JPH05340947A - サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キット - Google Patents
サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キットInfo
- Publication number
- JPH05340947A JPH05340947A JP4174911A JP17491192A JPH05340947A JP H05340947 A JPH05340947 A JP H05340947A JP 4174911 A JP4174911 A JP 4174911A JP 17491192 A JP17491192 A JP 17491192A JP H05340947 A JPH05340947 A JP H05340947A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- substance
- monoclonal antibody
- measured
- test tube
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 測定感度、測定の再現性に優れた免疫測定法
および免疫測定用試薬を提供する。 【構成】 測定対象物質に対する第一のモノクローナル
抗体、標識された測定対象物質に対する第二の抗体のフ
ラグメントおよび水不溶性担体に固定化され、かつ第一
のモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的に反応する第
三のモノクローナル抗体からなる免疫測定法および測定
用キット。
および免疫測定用試薬を提供する。 【構成】 測定対象物質に対する第一のモノクローナル
抗体、標識された測定対象物質に対する第二の抗体のフ
ラグメントおよび水不溶性担体に固定化され、かつ第一
のモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的に反応する第
三のモノクローナル抗体からなる免疫測定法および測定
用キット。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、サンドイッチ法による
免疫測定法および測定用キットに関する。
免疫測定法および測定用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】従来３種類のレセプターを用いるヘテロ
ジニアスなサンドイッチ法に基づく免疫測定法として
は、特開昭５９−２３２５１号公報に液層中に存在する
抗原と結合性の第１のレセプター、標識された第３のレ
セプターおよび第１のレセプターと結合性である第２の
レセプターを固相化抗体として用いることによりあらゆ
る測定項目に対応した固相化抗体を提供することを特徴
とした免疫測定法および測定試薬キットに関する記載が
ある。
ジニアスなサンドイッチ法に基づく免疫測定法として
は、特開昭５９−２３２５１号公報に液層中に存在する
抗原と結合性の第１のレセプター、標識された第３のレ
セプターおよび第１のレセプターと結合性である第２の
レセプターを固相化抗体として用いることによりあらゆ
る測定項目に対応した固相化抗体を提供することを特徴
とした免疫測定法および測定試薬キットに関する記載が
ある。
【０００３】上記特開昭５９−２３２５１号公報におい
ては、第２のレセプターとして、第１のレセプターのＦ
ｃ部分に特異的な抗体を用いる方法が例示されている
が、この場合第２のレセプターと第１のレセプターはそ
れぞれ異なる動物種から得られた抗体を用いる必要があ
る。
ては、第２のレセプターとして、第１のレセプターのＦ
ｃ部分に特異的な抗体を用いる方法が例示されている
が、この場合第２のレセプターと第１のレセプターはそ
れぞれ異なる動物種から得られた抗体を用いる必要があ
る。
【０００４】近年、免疫測定の分野においてはモノクロ
ーナル抗体がその特異性の高さ、常に均一な性能の抗体
が得られるなどの特徴により広く利用されるようになっ
てきている。通常モノクローナル抗体はマウス由来のも
のが非常に一般的であるため、特開昭５９−２３２５１
号公報に記載されているような方法においては、第１の
レセプターにモノクローナル抗体を用いた場合、第２の
レセプターにマウスから得られたモノクローナル抗体を
用いることは通常困難であり、いずれか一方のレセプタ
ーにはマウス以外の動物が産生する抗体、すなわちポリ
クローナル抗体を使用しなくてはならなかった。
ーナル抗体がその特異性の高さ、常に均一な性能の抗体
が得られるなどの特徴により広く利用されるようになっ
てきている。通常モノクローナル抗体はマウス由来のも
のが非常に一般的であるため、特開昭５９−２３２５１
号公報に記載されているような方法においては、第１の
レセプターにモノクローナル抗体を用いた場合、第２の
レセプターにマウスから得られたモノクローナル抗体を
用いることは通常困難であり、いずれか一方のレセプタ
ーにはマウス以外の動物が産生する抗体、すなわちポリ
クローナル抗体を使用しなくてはならなかった。
【０００５】しかしながら、ポリクローナル抗体では力
価、特異性が不十分なため、ポリクローナル抗体を免疫
測定用試薬に使用した場合、測定バックグラウンドの上
昇および測定感度、測定の再現性の低下といった問題を
発生させてきた。
価、特異性が不十分なため、ポリクローナル抗体を免疫
測定用試薬に使用した場合、測定バックグラウンドの上
昇および測定感度、測定の再現性の低下といった問題を
発生させてきた。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するため鋭意検討した結果本発明に到達した。すな
わち、本発明は、試料中の測定対象物質（Ａ）、（Ａ）
に対する第一のモノクローナル抗体（Ｂ）、標識された
（Ａ）に対する第二の抗体のＦ（ａｂ’）2 、Ｆａ
ｂ’、Ｆａｂの群から少なくとも１つ選択されるフラグ
メント（Ｃ）および水不溶性担体に固定化され、かつ第
一のモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的に結合する
第三のモノクローナル抗体（Ｄ）を反応させて形成され
た免疫複合体中の標識物質量を測定することにより
（Ａ）の量を測定する免疫測定法ならびに上記（Ｂ）、
（Ｃ）、（Ｄ）からなる免疫測定用キットに関するもの
である。
解決するため鋭意検討した結果本発明に到達した。すな
わち、本発明は、試料中の測定対象物質（Ａ）、（Ａ）
に対する第一のモノクローナル抗体（Ｂ）、標識された
（Ａ）に対する第二の抗体のＦ（ａｂ’）2 、Ｆａ
ｂ’、Ｆａｂの群から少なくとも１つ選択されるフラグ
メント（Ｃ）および水不溶性担体に固定化され、かつ第
一のモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的に結合する
第三のモノクローナル抗体（Ｄ）を反応させて形成され
た免疫複合体中の標識物質量を測定することにより
（Ａ）の量を測定する免疫測定法ならびに上記（Ｂ）、
