WO1999053318A1

WO1999053318A1 - Procedes de detection d'anticorps et dispositif de detection d'anticorps

Info

Publication number: WO1999053318A1
Application number: PCT/JP1999/001921
Authority: WO
Inventors: Tetsuya Tachikawa; Tetsuya Oda; Shigeo Takahashi; Atsunari Noda; Suguru Akamatsu; Kiyonori Katsuragi; Fusaichi Machikawa
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1998-04-14
Filing date: 1999-04-09
Publication date: 1999-10-21
Also published as: KR20010013751A; CN1163753C; BR9906351A; ES2306509T3; CN1263599A; KR100766098B1; TWI250281B; EP0989406A4; US20030175699A1; ATE395598T1; AU757629B2; AU3168799A; HK1027397A1; EP0989406A1; DE69938701D1; US7368277B2; EP0989406B1; CA2293677C; ID23440A; CA2293677A1

Description

明細書

抗体測定方法及び抗体測定装置技術分野

本発明は、被検試料中の抗体を検出乃至測定する方法、殊に臨床検体としての体液、特に尿中に存在するバクテリアやウィルス等の感染源に向けられた抗体を精度よく、また簡便かつ特異的に検出乃至測定する方法に関する。

また本発明は、被検試料中の抗体を検出乃至測定する装置、殊に臨床検体としての体液、特に尿中に存在する感染源に向けられた抗体を精度よく、また簡便かつ特異的に検出乃至測定する装置に関する。

さらに本発明は、上記抗体測定方法及び上記抗体測定装置を利用した測定法に有用な抗体測定用試薬キットに関する。背景技術

体液中に存在する、バクテリアやウィルス等の感染源 (病原体）に向けられた特異抗体の検出は、感染の有無を間接的に診断するために有用である。このため、従来から広く診断分野において、病原体またはその由来成分を測定系の抗原として利用して該抗体を検出する免疫測定法並びに免疫測定装置が用いられている。

しかしながら、測定系の抗原としてこのような病原体又はその由来成分を使用する免疫測定法の場合、測定系の構築が容易であるという利点はあるものの、十分満足できる感度や特異性が得られず、未だ改良の余地が残されている。

また免疫測定法で用いられる免疫測定装置として、ストリップの形態の 1 片の多孔質基材上で結合アツセィ (抗原抗体反応）を行うものを挙げることができる。この種の測定装置は、上記多孔質基材の毛細管特性により、ストリツプの一端に付した液体が順次一定方向に毛細管移動するという性質を利用したものである。つまり、分析対象物を含む被検試料（液体）を、種々の反応成分が特定の位置に順次配置されてなるストリップの一端に付すと、被検試料は該ストリップに沿って順次毛細管移動し、これにより所望の位置で反応成分が接触して反応する。また分析対象物の存在は、リガンドとリセプ夕一の間の結合反応に含まれる検出可能な標識からのシグナルを検出することにより確認、測定される。

これらの原理を用いるィムノアッセィは、しばしばィムノキヤビラリーアッセィ又はィムノクロマトグラフィ —アツセィなどと呼ばれ、例えば国際公開第 8 7 / 0 2 7 7 4号、 E P 0 3 0 6 7 7 2号等に開示されている。またその改良法としては特開昭 6 4 - 6 3 8 6 5号公報、特開平 1 一 2 9 9 4 6 4号公報及び特開平 6 — 1 6 7 4 9 7号公報に記載された発明を挙げることができる。

かかる測定装置は、特別な測定機器等を必要とせず、簡便で短時間で測定を終了できるという利点はあるものの、感度や特異性の面からは未だ改良の余地が残されている。

また、 1テストずつ独立した測定であるため、陰性或いは陽性コントロール検体を同時に測定することができず、得られた測定値が適切な測定に基づく信頼性あるものであるかどうかの判断ができないという問題を有してレる。

一般に、尿や唾液等の体液は、血液と比較して調製が非侵襲的であり簡便かつ安全であることから、臨床検査において望ましい検体である。

しかしながら、その中に存在する抗体量は、血液中の抗体量の通常 1千分の 1から 1万分の 1程度と非常に低濃度である。加えて、水分を多量に摂取した被験者の尿サンプルは極端に薄いといったように、サンプル間で抗体の量にかなりのバラツキがある。この場合、上記するような従来の抗体測定装置では、被検試料が薄すぎて抗体が検出できない場合も「陰性」結果を示すため、結果が真なる「陰性」なのか、被検試料が薄すぎて「陰性（偽陰性）」なのか、これら両者を区別できないという問題を含んでいた。

また、抗体量の少ない被検試料を対象とする場合、高感度に検出できる測定系が必要とされるが、その結果検体に存在する夾雑物に基づいて、非特異反応によって生じた副生成物を検出しやすくなり、偽陽性の判定結果を与えるという問題もある。

このため、尿や唾液などの体液を検体とする場合であつても十分な検出精度を与える抗体測定系、つまり高い特異性を有することにより偽陰性及び偽陽性検出が低減された、信頼性の高い測定系が必要とされる。本発明の第一の目的は、体液等の被検試料中に存在する、感染源に向けられた抗体を高感度かつ高い特異性をもって検出できる抗体測定技術（抗体測定方法及び抗体測定装置）を提供することである。

本発明の第二の目的は、尿等の比較的抗体量の少ない体液を被検試料とする場合にも、被検試料中の夾雑物に基づいて生じる「偽陽性」反応を抑制して、精度の高い抗体測定方法を提供することである。

本発明の第三の目的は、ィムノキヤビラリ一アツセィ又はィムノクロマトグラフィーアツセィの改良法であり、被検試料中の検出対象である標的抗体の存在及び量を、被検試料に基づいて生じる「偽陰性」と「真性陰性」とを区別して、精度よく検出測定できる抗体測定技術を提供することである。図面の簡単な説明

図 1 は、本発明の抗体測定装置に含まれるストリップ形状の固相支持体の構図を示す図である。なお、図中記号 1 は第 1領域、 2 はトレーサー領域、 3 は第 2領域、 4は第 3領域、 5 はテスト部位及び 6 はコントロール部位を示す。

図 2 は、本発明の抗体測定装置による被検試料中の標的抗体の測定原理を示す図である。なお図に示す各記号は図 1 と同じである。

図 3 は、本発明の抗体測定装置に含まれるストリップ形状の固相支持体（A ) の略図、並びに該固相支持体を包囲するハウジング（ B ) の略図を示す。図中、記号 1 〜 6 は図 1 と同じであり、記号 7 はハウジングの上部セクシヨン、 8 はハウジングの下部セクション、 9 は試料添加窓及び 1 0は検出窓を示す。

図 4は、実施例 1 ( 5 ) (i)に従う尿中 H. ピロリ抗体の測定結果を示す図面である。図中、〇は ¹³ C— U B T テストで陽性判定された H. ピロリ感染者の尿サンプルの結果を、鲁は同テストで陰性判定された H . ピロリ非感染者の尿サンプルの結果をそれぞれ示す。

図 5は、実施例 1 ( 5 ) (ii)に従う尿中 H. ピロリ抗体の測定結果を示す図面である。図中、縦軸は吸光度 (0. D.450nm) を、横軸は¹³ C— U B Tテストで確認した H. ピロリ感染陽性群及び同陰性群を示す。

図 6は、実施例 1 ( 6 ) に従う尿中 H. ピロリ抗体の測定結果を示す図面である。図中、〇は¹³ C— U B Tテストで陽性判定された H. ピロリ感染者の尿検体の結果を、書は同テストで陰性判定された H. ピロリ非感染者の尿検体の結果をそれぞれ示す。

図 7は、実施例 2 ( 2 ) に従う尿中 H B c抗体の測定結果を示す図面である。図中、翁は血中 H B c抗体陽性者の尿検体の結果を、〇は血中 H B c抗体陰性者の尿検体の結果をそれぞれ示す

図 8は、尿中 H I V抗体の測定において偽陽性の結果を与える尿検体のゲル濾過と各分画の抗体反応性を示す図である（実施例 3 ( 1 ) ) 。なお図中縦軸は、吸光度 (0. D. ) を、横軸はゲル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実線は 2 8 0 nmにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上記抗ヒト（ I g G + I g M) 抗体による検出結果を、白三角線は上記抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体による検出結果を、黒三角線は上記抗ヒト I g G ( F a b特異的）抗体による検出結果をそれぞれ示す。

図 9は、実施例 5に従う尿中ピロリ抗体の測定結果を示す図である。図中、縦軸は吸光度（0. D.450- 650nm) を、横軸は ¹³ C— U B Tテストで確認した H . ピロリ感染陽性群（ + ： n = 56) 及び同陰性群（一： n = 44) を示す。

図 1 0は、実施例 6 に従う尿中風疹ウィルス（ルべラ）抗体の測定結果を示す図である。図中、縦軸は吸光度（0. D.450- 650ηπι) を、横軸は巿販キットで測定された血清レベルにおけるルベラ抗体陽性群（ + ： η = 76) 及び同陰性群（一： η = 23) を示す。

図 1 1 は、本発明の抗体測定装置の第 2領域におけるテスト部位及びコントロール部位を示す図である（実施例 7 ( 3 ) ) 。

図 1 2は、本発明の抗体測定装置を使用して尿、全血液及び血漿中の Η. ピロリ抗体を測定した結果を、比較装置（Α〜 Ε) と比較した図である。なお、図中「Spec if icityj は、 ¹³C— U B Tテストで陰性が確認された被験者の各検体を各測定装置で測定した時に、陰性として検出できた割合（陰性率）を示し、「Sensitivity」は、 ¹³C— U B Tテス卜で陽性が確認された被験者の各検体を各測定装置で測定した時に、陽性として検出できた割合（陽性率）を示す。また比較装置 A〜Hは下記の測定装置を示す。

A： He 1 i tes t (Co r t ec s Diagnos t ics社製)

B： H. pylori - Check- 1

(Bio-Medical Products社製）

C： First Check H. pylori

(Worldwide Medical Corp社製）

D： Biocard Helicobacter pylori IgG

(Ant i Biotech Oy社製）

E : Ins ta Test H. Pylori

(Cor tez Diagnostics In 社製)

F： One Step H. pylor i Test

( Tec o D i agnos t i c s社製)

G： H. pylori SPOT

(International Immuno-D i agnos t i cs社製) H： Quick Stripe H. pylor i

(Di atec Diagnostics Inc.社製) 発明の開示

本発明者らは、尿などの比較的抗体存在量の少ない体液を被検試料とした場合でも標的抗体が高精度に測定できる測定系を開発すべく、鋭意研究を進めていたところ、抗原抗体反応において抗原に非特異的に結合する抗体成分（以下、非特異結合性抗体成分という。）が測定系に存在することによって非特異反応が生じており、それが偽陽性の判定結果を招いて検出精度を低下させていることを突き止めた。

かかる知見に基づいて本発明者らは更なる研究を進めたところ、測定対象たる標的抗体とそれに対する抗原との抗原抗体反応を大腸菌に由来する成分の存在下で行うことにより、非特異的な抗原抗体反応を抑制することができ、その結果偽陽性の判定結果を低減させて検出精度を有意に向上させることができることを見出した。

また本発明者らは、上記非特異結合性抗体成分が、 I g Gの軽鎖（ L鎖）或いは同 F ( a b ) 領域の抗原性を保持した I g G断片化物及び/又は同変性物であることを見いだし、当該抗体成分が血清抗体測定系において広く採用されている一般の抗体検出試薬（二次抗体等）と交叉反応し、その結果偽陽性の判定結果を招いていることを確認した。かかる知見に基づいて、本発明者らは抗体検出試薬として検出対象である標的抗体 I g Gの F c 領域に特異的に結合する性質を有する試薬を用いることにより、抗体測定系における非特異反応を抑制することができ、その結果偽陽性の判定結果を低減させて検出精度を有意に向上させることができることを確認した。

また本発明者らは、抗体測定装置（ィムノキヤビラリ —アツセィ装置、ィムノクロマトグラフィーアツセィ装置）の改良を目指して検討していたところ、測定装置のストリップの反応領域（判定領域）に、検出対象である標的抗体を検出する部位（「テスト部位」）に加えて、被検試料中に含まれる任意の抗体を検出測定する「コントロール部位」を設けることにより、「真性陰性」を「偽陰性」と区別して正確に検出測定できることを見出した。つまり、かかる測定系によれば、被検試料の濃度が薄い（すなわち、被検試料中の総抗体量が少ない）などの理由で判定不能な不適性な被検試料を使用した場合は「コントロール部位」が陰性を示して判定不能の表示する。一方、被検試料が適性の濃度の抗体量を有する場合は「コントロール部位」は陽性を示して被検試料の適正性を表示する。この場合、「テスト部位」における結果により、被検試料中の標的抗体の存在の有無、すなわち「陽性」であるか「真性陰性」であるかを判定することができる。

