KR101166394B1

KR101166394B1 - Ｅｄ-71 제제

Info

Publication number: KR101166394B1
Application number: KR1020067017923A
Authority: KR
Inventors: 히사카즈 가츠키; 마사키 시바타; 가즈노리 무라마츠; 아키히코 미즈타니; 츠요시 야마우치; 고우지 스즈키
Original assignee: 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2004-02-06
Filing date: 2005-02-07
Publication date: 2012-07-23
Also published as: CN101721708A; CN1938034B; JPWO2005074943A1; KR20070003904A; ES2638836T3; CN101721708B; CN1938034A; EP1714656A1; EP1714656B8; HK1144179A1; JP4921794B2; EP1714656A4; JP5529104B2; JP2012072169A; US20070129340A1; WO2005074943A1; EP1714656B1; ES2638836T8; HK1101139A1

Abstract

본 발명의 목적은 실온 보존 하에서 생성하는 ED-71 의 주분해물인 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성을 억제할 수 있는 제제를 제공하는 것이다. 본 발명에 의해, ((5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올, 유지 및 항산화제를 함유하는 제제가 제공된다.

Description

ＥＤ-71 제제{ED-71 PREPARATION}

본 발명은 (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올 (이하,「ED-71」이라고도 함) 을 함유하는 제제에 관한 것이다. 또한, ED-71 의 트랜스형 이성체인 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올 (이하,「트랜스체」라고도 함) 에 관한 것이기도 하다.

(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올은 주가이 제약 주식회사에 의해 개발된 뼈 형성 작용을 갖는 활성형 비타민 D₃의 합성 유도체이고, 골다공증 치료약으로서 현재 임상 시험 중인 약품이다 (Bone, Vol.30(4), 582-588, 2002).

ED-71 의 제제화에 있어서는, 공지의 비타민 D 유도체와 마찬가지로, 소프트 캡슐제 등의 제제화 수법을 이용할 수 있다. 공지의 비타민 D 유도체 제제에 대해서는, 예컨대, 1α,25-디히드록시콜레칼시페놀을 함유하는 의약 조성물에 0.01～5중량% 의 토코페롤류를 첨가함으로써, 1α,25-디히드록시콜레칼시페놀을 안정적으로 유지할 수 있다는 보고 (일본 공개특허공보 평6-87750), 알파칼시돌을 함유하 는 소프트 캡슐제에 dl-α-토코페롤과 디부틸히드록시톨루엔을 1 : 1 의 중량비로, 항산화제의 총량으로서 0.005% 이상 첨가함으로써, 알파칼시돌의 보존 안정성을 향상시키는 것이 가능하다는 보고 (일본 공개특허공보 평5-4925) 등이 있다. 그렇지만, 이들은 모두 비타민 D 류의 분해물의 생성을 억제할 수 있는지에 대해서는 언급하고 있지 않았다.

후생 노동성 발행의 가이드 라인 (ICH Harmonized Tripartite Guideline (Impurities in New Drug Products, Q3B(R), ICH Steering Committee, 2003)) 에 의하면, 제제 중에 있는 분해물의 함량이 1% 를 초과하는 경우에는 그 분해물의 안전성을 확인하는 것이 필수 조건으로 되어 있다. 따라서, 약물의 제제화시에는 제제 중의 각 분해물의 함량이 각각 1% 를 넘지 않은 것이 중요해진다.

따라서, ED-71 의 제제화시에도, 단지 유효 성분인 ED-71 의 보존 안정성을 향상시킬 뿐만 아니라, 주분해물의 생성을 억제하는 것도 실무 상 중요해진다.

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명은, ED-71 의 분해물의 생성을 억제할 수 있는 제제화 처방을 제공하는 것을 목적으로 한다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명자들은 상기 서술한 문제점을 해결하기 위해서 예의 검토를 거듭한 결과, ED-71 의 유지 중에서의 주분해물이 하기의 구조식으로 나타내는 ED-71 의 태키스테롤형 이성체 :

[화학식 1]

(6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올 : 이하, 「태키스테롤체」라고도 함) 및 하기의 구조식으로 나타내는 ED-71 의 트랜스체 :

[화학식 2]

((5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올) 인 것을 발견하였다. 그리고, ED-71 함유 유상 제제에 있어서, 항산화 물질을 첨가함으로써, 이들 분해물의 생성을 억제할 수 있는 것을 발견하여, 본 발명을 완성시켰다.

즉, 본 발명에 의하면, (1) (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,1 0-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올 ; (2) 유지 ; 및 (3) 항산화제를 함유하는 제제가 제공된다.

상기 제제에 있어서, (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의 분해물의 생성이 억제되는 것이 바람직하다. (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의 분해물은, 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올 및/또는 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이어도 된다. (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의 분해물이 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올 및 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올인 것이 바람직하다.

혹은, 상기 제제에 있어서 (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의, 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올 및/또는 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올로의 분해가 억제되는 것이 바람직하다.