（Ｃ）、（Ｄ）からなる免疫測定用キットに関するもの
である。
【０００７】本発明において、固相化抗体として測定対
象物質に対するモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的
なモノクローナル抗体を用いることが可能となったこと
によって、先に挙げた測定バックグラウンドの上昇およ
び測定感度、測定の再現性の低下といった問題を発生さ
せることがなくなり、常に安定した性能の免疫測定用キ
ットを供給することが可能となった。
象物質に対するモノクローナル抗体のＦｃ部分に特異的
なモノクローナル抗体を用いることが可能となったこと
によって、先に挙げた測定バックグラウンドの上昇およ
び測定感度、測定の再現性の低下といった問題を発生さ
せることがなくなり、常に安定した性能の免疫測定用キ
ットを供給することが可能となった。
【０００８】本発明において、モノクローナル抗体はマ
ウス、ラットなどから得られたものが挙げられるが、好
ましいのは抗体同志の非特異的吸着が小さく、かつ抗原
性物質との親和力の強いモノクローナル抗体を作製でき
るマウスから得られたものである。モノクローナル抗体
は、ケラー等の方法（ネイチャー、第２５６巻、４９５
頁、１９７５年）によって得ることができる。
ウス、ラットなどから得られたものが挙げられるが、好
ましいのは抗体同志の非特異的吸着が小さく、かつ抗原
性物質との親和力の強いモノクローナル抗体を作製でき
るマウスから得られたものである。モノクローナル抗体
は、ケラー等の方法（ネイチャー、第２５６巻、４９５
頁、１９７５年）によって得ることができる。
【０００９】本発明において、測定対象物質（Ａ）とし
てはＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＰＯ
Ａ、フェリチンなどの腫瘍マーカー；ＴＳＨ、ＬＨ、Ｆ
ＳＨ、ｈＣＧ、プロラクチン、ｈＧＨ、ガストリン、ソ
マトスタチン、グルカゴン、インスリンなどのホルモ
ン；ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、肝炎抗
体、ＴＢＧ、ＣＲＰ、β２−マイクログロブリンの様な
蛋白；エラスターゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパ
ーゼ、リボヌクレアーゼ、エノラーゼ、アルカリフォス
ファターゼなどの酵素；肝炎ウイルス、エイズウイルス
などの感染性物質などのエピトープを２個以上有する物
質が挙げられる。
てはＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＰＯ
Ａ、フェリチンなどの腫瘍マーカー；ＴＳＨ、ＬＨ、Ｆ
ＳＨ、ｈＣＧ、プロラクチン、ｈＧＨ、ガストリン、ソ
マトスタチン、グルカゴン、インスリンなどのホルモ
ン；ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、肝炎抗
体、ＴＢＧ、ＣＲＰ、β２−マイクログロブリンの様な
蛋白；エラスターゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、リパ
ーゼ、リボヌクレアーゼ、エノラーゼ、アルカリフォス
ファターゼなどの酵素；肝炎ウイルス、エイズウイルス
などの感染性物質などのエピトープを２個以上有する物
質が挙げられる。
【００１０】本発明において、第一のモノクローナル抗
体（Ｂ）としてはＦｃ部分を含む全抗体を用いることが
必要である。
体（Ｂ）としてはＦｃ部分を含む全抗体を用いることが
必要である。
【００１１】さらに、（Ｂ）としてはＩｇＧ、ＩｇＭ、
ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥのそれぞれのクラスの抗体を用
いることができる。これらのうち、好ましいのはＩｇ
Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡクラスである。
ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥのそれぞれのクラスの抗体を用
いることができる。これらのうち、好ましいのはＩｇ
Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡクラスである。
【００１２】本発明において、第二の抗体のフラグメン
ト（Ｃ）としては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、
ＩｇＥクラスのモノクローナル抗体あるいはポリクロー
ナル抗体を分解することによって得られたＦ（ａｂ’）
2、Ｆａｂ’、Ｆａｂから選択されるフラグメントを用
いることが必要である。これらのうちＦ（ａｂ’）2は
抗体をペプシンで分解することによって得られ、Ｆａ
ｂ’はＦ（ａｂ’）2 をメルカプトエチルアミンなどの
還元剤で分解することによって得られ、Ｆａｂは抗体を
パパイン分解することによって得ることができる。さら
に好ましくは、（Ｃ）はモノクローナル抗体を分解する
ことによって得られたフラグメントである。
ト（Ｃ）としては、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、
ＩｇＥクラスのモノクローナル抗体あるいはポリクロー
ナル抗体を分解することによって得られたＦ（ａｂ’）
2、Ｆａｂ’、Ｆａｂから選択されるフラグメントを用
いることが必要である。これらのうちＦ（ａｂ’）2は
抗体をペプシンで分解することによって得られ、Ｆａ
ｂ’はＦ（ａｂ’）2 をメルカプトエチルアミンなどの
還元剤で分解することによって得られ、Ｆａｂは抗体を
パパイン分解することによって得ることができる。さら
に好ましくは、（Ｃ）はモノクローナル抗体を分解する
ことによって得られたフラグメントである。
【００１３】また、（Ｃ）を標識する物質としては酵
素、蛍光物質、発光物質もしくは放射性同位元素が好適
に用いられる。
素、蛍光物質、発光物質もしくは放射性同位元素が好適
に用いられる。
【００１４】これらの標識物質としては、免疫測定にお
いて既に公知な物質のいずれもが使用することができ
る。酵素としては西洋ワサビぺルオキシダーゼ、アルカ
リフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、β−Ｄ
−ガラクトシダーゼなどが；蛍光物質としてはフルオレ
セイン、ユーロピウム誘導体などが；発光物質としては
アクリジニウムエステル、Ｎ−アミノブチル−Ｎ−エチ
ルイソルミノール（ＡＢＥＩ）などが；放射性同位元素
としては125Ｉや131Ｉが挙げられる。
いて既に公知な物質のいずれもが使用することができ
る。酵素としては西洋ワサビぺルオキシダーゼ、アルカ
リフォスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、β−Ｄ
−ガラクトシダーゼなどが；蛍光物質としてはフルオレ
セイン、ユーロピウム誘導体などが；発光物質としては
アクリジニウムエステル、Ｎ−アミノブチル−Ｎ−エチ