なお、抗体測定装置（ィムノキヤピラリーアツセィ装置、ィムノクロマトグラフィーアツセィ装置）の改良法を開示する特開平 1 一 2 9 9 4 6 4号公報及び特開平 6 ― 1 6 7 4 9 7号公報には、本発明と同様に判定領域にテスト部位に加えてコントロール部位を設けたアツセィ装置が記載されているが、かかるコントロール部位は、ストリップの上流域に配置した標識体が毛細管移動により移動してテスト部位を通ったか否かを確認判定するものであり、本発明とは全く異なるものである。

さらに本発明者らは、上記改善された抗体測定装置において、標的抗体とそれに対する抗原との結合反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことにより抗原抗体反応における非特異反応が抑制でき、また抗体検出試薬として I g Gの F c頜域に結合特異性を有する試薬を用いることにより抗原抗体結合物に対する非特異反応が抑制でき、しかして、偽陽性検出が有意に低減できることも確認した。

本発明は、かかるいくつかの知見に基づいて完成されたものである。

すなわち、第一に本発明は、偽陽性検出が低減された高い検出精度を有する抗体測定方法である。

(1-1) かかる抗体測定方法の一態様として、被検試料中の標的抗体を抗原抗体反応を利用して検出測定する方法であって、当該抗体と抗原との抗原抗体反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことを特徴とする抗体測定方法を挙げることができる。

なお、かかる抗体測定方法には下記の方法が包含される。

(a) 大腸菌由来成分が、大腸菌可溶性成分又はリポ多糖のいずれか少なくとも 1種である抗体測定方法。

(b) 大腸菌由来成分を、測定系の抗原 1 gあたり， 0.

l 〜 1 0 0 x g程度、好ましくは 0. 5〜 5 0 /x g 程度の割合で存在させる抗体測定方法。

(1-2) 抗体測定方法の他の態様として、被検試料中の標的抗体をサンドイッチ法に従って検出測定する方法であって、抗体検出試薬として該抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有する第二抗体を含む試薬を用いることを特徴とする抗体測定方法を挙げることができる。

なお、かかる抗体測定方法には下記の方法が包含される。

(a) 第二抗体が F c特異的抗 I g G抗体である上記抗体測定方法。 (b) 被検試料中の標的抗体と当該抗体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原との抗原抗体反応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定対象抗体と該抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有する第二抗体との反応工程を含む抗体測定方法。

(c)抗原抗体反応を大腸菌由来成分の存在下で行う抗体測定方法。

第二に、本発明は抗体測定装置に関する。当該装置には以下の態搽を含めることができる。

(2-1) 少なくとも（a)被検試料を接触させる第 1領域及び（b)該被検試料中の抗体を反応させる第 2領域を、被検試料が毛細管現象により該第 1領域から第 2領域に輸送されるように設けてなる固相支持体、並びに第 2領域での反応結果を検出するための標識手段を含有する測定装置であって、上記（b)第 2領域に、（i)検出対象である標的抗体を補足するリガンドを固定化したテスト部位と（ii)被検試料中の任意抗体を捕捉するリガンドを固定化したコントロール部位とを有することを特徴とする抗体測定装置抗体測定装置。

(2-2) テスト部位に固定化されたリガンドが、被検試料中の標的抗体に対する抗原である抗体測定装置。

(2-3) コントロール部位に固定化されたリガンドが、被検試料中の任意抗体を捕捉する抗ヒトイムノグロプリン抗体である抗体測定装置。

(2-4) 標識手段として、標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識化されたリガンドを有する抗体測定

(2-5) 標識手段が、標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識化されたリガンドであって、該標識化リガンドは固相支持体の第 2領域より上流域に脱離可能に支持されており、被検試料と接触すると該試料中の標的抗体及び任意抗体と反応してそれぞれ標的抗体 Z標識化リガンド—複合体及び任意抗体標識化リガンドー複合体を形成し、毛細管現象によって第 2領域に輸送されておのおのテスト部位及びコントロール部位に結合するものである抗体測定装置。

(2-6) 標識化リガンドが、固相支持体の第 1領域と第 2領域との間に位置する領域（トレーサー領域）に支持されてなる抗体測定装置。

(2-7) 標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識化リガンドが、標識化された抗ヒトイムノグロブリン抗体である抗体測定装置。

(2-8) 上記抗ヒトイムノグロブリン抗体が、ィムノグロブリン Gの F c頜域に結合特異性を有する抗 I g G抗体である抗体測定装置。

(2-9) 固相支持体が、第 1領域及び第 2領域に続いて更に吸収頜域を有し、これにより第 1領域から第 2領域に輸送された被検試料が毛細管現象によりさらに吸収領域に輸送される抗体測定装置。

(2-10) 第 2領域のテスト部位における標的抗体の結合反応が大腸菌由来成分の存在下で行われる抗体測定装置。

第三に、本発明は上記抗体測定装置を用いた、被検試料中の標的抗体の固相アツセィ方法に関する。当該方法には以下の態様を含めることができる。

(3-1) 被検試料を上記抗体測定装置の第 1 領域に接触させ、第 2領域のコントロール部位が発色している条件のもとで、第 2領域のテスト部位の発色の有無を検出することからなる、標的抗体の固相アツセィ方法：

(3-3) 抗体測定装置の第 2領域のテスト部位における標的抗体の結合反応を大腸菌由来成分の存在下で行う標的抗体の固相ァッセィ方法。

第四に本発明は、前述する抗体測定方法に用いられる抗体測定試薬キットに関する。かかる抗体測定試薬キッ卜の態様として次のものを含めることができる。

(4-1) 大腸菌由来成分を含むことを特徴とする抗体測定用試薬キット。

(4-2) 更に固相化されていてもよい抗原又は抗体検出試薬を含有する抗体測定用試薬キット。

(4-3) 抗体検出試薬として F c特異的抗 I g G抗体を含むことを特徴とする抗体測定用試薬キット。

(4-4) 前述する本発明の抗体測定装置を含む抗体測定用試薬キット。

( 1 ) 抗体測定方法

まず、第一の発明である抗体測定方法について説明する。

本発明の抗体測定方法は、抗体免疫測定法の改良方法であり、非特異反応を抑制することにより偽陽性検出を減少させることができることを特徴とする。

(1-1) 上記抗体測定方法の一態様として、被検試料中に含まれる標的抗体と該抗体の抗原との抗原抗体反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことを特徴とする方法を挙げることができる。当該方法によれば、抗原抗体反応における非特異的反応を有意に抑制でき、その結果偽陽性の判定結果の発生を減少することができる。

ここで用いられる大腸菌由来成分は、大腸菌 (Escher ichia coli) に由来する成分であれば特に制限されず、例えば、その蛋白質成分、糖質成分、脂質成分又はその混合成分であることができる。好ましくは、大腸菌の可溶性抽出物、またはリポ多糖（L P S ) を例示することができる。

上記大腸菌由来成分の調製方法は、特に制限されず各種の方法によることができる。通常、任意の大腸菌を該大腸菌の生育に適した培地を用いて生育増殖させ、得られた菌体を集菌して、超音波破碎機等を利用した物理的手段により或いは界面活性剤等を用いて破砕若しくは可溶化することにより、可溶性成分（可溶性抽出物）として調製することができる。また、 L P Sは、 '有機溶媒、例えば、フエノール、クロ口ホルム及びエーテル等の単溶媒又は 2若しくは 3種の混合溶媒を用いて抽出することにより調製することもでき、また遺伝子工学的手法により人工的に調製することもできる。また、これらは簡便には市販品を使用することもできる（例えば、リポポリサッカライド E. coli ： Di fco社、リポポリサッカライド E. col i ：シグマ社）。

本発明が対象とする被検試料としては、「体液」を好適に挙げることできる。「体液」とは、測定対象となる標的抗体の存在が認められる生体（ヒ卜、その他の動物を含む）の体液であれば特に限定されることなく、一般 T

18 の臨床検査において検体とされる体液を広く意味するものである。具体的には血清，血漿を含む血液、尿、脊髄液、羊水、唾液、汗等の体液を例示することができる。特に本発明は、従来から抗体検出用検体としての使用が望まれていた非侵襲的生体試料、たとえば尿、唾液及び汗、好ましくは尿における検出精度の問題を解決するものであり、ゆえに体液として好ましくはこれらの生体試料を例示することができる。

また、測定対象である「標的抗体」は、その測定乃至検出が望まれる抗体であれば特に限定はなく、例えば生体にとって異物である各種の感染源に向けられた抗体であることができる。

かかる感染源としては、特に限定はなく、ヒト、その他の動物へ感染しその結果として抗体産生が認められる各種の病原体を挙げることができる。具体的には、例えば、 H I V (ヒト免疫不全ウィルス）、 A型， B型及び C型等の各種肝炎ウィルス、風疹ウィルス、インフルェンザウィルス、麻疹ウィルス、サイトメガロウィルス、単純へルぺスウィルス、水痘 · 帯状へルぺスウィルス、アデノウイルス、ェンテロウィルス奪のウィルス類；へリコバク夕一ピロリ菌（H. py l o r i ：以下、単に H . ピロリ菌ともいう）、クラミジァ、結核菌、スピロヘータ、淋菌、梅毒菌、マイコプラズマ等のバクテリア類（大腸菌を除く）；及びトキソプラズマ、赤痢アメーバ一、ッッガムシ等の原虫類等を挙げることができる。好ましくは、 H I V、各種肝炎ウィルス、風疹ウィルス、インフルェンザウィルス、麻疹ウィルス、ヘルぺスウィルス等のウィルス類；ヘリコバク夕一ピロリ菌等のバクテリア類であり、特に好ましくはへリコパクターピロリ菌等のバクテリア類である。

本発明の測定方法において用いられる抗原としては、検出すべき標的抗体と抗原抗体反応する抗原であれば特に制限はなく、例えば既存の血清抗体測定系において採用されている抗原をいずれも良好に採用することができる。これらは、前述するようなウィルスやバクテリア等の病原体そのものであってもよいが、少なくとも当該病原体に固有の抗原決定基を有するものであればよい。例えば、病原体を加温処理や放射線照射等により不活性化したもの、病原体を界面活性剤等で抽出処理して得られる抗原、また、化学合成や遺伝子工学的手法により人工的に調製した抗原等を例示することができる。

尚、採用しょうとする抗原が本発明の測定法において良好に使用し得るかは、例えば、標的抗体との反応性を常法に従って試験することにより容易に確認することができる。

本発明の測定方法において、上記抗原は、所望により、常法に従って各種の任意の固相に固定化して用いることができる。当該固相としては、この技術分野において慣用の各種の固相が利用でき、例えばガラス、セルロース粉末、セフアデックス、セファロ一ス、ポリスチレン、濾紙、カルボキシメチルセルロース、イオン交換樹脂、デキストラン、プラスチックフィルム、プラスチックチュ一ブ、ナイロン、ガラスビーズ、絹、ポリアミン一メチルビニルエーテル一マレイン酸共重合体、アミノ酸共重合体、及びエチレン一マレイン酸共重合体等の種々の素材からなるスティック、ビーズ、プレート（マイクロプレートを含む）及び試験管等を広く例示できる。

固定化方法についても特に制限はなく、物理的結合及び化学的結合のいずれをも使用できる。例えば、共有結合法としてジァゾ法、ペプチド法（酸アミド誘導体法、カルボキシルク口ライド樹脂法、カルポジイミド樹脂法、無水マレイン酸誘導体法、イソシアナ一ト誘導体法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカルボナ一ト誘導体法、縮合試薬を使用する方法等）、アルキル化法、架橋試薬による担体結合法（例えば架橋試薬としてグルタールアルデヒド、へキサメチレンイソシアナ一ト等を用いるもの）、 U g i 反応による担体結合法等の化学的反応：或いはィオン交換樹脂のような担体を用いるイオン結合法：ガラスビーズ等の多孔性ガラスを担体として用いる物理的吸着法等が例示できる。

なお、測定系に使用される抗原の量は、特に制限されず、採用する測定系において慣用の抗原量に応じて任意に決定することができる。例えば、サンドイッチ法を採用する場合には、通常、標的抗体に対して過剰の抗原が使用され、例えば 1 0 0 1容量の反応液中で反応させる場合を例に挙げると、通常 0. l〜 1 0 0 / gZm l 程度、好ましくは 1〜 1 0 gZm l程度の抗原量を例示することができる。

上記抗原と標的抗体との抗原抗体反応は、大腸菌由来成分の存在下で行うことを限度に、特に制限されず、通常の免疫測定法で採用される条件が採用される。一般には 4 5 °C以下、好ましくは約 4〜 4 0 ° (：、より好ましくは 2 5〜 4 0 °C程度の温度条件下で、大腸菌由来成分とともに抗原と標的抗体とを共存させ、約 0. 5〜 4 0時間、好ましくは 1〜 2 0時間程度、放置もしくはインキュべ一シヨンする方法を挙げることができる。また、反応に使用される溶媒及びその P Hも、当該反応に悪影響を与えないものであれば特に制限されず、常法に従って若しくはそれに準じて例えばクェン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩緩衝液、酢酸緩衝液等の p H約 5 〜 9 の範囲で緩衝能を有する緩衝液を例示することができる。