상기 제제에 있어서, 항산화제가 dl-α-토코페롤, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 갈산프로필에서 선택되는 1종인 것이 바람직하고, dl-α-토코페롤인 것이 더욱 바람직하다.

상기 제제가 유상 제제인 것이 바람직하고, 소프트 캡슐제, 하드 캡슐제 또는 유상 액제 (특히, 소프트 캡슐제) 인 것이 바람직하다.

상기 제제에 있어서, (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이 유지에 대하여 0.000001～0.01중량% 함유되고, 항산화제가 유지에 대하여 0.0001～12중량% 함유되는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 별도의 측면에 의하면, ED-71 의 트랜스형 이성체인, (5E, 7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이 제공된다.

발명의 효과

본 발명의 ED-71 제제에 의해, ED-71 의 분해물의 생성을 억제할 수 있는 제제화 처방을 제공하는 것이 가능하다. 트랜스체는 ED-71 의 제제 분석에서의 표준품으로서도, 또한, 여러 가지 비타민 D 계 화합물의 합성 원료로서도 사용 가능하다.

도 1 은 40℃/75% RH 하에서 33일간 방치 후의 약액의 UV-HPLC 크로마토그래프 (265㎚) 를 도시한다.

도 2 는 40℃/75% RH 하에서 33일간 방치 후의 약액의 RI-HPLC 크로마토그래프를 도시한다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

이하, 본 발명의 보다 구체적인 양태 및 본 발명을 실시하기 위한 방법에 관하여 설명한다.

(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올(ED-71) 은 하기의 구조식으로 나타내는 화합물이다.

[화학식 3]

ED-71 은, 예컨대 일본 공개특허공보 평10-72432호에 기재된 방법에 따라서, (1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)콜레스타-5,7-디엔-1,3,25-트리올을 출발 물질로 하여, 자외선 조사 및 열이성화 반응 후, 역상 HPLC 로 정제하고, 농축 후, 아세트산에틸로 결정화시킴으로써 얻을 수 있다.

본 발명에 이용하는 「항산화제」로서는, 아질산염 (예컨대 아질산나트륨),아황산염 (예컨대, 아황산나트륨, 건조아황산나트륨, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨), 티오황산염 (예컨대, 티오황산나트륨), 알파티오글리세린, 1,3-부틸렌글리콜, 티오글리콜산 및 그의 염 (예컨대 티오글리콜산나트륨), 티오말산염 (예컨대 티오말산나트륨), 티오요소, 티오락트산, 에데트산염 (예컨대 에테트산나트륨), 디클로로이소시아눌산염 (예컨대 디클로로이소시아눌산칼륨), 시트르산, 시스테인 및 그 염 (예컨대 염산시스테인), 벤조트리아졸, 2-메르캅토벤즈이미다졸, 에리소르브산 및 그 염 (예컨대 에리소르브산나트륨), 아스코르브산 및 그 에스테르 화합물 (예컨대, L-아스코르브산스테아르산에스테르, 팔미트산아스코르브산), 인지질 (예컨대 대두 레시틴), 금속 킬레이트제 및 그의 염 (예컨대, 에틸렌디아민4아세트산, 에틸렌디아민4아세트산칼슘디소듐, 에틸렌디아민4아세트산디소듐), 타르타르산 및 그 염 (예컨대 로셀염), 폴리페롤류 (예컨대 카테킨), 글루타티온, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 갈산프로필, 천연 비타민 E, 아세트산 토코페롤, 농축 혼합 토코페롤, 토코페롤 동족체 (예컨대 d-α-토코페롤, dl-α-토코페롤, 5,8-디메틸토콜, 7,8-디메틸토콜, δ-메틸토콜, 5,7,8-트리메틸토코트리에놀, 5,8-디메틸토코트리에놀, 7,8-디메틸토코트리에놀, 8-메틸토코트리에놀) 등을 들 수 있고, 이들을 단독으로 혹은 2종 이상을 조합하여 이용할 수 있다. 그 중에서도, 아세트산토코페롤, 디부틸히드록시톨루엔, 천연 비타민 E, dl-α-토코페롤, d-α-토코페롤, 농축 혼합 토코페롤, 팔미트산아스코르브산, L-아스코르브산스테아르산에스테르, 부틸히드록시아니솔, 갈산프로필에서 선택되는 1종이 바람직하고, dl-α-토코페롤, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 갈산프로필에서 선택되는 1 종이 보다 바람직하며, dl-α-토코페롤이 특히 바람직하다.

본 발명에 이용되는 「유지」로서는, 중쇄 지방산 트리글리세라이드 (이하, 「MCT」라고도 함), 트리카프리린, 카프로산, 카프릴산, 카프르산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산, 식물유 등을 들 수 있다. 여기서, 식물유로서는, 야자유, 올리 브유, 채종유, 낙화생유, 옥수수유, 대두유, 면실유, 포도유, 홍화유 등을 들 수 있다. 이들 중에서, 불포화 지방산을 포함하고 있지 않은, MCT, 트리카프릴린, 카프로산, 카프릴산, 카프르산이 바람직하고, MCT 가 특히 바람직하다.

