JPH1072432A

JPH1072432A - ビタミンｄ誘導体結晶およびその製造方法

Info

Publication number: JPH1072432A
Application number: JP15514097A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Yamauchi; 剛山内
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-07-01
Filing date: 1997-06-12
Publication date: 1998-03-17
Anticipated expiration: 2017-06-12
Also published as: JP3429432B2

Abstract

(57)【要約】【課題】ビタミンＤ誘導体、特にはＥＤ−７１の高純
度精製物を大量的かつ安定的に供給するための方法を確
立すること。【解決手段】本発明により、式（Ｉ）：【化１】で表される化合物の結晶；ビタミンＤ誘導体の未精製物
または粗精製物を逆相系クロマトグラフィーで精製した
後、有機溶媒で結晶化させて得られるビタミンＤ誘導体
の結晶；ビタミンＤ誘導体の合成中に生成する新規な副
生物；並びに、ビタミンＤ誘導体またはその前駆体の精
製方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なビタミンＤ
誘導体結晶、より詳細には、逆相系クロマトグラフィー
で精製したビタミンＤ誘導体を有機溶媒で結晶化させて
得られる新規なビタミンＤ誘導体結晶に関する。本発明
はまた、結晶化工程を含むビタミンＤ誘導体の精製方法
に関する。

【０００２】

【従来技術】各種のビタミンＤ誘導体は有用な生理活性
を有することが知られている。例えば、特公平６−２３
１８５号には、下記一般式：

【化１２】［式中、Ｒ₁はアミノ基又は式ＯＲ’（Ｒ’は水酸基、
ハロゲン原子、シアノ基、アシルアミノ基で置換されて
いるか若しくは非置換の炭素数１〜７の低級アルキル基
である）を意味し、Ｒ₂は水素原子又は水酸基を意味す
る］で示される１α−ヒドロキシビタミンＤ₃誘導体が
記載されており、この誘導体がカルシウム代謝異常に基
づく疾患の治療薬または抗腫瘍剤として有用であること
が記載されている。また、上記一般式に属する化合物の
１つである１α，２５−ジヒドロキシ−２β−（３−ヒ
ドロキシプロポキシ）ビタミンＤ₃（ＥＤ−７１とも称
される）は骨形成作用を有する活性型ビタミンＤ誘導体
であり、骨粗鬆症治療剤として開発が進められている。

【０００３】その一方で、活性化合物の治療用原体の製
造においては、より高品質の原体を大量に安定的に製造
する必要があり、そのためにできるだけ早い段階で原体
の製造方法を確立することが要求されている。特に、Ｅ
Ｄ−７１は従来アモルファスの形態でしか得られておら
ず、結晶の形態で得たという報告はない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ビタ
ミンＤ誘導体、特にはＥＤ−７１の高純度精製物を大量
的かつ安定的に供給するための方法を確立することであ
る。本発明の一つの目的は、未精製物または粗精製物を
精製して得たビタミンＤ誘導体結晶を提供することであ
る。本発明の別の目的は、結晶化工程を含むビタミンＤ
誘導体の精製方法を提供することである。本発明の別の
目的は、結晶化工程を含むＥＤ−７１のプレ体化合物の
精製方法、並びに当該方法により得られた精製されたプ
レ体化合物を提供することである。本発明のさらに別の
目的は、ビタミンＤ誘導体の合成および精製中に副生す
る新規化合物を提供することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、（１）Ｅ
Ｄ−７１のＨＰＬＣ分取精製におけるプロビタミンＤ誘
導体（プロ体）中の不純物の影響；（２）プレビタミン
Ｄ誘導体（プレ体）及びＥＤ−７１の熱、光、酸素によ
る安定性；および（３）微量高生理活性物質であるＥＤ
−７１の取扱い；および（４）結晶化による精製の可能
性といった観点に留意して、プロ体からＥＤ−７１まで
の合成精製工程を鋭意研究した。その結果、メタノール
で再結晶したプロ体を使用し、低温で光反応を行い、熱
異性化反応後、逆相系ＨＰＬＣで精製し、濃縮し、酢酸
エチルで結晶化することにより、ＥＤ−７１結晶をグラ
ムオーダーで得ることに成功し、本発明を完成するに至
った。また、本発明者らは、プロ体中および光反応での
副生物の構造を解明し、新規な化合物をも同定した。

【０００６】すなわち、本発明の一側面によれば、式
（Ｉ）：

【化１３】で表される化合物の結晶が提供される。本発明の別の側
面によれば、ビタミンＤ誘導体の未精製物または粗精製
物を、逆相系クロマトグラフィーで精製した後、有機溶
媒で結晶化させて得られるビタミンＤ誘導体の結晶が提
供される。本発明のさらに別の側面によれば、逆相系ク
ロマトグラフィーによるビタミンＤ誘導体の精製方法が
提供される。本発明のさらに別の側面によれば、有機溶
媒で結晶化することによるビタミンＤ誘導体の精製方法
が提供される。

【０００７】本発明のさらに別の側面によれば、ビタミ
ンＤ誘導体の未精製物または粗精製物を、逆相系クロマ
トグラフィーで精製した後、有機溶媒で結晶化させるビ
タミンＤ誘導体の精製方法が提供される。本発明のさら
に別の側面によれば、式（II）：

【化１４】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶する式（II）で表される化合物の精製方法が
提供される。本発明のさらに別の側面によれば、式（I
I）：

