WO2002086151A1 - Methode d'analyse de constituant biologique - Google Patents

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WO2002086151A1
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measurement
measuring
biological component
thiodiglycolic acid
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Yoko Ueda
Kazuaki Yamashita
Original Assignee
International Reagents Corporation
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase

Definitions

  • the present invention relates to a biological component measurement reagent that can avoid the influence on the measurement result due to the presence of a substance that is not a measurement target in a measurement sample in the measurement of a biological component in the field of clinical testing.
  • Akita background technology Akita background technology
  • Methods for avoiding bilirubin interference include a method using bilirubin oxidase, a method using pyrirubin oxidase and a surfactant, a method using ferricyanide, a method using ferrocyanide, and a method using ferrocyanide / Methods using albumin are known.
  • the above method is a method of avoiding interference in the method of leading to color development mainly by a combination of oxidase and peroxidase, but also includes a method of avoiding interference in a substrate decomposition color method such as the ⁇ leucine amino peptidase measurement method ''. ing.
  • a substrate decomposition color method such as the ⁇ leucine amino peptidase measurement method ''. ing.
  • the problem of each interference by pyrirubin and hemolyzed hemoglobin has not yet been fully solved. Disclosure of the invention
  • An object of the present invention is to provide a biological component measuring reagent and a measuring method thereof that can avoid the influence of the presence of a substance that is not the measurement target of a measurement sample, for example, bilirubin or hemolysed hemoglobin, on the measurement of the biological component. It is to provide.
  • the present inventors have conducted intensive studies, and as a result, in the measurement of biological components, hemolysis was carried out by adding one or more of thiodiglycolic acid,] 3-thiodiglycol, methionine and the like to the reagent. The inventors have found that interference due to hemoglobin is avoided, and that addition of a sulfur-containing compound avoids interference due to pyrirubin, and thus completed the present invention.
  • the reagent contains one or more substances selected from the group consisting of thiodidacholic acid, / 3-thiodiglycol and methionine.
  • the reagent when one of the substances not to be measured is bilirubin, contains one or more sulfur-containing compounds. Reagents,
  • a reagent used when measuring a biological component by absorbance which contains at least one of thiodiglycolic acid, _thiodiglycol, methionine, thiourea, and sodium sulfite. Reagent for component measurement,
  • SDS sodium lauryl sulfate
  • a biological component measuring reagent kit comprising the reagent according to any one of the above items 1 to 12,
  • a method for measuring ALP activity characterized by using the reagent according to any one of the above items 1 to 12.
  • FIG. 1 is a view showing the relative effect of conjugated bilirubin interference in an ALP measurement system depending on the presence or absence of thiodidaricholic acid (Example 1).
  • FIG. 2 is a view showing the relative effect of the presence or absence of thiodiglycolic acid on the interference of hemolyzed hemoglobin in the ALP measurement system (Example 1).
  • FIG. 3 is a view showing the relative effect of the presence or absence of SDS on the interference of hemoglobin with hemolysis in the ALP measurement system (Example 1).
  • the biological component measured in the present invention may be a component contained in a living body, and is not particularly limited. Examples thereof include human or animal blood, serum, plasma, urine, stool, semen, cerebrospinal fluid, saliva, It can be used to measure components contained in body fluids such as sweat, tears, ascites, amniotic fluid, and extracts of organs, tissues, cells, and the like.
  • An example of such a component is a substance that can be measured by an absorptiometer using the absorbance and reflection of light of a specific wavelength as an index. Examples thereof include those having an enzyme activity and those which measure the enzyme activity by labeling a measurement component with an enzyme. More specifically, it can be used for measurement of a biological component using an alkaline phosphatase (ALP) activity of a living body as an index, and similarly, measurement using an activity of an ALP isozyme as an index.
  • ALP alkaline phosphatase
  • each interference by pyrirubin and hemolytic hemoglobin may affect the measurement result of ALP activity.
  • Examination of these interference avoidance measures in the ALP measurement system revealed that the addition of at least one of thiodiglycolic acid, methionine, and monothioglycone to hemolytic hemoglobin was effective.
