WO2001012643A1 - Caprazamycines antibiotiques et leur procede de production - Google Patents

Description

明 細 書

抗生物質力 プラ ザマイ シ ン類お よ びその製造法

技術分野

本発明 はす ぐれた抗菌活性を有する 新規な抗生物質で あ る 力 プラ ザマ イ シ ン ( caprazamycin) A、 B 、 C 、 E お よ び F ま たはその製薬学的に許容 さ れ る塩に関する。 ま た本発明 は これ ら 力 プラ ザマイ シ ン類の製造法に関す る。 さ ら に本発明 は、 それ ら 力 プラ ザマイ シ ン類あ る い はそれ ら の塩を有効成分 と する 医薬組成物、 特に抗菌性 組成物に関する。 さ ら にま た、 本発明 は、 それ ら 力 ブラ ザマイ シ ン類を生産で き る特性を持つ新規な微生物 と し て ス ト レ プ ト ミ セ ス · エ ス ピー MK 730— 62F2に 関する。

背景技術

細菌感染症の化学療法、 特に抗酸性菌の感染症の化学 療法にぉ レ、 て リ フ ァ ン ピ シ ン 、 カ ナマ イ シ ン 、 ス ト レ プ ト マ イ シ ン 、 バ イ オマ イ シ ン 、 力 ブ レ オマ イ シ ン 、 サイ ク ロ セ リ ン等の抗生物質が抗菌剤 と し て使用 さ れてい る , 細菌感染症の化学療法において 、 感染症の原因 と な る 細菌が薬剤耐性にな る こ と は重大な問題であ る 。 特に抗 酸性菌の感染症の化学療法において リ フ ァ ン ピ シン、 力 ナマイ シ ン 、 ス ト レプ ト マイ シ ン 、 バイ オマ イ シ ン 、 力 ブ レオマ イ シン、 サイ ク ロ セ リ ン等に耐性を有する抗酸 性菌が 出現 し社会的問題 と な っ てい る 。 薬剤耐性抗酸性 菌の感染症に有効な新 し い化学療法剤が強 く 望まれてい る。 ま た、 化学療法が確立 し てい ない非定型抗酸性菌の 感染症に有効な新 しい化学療法剤 も 強 く 望ま れてい る。 そのため 、 従来使用 さ れてい る既知の抗生物質 と は異な り 、 新規な化学構造を有 し且つ優れた抗菌作用 な どの 良 い性質を示す新規化合物の発見ま たは創製が強 く 望まれ てい る。 本発明 は、 上記の要望に応 え得る優れた抗菌活 性を持つ新規な抗生物質を提供する こ と を 目 的 と する。 発明の開示

本発明者 ら は有用 な抗生物質を発見する 目 的で研究を 行っ た。 その結果、 本発明者 ら に よ っ て分離 さ れた ス ト レブ ト ミ セ ス属 に属す る 新 し い菌株が新 しい構造骨格を 有する複数の抗生物質を産生する こ と を見い 出 した。 そ れ ら の一群の抗生物質を総括 して 力 プラ ザマ イ シ ン類 と 称する こ と に し た。 そ し て力 プラ ザマイ シ ン類が各種の 抗酸性菌、 グラ ム 陽性細菌お よ びそれ ら の薬剤耐性菌に 強い抗菌活性を示す こ と を見い出 した。 さ ら に研究を続 けて、 力 プラ ザマイ シ ン類を分析する こ と に よ り 、 今回 得 られた 力 プラ ザマイ シ ン類には、 5 種の化合物が包括 されてレ、 る こ と を見出 し 、 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F と それぞれ命名 し てそれ ら の化学構造を決定 した。 そ し て力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F が新規化合物であ る こ と を確認 し 、 そ し てそれ ら を総括 的に次の一般式 （ I ) に よ り 表せ る こ と を知 見 した。 な お、 力 プラ ザマ イ シ ン類は一般式 （ I ) に示 さ れる よ う に一つの共通な基本骨格を有する が、 側鎖であ る R は相 異な る炭素数 1 1〜 1 3の直鎖の ア ル キ ル基、 ない し分岐 し たアルキ ノレ基であ る。

従っ て 、 第 1 の本発明 において は、 次の一般式 （ I )

[式中、 R は力 プラ ザマイ シ ン A では ト リ デシル基であ り 、 力 プラ ザマイ シン B では 1 1ー メ チル一 ドデシル基で あ り 、 力 プラ ザマイ シ ン C では ドデシル基であ り 、 カ プ ラ ザマイ シ ン E では ゥ ンデシル基であ り 、 そ し てカ プラ ザマイ シ ン F では 9 ー メ チルー デ シル基であ る ] で示 さ れる 化合物であ る 、 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン A、 カ ブ ラ ザマ イ シ ン B 、 力 プ ラ ザマ イ シ ン C 、 力 プ ラ ザマ イ シ ン E お よ び力 プラ ザマ イ シ ン F 、 あ る いはそれ ら の製薬 学的に許容でき る塩が提供 さ れ る。

第 1 の本発明 に よ る 新規な抗生物質力 プラ ザマイ シ ン 類には、 下記の式 （ l a ) の力 プラ ザマ イ シ ン A、 式 （ l b ) の 力 プラ ザマ イ シ ン B 、 式 （ I c ) の 力 プラ ザマ イ シ ン C 、 式 （ Ie) の 力 プラ ザマ イ シ ン E お よ び式 （ If) のカ プラ ザマイ シ ン F が包含 さ れる。

( 1 ) 次式 （ la)

で示 さ れ る 力 プラ ザマ イ シ ン A [—般式 （ I ) で R が ト リ デシル基ー （CH₂) ₁₂— CH₃であ る場合の化合物 ] 。

( 2 ) 次式 （ lb)

で示 さ れ る 力 プラ ザマ イ シ ン B [—般式 （ I ) で R が 11 ー メ チル ー ドデシ ル基 ,CH₃

一 (CH^CH:

Chb であ る 場合の化合物 ]

( 3 ) 次式 （ I c )

で示 さ れ る 力 プラ ザマ イ シ ン C [一般式 （ I ) で R 力 ド デシル基一 （CH₂) H— CH₃であ る場合の化合物 ] 。 ( 4 ) 次式 （ I e )

(Ie)

で示 される 力 プラ ザマ イ シ ン E [—般式 （ I ) で R カ ゥ ンデシル基ー （CH₂) i。一 CH₃であ る 場合の化合物 ] 。

( 5 ) 次式 （ If)

で示 さ れ る 力 プラ ザマイ シ ン F [—般式 （ I ) で R 力 S 9 — メ チ ノレ 一デシノレ

であ る場合の化合物 ] 。

第 1 の本発明 に よ る 式 （ la) の力 プラ ザマイ シ ン A の 理化学的性状は、 次の通 り で あ る。

( 1 ) 外観

無色粉末

( 2 ) 分子式

C₅₃H₈₇N ₂

( 3 ) 高分解能質量分析 （ HRFABMS ： 陽イ オ ン モ ー ド ） 実験値 ： 1146. 5933 ( + H) +

計算値 ： 1146. 5921

( 4) 比旋光度

[ α ] _D ²³ -1. 4° ( c 0. 83、 DMS0)

( 5) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル （メ タ ノ ール中）

λ max nm ( E ) ： 261 (7， 400)

添付図面の図 1 に示す。

( 6) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

添付図面の図 2 に示す。

( 7) プ ロ ト ン核磁気共鳴スぺク ト ル

500MHzにおいて重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド中 で室 温にて測定 したプロ ト ン N M R スぺク ト ル添付図 面の図 3 に示す。

( 8) 炭素 13核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

125MHzにおいて重ジ メ チ ノレ ス ノレホ キ シ ド中 で室 温にて測定 した炭素 13NMRス ぺ ク ト ルは、添付図面 の図 4 に示す。

( 9) 溶解性

メ タ ノ ー ル 、 ジ メ チ ノレ ス ノレホ キ シ ド （ D M S 0 )、 水 に可溶で あ り ァセ ト ン、酢酸ェチルに不溶であ る。

( 10) T L C

シ リ カ ゲル 6 0 F ₂₅₄ ( メ ノレ ク 社製） の薄層 ク ロ マ 卜 グラ フ ィ ー上でブタ ノ 一ノレ ： メ タ ノ ール ： 水 (4 ： 1 ： 2 )の溶媒で展開 し た と き の R f値は 0. 44で あ る。