본 발명에 있어서「ED-71 의 분해물」이란, ED-71 을 유상 제제로서 보존했을 때에 검출되는 주요한 분해물을 말하고, 구체적으로는 ED-71 의 태키스테롤체 및 ED-71 의 트랜스체 등이다.

ED-71 의 태키스테롤체는 태키스테롤 골격을 갖는 하기의 구조식으로 나타내는 화합물이고, 그 화학명은 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올) 이다.

[화학식 4]

태키스테롤체는, 예컨대 일본 공개특허공보 평10-72432호에 기재된 방법에 따라서 합성할 수 있고, 혹은 다음의 방법으로도 합성할 수 있다. 즉, (1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-콜레스타-5,7-디엔-1,3,25-트리올을 출발 물질로 하고, 그 테트라히드로푸란 용액을 저온, 아르곤 분위기 하, 자외선 조사 후, 역상 HPLC 로 정제하고 농축 건고함으로써 태키스테롤체를 얻을 수 있다.

ED-71 의 트랜스체는 5-6위치의 2중 결합이 트랜스 배치인 하기의 구조식으로 나타내는 화합물이고, 그 화학명은 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이다.

[화학식 5]

상기 서술한 바와 같이, 약물의 제제화시에는, 유효 성분의 각 분해물의 함량이 각각 1% 를 넘지 않은 것이 중요해진다.

본 발명자들의 검토에 의하면, ED-71 을 MCT 에 용해한 용액을 소프트 캡슐에 내봉한 제제를 「실온」의 상한 온도인 30℃ 에서 12개월 저장한 경우, 태키스롤체 및 트랜스체의 생성량은 모두 1% 를 넘었기 때문에 (후기의 표 2～3 참조), ED-71 의 제제화시에는, 이들 주분해물의 생성을 억제하는 것이 필요하다. 즉, ED-71 제제의 실용화시에는, 단순히 ED-71 의 분해를 막을 뿐만 아니라, 특히, 태키스테롤체 및 트랜스체로의 분해를 막는 것이 중요하다.

태키스테롤체 및 트랜스체는 역상 액체 크로마토그래피에 의해 검출하고, 측정 파장 265㎚ 에서의 흡광도를 측정함으로써 이들의 존재를 확인할 수 있다.

ED-71 의 분해물의 생성이 억제되어 있는 상태로서는, 실온, 차광 하에서 12 개월 보존시의 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성량이 각각 1% 이하인 것이 바람직하고, 0.3% 이하인 것이 보다 바람직하며, 0.1% 이하인 것이 특히 바람직하다.

본 발명에 있어서「유상 제제」란, 약물을 유지에 용해한 용액을 경구 투여가 가능한 제형으로 제제화한 것을 말한다.

본 발명에 있어서 이용 가능한 유상 제제로서는, 소프트 캡슐제, 하드 캡슐제, 유상 액제 등을 들 수 있다.

소프트 캡슐제란, 젤라틴 등의 필름 형성 성분을 주성분으로 하는 피막에, 약물을 유지에 용해한 배합액을 봉입한 것을 말한다. 소프트 캡슐제의 제법은 적하법이나 로터리?다이법 등의 소프트 캡슐의 제조가 가능한 제법이면 어느 것을 사용해도 된다. 적하법이란, 캡슐의 심이 되는 물질을 캡슐의 피막이 되는 물질과 동시에 노즐로부터 냉각액 중으로 적하할 때, 계면 장력에 의해 이상 액류가 액적이 되고, 그것이 냉각되어 피막이 경화하여 캡슐이 되는 것을 이용한 방법이다. 로터리?다이법이란, 2 개의 서로 마주하여 회전하는 형성 롤러를 연속한 시트 (젤라틴 등의 겔 형성 성분을 함유하는 시트) 가 통과하고, 롤러에 의해서 시트로부터 캡슐 형성체가 눌려 빠지고, 동시에 충전물은 양쪽의 누름편 사이에 주입되며, 또한 누름편의 단부는 열작용에 의해 서로 용접되어 심 소프트 캡슐을 형성하는 방법이다. 비타민 D 류의 소프트 캡슐제 및 그 제조방법으로서는, 예컨대, 국제공개공보 WO01/15702호, 국제공개공보 WO02/13755호, 국제공개공보 WO03/094897호, 국제특허출원 PCT/JP03/07885호 등에 기재된 것을 들 수 있다.

하드 캡슐제란, 젤라틴 등의 필름 형성 성분을 주성분으로 하는 캡과 보디로 이루어지는 껍질 캡슐에 약물을 함유하는 용액을 충전하고, 용액이 새지 않도록 캡과 보디의 중합부에 젤라틴액 등을 도포하여 시일(seal)을 실시한 것이다.