  • the effect of pyrirubin is recognized by adding a sulfur-containing substance.
  • the sulfur-containing substance is not particularly limited as long as it contains a zeo atom in the molecule, and examples thereof include oxo acids and thio acids containing sulfur atoms and salts thereof, ammonium sulfite, calcium sulfite, sodium sulfite, and titanium sulfite. Examples include ammonium sulfate, sodium thiosulfate, potassium thiosulfate, thiodiglycolic acid, methionine, and thiourea. More preferably, an effect can be obtained by adding at least one of thiodidarylic acid, methionine, sodium sulfite, and thiourea to the reagent.
  • the ALP will be described in detail by way of example, but the object to be measured is not limited to the ALP.
  • ALP in human serum is widely distributed in various organs in the body, and is a membrane-bound enzyme located outside the biological membrane that degrades many phosphate compounds. It is a dimeric structure, which is a glycoprotein with a sugar chain attached to it.
  • diseases such as cull disease, fibrous osteomyelitis, hyperparathyroidism, Behcet's disease, metastatic bone cancer, osteomalacia, obstructive jaundice, acute hepatitis, cirrhosis, metastatic liver cancer, etc.
  • An increase in ALP activity is seen.
  • the measurement of the biological component of the present invention is carried out by measuring the blood, serum, plasma, urine, stool, semen, cerebrospinal fluid, saliva, sweat, tears, ascites, amniotic fluid, etc. of humans or animals, organs, tissues, cells, etc. It can be used to measure ALP contained in extracts and the like. This assay can also be used to measure the activity of ALP isozymes.
  • the color-forming compound dissociated by the action of ALP in the present invention refers to a substance that dissociates from the substrate for ALP measurement by the action of ALP.
  • the substrate for ALP measurement is not particularly limited, for example, glyceric phosphate, P-to-furfuric acid, phenylphosphoric acid, etc.
  • the color-forming compound dissociated by the action of ALP is p-nitrophenol.
  • the activity can be measured by measuring the decomposition rate of the substrate over time and calculating the increase in absorbance, or by the endpoint method. It is possible.
  • ALP measurement using trophenyl phosphate as a substrate was performed using diethanolamine (DEA) buffer and 2- (ethylamino) ethanol (EAE) buffer as buffer.
  • N-methyl-D-glucamine (MEG) buffer 2-amino-2-methyl-111-prono-nole (2-amino-1-methyl-propanol; AMP) buffer
  • MAG 2-amino-2-methyl-111-prono-nole
  • AMP 2-amino-1-methyl-propanol
  • the final concentration of thiodiglycolic acid contained in the ALP measurement reagent is 0.5 to 100 mM, preferably 1.0 to 50 mM, and more preferably 2.0 to 30 mM.
  • the final concentration refers to the concentration with respect to the final solution volume in which the measurement sample and the measurement reagent are reacted in the measurement system.
  • SDS in addition to the above-mentioned thiodiglycolic acid, SDS can be added to the ALP measurement reagent in order to avoid each interference of hemoglobin with hemolysis.
  • the SDS has a final concentration of 0.001 to 1.0%, preferably 0.005 to 0.5%, more preferably 0.01 to 0.1%.
  • the present invention also extends to an ALP measurement reagent to which thiodiglycolic acid or SDS is added, a measurement reagent kit containing the measurement reagent, and an ALP measurement method.
  • Example 1 the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
  • Example 1 the present invention will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
  • the measuring reagent was prepared as follows.
  • a solution prepared by adding 30 mM thiodiglycolic acid to the first reagent and a solution prepared by adding 0.5% of SDS were prepared.
  • the measurement sample was prepared by the following method.
  • the measuring device used Hitachi 7170 type automatic analyzer. The results are shown in FIGS. FIG. 1 shows that the interference by the conjugated bilirubin at each concentration can be avoided by the addition of thiodidaricholic acid.
  • the effect of adding thiodiglycolic acid and SDS to the measurement reagents on the measurement samples containing conjugated bilirubin or hemolysed hemoglobin (Hb) was examined.