第 1 の本発明の力 プ ラ ザマイ シ ン A は両性物質であ り その製薬学的に許容で き る塩 と し ては、 第 4 級ア ン モ ニ ゥ ム塩な どの有機塩基 と の塩、あ る いは各種金属 と の塩、 例えばナ ト リ ウ ム塩の よ う なァノレカ リ 金属 と の塩、 あ る いは酢酸な どの有機酸 と の付加塩、 あ る いは塩酸の よ う な無機酸 と の付加塩が あげ ら れ る 。

第 1 の本発明 に よ る 式 （ lb) の 力 プラ ザマ イ シ ン B の 理化学的性状は、 次の通 り であ る。

( 1) 外観

無色粉末

( 2) 分子式

C₅₃H₈₇N₅0₂₂

( 3) 高分解能質量分析 （ HRFABMS ： 陰イ オ ン モ ー ド） 実験値 ： 1144. 5750 (M - H) - 計算値 ： 1144. 5764

( 4) 比旋光度

[ ] _D ²³ - 2. 6° ( c 0. 91、 DMS0)

( 5) 紫外線吸収ス ペ ク ト ル （ メ タ ノ ー ル中）

λ max nm " ) : 261 (8， 000)

添付図面の図 5 に示す。

( 6) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

添付図面の図 6 に示す。

( 7) プ ロ 卜 ン 核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル 500 MH zにおいて重ジ メ チノレ ス ノレホ キ シ ド ： 重水 ( =10 : 1) の混合溶媒中で室温にて測定 したプ ロ ト ン N M R ス ぺ ク ト ゾレは、添付図面の 図 7 に示す。

( 8) 炭素 13核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

125MHzにおいて重ジメ チル ス ルホ キ シ ド ： 重水

( = 10 ： 1 )の混合溶媒中 で室温にて測定 し た炭素 13 NMRス ぺ ク ト ノレは、 添付図面の図 8 に示す。

( 9) 溶解性

メ タ ノ ー ル 、 DMS0、 水に可溶であ り ア セ ト ン 、 酢酸ェチルに不溶であ る。

( 10) T L C

シ リ カ ゲノレ 6 0 F ₂₅₄ (メ ノレク 社製） の薄層 ク ロ マ ト グラ フ ィ ー上でブタ ノ ーノレ ： メ タ ノ ール ： 水 (4 ： 1 ： 2)の溶媒で展開 した と き の Rf値は 0.44で あ る。

本発明 の 力 プラ ザマ イ シ ン B は両性物質で あ り 、 そ の 製薬学的に許容でき る 塩 と しては、 第 4 級ア ン モ ニ ゥ ム 塩な どの有機塩基 と の塩、 あ る い は各種金属 と の塩、 例 えばナ ト リ ウ ム塩の よ う なアルカ リ 金属 と の塩、 あ る レ、 は酢酸な ど の有機酸 と の付加塩、 あ る いは塩酸の よ う な 各種無機酸 と の付加塩が あげ られる。

本発明 に よ る 式 （ Ic) の力 プラ ザマ イ シ ン C の理化学 的性状は、 次の通 り であ る。

( 1) 外観 無色粉末

( 2) 分子式

( 3) 高分解能質量分析 （ HRFABMS ： 陽イ オ ン モ ー ド） 実験値 1132. 5747 (M + H) ⁺

計算値 1132. 5764

( 4) 比旋光度

[ α ] _D ²⁵ -1. 1° ( c 1. 33、 DMSO)

( 5) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル （ メ タ ノ ー ル中）

λ max nm ( ε ) ： 261 (8， 300)

添付図面の図 9 に示す。

( 6) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

添付図面の図 1 0 に示す。

( 7) プ ロ ト ン核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

500MHzにおいて重ジ メ チル ス ルホ キ シ ド中 で室 温にて測定 した プ ロ ト ン N M R ス ぺ ク ト ルは、 添 付図面の図 1 1 に示す。

( 8) 炭素 13核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

125MHzにぉレ、て重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド中 で室 温にて測定 した炭素 13NMRスぺ ク ト ルは、添付図面 の図 12に示す。

( 9) 溶解性

メ タ ノ 一ノレ 、 DMS0、 水 に可溶であ り ア セ ト ン 、 酢酸ェチルに不溶であ る 。 ( 10) T L C

シ リ カ ゲ ル 6 0 F ₂₅₄ ( メ ル ク 社製） の薄層 ク ロ マ ト グラ フ ィ ー上でブタ ノ ール ： メ タ ノ ーノレ ： 水 (4 ： 1 ： 2)の溶媒で展開 した と き の Rf値は 0. 44で あ る。

本発明 の 力 プラ ザマ イ シ ン C は両性物質で あ り 、 その 製薬学的に許容でき る 塩 と し て は、 第 4 級ア ンモ ニ ゥ ム 塩な どの有機塩基 と の塩、 あ る いは各種金属 と の塩、 例 えばナ ト リ ウ ム塩の よ う なァノレカ リ 金属 と の塩、 あ る い は酢酸な どの有機酸 と の付加塩、 あ る いは塩酸の よ う な 各種無機酸 と の付加塩があげ られる。

本発明 に よ る 式 （ Ie) の力 プラ ザマ イ シ ン E の理化学 的性状は、 次の通 り であ る。

( 1) 外観

無色粉末

( 2) 分子式

( 3) 高分解能質量分析 （ HRFABMS ： 陽イ オ ン モ ー ド） 実験値 1118. 5613 ( + H) *

計算値 1118. 5608

( 4) 比旋光度

[ ひ ] 0²⁵ - 5. ( c 0. 83、 DM SO)

( 5) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル （ メ タ ノ ール中）

λ max nm ( £ ) ： 262 (7， 700) 添付図面の図 1 3 に示す。

( 6) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

添付図面の図 1 4 に示す。

( 7) プ ロ ト ン核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

500MHzにおいて重ジメ チル ス ノレホ キ シ ド中で室 温にて測定 した プロ ト ン N M R スぺク ト ノレは、 添 付図面の図 1 5 に示す。

( 8) 炭素 13核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

125MHzにおいて重ジメ チル ス ルホ キ シ ド中で室 温にて測定 した炭素 13 NMRス ぺ ク ト ルは、添付図面 の図 16に示す。

( 9) 溶解性

メ タ ノ ー ル 、 DMS0、 水に可溶であ り ア セ ト ン 、 酢酸ェチルに不溶であ る。

( 10) T L C

シ リ カ ゲ ル 6 0 F ₂₅₄ ( メ ル ク 社製） の薄層 ク ロ マ ト グラ フ ィ ー上でブタ ノ ーノレ ： メ タ ノ ー ル ： 水 (4 ： 1 ： 2)の溶媒で展開 した と き の Rf値は 0. 44で あ る。

本発明 の 力 プラ ザマ イ シ ン E は両性物質で あ り 、 そ の 製薬学的 に許容でき る 塩 と し ては、 第 4 級ア ン モ ニ ゥ ム 塩な どの有機塩基 と の塩、 あ る いは各種金属 と の塩、 例 えばナ ト リ ゥ ム塩の よ う なアル力 リ 金属 と の塩、 あ る い は酢酸な どの有機酸 と の付加塩、 あ る いは塩酸の よ う な 各種無機酸 と の付加塩が あげ られる。

本発明 に よ る 式 （ If) の力 プラ ザマイ シ ン F の理化学 的性状は、 次の通 り であ る。

( 1) 外観

無色粉末

( 2) 分子式

H₈₃N₅0₂₂

( 3) 高分解能質量分析 （ HRFABMS ： 陽イ オ ン モ K 実験値 1118. 5615 (M + H) +

計算値 1118. 5608

( 4) 比旋光度

[ a ] ⁵ - 4. 7° ( c 0. 90、 DMS0)

( 5) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ノレ （メ タ ノ ー ル中）

λ max nm ( ε ) ： 262 (7， 600)

添付図面の図 17に示す。

( 6) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

添付図面の図 18に示す。

( 7) . プ ロ ト ン核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

500MHzにおレ、て重ジメ チル ス ノレホ キ シ ド中で室 温に て測定 し た プ ロ ト ン N M R ス ぺ ク ト ル は 、 添 付図面の 図 19に示す。