該反応系における大腸菌由来成分の配合割合は、特に制限はないが、反応系の抗原 1 gあたり、通常 0 . 1 〜： L O O g程度、好ましくは 0 . 5 〜 5 0 i g程度を例示することができる。

本発明の抗体測定方法は、基本的には、大腸菌由来成分の存在下での、標的抗体と当該抗体に対する固定化されていてもよい抗原との抗原抗体反応工程を有するものであれば、他の工程は特に制限されない。好ましくは、更に当該抗原に捕捉された標的抗体（抗原抗体結合物）の検出工程、具体的には抗原抗体結合物と抗体検出試薬との反応工程を含んでいることが望ましい。

抗原抗体反応で得られる抗原抗体結合物を検出 · 測定する方法並びにそれらの条件は、特に制限されることなく、通常の免疫測定法で用いられるもの若しくはそれに準じた方法及び条件を採用することができる。

本発明は、好適にはサンドイッチ法に従い実施することができる。例えば、固相化サンドイッチ法によれば、被検試料中の標的抗体は例えば次のようにして測定することができる。まず、標的抗体と特異的に抗原抗体反応する抗原を固相化してなる固相化抗原に、大腸菌由来成分及び標的抗体を含み得る被検試料（例えば、尿などの体液）を加えて、抗原抗体反応を行わせる。次いで、固相化抗原に結合しなかった未結合物質を例えば洗浄により除去して、その後抗体検出試薬を加えて、固相化抗原に結合した標的抗体（抗原抗体結合物）と反応させ、該試薬に応じた検出手段によって抗原抗体結合物の存在を検出するか、又はその量を測定する。

これら測定手法における各種手段の選択やそれらの改変等はいずれも当業者のよく知るところであり、本発明においてはそれら各手法のいずれによることもできる

〔「臨床検査法提要」、金原出版、 1 995年等参照〕。ここで抗体検出試薬としては、特に制限されることなく、一般に当業界で用いられている各種の試薬を広く用いることができる。例えば、測定対象である抗体（ィムノグロブリン）と結合し得る抗ヒ卜ィムノグロブリン抗体等の二次抗体を挙げることができる。なお、該抗ヒトィムノグロブリン抗体には、測定対象である各クラスのィムノグロブリンを免疫源として免疫された任意の被免疫動物から得られる抗血清又はその精製物（ポリクロ一ナル抗体）或いはモノクローナル抗体が包含される。また、抗体検出試薬として、後記（1-2)に説明するように、測定対象である抗体（ I g G) の F c領域に結合特異性を有する抗 I g G抗体を用いることもできる。かかる抗 I g G抗体としては、 I g Gの軽鎖或いは I g Gの F ( a b ) 領域と反応性を示さない F c特異的抗 I g G 抗体、又は I g Gの F c領域に対して特異的に反応性を有するプロテイン Aやプロテイン G等を使用することもできる。これらは標的抗体が I g Gである場合に、特に好適に使用できる。

これらの抗体検出試薬は、常法に従い調製することができ、また市販品としても入手することができる。

当該抗体検出試薬は、その検出の為に、通常の標識剤によって、直接的に修飾されていてもよいし、また付加的な検出手段により間接的に修飾することもできる。

この標識剤としては、特に制限はされず、従来公知のもの又は将来使用され得るいずれのものをも用いることができるが、具体的には ¹²⁵ I 、 ³H、 ¹⁴C等の放射性同位元素類；アルカリホスファタ一ゼ（AL P ) 、ペルォキシダ一ゼ（H R P ) 等の酵素類；フルォレセインイソチオシァネート（ F I T C) 、テトラメチルローダミンイソチオシァネート（R I T C) 等の蛍光物質類；及び 1 N - ( 2， 2 , 6， 6 —テトラメチル一 1 一才キシル一 4—ピペリジル） — 5 N— (ァスパルテート）一 2 ， 4 —ジニトロベンゼン（ T O P A ) 等が例示され、これらを標識剤として使用する免疫測定法は、それぞれラジオイムノアツセィ、ェンザィムィムノアツセィ、フルォロイムノアッセィ及びスピンィムノアツセィと称されている。また、金コロイド着色ラテックス粒子等を標識してなる抗体検出試薬を用いたィムノクロマトアツセィ法を採用することもできる。

尚、これらの標識剤による標識方法や間接的な標識化による修飾方法、並びにそれらの検出方法等は、自体公知の方法に従って行うことができる（「単クロ一ン抗体」岩崎辰夫他著、講談社サイェンティフイク、 1 9 84 ；「酵素免疫測定法」第 2版、石川栄治他著、医学書院、 1 9 8 2等）。

本発明の測定方法は、前記測定対象たる標的抗体とその抗原との反応において大腸菌由来成分を使用することを必須とするものであって、その限りにおいて、他の基本的操作等は特に制限されることなく、通常の免疫測定法における方法及び慣用の方法等を広く採用することができる。故に、上記の抗原抗体結合物と抗体検出試薬との反応条件も特に制限されず、免疫測定法で一般的に採用される条件が用いられる。通常、前述する抗原抗体反応の条件と同様な条件、例えば通常 4 5 °C以下、好ましくは約 4〜 4 0 °C、より好ましくは 2 5〜 4 0 °C程度の温度条件下、 p Hが約 5〜 9程度の下で、約 0. 5〜 4 0時間、好ましくは 1〜 2 0時間程度放置するかもしくはインキュベーションする方法を挙げることができる。

被検試料中における標的抗体の存在有無、或いはその含有量は、常法に従って、抗体検出試薬の標識に用いた標識剤（或いはその間接的な標識）の種類に応じた標識活性の測定により、或いはその測定値より換算した抗体力価として評価される。

(1-2) 本発明の抗体測定方法の他の態様として、被検試料中に存在する標的抗体の免疫測定法において、抗体検出試薬として標的抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有する試薬を用いる方法を挙げることができる。

当該方法によれば、非特異結合性抗体成分と抗体検出試薬との反応を有意に抑制でき、その結果偽陽性の判定結果が生じるのを減少させることができる。すなわち、当該抗体測定方法は、サンドィツチ法に従う抗体免疫測定法の改良方法として位置づけることができる。

本発明で用いられる抗体検出試薬は、測定対象である抗体（ I g G) と反応性を有することによりその検出に使用でき、また標的抗体 I g Gの軽鎖或いは I g Gの F ( a b ) 領域とは反応性を示さない、すなわち標的 I g Gの F c領域に結合特異性を有することによって特徴付けられる。

当該抗体検出試薬としては、より具体的には、標的抗体 I g Gの F c領域を免疫源として調製される F c特異的抗 I g G抗体を例示することができ、これは、該免疫源で免疫された任意の被免疫動物から得られる抗血清又はその精製物（ポリクロ一ナル抗体）或はモノクローナル抗体を包含するものである。また、当該試薬は、これらの抗体からなる試薬に限定されることなく、例えば、抗体 I g Gの F c領域に対して特異的に反応性を有するプロティン Aやプロティン G等であってもよい。

尚、これらの抗体検出試薬は、常法に従い調製することができ、また市販品としても入手することができる (例えば、シグマ社、 Jackson Immuno Research Labo r a tories, Inc. , 及び Cappel社等から入手できる）。

上記抗体検出試薬は、その検出の為に、通常の標識剤によって、直接的に修飾されていてもよいし、また付加的な検出手段により間接的に修飾することもできる。

なお、標識剤の種類、標識方法及び標識剤の検出方法については、前記（1-1)で述べたものを同様に例示することができる。本発明の抗体測定方法は、標的抗体の検出、すなわち抗原抗体結合物の検出において、上記特定の抗体検出試薬の使用を必須とするものであり、その限りにおいて他の基本的操作等は特に制限されることなく、通常のサンドイッチ法に従う免疫測定法における操作を広く採用することができる。

基本的には、本発明の抗体測定方法は、検出を所望する標的抗体と反応し得る抗原を用いて、該抗原を被検試料中に存在する標的抗体と抗原抗体反応させ、その結果、当該抗原に結合した標的抗体（抗原抗体結合物）を上記抗体検出試薬にて検出することにより実施される。

なお、ここで被検試料及び抗原は前記（1 - 1 )に挙げたものを同様に例示することができ、また標的抗体についても、感染源に向けられた抗体 I g Gである限り前述の（1 - 1 )に挙げたものを同様に例示することができる。なお、本発明の方法においては、感染源として大腸菌を含むことができる。

また本発明において抗原又は抗体検出試薬は、所望により、常法に従って各種の任意の固相に固定化して用いることができる。なお、用いられる固相及び固相化方法については、前記の（1 - 1 )に挙げたものを同様に例示することができる。抗原と標的抗体との抗原抗体反応についても特に制限されず、通常の免疫測定法における条件が採用される。一般には 4 5 °C以下、好ましくは約 4 〜 4 0 ° (：、より好ましくは 2 5 〜 4 0 °C程度の温度条件下で、抗原と測定対象抗体とを共存させ、約 0 . 5 〜 4 0時間、好ましくは 1 〜 2 0時間程度、放置もしくはインキュベーションする方法を挙げることができる。

なお、かかる抗原抗体反応において、制限はされない力前記（1 - 1 )に記載するように、大腸菌に由来する成分を共存させることもできる。

次いで、得られる抗原抗体結合物を洗浄して、該抗原抗体結合物を前述する特定の抗体検出試薬と反応させる工程に供せられる。該反応は、免疫測定法（サンドイツチ法）において一般的に採用される条件と同様若しくはそれに準じて行うことができる。例えば、溶媒は、当該反応に悪影響を与えないものであれば特に制限はなく、具体的にはクェン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩緩衝液、酢酸緩衝液等の p Hが約 5 〜 9程度の緩衝液を例示することができる。また反応時間及び反応温度についても、特に制限されないが、前述する抗原抗体反応の条件と同様な条件を例示することができる。

尚、被検試料中における標的抗体の存在の有無或いはその含有量は、（1 - 1 )と同様に、常法に従って抗体検出試薬の標識に用いた標識剤（或はその間接的な標識）の種類に応じた標識活性の測定により、或いはその測定値より換算した抗体力価として評価される。

( 2 ) 抗体測定装置

次に第二の発明である抗体測定装置について説明する。本発明の抗体測定装置は、固相アツセィを利用して、被検試料中の検出対象である標的抗体の存在及び/又は量を精度よく検出測定するように改良されたものである。

具体的には本発明の抗体測定装置は、少なくとも（a) 被検試料を接触させる第 1領域及び（b)被検試料中の抗体を反応させる第 2頜域を、被検試料が毛細管現象により該第 1領域から第 2領域に輸送されるように設けてなる固相支持体、並びに第 2領域での反応結果を検出するための標識手段を含有するアツセィ装置であって、上記 (b)第 2領域に、（i )アツセィ対象である標的抗体に対するリガンドを固定化したテスト部位と（i i )被検試料中の任意抗体を捕捉するリガンドを固定化したコントロール部位とを有することを特徴とする抗体測定装置である。

本発明の抗体測定装置の特徴は、第 2領域にテスト部位とは別個にコントロール部位を設けたところにあり、該コントロール部位は、適性な被検試料を適用し適切な装置で適切に測定された場合は、被検試料中に標的抗体が存在すると否に拘わらず、標識の存在下で陽性の結果を示す表示を形成し、一方不適性な被検試料を適用した場合或いは不適切な装置でもしくは不適切に測定された場合は、被検試料に標的抗体が存在すると否に拘わらず、標識の存在下で陰性の結果を示す表示を形成するように構成される。

すなわち、当該装置の第 2領域中のコントロール部位は、被検試料中に標的抗体が存在すると否に拘わらず、テスト部位の結果（特に陰性の結果）力有効なアツセィ結果であるか否かを表示する部位に相当する。しかして、かかる構成に基づいて、本発明の抗体測定装置によれば、偽陰性と真性陰性とを区別して精度よく（高い信頼性で）被検試料中の抗体を定性、定量することが可能となる。

更に、本発明の抗体測定装置は、テスト部位における標記抗体の反応を大腸菌由来成分の存在下で行うように設計されていてもよく、または、当該テスト部位における反応を検出する抗体検出試薬として標的抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有する試薬が用いられるように設計されていてもよい。かかる構成に基づいて、本発明の抗体測定装置によれば、非特異的反応が抑制されて、その結果偽陽性判定結果が生じるのを有意に低減して、精度よく高感度に被検試料中の抗体を定性、定量することが可能となる。