ルイソルミノール（ＡＢＥＩ）などが；放射性同位元素
としては125Ｉや131Ｉが挙げられる。
【００１５】この標識方法としては上記の何れのタイプ
の場合も従来公知の標識方法で作製することができる。
例えば、酵素により標識する方法としては石川らの方
法（アナリティカル・レター、第１５巻、１４７頁、１
９８２年）；蛍光物質を標識する方法としてはヘミラ
等の方法（アナリティカル・バイオケミストリー、第１
３７巻、３３５頁、１９８４年）；発光物質を標識す
る方法としてはウッドヘッド等の方法（クリニカル・ケ
ミストリー、第２９巻、１４８０頁、１９８３年）；
放射性同位元素を標識する方法としてはハンター等の方
法（ネイチャー、１９４巻、４９５頁、１９６２年）な
どが挙げられる。
の場合も従来公知の標識方法で作製することができる。
例えば、酵素により標識する方法としては石川らの方
法（アナリティカル・レター、第１５巻、１４７頁、１
９８２年）；蛍光物質を標識する方法としてはヘミラ
等の方法（アナリティカル・バイオケミストリー、第１
３７巻、３３５頁、１９８４年）；発光物質を標識す
る方法としてはウッドヘッド等の方法（クリニカル・ケ
ミストリー、第２９巻、１４８０頁、１９８３年）；
放射性同位元素を標識する方法としてはハンター等の方
法（ネイチャー、１９４巻、４９５頁、１９６２年）な
どが挙げられる。
【００１６】本発明において、第三のモノクローナル抗
体（Ｄ）としては、（Ｂ）と同じ動物種から得られたも
のである。また、（Ｄ）はＦｃ部分を含む全抗体であっ
てもよいし、第二の抗体（Ｃ）の場合と同様なフラグメ
ントであってもよい。
体（Ｄ）としては、（Ｂ）と同じ動物種から得られたも
のである。また、（Ｄ）はＦｃ部分を含む全抗体であっ
てもよいし、第二の抗体（Ｃ）の場合と同様なフラグメ
ントであってもよい。
【００１７】また、（Ｄ）は、（Ｂ）がＩｇＧの場合、
ＩｇＧ由来のＦｃ部分を；（Ｂ）がＩｇＭの場合、Ｉｇ
Ｍ由来のＦｃ部分を；（Ｂ）がＩｇＡの場合は、ＩｇＡ
由来のＦｃ部分をというように、（Ｂ）のクラス、サブ
クラスに対応したＦｃ部分を免疫することによって得る
ことができる。さらに、より特異性の高い抗体を得るた
めには、ポリクローナルなマウスのＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＡ由来のＦｃ部分を免疫するよりも、モノクローナル
なマウスのＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ由来のＦｃ部分を免
疫した方が、より特異性の高いモノクローナル抗体を得
ることができる。
ＩｇＧ由来のＦｃ部分を；（Ｂ）がＩｇＭの場合、Ｉｇ
Ｍ由来のＦｃ部分を；（Ｂ）がＩｇＡの場合は、ＩｇＡ
由来のＦｃ部分をというように、（Ｂ）のクラス、サブ
クラスに対応したＦｃ部分を免疫することによって得る
ことができる。さらに、より特異性の高い抗体を得るた
めには、ポリクローナルなマウスのＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｉ
ｇＡ由来のＦｃ部分を免疫するよりも、モノクローナル
なマウスのＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ由来のＦｃ部分を免
疫した方が、より特異性の高いモノクローナル抗体を得
ることができる。
【００１８】本発明において、（Ｄ）を固定化する水不
溶性担体としてはガラスビーズ、プラスティックビー
ズ、プラスティック試験管、ガラスフィルター、マイク
ロパーティクルなどのこれまで公知の担体がいずれも使
用することができる。
溶性担体としてはガラスビーズ、プラスティックビー
ズ、プラスティック試験管、ガラスフィルター、マイク
ロパーティクルなどのこれまで公知の担体がいずれも使
用することができる。
【００１９】水不溶性担体に、上記（Ｄ）を結合させる
方法としては、特開平２−２０５７７４号公報に記載の
方法と同様でよい。すなわち、ガラスと（Ｄ）を化学的
に結合させる方法（例えば、米国特許第４２８０９９２
号明細書および同第３６５２７６１号明細書）、および
プラスティックに抗体を物理吸着させる方法（例えば、
イー・エングバル等；バイオキム・バイオフィズ・アク
タ、２５１巻、４２７頁、１９７１年）がある。
方法としては、特開平２−２０５７７４号公報に記載の
方法と同様でよい。すなわち、ガラスと（Ｄ）を化学的
に結合させる方法（例えば、米国特許第４２８０９９２
号明細書および同第３６５２７６１号明細書）、および
プラスティックに抗体を物理吸着させる方法（例えば、
イー・エングバル等；バイオキム・バイオフィズ・アク
タ、２５１巻、４２７頁、１９７１年）がある。
【００２０】本発明において、免疫複合体は（Ｂ）、
（Ｃ）、（Ｄ）および（Ａ）を含む試料を以下に示した
［方法１］〜［方法３］の３通りの方法で反応させるこ
とによって水不溶性担体上に形成させることができる。
すなわち、［方法１］として（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）お
よび（Ａ）を同時に反応させる方法、［方法２］として
（Ｂ）、（Ｃ）および（Ａ）を反応させてから（Ｄ）と
反応させる方法、および［方法３］として（Ｂ）、
（Ｄ）および（Ａ）を反応させ、Ｂ／Ｆ分離によって未
反応物を除去してから（Ｃ）と反応させる方法の以上３
通りの順序での測定方法のいずれもが本発明においては
適用することができる。
（Ｃ）、（Ｄ）および（Ａ）を含む試料を以下に示した
［方法１］〜［方法３］の３通りの方法で反応させるこ
とによって水不溶性担体上に形成させることができる。
すなわち、［方法１］として（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）お
よび（Ａ）を同時に反応させる方法、［方法２］として
（Ｂ）、（Ｃ）および（Ａ）を反応させてから（Ｄ）と
反応させる方法、および［方法３］として（Ｂ）、
（Ｄ）および（Ａ）を反応させ、Ｂ／Ｆ分離によって未
反応物を除去してから（Ｃ）と反応させる方法の以上３
通りの順序での測定方法のいずれもが本発明においては
適用することができる。
【００２１】該免疫複合体中の標識物質量は、いずれも
これまで公知の方法を用いて測定することができる。標
識物が酵素の場合、その酵素活性は分光光度計を用いる
比色法（エングバル等、ジェー・イムノール、１０９
巻、１２９頁、１９７２年）、蛍光光度計を用いる蛍光
法（渡辺等、クリニカル・ケミストリー、２５巻、８０
頁、１９７９年）、ルミノメーターを用いる発光法（ソ
ルペ等、メッソズ・イン・エンザイモロジー、１３３
巻、３３１頁、１９８６年）などにより測定することが
できる。また、標識物が蛍光物質の場合、ヘミラ等の方
法（アナリティカル・バイオケミストリー、１３７巻、
３３５頁、１９８４年）などによって蛍光光度計を用い
て測定することができ、標識物が発光物質の場合、ウィ
ークス等の方法（クリニカル・ケミストリー、２９巻、
１４７４頁、１９８３年）などによってルミノメーター
を用いて測定することができ、標識物が放射性同位元素
