ-ソール、没食子酸プロピル等についても、上記の dl α—トコフェロールと同様である。

[0050] なお、本出願が主張する優先権の基礎となる出願である特願 2004— 30702号の開示は全て引用により本明細書の中に取り込まれる。

実施例

[0051] 以下に実施例を挙げて、本発明を具体的に説明するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。尚、以下の実施例において、 ED— 71およびタキステロール体は、特開平 10-72432号に記載の方法により合成したものを用いた。

[0052] 実施例 1 : トランス体（（5Ε. 7E)-(1R. 2R. 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）

9. 10 セココレスタ— 5. 7. 10 (19) トリェンー 1. 3. 25—トリオール）の合成およびデータ

(合成および精製方法）

ED-71 500mgを窒素雰囲気下、 50mLナス型フラスコに入れ、そこに液体二酸化硫黄 30mLを注入し、 3時間還流 (約— 15°C)攪拌した。二酸ィ匕硫黄を留去して、 (5 Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロプロポキシ）—6, 19—スルフォン 9, 10—セココレスター 5(10), 7 ジェン 1, 3, 25 トリオール (以下「二酸化硫黄付加体」と記す)を淡黄色固体として 560mg得た。 50mLナス型フラスコ中に、二酸化硫黄付カロ体 200mg、炭酸水素ナトリウム 500mg、エタノール 20mLをカ卩え、攪拌下 210分間還流した。冷却後、不溶物を濾別し、溶液を濃縮乾固した。濃縮乾固物をエタノール 10mL、ジェチルエーテル 10mLに溶解し、濾過後、溶液を濃縮乾固した。

[0053] 乾固物を逆相系分取 HPLC (装置：日立製作所製、カラム: Kromasil ODS (KR1 00-7-C18, 250X20mmI. D. , Eka Chemicals製）、移動相： 50%—ァセト-トリル水溶液、流速： 9.99mLZmin、検出： UV=220nm及び 265nm)で展開処理し、 54分力も 68分の溶出部分を分取した。分取液を濃縮乾固して約 50mgの白色固体を得た。得られた白色固体は少量のエタノールと酢酸ェチル 0.5mLを用いて溶解し、 20°C設定の冷凍庫中で結晶化した。析出してきた結晶を分離し、微量の酢酸ェチルで洗净し、乾燥してトランス体 39mg (収率 22%)を得た。

[0054] (物性データ）

HPLC純度： 99.6%(HPLC条件： Kromasil ODS 100— 5C18, 5 m, 4 .6mml. D. X 250mm, 55%ァセトニトリル水溶液、流速 0.9mLZ分、 220 lmg/mL 10 μ L、面積測定範囲 4一 30分） .

NMR(CDCl) (ppm) :6.63(1H, d, J=ll.2Hz), 5.85(1H, d, J=ll

3

.6Hz), 5.18 (1H, t, J=l.8Hz), 5.13 (1H, t, J=l.8Hz), 4.43 (1H, d, J =8.3Hz), 4.28 (1H, ddd, J = 3.6Hz, 3.6Hz, 3.6Hz), 3.7—4.0(3H, m), 3.34(1H, dd, J = 2.8Hz, 8.4Hz), 1.21 (6H, s), 0.93 (3H, d, J = 6. 3Hz), 0.56 (3H, s) .

1³C-NMR(CDC1 ) (ppm) 149.2, 145.4, 132.0, 123.4, 116.0, 109.0

3

, 84.2, 71.3, 71.1, 66.3, 61.2, 56.5, 45.9, 44.4, 40.5, 36.4, 36. 0, 31.8, 29.3, 29.2, 29.1, 27.6, 23.5, 22.3, 20.8, 18.8, 18.4, 12 .2.