なお、本発明の抗体測定装置が対象とする被検試料及び標的抗体としては、（ 1 ) において述べた抗体測定方法と同様のものを挙げることができる。

本発明によれば、まず、少なくとも第 1 領域と第 2領域を備える固相支持体が提供される。

第 1 領域は被検試料が付され被検試料と接触する領域であり、第 2領域は該被検試料中に含まれる抗体（標的抗体を含み得る全抗体）がリガンドーリセプター又は抗原一抗体の関係で反応 · 結合し、また更に標識体の存在下でその反応結果が現れる領域（反応領域及び判定頜域）である。これらの領域は、固相支持体の第 1領域に付され、接触した被検試料が、該第 1領域から第 2領域に毛細管現象によって輸送される態様で固相支持体上に配置される。好ましくは、第 1領域に接触した被検試料の全部若しくは少なくとも一部が、固相支持体の実質的に平面な層を通って第 2領域に毛細管移動するように配置される。

尚、固相支持体は、第 1領域から第 2領域を通って毛細管移動する被検試料（液体）を吸収する領域として、第 2領域に続いて第 3領域を有していても良い。

固相支持体は、好ましくはストリップの形状を有し、第 1領域及び第 2領域は、ストリップの同一平面上に被検試料が毛細管作用により第 1帯域（第 1 領域）から第 2帯域（第 2領域）に移動し、必要であれば更に第 2帯域から続く第 3帯域（第 3領域）に流入する様式で配列される。なお、このように固相支持体の好ましい形状は、ス卜リップ形状であるが、その形状及びその形式が本発明の固相支持体の各種の機能を実施しうる限り、他の形状のいずれをも採用することができる。

固相支持体は、被検試料（液体）を吸収することができ、かつ試料により湿潤した際、少なくとも該試料に含まれる抗体を毛細管作用によって固相支持体の第 1 領域から第 2領域に、必要であれば更に第 2領域から続く第 3領域へ流動させることができるものである。さらに固相支持体は、被検試料中に含まれる抗体（標的抗体を含む）と反応してそれを捕捉するリガンドを支持固定化できるものであることが好ましい。

適切な固相支持体の例としては、ポリエチレン、ダラスファイノ'一、セルロース、レ一ヨン、ナイロン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用紙、ニトロセルロース、ろ紙などの多孔性基材が挙げられる。

固相支持体の第 1領域、第 2領域、第 3領域等の各領域は、上記に掲げる基材の中から選択される同一又は異なる基材から構成することができ、各頜域の役割や機能に応じて、種々選択して採用される。

固相支持体の第 1領域は、その表面に適用された被検試料を吸収し、該試料を第 2領域に毛細管移動させることができる多孔性基材からなることが好ましい。第 1頜域に適した多孔性基材としては、特に制限はされないが、通常ポリエチレン（例えば P〇 R E X ： Porex Techno io gi es, Fai rburn, Georgi a 製) 、グラスファイノ、、一、レ一ヨン、ナイロン、及び紙を含むセルロース系材料等が例示できる。好ましくは多孔性ポリエチレン、ろ紙等のセルロース系材料である。

固相支持体の第 2領域は、その毛細管作用により第 1 領域から第 2領域へ被検試料（液体）をはじきながら（w icking)、毛細管移動させることができ、また被検試料中の抗体（標的抗体を含む）に対するリガンドを、試料の毛細管移動により脱離しないように支持できる多孔性基材であることが望ましい。このような多孔性基材としては、ろ紙、クロマトグラフィー用紙、グラスファイバ一、架橋結合されたデキストラン、ナイロン及びニトロセルロースなどが挙げられるが、好ましくは、リガンドを容易に固定することができる理由から、ニトロセルロースである。

第 2領域には、被検試料中の標的抗体を特異的に認識してそれを捕捉するリガンドを結合固定化してなるテスト部位、及び被検試料中の任意抗体を認識してそれを捕捉するリガンドが結合固定化してなるコントロール部位が設けられる。コントロール部位は、テスト部位と一定の間隔をおいて、好ましくは毛細管移動の下流位置に配置され、両部位が同じ条件で被検試料の液体先端により接触されることが望ましい。

テスト部位のリガンドとしては、分析対象である標的抗体と特異的に結合するものであれば特に制限されない力^ 好ましくは、標的抗体に特異的に認識され、特異的に結合（抗原抗体反応）する抗原を挙げることができる。かかる抗原としては、既存の血清抗体測定系において採用されている抗原を広く採用することができる。これらは、ウィルスやバクテリア等の病原体そのものであってもよいが、少なくとも当該病原体に固有の抗原決定基を有するものであればよい。例えば、病原体を加温処理や放射線照射等により不活性化したもの、病原体を界面活性剤等で抽出処理して得られる抗原、また、化学合成や遺伝子工学的手法により人工的に調製した抗原等を例示することができる。

コントロール部位のリガンドとしては、被検試料中に含まれる任意の抗体と結合するものであれば特に制限されないが、好ましくは、特に尿に含まれる任意抗体を特異的に認識し、該抗体に結合する抗体（抗ーィムノグロブリン抗体）を挙げることができる。

これらのリガンドは、液体試料の毛細管移動によりテスト部位及びコントロール部位から脱離除去されないように、それぞれテスト部位及びコントロール部位に位置する多孔性基材に固定される。すなわち、各リガンドは第 2領域が分析対象物を含む試料により濡れたときに、拡散しないように上記多孔性基材の各部位に結合し、そして該各部位に固定化された状態を保ち、固相支持体の第 3領域に輸送されることがないように支持されることが望ましい。

このようなリガンドの固定化は、当該技術分野において公知の方法により、上記の各種多孔性基材に物理的結合または化学的結合させることにより達成できる。

例えば、共有結合法としてジァゾ法、ペプチド法（酸アミド誘導体法、カルボキシルク口ライド樹脂法、カルポジイミド樹脂法、無水マレイン酸誘導体法、イソシァナ一ト誘導体法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカルボナー卜誘導体法、縮合試薬を使用する方法等）、アルキル化法、架橋試薬による担体結合法（例えば架橋試薬としてダルタールアルデヒド、へキサメチレンイソシアナ一ト等を用いるもの）、 U g i 反応による担体結合法等の化学的反応：或いはイオン結合法：物理的吸着法等が例示できる。また第 2領域に用いられる多孔質基材がニトロセルロースの場合は、非共有結合によって簡便に上記リガンドを結合することが可能である。

第 2領域のテスト部位に用いられるリガンド（抗原）の量は、被検試料中に存在すると思われる標的抗体が本質的にすべてテスト部位に結合するように過剰量であることが好ましい。

また、第 2領域のコントロール部位に用いられるリガンド（抗ーィムノグロブリン抗体）の量は、被検試料中の任意の抗体（標的抗体を含んでいても良い）が本質的にすベてコントロール部位に結合するように過剰量であることが好ましい。

なお、テスト部位における標的抗体とリガンド（特に抗原）との結合反応は、大腸菌由来成分の存在下で行なわれることが好ましい。かかる大腸菌由来成分は被検試料の希釈溶液中に配合され被検試料とともに第 1領域に付されることによって反応系に供されてもよいし、また固相支持体のテスト部位又はその上流域（前述の第 1 頜域、後述するトレーサー領域等）に脱着可能なように付着固定されていてもよい。大腸菌由来成分としては、先に述べたように大腸菌に由来する成分であれば特に制限されず、例えばその蛋白質成分。糖質成分、脂質成分またはその混合成分であることができる。好ましくは大腸菌の可溶性抽出物、リポ多糖（ L P S ) が例示される。

被検試料を第 1領域に適用すると、試料は第 1領域から毛細管移動により第 2領域に流入し、そこでまず第 2 頜域内のテスト部位に試料中の標的抗体が結合 · 固定化され、次いでその下流に位置するコントロール部位に残りの任意抗体（テスト部位に結合しきれなかった標的抗体を含む）が結合 · 固定化される。

本発明で用いられる標識手段は、被検試料中の標的抗体及び任意抗体がそれぞれ上記のテスト部位及びコントロール部位に結合 · 固定化されたか否かを検出する手段として用いられる。

かかる標識手段としては、抗体に対するリガンドと該リガンドに結合した検出可能な標識から構成されるものを挙げることができる。

抗体に対するリガンドは、被検試料中に存在する抗体を認識してかつそれに結合する分子であれば特に制限されないが、本発明においては、測定対象である標的抗体及び被検試料中に含まれる任意の抗体のいずれにも結合するものであることが望ましく、かかるものとしては前記したコントロール部位のリガンドと同一のもの、特には該コントロール部位のリガンドとして採用したと同一の結合性を有する抗ィムノグロプリン抗体を例示することができる。

該抗ィムノグロブリン抗体には、例えばヒトイムノグロブリン等の対象に応じたィムノグロブリンを免疫源として免疫された任意の被免疫動物から得られる抗血清またはその精製物（ポリクローナル抗体）或いはモノクロ —ナル抗体が包含される。

なお、コントロール部位のリガンドとしての抗ィムノグロブリン抗体は、所望により、例えば被検試料に含まれる総抗体を補足しこれを検出するように全てのクラスの抗体に向けられたものとすることができ、或いは、ィムノグロブリン G ( I g G ) 等の任意の所望クラスの抗体に向けられたものとすることもできる。好ましくは、かかるリガンドは測定を所望する標的抗体のクラスと同じクラスの抗体に向けられた抗ィムノグロプリン抗体とすることができ、この場合にはコントロール部位において標的抗体と同種抗体の検出が行われることにより、尿に限らず、血清等の各種の体液を被検試料に用いる場合においても、そのアツセィが適切に実施されたかを判断する上で最も適した指標を与える点で好ましい。

また、標的抗体が I g Gである場合は、上記標識手段としてのリガンドは、より好ましくは抗体 I g Gの F c 領域に結合特異性を有することで特徴づけられるリガンドあるのがよく、例えば抗体 I g Gの軽鎖或いは F ( a b )領域と反応性を示さない F c特異的抗 I g G抗体、又は抗体 I g Gの F c領域に対して特異的に反応性を有するプロテイン Aやプロテイン G等の採用を好ましく例示することができる。これらの抗ィムノグロブリン抗体乃至リガンドは、常法に従って調製することができ、また市販品としても入手することができる。

検出可能な標識成分は、特異的結合アツセィ、特にィムノアツセィに使用される当該技術分野において公知のもの又は将来使用され得るあらゆる検出可能な標識であれば特に制限はされない（「単クローン抗体」岩崎辰夫他著、講談社サイェンティフイク、 1 984 ；「酵素免疫測定法」第 2版、石川栄治他著、医学書院、 1 982等）。

好ましい標識としては、第 2領域のテスト部位ゃコントロール部位において好ましくは色の変化を生じるものである。制限はされないが、より好ましくは色の変化を何らかの計測器を必要とすることなく、可視的に認識できるものである。例えば、各種の発色源、例えば蛍光性物質、吸収性色素などが挙げられ、より好ましくは可視的に検出可能なマ一力一を含む粒子状の標識を挙げることができる。

適切な粒子状の標識には、ポリマー（例えば、ラテツクス又はポリスチレン）、嚢（サック）、リボソーム、金属ゲル（例えば、銀コロイド又は金コロイド）またはポリスチレン染料の粒子が含まれる。好ましくは銀コロィド又は金コロイド等の金属ゲルである。

かかる標識は、常法に従い、リガンドに化学的或いは物理的に結合させることによって標識化リガンドとして調製され、これらはまた市販品としても入手することができる。

本発明で用いられる標識手段は、固相支持体の第 2頜域（テスト部位及びコントロール部位を含む）に適用されて、該領域で生じた試料中の抗体との反応結果を検出できるように標識するものであればよく、かかる目的を満たす限りにおいてその存在態様は特に制限されない。例えば、本発明測定装置をフロ一スルー（ f l o w t h r o u g h ) タイプの装置とする場合には、当該標識手段は固相支持体とは別個のものとして、抗体測定用試薬キットに含ませることができる。

好ましくは、標識手段は固相支持体に脱離可能な態搽で支持固定化されており、より好ましくは固相支持体の第 2領域より上流域に脱離可能な態様で支持固定化されているのが望ましい。一層好ましい態様は、固相支持体の第 1 領域と第 2領域との間に位置する領域（以下、トレーサー領域という）に支持されるものである。かかる場合、第 1頜域に適用された被検試料は、毛細管移動によりトレ一サ一領域に移動し、そこで標識化リガンドと接触して、標的抗体標識化リガンドー複合体及び任意抗体/標識化リガンドー複合体をそれぞれ形成する。トレーサー領域を通過後、かかる複合体を含む被検試料は更に毛細管移動により第 2領域に移動する。第 2頜域内のテスト部位に配置されたリガンド（抗原）は、標的抗体に特異的であり、またコントロール部位に配置されたリガンド（抗ィムノグロブリン抗体）は、任意抗体に特異的である。このため、毛細管移動してきた試料中の標的抗体ノ標識化リガンドー複合体はまず該テスト部位に捕捉され、次いで試料中の残りの任意抗体 Z標識化リガンドー複合体（標的抗体ノ標識化リガンドー複合体を含む）がコントロール部位に捕捉される。かかる固相支持体のトレーサー領域は、標的抗体及び任意抗体を含む被検試料を第 1領域から第 2領域へと毛細管移動により輸送でき、かつ上述する標識化リガンドをかかる毛細管移動に伴って脱離可能なように支持固定できる基材からなるものであれば特に制限されない。通常、多孔性基材からなり、例えばポリエチレン、グラスファイバ一、レーヨン、ナイロン、又は紙等を含むセルロース系材料等を例示することができる。好ましくは、非特異的な吸着を呈しにくい材料であり、例えば所望によりポリビニルアルコール（ P V A ) で処理されていてもよいグラスファイバ一等を挙げることができる。