の場合、エスピノーザ等の方法（クリニカル・ケミスト
リー、３３巻、１４３９頁、１９８７年）などによって
シンチレーションカウンターを用いて測定することがで
きる。
これまで公知の方法を用いて測定することができる。標
識物が酵素の場合、その酵素活性は分光光度計を用いる
比色法（エングバル等、ジェー・イムノール、１０９
巻、１２９頁、１９７２年）、蛍光光度計を用いる蛍光
法（渡辺等、クリニカル・ケミストリー、２５巻、８０
頁、１９７９年）、ルミノメーターを用いる発光法（ソ
ルペ等、メッソズ・イン・エンザイモロジー、１３３
巻、３３１頁、１９８６年）などにより測定することが
できる。また、標識物が蛍光物質の場合、ヘミラ等の方
法（アナリティカル・バイオケミストリー、１３７巻、
３３５頁、１９８４年）などによって蛍光光度計を用い
て測定することができ、標識物が発光物質の場合、ウィ
ークス等の方法（クリニカル・ケミストリー、２９巻、
１４７４頁、１９８３年）などによってルミノメーター
を用いて測定することができ、標識物が放射性同位元素
の場合、エスピノーザ等の方法（クリニカル・ケミスト
リー、３３巻、１４３９頁、１９８７年）などによって
シンチレーションカウンターを用いて測定することがで
きる。
【００２２】本発明はまた、上記第一から第三の３種類
の抗体（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）からなるサンドイッチ法
免疫測定用キットに関するものである。
の抗体（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）からなるサンドイッチ法
免疫測定用キットに関するものである。
【００２３】本発明の免疫測定用キットは、必須構成成
分である上記３種類の抗体以外に、この免疫測定用キッ
トの使用を便ならしめるために、種々の補助剤を含有さ
せることができる。例えば、免疫反応におけるサンプル
のｐＨの影響を回避するために用いられる各種緩衝液も
しくは緩衝剤；免疫反応を効率よく進行させ、かつ様々
な血清成分の免疫反応への阻害を回避するための様々な
蛋白成分や糖成分；免疫測定において非特異的吸着を防
止するのに用いられる界面活性剤；キットの保存安定性
のための防腐剤などを任意の組合せで包含させることが
できる。
分である上記３種類の抗体以外に、この免疫測定用キッ
トの使用を便ならしめるために、種々の補助剤を含有さ
せることができる。例えば、免疫反応におけるサンプル
のｐＨの影響を回避するために用いられる各種緩衝液も
しくは緩衝剤；免疫反応を効率よく進行させ、かつ様々
な血清成分の免疫反応への阻害を回避するための様々な
蛋白成分や糖成分；免疫測定において非特異的吸着を防
止するのに用いられる界面活性剤；キットの保存安定性
のための防腐剤などを任意の組合せで包含させることが
できる。
【００２４】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２５】実施例 ＴＳＨの測定
【００２６】(1) 固相用モノクローナル抗体の作製 抗ＡＦＰモノクローナル抗体のＦｃ部分１００μｇをフ
ロイントの完全アジュバントとともにＢＡＬＢ／ｃマウ
スの腹腔内に投与し免疫した。２ヶ月後に再び抗ＡＦＰ
モノクローナル抗体のＦｃ部分１００μｇを静脈内に投
与し、３日後に脾臓を摘出して脾細胞を採取した。ＲＰ
ＭＩ １６４０培地にて洗浄した後、脾細胞全量を２×
１０7 個のマウスミエローマ細胞（Ｐ３−ＮＳ１／１−
Ａｇ４．１）と混ぜ、３７℃の４２．５％ポリエチレン
グリコール１５４０および７．５％ジメチルスルホキシ
ドを含むＲＰＭＩ １６４０培地１ｍｌ中で１分間融合
させた。１分後にその細胞懸濁物をＲＰＭＩ １６４０
培地５ｍｌで徐々に希釈した。それらの細胞を遠心分離
し、洗浄した後、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノ
プテリン、チミジン、１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ
１６４０培地）を２０ｍｌになるよう加えて、９６ウ
ェルマイクロプレートに０．２ｍｌずつ分注して２週間
培養した後、増殖したウェル中の培養上清の抗体活性を
測定した。
ロイントの完全アジュバントとともにＢＡＬＢ／ｃマウ
スの腹腔内に投与し免疫した。２ヶ月後に再び抗ＡＦＰ
モノクローナル抗体のＦｃ部分１００μｇを静脈内に投
与し、３日後に脾臓を摘出して脾細胞を採取した。ＲＰ
ＭＩ １６４０培地にて洗浄した後、脾細胞全量を２×
１０7 個のマウスミエローマ細胞（Ｐ３−ＮＳ１／１−
Ａｇ４．１）と混ぜ、３７℃の４２．５％ポリエチレン
グリコール１５４０および７．５％ジメチルスルホキシ
ドを含むＲＰＭＩ １６４０培地１ｍｌ中で１分間融合
させた。１分後にその細胞懸濁物をＲＰＭＩ １６４０
培地５ｍｌで徐々に希釈した。それらの細胞を遠心分離
し、洗浄した後、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノ
プテリン、チミジン、１０％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ
１６４０培地）を２０ｍｌになるよう加えて、９６ウ
ェルマイクロプレートに０．２ｍｌずつ分注して２週間
培養した後、増殖したウェル中の培養上清の抗体活性を
測定した。
【００２７】次に、活性の認められたウェルの細胞を限
界希釈法により繰り返してクローン化し、抗マウスＦｃ
モノクローナル抗体を産生する細胞を得た。この細胞を
無血清培養液中で培養し、培養上清液を採取した。この
培養液中のモノクローナル抗体をアフィ・ゲル・プロテ
インＡ ＭＡＰＳキット（バイオラッド社製）を用いて
精製単離し、以下の検討に用いた。
界希釈法により繰り返してクローン化し、抗マウスＦｃ
モノクローナル抗体を産生する細胞を得た。この細胞を
無血清培養液中で培養し、培養上清液を採取した。この
培養液中のモノクローナル抗体をアフィ・ゲル・プロテ
インＡ ＭＡＰＳキット（バイオラッド社製）を用いて
精製単離し、以下の検討に用いた。
【００２８】(2) 固相への抗体の結合 炭酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ９．５）に先に得られた
抗マウスＦｃモノクローナル抗体を１００μｇ／ｍｌに
なるように溶解した。ヌンク社製ポリスチレン試験管
（１２×７５ｍｍ）にこのモノクローナル抗体含有炭酸
緩衝液を各５００μｌずつ分注し、４℃で４８時間靜置
し抗体を試験管内壁に固定化した。固定化終了後、アス
ピレーターを用いて試験管内の液を除去した。生理食塩
水１ｍｌで試験管内を３回洗浄し、さらに１％牛血清ア
ルブミン（以下ＢＳＡと略す）を含むリン酸緩衝液
（０．０２Ｍ、ｐＨ７．２）１ｍｌを加え、使用時まで
４℃で保存した。
抗マウスＦｃモノクローナル抗体を１００μｇ／ｍｌに
なるように溶解した。ヌンク社製ポリスチレン試験管
（１２×７５ｍｍ）にこのモノクローナル抗体含有炭酸
緩衝液を各５００μｌずつ分注し、４℃で４８時間靜置
し抗体を試験管内壁に固定化した。固定化終了後、アス