UV (エタノール）（λ max) :209.8nm( ε 12300), 274.6nm( ε 23200). IR(KBr) (cm^-1) :3365, 2951, 2935, 2877, 2845, 1628, 1468, 1458, 14 37, 1375, 1363, 1350, 1333, 1215, 1120, 1080, 1059, 1034, 997, 958 , 947, 933, 904, 891 , 872, 729, 715, 683, 638, 627。

実施例 2： ED— 71含有ソフトカプセル剤における主分解物の同定

(方法)

トリチウム標識した ED— 71 (2 j8— ([3」H]— 3—ヒドロキシプロピル)— 1 α , 3 β—25 トリヒドロキシコレスタ一 5、 7、 10 ( 19)—トリェン（または、 (5Ζ, 7E) - ( 1R, 2R, 3R) — 2— ([3—³ H]— 3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10 セココレスタ 5, 7, 10 ( 19) トリェン — 1 , 3, 25—トリオールとも標記する。以下「³H— ED— 71」と記す）を用い (J. Labele d Cpd. Radiopharm. 42, 519— 525 ( 1999) )、これを未標識の ED— 71とともに MCTに溶解した (ED— 71濃度：： g/100 mg, ³H—ED— 71濃度： 1. 38 MBq/ mL)。この薬液を空のソフトカプセル（カプセル剤皮はゼラチン 47. 67 mg,グリセリン 16. 68 mgおよび酸化チタン 0. 65 mgから成るもので、ロータリ一 ·ダイ法により製造したもの）に注射針付シリンジを用い充填し (0. 08 mLZカプセル）、ゼラチンでシールし、 40°CZ75%RH、遮光下で、 33日間放置した。薬液中に生成した分解物を、 UVおよび RI検出器を装備した HPLC (島津製作所製）により検出した。

HPLC分析条件

カラム： YMC— Pack ODS AM— 303 (250 X 4. 6 mm, 5 /z m)ゝ YMC製

移動相：ァセトニトリル Z水 =1： 1

流速： 1. 2 mLZ分

ピーク検出： UV265 nm, RI

カラム温度： 30°C

(結果)

40°CZ75%RH下で 33日間放置後の薬液を HPLCにより測定したクロマトグラムを、それぞれ図 1および図 2に示す。 RIのクロマトグラムには、 ED— 71に対応する主たるピークおよびプレ体に対応する 17分付近のマイナーピーク以外に、 16分付近と 24分付近にもそれぞれマイナーピークが検出された。これら 2種のピークは 40°C/7 5%RHで保存する前のサンプルには検出されな!、こと、および RI— HPLCで検出されたピークは³ H— ED— 71由来のピークであることから、これら 2種の成分力 ¾D— 71 の主分解物であることが示唆された。 16分付近に溶出したピークは、タキステロール体の標準溶液を同一 HPLC条件で分析した場合に検出された主ピークの溶出位置とほぼ一致したため、このピークはタキステロール体由来のピークであると考えられる。また、 24分付近に溶出したピークは、トランス体の標準溶液を同一 HPLC条件で分祈した場合に検出された主ピークの溶出位置とほぼ一致したため、このピークはトランス体由来のピークであると考えられる。

[0057] なお、 ED— 71のプレ体（ィ匕学名： 6Z— (1R, 2R, 3R)— 2— (3ヒドロキシプロボキシ） -9, 10—セココレスタ— 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェン— 1, 3, 25—トリオール）は、 ED— 7 1と、油液中、水溶液中またはエタノールなどの有機溶媒中において平衡関係にある異性体として存在する化合物であり（特開平 10 - 72432号）、下記の構造式で示される。

[0058] [化 6]

E D - 7 1のプレ体

[0059] 実飾 13 :

ED— 71含有製剤における主分解物の生成に及ぼす抗酸化剤の影響を調べるために、 ED— 71および抗酸化剤を含有する MCT溶液を充填したソフトカプセル剤を各種条件で保存し、タキステロール体およびトランス体の生成挙動を評価した。

[0060] (処方）

表 1に被験ソフトカプセルの処方を示す。 ED— 71は MCTに対して、 0. 0001重量 %となるよう配合した。抗酸化剤としては、 dl— α—トコフエロール (和光純薬工業製）および ΒΗΤ (ジブチルヒドロキシトルエン）（和光純薬工業製)を、単独または併用して用いた。各抗酸化剤の添加量は、 MCTに対してそれぞれ 0. 02重量％となるように配合した。抗酸化剤を含有する処方を処方 1、 2、 3とし、抗酸化剤を含有しない処方を対照処方 1とした。