소프트 캡슐제 및 하드 캡슐제의 피막은 필름 형성 성분, 가소제, 차광제 등으로 이루어지고 이들을 배합한 것이다.

필름 형성 성분에는, 각종 젤라틴 등의 동물 유래 성분이어도 되고, 각종 수용성 고분자 등의 비동물 유래 성분이어도 되고, 이들 성분을 임의의 비율로 1종 이상 배합하여 이용할 수 있다. 동물 유래 성분이란, 알칼리 처리 젤라틴, 산처리 젤라틴, 화학 수식 젤라틴 등을 들 수 있다. 화학 수식 젤라틴으로서는, 그 수식 양식은 특별히 한정되지 않지만, 젤라틴의 아미노기와 숙신산, 프탈산, 아세트산 등의 물질을 반응시켜 제조한 것을 이용할 수 있다. 화학 수식 젤라틴에 이용하는 젤라틴은 알칼리 처리 젤라틴이어도 되고 산처리 젤라틴이어도 된다. 비동물 유래 성분으로서는, 한천, 카라기닌, 알긴산 등의 해초로부터 추출되는 다당류, 로스트빈검, 구아검, 타마린드검, 카시아검, 타라빈검 등의 식물 종자에서 얻어지는 다당류, 아라비아검, 트래거캔스검, 아몬드검, 담슨검 등의 식물이 분비하는 다당류, 펙틴, 아라비노갈락탄, 글루코만난 등의 식물로부터 추출되는 다당류, 젤란검, 크산탄검, 풀루란, 덱스트란, 카드란 등의 미생물로부터 얻어지는 다당류, 결정 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카르복실메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 등 섬유소 점질물 등을 들 수 있다.

가소제로서는, 글리세린, 소르비톨, 말토오스, 글루코오스, 말티토오스, 자당, 자일리톨, 만니톨, 에리스리톨, 폴리에틸렌글리콜류 (분자량 400~6000) 등을 들 수 있고, 본 발명에서는 이들의 가소제를 1 종 이상 사용할 수 있다.

차광제로서는, 산화티탄, 32산화철 (벵가라), 황색 32산화철, 황산화철, 산화아연 등의 금속 산화물, 탤크, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 규산마그네슘, 경질 무수 규산 등의 무기 화합물, 카라멜, 식용 적색 3호 알루미늄레이크, 식용 황색 4호 알루미늄레이크, 식용 황색 5호 알루미늄레이크, 식용 녹색 3호 알루미늄레이크, 식용 청색 2호 알루미늄레이크, 동클로로피린나트륨 등의 식용 색소 등이고, 본 발명에서는 이들 비수용성 차광제를 1 종 이상 사용할 수 있다.

「유상 액제」란, 약품을 함유하는 유상 용액을 밀봉 용기 (예컨대, 유리 용기, 플라스틱 용기나 스틱 포장 용기 등) 에 충전한 것이다.

본 제제에 이용하는 유지의 양은 특별히 한정되지 않고, 캡슐제 (소프트 캡슐제, 하드 캡슐제) 에 대해서는 1 캡슐당 50～500㎎ 인 것이 바람직하고, 60～250㎎ 인 것이 특히 바람직하다. 유상 액제의 경우에 이용하는 유지의 양으로서는, 1 용기당 0.5～5g 인 것이 바람직하고, 1～3g 인 것이 특히 바람직하다.

제제 중에 포함되는 ED-71 함량은 특별히 한정되지 않고, 단위 제제당 ED-71량으로서 0.05～5㎍ 포함되어 있는 것이 바람직하고, 0.5～0.75㎍ 포함되어 있는 것이 특히 바람직하다. 이것을 유지 중 ED-71 농도로 환산하면, 캡슐제의 경우에는 0.00001중량% 이상이 바람직하고, 0.0002중량% 이상이 특히 바람직하며, 0.01 중량% 이하가 바람직하고, 0.00125중량% 이하가 특히 바람직하다. 유상 액제의 경우는 0.000001중량% 이상이 바람직하고, 0.000017중량% 이상이 특히 바람직하고, 0.001중량% 이하가 바람직하고, 0.000075중량% 이하인 것이 특히 바람직하다.

항산화제의 유지로의 배합량도 특별히 한정되지 않고, 항산화제로서 사용 가능한 최대 사용량 이하의 양 (예컨대, 의약품 첨가물 사전 (약사일보사, 2000) 에 기재되어 있는 승인 전례의 최대 사용량 이하, 식품 첨가물 공정서 (니혼 식품 첨가물협회, 1999) 에 기재되어 있는 사용 제한량 이하의 양 등) 을 통상 이용할 수 있다.