【化１５】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶して得られる精製された式（II）で表される
化合物が提供される。

【０００８】本発明のさらに別の側面によれば、式（I
I）：

【化１６】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶することによって得た精製された式（II）の
化合物を、紫外線照射および熱異性化反応に付して式
（Ｉ）：

【化１７】のビタミンＤ誘導体を得；次いで、上記で得た未精製ま
たは粗精製のビタミンＤ誘導体を、逆相系クロマトグラ
フィーで精製した後、有機溶媒で結晶化させることを含
む精製ビタミンＤ誘導体の製造方法が提供される。

【０００９】本発明のさらに別の側面によれば、式（II
I）：

【化１８】で表される化合物、並びに、式（IV）：

【化１９】で表される化合物が提供される。これらの化合物は、Ｅ
Ｄ−７１のプロ体を紫外線照射および熱異性化反応に付
した後の反応液中に存在する化合物である。

【００１０】

【発明の実施の形態】本明細書中、ビタミンＤ誘導体と
は、部分構造として、式（Ｖ）：

【化２０】を有するものを意味する。ビタミンＤ誘導体は好ましく
は、式（VIA）、（VIB）および（VIC）：

【化２１】［式中、Ｒ₁は、（１）アミノ基；（２）−ＯＲ₅（Ｒ₅
は低級アルキル基、低級アルケニル基、低級アルキニル
基であり、これらは各々水酸基、ハロゲン原子、シアノ
基、アミノ基、アシルアミノ基、低級アルコキシ基で置
換されていてもよい）；あるいは（３）低級アルキル
基、低級アルケニル基または低級アルキニル基であり、
これらは各々、水酸基、ハロゲン原子、シアノ基、アミ
ノ基、アシルアミノ基、低級アルコキシ基で置換されて
いてもよい；を示し、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は炭素数１か
ら１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基
または炭素数２から１０のアルキニル基を示し、これら
は各々１以上の水酸基で置換されていてもよく、Ａは硫
黄原子または酸素原子を示す］で表される誘導体であ
る。なお、上記定義中の「低級」なる用語は、アルキル
基に用いる場合には例えば炭素数１から７のアルキル基
を示すために用いられ、アルケニル基およびアルキニル
基に用いる場合には例えば炭素数２から７のアルケニル
基を示すために用いられ、アルコキシ基に用いる場合に
は、例えば炭素数１から７のアルコキシ基を示すために
用いられる。

【００１１】ビタミンＤ誘導体はさらに好ましくは、１
α−ヒドロキシビタミンＤ₃、１α，２５−ジヒドロキ
シビタミンＤ₃、２４，２５−ジヒドロキシビタミン
Ｄ₃、または以下の式（VIIA）または（VIIB)：

【化２２】（式中、ｎは１から７の整数を示す）または以下の式
（VIIIA）または（VIIIB）：

【化２３】（式中、Ａは硫黄原子又は酸素原子を示す）で表される
誘導体である。

【００１２】ビタミンＤ誘導体は特に好ましくは、式
（VIIA）：

【化２４】（式中、ｎは１から７の整数を示す）で表される誘導体
である。最も好ましいビタミンＤ誘導体は、式（IX）：

【化２５】で表されるビタミンＤ誘導体、即ちＥＤ−７１と称され
るものである。

【００１３】本明細書中において、「結晶」という用語
はその最も広い意味において用いられ、結晶形態、結晶
系などは特に限定されないものとする。

【００１４】本発明の最も好ましいビタミンＤ誘導体で
あるＥＤ−７１の結晶体は、上記の通り、その性質は特
に限定されるものではないが、特に好ましくは以下の条
件を充足するものである。（１）性状（外観）：肉眼および蛍光顕微鏡により観察
し白色の結晶性の粉末。（２）溶状：１ｍｇ／ｍＬエタノールで透明溶液とな
る。（３）確認：ＩＲ法またはＮＭＲ法で構造を支持する。（４）融点：ＤＳＣで測定して１３０℃以上を示す。（５）吸光係数：４０μｇ／ｍＬエタノールで２６５ｎ
ｍのεを測定し、１６０００以上を示す。（６）ＨＰＬＣ純度：ＨＰＬＣ（DIACHROMA ODS N-20
５μｍ４．６×２５０ｍｍ、４５％アセトニトリル−
水、流速１ｍＬ／分、２２０ｎｍ、１ｍｇ／ｍＬ１０μ
Ｌ、４−９０分）のピーク面積が９７％以上である。

【００１５】本発明の一側面によれば、ビタミンＤ誘導
体の未精製物または粗精製物を、逆相系クロマトグラフ
ィーで精製した後、有機溶媒で結晶化させて得られるビ
タミンＤ誘導体の結晶、並びに、逆相系クロマトグラフ
ィーおよび／または有機溶媒を用いる結晶化によるビタ
ミンＤ誘導体の精製方法が提供される。

【００１６】本明細書中において、「未精製物または粗
精製物」とは、ビタミンＤ誘導体の合成反応直後の未精
製のままの生成物、または慣用な精製方法で粗精製した
後のビタミンＤ誘導体生成物を意味し、それらは通常ア
モルファス形態で存在している。