[0061] [表 1] 表 1 ソフトカプセル処方

対照処方 1 処方 1 処方 2 処方 3

. ⁿ

名〇 tm BHT+卜

トコフヱ口一

無添加 BHT添カロフエローノレ

ル添加

添加

力プセル剤皮

,.ゼラチン (APB-H) 47.67 m g

グリセリン 16.68 m g

酸化チタン 0.65 m g

精製水

小計 65.00 m g

芯液

E D - 7 1

無水エタノール 1.30 m g 1.30 m g 1.30 m g

BHT 0.02 m g 0.02 m g

DL-α- トコフエ口一ノレ 0.02 m g 0.02 m g

M C T (ODO-C) 98.70 m g 98.68 m g 98.68 m g 98.66 m g 小計 100,00 m g 100.00 m g 100.00 m g 100.00 m g

ΙΊ- 165.00 m g 165.00 m g 166.00 m g 165.00 m g

[0062] (ソフトカプセル製法）

ソフトカプセルは、シームレスカプセル充填機（スフエレックス、フロイント産業製）を用いて滴下法で、 1カプセルあたりの薬液重量および皮膜重量がそれぞれ lOOmg および 65mgとなるように製造した。

[0063] (保存条件）

ソフトカプセルをガラス瓶に約 100カプセルずつ入れ、密栓した状態および密栓しない状態で、 30°CZ60%RH、遮光下にそれぞれ 12ヶ月間保存した。

[0064] (タキステロール体、トランス体の確認法）

保存期間終了後に、各ソフトカプセル力薬液を抜き取り、そのうち 50 Lを HPLC 分析に供した。

[0065] カラム： YMC— Pack ODS AM— 303 (250 X 4. 6 mm, 5 πι)、 YMC製移動相：ァセトニトリル Z水 =ι： 1

流速： 1. 2 mLZ分

検出波長： 265 nm

カラム温度： 30°C

検出ピークエリアの総和に対するタキステロール体またはトランス体のピーク面積比を算出し、生成量の指標として用いた。

[0066] (ED— 71含量の測定法）

ED— 71含量を以下に示す HPLC法により測定し、保存期間終了後の残存率を求めた。

[0067] ·内部標準用液の調製法：

4ーヒドロキシ安息香酸へプチル約 2mgを精密に量り取り、エタノールをカ卩ぇ正確に lOOmLとした。この溶液をエタノールにより 10倍に希釈したものを内部標準溶液とした。

[0068] ，標準溶液の調製法：

ED— 71標準品約 2mgを精密に量り取り、エタノールをカ卩えて正確に 200mLとした。この溶液 2. 5mLを正確にとり、エタノールを加え正確に 20mLとしたものを標準原液とした。

[0069] MCT約 300mgを 10mLナシ型フラスコにとり、標準原液 2mLおよび内部標準溶液 2mLをカ卩えた。これを室温にてエバポレータで 10分間以上減圧乾燥し、残留した

MCT^液を標準溶液とした。

[0070] '試料溶液の調製法：

カプセル力も薬液を抜き取り、そのうち約 300mgを精密に 10mLナシ型フラスコに量り取った。これに内部標準溶液を正確に 2mLカ卩えた後、室温にてエバポレータで

10分間減圧乾燥し、残留した MCT溶液を試料溶液とした。

[0071] 'HPLC分析条件：

試料溶液および標準溶液 50 Lを、下記の条件でカラムスイッチング方式の HPL

C分析に供した。

[0072] カラム： YMC— Pack ODS AM— 303 (250 X 4. 6mm, YMC製移動相：（プレカラム) A液にァセトニトリル ·水混液（1:1)、 B液にァセトニトリルを用いて、グラジェントにより MCTを溶出する。

[0073] (分析カラム）：ァセトニトリル ·水混液（1:1)

流速： 1.2 mLZ分

検出波長： 265 nm

カラム温度： 23°C.