  • the preparation of the measurement sample and the preparation of the reagent were performed by the following methods, and the measurement was performed in the same manner as in Example 1.
  • Samples for measurement were each prepared in the same manner as in Example 1 so as to have a conjugated pyrylrubin concentration of 21.6 mg / dL or a hemolytic Hb concentration of 480 rag / dL.
  • the first and second reagents were prepared as described in Example 1. Further, a reagent was prepared by adding 30 mM of thiodiglycolic acid and 5% of SDSO to the first reagent in combination.
  • Table 1 shows the results. As is clear from Table 1, it was shown that the addition of thiodicalic acid and SDS avoids interference of conjugated bilirubin and hemoglobin with hemolysis. (table 1 ) ( % )
  • the biological component measurement reagent of the present invention makes it possible to obtain an accurate measurement value of a biological component by avoiding interference by hemolytic hemoglobin and bilirubin.

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Description

生体成分測定方法 技術分野
本発明は、 臨床検査の分野における生体成分の測定において、 測定試 料の測定対象物でない物質の存在による測定結果への影響を回避しうる 生体成分測定試薬に関する。 明 田 背景技術
現在、 臨床化学の分野における血清成分の測定法としては、 目的成分 が酵素である場合には、その基質となる化合物を用いて酵素反応を行い、 得られた生成物を測定して酵素活性を算出する方法が広く普及している また、 目的成分が酵素以外の場合には、 目的成分に特異的に作用する酵 素を用い、 その酵素反応により得られた生成物を測定して目的成分量を 算出する、いわゆる「酵素法」 と呼ばれる測定方法が広く普及している。 体液成分中の種々の成分、 例えば還元性物質であるァスコルビン酸、 ヘモグロビン、 ビリルビン等の還元作用による負誤差の影響、 また、 へ モグロビン、 ピリルビン等の色素は、 測定波長によっては正、 負誤差の 原因となり、 これら色素自身の吸収が光ならびに測定試薬組成中の成分 等の影響により測定中に経時的に変化し、 測定結果に影響を与えること も広く知られており、 このような影響を干渉という。
測定法のいかんを問わず、 体液成分による干渉回避のための種々の方 法が検討されており、 例えばヘモグロビン、 ピリルビンによる各干渉に 対する回避策だけに絞っても数多くの報告がなされている。 へモグロビ ンの干渉回避方法については、 チォ尿素を用いる方法、 カチオン性界面 活性剤ノ両性界面活性剤を用いる方法、 カチオン性界面活性剤 Z両性界 面活性剤/ァニオン性界面活性剤を用いる方法、 アルキルスルホン酸塩 類を用いる方法、 二色光測定を行う方法等が知られている。 また、 ビリ ルビンの干渉回避方法については、 ビリルビンォキシダーゼを用いる方 法、 ピリルビンォキシダーゼと界面活性剤等を組み合わせる方法、 フエ リ シアン化物を用いる方法、 フヱロシアン化物を用いる方法、 フエロシ ァン化物/アルプミンを用いる方法等が知られている。