【００１７】本明細書中においては、「逆相系クロマト
グラフィー」とは、通常の意味と同じように、固定相の
方が移動相より極性の小さい系でのクロマトグラフィー
を意味する。逆相系クロマトグラフィーは高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）で行うのが好ましい。目的
とする物質を効率よく分離するためには分離溶剤、充て
ん剤の種類およびカラムへの負荷量を適宜選択すること
が必要である。

【００１８】分離溶剤の例としては、アセトニトリル／
水系およびメタノール／アセトニトリル／水系などが挙
げられるがこれらに限定されるものではない。また、上
記の溶剤を用いる場合の混合比率は、精製目的物の種
類、充填剤の種類などに応じて最適な比率を選択すれば
よく、特には限定されない。それらの比率は、一般的に
は、アセトニトリル２０〜６０重量部、メタノール０〜
４０重量部、そして水０〜８０重量部である。充てん剤
の種類は、粒径、ポアーサイズなどを指標にして、使用
するカラムあるいは精製目的物との適合性などを考慮し
て適宜選択することができる。カラム負荷量はカラムの
内径などに応じて調節することが必要であるが、例えば
内径５０ｍｍの場合には、２５μｇから１０ｇ程度、好
ましくは２５μｇから３ｇ程度負荷することができる。

【００１９】上記のクロマトグラフィーで得た画分は結
晶化に先立って、単離することが必要である。単離法と
しては、エバポレーターによる濃縮、凍結乾燥、抽出
法、濾過法などが挙げられる。上記を含む単離法の中か
ら目的精製物の性質などを考慮して適当なものを適宜選
択すればよい。例えばＥＤ−７１を精製する場合にはエ
バポレーターによる濃縮が操作上利点が大きく、再現性
があり、またＥＤ−７１が分解しないという理由により
好都合である。

【００２０】ビタミンＤ誘導体の結晶化のために用いる
有機溶媒は、好ましくは、非プロトン性有機溶媒であ
る。非プロトン性有機溶媒の例としては、酢酸エチルな
どのエステル類、アセトンなどのケトン類、ジエチルエ
ーテル、ジイソプロピルエーテルなどのエーテル類、あ
るいはアセトニトリル、またはこれらの混合溶媒などが
挙げられ、特に好ましい有機溶媒は、酢酸エチル、アセ
トンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶媒で
ある。晶析条件は、目的精製物および晶析溶媒に応じて
適宜選択する必要があり、一般的には、粗ビタミンＤ誘
導体に対して、１倍から１００倍、好ましくは５倍から
１０倍の溶媒を加えて、３０℃以下、好ましくは−１０
℃以下で晶析させる。

【００２１】本発明の一側面によれば、式（II）：

【化２６】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶する上記化合物の精製方法、並びに当該精製
方法により得られた式（II）で表される化合物が提供さ
れる。上記の再結晶のために用いられるアルコールは、
メタノールである。

【００２２】上記のようにアルコールでの再結晶により
精製された式（II）で表される化合物の性質は、特に限
定されるものではないが、特に好ましくは以下の条件を
充足するものである。（１）性状（外観）：肉眼および蛍光顕微鏡により観察
し白色から黄色の結晶性の粉末。（２）溶状：２ｍｇ／ｍＬエタノールで白色から黄色の
透明溶液となる。（３）確認：ＩＲ法およびＮＭＲ法で構造を支持する。（４）水分：カールフィッシャー法でサンプル量１００
ｍｇ使用し、３．０％以下である。

【００２３】（５）吸光係数：１００μｇ／ｍＬエタノ
ールで２８２ｎｍのεを測定し、１００００以上を示
す。（６）ＨＰＬＣ純度：ＨＰＬＣ（DIACHROMA ODS N-20
５μｍ４．６×２５０ｍｍ、５５％アセトニトリル−
水、流速１ｍＬ／分、２２０ｎｍ、１ｍｇ／ｍＬ１０μ
Ｌ、４−７０分）のピークでの面積が８５％以上で、プ
ロ体化合物とｕｎＰ₄間に明暸なピークがない。（７）含量：ＨＰＬＣ（YMC Pack ODS A-303 ５μｍ
４．６×２５０ｍｍ、５５％アセトニトリル−水、流速
１ｍＬ／分、２２０ｎｍ、内部標準法）で８５％以上で
ある。以下において本発明を実施例により説明するが、本発明
は実施例によって限定されるものではない。

【００２４】

【実施例】

実施例１：２β−（３’−ヒドロキシプロポキシ）−
５，７−コレスタジエン−１α，３β−トリオール（プ
ロ体）の合成および精製

【化２７】エポキシ化合物１（１．００ｇ，２．４１ｍｍｏｌ）、
ｔｅｒｔ−ブトキシカリウム（０．７５ｇ，６．６８ｍ
ｍｏｌ）および１，３−プロパンジオール（２０ｍｌ）
の混合物を室温で１０分間撹拌後、内温９５℃で５．０
時間撹拌した。飽和アンモニア水（４０ｍｌ）に撹拌し
つつ反応液を添加した。室温（２５〜３５℃）で１０分
間撹拌後、結晶を濾取し、蒸留水（２０ｍｌ）で３回洗
浄した。得られた含水粗結晶（６．３ｇ）をアセトニト
リル（２０ｍｌ）中で室温下（２７〜２２℃）、１時間
撹拌した。結晶を濾取し、アセトニトリル（５ｍｌ）で
２回洗浄し、乾燥することによりプロ体化合物２（０．
９６ｇ、収率８１％）を得た。