(結果）

HPLC〖こよる、タキステロール体、トランス体、 ED— 71の検出結果を表 2— 4に示す。

[0074] [表 2]

ED— 7 1 I g含有ソフトカプセルを入れた容器を密栓おょぴ開放状態で 30°C/60%RH、遮光下で保存時のタキ ^ステロール体のピークエリア比

タキステロール体ピークエリア比

対照処方 1 処方 1 処方 2 処方 3 保存条件保存期間（ヶ月）無添力 U ΒΗΤ トコフエ口一ノレ BHT+トコフエ口一ノレ

30°C/60% H 0 N.D. N.D. N.D. N.D.

密桎 6 1.31 N.D. N.D. N.D.

12 1.85 0.56 N.D. N.D,

30Τ/60%ΚΗ 0 N.D, N.D. N,D. N.D.

開放 6 1.54 N.D. N,D. N.D.

12 2.06 0.63 N,D. N.D.

n=l, N.D. <0.1%

[0075] [表 3]

ED- 7 1 1 g含有ソフトカプセルを入れた容器を密栓および開放状態で 30°C/60%RH、遮光卜'で保存時のトランス体ピークエリァ比

トランス体ピーク ¾リア比

対照処方 t 処方 2 処方 3 保存条件保存期間（ヶ月）無添力 U トコフエ口一ゾレ BHT+トコフエロール

30°C/60%RH 0 N.D. N.D. N.D. N.D.

密检 6 1.31 N.D. N.D, N,D.

12 1.85 0.56 N.D. N.D.

30 / 60%RH 0 N.D. N.D. N.D. N.D.

開放 6 1.54 N.D. N.D. N.D,

12 2.06 0,63 N.D. N.D.

n-I,N.D. <0.I% [0076] [表 4] 表 4 E D 7 1 1 ii g含有ソフトカプセルを入れた容器を密拴および開放状態で

3 0 °C/ 6 0 % Rト I、遮光' Fで保存時の F, D— 7 1の残存率

RD-71残存率（％)

対照処方 1 処方 1 処方 2 処 3 保存条件保存期間（ヶ月）無添カロ l IT トコフエロール BHT+卜コフエ Π—ノレ

30°C/60%RH 6 96.7 99.9 100.5 100.0

密栓 12 93.0 98,3 983 98.6

30^ΰΟ/60% Ι Ι 6 93.6 98.0 97.6 97.9

開放 12 88.1 93.7 95.0 95.5 n=l

[0077] 表 2— 3から明らかなように、開放状態で 12ヶ月保存時の対照処方製剤におけるタキステロール体およびトランス体の生成量は、ピークエリア比としてそれぞれ、 1. 741 %および 2. 06%であったのに対し、処方 2、 3では、いずれも検出限界以下 (0. 1% )にまで抑制されていた。表 4から明らかなように、処方 2、 3の方が対照処方に比ベて ED— 71の残存率も高力つた。以上の結果から、抗酸化剤を添加した処方 1、 2、 3では、いずれも対照処方に比べて、タキステロール体およびトランス体の生成が抑制されてヽることが示された。

[0078] 実施例 4 :

ED— 71含有製剤における主分解物の生成に及ぼす抗酸化剤の添加量の影響を調べるために、 dl— a—トコフエロールの添カ卩量が異なる ED— 71含有 MCT溶液を充填したソフトカプセルを各種条件で保存し、タキステロール体、トランス体の生成挙動を評価した。

[0079] (処方）

表 5に被験ソフトカプセルの処方を示す。 ED— 71は MCTに対して、 0. 001重量％となるよう配合した。抗酸化剤としては、 dl—ひ—トコフエロール (エーザィ製)を用いて、 MCTに対して 0. 002%, 0. 005%, 0. 01%, 0. 02%および 0. 04重量⁰ /₀となるように配合した（それぞれ、処方 4, 5、 6、 7, 8)。 dl— α—トコフエロールを含有しない処方を対照処方 2とした。

[0080] [表 5] 表 5 ソフトカプセル処方

対照処方 2 処方 4 処方 5 処方 6 ^方 7 ^方 8 原料名 -

0% 0.002% 0.005% 0,01% 0.02% 0.04% カブセル剤皮

ゼラチン (APB H) 47.67 mg

グリセリン 16.68 mg

酸化チタン 0.65 mg

(精製水） (71.84 mg)