( 8) 炭素 13核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル

125MHzにおレヽて重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド中 で室 温にて測定 し た炭素 13 NMRス ぺ ク ト ルは、添付図面 の図 20に示す。

( 9) 溶解性

メ タ ノ ーノレ 、 DMS0、 水 に可溶であ り ア セ ト ン 、 酢酸ェチルに不溶であ る 。

( 10) T L C

シ リ カ ゲル 6 0 F ₂₅₄ ( メ ルク 社製） の薄層 ク ロ マ 卜 グラ フ ィ —上でブ タ ノ 一 ノレ ： メ タ ノ ーノレ ： 水 (4 ： 1 ： 2)の溶媒で展開 し た と き の Rf値は 0· 44で あ る。

本発明 の 力 プラ ザマイ シ ン F は両性物質で あ り 、 その 製薬学的に許容でき る 塩 と し て は、 第 4 級ア ン モ ニ ゥ ム 塩な どの有機塩基 と の塩、 あ る いは各種金属 と の塩、 例 えばナ ト リ ゥ ム塩の よ う なァノレ力 リ 金属 と の塩、 あ る レ、 は酢酸な どの有機酸 と の付加塩、 あ る いは塩酸の よ う な 各種無機酸 と の付加塩が あげ ら れる。

なお、 本明細書では、 力 プラ ザマイ シ ン A 、 力 プラ ザ マ イ シ ン B 、 力 プラ ザマ イ シ ン C 、 力 プラ ザマ イ シ ン E 、 力 プラ ザマ イ シ ン F の う ちの一つ 、 あ る いは二つま たは それ以上の混合物、 も し く は、 すべて の混合物を 、 単に 力 プラ ザマイ シ ン類 と 称する こ と が あ る 。

本発明 に よ る 前記の一般式 （ I) で表せる 力 プラ ザマイ シ ン類は後記の生物学的性質を有す る 。

すなわ ち 、 力 プラ ザマ イ シ ン A、 力 プラ ザマ イ シ ン B 、 力 プラ ザマ イ シ ン C 、 力 プラ ザマ イ シ ン E お よ び力 ブラ ザマイ シ ン F は、 薬剤耐性菌を含む抗酸性菌お よ び薬剤 耐性菌 （ メ チシ リ ン耐性菌等） を含む グラ ム 陽性の細菌 に対 して抗菌活性を示す。 こ れ ら の細菌に対する 力 ブラ ザマイ シ ン類の抗菌活性を次の と お り 試験 し た。

試験例 1

各種の微生物に対す る 力 プラ ザマイ シ ン A の抗菌ス ぺ ク ト ルは 日 本化学療法学会標準法に基づき 、 1 % グ リ セ リ ン加普通寒天培地上で倍数希釈法に よ り 測定 した。 そ の結果を表 1 に示す。

表 1 力 プラザマイ シン A 供 SA 囷 最小発育阻止濃度

( μ g/ ml ) マイ コ バク テ リ ゥム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 1 56 マイ コ バク テ リ ゥム · ス メ グマテ ィ ス ATCC607 PM- R 1 56

(パロ モマイ シ ン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 VM- R 0 78

(バイ オマイ シ ン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥ ム ' ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 CPM -R 0. 78

(カブ レオマイ シン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 ST- R 0. 78

( ス ト レブ ト ス ラ イ シ ン耐性 )

マイ コ バク テ リ ゥ ム ' ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 KM - R 0. 78

(カナマイ シ ン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥム · ス メ グマテ ィ ス ATCC607 SM- R 1. 56

(ス ト レプ ト マイ シ ン耐性）

マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 RFP - R 0. 78

( リ フ ァ ン ビ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · フ レ イ 1. 56 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム - バケ A T C C 15483 0. 2 マイ コ バク テ リ ゥ ム ' フ ォ ーツイ ツム 6. 25

試験例 2

各種の微生物に対す る 力 プラ ザマイ シ ン B の抗菌ス ぺ ク ト ルは 日 本化学療法学会標準法に基づき 、 1 % グ リ セ リ ン加普通寒天培地上で倍数希釈法に よ り 測定 し た。 そ の結果を表 2 に示す。 表 2

力 プラザマ イ シ ン B 供 試 菌 最小発育阻止濃度

( μ g / m 1 ) マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 3. 13 マイ く ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 PM- R 1. 56

(パロ モマイ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマテ ィ ス ATCC607 VM- R 1. 56

(バイ オマイ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グ マテ ィ ス ATCC607 CPM - R 1. 56

( 力 7 レ オマイ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 ST- R 1. 56

(ス ト レブ ト ス ラ イ シン耐性 )

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 K - R 1. 56

(カナマイ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 SM- R 3. 13

(ス ト レ プ ト マイ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グ - 7テ イ ス ATCC607 RFP - R 3. 13

( リ フ ァ ン ビシ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · フ レイ 3. 13 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · バケ ATCC 15483 0. 39 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' フ ォー ツ イ ツ ム 50

試験例 3

表 2 に示 さ れた も の以外の各種の微生物に 対する カ プ ラ ザマ イ シ ン B の抗菌 ス ぺ ク ト ルを 、 日 本化学療法学会 標準法に基づき 、 ミ ュ ラ · ヒ ン ト ン寒天培地上で倍数希 釈法に よ り 測定 した。 そ の結果を表 3 に示す。 表 3 力 プ ラ ザ マ ' イ シ ン B 供 最 小 発 育 阻 止 濃 度 g /ml) ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス ' ァ ゥ レ ウ ス FDA209P 1. 56 ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス ' ァ ゥ レ ウ ス ス ミ ス 3. 13 ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス · ァ ゥ レ ウ ス MS9610 3. 13

(多剤耐性）

ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス · ァ ゥ レ ウ ス No. 5 3. 13

( メ チ シ リ ン 耐性）

ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス · ァ ゥ レ ウ ス No. 17 6. 25

( メ チ シ リ ン 耐性)

ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス · 了 ウ レ ウ ス MS 16526 3. 13

( メ チ シ リ ン 耐性）

ス タ フ イ ロ コ ッ カ ス - ァ ゥ レ ウ ス TY 04282 6. 25

( メ チ シ リ ン 耐性)

ミ ク ッ カ ス · ル テ ウ ス F D A 16 3. 13 ミ ク ロ コ ッ カ ス · Φテ ウ ス PC I 1001 3. 1 ノ チ ル ス · ア ン ト ラ シ ス 0. 78 バ チ ル ス · ズブ チ リ ス NRRし B - 558 12. 5 ノくチ ,レ ス · ズプチ リ ス PC I 219 6. 25 バチ ル ス · セ レ ウ ス ATCC 10702 3. 13 コ リ ネ バ ク テ リ ウ ム - ボビ ス 1810 3. 13 ェ シ エ リ ヒ ァ . コ リ I H J 100

試験例 4

各種の微生物 に対す る 力 プラ ザマ イ シ ン C の抗菌 ス ク ト ルは 日 本化学療法学会標準法 に基づ き 1 % グ リ セ

1リ1 ン、 / 刀 fin U ¾Γ OS 人 ·立口 i4lSi J L 1立 ®r Wも $π 、 ίΗΖΧ に よ り 測 定 し た。 そ の結果 を 表 4に示す。

表 4 力プラザマ イ シン C 供 試 菌 最小発育阻止濃度 μ g /m 1 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 1. 56 マイ コ バ ク テ リ ゥム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 ΡΜ- R 1. 56

(バ ロ モマイ シ ン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 V - R 1. 0 D

(バイ オマイ シン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥ ム ' ス メ グマティ ス ATCC607 CPM - R 1. 56

(力 ブ レ オマイ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 S T -R 1. 56

( ス ト レ ブ ト ス ラ イ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 KM -R 0. 78

( 力 十マイ シ ン耐性）

マイ コ .'、 ク ァ リ ウ ム ' ス メ ク マア イ ス ATCC60 S M - R 1. 56

( ス ト レ プ ト マイ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 RFP R 1. 56

( リ フ ァ ン ビシ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ■ フ レ イ 1. 56

く ク テ リ ウ ム . バケ ATCC 15483 0. 39 マ イ く ク テ リ ゥ ム . フ ォー ツイ ツ ム 12. 5

試験例 5

各種の 微生物 に 対す る 力 プ ラ ザマ イ シ ン E の抗菌 ス ぺ ク ト ル は 日 本化学療法学会標 準法 に 基づ き 、 1 % グ リ セ リ ン加普通寒天培地上で倍数希釈法に よ り 測定 した。 そ の結果を表 5に示す。