그 중에서도, dl-α-토코페롤에 대해서는, 캡슐제의 경우, 유지 중에 O.0001중량% 이상 포함되어 있는 것이 바람직하고, 0.002중량% 이상인 것이 보다 바람직하며, 0.01중량% 이상인 것이 특히 바람직하고, 12중량% 이하 포함되어 있는 것이 바람직하며, 1중량% 이하 인 것이 보다 바람직하고, O.1중량% 이하인 것이 특히 바람직하다. 유상 액제의 경우는, 유지 중에 O.0001중량% 이상 포함되어 있는 것이 바람직하고, 0.002중량% 이상인 것이 보다 바람직하고, 0.01중량% 이상인 것이 특히 바람직하고, 1.2중량% 이하 포함되어 있는 것이 바람직하고, 1중량% 이하인 것이 보다 바람직하고, O.1중량% 이하인 것이 특히 바람직하다. 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 갈산프로필 등에 관해서도 상기의 dl-α-토코페롤과 마찬가지이다.

한편, 본 출원이 주장하는 우선권의 기초가 되는 출원인 일본특허출원 2004-30702호의 개시는 모두 인용에 의해 본 명세서 중에 삽입된다.

실시예 1

이하에 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 전혀 이 것에 한정되지 않는다. 한편, 이하의 실시예에 있어서, ED-71 및 태키스테롤체는 일본 공개특허공보 평10-72432호에 기재된 방법에 의해 합성한 것을 이용하였다.

실시예 1 : 트랜스체 ((5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올) 의 합성 및 물성 데이터

(합성 및 정제 방법)

ED-71 500㎎ 을 질소 분위기 하에서 50㎖ 가지형 플라스크에 넣고, 여기에 액체 이산화유황 30㎖ 를 주입하고, 3시간 환류 (약 -15℃) 교반하였다. 이산화유황을 증류 제거하여, (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드로프로폭시)-6,19-술폰-9,10-세코콜레스타-5(10),7-디엔-1,3,25-트리올 (이하「이산화유황 부가체」라고 기재함) 을 담황색 고체로서 560㎎ 얻었다. 50 ㎖ 가지형 플라스크 안에 이산화유황 부가체 200㎎, 탄산수소나트륨 500㎎, 에탄올 20㎖ 를 첨가하고, 교반 하 210 분간 환류하였다. 냉각 후, 불용물을 여과 분별하여 용액을 농축 건고하였다. 농축 건조물을 에탄올 10㎖, 디에틸에테르 10㎖ 에 용해하고 여과 후 용액을 농축 건고하였다.

건고물을 역상계 분취 HPLC (장치 : 히타치제작소 제조, 컬럼, Kromasil ODS (KR100-7-C18, 250×20㎜I.D., Eka Chemicals 제조), 이동상 : 50%-아세토니트릴 수용액, 유속 : 9.99㎖ /min, 검출 : UV=220㎚ 및 265㎚) 에서 전개 처리하고, 54분 내지 68분의 용출 부분을 분취하였다. 분취액을 농축 건고하여 약 50㎎ 의 백색 고체를 얻었다. 얻어진 백색 고체는 소량의 에탄올과 아세트산에틸 O.5㎖ 을 이용하여 용해하고, -20℃ 설정의 냉동고 안에서 결정화하였다. 석출한 결정을 분리하여, 미량의 아세트산에틸로 세정하고, 건조하여 트랜스체 39㎎ (수율 22%) 을 얻었다.

(물성 데이터)

HPLC 순도: 99.6% (HPLC 조건 : Kromasil ODS 100-5C18, 5㎛, 4.6㎜I.D.×250㎜, 55% 아세토니트릴 수용액, 유속 0.9㎖/분, 220㎚, 1㎎ /㎖ 10㎕, 면적 측정 범위 4～30분).

UV(에탄올)(λmax) : 209.8㎚(ε12300),274.6㎚(ε23200).

실시예 2 : ED-71 함유 소프트 캡슐제에서의 주분해물의 동정

(방법)

트리튬 표식한 ED-71(2β-([3-³H]-3-히드록시프로필)-1α,3β-25-트리히드록 시콜레스타-5,7,10(19)-트리엔 (또는, (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-([3-³H]-3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이라고 표기함. 이하「³H-ED-71」이라고 기재함) 을 이용하고 (J.Labeled Cpd. Radiopharm. 42, 519-525(1999)), 이것을 미표식의 ED-71 과 함께 MCT 에 용해한다 (ED-71 농도: 1㎍/100㎎, ³H-ED-71 농도 : 1.38MBq/㎖). 이 약액을 빈 소프트 캡슐 (캡슐제 피는 젤라틴 47.67㎎, 글리세린 16.68㎎ 및 산화티탄 0.65㎎ 으로 이루어지는 것으로, 로터리?다이법에 의해 제조한 것) 에 주사 바늘 부착 시린지를 이용하여 충전하고 (0.08㎖/캡슐), 젤라틴으로 시일하여 40℃/75%RH, 차광 하에서 33일간 방치하였다. 약액 중에 생성한 분해물을 UV 및 RI 검출기를 장비한 HPLC (시마즈 제작소 제조) 에 의해 검출하였다.