上記の方法は、 主に酸化酵素とペルォキシダーゼの組み合わせにより 発色へ導く方法における干渉回避方法であるが、 一部 「ロイシンアミノ ぺプチダーゼ測定法」 のような基質分解発色法における干渉回避方法も 含まれている。 しかし、 ピリルビンならびに溶血ヘモグロ ビンによる各 干渉の問題は未だ十分に解決された状況とはいえない。 発明の開示
本発明の課題は、 生体成分の測定において、 測定試料の測定対象物で ない物質、 たとえばビリルビン、 溶血ヘモグロ ビンの存在による測定結 果への影響を回避しうる生体成分測定試薬およびその測定方法を提供す ることである。 本発明者らは、 鋭意研究を重ねた結果、 生体成分の測定において、 試 薬にチォジグリ コール酸、 ]3—チォジグリコール、 メチォニン等のいず れか 1または 2以上を添加することで溶血へモグロビンによる干渉が回 避され、 さらに含硫化合物を添加することにより ピリルビンによる干渉 が回避されることを見出し、 本発明を完成した。
すなわち本発明は、
1 . 測定試料中の生体成分を測定する場合において、 試料中の測定対象 物でない物質の存在により測定結果に影響を及ぼすことを回避するため に、 試薬にチォジダリ コール酸、 /3—チォジグリコール、 メチォニンの いずれか 1または 2以上の物質を含むことを特徴とする生体成分測定試 薬、
2 . 測定対象物でない物質のいずれかが溶血ヘモグロ ビンである前項 1 に記載の生体成分測定試薬、
3 . 測定試料中の生体成分を測定する場合において、 測定対象物でない 物質のいずれかがビリルビンである場合に、 試薬に 1または 2以上の含 硫化合物を含むことを特徴とする生体成分測定用試薬、
4 . 含硫化合物がチォジグリコール酸、 0—チォジグリコール、 メチォ ニン、 チォ尿素、 亜硫酸ナトリ ウムである前項 3に記載の生体成分測定 用 薬、
5 . 測定対象物でない物質のいずれかがビリルビンおよびへモグロビン である前項 3または 4に記載の測定試薬、
6 . 生体成分を吸光度により測定する際に使用する試薬であって、 チォ ジグリ コール酸、 _チォジグリ コール、 メチォニン、 チォ尿素、 亜硫 酸ナトリ ゥムのいずれか 1または 2以上の物質を含む生体成分測定用試 薬、
7 . 生体成分の吸光度による測定が、 生体成分中の酵素活性の測定であ る前項 6に記載の測定用試薬、
8 . 酵素活性の測定がアルカリホスファターゼ （A L P ) の作用により 解離する発色化合物を用いて A L P活性を測定する前項 7に記載の測定 用試薬、
9 .チォジグリ コール酸を含有する前項 7または 8に記載の測定用試薬、 1 0 .チォグジリ コール酸の最終濃度が 0. 5〜100mMであることを特徴と する前項 9に記載の測定試薬、 1 1 . チォジグリ コール酸の他にさらにラウリル硫酸ナトリ ウム （S D S ) を含有することを特徴とする前項 9または 1 0に記載の測定試薬、
1 2 . S D Sの最終濃度が 0. 005〜1. 0%であることを特徴とする前項 1 1に記載の測定試薬、
1 3 . 前項 1〜 1 2のいずれか 1に記載の試薬を含むことを特徵とする 生体成分測定試薬キッ ト、
1 4 . 前項 1〜 1 2のいずれか 1に記載の試薬を用いることを特徴とす る A L P活性の測定方法、 からなる。 図面の簡単な説明
第 1図は、 A L P測定系における抱合型ビリルビンの干渉について、 チォジダリコール酸の添加の有無による相対的効果を示す図である （実 施例 1 )。
第 2図は、 A L P測定系における溶血ヘモグロビンの干渉について、 チォジグリコール酸の添加の有無による相対的効果を示す図である （実 施例 1 )。
第 3図は、 A L P測定系における溶血へモグロ ビンの干渉について、 S D Sの添加の有無による相対的効果を示す図である （実施例 1 )。 発明を実施するための最良の形態