本発明の好ましい態様には、固相支持体に、上記のトレーサー頜域と第 2領域内のテスト部位とが一定の間隔をおいて配置されてなるものが含まれる。このように、トレーサー領域とテスト部位との間に一定の領域が設けられることにより、トレーサー領域で標識化リガンドと接触した被検試料は、第 2領域のテスト部位に到達するに先だって、かかる領域で抗体と標識化リガンドとが混合され、抗体と標識化リガンドとの結合反応が促進される。つまり、かかる領域は、試料中の標的抗体及び任意抗体がそれぞれテスト部位及びコントロール部位に接触する前に、該標的抗体及び任意抗体と標識化リガンドとの結合のためのインキュベート領域（時間、空間）を提供するものである。

更に、本発明の固相支持体は、第 2領域に続いて第 3 領域を有していても良い。

被検試料は第 1領域、必要であればトレーサー領域を通じて、第 2領域に接触後、毛細管移動によって第 2領域を通過して該第 3領域へ移動し続ける。すなわち、かかる第 3領域は第 2領域から流入する液体を受ける領域として機能し、第 2領域と毛細管移動により液体伝達されている。

第 3領域は、通常少なくとも第 2領域で結合しなかつた液体含有物質を受けるために機能するものであればよいが、更に、液体試料の毛細管流（すなわち、液体の先端）が、固相支持体上の予め決定された完了ゾーンに進んでアツセィの完了を知らせる部位を有することもできる。

かかる目的で、固相支持体には、第 2領域の下流域にエリス口シン B、サフラニン〇またはフエノールレッド等の水溶性染料を含む可視インディケ一夕一ゾーンを設けることもできる。この場合、被検試料の液体先端が第

2頜域を横切り、そして第 3領域に入る際に上記インディケ—夕—ゾーンを通って流れ、そこに位置する染料は被検試料（液体）の毛細管移動により下流域に運ばれ、そこで被検試料が第 1領域、トレーサー領域及び第 2頜域（テスト部位、コントロール部位）を通過して、アツセィが完了したことを検出確認することができる。

第 3領域は、被検試料（液体）を吸水できる基材からなるものであれば特に制限されず、例えばポリエチレン、レーヨン、ナイロン、又は紙等を含むセルロース系材料等を例示することができる。好ましくは紙等を含むセルロース系材料である。以下、本発明を、抗体測定装置及びその部品の好ましい態様を添付する図面を参照しながら説明する。ただし該図面で示す装置は本発明の一態様にすぎず、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。

図 1 は、本発明の装置に含まれるストリップ形状の固相支持体（ 6 0 X 5 mm) の略図である。図 1 中、記号 1 は被検試料が適用され該被検試料が接触する第 1領域

( 1 6 X 5 mm、厚さ 0. 9 2 mm) であり、記号 2は標識化リガンド（例えば、金コロイド標識化抗ヒト I g G抗体）が支持されているトレーサー頜域（ 5 X 5 mm、厚さ 0. 7 9 mm) であり、記号 3は被検試料中の抗体と反応し、その結果を表示する第 2領域（ 1 8 ramX 5 inm、厚さ 0 . 1 mm) であり、記号 4は第 1頜域から第 2領域を経て移動してきた被検試料を吸収する第 3領域（ 2 2 X 5 mm、厚さ 1 . 4 6 mm) である。

第 1頜域の厚さは通常 0 . 2〜 2 mm、好ましくは 0 . 8〜 1 . 2 mmであり、トレ一サ一領域の厚さは通常 0 . 2 〜 1 . 5 mm、好ましくは 0 . 5 〜 1 mmであり、第 2領域の厚さは通常 0 . 0 3〜 0 . 2 mm、好ましくは 0 . 0 8〜 0 . 1 2 mmであり、第 3領域の厚さは通常 0 . 5 〜 3 mm, 好ましくは 1 〜 2 mmを挙げることができるが、これらに何ら制限されることはない。

第 2領域（ 3 ) 内には、標的抗体に特異的に結合するリガンドが支持固定化されてなるテスト部位（テストライン、約 I X 5 mm) (記号 5 ) と任意抗体に結合するリガンド（抗ヒトイムノグロブリン抗体）が支持固定化されてなるコントロール部位（コントロールライン、約 1 X 5 mm) (記号 6 ) とが配置される。テスト部位（ 5 ) はトレーサー領域（ 2 ) から一定の間隔（約 6 ram程度）を置いて、またコントロール部位（ 6 ) はテスト部位 ( 5 ) から一定の間隔（約 6 mm程度）を置いて配置される。テスト部位は、被検試料中の標的抗体と特異的に反応し、標識の存在下でその標的抗体の存在の有無を表示するように機能し、コントロール部位は使用した被検試料が適性であつたか否かを標識の存在下で表示するように機能する。

ストリップの固相支持体を構成する、第 1領域，トレ

—サ一領域，第 2領域及び第 3領域の各部材（基材）は、試料が移動するストリップの長手方向にそれぞれ接合されていればよく、その接合態様を問わないが、好適には、第 1領域の長手方向の先端域とトレーサー領域の基端域、トレーサー領域の先端域と第 ₂領域の基端域、並びに第

2領域の先端域と第 3領域の基端域が積層された状態で接合されていることが望ましい。より好ましくは図 1 に示されるように、第 1領域の長手方向の先端域がトレ一サー領域の基端域の上に積層され、またトレーサー領域の長手方向の先端域が第 2領域の基端域の上に積層される態搽であり、更に第 3領域の基端域が第 2領域の先端域の上に積層されていてもよい。かかる接合態様を有することによって、第 1頜域に付された試料はストリップの長手方向にスムーズに移動することができる。積層域の長手方向幅は特に制限されないが、 0 . 5 〜 1 0 m m、好ましくは l 〜 2 m m、より好ましくは 0 . 8 〜 1 . 2 m m程度を例示することができる。なお、積層部の各領域の上下位置はこれに限定されず、その逆であってもよい前述する固相支持体は、使用しやすいようにアツセィ装置の形態でパッケージングされていることが好ましい。

( 3 ) 固相ァッセィ方法

次に図 2 に基づいて、本発明装置によるアツセィ原理を説明する。

なお、本発明の第三は当該装置を用いることによる標的抗体の固相アツセィ法であり、具体的には抗体測定装置の第 1 領域の被検試料を接触させ、第 2領域のコントロール部位が発色している条件のもとで、第 2領域のテスト部位の発色の有無を検出することからなる、被検試料中の標的抗体の固相アツセィ法である。

アツセィにおいて、標的抗体を含む疑いのある被検試料は、まず固相支持体の第 1領域（ 1 ) に適用される。

なお、被検試料は、尿等の体液をそのまま使用しても、また適当な希釈溶液で希釈して使用してもよい。希釈溶液としては、特に制限されず、例えば p H 5 〜 9程度、好ましくは P H 6 . 5 〜 8 . 5程度の範囲で緩衝能のある緩衝剤（例えばクェン酸緩衝液、燐酸緩衝液、トリス緩衝液、酢酸緩衝液、ホウ酸緩衝液等）、界面活性剤などを含むことができる。

また、抗原抗体反応を大腸菌に由来する成分の存在下で行うことにより、抗原抗体反応における非特異的反応が抑制され、その結果偽陽性検出が低減されることから、好ましくは、更に大腸菌由来成分を含む希釈溶液を用いることが望ましい。希釈溶液中に配合する大腸菌由来成分（L P S )の量は、特に制限はされないが、反応系、すなわちテスト領域におけるリガンド（抗原） l gあたり、 0. l〜 1 0 / g程度、好ましくは 0. 5〜 5 z g 程度の割合となるように調製されることが好ましい。

また被検試料に配合される大腸菌由来成分（L P S )の量として、通常 5 g /m l 以上、好ましくは 5〜 1 0 0 g /m 1 , より好ましくは l O S O i g Zm l の範囲を例示することができる。なお、 l O O ^ g Zm l 以上配合することは特に制限しないが、それ以下の配合で本発明の効果は達成される。

被検試料を第 1領域（ 1 ) に適用することによって第 1領域は湿潤する。適用された被検試料は、第 1領域 ( 1 ) を通って毛細管移動によりトレーサー頜域（ 2 ) に入り、ここでトレーサー頜域内に脱離可能な状態で支持されている標識化リガンド（金コロイド標識化抗ヒト I g G抗体）と接触し反応する。

適性な被検試料を使用した場合において、試料中に標的抗体が含まれている場合は、標的抗体と試料に含まれる任意抗体はいずれも、トレ一サ一領域（ 2 ) において上記標識化リガンドに結合して、それぞれ標的抗体ノ標識化リガンド一複合体及び任意抗体/標識化リガンドー複合体を形成する。被検試料がトレーサー領域（ 2 ) を通過後、形成された各複合体又は複合体を形成していない標識化リガンドは被検試料と共にトレーサー領域

( 2 ) から下流域に輸送される。好適な態様において、未だ複合体を形成していない標識化リガンドは、トレ一サ一領域（ 2 ) から第 2領域（ 3 ) のテスト部位（ 5 ) に接触するまでの間に、抗体を含む被検試料と共に毛細管移動しながら、複合体形成に十分な時間（空間）を与えられる。次いで第 2領域のテスト部位（ 5 ) に到達すると、まず該部位（ 5 ) において被検試料に含まれる標的抗体ノ標識化リガンド一複合体が、該部位に支持されてなるリガンドと結合し、固定化される。次いで、被検試料は更に毛細管移動により下流域に移動して、コントロール部位（ 6 ) において任意抗体標識化リガンドー複合体が該部位のリガンド（抗ヒトイムノグロプリン抗体）と結合し、固定化される。次に、第 2領域のテスト部位（ 5 ) 及びコントロール部位（ 6 ) に固定化された複合体を、その標識化リガンドの標識成分に基づいて検出することによってアツセィ結果を陽性として示すことができる。それに対して、被検試料として標的抗体を含まない試料を用いた場合は、テスト部位（ 5 ) に結合する標的抗体ノ標識化リガンドー複合体が形成されないため、該テスト部位（ 5 ) で標識は検出されない（陰性）。

ところでテスト部位（ 5 ) で表示される陰性結果には、試料の濃度が薄い（すなわち、試料中の総抗体量が少ない）ことに起因する陰性（偽陰性）結果と試料中に標的抗体が存在しない陰性（真性陰性）結果の両者が包含される。かかる陰性の別はテスト部位（ 5 ) の結果だけでは判定することはできないが、偽陰性の場合は、コントロール部位（ 6 ) に結合する任意抗体標識化リガンド —複合体自体が形成されないため、コントロール領域が陰性を示し、真性陰性の場合は、任意抗体 Z標識化リガンドー複合体が形成されるため、コントロール領域が陽性を示し、かかるコントロール部位（ 6 ) の陰性及び陽性の相違によって、テスト部位（ 5 ) の陰性結果が偽陰性であるのか真性陰性であるのかを区別することができる。更に、失活した標識化リガンドが採用された場合等、適切な装置で適切に測定が実施されなかった場合には、同様にコントロール部位（ 6 ) が陰性を示すことにより、これらの原因による偽陰性検出をも防ぐことができる。

あらゆる未結合抗体、標識化リガンドなどを含む液体試料は毛細管移動により更に第 2領域（ 3 ) から下流域に位置する第 3領域（ 4 ) に移動し続ける。所望により、インディケ一夕一ゾーンを設けることができ、この場合、液体の先端はインディケ一夕一ゾーンから完了ゾーンへ染料を運び、該液体染料が第 3領域を通過してアツセィが終了したことを示す。水平方向で使用される本発明の抗体測定装置の例を、図 3 に示す。第 1領域（ 1 ) 、トレ一サ一領域（ 2 ) 、第 2領域（ 3 ) (テスト部位（ 5 ) とコントロール部位 ( 6 ) を含む）、第 3領域（ 4 ) を含む固相支持体

( A) は、適当な材料からなるハウジング内（ B ) に置かれる。かかる八ウジング材料としては、成形可能なプラスチック、例えばポリスチレン等が好ましいが、他の材料、例えばガラスや金属や紙などを使用することも可能である。上記ハウジングは、幾つかの開口部を有する上部セクション（ 7 ) と下部セクション（ 8 ) とからなり、固相支持体はハウジングの下部セクション上に配置され、その上から上部セクションにより覆われる。ノ λゥジングの上部セクションの開口部（ 9 ) 及び（ 1 0 ) は、固相支持体の各領域の配置に沿って整列され、それぞれ固相支持体の第 1領域（ 1 ) 及び第 2領域（ 3 ) に対応している。