ピレーターを用いて試験管内の液を除去した。生理食塩
水１ｍｌで試験管内を３回洗浄し、さらに１％牛血清ア
ルブミン（以下ＢＳＡと略す）を含むリン酸緩衝液
（０．０２Ｍ、ｐＨ７．２）１ｍｌを加え、使用時まで
４℃で保存した。
【００２９】(3) 西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Ｔ
ＳＨモノクローナル抗体の調製 抗ＴＳＨモノクローナル抗体（ベーリンガー・マンハイ
ム社製）のＦａｂ’フラグメントと西洋ワサビペルオキ
シダーゼ｛東洋紡（株）製｝を石川等の方法（アナリテ
ィカル・レター、第１５巻、１４７頁、１９８２年）に
従って結合し、酵素標識抗体を得た。
ＳＨモノクローナル抗体の調製 抗ＴＳＨモノクローナル抗体（ベーリンガー・マンハイ
ム社製）のＦａｂ’フラグメントと西洋ワサビペルオキ
シダーゼ｛東洋紡（株）製｝を石川等の方法（アナリテ
ィカル・レター、第１５巻、１４７頁、１９８２年）に
従って結合し、酵素標識抗体を得た。
【００３０】(4) 発光試薬の調製 ルミノール（東京化成製）０．１８ｇ、ｐ−ヨードフェ
ノール｛ナカライテスク（株）製｝０．１０ｇおよび３
０％過酸化水素溶液５００μｌを０．１Ｍ、ｐＨ８．５
のトリス／塩酸緩衝液１リットルに溶解し、これをスト
ック溶液とした。
ノール｛ナカライテスク（株）製｝０．１０ｇおよび３
０％過酸化水素溶液５００μｌを０．１Ｍ、ｐＨ８．５
のトリス／塩酸緩衝液１リットルに溶解し、これをスト
ック溶液とした。
【００３１】(5) 血中ＴＳＨの測定 第一のモノクローナル抗体溶液の調製 抗ＴＳＨモノクローナル抗体（ＵＣＢバイオ社製、抗原
認識部位は前記のベーリンガー社製抗体とは異なる）を
１％ＢＳＡ含有リン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ７．
２）で１００μｇ／ｍｌとなるよう希釈した。
認識部位は前記のベーリンガー社製抗体とは異なる）を
１％ＢＳＡ含有リン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ７．
２）で１００μｇ／ｍｌとなるよう希釈した。
【００３２】酵素標識抗体液の調製 (3)で得たペルオキシダーゼ標識抗ＴＳＨモノクローナ
ル抗体を１％ＢＳＡ含有リン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐ
Ｈ７．２）で５０００培に希釈した。
ル抗体を１％ＢＳＡ含有リン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐ
Ｈ７．２）で５０００培に希釈した。
【００３３】標準液の調製 精製ヒトＴＳＨを１％ＢＳＡ含有リン酸緩衝液（０．０
２Ｍ、ｐＨ７．２）で１、３、５、１０、２５、５０μ
Ｕ／ｍｌとなるよう希釈調製した。
２Ｍ、ｐＨ７．２）で１、３、５、１０、２５、５０μ
Ｕ／ｍｌとなるよう希釈調製した。
【００３４】測定操作法 (a) ［方法１］による測定 (2) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液をアスピレー
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液および試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、(5)
ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌおよび(5) ので調製した酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて除去
し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作した。こ
の操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液および試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、(5)
ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌおよび(5) ので調製した酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて除去
し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作した。こ
の操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
【００３５】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、(4) で調製した発光試薬５００μｌを
加え、化学発光反応を行った。測定値は１０秒間の積分
値として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、(4) で調製した発光試薬５００μｌを
加え、化学発光反応を行った。測定値は１０秒間の積分
値として得た。
【００３６】(b) ［方法２］による測定 (2) で調製したのとは別の試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、(5)
ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌおよび(5) ので調製した酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、(5)
ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌおよび(5) ので調製した酵素標識抗体液２５０μｌ
を加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。
【００３７】(2) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液
をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを
用いて試験管内を１回洗浄した。洗浄した試験管に上記
の反応液５００μｌを加え、さらに３７℃で３０分間反
応した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて
除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作し
た。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを
用いて試験管内を１回洗浄した。洗浄した試験管に上記
の反応液５００μｌを加え、さらに３７℃で３０分間反
応した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて
除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作し