【００２５】上記方法により得たプロ体化合物２（２
９．０ｇ）を予めアルゴンガスで通気したメタノール２
９０ｍｌに加熱溶解し、桐山濾紙(No.4)で温時濾過し、
室温まで冷却後、種晶を加え結晶を析出した。−１０℃
以下に冷却の後、結晶を濾取し、冷却したメタノール２
９ｍｌで２回洗浄した。室温で減圧乾燥することにより
精製プロ体２２．９ｇ（回収率７９．１％，Ｎｅｔ回収
率９２．１％）を得た。この精製プロ体の物性データは
以下の通りであった。

【００２６】ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）およびＩＲ（ＫＢ
ｒ）：構造を支持ＴＬＣ（ＣＨ₂Ｃｌ₂：エタノール＝９：１）：１スポッ
ト（Ｒｆ０．５）ＨＰＬＣ純度（２２０ｎｍ）：９８．７％含量：９７．１％（内部標準法）ＤＳＣ：ピークｍｉｎ；９５．６℃、１６３．２℃、ピ
ークｍａｘ；１２０．２℃

【００２７】実施例２：（１Ｒ，２Ｒ）−１，２５−ジ
ヒドロキシ−２−（３’−ヒドロキシプロポキシ）−コ
レカルシフェロール；２β−（３’−ヒドロキシプロポ
キシ）−（１α，３β，５Ｚ，７Ｅ）−９，１０−セコ
コレスタ−５，７，１０（１９）−トリエン−１，３，
２５−トリオール（ＥＤ−７１）の合成および精製

【化２８】

【００２８】１Ｌ容器中で、実施例１で得た精製プロ体
化合物２（６．０２ｇ）をＴＨＦ（１Ｌ）に溶解し、ア
ルゴン脱気下、冷却状態（内温−１３℃以下）で４００
Ｗ高圧水銀灯（Ｖｙｃｏｒフィルター使用）により１５
０分間紫外線照射した。反応液を室温に戻し、ＴＨＦ
（１００ｍＬ）で共洗しつつ２Ｌ茄子型フラスコに移
し、１８０分間加熱還流した。反応液を濃縮後、メタノ
ール（８０ｍＬ）に溶解し分離サンプルとした。分離サ
ンプル２０ｍＬ（Ｐｒｏ体換算１．５ｇ量）を、分取用
カラムクロマト装置（内径５０×長さ３００ｍｍ；充て
ん剤名ＤＩＡＣＨＲＯＭＡＯＤＳＮ−２０、三菱加
工機から入手；粒径５μｍ）に全量ポンプ注入した。４
５％アセトニトリル水溶液（６０ｍｌ／分）で展開し、
ＵＶ（２２０，３０５ｎｍ）でモニターしてＥＤ−７
１の分画を約２．４Ｌ（約１３０〜１７０分）を得た。
同様の操作を３回繰り返し、計４回分のＥＤ−７１の分
取分画約９Ｌを１０Ｌエバポレータで濃縮した。残査を
エタノールに溶解し、再度濃縮乾固した。濃縮残査に酢
酸エチル（２０ｍｌ）を加えて溶解し、室温撹拌下、結
晶を析出させ、更に−１０℃以下に冷却し、１５分間撹
拌した。結晶を濾取し、冷却した酢酸エチル（６ｍｌ）
で３回洗浄後、室温で一晩減圧乾燥し、ＥＤ−７１
（２．１７ｇ；収率３６．１％）を得た。

【００２９】ＨＰＬＣ純度：９９．８％（２２０ｎ
ｍ），９９．９％（２６５ｎｍ）ＵＶ（エタノール）：λｍａｘ２６５．４ｎｍ（ε１
７１００）ＤＳＣ：１３５．３℃（ピークｍｉｎ），１２２ｍＪ／
ｍｇ残存溶剤（ＧＣ法）：１．２４％（酢酸エチル）、０．
２４％（エタノール）ＩＲ（ｃｍ^-1）： 3533, 3417, 3336, 2943, 2918, 286
2, 1649, 1470, 1444,1416, 1381, 1377, 1342, 1232,
1113, 1078, 1072, 1045,999, 974, 957, 955, 924, 91
0, 895, 868, 833, 796, 764,663, 634, 594, 472

【００３０】実施例３：関連化合物物性データ光、熱異性化反応時に得られる類縁物質の一部を単離し
構造決定および物性データを収得した。実施例１および
２で得られたプロ体およびＥＤ−７１の物性データに関
しても詳細に測定した。なお、記載した物性データは再
結晶等によって精製したサンプルのものである。融点は
未補正である。ＩＲスペクトルはＫＢｒ錠剤法でＪＥＯ
ＬＪＩＲ−６０００にて測定した。¹H-NMR、¹³C-NMR
スペクトルはＴＭＳを内部標準、又はＣＨＣｌ_３のピー
クを基準としＪＥＯＬＪＮＭ−２７０ＥＸを用いて測
定した。ＵＶは溶媒にエタノールを使用し室温条件でＨ
ＩＴＡＣＨＩＵ−３２１０にて測定した。