本発明において測定される生体成分は、 生体中に含有する成分であれ ばよく、 特に限定されないが、 例えばヒ トまたは動物の血液、 血清、 血 漿、 尿、 便、 精液、 髄液、 唾液、 汗、 涙、 腹水、 羊水等の体液、 臓器、 組織、細胞等の抽出液等に含まれる成分の測定に使用することができる。 このような成分の例として、 吸光光度計により特定の波長の光の吸収度 および反射を指標として測定しうる物質が挙げられ、 例えば成分自身が 酵素活性を有するもの、 あるいは測定成分に酵素標識して該酵素活性を 測定するもの等が挙げられる。 より具体的には、 生体のアルカリホスフ ァターゼ （A L P ) 活性を指標とする生体成分の測定や、 同様に A L P のアイソザィムの活性を指標とする測定に用いることもできる。
従来用いられている A L P測定試薬をそのまま 2試薬系に分配した 試薬組成では、 ピリルビンならびに溶血ヘモグロ ビンによる各干渉で A L P活性の測定結果に影響を及ぼすことがある。 A L P測定系における これらの干渉回避策を検討したところ、溶血性へモグロビンに対しては、 チォジグリ コール酸、 メチォニン、 一チォジグリ コーノレのいずれか少 なく とも 1を添加することにより効果が認められた。 また、 ピリルビン に対しては、 含硫物質を添加することにより効果が認められる。 含硫物 質とは分子にィォゥ原子を含むものであれば特に限定されないが、 その 例として、 硫黄原子を含むォキソ酸、 チォ酸およびこれらの塩、 亜硫酸 アンモニゥム、 亜硫酸カルシウム、 亜硫酸ナトリ ウム、 チォ硫酸アンモ 二ゥム、チォ硫酸ナトリ ウム、チォ硫酸力リ ウム、チォジグリコール酸、 メチォニン、 チォ尿素等が例示される。 より好ましくはチォジダリ コー ル酸、 メチォニン、 亜硫酸ナトリ ウム、 チォ尿素のいずれか少なく とも 1 を試薬に添加するこ とで効果が認められる。 また、 溶血ヘモグロ ビン の干渉回避作用のある S D Sをこれらから選択されるいずれかの物質と 共存させてもピリルビン干渉回避効果も保持されることから、 S D Sを 併用することでビリルビンおよび溶血へモグロビンの各干渉を回避でき ることを見出し、 本発明を完成した。
以下、 A L Pを例示して詳細に説明するが、 測定対象物は A L Pに限 定されるものではない。
ヒ ト血清中 A L Pは体内諸器官に広く分布し、 多くのリン酸化合物を 分解する生体膜の外側に局在する膜結合の酵素で、 サブュニッ ト 2分子 のダイマー状の構造であり、 これに糖鎖がつく糖タンパク質である。 例 えば、 クル病、 繊維性骨炎、 上皮小体機能亢進症、 ベーチェッ ト病、 転 移性骨癌、 骨軟化症などの疾患や閉塞性黄疸、 急性肝炎、 肝硬変、 転移 性肝癌等で、 A L P活性の上昇が見られる。
本発明の生体成分の測定は、 ヒ トまたは動物の血液、血清、血漿、尿、 便、 精液、 髄液、 唾液、 汗、 涙、 腹水、 羊水等の体液、 臓器、 組織、 細 胞等の抽出液等に含まれる A L Pの測定に使用することができる。また、 本測定法は、 A L Pのアイソザィムの活性測定に用いることもできる。 本発明における A L Pの作用により解離する発色化合物とは、 A L P 測定用基質から A L Pの作用により解離する物質をいう。 A L P測定用 基質は、 特に限定されるものではないが、 例えばグリセ口リン酸、 P- - ト口フエュルリン酸、 フエニルリン酸等が知られており、 一般的には p_ ニトロフエ-ルリン酸が使用される。 各 A L P測定用基質において、 A L Pの作用により解離する発色化合物は、 p —ニ トロフエノールである。 本発明の上記の基質を用いた A L P活性の測定は、 基質の分解速度を 経時的に測定して吸光度の増加により算出して活性を測定することもで き、 エンドポイント法で測定することも可能である。 また、 トロフ ェニルリン酸を基質とした A L Pの測定は緩衝液としてジエタノールァ ミ ン （di ethanolamin ; D E A ) 緩衝液、 2— （ェチルァ ミ ノ） エタノー ノレ （2— (ethylamino) ethanol； E A E ) 緩衝液、 N—メチノレー D—グルカ ミン （N- methyl- D - glucamine ; M E G ) 緩衝液、 2—アミノー 2—メチル 一 1 一プロノ ノ一ノレ （2— amino一 2一 methyl_l一 propanol； A M P ) 緩衝 ί夜を 用いる方法が知られているが （検査と技術、 Vol . 29， No. 3, p. 225-230 (2001) )、本発明の測定試薬および測定方法は、特に A M Pを使用した場 合に効果が認められる。