た。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
【００３８】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
【００３９】(c) ［方法３］による測定 (2) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液をアスピレー
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、さら
に(5) ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２
５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュ
ベートした。反応終了後、反応液をアスピレーターを用
いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作
した。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、さら
に(5) ので調製した第一のモノクローナル抗体溶液２
５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュ
ベートした。反応終了後、反応液をアスピレーターを用
いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作
した。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
【００４０】先の洗浄の終了した試験管に(5) ので調
製した酵素標識抗体液５００μｌを加えよく攪拌し、３
７℃で３０分間インキュベートした。反応終了後、反応
液をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌ
を加えて再び同様に操作した。この操作を３回繰り返し
て未反応物を除去した。
製した酵素標識抗体液５００μｌを加えよく攪拌し、３
７℃で３０分間インキュベートした。反応終了後、反応
液をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌ
を加えて再び同様に操作した。この操作を３回繰り返し
て未反応物を除去した。
【００４１】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
【００４２】［方法１］〜［方法３］での各標準液にお
ける発光量と、その発光量をグラフにプロットして得ら
れた検量線から読み取ったヒトプール血清測定値（同一
検体をｎ＝１０で測定）と測定値の平均、標準偏差、Ｃ
Ｖを表１に示した。
ける発光量と、その発光量をグラフにプロットして得ら
れた検量線から読み取ったヒトプール血清測定値（同一
検体をｎ＝１０で測定）と測定値の平均、標準偏差、Ｃ
Ｖを表１に示した。
【００４３】
【表１】
【００４４】比較例 ＴＳＨの測定
【００４５】比較検討用として固相に抗マウスＦｃポリ
クローナル抗体を用いた場合の測定例を以下に示した。
クローナル抗体を用いた場合の測定例を以下に示した。
【００４６】(1) 固相への抗体の結合 炭酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ９．５）に抗マウスＦｃ
ポリクローナル抗体（カッペル社製）を１００μｇ／ｍ
ｌになるように溶解した。ヌンク社製ポリスチレン試験
管（１２×７５ｍｍ）にこのポリクローナル抗体含有炭
酸緩衝液を各５００μｌずつ分注し、４℃で４８時間靜
置し抗体を試験管内壁に固定化した。固定化終了後、ア
スピレーターを用いて試験管内の液を除去した。生理食
塩水１ｍｌで試験管内を３回洗浄し、さらに１％ＢＳＡ
を含むリン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ７．２）１ｍｌ
を加え、使用時まで４℃で保存した。
ポリクローナル抗体（カッペル社製）を１００μｇ／ｍ
ｌになるように溶解した。ヌンク社製ポリスチレン試験
管（１２×７５ｍｍ）にこのポリクローナル抗体含有炭
酸緩衝液を各５００μｌずつ分注し、４℃で４８時間靜
置し抗体を試験管内壁に固定化した。固定化終了後、ア
スピレーターを用いて試験管内の液を除去した。生理食
塩水１ｍｌで試験管内を３回洗浄し、さらに１％ＢＳＡ
を含むリン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ７．２）１ｍｌ
を加え、使用時まで４℃で保存した。
【００４７】(2) 血中ＴＳＨの測定 試薬の調製 比較例における測定についても、固相化抗体以外の発光
試薬、第一のモノクローナル抗体溶液、酵素標識抗体液
および標準液などの試薬は先の実施例での検討において
用いたものをそのまま利用した。但し、酵素標識抗体に
ついては１０００培希釈で使用した。
試薬、第一のモノクローナル抗体溶液、酵素標識抗体液
および標準液などの試薬は先の実施例での検討において
用いたものをそのまま利用した。但し、酵素標識抗体に
ついては１０００培希釈で使用した。
【００４８】測定操作法 (a) ［方法１］による測定 (1) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液をアスピレー
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液および試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、で
調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μｌおよ
び酵素標識抗体液２５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃
で３０分間インキュベートした。反応終了後、反応液を
アスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加
えて再び同様に操作した。この操作を３回繰り返して未
反応物を除去した。
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液および試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、で
調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μｌおよ
び酵素標識抗体液２５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃
で３０分間インキュベートした。反応終了後、反応液を
アスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加
えて再び同様に操作した。この操作を３回繰り返して未
反応物を除去した。
【００４９】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、で調製した発光試薬５００μｌを加