開口部（ 9 ) により支持体の第 1領域（ 1 ) に試料を適用することが可能となる（試料添加窓）。開口部

( 9 ) は、該開口部の周辺に一段高い側面を有していることが好ましく、かかる側面はゥエルを形成して液体試料が支持体の第 1領域に滴下され浸透することを促進する。なお、被検試料を固相支持体の第 1領域に接触させる方法は、特に制限されないが、装置の試料添加窓

( 9 ) から固相支持体平面に対して垂直となるようにまつすぐ滴下することが好ましい。

開口部（ 1 0 ) は、固相支持体の第 2領域のテスト部位及びコントロール部位が目視できるように配置され、これによりテスト部位への標識化リガンド標的抗体一複合体の結合の有無、及びコントロール部位への標識化リガンド /"任意抗体—複合体の結合の有無を視覚によつて検出可能となる（検出窓、判定窓）。なお、開口部

( 1 0 ) は、必ずしもテスト部位とコントロール部位との双方を含むように開口している必要はなく、固相支持体のテスト部位とコントロール部位とが別個の開口部によって 2つの検出窓を形成するものであってもよい。

本発明の抗体測定装置によれば、通常 4 5 °C以下、好ましくは 4〜 4 0 ° (：、より好ましくは 1 5〜 3 0 °C程度の温度条件下で、被検試料適用後、数分〜 3 0分、好ましくは 5〜 2 0分放置することによって、被検試料中の標的抗体の存在の有無及び/又はその量を精度よくアツセィすることができる。

( 4 ) 抗体測定用試薬キット

上記（ 1 ) に説明する抗体測定方法、または（ 2 ) に説明する抗体測定装置を利用した固相アツセィ法を実施するにあたっては、抗体測定に必要とされる各種の試薬、並びに装置を一式備えた抗体測定用試薬キットを利用することが簡便であ。

本発明は、これらの抗体測定方法または固相アツセィ法を実施する為の抗体測定用試薬キットをも提供するものである。

本発明の抗体測定用試薬キットは、被検試料中の抗体を抗原抗体反応を利用して検出測定するためのものであり、その一態様として前述する大腸菌由来成分を一成分として含むものを挙げることができる。当該試薬キットは、更に測定対象である標的抗体と抗原抗体反応する固相化されていてもよい抗原、または抗体検出試薬等を含有していてもよい。また、当該試薬キットには、測定の実施の便益のために、更に適当な反応液、希釈液、洗浄液、反応停止液、標識活性測定試薬等が含まれていてもよい。

また、本発明の抗体測定用試薬キットの他の態様として、抗体検出試薬として、前述する標的抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有するもの、好ましくは F c特異的抗 I g G抗体を含むものを挙げることができる。

さらに本発明の抗体測定用試薬キッ卜の他の態様として、前述する抗体測定装置を含有するものを挙げることができる。当該試薬キットには、試薬として更に前述するような大腸菌由来成分または標的抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有するものの少なくとも一方を含めることができ、更にまた前述するような反応液、希釈液、洗浄液、反応停止液、標識活性測定試薬等の各種試薬、並びにスポィトゃ被検試料を希釈するために使用されるアンプル（チューブ）等の付属品を含め _ることができる。発明を実施するための最良の形態以下、本発明の説明のために実施例を記載するが、当該実施例はなんら本発明の技術的範囲を制するものではない。当業者は本明細書の記載に基づいて容易に本発明に修飾、変更を加えることができ、それらはいずれも本発明の技術的範囲に含まれる。実施例 1 H. ピロリ抗体の測定

( 1 ) H. ピロリ抗原の調製

H. ピロリ菌（臨床分離株）をブルセラァガ一培地

(べクトン社）で 4 8時間培養（10% C0₂, 5¾ 0₂, 37。C) し、冷 P B Sで集菌した。冷 P B Sで 5回遠心洗净後、菌体濃度が 1 0 O m g Zm l になるように冷 P B Sをカロえ、攪拌下、当量の冷 0. 2 % トリトン X— 1 0 0の P B S溶液を加えた。 5分間攪拌後遠心して得た上清を H. ピロリ抗原溶液とし、 — 8 0 °Cで保存した。

( 2 ) H. ピロリ抗原プレートの調製

上記の H. ピロリ抗原溶液（2. g蛋白量/ ml) を 1 0 0 1 Zゥエルの割合で 9 6穴プレートに加え、 4 °Cで一夜インキュベートした。該ゥエルを P B Sで 1回洗浄後、ブロッキング液（夕'ルへ'ッコ -PBS (D-PBS) , 1¾ BSA, 5% ソルビトール， 0.05% NaN₃ (pH 7.4)) を 3 0 0 1 Zゥエルで加え、 4でで一夜インキュベートした。ブロッキング液を除去し、 2 5 °Cで一夜乾燥させ、これをァルミ袋に乾燥剤とともに入れ密封して、使用時まで 4 °C で保存した。

( 3 ) 大腸菌由来成分の調製

大腸菌（pvcl8/JM109株：宝酒造社製）をアンピシリン含有液体 L B培地（Luria- Ber ni培地、日本製薬社）で、 3 7 °C、 1 8時間培養後、遠心により集菌し P B Sで 2 回洗浄した。菌体濃度が 1 0 0 m g /m 1 になるように冷 P B S を加え、超音波破砕機により破砕抽出した（ 10 秒 X 3回）。かくして得た遠心上清を大腸菌由来成分とし、 — 8 0 °Cにて保存した（以下、大腸菌抽出物とい。）。

( 4 ) H . ピロリ尿中抗体の測定

被検試料として尿を用い、尿中に含まれる H . ピロリ抗体を測定した。

即ち、前記（ 2 ) で調製した H . ピロリ抗原プレートの各ゥエルに、 2 0 g蛋白量 Zm l の大腸菌抽出物を含む第 1緩衝液（ 200mM トリス緩衝液， 0. 14M NaCl, 2% カゼイン， 0.5% BSA, 0.05¾ T een 20, 0. 1¾ NaN₃ ( H 7.3)) を 2 5 x 1 及び尿サンプルを 1 0 0 1 力!]え、 1 0秒間攪拌後、 3 7 °Cで 1 時間放置した。該プレートを P B S T (0.05¾ Tween 20 及び 0.05¾ NaN₃ を含む P B S溶液）にて 6 回洗浄後、酵素（H R P ) 標識抗ヒト 1 g Gi 体 (Peroxidase conjugated Af f i n i Pure Goat a nti-Human lgG(Fc) ：ジャクソン · ィムノ · リサーチ社）を第 2緩衝液（50mM トリス緩衝液， 0. 14M NaCl， 0.5¾ BSA, 5% ャギ血清， 0.05% Tween 20, 0. 1% XL- II、 (pH 7.3)) で 1 1 , 0 0 0倍希釈したものを l O O i lカロえて 3 7 °Cで 1時間放置し、その後 P B S Tにて 6回、プレ一ト洗浄を行つた。

発色液（50mM クェン酸リン酸緩衝液， 50 TMB溶液， 0. 0075¾ H₂0₂ ) の 1 0 0 1 を加えて室温で 2 0分間反応後、反応停止液（50% TMB停止溶液， 50% 1N-H₂S0₄) を 1 0 0 ^ 1 加えて吸光度を測定した。

( 5 ) 測定結果

(i) 現在ある診断法のうち最も正確な H . ピロリ感染診断法であるとされる ¹³ C— U B Tテスト [J. Gastroenter ol. , 33:pp.6- 13 ( 1998)]にて群分けした H . ピロリ感染陽性者及び同陰性者の各 5例の尿を検体として、尿中の H. ピロリ抗体を上記（ 4 ) に従って測定した。

尚、対照実験として、大腸菌抽出物を添加しない以外は同一方法にて同一尿検体を測定し、その結果から大腸菌抽出物の添加による本発明方法の効果を検討した。

結果を図 4に示す。

図 4において、縦軸は吸光度（OD450-650nm) を、横軸は大腸菌抽出物の添加の有（+ ) 無（―）を示し、また図中、〇は¹³ C— U B Tテストにおける H . ピロリ感染陽性者の尿サンプルの結果を、像は同テストにおける H. ピロリ感染陰性者の尿サンプルの結果をそれぞれ示す。

図 4から明らかなように、大腸菌抽出物を添加した本発明方法による測定によれば、 ¹³ C— U B Tテストの結果と一致した態様で、 H. ピロリ感染陽性者と陰性者を明確に区別でき、精度に優れた検出が可能であった。

(ii) H. ピロリの根絶治療を受けたことのない健常者 9 9名及び胃疾患を有する患者 2 0名（胃潰瘍 7例及び胃炎 1 3例）の尿サンプルを用いて、上記（ 4 ) に従つて大腸菌抽出物の存在する系で、尿中の H. ピロリ抗体を測定した。結果を図 5 に示す。同図において、縦軸は吸光度（O.D.450nm) を、横軸は ¹³ C— U B Tテストによる群分け（陽性者、陰性者）を示す。この結果から、大腸菌抽出物を添加した測定系において、陰性者の尿サンプルは偽陽性を示すことなく明確に陰性の結果を示すことが明らかとなった。

(iii) 上記（ii)における被験者の血清中に含まれる H. ピロリ抗体の量を、市販の E L I S Aキットを用いて測定し、その測定方法の感度、特異性及び精度を、同一被験者の尿サンプルを用いて測定した本発明方法の結果と比較した。尚、被験者の血清サンプル及び尿サンプルは、同時に採取し常法に従って調製した。

使用した市販の E L I S Aキットは、「HM— C A P ™ k i t ; Enteric Products社」（HM- CAP) 、「H e 1 i c o G™ k i t ; Shield D i agno s t i c社」（Hel ico G) 及び「H E L— p T E S T ^TM k i t ; AMRAD Biotech社」（HEい p) であり、各測定は、各キットに添付されている指示書に従って実施した。結果を表 1 に示す。

<表 1 > 測定方法一検体感度特異性精度

HM-CAP 血清 80% (56/70) 96% (47/49) 87% (103/119) HeUco G 血清 99% (69/70) 88% (43/49) 94% (112/119) HEL-p 血清 97% (68〃0) 90% (44/49) 94% (112/119) 本発明方法尿 99% (69/70)_ 100% (49/49)_ 99% (118/119)

表 1 において、「感度」は、 H. ピロリ陽性者（¹³C 一 U B Tテストにおける感染陽性者： n = 7 0 ) における各キットでの陽性率を、「特異性」は、 H. ピロリ陰性者（¹³C— U B Tテストにおける感染陰性者： n = 4 9 ) における各キットでの陰性率をそれぞれ示すものであり、「精度」は、全被験者（ 7 0 + 4 9 = 1 1 9例）における各キッ卜で正確に測定できた割合を示す。

本発明方法による H. ピロリ抗体の測定によれば、抗体が微量にしか存在しない尿を被検体として用いているにも拘わらず、既存の血中抗体検出キットよりも感度及び特異性において優れており、顕著に優れた精度を示すことが明らかである。

( 6 ) H. ピロリ尿中抗体の測定

大腸菌抽出物の代わりに大腸菌 L P S (Diico社製）を含む第 1緩衝液（ L P S濃度： 5 ₂ ゥエル）を用いた以外は、前記（ 4 ) に従って、尿検体中に含まれる H. ピロリ抗体を測定し、前記（ 5 ) (i)に従って、その測定結果を評価した。結果を図 6に示す。この図から大腸菌 L P Sについても大腸菌抽出物と同様の結果が得られること力わカヽる。実施例 2 B型肝炎ウイルス（ H B c ) 抗体の測定

( 1 ) B型肝炎ウイルス（ H B c ) 抗体の測定

H B c抗原 (Chemicon International社製）を用いて前記実施例 1 ( 2 ) に準じて抗原プレートを調製し、尿中検体に含まれる B型肝炎ウィルス（コア）（H B c ) 抗体の測定を前記実施例 1 ( 4 ) に準じて行った。

すなわち、 H B c抗原プレートの各ゥエルに、所定濃度の大腸菌抽出物を含む第 1緩衝液 2 5 μ 1 及び尿サンプル 1 0 0 i 1 を加え、 1 0秒間攪拌後、 3 7 °Cで 1時間放置した。該プレートを P B S Tにて 6回洗浄後、酵素（HR P ) 標識抗ヒト I g G抗体を第 2緩衝液で 1 1， 0 0 0倍希釈したものを 1 0 0 1加えて 3 7 °Cで 1時間放置し、その後、プレート洗浄（ P B S Tにて 6回）を行った。

発色液 1 0 0 β 1 を加えて室温で 2 0分間反応後、反応停止液 1 0 0 1 を加えて吸光度を測定した。

( 2 ) 測定結果

市販の H B c抗体リアキット（ダイナボット社製）を用いた測定により血中 H B c抗体陽性者及び同陰性者に群分けした各 5例における尿中 H B c抗体を上記（ 1 ) に従って測定した。