表 5

力 プ ラ ザマ ノ シン ン Fし 供 試 菌 舉小 音 m 1卜濃

V β g / m マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマテ ィ ス ATCC607 1. 56 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 P - R 1. 56

(パ ロ モマイ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマテ ィ ス ATCC607 V - R 0. 39

(バイ オマイ シ ン耐性）

マイ コ バク テ リ ゥ ム . ス メ グ - 7テ イ ス ATCC607 CPM- -R 0. 39

(力ブ レ オマイ シ ン耐性）

マ イ コバ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 ST- 0. 78

(ス ト レ ブ ト ス ラ イ シ ン耐性 )

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ ィ ス ATCC607 KM- R 0. 78

(カナマイ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ ィ ス ATCC607 SM- R 1. 56

( ス ト レ ア ト マ イ ン ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グー テ イ ス ATCC607 RFP- -R 0. 78

( リ フ ァ ン ピ シ ン耐性）

マイ く ク テ リ ゥ ム · フ レイ 1. 56 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · バケ ATCC 15483 0. 39 マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム · フ ォ ー ツ イ ツ ム 12. 5

試験例 6

各種の微生物に対す る 力 プラ ザマ イ シ ン F の抗菌ス ぺ ク ト ルは 日 本化学療法学会標準法に基づき 、 1 % グ リ セ リ ン加普通寒天培地上 で倍数希釈法に よ っ て 測定 し た。 その結果を表 6に示す。

表 6 力 プラザマイ シン F 供 試 最小発育阻止濃度

( g / m 1 ) マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ イ ス ATCC607 1. 56 マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマ テ イ ス ATCC607 P - R 0. 78

( パ ロ モマイ シ ン耐性）.

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ イ ス ATCC607 PM- R 1. 56

( バ イ オ マ イ シン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' ス メ グマ テ イ ス ATCC607 PM - R 0. 78

(カ ブ レオマイ シン耐性）

マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマ テ イ ス ATCC607 ST- R 0. 78

( ス ト レ ブ ト ス ライ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマ テ イ ス ATCC607 K - R 0. 78

(力 十マ イ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマテ イ ス A T C C 607 SM- 1. 56

( ス ト レ プ ト マイ シ ン耐性）

マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム . ス メ グマテ イ ス ATCC607 R FP- - R 0. 78

( リ フ ァ ン ピ シ ン耐性）

マイ コ バ ク テ リ ゥ ム . フ レ イ 1. 56 マイ コ バ ク テ リ ゥ ム ' バ ケ ATCC 15483 0. 78 マ イ コ ノく ク テ リ ゥ ム · フ ォ ー ツ イ ツ ム 12. 5

試験例 7

核 ( Mycobacterium tuberculosis) 、 な ら びに非 定型抗酸性菌で あ る マ イ コ バ ク テ リ ゥ ム · ア ビ ゥ ム · キ ノレ ヒ ベ /レ ヴ ( Mycobacterium avium kirchberg) お よ びマ ィ コ /く ク テ リ ゥ ム · ィ ン ト ラ セ ノレ ラ レ （M cpbacterium intracellulars) に対する 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の抗菌ス ぺ ク ト ルを、 Middlebrook 7H9液体培 地中で倍数希釈法に よ り 測定 した。 ま た 、 前記の細菌に 対する リ フ ァ ン ピシ ン （ RFP) お よ びィ ソ ニ コ チ ン酸 ヒ ド ラ ジ ド （ INH) (比較薬剤 と し て） の抗菌ス ぺ ク ト ルを、 同 じ倍数希釈法に よ り 測定 し た。 得 ら れた結果を次の表 7 に示す。

表 7

さ ら に 、 第 2 の本発 明 に よ る と 、 ス ト レ プ ト ミ セ ス属 に属 し て 、 前記 の一般式 （ I ) で表 さ れ る 力 プ ラ ザマ イ シ ン 力 プラ ザマイ シ ン B 、 力 プラ ザマイ シ ン C 、 カ プ ラ ザマイ シ ン E お よ び力 プラ ザマイ シ ン F の少 く と も一 つを生産する 生産菌を培養 し、 そ の培養物か ら 、 力 ブラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の少 く と も 一つ を採 取する こ と を特徴 と す る 、 一般式 （ I ) で表 さ れる 抗生 物質力 プラ ザマ イ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び （ま た は） F の製造方法が提供さ れる。

第 2 の本発明 の方法で使用する 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン類の生産菌は、 前述 した理化学的性質お よ び生物学 的性質を有する 抗生物質を生産す る 能力 を有する も の で あれば、 そ の種を問わず使用 でき て 、 広範な微生物か ら 選ぶ こ と ができ る。 かかる微生物の う ち、 抗生物質カ プ ラザマイ シ ン類の生産菌の具体的な好適の一例には、 本 発明者 ら に よ り 平成 9 年 3 月 、 微生物化学研究所におい て 、 ノヽ ワ イ 、 オ ア フ 島 の 土壌 よ り 分離 された放線菌で 、 M K730- 62F2の菌株番号力 付 さ れた菌株があ る。

以下に MK730- 62F2株の菌学的諸性質につ い て記載する。 1. 形態

MK730-62F2株は、 分枝 し た基生菌糸 よ り 、 比較的長い 気菌糸 を伸長 し 、その先端に 5— 10回転の らせんを形成す る。成熟 した胞子鎖は 10— 50個の卵 円形の胞子を連鎖 し、 胞子の 大 き さ は約 0. 5〜 0. 6 X 0. 8〜 1. 0ミ ク 口 ンであ る 。 なお、 胞子の表面は平滑であ る。 輪生枝、 菌束糸 、 胞子 の う 、 お よ び運動性胞子は認め ら れない。 2. 各種培地におけ る 生育状態

色の記載について [ ] 内 に示す色の標準は、 コ ン テ イ ナ— . コ ー ポ レ ー シ ョ ン . ォブ . ァ メ リ カ の カ ラ ー . ノヽ ■ ~ モ ニ一 · マ ニ ュ / ノレ ( Container し orporation of Americaの color harmony manual) を用レヽた。

( 1) ス ク ロ ー ス · 硝酸塩寒天培地 （ 27°C培養）

う す黄 [ 2 ea, Lt Wheat] の発育上に、 白 の気菌糸 を、 う つす ら と 着生 し、 溶解性色素は認め られな い。

( 2) グ リ セ リ ン ' ァ ス パ ラ ギ ン寒天培地 （ ISP-培地 5、 27°C培養）

う す黄 [ 2 ea, Lt Wheat] 〜 う す黄茶 [ 2 ng, Dull Gold] の発育上に、 灰 白 [ 3 dc, Natural ] 〜 明 る レヽ灰 [ d] の気菌糸 を着生す る。 溶解性色素は認め られない。

( 3) ス タ ーチ . 無機塩寒天培地 （ ISP-培地 4、 27°C培養） ラ す黄 [2 ea, Lt Wheat]〜 ラ す黄茶 [ 2 lg， Mustard

Tan] の発育上に、 白 〜明 る い灰 [ d] の気菌糸 を着生す る。 溶解性色素は認め られな い。

( 4) チ ロ シ ン寒天培地 （ ISP-培地 7、 27°C培養）

う す黄茶 [ 2 le， Mustard 〜 2 ng, Dul l Gold] の発 育上に、 灰 白 [ b， Oyster White 〜 3 dc, Natural ] の 気菌糸 を着生 し 、 暗い茶の溶解性色素 を産生する。

( 5) ィ 一 ス 卜 · 麦芽寒天培地 （ ISP-培地 2、 27°C培養） う す黄茶 [2 ie， Lt Mustard Tan 〜 3 i c , Lt Amber] の発育上に、 灰 白 [ b, Oyster White] 〜明 る レ、灰 [ d] の気菌糸 を着生す る。 溶解性色素は認め られない。

( 6) オー ト ミ ー ル寒天培地 （ ISP-培地 3、 27°C培養） う す黄 [ 2 ea， Lt Wheat] の発育上に、 灰 白 [ 3 dc， Natural] 〜 明 る い灰 [ d] の気菌糸 を着生 し 、 溶解性色 素は認め られない。