え、化学発光反応を行った。測定値は１０秒間の積分値
として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、で調製した発光試薬５００μｌを加
え、化学発光反応を行った。測定値は１０秒間の積分値
として得た。
【００５０】(b) ［方法２］による測定 (1) で調製したのとは別の試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、で
調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μｌおよ
び酵素標識抗体液２５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃
で３０分間インキュベートした。
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、で
調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μｌおよ
び酵素標識抗体液２５０μｌを加えよく攪拌し、３７℃
で３０分間インキュベートした。
【００５１】(1) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液
をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを
用いて試験管内を１回洗浄した。洗浄した試験管に上記
の反応液５００μｌを加え、さらに３７℃で３０分間反
応した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて
除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作し
た。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
をアスピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを
用いて試験管内を１回洗浄した。洗浄した試験管に上記
の反応液５００μｌを加え、さらに３７℃で３０分間反
応した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて
除去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作し
た。この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
【００５２】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
【００５３】(c) ［方法３］による測定 (1) で作製した抗体結合試験管中の浸漬液をアスピレー
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、さら
にで調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌを加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベート
した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて除
去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作した。
この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
ターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを用いて試験管
内を１回洗浄した。洗浄した試験管に標準液または試料
（ヒトプール血清）１００μｌをサンプリングし、さら
にで調製した第一のモノクローナル抗体溶液２５０μ
ｌを加えよく攪拌し、３７℃で３０分間インキュベート
した。反応終了後、反応液をアスピレーターを用いて除
去し、生理食塩水１ｍｌを加えて再び同様に操作した。
この操作を３回繰り返して未反応物を除去した。
【００５４】先の洗浄の終了した試験管にで調製した
酵素標識抗体液５００μｌを加えよく攪拌し、３７℃で
３０分間インキュベートした。反応終了後、反応液をア
スピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加え
て再び同様に操作した。この操作を３回繰り返して未反
応物を除去した。
酵素標識抗体液５００μｌを加えよく攪拌し、３７℃で
３０分間インキュベートした。反応終了後、反応液をア
スピレーターを用いて除去し、生理食塩水１ｍｌを加え
て再び同様に操作した。この操作を３回繰り返して未反
応物を除去した。
【００５５】洗浄の終了した先の試験管をアロカ社製ル
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
ミネッセンスリーダーＢＬＲ−２０１型のサンプルホル
ダーにセットし、［方法１］の場合と同様に化学発光反
応を行った。測定値は１０秒間の積分値として得た。
【００５６】［方法１］〜［方法３］での各標準液にお
ける発光量と、その発光量をグラフにプロットして得ら
れた検量線から読み取ったヒトプール血清濃度（同一検
体をｎ＝１０で測定）と測定値の平均、標準偏差、ＣＶ
を表２に示した。しかしながら、ポリクローナル抗体を
用いて測定した場合の結果は、測定のバックグラウンド
がモノクローナル抗体を用いた場合より非常に高く、加
えてプール血清の測定値の再現性も不良な結果となっ
た。
ける発光量と、その発光量をグラフにプロットして得ら
れた検量線から読み取ったヒトプール血清濃度（同一検
体をｎ＝１０で測定）と測定値の平均、標準偏差、ＣＶ
を表２に示した。しかしながら、ポリクローナル抗体を
用いて測定した場合の結果は、測定のバックグラウンド
がモノクローナル抗体を用いた場合より非常に高く、加
えてプール血清の測定値の再現性も不良な結果となっ
た。
【００５７】
【表２】
【００５８】
【発明の効果】本発明において、固相化抗体にマウス抗
体のＦｃ部分に特異的なモノクローナル抗体を用いるこ
とにより、現行のポリクローナル抗体を用いた場合にみ
られる測定バックグラウンドの上昇および測定感度、測
定の再現性の低下といった問題を発生させることなく常
に均一な性能の測定用キットを提供することが可能とな
った。
体のＦｃ部分に特異的なモノクローナル抗体を用いるこ
とにより、現行のポリクローナル抗体を用いた場合にみ
られる測定バックグラウンドの上昇および測定感度、測
定の再現性の低下といった問題を発生させることなく常
に均一な性能の測定用キットを提供することが可能とな
った。
Claims (5)
- 【請求項１】 試料中の測定対象物質（Ａ）、（Ａ）に
対する第一のモノクローナル抗体（Ｂ）、標識された
（Ａ）に対する第二の抗体のＦ（ａｂ’）2 、Ｆａ
ｂ’、Ｆａｂの群から少なくとも１つ選択されるフラグ
メント（Ｃ）および水不溶性担体に固定化され、かつ