なお、反応液中の大腸菌抽出物の濃度を、 0、 0. 7 8、 1. 5 6、 3. 1 3、 6. 2 5、 1 2. 5 8ノ01 1 となるように設定し、その添加による効果を検討した。結果を図 7に示す。

図 7において、縦軸は吸光度（ 0 D450— 650nra) を、横軸は大腸菌抽出物の添加濃度を、參は血中 H B c抗体陽性者の尿検体結果を、〇は血中 H B c抗体陰性者の尿検体結果をそれぞれ示す。該図より、尿を被検試料とした場合でも、大腸菌抽出物の添加量に依存して、血中 H B c抗体陽性者及び同陰性者のそれぞれで検出された H B c抗体レベルの差がより明確になることが明らかとなつた。実施例 3

公知測定法 [Calypte^TM HIV- 1 Urine EIA： Arch. Pat hoi. Lab. Med.， 119， 139-141 (1995) ； Clinical lnf ectious Diseases, 19， 1100-1104 ( 1994)] による尿中 H I V抗体の測定において偽陽性の結果を与えた尿検体を用いて、該測定系で非特異反応を与える成分が何であるかを突きとめるべく検討を行った。

( 1 ) 上記該当する尿検体を 1 Mリン酸緩衝液（pH 7. 7) にて p H 7. 4に調整後、 5. 0、 0. 8及び 0. 2 のカツトフイノレターで順次濾過し、その 2 0 m 1 を限外濾過（ 10 kd力ットのメンブラン）にて 2 m 1 にまで濃縮した。濃縮した尿検体をゲル濾過（Sephacryl S- 30 0, Pharmacia) に付し、得られた各分画について、 H I V抗原への反応性を試験した。

尚、 H I V抗原への反応性は、各分画を H I V抗原

(gpl60) を固定化した H I V抗原固相化プレートと反応させた後、結合成分（非特異反応成分）を A L P標識ャギ抗ヒト（ I g G + I g M) 抗体または A L P標識ャギ抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体又は H R P標識ャギ抗ヒト I g G ( F a b特異的）抗体（いずれも Jackson Im munoResearch Labs.社製）を用いて、検出した。結果を図 8に示す。図 8において、縦軸は吸光度（O.D. ) を、横軸はゲル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実線は 2 8 0 n mにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上記抗ヒト ( I g G + I g M) 抗体による検出結果を、白三角線は上記抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体による検出結果を、黒三角線は上記抗ヒト I g G ( F a b特異的）抗体による検出結果をそれぞれ示す。

図 8より、抗ヒト I g G ( F a b特異的）抗体での検出においては、抗ヒト（ I g G + I g M) 抗体における場合と同様の反応様式（非特異反応成分との反応性）を示し、一方、抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体を用いた場合には反応性を示さないことが明らかとなった。このことより、非特異反応を与える成分は、 F c部分を含まない抗ヒト I g G ( F a b特異的）抗体との反応性を保持したヒト I g Gの断片化物又は同変性物であると考えられた。

従って、このような非特異反応を与える成分との反応性を持たない抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体を抗体検出試薬として使用すれば、抗体検出において非特異反応を防ぐことができ、その結果、非特異反応に基づく偽陽性の判定結果の発生が減少することにより特異性の高い高精度の抗体検出方法が提供できることが明らかになつた実施例 4 尿中 H I V抗体の測定

H I V抗原プレート（Calypte^TM HIV- 1 Urine EIA， C alypte Biomedical Corp. ) の各ゥエルに、第 1緩衝液

(Calypte™ HIV- 1 Urine EIAのサンプル緩衝液）を 2 5 1 及び尿サンプルを 2 0 0 1 加え、 1 0秒間攪拌後、 3 7 °Cで 1時間放置した。該プレートを 6回洗浄後（洗浄液： D-PBS, 0.05¾ Tween 20) 、 H R P標識ャギ抗ヒト 1 g G ( F c特異的）抗体 ( Peroxidase -conjugated Af f mi Pure uoat anti-Human lg 、 Fc Fragment Specif i c， Jackson I mmunoResearch Labs.社製）を第 2緩衝液

(50mM トリス緩衝液， 0.14M NaCl， 0.5¾ BSA, 5% Goat Serum, 0.05¾ Tween 20， 0.1% XL-I I ( H 7.3)) で 1 1， 0 0 0倍希釈したものを 1 0 0 1加え、同様に 3 7 °C での 1時間放置とプレート洗浄（ 6回）を行った。

次いで、発色液（50% TMB, 50m Citrate-Na₂HP0₄， 0. 0075¾ H ₂0₂ ) を 1 0 0 n 1加え、室温で 1 0分間反応後、反応停止液（50% TMB停止液， 50% 1N-H₂S0₄ ) 1 0 0 ^ 1 を加えて吸光度（OD = 450nm) を測定した。

尚、比較対照実験として、 A L P標識ャギ抗ヒトイムノグロプリン抗体を第 2抗体として使用する公知測定法 [Calypte™ HIV- 1 Urine EIA： Arch. Pathol. Lab. Me d. , 119, 139-141 ( 1995) ； Clinical Infectious Dise ases, 19, 1100-1104 (1994)] を用いて同一の検体を測定した（対照方法）。また、該測定キットの陰性コントロールと陽性コントロールを上記本発明の測定方法に従い測定した結果、同キットにおける測定結果と同等の吸光度が得られたことから、同キッ卜のカツトオフ値の算出法に従い、本発明方法におけるカツトオフ値を、該陰性コントロールの平均吸光度に 0. 1 8 0を加えた値と

7 o

血清 H I V抗体陽性者（ 2例）及び同抗体陰性者（ 9 8例）から得られた 1 0 0検体（尿）について測定した結果を表 2に示す。

<表 2 >

4例中、 2例は血清 HIV抗体陽性者である表 2より、本発明方法及び対照方法の感度はともに 1

0 0 % ( 2 / 2 ) であったが、特異性は対照方法では 7 1. 4 % ( 7 0 / 9 8 ) であり、本発明方法では 9 8 % ( 9 6 / 9 8 ) であった。

このことから本発明方法による抗体測定方法は、対照方法に比較して偽陽性が著しく減少し特異性において極めて優れていることがわかる。実施例 5 尿中 H. ピロリ抗体の測定

( 1 ) H. ピロリ抗原プレートの調製

常法 [J. Clin. Microbiol. , 29: 2587-2589 ( 1991)] に従って調製したピロリ菌（臨床分離培養株）の 1 0 0 m / m 1 冷ダルベッコ一 P B S溶液に、スターラーで攪拌しながら更に冷 0. 2 % トリトン— X溶液を等量加え、 5分間攪拌後遠心した（ 3, 000 rpm, 20 min. ) 。上澄みを新しいチューブに移して抽出液とした（l〜1.5mg /ml protein) _α

この抽出液を、 D— P B Sで希釈し（2.5/i g/ml) 、 9 6ゥエルプレートの各ゥエルに 1 0 0 μ 1 ずつ加え、 2 5 °Cで一夜インキュベートした。該ゥエルを洗浄後、ブロッキング液 (D-PBS, 0.5% casein, 5¾ sorbitol, 0.0 5¾ NaN₃ (pH 7.4)) 3 0 0 μ 1 を加え、 2 5 °Cで一夜ィンキュペートした。次いでブロッキング液を除去し、 2 5でで一夜乾燥させ、これをアルミ袋に乾燥剤とともに入れ密封して、使用時まで 4 °Cで保存した。

( 2 ) 測定

上記で得られた固相化抗原（プレート）を用い、実施例 4 と同様にして尿検体中のピ口リ抗体を測定した。

即ち、各ゥエルに、第 1緩衝液（200mM トリス緩衝液, 0. 14M NaCl, 2% casein, 0.5¾ BSA, 0.05% Tween 20, 0. 1¾ NaN_3l 20^ g/ml E. Coli抽出物（pH 7. 3) ) 2 5 1 及び尿サンプル 1 0 0 1 加え、 1 0秒間攪拌後、 3 7 °Cで 1 時間放置した。該プレートを 6 回洗浄後、実施例 4 と同様に、 H R P標識ャギ抗ヒト I g G ( F c 特異的）抗体の第 2緩衝液溶液希釈物 1 0 0 1 を加えて 3 7でで 1 時間放置することにより抗体を検出した。

得られた結果を図 9及び表 3 に示す。

<表 3 > サン 7·ルカ7トオフ値感度特異性正確性

"C-UBT (り "C-UBT(-)

本発明方法尿 M+3SD(0.104) 56/56(醒） 42/44C95X) 98X

尿 M+5SDC0.147) 56/56C100X) 43/44(9850 99X 対照方法血清 3SDC1.27) 53/56(95») 43/44C98X) 96K

血清 M+5SDC1.82) 47/56(8430 43/44(9850 90X 図 9中、縦軸は吸光度（OD-450- 650nm) を、横軸は¹³ C一 U B T試験 [J. Gastroenterol.， 33: pp.6- 13 (199 8)] にて確認したピロリ感染陽性群（ + ； n = 56) 及び同陰性群 (― ； n = 44) を示す。

表 3において、感度は、 ¹³ C— U B T試験における陽性者を陽性と検出した割合を、特異性は、 ¹³C— U B T 試験における陰性者を陰性と検出した割合を、正確性は、 3 C - U B T試験における陽性者及び同陰性者をそれぞれ陽性及び陰性と検出した割合をそれぞれ示し、カツトオフ値として、平均 M + 3 S D又は M+ 5 S Dを採用した場合について表した。また、対照として、血清を被検試料とするピロリ抗体測定キット [HM— C A P ： E P 1 社協和メデックス（株） ] を用いて同一検体を測定した結果を併記した（対照方法）。

該結果より、本発明方法が、対照方法よりも特に感度及び正確性において、優れた結果を与えることが判明した。実施例 6 尿中風疹ウィルス（ルベラ）抗体の測定

( 1 ) ルベラ抗原プレートの調製

抗原として市販のルベラ抗原 [ B 1 0— D E S IG N 社] を用い、抗原濃度を 1 gZm 1 及びブロッキング液を（D- PBS, 1¾ BSA, 5¾ sorbitol, 0.05% NaN₃ (pH 7, 4)) とした以外は前記実施例 5 ( 1 ) と同様にして、ルベラ抗原プレートを調製した。

( 2 ) 測定

上記で得た抗原プレートを使用して、前記実施例 5 ( 2 ) と同様にして尿サンプル中のルベラ抗体を測定した。得られた結果を図 1 0及び表 4に示す。

く表 4 〉

図 1 0中、縦軸は吸光度（OD = 450- 650nra) を、横軸は市販キット（風疹 I g G (II) 一 E I A 「生研」、デン力生研（株））によって測定された血清ルベラ抗体陽性群（n = 76) 及び同陰性群（n = 23) をそれぞれ示す。表 4 は、本発明方法と対照方法としての上記血清ルベラ抗体測定結果との一致性を示すものである。

該結果より、本発明方法と対照方法の一致率は 1 0 0 53 1

71

% ( 9 9 / 9 9 ) であり、本発明によれば、検体として安全かつ簡便な尿を採用しても高感度かつ高特異的な抗体検出が可能であり、臨床検査分野において有用であることが判明した。実施例 7 抗体測定装置の作成

( 1 ) H. ピロリ抗原の調製

実施例 1 ( 1 ) と同様の方法で H. ピロリ抗原溶液を調製し、一 8 0 °Cで保存した。

( 2 ) 標識抗ヒト I g G抗体含有乾燥グラスファイバーの調製

グラスファイバーシート（ 5. 0 mm X 2 6 0 mm、厚さ 0. 8 mm、 Whatman社製）に直径 4 O nmの金コロイド標識抗ヒト I g G ( F c特異的）抗体溶液を l m 1 加えて一夜乾燥して調製した。これは、使用するまで乾燥剤とともに室温で保存した。

( 3 ) メンブレンの調製

上記（ 1 ) で調製した H. ピロリ抗原溶液（ 3 m g Z m l ) 及び抗ヒト I g G抗体（ 0. 3 m g/m l ) のそれぞれを、ニトロセルロース膜（ 2 6. 5 mm x 2 6 0 m m、厚さ 0. 1 mm ；ァドノくンス ' マイクロディノくイス社製）に、図 1 1 に示すように一定の間隔を置いて引いたライン状に噴霧（ 1. 5 I Z c m) し、 3 7 °Cで 1 2 0分間乾燥した。乾燥後、スキムミルクを含むポラックス（Borax) 緩衝液（ p H8.2) に 3 0分間浸漬して洗浄した。 3 7 °Cで 1時間乾燥し、乾燥剤とともに室温で保存した。

( 4 ) アセンブリ一（固相支持体）

図 3 ( A )に示すように、上記メンブレン（ 3 ) 、吸水濾紙パッド（ 4 ) ( 2 2 X 2 6 0 m m、厚さ 1. 5 mm ； Whatman社製）、上記標識抗体含有グラスファイバー ( 2 ) 及びサンプルノ、。ッド（ 1 ) ( 1 5 x 2 6 0 mm、厚さし 0 mm ；ろ紙、 Whatman社製）を接着剤にて貼り合わせ、 5 m m幅にてカットした。