【００３１】プロ体（実施例１で得たもの)の物性デー
タ¹ H-NMR(ppm): 0.63(3H,s), 0.96(3H, d, J^20-21 = 6.3H
z), 1.07(3H, s),1.22 (6H, s), 3.6-4.0(7H, m), 5.36
-5.40(1H, m),5.70-5.73(1H, m)¹³ C-NMR(ppm): 141.1, 136.6, 120.8, 115.1, 82.2, 7
1.0, 70.9, 68.3,66.7, 59.8, 55.7, 54.4, 44.1, 42.
9, 41.3, 39.0, 38.3,36.3, 36.0, 34.6, 32.0, 28.8,
28.7, 27.9, 22.9, 20.7,20.5, 18.6, 15.8, 11.7 UV;λmax(ε): 294.2nm(6550), 282.2nm(11300), 271.9
nm(10500),204.7nm(2420) IR(cm^-1): 3385, 2941, 2872, 1471, 1468, 1381, 137
9, 1327, 1138, 1082,1080,1053

【００３２】ＥＤ−７１の物性データ¹ Ｈ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）：6.37(1H, d; 11.4Hz), 6.05(1
H, d; 11.4Hz), 5.50(1H, t; 2.1Hz),5.08(1H, t; 2.1H
z), 4.32(1H, d; 8.9Hz), 4.26(1H, m), 3.88-3.96(1H,
m),3.85(2H, t; 5.7Hz), 3.69-3.77(1H, m), 3.27(1H,
dd; 9.0Hz, 2.8Hz),2.78- 2.83(1H, m), 2.55(1H, dd;
10.6Hz, 4.0Hz), 2.42(1H, bd; 13.6Hz),1.8-2.1(5H,
m), 1.22(6H, s), 1.2-1.7(11H, m), 0.94(3H, d; 6.3H
z),0.9-1.1(1H, m), 0.55(3H, s)

【００３３】¹³Ｃ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）：144.2, 143.0,
132.2, 124.9, 117.2, 111.8, 85.4, 71.6, 71.1, 68.
3,66.6, 61.1, 56.6, 56.4, 45.9, 44.4, 40.5, 36.4,
36.1, 31.9, 29.3,29.2, 29.1, 27.7, 23.7, 22.4, 20.
8, 18.8, 11.9 ＵＶ（λｍａｘ）：２６５．４ｎｍ（ε１７９００）融点：１３４．８〜１３５．８℃（１℃／分），ＤＳＣ：１３７℃（ピークｍｉｎ，１１５ｍＪ／ｍ
ｇ），ＴＧ／ＤＴＡ：１３８℃（ピークｍｉｎ，溶解時乾燥減
量約１％，１．９６ｍｇ使用) ＩＲ（ｃｍ^-1）：3533, 3417, 3336, 2943, 2918, 286
2, 1649, 1470, 1444, 1416, 1381, 1377, 1342, 1232,
1113, 1078, 1072, 1045, 999, 974, 957, 955, 924,
910,895, 868, 833, 796, 764, 663, 634, 594, 472

【００３４】ルミ体（以下の式で表されるもの）：

【化２９】ＨＰＬＣ純度：９７．５％（２２０ｎｍ）¹ Ｈ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）：5.75(1H, d, J=5.3Hz), 5.42-
5.44(1H, m), 4.19(1H, q, J=2.9Hz),3.8-4.0(4H, m),
3.6-3.7(1H, m), 3.25(1H, dd, J=2.6Hz, 9.6Hz),1.21
(6H, s), 0.90(3H, d, J=5.6Hz), 0.82(3H, s), 0.58(3
H, s)

【００３５】¹³Ｃ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）：141.9, 136.2,
123.3, 115.5, 82.8, 77.9, 71.1, 67.4, 64.9, 61.1,
57.2 49.5, 46.7, 44.4, 43.8, 41.4, 37.5, 36.2, 35.9, 3
2.0, 29.4, 29.2,28.8, 22.6, 21.4, 20.9, 18.5, 18.
3, 8.5 ＵＶ（λｍａｘ）：２７３．５ｎｍ（ε９０１０）ＩＲ（ｃｍ^-1）：3437, 3383, 3309, 3041, 2960, 293
5, 2872, 2787, 1657, 1641, 1470, 1441,1375, 1257,
1205, 1203, 1167, 1128, 1097, 1074, 1039, 1011, 98
0, 935,908, 885, 820, 781, 779, 723, 671, 613

【００３６】タキ体（以下の式で表されるもの）：

【化３０】ＨＰＬＣ純度：９７．６％（２２０ｎｍ）¹ Ｈ-ＮＭＲ（ｐｐｍ）：6.65(1H, d, J=16.1Hz), 6.10
(1H, d, J=16.1Hz), 5.73(1H, d, J=2.8Hz),4.21-4.25
(2H, m), 3.70-3.90(4H, m), 3.45(1H, dd, J=2.4Hz,
6.0Hz),1.91(3H, s), 1.22(6H, s), 0.98(3H, d, J=6.5
Hz), 0.69(3H, s)

【００３７】¹³Ｃ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）：138.1, 130.9,
129.5, 127.8, 126.0, 124.5, 83.1, 72.4, 71.1, 68.
5,65.3, 61.1, 54.0, 50.0, 44.4, 42.8, 36.4, 36.0,
35.9, 31.9, 31.4,29.4, 29.2, 28.7, 25.1, 24.3, 20.
8, 18.7, 15.1, 11.2 ＵＶ（λｍａｘ）：２８１．４ｎｍ（ε２６１００）ＩＲ（ｃｍ^-1）：3375, 2945, 2875, 1664, 1632, 161
2, 1468, 1429, 1377, 1215, 1157,1095, 1068, 957, 9
08, 879, 764, 710, 646