本発明において、 ビリルビンならびに溶血へモグロ ビンの各干渉回避 のために A L P測定試薬に含有させるチォジグリコール酸は、 最終濃度 が 0. 5〜100mM、 好ましくは 1. 0〜50mM、 より好ましくは 2. 0〜30mMとな るようにする。 ここにおいて、 最終濃度とは、 測定系において測定用試 料と測定用試薬を反応させる最終溶液量に対する濃度をいう。
さらに、本発明は A L P測定試薬に上記チォジグリコール酸に加えて、 溶血へモグロビンの各干渉回避のために S D Sを含有させることもでき る。 該 S D Sは、 最終濃度が 0. 001〜1. 0%、 好ましくは 0. 005〜0. 5 %、 より好ましくは 0. 01〜0. 1 %となるようにする。
本発明は、 チォジグリコール酸、 または、 さらに S D Sを添加した A L P測定試薬および該測定試薬を含む測定試薬キッ トならびに A L P測 定方法にも及ぶ。 実施例
以下に実施例で本発明を説明するが、 本発明はこれら実施例に限定さ れるものではない。 実施例 1
抱合型ビリルビン濃度または溶血へモグロ ビン濃度が異なる試料の測 定系において、 測定試薬にチォジグリコール酸または S D Sを添加した ときの効果を検討した。
測定用試薬は以下のように調製した。
(第一試薬）
2—ァミ ノ - 2 -メチル- 1-プロパノール （AMP) 350mM 硫酸亜鉛 1. 36mM 酢酸マグネシウム 2. 71mM
N -ヒ ドロキシェチルエチレンジァミ ン三酢酸 2. 71mM (HEDTA)
pH 10. 4 ( 30°C )
(第二試薬）
2 -ァミノ _2 -メチル -1_プロパノール (AMP) 350mM
4—ニ トロフエニルリ ン酸 65. ImM pH 10. 4 ( 30°C )
第一試薬にチォジグリ コール酸 30mM を添加したものならびに S D S 0. 5%添加したものを調製した。
測定用試料は以下の方法により調製した。
(a)抱合型ビリルビン濃度が異なる血清試料
管理血清 QAP-トロール · 1Χ (国際試薬製） の血清 9容と抱合型ビリル ビンを含まない水溶液または調製した抱合型ビリルビン （干渉チエツ ク ： 国際試薬製） を含む水溶液 1容を混合して、 抱合型ピリルビン濃度 が最大 22 mg/dLである血清の希釈系列を調製し、 各測定用試料とした。 (b) ヘモグロ ビン濃度が異なる血清試料
管理血清 QAP-トロール · Π (国際試薬製） の血清 9容と溶血へモグロ ビンを含まない水溶液または調製した溶血へモグロビン （干渉チェッ ク ： 国際試薬製） を含む水溶液 1容を混合して、 溶血ヘモグロ ビン濃度 が最大 480mg/dLである血清の希釈系列を調製し、 各測定用試料とした。 測定は以下の条件で行った。
測定用試料 5 μ ίに第一試薬 210 μ ίを加え、 37°Cで 5分間予備加温し た後、 第二試薬 70 /i L を添加し、 撹拌後 405nm (主波長） および 505nm (副波長） における単位時間当たりの吸光度の増加速度を比較した。 A L P活性値が既知である酵素溶液の吸光度増加速度を元に、 各測定用試 料中の酵素活性を決定した。
測定装置は日立 7170形自動分析装置を使用した。 結果を第 1図〜第 3図に示した。 第 1図より各濃度の抱合型ビリルビ ンによる干渉は、 チォジダリコール酸の添加により回避されることが示 された。
また第 2図より各濃度の溶血へモグロビンによる干渉は、 チォジダリ コール酸の添加により軽減されることが認められた。
第 3図より各濃度の溶血へモグロビンによる干渉は、 S D Sの添加に より回避されることが確認された。 実施例 2