3. 生理学的性質

( 1 ) 生育温度範囲

グ ル コ ー ス · ァ ス パ ラ ギ ン 寒 天培地 ( グ ル コ ー ス

1.0%、 ァ ス パ ラ ギ ン 0.05%、 リ ン酸二 カ リ ウ ム

0.05%、 ひ も寒天 2.5%、 pH 7.0)を用 レヽ 、 10°C、 20。C、

24°C、 27。C、 30°C、 37°C、 45 °Cお よ び 50 °Cの各温度で試 験 した結果、 本菌株は 10°C、 45°Cお よ び 50°C を除き 、 20°C か ら 37 °Cの範囲で生育 した。 生育至適温度は、 30〜 37°C 付近であ る。

( 2) ス タ ー チ の加水分解 （ ス タ ー チ · 無機塩寒天培地、 ISP-培地 4、 27°C培養）

培養後 3 日 目 頃 よ り ス タ ー チ の加水分解を認め、 そ の 作用 は 中等度であ る。

( 3) メ ラ ニ ン様色素 の生成 （ ト リ プ ト ン . イ ー ス ト . ブ ロ ス 、 ISP -培地 1 ; ぺプ ト ン · ィ ー ス ト · 鉄寒天培地、

ISP-培地 6 ; チ ロ シ ン寒天培地、 ISP-培地 7 ; いずれ も 27。C 培養）

いずれの培地で も 陽性であ る。

(4) 炭素源の利用性 （ プ リ ドハ ム · ゴ 卜 リ ーブ寒天培地、 ISP-培地 9、 27°C培養）

D — グノレ コ ー ス 、 L ー ァ ラ ビ ノ ー ス 、 D — フ メレ ク ト ー ス 、 ス ク ロ ー ス 、 イ ノ シ ト ー ノレ 、 ラ ム ノ ー ス 、 ラ フ イ ノ ー スお よ び D — マ ン ニ ト ー ル を利用 し て発育 し、 D — キ シ ロ ー ス もおそ ら く 利用する 。

( 5) 硝酸塩の還元反応 （ 0. 1%硝酸カ リ ウ ム含有ぺプ ト ン水、 ISP-培地 8、 27°C培養）

陰性であ る。

( 6) ゼ ラ チ ン の液化 （単純ゼ ラ チ ン 、 20 °C培養 ； ダル コ ー ス ' ペ プ ト ン ' ゼ ラ チ ン、 27。C培養）

単純ゼ ラ チ ンは、 培養後 40日 間の観察で液化を認めな かっ た。 グル コ ー ス ' ペ プ ト ン ' ゼ ラ チ ン の場合、 培養 後 40日 頃に弱い液化を 示 した。

( 7) 脱脂牛乳の凝固 ' ペプ ト ン化 （ 10 % ス キ ム ミ ル ク 、 37 °C培養）

凝固する こ と な く 、培養後 7日 目 頃 よ り ペプ ト ン化が始 ま り 、 14日 目 に は完了 した。

以上の性状 を要約す る と 、 MK730- 62F2株は、 分枝 し た 基生菌糸 よ り 、 らせん形成を有す る気菌糸 を伸長す る 。 胞子の表面は平滑であ る 。 種々 の培地で、 う す黄〜 う す 黄茶の発育上に 、 灰 白 〜明 る い灰の気菌糸 を着生す る。 溶解性色素は、 メ ラ ニ ン様色素以外は認め ら れない。 生 育至適温度は 30〜 37 °C付近であ る。 メ ラ ニ ン様色素の生 成は陽性、 ス タ ー チ の水解性は 中等度であ る 。 なお 、 細 胞壁に含まれる 2， 6— ジア ミ ノ ピメ リ ン酸は LL一型であ り 、 菌体中の主要な メ ナキ ノ ンは MK- 9 (H8) お よ び

MK-9 (H6) であっ た。

こ れ ら の性状 よ り MK730- 62F2株は 、 ス ト レ プ ト ミ セ ス ( Streptomyces) 属に属する と 考え ら れ る。 そ こ で、 近 縁の既知菌種を検索 し た結果、 ス ト レ プ ト ミ セ ス · ディ , ス タ ト ク ロ セ ク 不 ス (StreDtomyces diastatochromo^e nes、 文献、 International Journal of systematic B a c teriology , 22卷、 290頁、 1972年） 、 ス 卜 レ プ 卜 ミ セ ス · レ ン ス ト マ イ シ フ ィ ク ス (Streptomyces resistomycif ic us -、 文 ^;、 International Journal of Systematic B a c t er iology , 18卷、 165頁、 1968年）、 ス 卜 レ プ ト ミ セ ス · コ リ ヌ ス (.Stre tomvces col linus, 文献、 International Journal of Systematic Bacteriology^ 18 、 100貞、 1 968年） お よ びス ト レプ ト ミ セ ス *ァ ウ ラ ンテ ィ オ ダ リ セ ゥ ス (Streptomyces aurantio_ ri seus^ 文献、 Internati o n a 1 Journal of Systematic Bacteriology^ 18 、 297 頁、 1968年） が あげ ら れた。 次に上記 4種の本研究所保存 菌株 と MK730- 62F2株を 実地に比較検討 した。 その成績を 表 8 に示す。 表 8

* + ： 禾 IJ 用 、 （ + ) ： お そ ら く 利 用 、 利 用 の 存否 が 判 然 と し な い 表 8 続

+ ： 利 用 、 （ + ) ： お そ ら く 利 用 、 土 ： 利 用 の 存 否 が 判 然 と し な い 以上の表 8 力、 ら 明 ら かな よ う に、 MK730- 62F2株は表 8 で比較 さ れたいずれの種 と も類似 し た性状を示 し た。 し 力 し 、 ス ト レ プ ト ミ セ ス · レ ジ ス ト マ イ シ フ ィ ク ス は発 育の色調が う す黄茶一茶黒を呈 し 、 溶解性色素が茶を帯 び、 脱脂牛乳をペプ ト ン化 し ない点で、 MK730- 62F2株 と 相違 して いた。 ま た、 ス ト レ プ ト ミ セ ス ' コ リ ヌ ス は気 菌糸の形態が直状一ループ状を示 し、 脱脂牛乳をぺプ ト ン化 し な い点で、 ま た ス 卜 レ プ ト ミ セ ス ' ァ ウ ラ ンテ ィ ォグ リ セ ウ ス は溶解性色素が茶を帯び、 単純ゼラ チ ン を 液ィヒ し、 硝酸塩を還元する 点で、 MK730-62F2株 と 区別 さ れた。 一 方 、 ス ト レ プ ト ミ セ ス ' デ ィ ア ス タ ト ク ロ モ ゲ ネ ス は単純ゼ ラ チ ン の液化が陽性を示すほかは、 MK730- 62F2株 と よ く 類似 して いた。 し力 し 、 現時点では MK730 - 62F2株を ス 卜 レ プ ト ミ セ ス ' デ ィ ア ス タ ト ク ロ モ ゲ ネ ス のー菌株であ る と 同定でき ない。 そ こ で、 MK730- 62F2株 を ス ト レ プ ト ミ セ ス ' エ ス ピ ー （ Streptomyces sp. ) MK 730-62F2と した。

なお、 MK730- 62F2株を 日 本国茨城県つ く ば巿東 1 丁 目 1 番 3 号に在る 工業技術院生命工学工業技術研究所に寄 託申請 し 、 1998年 11月 27曰 、 FERM P— 17067と し て受託 さ れた。 ま た、 2000年 7 月 12日 の受託 日 でブダぺ ス ト 条約 の規糸勺下（こ MK730— 62F2株（ま FERM BP— 7218の受託番号で前 記の研究所に寄託 さ れた。