HPLC 분석 조건

컬럼 : YMC-Pack ODS AM-303(250×4.6㎜, 5㎛), YMC 제조

이동상 : 아세토니트릴/물=1 : 1

유속 : 1.2㎖ /분

피크 검출 : UV 265㎚, RI

컬럼 온도 : 30℃

(결과)

40℃/75%RH 하에서 33일간 방치 후의 약액을 HPLC 에 의해 측정한 크로마토그램을, 각각 도 1 및 도 2 에 도시한다. RI 의 크로마토그램에는 ED-71 에 대 응하는 주된 피크 및 프리체(pre form)에 대응하는 17분 부근의 마이너 피크 이외에, 16분 부근과 24분 부근에도 각각 마이너 피크가 검출되었다. 이들 2종의 피크는 40℃/75% RH 에서 보존하기 전의 샘플에는 검출되지 않은 것, 및 RI-HPLC 에서 검출된 피크는 ³H-ED-71 유래의 피크이기 때문에, 이들 2 종의 성분이 ED-71 의 주분해물인 것이 시사되었다. 16분 부근에 용출한 피크는 태키스테롤체의 표준 용액을 동일 HPLC 조건에서 분석한 경우에 검출된 주피크의 용출 위치와 거의 일치하였기 때문에, 이 피크는 태키스테롤체 유래의 피크라고 생각된다. 또한, 24분 부근에 용출한 피크는 트랜스체의 표준 용액을 동일 HPLC 조건으로 분석한 경우에 검출된 주피크의 용출 위치와 거의 일치하였기 때문에, 이 피크는 트랜스체 유래의 피크라고 생각된다.

한편, ED-71 의 프리체 (화학명 : 6Z-(1R,2R,3R)-2-(3히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올) 는 ED-71 과, 유액 중, 수용액 중 또는 에탄올 등의 유기 용매 중에 있어서 평형 관계에 있는 이성체로서 존재하는 화합물이고 (일본 공개특허공보 평10-72432호), 하기의 구조식으로 표시된다.

[화학식 6]

[ED-71 의 프리체]

실시예 3

ED-71 함유 제제에서의 주분해물의 생성에 미치는 항산화제의 영향을 조사하기 위해서, ED-71 및 항산화제를 함유하는 MCT 용액을 충전한 소프트 캡슐제를 각종 조건으로 보존하고, 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성 거동을 평가하였다.

(처방)

표 1 에 피험 소프트 캡슐의 처방을 나타낸다. ED-71 은 MCT 에 대하여, 0.0001중량% 가 되도록 배합하였다. 항산화제로서는 dl-α-토코페롤 (와코쥰야쿠 공업 제조) 및 BHT (디부틸히드록시톨루엔) (와코쥰야쿠 공업 제조) 를 단독 또는 병용하여 이용하였다. 각 항산화제의 첨가량은 MCT 에 대하여 각각 0.02중량% 가 되도록 배합하였다. 항산화제를 함유하는 처방을 처방 1, 2, 3으로 하고, 항산화제를 함유하지 않은 처방을 대조 처방 1 로 하였다.

(소프트 캡슐 제법)

소프트 캡슐은 심리스 캡슐 충전기 (스페렉스, 프로인트 산업 제조) 를 이용하여 적하법으로 1 캡슐 당 약액 중량 및 피막 중량이 각각 100㎎ 및 65㎎ 가 되도록 제조하였다.

(보존 조건)

소프트 캡슐을 유리병에 약 100 캡슐씩 넣고, 마개를 밀봉한 상태 및 마개를 밀봉하지 않은 상태에서 30℃/60% RH, 차광 하에서 각각 12 개월간 저장하였다.

(태키스테롤체, 트랜스체의 확인법)

보존 기간 종료 후에 각 소프트 캡슐로부터 약액을 발취하고, 그 중 50㎕ 를 HPLC 분석에 제공하였다.

컬럼 : YMC-Pack ODS AM-303(250×4.6㎜, 5㎛), YMC 제조

이동상 : 아세토니트릴/물=1 : 1

유속 : 1.2㎖ /분

검출 파장 : 265㎚

컬럼 온도 : 30℃

검출 피크 에리어의 총합에 대한 태키스테롤체 또는 트랜스체의 피크 면적비를 산출하여 생성량의 지표로서 이용하였다.

(ED-71 함량의 측정법)

ED-71 함량을 이하에 나타내는 HPLC 법에 의해 측정하고, 보존 기간 종료 후의 잔존율을 구하였다.

?내부 표준 용액의 조제법:

4-히드록시벤조산헵틸 약 2㎎ 을 정밀하게 측량하고, 에탄올을 첨가하여 정확히 100㎖ 로 하였다. 이 용액을 에탄올에 의해 10배로 희석한 것을 내부 표준 용액으로 하였다.