【００３８】プレ体（以下の式で表されるもの）：

【化３１】ＨＰＬＣ純度：９７．２％（２２０ｎｍ）¹ Ｈ−ＮＭＲ（ｐｐｍ）:5.91, 5.78(1H×2, d, J=12H
z), 5.52(1H, d, J=3.3Hz), 4.0-4.2(2H, m),3.7-4.0(4
H, m), 3.43(1H, dd), 1.76(3H, s), 1.22(6H, s),0.96
(3H, d, J=6.6Hz), 0.70(3H, s) ＵＶ（λｍａｘ）：２０６ｎｍ（ε１０３００）ＩＲ（ｃｍ^-1）：3377, 2949, 2947, 2872, 1643, 147
0, 1435, 1406, 1379, 1377, 1263,1215, 1140, 1119,
1088, 1063, 1047, 1032, 1030, 962, 937, 935, 756,7
35, 542

【００３９】実施例４：ＥＤ−７１のＸ線結晶構造解析ＥＤ−７１試料（実施例３で使用したＥＤ−７１試料）
より結晶を選出し、Ｘ線回折実験を行った。その結果、
本結晶は斜方晶系に属し、空間群Ｐ２₁２₁２₁、格子定
数ａ＝１０．３５２（２）、ｂ＝３４．０５８（２）、
ｃ＝８．２３１（１）Å、Ｚ＝４であることが判明し、
２５２０個の反射データを測定した。構造解析は以下の
ように行った。直接法（ＳＨＥＬＸＳ８６）により位相
を求め、非水素原子位置をフーリエ合成により見いだし
た。炭素に結合した水素原子位置については炭素原子位
置より算出した。酸素に結合した水素原子位置は他の原
子の位置を求めた後、Ｄ合成により見いだした。

【００４０】最小二乗法による精密化計算（非水素原子
は位置および異方性温度因子を、酸素に結合した水素は
位置のみを精密化）の結果、信頼度因子（Ｒ値）は３．
９％に収斂した。ただし、絶対構造の決定は直接には行
わず、１３、１４、１７、２０位の配置をコレステロー
ルと同じ配置として計算を行った。以上の解析に基づい
て得られた、ＥＤ−７１の構造と水素結合を図１から図
４に示す。

【００４１】参考例１：ＥＤ−７１結晶化合物の安定性アモルファスＥＤ−７１と結晶ＥＤ−７１について１０
℃、２５℃および４０℃の温度で安定性を比較した。安
定性の指標としては、ＨＰＬＣ定量アッセイ、吸光度お
よび純度試験（ＨＰＬＣにおけるピーク面積比）を用い
た。試験方法は以下の通りである

【００４２】（１）安定性試験の方法アモルファスと結晶について、約２ｍｇを精密に秤量
し、１０ｍｌ容スクリューキャップつき試験管（透明）
に入れる。真空デシケータ及びグローブボックスを用い
て、試験管内をアルゴンガスで置換する（「１Ｍ（空
気）」と示したポイントの試料はこの操作を行わな
い）。各温度の恒温槽に試験管を入れ、遮光して保存す
る。１週間（１Ｗ）、２週間（２Ｗ）及び１カ月（１
Ｍ）後に試験管を取り出し、以下の各試験を行う。

【００４３】（２）ＨＰＬＣ定量試験管に無水エタノール５ｍｌを正確に加える（試料溶
液とする）。試料溶液１ｍｌと内標準溶液１ｍｌを正確
にとり、さらに塩化メチレンを加えて正確に２０ｍｌと
する（溶液とする）。尚、内標準溶液は２−アミノピ
リミジンのメタノール溶液（０．６ｍｇ／ｍｌ）を用い
る。定量用標準溶液（結晶ＥＤ−７１の無水エタノール
溶液；０．４ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌと内標準溶液１ｍｌを
正確にとり、さらに塩化メチレンを加えて正確に２０ｍ
ｌとする（溶液とする）。溶液及びの２０μｌに
ついてＨＰＬＣ測定を行い、各々について内標準のピー
ク面積に対するＥＤ−７１のピーク面積の比を求める。
溶液及びの面積比から、試料溶液中のＥＤ−７１含
量を求める。初期値に対する各ポイントの定量値の比を
求め、残存率％とする。ＨＰＬＣ条件カラム；ＹＭＣＡ−００４ＳＩＬ（４．６×３００ｍ
ｍ）移動相；塩化メチレン・メタノール混液（９５／５）流速；１ｍｌ／分検出；ＵＶ２６５ｎｍ

【００４４】（３）吸光度「ＨＰＬＣ定量」で調製した試料溶液１ｍｌを正確にと
り、さらに無水エタノールを加えて正確に１０ｍｌと
し、紫外分光光度計により２６５ｎｍの吸光度を測定す
る。吸光度により、Ｅ１％を求める。Ｅ１％は、Lamber
t-Beerの法則から誘導されるもので、以下の式により求
める。Ｅ１％＝Ａ／ｃｂ［ここで、Ａは吸光度、ｃはｇ／１００ｍｌでの濃度、
ｂはｃｍで表した試料中の光路長であり、通常１であ
る］