第 2 の本発明 の方法 において は、 抗生物質 力 プラ ザマ ィ シ ン類の製造は次の通 り 行われる。

すなわち 、 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン類の製造は、 抗 生物質力 プラ ザマイ シ ン A、 B 、 C 、 E お よ び F の少な く と も 一 つ を生産する 生産菌 （単に 力 プラ ザマイ シ ン生 産菌 と い う ） を栄養培地中 に接種 し 、 抗生物質力 プラ ザ マ イ シ ン類の生産に良好な温度で培養する こ と に よ っ て 行われ、 抗生物質力 プ ラ ザマイ シ ン類を含む培養物が得 られる。 こ の よ う な 目 的に用 レ、 る 栄養培地 と しては、 放 線菌の培養に利用 し う る も の が使用 さ れる。 栄養源 と し て、 例え ば市販 さ れて い る 大豆粉、 ペプ ト ン、 酵母ェキ ス 、 肉エ キ ス 、 コ ー ン . ス テ ィ ー プ ' リ カ ー 、 硫酸ア ン モニ ゥ ム等の窒素源が使用 で き る 。 ま た、 ト マ ト ペー ス ト 、 グ リ セ リ ン、 でん粉、 グル コ ー ス 、 ガラ ク ト 一ス 、 デキ ス ト リ ン等の炭水化物あ る いは脂肪な どの炭素源が 使用 で き る 。 さ ら に食塩、 炭酸カ ル シ ウ ム等の無機塩を 添加 して使用 で き る。 その他必要に応 じて微量の金属塩 を添加す る こ と 力 Sでき る。 こ れ ら の も のは、 力 プラ ザマ ィ シ ン生産菌が利用 し 、 抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン類の 生産に役に立つ も の で あれば よ く 、 公知の放線菌の培養 材料はすべて用 レ、 る こ と 力 Sで き る 。

抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン類の生産は、 ス ト レブ ト ミ セ ス属 に属す る 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン類の生産能を 有する 微生物が使用 さ れる。 具体的に は、 本発明者 ら の 分離 し た ス ト レ ブ ト ミ セ ス · エ ス ピ一 M K 7 3 0 - 6 2 F 2力 S抗生 物質力 プラ ザマイ シ ン類を生産す る こ と は、 本発明者 ら に よ っ て 明 ら かに さ れてい る が、 そ の他の菌株について は、 抗生物質生産菌の 単離の常法に よ っ て 自 然界 よ り 分 離する こ と が可能であ る。 ま た、 ス ト レプ ト ミ セ ス ' ェ ス ピー MK730- 62F2を含めて、 力 プラ ザマイ シ ン生産菌を 放射線照射その他、 変異処理に よ り 抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン類の生産能を高 め る余地 も 残っ てレ、 る 。 さ ら に遺 伝子工学的手法に よ っ て抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン類の 生産 も 可能であ る。

力 プラ ザマイ シ ン類の生産のた めの種母培地 と しては、 寒天培地上、 MK730-62F2株の斜面培養か ら 得た生育物 を 使用する 。

抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン類の製造に 当 た っ ては、 ス ト レブ ト ミ セ ス属に属する 力 プラ ザマ イ シン生産菌 を適 当 な培地で好気的に培養する のが好ま し く 、 そ の培養液 か ら 目 的の 力 プラ ザマイ シ ン を採取す る の に は常用 の手 段を用 レ、 る こ と ができ る。 培養温度は、 力 プ ラ ザマイ シ ン生産菌の発育が実質的に阻害 さ れずに こ れ ら の抗生物 質を生産 し う る範囲で あれば、 特に制約 さ れ る も の でな い。 培養温度は、 使用する 力 プラ ザマ イ シ ン生産菌 に応 じて適当 に選択でき る が、 好ま し く は、 25〜 30 °C の範囲 内の温度 を挙げる こ と ができ る。

こ の MK730-62F2 株に よ る 力 プラ ザマ イ シ ン類の生産 は、 通常は 3 ない し 9 日 間で最高 に達す る が 、 一般に充 分な抗菌活性が培地に付与 さ れる ま で続け る 。 こ の培養 液中の力 プラ ザマイ シ ン類の力価の経時変化は、 H P L C法 ま たはマイ コ バ ク テ リ ゥ ム · ス メ グマテ ィ ス あ る いはマ ィ コパ ク テ リ ゥ ム · バケ を被検菌 と する 円筒平板法に よ り 測定で き る。

第 2 の本発明 の方法においては、 上記の よ う に して得 られた培養物力ゝ ら カ プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の少 く と も 一つ を採取する が 、 採取法 と して は微生 物の生産す る代謝物を採取する の に用 い られ る 手段を適 宜利用す る こ と ができ る。 例 えば、 水 と 混 ざ ら ない有機 溶媒に よ る 抽出 の手段、 各種吸着剤に対する 吸着親和性 の差を利用する 手段、 ゲルろ過、 向流分配を利用 した ク ロ マ ト ダ ラ フ ィ 一等を 単独ま たは組み合わせて利用 し 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F をそれぞれ単独 にま たは何れかの混合物 と し て採取で き る。 ま た、 分離 した菌体か ら は、 適当 な有機溶媒を用 いた溶媒抽出法や 菌体破砕に よ る 溶出法に よ り 力 プ ラ ザマイ シ ン を抽出 し、 上記 と 同様に 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F を単離 して採取する こ と がで き る 。 カゝ く して 、 前記 した 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F 力 S 別 々 にま た は混合物 と して得 られ る。 なお力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の相互の分離は、 後記の実施例 で例示 さ れる よ う に、 適当 な展開溶媒を用 い る 高速液体 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー （ H P L C ) に よ っ て行 う こ と 力； で さ る。

さ ら に 、 第 3 の本発明 では、 一般式 （ I ) で示 さ れる 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の少な く と も 一つ 、 ま たはそれの塩を有効成分 と し て含有 し 、 ま た製 薬学的に許容 さ れる担体を 、 有効成分 と 混和 して含有す る 医薬組成物が提供 さ れる。

第 3 の本発明 に よ る 医薬組成物においては 、 有効成分 と し て の一般式 （ I ) の化合物を 、 製薬学的 に許容でき る 常用 の固体ま たは液状担体、 例 えばエ タ ノ ール、 水、 生理食塩水、 でん粉等 と 混和 して含有する組成物の形で あ る こ と ができ る。

第 3 の本発明 の医薬組成物で用 い る 有効成分であ る一 般式 （ I ) の力 プラ ザマイ シ ンま たはその塩は、 経 口 的 に投与で き 、 あ る いは静脈内 ま た は筋肉内注射 も し く は 腹腔内投与な どに よ り 非経 口 的に も投与する こ と が で き る。

経 口 投与用 の場合に は、 第 3 の本発明の医薬組成物で は 、 有効成分 と し て の一般式 （ I ) の 力 プラ ザマ イ シ ン ま たはその塩を薬学的 に許容で き る慣用 の固体ま た は液 体状の担体 と 混和 し て 、 その混合物を散剤、 錠剤、 カ ブ セ ル剤、 懸濁剤、 シ ロ ッ プ剤等の形で製剤 と する こ と 力 S でき る。

第 3 の本発明 の医薬組成物にお け る 有効成分 と し て の 一般式 （ I )の化合物の含量割合は、 剤形に よ っ て異な る が、 例え ば、 好都合な含量割合は投与単位物の重量の約 2 〜 90%の範囲にあ る のが よ い。

第 3 の本発明の組成物を注射用 に製剤する 場合には、 望ま しい製剤形態 と し ては、 有効成分 と し て の前記の化 合物を含む無菌の水溶液あ る いは無菌の凍結乾燥剤が あ る 。 こ こ に 用 レ、 る 液体担体 と し て は例 えば水 、 含水エ タ ノ ール、 グ リ セ ロ ール 、 プ ロ ピ レ ン グ リ コ ー ル 、 植物油 な どが好ま しい。

本発明 の組成物において有効成分 と して用 い られる一 般式 （ I ) の力 プラ ザマイ シ ンま たはその塩の投与量は、 治療すべ き 細菌感染症の種類、 治療の 目 的お よ び症状の 程度な ど に よ っ て異な る が、 最適な投与量は専門家に よ る適当 な予備試験で決定でき る。 なお、 力 プ ラ ザマイ シ ン B は、 マ ウ ス （ I C R 系、 4 週令、 雌） に対 して静脈 注射時に 75mg/kgの投与量で毒性を示 さ なかっ た。

ま た、 第 4 の本発明 では、 前記の一般式 （ I ) の カ ブ ラ ザマイ シ ン A、 B 、 C 、 E お よ び F を生産する特性を 持ち且つ工業技術院生命工学工業技術研究所に FERM BP - 7218の受託番号で寄託 さ れた ス ト レ プ ト ミ セ ス · エ ス ピ 一 MK730-62F2 株が新規な微生物 と し て提供 さ れる 。