計 65.00 mg

芯液

1 : 1) 7 1 0 01 mg 0.001 mg 0.001 mg 0.001 mg 0.001 mg 0.001 mg 無水ェタノ 1.300 mg 1.300 mg 1.300 mg し 300 mg 1,300 mg 1.300 mg d 1 - - ^ 0.000 mg 0.002 mg 0.005 mg 0 010 mg 0.020 mg 0.040 mg C (ODO C) 98.700 mg 98.697 mg 98.694 mg 98.689 mg 98.679 mg 98.659 mg

100.000 mg 100.000 mg 100.000 mg 100.000 mg 100.000 mg 100.000 mg

[0081] (ソフトカプセル製法）

ソフトカプセルは、シームレスカプセル充填機 (スフエレックス、フロイント産業製）を用いて滴下法で、 1カプセルあたりの薬液重量および皮膜重量がそれぞれ lOOmg および 65mgとなるように製造した。

[0082] (保存条件とタキステロール体、トランス体の確認法）

ソフトカプセルをガラス瓶に約 100カプセルずつ入れ、密栓した状態で、 40°C、遮光下に 3ヶ月間保存した。保存期間終了後に、各ソフトカプセル力も薬液を抜き取り、タキステロール体およびトランス体の生成量を実施例 3に記載の方法で測定した。

[0083] (結果）

HPLCによる、タキステロール体、トランス体の検出結果を表 6、 7に示す。

[0084] [表 6]

ビ含有ソフトカプセルを入れた容器を密栓状態で

、遮光下で保存時のタキステロ一ル体ビークエリァ比

タキステロール体ピークエリア比

処方処方処方処方方処方保存条件保存期問（ケ Λ ) 歸

リ 1

密栓カツコ内は a -トコフエロール添加量

[0085] [表 7] 舊含有ソフトカプセルを入れた容器を密拴伏態で

。、遮光下で保存時のトランス体ピークエリア比

卜ランス体ピクエリア比

照処方処方処方処方

保存期間（ヶ月）

じ.

密栓カツコ内は

∞

[0086] 表 6、 7から明らかなように、 dl— α—トコフエロール添カ卩量が 0. 002重量％の場合でも、対照処方に比べて、タキステロール体およびトランス体の生成抑制効果が認められた。タキステロール体については、 dl— α—トコフエロール添カ卩量依存的な生成抑制効果が認められた。一方、トランス体の生成抑制効果は、 dl— α—トコフエロールの添加量が 0. 01%以上の領域ではいずれの添カ卩量においてもトランス体の生成量は 0. 1%以下であった。以上の結果から、 d卜 α—トコフエロールは ED— 71主分解物の生成を濃度依存的に抑制し、 dl— α—トコフエロール添カ卩量 0. 002重量％においても、顕著な主分解物生成抑制効果を有することが示された。

[0087] 実飾 15 :

ED - 71含有製剤における主分解物の生成に及ぼす各種抗酸化剤の効果を評価するために、 ED— 71含有 MCT溶液に各種抗酸化剤を添加し、 50°C下で 1ヶ月保存し、タキステロール体、トランス体の生成挙動を評価した。

[0088] (処方）

ED-71は MCTに対して、 0. 0017重量％となるよう配合した。抗酸化剤としては、 dl— a トコフエロール（和光純薬工業製）、ジブチルヒドロキシトルエン（和光純薬ェ業製)、プチルヒドロキシァ二ソール (和光純薬工業製)、没食子酸プロピル (和光純薬工業製)を、それぞれ単独で使用した。各抗酸化剤の添加量は MCTに対して 0. 2重量％となるように配合した。抗酸化剤を含有する処方を処方 9、 10、 11、 12とし、抗酸化剤を含有しな!ヽ処方を対照処方 3とした。

[0089] (保存条件とタキステロール体、トランス体の確認法）

上記処方 9一 12の各薬液の約 lgを、それぞれスピッツ管に入れ、密栓し、 50°C、遮光下に 1ヶ月間保存した。保存期間終了後に、各薬液中のタキステロール体およびトランス体の生成量を実施例 3に記載の方法で測定した。