【００４５】（４）純度試験（４−１）順相ＨＰＬＣ「ＨＰＬＣ定量」で調製した試料溶液１ｍｌをとり、減
圧乾燥により溶媒（無水エタノール）を除去する。これ
に塩化メチレン１ｍｌを加えて再溶解し、２５μｌにつ
いてＨＰＬＣ測定を行う。ＨＰＬＣ条件カラム；ＹＭＣＡ−００４ＳＩＬ（４．６×３００ｍ
ｍ）移動相；塩化メチレン・メタノール混液（９６／４）流速；１．８ｍｌ／分検出；ＵＶ２６５ｎｍ（４−２）逆相ＨＰＬＣ「ＨＰＬＣ定量」で調製した試料溶液２５μｌについ
て、ＨＰＬＣ測定を行う。ＨＰＬＣ条件カラム；ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−２（５×２５０ｍ
ｍ）移動相；アセトニトリル・水混液（５５／４５）流速；１ｍｌ／分検出；ＵＶ２６５ｎｍ及び２２０ｎｍなお、ＨＰＬＣ定量アッセイおよび純度試験については
２個の試料の平均値を示す。得られた結果を以下の表１
から表５に記載する。

【００４６】表１：ＨＰＬＣ定量アッセイの結果（残存率％）１０℃ ２５℃ ４０℃ アモルファス結晶アモルファス結晶アモルファス結晶初期値 100 100 100 100 100 100 １Ｗ 99.5 99.4 94.4 99.5 ２Ｗ 98.5 96.8 94.7 98.8 88.8 102.9 １Ｍ 94.8 97.0１Ｍ（空気） 97.4 95.0 注：１Ｍ（空気）以外はＡｒガス置換

【００４７】表２：Ｅ１％１０℃ ２５℃ ４０℃ アモルファス結晶アモルファス結晶アモルファス結晶初期値 327.5 350.2 327.5 350.2 327.5 350.2 １Ｗ 323.0 349.5 313.2 349.8 ２Ｗ 324.9 343.8 316.9 341.6 304.0 348.7 １Ｍ 320.5 342.7１Ｍ（空気） 316.3 341.7 注：１Ｍ（空気）以外はＡｒガス置換

【００４８】表３：順相ＨＰＬＣ［Ｐ．Ａ．Ｒ．（％）］による純度試験（２６５ｎｍ）１０℃ ２５℃ ４０℃ アモルファス結晶アモルファス結晶アモルファス結晶初期値 ED-71 96.06 99.15 96.06 99.15 96.06 99.15 プレ体 1.67 0.21 1.67 0.21 1.67 0.21 その他 2.27 0.63 2.27 0.63 2.27 0.63 １Ｗ ED-71 95.97 99.56 94.47 99.55 プレ体 1.88 0.14 2.53 0.14 その他 2.14 0.30 3.00 0.31 ２Ｗ ED-71 95.46 99.06 94.74 98.95 92.12 98.92 プレ体 2.27 0.66 2.25 0.67 2.99 0.67 その他 2.28 0.27 3.01 0.38 4.89 0.41 １Ｍ ED-71 94.58 98.91 プレ体 2.33 0.65 その他 3.09 0.44 １Ｍ（空気） ED-71 95.26 98.88 プレ体 2.31 0.66 その他 2.42 0.46 注：１Ｍ（空気）以外はＡｒガス置換

【００４９】表４：逆相ＨＰＬＣ［Ｐ．Ａ．Ｒ．（％）］による純度試験（２６５ｎｍ）１０℃ ２５℃ ４０℃ アモルファス結晶アモルファス結晶アモルファス結晶初期値 ED-71 95.38 99.04 95.38 99.04 95.38 99.04 プレ体 1.16 0.36 1.16 0.36 1.16 0.36 その他 3.47 0.60 3.47 0.60 3.47 0.60 １Ｗ ED-71 94.78 99.35 92.47 99.40 プレ体 1.27 0.28 1.98 0.29 その他 3.95 0.38 5.55 0.31 ２Ｗ ED-71 94.48 98.84 94.20 98.78 90.68 98.75 プレ体 1.75 0.83 1.72 0.85 2.53 0.85 その他 3.77 0.32 4.08 0.37 6.78 0.40 １Ｍ ED-71 93.05 98.77 プレ体 1.88 0.86 その他 5.07 0.37 １Ｍ（空気） ED-71 94.11 98.72 プレ体 1.82 0.86 その他 4.07 0.42 注：１Ｍ（空気）以外はＡｒガス置換

【００５０】表５：２２０ｎｍ（％）１０℃ ２５℃ ４０℃ アモルファス結晶アモルファス結晶アモルファス結晶初期値 ED-71 93.95 97.44 93.95 97.44 93.95 97.44 プレ体 1.35 0.52 1.35 0.52 1.35 0.52 その他 4.70 2.04 4.70 2.04 4.70 2.04 １Ｗ ED-71 93.37 98.17 90.00 98.18 プレ体 1.50 0.44 2.29 0.47 その他 5.13 1.40 7.71 1.35 ２Ｗ ED-71 92.85 97.91 92.39 97.56 87.40 97.65 プレ体 2.02 1.01 1.93 1.01 2.88 1.02 その他 5.13 1.09 5.68 1.43 9.72 1.33 １Ｍ ED-71 92.85 97.44 プレ体 2.02 1.05 その他 5.13 1.51 １Ｍ（空気） ED-71 92.07 97.09 プレ体 2.04 1.09 その他 5.88 1.82 注：１Ｍ（空気）以外はＡｒガス置換