図面の簡単な説明

図 1 は力 プラ ザマイ シ ン A の メ タ ノ ール溶液中の紫外 線吸収ス ぺ ク ト ル であ る 。

図 2 は 力 プラ ザマ イ シ ン A の K B r 錠剤法で測定 し た 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル であ る 。

図 3 は 力 プラ ザマ イ シ ン A の重ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド 溶液中に て室温で測定 し た 5 00 M H zにお け る プ ロ 卜 ン核磁 気共鳴ス ぺ ク ト ル であ る 。

図 4 は力 プラ ザマイ シ ン Aの重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド 溶液中 にて室温で測定 した 1 2 5 M H zにお け る 炭素 1 3核磁気 共鳴スぺ ク ト ゾレであ る 。

図 5 は力 プラ ザマイ シ ン B の メ タ ノ ール溶液中の紫外 線吸収ス ぺ ク ト ノレ であ る。

図 6 は力 プラ ザマイ シ ン B の K B r 錠剤法で測定 した 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル であ る。

図 7 は 力 プ ラ ザマ イ シ ン B の重 ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド ： 重水 （ = 1 0 ： 1 ) の混合溶媒中 にて室温で測定 した 5 00 MH zにお け る プロ ト ン核磁気共鳴ス ぺ ク ト ル であ る 。

図 8 は 力 プ ラ ザマ イ シ ン B の重 ジ メ チ ノレ ス ノレ ホ キ シ ド ： 重水 （ = 1 0 ： 1 ) の混合溶媒中 に て室温で測定 し た 1 2 5 MH zにおけ る 炭素 1 3核磁気共鳴ス ぺ ク ト ノレ であ る。

図 9 は 力 プラ ザマイ シ ン C の メ タ ノ 一ル溶液中の紫外 線吸収ス ぺ ク ト ノレ であ る。

図 1 0は 力 プラ ザマイ シ ン C の K B r 錠剤法で測定 し た 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル であ る。

図 1 1は 力 プラ ザマイ シ C の重 ジ メ チルス ノレホ キ シ ド溶 液中 にて室温で測定 し た 5 00 MH zにおけ る プ ロ ト ン核磁気 共鳴ス ぺ ク ト ル であ る 。 図 12は力 プラ ザマイ シ ン C の重ジメ チル ス ルホキ シ ド 溶液中にて室温で測定 した 125MHzにお け る炭素 13核磁気 共 S ス ぺ ク ト ノレ であ る。

図 13は力 プラ ザマイ シ ン E の メ タ ノ ール溶液中の紫外 線吸収ス ぺ ク ト ル であ る。

図 14は力 プラ ザマイ シ ン E の K B r 錠剤法で測定 した 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル であ る 。

図 15は力 プラ ザマ イ シ ン E の重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド 溶液中にて室温で測定 した 500MHzにお け る プ ロ ト ン核磁 気共鳴ス ぺ ク ト ル であ る。

図 16は力 プラ ザマイ シ ン E の重ジメ チノレ ス ノレホ キ シ ド 溶液中にて室温で測定 した 125 MH zにお け る炭素 13核磁気 共 t; ス ぺ ク ト ノレ であ る。

図 17は力 プラ ザマイ シ ン F の メ タ ノ ー ル溶液中の紫外 線吸収ス ぺ ク ト ル であ る。

図 18は力 プラ ザマ イ シ ン F の K B r 錠剤法で測定 し た 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル であ る。

図 19は力 プラ ザマイ シ ン F の重ジメ チル ス ノレホ キ シ ド 溶液中 にて室温で測定 し た 500MHzにおけ る プ ロ ト ン核磁 気共鳴ス ぺ ク ト ル であ る。

図 20は 力 プラ ザマイ シ ン F の重ジ メ チル ス ノレホ キ シ ド 溶液中 にて室温で測定 した 125 MH zにお け る 炭素 13核磁気 共鳴ス ぺ ク ト ノレ であ る。

発明 を実施する た め の最良の 方法 以下に実施例に よ り 本発明 を さ ら に詳細に説明す る。 実施例 1

抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の 製造

寒天斜面培地に培養 したス ト レプ ト ミ セ ス ' エ ス ピー MK730-62F2 (受託番号 FERM BP— 7218で寄託） を、 ガ ラ ク ト 一 ス 2 % 、 デ キ ス ト リ ン 2 % 、 グ リ セ リ ン 1 %、 バ ク ト ソ ィ ト ン （デ ィ フ コ 社製） 1 % 、 コ ー ン · ス テ ィ ープ リ カ ー 0. 5%、 硫酸ア ンモ ニ ゥ ム 0. 2%、 炭酸カ ル シ ゥ ム 0. 2 % を含む液体培地 （ p H 7. 4に調整） を三角 フ ラ ス コ （ 500ml容）に 110mlずつ分注 し て常法に よ り 120 °C で 20 分滅菌 した培地に接種 した。その後に 30°Cで 2日 間 にわた り 回転振 と う 培養 し 、 種母培養液を得た。

ト マ ト ぺ一ス ト （力 ゴメ 社製） 2. 4%、 デキ ス ト リ ン 2. 4%、 酵母エ キ ス （ オ リ エ ン タ ル社製） 1. 2%、 塩化 コ バル ト 0. 0006 % ( p H 7. 4に調整） の組成の培地 15 リ ツ ト ルを タ ン ク 培養槽 （ 30リ ッ ト ル容） 中 に調製 し 、 滅菌 後 に生産培地 と して用 いた。 こ の生産培地に 、 上記の種 母培養液の 2 %量を接種 し、 27°C 、 1 分間 あた り 通気量 1 5リ ッ ト ノレ 、 200rpmの撹拌速度 を用 い る培養条件で 6日 間 タ ン ク 培養 した。

こ の よ う に し て得 ら れた培養液 を遠心分離 して培養 ろ 液 12リ ッ ト ル と 菌体を 分離 し た。 つづ い て 、 菌体に 6 リ ッ ト ノレ の メ タ ノ ールを力□ えて よ く 撹拌 し 、 菌体力ゝ ら カ ブ ラザマイ シ ン類を メ タ ノ ールで抽出 し た。 培養 ろ液 と 菌 体抽出液 （ メ タ ノ ール抽出液） を合わせて、 得 られた混 合液 18リ ッ ト ルを芳香族系合成吸着剤 ダイ ヤイ オ ン HP- 20 ( 日 本、 三菱化学株式会社製） の カ ラ ム 750 mlに通過 させ、 力 プラ ザマイ シ ン類を吸着 さ せた。 こ の ダイ ヤィ オン HP-20に脱ィ オン水、 50 %メ タ ノ ール水、 80%メ タ ノ —ノレ水、 80 %ア セ ト ン水、 ア セ ト ン を各 2. 25 リ ッ ト ル 順次通過 さ せた。 力 プラ ザマ イ シ ン類は、 80 %ア セ ト ン 水での溶出画分中 に多 く 溶出 さ れた。 ま た、 50%メ タ ノ一 ル水溶出画分お よ び 80%メ タ ノ 一ル水溶出画分に も カ プ ラ ザマイ シ ン類が含ま れていたので、 両者を合わせて再 度、 ダイ ヤイ オン HP- 20カ ラ ム （ 750 ml) に通過 さ せ、 こ れに よ り 力 プラ ザマイ シ ン類をカ ラ ム の吸着剤に吸着 さ せ、次レ、でカ ラ ム に 80%メ タ ノ ーノレ水 2. 25リ ッ ト ルを通過 させた。 その後、 カ ラ ム 力、 ら 80%ァセ ト ン水 2. 25リ ッ ト ル で溶出 さ せた。 こ の 80%ァセ ト ン水での溶出液を先の 80% アセ ト ン水溶出画分に合わせ、 減圧下で濃縮乾固 し て力 プラ ザマイ シ ン類を含む粗精製物 10. 1 gを得た。