抱合型ビリルビンまたは溶血ヘモグロ ビン （Hb) が含まれる測定用試 料において、 測定試薬にチォジグリ コール酸および S D Sを添加したと きの効果について検討を行った。 測定用試料の調製および試薬の調製は 以下の方法で行い、 測定は実施例 1 と同様に行った。
(測定用試料の調製）
測定用試料は、 実施例 1 と同様の方法で、 抱合型ピ リ ルビン濃度 21. 6mg/dLまたは溶血 Hb濃度 480rag/dLとなるように各調製した。
(試薬の調製）
第一試薬および第二試薬は実施例 1に示したのと同様に調製した。 さ らに、第一試薬に、 チォジグリコール酸 30mMおよび S D S O. 5%を併用し て添加したものを調製した。
チォジグリ コール酸および S D S添加効果の評価は、 抱合型ビリルビ ンおよび溶血 Hb を含まない測定系での測定値を 100%とした相対値で行 つた。
その結果を表 1に示した。 表 1から明らかなようにチォジダリ コール 酸および S D Sの添加により抱合型ビリルビンならびに溶血へモグ口ビ ンの干渉が回避されることが示された。 (表 1 ) ( % )
Figure imgf000012_0001
(無添加：チォジグリ コール酸および S D Sを添加しない試薬測定系） (添加 ： チォジグリ コール酸および S D Sを添加した試薬測定系） 産業上の利用可能性
以上説明したように、 本発明の生体成分測定試薬により、 溶血性へモ グロビンによる干渉ならぴにビリルビンによる干渉を回避して、 生体成 分の正確な測定値を得ることが可能となる。

Claims

請 求 の' 範 囲
1 . 測定試料中の生体成分を測定する場合において、 試料中の測定対象 物でない物質の存在により測定結果に影響を及ぼすことを回避するため に、 試薬にチォジグリコール酸、 _チォジグリコール、 メチォニンの いずれか 1または 2以上の物質を含むことを特徴とする生体成分測定試 薬。 .
2 . 測定対象物でない物質のいずれかが溶血へモグロビンである請求の 範囲 1に記載の生体成分測定試薬。
3 . 測定試料中の生体成分を測定する場合において、 測定対象物でない 物質のいずれかがピリルビンである場合に、 試薬に 1または 2以上の含 硫化合物を含むことを特徴とする生体成分測定用試薬。
4 . 含硫化合物がチォジグリコール酸、 βーチォジグリ コール、 メチォ ニン、 チォ尿素、 亜硫酸ナトリ ウムである請求の範囲 3に記載の生体成 分測定用試薬。
5 . 測定対象物でない物質のいずれかがビリルビンおよびヘモグロ ビン である請求の範囲第 3項または第 4項に記載の測定試薬。
6 . 生体成分を吸光度により測定する際に使用する試薬であって、 チォ ジグリ コール酸、 β—チォジグリ コール、 メチォニン、 チォ尿素、 亜硫 酸ナトリ ゥムのいずれか 1または 2以上の物質を含む生体成分測定用試
7. 生体成分の吸光度による測定が、 生体成分中の酵素活性の測定であ る請求の範囲第 6項に記載の測定用試薬。
8. 酵素活性の測定がアルカリホスファターゼ （AL P) の作用により 解離する発色化合物を用いて A L P活性を測定する請求の範囲第 7項に 記載の測定用試薬。
9. チォジグリ コール酸を含有する請求の範囲第 7項または第 8項に記 載の測定用試薬。
1 0.チォグジリ コール酸の最終濃度が 0.5〜； LOOmMであることを特徴と する請求の範囲第 9項に記載の測定試薬。
1 1. チォジグリ コール酸の他にさらにラウリル硫酸ナトリ ウム （S D S) を含有することを特徴とする請求の範囲第 9項または第 1 0項に記 載の測定試薬。
1 2. S D Sの最終濃度が 0.005〜1.0%であることを特徴とする請求の 範囲第 1 1項に記載の測定試薬。
1 3. 請求の範囲第 1〜 1 2項のいずれか 1に記載の試薬を含むことを 特徴とする生体成分測定試薬キッ ト。
1 4. 請求の範囲第 1〜 1 2項のいずれか 1に記載の試薬を用いること を特徴とする AL P活性の測定方法。
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