これを図 3 ( B ) に示すような成形されたプラスチックハウジングの下部セクション（ 8 ) 内におき、次いで、試料添加窓（ 9 ) 及び検出窓（ 1 0 ) が並んだ 2つの開口部を有するハウジングの上部セクション（ 7 ) を支持体の上から被して下部セクション（ 8 ) と一体化させた。実施例 8 尿中 H. ピロリ抗体の測定

実施例 7で調製した装置を用いて、 H. ピロリ感染者尿、同未感染者尿及び同感染者の極端に薄い尿の 3種類の尿検体における H. ピロリ抗体を測定した。 1

73 まず、検体希釈液（ 200mM トリス緩衝液， 0.14M NaCl, 2% カゼィン， 0.5% BSA, 0.05% Tween 20, 0.1% NaN₃ (pH 7.3)、大腸菌し P S (Diico社製） 5 0 g / m 1 ) 5 0 0 μ \ に尿検体 5 0 0 1 を加えて混合し、該混合液から 6滴（約 1 5 0 1 ) を実施例 7記載の装置の試料添加窓（ 9 ) に滴下して支持体に吸着させ、 2 0分静置した。その結果、被検体として適性尿検体を使用した場合は、検出窓（ 1 0 ) のコントロール部位にピンク〜赤色の発色帯が出現し、一方被検体として極端に薄い不適性尿検体を使用した場合は、検出窓（ 1 0 ) のテスト部位及びコントロール部位はいずれも発色せず、判定不能の結果を示した。適性尿検体を用いた場合、 Η . ピロリ菌に感染していない場合は、検出窓（ 1 0 ) のコントロール部位のみにピンク〜赤色の発色帯が出現し、 Η . ピロリ感染に関して陰性結果（真性陰性）を示し、 Η. ピロリ菌に感染している場合は、検出窓（ 1 0 ) のテスト部位及びコントロール部位ともにピンク〜赤色の発色帯が出現し、 Η . ピロリ感染に関して陽性結果を示した。実施例 9 尿中 Η . ピロリ抗体の測定

( 1 ) 大腸菌由来成分の調製

大腸菌（pvcl8/JM109株：宝酒造社製）をアンピシリン含有液体 L B培地（Luria- Bertani培地、日本製薬社）で、 3 7 °C, 1 8時間培養後、遠心により集菌し P B Sで 2 回洗浄した。菌体濃度が 1 0 0 m g Z m 1 になるように冷 P B Sを加え、超音波破砕機により破砕抽出した（10 秒 X 3回）。かくして得た遠心上清を大腸菌抽出蛋白とした。

( 2 ) 実施例 8の検体希釈液に配合した大腸菌 L P Sの代わりに上記（ 1 ) で調製した大腸菌抽出蛋白を使用する以外は、実施例 8 と同様にして尿中の H. ピロリ抗体の測定を行った。その結果、実施例 8 と同様の結果が得られた。実施例 1 0

¹³C— U B Tテスト [J. Gastroenterol. , 33:6-13(199 8)]にて群分けした H. ピロリ感染陽性者及び同陰性者の各 2 1例（計 4 2例）の、全血液、血漿、尿をそれぞれ被検試料として、被検試料中の H. ピロリ抗体を上記実施例 8に従って測定した。

尚、比較実験として、全血液、血漿を被検試料とする市販の H. ピロリ抗体測定装置を使用して、同一被験者の検体を対象として測定を行い、その結果から本発明装置の効果を検討した。結果を図 1 2に示す。なお、図中比較装置 A〜Hは下記の測定装置を示す。 A ： Helitest ( Cortecs Diagnostics社製)

B ： H. pylori-Check-1

( Bio-Medical Products社製：）

C ： First Check H. ylori

(Worldwide Medical Corp社製）

D ： Biocard Helicobacter pylori I G

' ( Anti Biotech Oy社製）

E ： Insta Test H. Pylori

( Cortez Diagnostics Inc.社製)

F ： One Step H. pylori Test

( Teco Diagnostics社製)

G ： H. ylori SPOT

( International I腿 uno - Diagnostics社製) H ： Quick Stripe H. pylori

( iatech Diagnostics Inc.社製)

また、図中「 Specif ity」は、 ¹³ C— U B Tテスト陰性サンプルを各キットで測定した時に、陰性として検出できた割合（陰性率）を示し、「SensiUvity」は、 ¹³ C— U B Tテスト陽性サンプルを各キットで測定した時に、陽性として検出できた割合（陽性率）を示す。

図 1 2の結果から、本発明の抗体測定装置及び固相ァッセィ方法は、被検試料として血液（全血液、血漿）を使用した場合はもちろん、尿を使用した場合でも、高い検出特異性及び精度を有する優れたァッセィシステムであることが分かる。

また該結果より、本発明によれば、検体として安全かつ簡便な尿を採用しても高感度かつ高特異的な抗体検出が可能であり、臨床検査分野において有用であることがいんな。実施例 1 1 大腸菌由来成分の尿中抗体測定に対する効果

( 1 ) 尿中抗体測定に対する大腸菌由来成分の効果を実施例 8の測定装置を利用して評価した。具体的には、 ¹³ C一 U B Tテストにて群分けした H. ピロリ感染陽性者及び同陰性者の尿をそれぞれ被検試料として、検体希釈液に大腸菌 L P Sを配合しない系（希釈液 1 ) 及び表 5 に示す種々濃度の大腸菌 L P Sを配合した系で、尿中の H. ピロリ抗体を測定した。テスト部位及びコントロール部位のラインの発色は、デンシトメーター（A T T O 社製）によるライン強度で評価した。結果を表 5に示す。 <表 5 >

被検試料に大腸菌 L P S を 1 1 . l ^ g Z m l 以上配合することで、希釈液 1 で見られた非特異反応が消失し偽陽性検出（誤検出）を防止できることが分かった。産業上の利用可能性

本発明は、比較的抗体含有量の少ない尿を被検試料とする場合であっても、感染源に向けられた標的抗体を高感度かつ高い特異性をもって検出できる抗体測定技術を提供するものである。すなわち本発明の抗体測定法によれば、被検試料中の夾雑物に基づいて生じる「偽陽性」反応が有意に抑制されて、精度並びに信頼性の高い抗体測定結果を得ることができる。また本発明は、ィムノキャビラリ一アツセィ又はィムノクロマトグラフィーアツセィの改良法であり、これにより被検試料中の標的抗体の存在及び量を、被検試料に基づいて生じる「偽陰性」と「真性陰性」とを区別して、精度よく検出測定できる

Claims

請求の範囲

1 . 被検試料中の標的抗体を抗原抗体反応を利用して検出測定する方法であって、当該抗体と抗原との抗原抗体反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことを特徴とする抗体測定方法。

2 . 大腸菌由来成分が、大腸菌可溶性成分又はリポ多糖のいずれか少なくとも 1種であることを特徴とする請求項 1記載の抗体測定方法。

3 . 大腸菌由来成分を、測定系の抗原 1 gあたり、 0 . 1 〜 1 0 0 g程度の割合で存在させることを特徴とする請求項 1記載の抗体測定方法。

4 . 被検試料中の標的抗体をサンドイッチ法に従って検出測定する免疫測定法であって、抗体検出試薬として該抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有するものを用いることを特徴とする抗体測定方法。

5 . 抗体検出試薬が F c特異的抗 I g G抗体である請求項 4記載の抗体測定方法。

6 . 被検試料中の標的抗体と当該抗体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原との抗原抗体反応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された標的抗体と該抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有する抗体検出試薬との反応工程を含む請求項 4記載の抗体測定方法。

7 . 抗原抗体反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことを特徴とする請求項 6記載の抗体測定方法。

8 . 被検試料が尿である請求項 1 または 4 に記載の抗体測定方法。

9 . 標的抗体が感染源に向けられた抗体である請求項 1 または 4 に記載の測定方法。

1 0 . 感染源が、ヒト免疫不全ウィルス、肝炎ウィルス風疹ゥイノレス、インフルエンザウイルス、麻疹ウィルスヘルぺスウィルス、サイトメガロウィルス、ヘリコパ、クター · ピロリ菌、クラミジァ菌、淋菌及びトキソプラズマスからなる群から選択されるいずれかである請求項 1 または 4記載の抗体測定方法。

1 1. 抗原が、バクテリア、ウィルス、原虫、又は少なくともそれらの抗原決定基を有するバクテリア由来成分、ウィルス由来成分若しくは原虫由来成分である請求項 1 または 4に記載の抗体測定方法。

1 2. 抗原が、へリコパクター ' ピロリ菌又は少なくともその抗原決定基を有するへリコパクター · ピロリ菌由来成分である請求項 1 または 4記載の抗体測定方法。

1 3. 少なくとも（a)被検試料を接触させる第 1領域及び（b)該被検試料中の抗体を反応させる第 2領域を、被検試料が毛細管現象により該第 1領域から第 2領域に輸送されるように設けてなる固相支持体、並びに第 2領域での反応結果を検出するための標識手段を含有する測定装置であって、上記（b)第 2領域に、（i)検出対象である標的抗体を補足するリガンドを固定化したテスト部位と (ii)被検試料中の任意抗体を捕捉するリガンドを固定化したコントロール部位とを有することを特徴とする抗体測定装置。

1 4. テスト部位に固定化されたリガンドが、被検試料中の標的抗体に対する抗原である請求項 1 3記載の抗体測定装置。

1 5 . コントロール部位に固定化されたリガンドが、被検試料中の任意抗体を捕捉する抗ヒトイムノグロプリン抗体である請求項 1 3記載の抗体測定装置。

1 6 . 標識手段として、標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識化されたリガンドを有する請求項 1 3 に記載の抗体測定装置。

1 7 . 標識手段が、標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識化されたリガンドであって、該標識化リガンドは固相支持体の第 2領域より上流域に脱離可能に支持されており、被検試料と接触すると該試料中の標的抗体及び任意抗体と反応してそれぞれ標的抗体 //標識化リガンド -複合体及び任意抗体 Z標識化リガンド -複合体を形成し、毛細管現象によって第 2領域に輸送されておのおのテスト部位及びコントロール部位に結合するものである、請求項 1 3記載の抗体測定装置。

1 8 . 標識化リガンドが、固相支持体の第 1 領域と第 2 領域との間に位置する領域（トレーサー領域）に支持されてなる請求項 1 7記載の抗体測定装置。

1 9 . 標的抗体及び任意抗体のいずれにも結合する標識ィ匕リガンドが、標識化された抗ヒトイムノグロブリン抗体である請求項 1 7記載の抗体測定装置。

2 0 . 抗ヒトイムノグロブリン抗体が、ィムノグロプリン Gの F c領域に結合特異性を有する抗 I g G抗体である、請求項 1 9記載の抗体測定装置。

2 1 . 固相支持体が、第 1 領域及び第 2領域に続いて更に吸収領域を有し、これにより第 1領域から第 2領域に輸送された被検試料が毛細管現象によりさらに吸収領域に輸送される請求項 1 3 に記載の抗体測定装置。

2 2 . 第 2領域のテスト部位における標的抗体の結合反応が大腸菌由来成分の存在下で行われる請求項 1 3記載の抗体測定装置。

2 3 . 被検試料が尿である請求項 1 3記載の抗体測定装

2 4 . 被検試料中の感染源に向けられた検出対象たる標的抗体を測定するための請求項 1 3乃至 2 2 のいずれかに記載の抗体測定装置の使用。

2 5 . 被検試料が尿である請求項 2 4記載の使用。

2 6 . 被検試料を請求項 1 3 に記載の抗体測定装置の第 1領域に接触させ、第 2領域のコントロール部位が発色している条件のもとで、第 2領域のテスト部位の発色の有無を検出することからなる、被検試料中の標的抗体の固相ァッセィ方法。

2 7 . 被検試料を請求項 2 0 に記載の抗体測定装置の第 1領域に接触させ、第 2領域のコントロール部位が発色している条件のもとで、第 2領域のテスト部位の発色の有無を検出することからなる、被検試料中の標的抗体の固相ァッセィ方法。

2 8 . 抗体測定装置の第 2領域のテスト部位における標的抗体の結合反応を大腸菌由来成分の存在下で行うことを特徴とする請求項 2 6 または 2 7記載の標的抗体の固相アツセィ方法。

2 9 . 被検試料が尿である請求項 2 6記載の標的抗体の固相ァッセィ方法。

3 0 . 被検試料中の抗体を抗原抗体反応を利用して検出測定するのに用いられる試薬キットであって、大腸菌由来成分を含むことを特徴とする抗体測定用試薬キット。

3 1 . 抗体検出試薬として標的抗体 I g Gの F c領域に結合特異性を有するものを含むことを特徴とする抗体測定用試薬キット。

3 2 . 請求項 1 3記載の抗体測定装置を含む抗体測定用試薬キット。