こ の力 プラ ザマイ シ ン類を含む粗精製物の 10. 1 gを ク 口 ロ ホ ノレ ム 一 メ タ ノ ー ル （ =1 : 2) の混合溶媒の 50mlに溶 解 し て、 その溶液にキーゼル グール （ メ ルク 社製、 Art · 10601 ) 50mlを力 tl え溶媒を減圧下で濃縮乾固 し た。 こ の よ う に力 プラ ザマ イ シ ン類を キーゼル グールに 吸着 さ せた も の を 、 シ リ カ ゲル カ ラ ム （内径 54 mm X長 さ 200 mm) の 上にのせ、 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を行っ た。 こ の際には、 展開溶媒 と し て ク ロ 口 ホ ル ム 一 メ タ ノ ー ル一 水 （ =

4 ： 1 ： 0. 1) 、 ク ロ ロ ホ ノレ ム 一 メ タ ノ ー ノレ 一水 ( = 2 ： 1 ： 0. 2) 、 ク ロ ロ ホ ノレ ム 一 メ タ ノ ー ル一水 （ = 1 ： 1 ： 0.2) の各混合液の各 1. 35 リ ッ ト ル を用い、 順次に展開 を行っ た。 フ ラ ク シ ョ ン コ レ ク タ ー に よ っ て 、 シ リ カ ゲ ルカ ラ ム 力、 ら の溶出液を、 フ ラ ク シ ョ ン No. 1 〜 53では 20gづっ分画 し、 フ ラ ク シ ョ ン No. 54〜 117では 19gづっ分 画 して集め る と 、力 プラ ザマイ シ ン類を含む活性画分は、 フ ラ ク シ ョ ン No. 66〜 83に溶出 さ れた。 これ ら 活性画分を 集めて減圧下で濃縮乾固 し 、 625. 3 mgの 力 プラ ザマイ シ ン類を含む粗精製物を得た。

こ の 力 プラ ザマイ シ ン類を含む粗精製物に メ タ ノ ー ル

5 ra 1を力 D えて溶解 した。得 ら れた溶液 を 5 °Cの冷喑下に静 置する と 、 力 プ ラ ザマ イ シ ン類を含む析出沈殿画分の

537. 3 mgを得た。

つづいて、 こ の力 プラ ザマイ シ ン類を含む析出沈殿を H PLC ( CAPCELL PAK C 18 20 X 250mm, 資生堂製）を用 レヽ精 製 した。 こ の HPLCでは、 展開溶媒 と し て 50%ァセ ト ニ ト リ ノレ水 - 0. 05%ぎ酸 （流速 ： 120 ml/min) に よ り 展開す る と 、 61〜 68分後 に 力 プラ ザマ イ シ ン A が溶出 さ れ、 52〜 60分 後 に力 プラ ザマイ シ ン B が溶出 さ れ 、 39〜 41分後 に カ プ ラ ザマイ シ ン C が溶出 さ れ、 25〜 28分後 に に 力 プラ ザマ イ シ ン E が溶出 さ れ、 ま た 22〜 25分後 に 力 ブ ラ ザマ イ シ ン F が溶出 さ れた。 それぞれの活性分画を集めて、 減圧 下で濃縮乾固す る こ と に よ り 、 力 プラ ザマイ シ ン A を 56.9mg、 力 プラ ザマイ シン B を 90.3rag、 力 プラ ザマイ シ ン C を 19. 7mg、 力 プ ラ ザマイ シ ン E を 30. 3mg、 お よ び力 プラ ザマイ シ ン F を 25.5mg得た。

産業上の利用可能性

以上に説明 した と お り 、 本発明 に よ り 新規な抗生物質 と して一般式 （ I ) で表 さ れ る 力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F は、 それぞれに、 各種の抗酸性菌、 細菌 お よ びそれ ら の薬剤耐性菌株に対 してす ぐれた抗菌活性 を有する。 従っ て、 本発明の力 プラ ザマイ シ ン類は抗酸 性菌お よ び細菌の感染症を治療す る の に有効であ っ て有 用であ る。

Claims

請求の範囲

次の一般式 （ I )

[式中、 R は力 プラ ザマイ シ ン A では ト リ デ シル基であ り 、 力 プラ ザマ イ シ ン B では 1 1— メ チル ー ドデシル基で あ り 、 力 プラ ザマ イ シ ン C では ドデシル基で あ り 、 カ プ ラ ザマイ シ ン E では ゥ ンデシル基であ り 、 そ して カ プラ ザマ イ シ ン F では 9 — メ チルーデ シル基であ る ] で示 さ れる化合物であ る 、 抗生物質力 プラ ザマイ シ ン A、 カ ブ ラ ザマ イ シ ン B 、 力 プ ラ ザマ イ シ ン C 、 力 プ ラ ザマ イ シ ン E ま た は力 プラ ザマ イ シ ン F 、 あ る いはそれ ら の製薬 学的に許容でき る塩。

2 . 次式 （ l a )

で示 さ れ る 力 プ ラ ザマ イ シン A [請求の範囲 1 に示 さ れ る 一般式 （ I ) の化合物で R が ト リ デ シル基一 （ CH ₂ ) 一 CH ₃ で あ る 場合の化合物 ] であ る 請求の範囲 1 に記載 の抗生物質。

3 . 次式 （ lb)

で示 さ れる 力 プラ ザマ イ シ ン B [請求の範囲 1 に示 さ れ る 一般式 （ I ) の化合物で R が 11ー メ チルー ドデシル基 CH₃

(C^j^CH

\

CH₃ であ る場合の化合物 ] であ る 請求の範囲 記載の抗生 物質。

4 . 次式 （ I c )

で示 さ れ る 力 プラ ザマ イ シ ン c [請求の範囲 1 に示 さ れ る 一般式 （ I )の化合物で R が ドデシル基 ー （ C H ₂ ) , — C H ₃ であ る場合の化合物 ] であ る 請求の範囲 1 に記載の抗生 物質。

5 . 次式 （ I e )

で示 さ れ る 力 プラザマイ シ ン E [請求の範囲 1に示 さ れる 一般式 （ I )の化合物で R が ゥ ンデシル基ー （CH₂) ₁₀- CH₃ であ る場合の化合物 ] であ る 請求の範囲 1 に記載の抗生 物質。

6 . 次式 （ If)

で示 さ れ る 力 プラ ザマ イ シ ン F [請求の範囲 1 に示 さ れ る 一般式 （ I )の化合物で R が 9 ー メ チルー デシル基 CH3

であ る場合の化合物 ] であ る請求の範囲 1 に記載の抗生 物質。

7 . ス ト レプ ト ミ セ ス 属に属 して 、 請求の範囲 1 に記載 の一般式 （ I ) で示 さ れる抗生物質力 プラ ザマ イ シ ン A、 力 プラ ザマ イ シ ン B 、 力 プラ ザマ イ シ ン C 、 力 プラ ザマ イ シ ン E お よ び力 プラ ザマイ シ ン F の少 く と も 一 つ を生 産する 生産菌を培養 し 、 その培養物か ら 、 力 プラ ザマイ シ ン A、 B 、 C 、 E お よ び F の少 く と も 一つ を採取す る こ と を特徴 と す る 、 請求の範囲 1 に記載の抗生物質カ ブ ラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び （ま たは） F の製造 方法。

8 . 力 プラ ザマイ シ ン A、 B 、 C 、 E お よ び F の 少 く と も一つ を生産する 菌 と して、 工業技術院生命工学工業技 術研究所にブダぺス ト 条約の規約下に FERM BP- 7218の受 託番号で寄託 さ れてあ る ス ト レブ ト ミ セ ス · エ ス ピ ー MK 730-62F2を使用する 、 請求の範囲 7 に記載の方法。

9 . 請求の範囲 1 に記載の一般式 （ I ) で示 さ れる 抗生 物質力 プラ ザマイ シ ン A 、 B 、 C 、 E お よ び F の少な く と も 一つ 、 あ る いはそ の製薬学的に許容で き る塩を有効 成分 と し て含有 し 、 ま た製薬学的 に許容 さ れ る 担体を 、 有効成分 と 混和 し て含有す る 医薬組成物。

10.抗細菌性組成物であ る請求の範囲 9 に記載の組成物。

11. 請求の範囲 1 に記載の一般式 （ I ) で示 さ れる 抗生 物質力 プラ ザマイ シ ン A、 B 、 C 、 E お よ び F を生産す る特性を持ち且つ工業技術院生命工学工業技術研究所に FERM BP- 7218の受託番号で 寄託 さ れた ス ト レ プ ト ミ セ ス · エ ス ピー MK730 - 62F2。