?표준 용액의 조제법:

ED-71 표준품 약 2㎎ 을 정확하게 측량하고, 에탄올을 첨가하여 정확히 200㎖ 로 하였다. 이 용액 2.5㎖ 를 정확히 취하고 에탄올을 첨가하여 정확히 20㎖ 로 한 것을 표준 원액으로 하였다.

MCT 약 300㎎ 을 10㎖ 가지형 플라스크에 넣고, 표준 원액 2㎖ 및 내부 표준 용액 2㎖ 를 첨가하였다. 이것을 실온에서 증발기로 10분간 이상 감압 건조하여 잔류한 MCT 용액을 표준 용액으로 하였다.

?시료 용액의 조제법:

캡슐로부터 약액을 발취하고, 그 중 약 300㎎ 을 정확하게 10㎖ 가지형 플라스크에 측량하였다. 이것에 내부 표준 용액을 정확히 2㎖ 첨가한 후, 실온에서 증발기로 10분간 감압 건조하여 잔류한 MCT 용액을 시료 용액으로 하였다.

?HPLC 분석 조건:

시료 용액 및 표준 용액 50㎕ 를 하기의 조건으로 컬럼 스위칭 방식의 HPLC 분석에 제공하였다.

컬럼 : YMC-Pack ODS AM-303(250×4.6㎜, 5㎛), YMC 제조

이동상 : (프리 컬럼) A 액에 아세토니트릴?수혼합액 (1 : 1), B 액에 아세토니트릴을 이용하여 글라디엔트에 의해 MCT 를 용출한다.

(분석 컬럼) :아세토니트릴?수혼합액 (1 : 1)

유속 : 1.2㎖ /분

검출 파장 : 265㎚

컬럼 온도 : 23℃

(결과)

HPLC 에 의한, 태키스테롤체, 트랜스체, ED-71 의 검출 결과를 표 2～4 에 나타낸다.

n=1, N.D<0.1%

n=1, N.D<0.1%

n=1

표 2～3 에서 알 수 있듯이, 개방 상태에서 12 개월 보존시의 대조 처방 제제에서의 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성량은, 피크 면적비로서 각각 1.741% 및 2.06% 이었던 것에 반하여, 처방 2, 3 에서는 모두 검출 한계 이하 (0.1%) 로 까지 억제되어 있었다. 표 4 에서 알 수 있듯이, 처방 1, 2, 3 쪽이 대조 처방과 비교하여 ED-71 의 잔존율도 높았다. 이상의 결과로부터, 항산화제를 첨가한 처방 1, 2, 3 에서는 모두 대조 처방과 비교하여, 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성이 억제되어 있는 것이 표시되었다.

실시예 4 :

ED-71 함유 제제에서의 주분해물의 생성에 미치는 항산화제의 첨가량의 영향을 조사하기 위해서, dl-α-토코페롤의 첨가량이 상이한 ED-71 함유 MCT 용액을 충전한 소프트 캡슐을 각종 조건으로 보존하고, 태키스테롤체, 트랜스체의 생성 거동을 평가하였다.

(처방)

표 5 에 피검 소프트 캡슐의 처방을 나타낸다. ED-71 은 MCT 에 대하여, 0.001중량% 가 되도록 배합하였다. 항산화제로서는, dl-α-토코페롤 (에이자이 제조) 를 이용하고, MCT 에 대하여 0.002%, 0.005%, 0.01%, 0.02% 및 0.04중량% 가 되도록 배합하였다 (각각, 처방 4, 5, 6, 7, 8). dl-α-토코페롤을 함유하지 않은 처방을 대조 처방 2 로 하였다.

(소프트 캡슐 제법)

소프트 캡슐은 심리스 캡슐 충전기 (스페렉스, 프로인트 산업 제조) 를 이용하여 적하법으로, 1 캡슐당 약액 중량 및 피막 중량이 각각, 100㎎ 및 65㎎ 가 되도록 제조하였다.

(보존 조건과 태키스테롤체, 트랜스체의 확인법)

소프트 캡슐을 유리병에 약 100캡슐씩 넣고, 마개로 밀봉한 상태에서 40℃, 차광 하에서 3 개월간 보존하였다. 보존 기간 종료 후에 각 소프트 캡슐로부터 약액을 발취하고, 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성량을 실시예 3 에 기재된 방법으로 측정하였다.

(결과)

HPLC 에 의한 태키스테롤체, 트랜스체의 검출 결과를 표 6, 7 에 나타낸다.