【００５１】以上の結果から、２５℃での２Ｗまで、並
びに４０℃での２Ｗまでにおいては、結晶体の方がアモ
ルファス体より安定性が高いことが明らかに分かる。

【００５２】

【発明の効果】本発明のビタミンＤ誘導体結晶は、純度
の向上、安定性の向上および品質の安定化などの利点を
もたらし、当該ビタミンＤ誘導体を含む医薬品などを製
造する際に有用である。また、本発明のビタミンＤ誘導
体の精製方法により、高品質のビタミンＤ誘導体を安定
的かつ大量的に（グラムオーダーで）製造することが可
能になる。また、本発明のＥＤ−７１の類縁化合物であ
るタキ体およびＥＤ−７１のプロ体の類縁化合物である
ルミ体は新規化合物であり、ビタミンＤ誘導体の合成に
おける試験または分析の際などに有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＥＤ−７１結晶の構造を示す分子構造
投影図である。

【図２】図２は、ＥＤ−７１結晶の構造のステレオ図を
示す分子構造投影図である。

【図３】図３は、ＥＤ−７１結晶の水素結合（関連部分
のみを示した）を示す分子構造投影図である。

【図４】図４は、ＥＤ−７１結晶の水素結合（関連部分
のみを示した）を示す分子構造投影図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）：【化１】で表される化合物の結晶。
【請求項２】ビタミンＤ誘導体の未精製物または粗精
製物を、逆相系クロマトグラフィーで精製した後、有機
溶媒で結晶化させて得られるビタミンＤ誘導体の結晶。
【請求項３】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒である
ことを特徴とする請求項２記載の結晶。
【請求項４】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、ア
セトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶媒
であることを特徴とする請求項３記載の結晶。
【請求項５】ビタミンＤ誘導体が式（Ｉ）：【化２】で表される化合物であることを特徴とする請求項２記載
の結晶。
【請求項６】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒である
ことを特徴とする請求項５記載の結晶。
【請求項７】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、ア
セトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶媒
であることを特徴とする請求項６記載の結晶。
【請求項８】逆相系クロマトグラフィーによるビタミ
ンＤ誘導体の精製方法。
【請求項９】ビタミンＤ誘導体が式（Ｉ）：【化３】で表される化合物であることを特徴とする請求項８記載
の精製方法。
【請求項１０】有機溶媒で結晶化することによるビタ
ミンＤ誘導体の精製方法。
【請求項１１】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒であ
ることを特徴とする請求項１０記載の精製方法。
【請求項１２】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、
アセトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶
媒であることを特徴とする請求項１１記載の精製方法。
【請求項１３】ビタミンＤ誘導体が式（Ｉ）【化４】で表される化合物であることを特徴とする請求項１０記
載の精製方法。
【請求項１４】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒であ
ることを特徴とする請求項１３記載の精製方法。
【請求項１５】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、
アセトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶
媒であることを特徴とする請求項１４記載の精製方法。
【請求項１６】ビタミンＤ誘導体の未精製物または粗
精製物を、逆相系クロマトグラフィーで精製した後、有
機溶媒で結晶化させるビタミンＤ誘導体の精製方法。
【請求項１７】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒であ
ることを特徴とする請求項１６記載の精製方法。
【請求項１８】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、
アセトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶
媒であることを特徴とする請求項１７記載の精製方法。
【請求項１９】ビタミンＤ誘導体が式（Ｉ）：【化５】で表される化合物であることを特徴とする請求項１６記
載の精製方法。
【請求項２０】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒であ
ることを特徴とする請求項１９記載の精製方法。
【請求項２１】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、
アセトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶
媒であることを特徴とする請求項２０記載の精製方法。
【請求項２２】式（II）：【化６】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶する式（II）で表される化合物の精製方法。
【請求項２３】アルコールがメタノールであることを
特徴とする請求項２２記載の精製方法。
【請求項２４】式（II）：【化７】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶して得られる精製された式（II）で表される
化合物。
【請求項２５】アルコールがメタノールであることを
特徴とする請求項２４記載の化合物。
【請求項２６】式（II）：【化８】で表される化合物の未精製物または粗精製物をアルコー
ルで再結晶することによって得た精製された式（II）の
化合物を、紫外線照射および熱異性化反応に付して式
（Ｉ）：【化９】のビタミンＤ誘導体を得；次いで、上記で得た未精製ま
たは粗精製のビタミンＤ誘導体を、逆相系クロマトグラ
フィーで精製した後、有機溶媒で結晶化させることを含
む精製ビタミンＤ誘導体の製造方法。
【請求項２７】有機溶媒が非プロトン性有機溶媒であ
ることを特徴とする請求項２６記載の製造方法。
【請求項２８】非プロトン性有機溶媒が酢酸エチル、
アセトンまたはアセトニトリルあるいはこれらの混合溶
媒であることを特徴とする請求項２７記載の製造方法。
【請求項２９】アルコールがメタノールであることを
特徴とする請求項２６から２９のいずれか１項に記載の
製造方法。
【請求項３０】式（III）：【化１０】で表される化合物。
【請求項３１】式（IV）：【化１１】で表される化合物。