[0090] (結果）

HPLCによる、タキステロール体、トランス体の検出結果を表 8に示す。

[0091] [表 8] 表 8 Κ I)— 7 1含有 M C T溶液を 5 0。C、遮光下で〖ケ ϋ保存 Β の

タキステロール体およびトランス ^のビークエリア比

ピ一クエリア比 (%)

処方杭酸化剤タキステロ一/レ体トランス体

対照処方 3 使用せず 0.76 0.43 処 9 d l — トコフエ口一ノレ N.D. N.D. 処方 10 ジブチルヒドロキシトノレェン N.D. N.D. 処方 11 ブチノレヒドロキシァニソーノレ N.D. N.D. 処方 12 没食子酸プロピル N.D. N.D.

=1, N,D <0,1%

[0092] 表 8から明らかなように、いずれの抗酸化剤を使用した場合も、タキステロール体およびトランス体の生成は顕著に抑制された。

[0093] 実飾 16 :

被験カプセルを下記処方のソフトカプセルとした以外は実施例 4記載の方法に従つて、 ED— 71含有製剤を作成しタキステロール体、トランス体の生成挙動を評価した。 V、ずれの処方にぉ、てもタキステロール体、トランス体の生成が抑制されて、た。 [表 9] j½ 9 ソフト力プセル処力'

処方 13 処方 14

原料名

(0.02%) (0.02%)

カプセル剤皮

ゼラチン (APB H) 54.71 mg

ノノレビトー/レ 8.34 mg

カラメル (2MC)

(^τΚ) ― (82.33 mg)

計 65.00 mg

芯液

E D 7 1 0.0005 mg 0.001 mg

無水エタノー 1.300 mg 1.300 mg

d 1 —a— トコフエロール 0.020 mg 0 020 mg

MC T(ODO-C) 98.6795 mg 98.679 mg

計 100.000 mg 100.000 mg

産業上の利用可能性

本発明の ED-71製剤により、 ED-71の分解物の生成を抑制しうる製剤化処方を提供することが可能である。トランス体は、 ED— 71の製剤分析における標準品として有用であり、また、種々のビタミン D系化合物の合成原料としても有用である。

Claims

請求の範囲

(1) (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオール

(2) 油脂、および

(3) 抗酸化剤

を含む製剤。

(5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7 , 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールの分解物の生成が抑制されている、請求項 1記載の製剤。

(5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7 , 10 (19)—トリェン—1, 3, 25—トリオールの、 6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ）—9, 10—セココレスタ— 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールおよび/または（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10— セココレスタ— 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールへの分解が抑制される、請求項 1記載の製剤。

(5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7 , 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールの分解物が、 6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3— ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスター 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールおよび Zまたは（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロボキシ）― 9, 10—セココレスタ— 5, 7, 10 (19)—トリェン— 1, 3, 25—トリオールである、請求項 2 記載の製剤。

(5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7 , 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールの分解物力 6E— (1R, 2R, 3R)— 2— (3 ーヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスター 5 (10) , 6, 8 (9)—トリェンー 1, 3, 25— トリオールおよび（5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10— セココレスタ— 5, 7, 10 (19)—トリェンー 1, 3, 25—トリオールである、請求項 2記載の製剤。

抗酸化剤が、 dl— α—トコフエロール、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシァ -ソール、没食子酸プロピル力も選ばれる 1種である、請求項 1ないし 5のいずれか 1 項記載の製剤。

[7] ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤または油状液剤である、請求項 1な、し 6の、ずれか 1項記載の製剤。

[8] ソフトカプセル剤である請求項 1な、し 7の、ずれか 1項記載の製剤。

[9] (5Z, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ 5, 7

, 10 (19)—卜!;ェンー 1, 3, 25—卜!;才ーノレ力 S油月旨に対して 0. 000001— 0. 01重量

%含まれ、抗酸化剤が油脂に対して 0. 0001— 12重量％含まれる請求項 1ないし 8 の!、ずれか 1項記載の製剤。

[10] (5E, 7E)-(1R, 2R, 3R)— 2— (3—ヒドロキシプロポキシ )—9, 10—セココレスタ— 5,

7, 10 (19)—トリェン一 1, 3, 25—トリオール。