괄호 내는 dl-α-토코페롤 첨가량

n=1, N.D.<0.1%

괄호 내는 dl-α-토코페롤 첨가량

n=1, N.D.<0.1%

표 6, 7 에서 알 수 있듯이, dl-α-토코페롤 첨가량이 0.002중량% 인 경우라도, 대조 처방과 비교하여 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성 억제 효과가 인정되었다. 태키스테롤체에 대해서는, dl-α-토코페롤 첨가량 의존적인 생성 억제 효과가 인정되었다. 한편, 트랜스체의 생성 억제 효과는 dl-α-토코페롤의 첨가량이 O.01% 이상인 영역에서는 모든 첨가량에 있어서도 트랜스체의 생성량은 0.1% 이하였다. 이상의 결과로부터, dl-α-토코페롤은 ED-71 주분해물의 생성을 농도 의존적으로 억제하고, dl-α-토코페롤 첨가량 0.002중량% 에 있어서도 현저한 주분해물 생성 억제 효과를 갖는 것이 표시되었다.

실시예 5

ED-71 함유 제제에서의 주분해물의 생성에 미치는 각종 항산화제의 효과를 평가하기 위해서, ED-71 함유 MCT 용액에 각종 항산화제를 첨가하고, 50℃ 하에서 1개월 보존하여 태키스테롤체, 트랜스체의 생성 거동을 평가하였다.

(처방)

ED-71 은 MCT 에 대하여, 0.0017중량% 가 되도록 배합하였다. 항산화제로서는, dl-α-토코페롤 (와코쥰야쿠 공업 제조), 디부틸히드록시톨루엔 (와코쥰야쿠 공업 제조), 부틸히드록시아니솔 (와코쥰야쿠 공업 제조), 갈산프로필 (와코쥰야쿠 공업 제조) 을 각각 단독으로 사용하였다. 각 항산화제의 첨가량은 MCT 에 대하여 0.2중량% 가 되도록 배합하였다. 항산화제를 함유하는 처방을 처방 9, 10, 11, 12 로 하고, 항산화제를 함유하지 않은 처방을 대조 처방 3 으로 하였다.

(보존 조건과 태키스테롤체, 트랜스체의 확인법)

상기 처방 9～12 의 각 약액의 약 1g 을 각각 스피츠관에 넣고, 마개로 밀봉하고, 50℃, 차광 하에서 1 개월간 보존하였다. 보존 기간 종료 후에, 각 약액 중의 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성량을 실시예 3 에 기재된 방법으로 측정하였다.

(결과)

HPLC 에 의한 태키스테롤체, 트랜스체의 검출 결과를 표 8 에 나타낸다.

n=1, N.D.<0.1%

표 8 에서 알 수 있듯이, 어떤 항산화제를 사용한 경우에도 태키스테롤체 및 트랜스체의 생성은 현저히 억제되었다.

실시예 6 :

피험 캡슐을 하기 처방의 소프트 캡슐로 한 것 이외에는 실시예 4 기재의 방법에 따라서, ED-71 함유 제제를 작성하여 태키스테롤체, 트랜스체의 생성 거동을 평가하였다. 어떤 처방에 있어서도 태키스테롤체, 트랜스체의 생성이 억제되어 있었다.

본 발명의 ED-71 제제에 의해, ED-71 의 분해물의 생성을 억제할 수 있는 제제화 처방을 제공하는 것이 가능하다. 트랜스체는 ED-71 의 제제 분석에 있어서의 표준품으로서 유용하고, 또한, 여러 가지 비타민 D 계 화합물의 합성 원료로서도 유용하다.

Claims

(1) (5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(

19)-트리엔-1,3,25-트리올

(2) 유지, 및

(3) dl-α-토코페롤, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 및 갈산프로필에서 선택되는 1종인 항산화제를 함유하는 제제로서,

(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의, 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올, (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올 또는 양자 모두로의 분해가 억제된 제제.
삭제
삭제
삭제
제 1 항에 있어서,

(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올의 분해물이, 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올 및 (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올인 제제.
삭제
제 1 항 또는 제 5 항에 있어서,

소프트 캡슐제, 하드 캡슐제 또는 유상 액제인 제제.
제 7 항에 있어서,

소프트 캡슐제인 제제.
제 1 항 또는 제 5 항에 있어서,

(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올이 유지에 대하여 0.000001～0.01중량% 함유되고, 항산화제가 유지에 대하여 0.0001～12중량% 함유되는 제제.
(5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올.
(5Z,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올(ED-71) 함유 유상 제제에, dl-α-토코페롤, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, 및 갈산프로필에서 선택되는 항산화제를 첨가하는 것을 포함하는, 상기 유상 제제에 있어서 차광 하에서, ED-71 의 분해물인 6E-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5(10),6,8(9)-트리엔-1,3,25-트리올, (5E,7E)-(1R,2R,3R)-2-(3-히드록시프로폭시)-9,10-세코콜레스타-5,7,10(19)-트리엔-1,3,25-트리올 또는 양자 모두의 생성을 억제하는 방법.
제 11 항에 있어서, 30℃ 에서 12 개월 보존시 상기 제제 중 상기 분해물의 생성량을 각각 1% 이하로 억제하는 방법.