（Ｂ）のＦｃ部分に特異的に結合する第三のモノクロー
ナル抗体（Ｄ）を反応させて形成された免疫複合体中の
標識物質量を測定することにより（Ａ）の量を測定する
免疫測定法。 - 【請求項２】 （Ｄ）が（Ｂ）と同じ動物種から得られ
たモノクローナル抗体である請求項１記載の免疫測定
法。 - 【請求項３】 （Ｃ）がモノクローナル抗体のＦ（ａ
ｂ’）2 、Ｆａｂ’、Ｆａｂの群から少なくとも１つ選
択されるフラグメントである請求項１または２記載の免
疫測定法。 - 【請求項４】 （Ｃ）が酵素、蛍光物質、発光物質もし
くは放射性同位元素で標識されている請求項１〜３いず
れか記載の免疫測定法。 - 【請求項５】 請求項１〜４いずれか記載の（Ｂ）、
（Ｃ）および（Ｄ）から成る免疫測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17491192A JP3360273B2 (ja) | 1992-06-08 | 1992-06-08 | サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17491192A JP3360273B2 (ja) | 1992-06-08 | 1992-06-08 | サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05340947A true JPH05340947A (ja) | 1993-12-24 |
| JP3360273B2 JP3360273B2 (ja) | 2002-12-24 |
Family
ID=15986857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17491192A Expired - Fee Related JP3360273B2 (ja) | 1992-06-08 | 1992-06-08 | サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3360273B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999053318A1 (fr) * | 1998-04-14 | 1999-10-21 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Procedes de detection d'anticorps et dispositif de detection d'anticorps |
-
1992
- 1992-06-08 JP JP17491192A patent/JP3360273B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999053318A1 (fr) * | 1998-04-14 | 1999-10-21 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Procedes de detection d'anticorps et dispositif de detection d'anticorps |
| US7368277B2 (en) | 1998-04-14 | 2008-05-06 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. | Method for assay of antibodies and antibody assay device |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3360273B2 (ja) | 2002-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0709678B1 (en) | Immunoassay plate | |
| JP6779293B2 (ja) | イムノアッセイにおける干渉を低減するための方法 | |
| JP4559729B2 (ja) | 妊娠検出方法 | |
| JPH06258325A (ja) | 異なる２又は３種類のモノクローナル抗体を使用する 抗原測定法及び該モノクローナル抗体を利用した試験 キット | |
| JP2000508075A (ja) | 発光特異的結合アッセイ | |
| JPH09500215A (ja) | 被分析成分を測定する方法及び患者血清中の抗−ｔｓｈ受容体自己抗体の測定へのその使用 | |
| EP0088974A2 (en) | Homogeneous immunoassay with labelled monoclonal anti-analyte | |
| CA1326814C (en) | Method of high sensitivity immunoassay | |
| AU654557B2 (en) | Free-species analyte assay | |
| WO1999060401A1 (fr) | Immunoreactifs et procede de dosage immunologique | |
| JP3360273B2 (ja) | サンドイッチ法による免疫測定法および測定用キット | |
| US5639627A (en) | Method for assaying specific antibody | |
| JPH02124462A (ja) | 改良免疫測定法 | |
| JP2001255325A (ja) | 免疫学的測定法及び試薬 | |
| JP3174402B2 (ja) | 競合法による免疫測定法および測定用キット | |
| EP0389301A2 (en) | Reagent complex for immunoassay | |
| JP3866763B2 (ja) | 加水分解感受性分子または分子部分を安定化する方法 | |
| JP2003107089A (ja) | 超迅速超高感度測定法 | |
| EP0419367B1 (fr) | Procédé de détection d'une substance biologique à l'aide de ligands | |
| JP5714791B2 (ja) | 非特異反応抑制剤 | |
| JPH04203968A (ja) | 化学発光免疫測定法 | |
| JPH0727764A (ja) | Ｆｃ部位をブロックした免疫学的測定用抗体、該抗体を含む免疫学的測定用試薬、該免疫学的測定用試薬を使用する免疫学的測定法及びＦｃ部位をブロックするブロック試薬 | |
| JPWO2008078809A1 (ja) | 鳥類抗体を使用する免疫学的検出方法 | |
| JPH10132818A (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JP4359416B2 (ja) | 微小粒子固相上に固定化された物質の測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |