TWI772250B - IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法 - Google Patents

IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
TWI772250B
TWI772250B TW103109979A TW103109979A TWI772250B TW I772250 B TWI772250 B TW I772250B TW 103109979 A TW103109979 A TW 103109979A TW 103109979 A TW103109979 A TW 103109979A TW I772250 B TWI772250 B TW I772250B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
fusion protein
seq
amino acid
acid sequence
medicament
Prior art date
Application number
TW103109979A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201524995A (zh
Inventor
賈斯汀 舍爾
文軍 歐陽
艾瑞克 蓋瑞 史帝奇
理查 凡德蘭
菲利浦Ｅ 賀斯
甘尼Ａ 克魯曼
王曉婷
杰德 羅斯
布魯傑恩 尼可拉斯 凡
韋恩Ｐ 李
Original Assignee
美商建南德克公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商建南德克公司 filed Critical 美商建南德克公司
Publication of TW201524995A publication Critical patent/TW201524995A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI772250B publication Critical patent/TWI772250B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Abstract

本發明係關於IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑、包含其之組合物、製造方法及使用該組合物來治療疾病之方法。本發明亦關於與IL-22受體相關聯之試劑及其使用方法。

Description

IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法
本申請案主張均於2013年3月15日申請之美國臨時申請案序號61/800,148、61/800,795及61/801,144、於2013年5月8日申請之美國臨時申請案序號61/821,062、及於2013年7月30日申請之美國臨時申請案序號61/860,176之優先權，其內容均以其全文引用之方式併入本文中。
序列表
本申請案包含經由EFS-Web提交且以其全文引用方式併入本文中之序列表。於2014年3月3日创建之該ASCII複本命名為P5580R1-WO_Seq_Listing.txt，及大小為106,757位元。
本發明係關於IL-22及IL-22 Fc融合蛋白質、IL-22激動劑、包含其之組合物、及製造其之方法及使用其之方法。
介白素-22(IL-22)為由Th22細胞、NK細胞、淋巴組織誘導(LTi)細胞、樹突細胞及Th17細胞產生之細胞因子之IL-10家族中的一員。IL-22結合至IL-22R1/IL-10R2受體複合物，其表現於諸如上皮細胞、肝細胞、及角質細胞之先天細胞中及表現於包括真皮、胰臟、腸及呼吸系統之若干器官之屏障上皮組織中。
IL-22在黏膜免疫性方面起重要作用，介導早期宿主防禦細菌病 原體之黏附及抹消。請參見Zheng等人，2008，Nat.Med.14：282-89。IL-22促使自上皮細胞產生抗微生物肽及促發炎細胞因子並刺激腸中結腸上皮細胞之增生及遷移。請參見Kumar等人，2013，J.Cancer，4：57-65。在細菌感染後，IL-22基因剔除小鼠展現受損腸上皮再生、高細菌負載量及提高之遷移率。Kumar等人(前述)。類似地，經流行性感冒病毒感染之IL-22基因剔除小鼠會導致嚴重體重損失及氣管及支氣管上皮細胞之受損再生。因此，IL-22在抑制微生物感染方面起促發炎作用以及在發炎反應中之上皮再生方面起抗發炎保護作用。IL-22的促進病理學發炎及組織修復之生物作用大部份仍有待確定。仍未能徹底理解關於IL-22對上皮細胞效應之似乎衝突的報告。Kumar等人(前述)。
調節限制細菌複製及傳染之抗微生物防禦素將有助於藉由減低後續之LPS產生、及保持黏膜完整性使腸微生物相穩定。IL-22上調包括SAA之急性期蛋白質之表現，及造成一系列與急性發炎反應相關聯之基因(包括IL-6、G-CSF、及IL-1a)表現。全身性投與健康小鼠IL-22亦可上調LPS結合蛋白質達成生理相關濃度以中和LPS來回應於細菌感染。
在發炎性腸病(IBD)患者中檢測到IL-22之經增加的表現。請參見(例如)Wolk等人，2007，J.Immunology，178：5973；Andoh等人，2005，Gastroenterology，129：969。據認為諸如克羅恩病(Crohn's disease)(CD)及潰瘍性結腸炎(UC)之IBD起因於對存於腸中之共生微生物系之調控失當之免疫反應。Cox等人，2012，Mucosal Immunol，5：99-109。UC及CD二者均為在暴露至尚不易界定之環境刺激之遺傳易感個體中發生的複雜疾病。CD及UC由常見及獨特機制所介導及展現獨特之臨床特徵。請參見Sugimoto等人，2008，J.Clinical Investigation，118：534-544。
於UC中，發炎主要發生在結腸及直腸之黏膜中，會導致包括腹瀉、直腸出血、體重損失之衰竭性病況。據認為UC主要係由宿主對可穿透通過受損上皮屏障之腸微生物之不適當的發炎反應所引起(Xavier與Podolsky，2007，Nature 448：427-434)。克羅恩病之特徵係活化免疫細胞之腸浸潤及腸架構之扭曲。請參見Wolk等人，如上述。
近年來，基於調節免疫反應之各種策略的許多種藥物已經過測試可治療IBD，包括類固醇、免疫調節劑、及抗炎症細胞因子之抗體，且取得易變的成就(Pastorelli等人，Expert opinion on emerging drugs，2009，14：505-521)。複雜種類之腸道菌群造成疾病之異質性。因此，需求更佳的針對於IBD之療法。
心血管疾病(CVD)為部分起因於大血管動脈粥樣硬化疾病之死亡率的首要原因。動脈粥樣硬化為CVD事件的主要原因及為起因於高膽固醇血症及長期發炎血管之緩慢且進行性疾病。動脈粥樣硬化病灶之特徵為滿載免疫細胞(特別是巨噬細胞及T細胞)之浸潤的脂質。現知曉先天及適應性免疫機制均造成致動脈粥樣硬化性斑塊之進展及最終栓塞(Ross,Am Heart J.1999年11月；138(5 Pt 2)：5419-20；Hansson 2005 N Engl J Med 352(16)：1685-95；Hansson與Hermansson 2011 Nature Immunology 12(3)：204-12)。
急性胰腺炎(AP)為胰臟之急性發炎過程。急性腎損傷(AKI)為腎功能之突發性損失，會導致尿素及其他含氮廢產物之滯留及胞外體積及電解質之失調。AKI在過去被稱為急性腎衰竭。該改變反映新近認識到，不導致顯性器官衰竭之腎功能之甚至較小的減低具大臨床相關性及與增加的致病率及死亡率相關聯。仍需求更佳的針對於AP及AKI之治療。
代謝症候群為一種特徵係一系列造成栓塞、高血壓、血脂異 常、及發炎之風險因子之複雜狀況。胰島素抗性及肥胖為代謝症候群根本之主要致病機制。
胰島素抗性會增加CVD風險，因為其引起內皮功能障礙，此與致動脈粥樣硬化血脂異常、發炎、及高血壓併發，造成起因於冠狀動脈疾病(CAD)之死亡率。持續性胰島素抗性亦會增大發展出2型糖尿病(T2DM)之機率，然而，致動脈粥樣硬化狀況會在T2DM發作前許多年發生。因此，極有可能係，CAD之自然史在於與T2DM相同的途徑，但以亞臨床形式於生命更早期開始，臨床表現耗時較長，在存在或不存在糖尿病下。
創造術語代謝內毒素血症係用於描述由例如高脂高熱量飲食(HFD)引起之增加的血漿LPS之病況(Cani等人2007.Diabetes 56(7)：1761-72)。餵食HFD之小鼠具有增加的細菌性脂多糖(LPS)血漿水平及此提高似乎是增加膳食脂肪之直接後果(Cani等人2007(前述)；Cani等人2008 Diabetes 57(6)：1470-81；Ghoshal等人2009，J Lipid Res 50(1)：90-7)。腸微生物相藉由調控腸黏膜上皮細胞功能在宿主能量平衡及膳食營養素之收穫及碳水化合物代謝方面發揮不可或缺的作用，此存在有說服力的證據(Turnbaugh等人2009，J Physiol(Lond)587(Pt 17)：4153-8；Manco等人2010，Endocr Rev 31(6)：817-44)。藉由非比例膳食脂肪組成或過量膳食熱量攝入發生之腸微生物相之轉變係肥胖及胰島素抗性之所公認之引發劑，確立之心血管疾病之後遺症。脂多糖於革蘭氏陰性細菌(gram-negative bacteria)之外膜中發現及充作可引起強免疫反應之內毒素來源(Barcia等人Clin Infect Dis 41修正案7：S498-503)。腸微生物相之群體、物種及局部分佈之改變會導致LPS之分解代謝改變及高脂飲食將有利於LPS跨腸屏障之吸收。於該等情況下，全身性循環中LPS之增加將會引起低度慢性發炎，從而活化對升高血漿脂質之內源性保護性宿主反應，該內源性保護性宿 主反應於慢性病況中會造成飲食誘導之肥胖、胰島素抗性及動脈粥樣硬化、及最終之CVD事件。
糖尿病為由存在慢性升高之血糖濃度(高血糖症)所定義的嚴重代謝疾病。高血糖症之這種狀況乃是相對或絕對缺乏肽激素(胰島素)之活性之結果。胰島素係由胰臟之β細胞產生並分泌的。據報告胰島素可促進葡萄糖利用、蛋白質合成、及碳水化合物能量呈肝糖形式之形成及儲存。葡萄糖係呈肝糖形式(一種聚合葡萄糖形式)儲存於身體中，其可轉化回為葡萄糖以滿足代謝需求。於正常條件下，胰島素於葡萄糖刺激後以基礎速率及以提高的速率兩者分泌，均藉由將葡萄糖轉化為肝糖來維持代謝體內穩態。仍有需要針對於動脈粥樣硬化之新穎治療範例、及CVD事件、代謝症候群、急性內毒素血症及敗血症、及與胰島素相關之病症之預防。
傷口癒合為涉及發炎期、肉芽組織形成期、及組織再塑期之複雜過程(請參見(例如)Singer與Clark，Cutaneous Wound Healing，N.Engl.J.Med.341：738-46(1999))。該等事件由於損傷部位處釋放之細胞因子及生長因子觸發。許多因素會複雜化或干擾正常適當的傷口癒合。例如，該等因素包括年齡、感染、營養不良、免疫抑制、藥療、輻射、糖尿病、外周血管疾病、全身性疾病、吸煙、及壓力。
對於患有為慢性衰竭性疾病之糖尿病之個體，通常會伴隨發展出糖尿病性足部潰瘍(亦稱為傷口)。慢性潰瘍係定義為不經有序且及時的修復過程進行以產生出解剖及功能完整性之傷口(請參見(例如)Lazarus等人，Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing，Arch.Dermatol.130：489-93(l994))。根據其性質，糖尿病性足部潰瘍為慢性傷口(美國糖尿病協會(American Diabetes Association)，Consensus development conference on diabetic foot wound care，Diabetes Care，22(8)：1354-60(1999))。因為皮膚充 作針對於環境之主要屏障，故開放的難治傷口可係災難性；會導致嚴重殘疾(包括肢體喪失)及甚至死亡。足部潰瘍為患有糖尿病的個人中達成約85%下肢截肢之前驅(請參見(例如)Apelqvist等人，What is the most effective way to reduce incidence of amputation in the diabetic foot？Diabetes Metab Res.Rev.，16(1增刊)：S75-S83(2000))。因此，需要加速或促進傷口癒合，包括糖尿病性傷口癒合。
於一個態樣中，本發明提供IL-22 Fc融合蛋白質、包含其之組合物、及使用其之方法。
於一個態樣中，本發明提供一種結合至IL-22受體之IL-22 Fc融合蛋白質，該IL-22 Fc融合蛋白質包含經連接子鍵聯至Fc區之IL-22多肽，其中該Fc區包含鉸鏈區、IgG CH2域及IgG CH3域，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對選自由SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12及SEQ ID NO：14組成之群之胺基酸序列至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、較佳至少99%序列一致性之胺基酸序列，及其中該Fc區係未經糖基化。於某些實施例中，CH2域之N297殘基係經改變成甘胺酸或丙胺酸。於某些其他實施例中，N297殘基係經改變成Gly；而於其他實施例中，N297殘基係經改變成Ala。於某些實施例中，與IL-22受體之結合觸發IL-22受體下游信號傳導(包括活化STAT3)。
於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少98%序列一致性之胺基酸序列。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少99%序列一致性之胺基酸序列。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少99%序列一致性之胺基酸序列。於某些其他實 施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：12之胺基酸序列至少99%序列一致性之胺基酸序列。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之功能及/或活性可藉由活體外或活體內方法檢定，例如，IL-22受體結合檢定、Stat3螢光素酶受體活性檢定等等。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12之胺基酸序列。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。於某些實施例中，本發明提供由包括培養可在適於表現IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞之步驟的方法製得之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，該方法進一步包括自細胞培養物或培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。於某些實施例中，宿主細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞；而於其他實施例中，宿主細胞為大腸桿菌(E.coli)細胞。
於另一個態樣中，本發明提供一種包含經肽連接子鍵聯至IgG Fc區之IL-22多肽之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該Fc區包含鉸鏈區、IgG CH2域及IgG CH3域，及其中該Fc區係未經糖基化。於某些實施例中，鉸鏈區包含CPPCP(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列。於某些其他實施例中，Fc區中之N297殘基係經改變及/或Fc區中之T299殘基係經改變。於某些實施例中，CH2域中之N297殘基係經改變，較佳係經改變成甘胺酸或丙胺酸。於某些特定實施例中，N297殘基係經改變成甘胺酸。於某些其他實施例中，N297殘基係經改變成丙胺酸。又於其他實施例中，T299殘基係經改變成Ala、Gly或Val。於某些其他實施例中，連接子為8至20個胺基酸長、8至16個胺基酸長、或10至16個胺基酸長。
於某些實施例中，Fc區包含IgG1之CH2及CH3域。於某些特定實施例中，連接子包含胺基酸序列DKTHT(SEQ ID NO：32)。於某些實施例中，連接子包含胺基酸序列GGGDKTHT(SEQ ID NO：41)。於某 些實施例中，連接子為至少11個胺基酸長且包含胺基酸序列EPKSCDKTHT(SEQ ID NO：33)。於某些其他實施例中，連接子包含胺基酸序列VEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：34)、KVEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：35)、KKVEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：36)、DKKVEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：37)、VDKKVEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：38)、或KVDKKVEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：39)。於某些特定實施例中，連接子包含胺基酸序列EPKSSDKTHT(SEQ ID NO：40)。於某些實施例中，連接子包含胺基酸序列VEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：67)、KVEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：68)、KKVEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：66)、DKKVEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：64)、VDKKVEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：69)、或KVDKKVEPKSSDKTHT(SEQ ID NO：65)。於某些特定實施例中，連接子不包含GGS(SEQ ID NO：45)、GGGS(SEQ ID NO：46)或GGGGS(SEQ ID NO：47)之胺基酸序列。於個別實施例中，IL-22 IgGI Fc融合蛋白質包含GGGSTHT(SEQ ID NO：63)之連接子序列。於其他特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14之胺基酸序列。於某些其他特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列。
於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含IgG4之CH2及CH3域。於某些其他實施例中，連接子包含胺基酸序列SKYGPP(SEQ ID NO：43)。於某些特定實施例中，連接子包含胺基酸序列RVESKYGPP(SEQ ID NO：44)。於某些實施例中，連接子均不包含胺基酸序列GGS(SEQ ID NO：45)、GGGS(SEQ ID NO：46)或GGGGS(SEQ ID NO：47)。於其他特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8或SE ID NO：10之胺基酸序列。於特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。於另一個實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係藉由包括培養可在適於表現IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞之步驟的方法製得。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係由進一步包括自細胞培養物或培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟的方法製得。於某些實施例中，宿主細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。於某些其他實施例中，宿主細胞為大腸桿菌細胞。
又於另一個態樣中，本發明提供包含IL-22 Fc融合蛋白質之組合物，該IL-22 Fc融合蛋白質包含經連接子鍵聯至Fc區之IL-22多肽，其中該Fc區包含鉸鏈區、IgG CH2域及IgG CH3域，及其中該組合物在CH2域中具有不大於5%之無岩藻糖基化水平。於某些實施例中，該無岩藻糖基化水平係不大於2%，更佳係小於1%。於某些實施例中，該無岩藻糖基化水平係藉由質譜法測定。於某些實施例中，Fc區包含IgG4之CH2及CH3域。於某些實施例中，Fc區包含IgG1之CH2及CH3域。於某些其他實施例中，鉸鏈區包含CPPCP(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26之胺基酸序列。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列。於某些實施例中，該組合物係藉由包括培養可在適於表現IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞、及自細胞培養物或培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟的方法製得，其中該組合物在Fc區之CH2域中具有不大於5%之無岩藻糖基化水平。於某些實施例中，該無岩藻糖基化水平係不大於2%，更佳係小於1%。於某些實施例中，藉由純化，較佳純化岩藻糖基化物種使其與無岩藻糖基化物種分離，獲得IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，藉由親和層析純化IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，宿主細胞為CHO細胞。
於另一個態樣中，本發明提供IL-22 Fc融合蛋白質、或包含IL-22 Fc融合蛋白質之組合物，該IL-22 Fc融合蛋白質係藉由包括培養可在適於表現IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞之步驟的方法製得。於某些實施例中，該方法進一步包括自細胞培養物或培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。於某些實施例中，宿主細胞為CHO細胞；而於其他實施例中，宿主細胞為大腸桿菌細胞。
於另一個態樣中，本發明提供一種包含本文所述IL-22 Fc融合蛋白質之組合物。又於另一個態樣中，本發明提供一種包含本文所述IL-22 Fc融合蛋白質、及至少一種醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。於某些實施例中，該組合物或醫藥組合物包含包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些特定實施例中，該組合物或醫藥組合物包含包含SEQ ID NO：8胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係由大腸桿菌所產生。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區係未經糖基化。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質不誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。於某些實施例中，該醫藥組合物進一步包含次最佳量的諸如地塞米松(dexamethasone)之治療劑。於某些實施例中，IL-22多肽包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
此外，根據本發明之各個及每個態樣，於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質可為二聚IL-22 Fc融合蛋白質(就IL-22而言)；而於其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質可為單體Fc融合蛋白質(就IL22而言)。
於另一個態樣中，本發明提供一種單體IL-22 Fc融合蛋白質。於某些特定實施例中，單體融合蛋白質包含IL-22 Fc融合臂及Fc臂。於某些實施例中，IL-22 Fc融合臂及Fc臂在Fc區中包含結或孔中之任何 一者。於某些實施例中，IL-22 Fc融合臂(單體IL-22 Fc融合)之Fc區包含結及Fc臂(未鍵聯至IL-22之單體Fc)之Fc區包含孔。於某些實施例中，IL-22 Fc融合臂(單體IL-22 Fc融合)之Fc區包含孔及Fc臂(未鍵聯至IL-22之單體Fc)之Fc區包含結。於某些其他實施例中，單體IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：61及SEQ ID NO：62之胺基酸序列。於某些其他實施例中，兩個臂之Fc區進一步包含N297G突變。於某些實施例中，單體IL-22 Fc係藉由包括培養一或多種包含一或多種可表現包含SEQ ID NO：61胺基酸序列之第一多肽及包含SEQ ID NO：62胺基酸序列之第二多肽之核酸分子之宿主細胞之步驟的方法製得。於某些其他實施例中，該方法進一步包括自細胞培養物或培養基獲得單體IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。於某些實施例中，宿主細胞為大腸桿菌細胞。於一個相關態樣中，本發明提供一種包含單體IL-22 Fc融合蛋白質之組合物或醫藥組合物。
又於另一個態樣中，本發明提供一種編碼本文所述之IL-22 Fc融合蛋白質之單離的核酸。於某些實施例中，核酸編碼包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26，較佳SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：12，更佳SEQ ID NO：8之胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些其他實施例中，核酸包含SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：25之多核苷酸序列。於某些特定實施例中，核酸包含SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：11、較佳SEQ ID NO：7之多核苷酸序列。於相關態樣中，本發明提供包含上文所述核酸之載體、及包含載體之宿主細胞。於某些實施例中，宿主細胞為原核細胞或真核細胞。於某些特定實施例中，宿主細胞為原核細胞，包括(但不限於)大腸桿菌細胞。於某些其他實施例中，宿主細胞為真核細胞，包括(但不限於)CHO細胞。於某些實施例中，宿主細胞包含包 含編碼包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質之核酸之載體。
於另一個相關態樣中，本發明提供製造IL-22 Fc融合蛋白質之方法，該等方法包括在適於表現IL-22 Fc融合蛋白質之條件下培養宿主細胞之步驟。於某些實施例中，該方法進一步包括自細胞培養物或培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。IL-22 Fc融合蛋白質可自細胞培養物或培養基依相關技術中已知的任何蛋白質單離或純化方法獲得，該等方法包括(但不限於)收集培養基、冷凍/融化、離心、細胞裂解、均質化、硫酸銨沉澱、HPLC、及親和凝膠過濾、及離子交換柱層析。於某些實施例中，該方法進一步包括移除無岩藻糖基化IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。於某些其他實施例中，藉由親和管柱層析移除無岩藻糖基化IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，宿主細胞為大腸桿菌細胞。於其他實施例中，宿主細胞為CHO細胞。
又於另一個態樣中，本發明提供一種包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質及至少一種醫藥上可接受之載劑之組合物或醫藥組合物。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：24、或SEQ ID NO：26之胺基酸序列。於其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區係未經糖基化。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區係未經糖基化而IL-22多肽係經糖基化。於某些該等實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係產生於CHO細胞中。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質不包含抗體依賴性細胞毒性。又於其他實施例中，該醫藥組合物進一步包含地塞米松或TNF拮抗劑。於某些特定實施例中，地塞米松或TNF拮抗劑係以次最佳量存在。
於某些其他實施例中，該包含IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物在CH2域中具有不大於5%，較佳不大於2%，更佳小於1%之無岩藻糖 基化水平。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26、較佳SEQ ID NO：24之胺基酸序列。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係產生於CHO細胞中。於某些特定實施例中，個體為人類。於某些實施例中，該醫藥組合物係以全身性或局部方式投與。於某些其他實施例中，該醫藥組合物係經靜脈內、經皮下、經腹膜內或經局部投與。
於另一個態樣中，本發明提供一種包含本文所述之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質及至少一種醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。於某些實施例中，該醫藥上可接受之載劑為膠凝劑。於某些實施例中，膠凝劑為多醣。於一些實施例中，膠凝劑為(但不限於)甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、POE-POP嵌段聚合物、藻酸鹽、透明質酸、聚丙烯酸、羥乙基甲基纖維素或羥丙基甲基纖維素。於一些實施例中，多醣為纖維素質，諸如(但不限於)羥乙基甲基纖維素或羥丙基甲基纖維素。於某些實施例中，膠凝劑為羥丙基甲基纖維素。於一些實施例中，該醫藥組合物係用於局部投與。於某些實施例中，該用於局部投與之醫藥組合物包含IL-22多肽。於一些實施例中，該用於局部投與之醫藥組合物包含IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，該用於局部投與之醫藥組合物包含無Fc融合之IL-22多肽。
於另一個態樣中，本發明提供治療有需要之個體之IBD之方法，該等方法包括投與個體包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物。於某些實施例中，IBD為潰瘍性結腸炎。於某些其他實施例中，IBD為克羅恩病。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區係未經糖基化。於某些實施例中，Fc區之N297殘基及/或T299殘基係經改變。於某些實施例中，Fc區之N297殘基係經改變。於某些其他實施例中，N297殘基係經改變為Gly或Ala，較佳係Gly。於某些其他 實施例中，T299殘基係經改變，較佳係經改變為Val、Gly或Ala。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：14、較佳SEQ ID NO：8.之胺基酸序列。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係產生於大腸桿菌或CHO細胞中。於某些實施例中，個體為人類。於某些其他實施例中，該醫藥組合物係經靜脈內、經皮下、經腹膜內或經局部投與。
於另一個態樣中，本發明提供使用本發明之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質來治療以下疾病中任何一者或其組合之方法：II型糖尿病、具病態肥胖症之II型糖尿病、傷口(包括糖尿病性傷口及糖尿病性潰瘍)、燒傷、潰瘍(包括壓力潰瘍及靜脈潰瘍)、移植物抗宿主疾病(GVHD)、動脈粥樣硬化、心血管疾病、代謝症候群、內毒素血症(急性且輕度)、敗血症、急性冠心病、高血壓、血脂異常、肥胖症、高血糖症、脂質代謝疾病、肝炎、急性肝炎、腎衰竭、急性腎衰竭、急性腎臟損傷、腎移植物衰竭、屍體腎移植後移植物功能延遲、造影誘導性腎病、胰腺炎、急性胰腺炎、肝纖維化及肺纖維化。於某些實施例中，急性胰腺炎可為輕度到中度至重度之疾病。於某些實施例中，急性胰腺炎包括ERCP(內視鏡逆行性膽胰管攝影術)後疾病。於一些其他實施例中，意欲針對於上述疾病進行治療之患者有需要改變其HDL/LDL脂質譜，患者中該IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質可改變以增加HDL而減低LDL。於一個相關態樣中，本發明提供IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質於製備用於治療上述疾病中任何一者或其組合之藥物之用途。
於另一個態樣中，本發明提供抑制有需要之個體之腸中微生物感染、或於微生物感染期間保存腸中杯狀細胞之方法，該等方法包括投與有需要之個體包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物之步驟。於其他相關態樣中，本發明提供增進有需要之個體之腸中上皮 細胞完整性、黏膜癒合、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合之方法，該等方法包括投與個體包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物。於某些實施例中，上皮細胞為腸道上皮細胞。
於另一個態樣中，提供一種預防或治療心血管病況之方法，該病況包括動脈粥樣硬化斑塊形成之病理學。該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質。該等心血管病況包括(例如)冠狀動脈疾病、冠狀微血管疾病、中風、頸動脈疾病、外周動脈疾病、及慢性腎病。該方法可進一步包括減慢動脈粥樣硬化斑塊形成之進展。該方法可進一步包括投與該個體一或多種其他治療劑以預防或治療心血管病況。
於另一個態樣中，提供一種治療代謝症候群之方法。該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質。該方法可進一步包括減低一或多種與代謝症候群相關聯之風險因子，其包括腹部肥胖、高血糖症、血脂異常、及高血壓中之一或多者。該方法可進一步包括減低個體之細菌性脂多糖(LPS)水平。該方法可進一步包括投與個體一或多種其他藥劑以預防或治療代謝症候群。
於另一個態樣中，提供一種延遲或減慢動脈粥樣硬化之進展之方法。該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質。該方法可進一步包括投與個體一或多種其他藥劑以延遲或減慢動脈粥樣硬化之進展。
於另一個態樣中，提供一種預防動脈粥樣硬化之標誌之方法。該方法包括投與處在動脈粥樣硬化風險之個體治療有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22 Fc融合蛋白質之IL-22多肽可有效對抗發展出動脈粥樣硬化之標誌。於某些實施例中，個體已經識別為處在發展出心血管病況之風險。於某些實施例中，個體遺傳地處 在發展出心血管病況之風險。於一或多個實施例中，動脈粥樣硬化之標誌包括斑塊累積。於一些實施例中，動脈粥樣硬化之標誌包括血管發炎。該方法可進一步包括投與個體一或多種其他藥劑以防止動脈粥樣硬化之標誌。
又於另一個態樣中，提供一種治療急性內毒素血症及敗血症中之一或多者之方法。該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白。該方法可進一步包括投與個體一或多種其他藥劑以治療急性內毒素血症及敗血症中之一或多者。
於一個其他態樣中，提供一種加速或促進個體之傷口癒合或兩者之方法。該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑。於某些實施例中，傷口為慢性傷口。於某些其他實施例中，傷口為受感染傷口。於某些實施例中，個體係糖尿病性，包括患有II型糖尿病之個體。於一或多個實施例中，傷口為糖尿病性足部潰瘍。於某些實施例中，投與該治療有效量之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑直到呈現完全傷口閉合。於一些實施例中，投藥係全身性；及於其他實施例中，投藥係局部性。於某些實施例中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑係呈用於局部投與之調配物形式。於某些實施例中，局部調配物包含不包含Fc融合之IL-22多肽。於某些實施例中，IL22激動劑係選自由以下組成之群：IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、IL-22激動劑、IL-19多肽、IL-19 Fc融合蛋白質、IL-19激動劑、IL-20多肽、IL-20 Fc融合蛋白質、IL-20激動劑、IL-24多肽、IL-24 Fc融合蛋白質、IL-24激動劑、IL-26多肽、IL-26 Fc融合蛋白質、IL-26激動劑、及IL-22R1激動劑。於某些其他實施例中，IL-22激動劑係選自由以下組成之群：IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、IL-22激動劑、IL-20多肽、IL-20 Fc融合蛋白質、IL-20激動劑、IL-24多肽、IL-24 Fc融合蛋白 質、IL-24激動劑及IL-22R1激動劑。於某些實施例中，IL-22R1激動劑為抗-IL22R1激動抗體。
於另一個態樣中，本發明提供治療代謝症候群之方法，該等方法包括投與有需要之個體治療有效量之一或多種IL-22激動劑之步驟。於某些實施例中，IL22激動劑係選自由以下組成之群：IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、IL-22激動劑、IL-19多肽、IL-19 Fc融合蛋白質、IL-19激動劑、IL-20多肽、IL-20 Fc融合蛋白質、IL-20激動劑、IL-24多肽、IL-24 Fc融合蛋白質、IL-24激動劑、IL-26多肽、IL-26 Fc融合蛋白質、IL-26激動劑、及IL-22R1激動劑。於某些其他實施例中，IL-22激動劑係選自由以下組成之群：IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、IL-22激動劑、IL-20多肽、IL-20 Fc融合蛋白質、IL-20激動劑、IL-24多肽、IL-24 Fc融合蛋白質、IL-24激動劑及IL-22R1激動劑。於某些實施例中，IL-22R1激動劑為抗-IL22R1激動抗體。於某些其他實施例中，代謝症候群為糖尿病。於某些特定實施例中，代謝症候群為II型糖尿病。
根據另一個實施例，個體係投與本發明之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，個體為人類。於某些實施例中，IL-22多肽或IL22 Fc融合蛋白質係經靜脈內、經皮下、經腹膜內、經全身或經局部投與。
於該等態樣之某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區係未經糖基化。於某些實施例中，Fc區之N297殘基及/或T299殘基係經改變。於某些實施例中，Fc區之N297殘基係經改變。於某些其他實施例中，N297殘基係經改變為Gly或Ala，較佳係Gly。於某些其他實施例中，T299殘基係經改變，較佳係經改變為Val、Gly或Ala。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12或EQ ID NO：14，較佳SEQ ID NO：8之胺基酸序 列。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係產生於大腸桿菌中。於某些實施例中，個體為人類。於某些其他實施例中，該醫藥組合物係經靜脈內、經皮下或經局部投與。
於某些其他實施例中，該包含IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物在CH2域中具有不大於5%，較佳不大於2%，更佳小於1%之無岩藻糖基化水平。於某些特定實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：26，較佳SEQ ID NO：24之胺基酸序列。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係產生於CHO細胞中。於某些特定實施例中，個體為人類。於某些其他實施例中，該醫藥組合物係經靜脈內、經皮下或經局部投與。
又於上述態樣之其他實施例中，與IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區連接之N-聚糖係藉由糖解酵素酶促移除。於某些實施例中，糖解酵素為肽-N-糖苷酶(PNGase)。於某些特定實施例中，個體為人類。
又於另一個態樣中，本發明亦提供本文所述IL-22 Fc融合蛋白質於製造用於治療有需要之個體之IBD(包括UC及CD)之藥物之用途。於一個相關態樣中，本發明提供本文所述IL-22 Fc融合蛋白質於製造用於抑制有需要之個體之腸中微生物感染、或用於在微生物感染期間保持腸中杯狀細胞之藥物之用途。又於另一個態樣中，本發明提供本文所述IL-22 Fc融合蛋白質於製造用於增進有需要之個體之腸中上皮細胞完整性、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合之藥物之用途。於其他相關態樣中，本發明提供以IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質於製造用於治療有需要之個體之心血管病況、代謝症候群、動脈粥樣硬化、急性腎損傷、急性胰腺炎、用於加速、促進或增進有需要之個體中傷口癒合(包括(但不限於)慢性傷口、糖尿病性傷口、受感染傷口、壓力潰瘍或糖尿病性足部潰瘍之癒合)之藥物之用途。
除非本文清楚地另外提出，否則可將各個及每個實施例組合。除非本文清楚地另外提出，否則各個及每個實施例可應用於本發明之各個及每個態樣。
從隨後的某些較佳實施例及申請專利範圍之較詳細陳述當可明瞭本發明之具體實施例。
圖1顯示源自不同哺乳動物物種之成熟IL-22之胺基酸序列比對：人類(GenBank寄存編號Q9GZX6，SEQ ID NO：4)、黑猩猩(GenBank寄存編號XP_003313906，SEQ ID NO：48)、猩猩(GenBank寄存編號XP_002823544，SEQ ID NO：49)、小鼠(GenBank寄存編號Q9JJY9，SEQ ID NO：50)及狗(GenBank寄存編號XP_538274，SEQ ID NO：51)。
圖2顯示典型人類單株IgGI Fc(小圖A)、包含連接子序列EPKSCDKTHT(SEQ ID NO：33，小圖B)、EPKSSDKTHT(SEQ ID NO：40，小圖C)、及GGGDKTHT(SEQ ID NO：41，小圖D)之IL-22 IgG1 Fc融合、及包含不具有或具有N297G突變之連接子序列RVESKYGPP(SEQ ID NO：44，分別係小圖E及F)之IL-22 IgG4 Fc融合及包含具有N297G突變(小圖G)之連接子序列EPKSSDKTHT(SEQ ID NO：40)之IL-22 IgGI Fc融合之Fc區之糖基化狀態之質譜分析結果。
圖3顯示人類IL-22 IgG4 Fc融合(N297G，具有C-端Lys之全長Fc序列，SEQ ID NO：16，不具有Lys之全長Fc序列，SEQ ID NO：8)、IL-22 IgG1 Fc融合(N297G，具有C-端Lys之全長Fc序列，SEQ ID NO：20，不具有Lys之全長Fc序列，SEQ ID NO：12)及IL-22(SEQ ID NO：4)之序列比對。顯示的IL-22序列乃是不具有前導序列之成熟形式。鉸鏈序列CPPCP(SEQ ID NO：31)顯示於盒中，其後為CH2及CH3域。N297G取代及可選C-端Lys殘基經標注。
圖4出示顯示STAT3螢光素酶檢定之結果的圖。在表現人類IL- 22R之293細胞中測量由IL-22 IgG4 Fc融合或IL-22 IgGI Fc融合所刺激之螢光素酶活性。該等結果顯示IL-22 IgG4及IL-22 IgG1 Fc融合展現類似的活體外活性。
圖5顯示小鼠IL-22 Fc融合蛋白質於聚葡萄糖硫酸鈉(DSS)誘導之小鼠IBD模型中之治療效應。小鼠IL-22 Fc融合蛋白質改良DSS誘導之IBD小鼠中之結腸組織學(圖5B)及該改良換算成減小之結腸組織學分值(圖5C)。相較於為此模型中目前最佳的護理標準之地塞米松，IL-22 Fc融合蛋白質處理會導致處理期間小鼠體重損失之減低(圖5A)。
圖6顯示在第0天及第7天經0.15mg/kg及1.5mg/kg給藥之馬來猴中人類IL-22 IgG4及IgG1 Fc融合蛋白質之血清清除率。
圖7顯示於第1天及第8天以0.15mg/kg及1.5mg/kg給藥(與圖6中之第0天及第7天相同的給藥方案)之後馬來猴中之三種IL-22R下游基因之血清水平。在投與hIL-22 Fc後，圖7A顯示血清澱粉樣蛋白A(SAA)之劑量相依的增加，圖7B顯示脂多糖結合蛋白(LPS-BP)之劑量相依的增加，圖7C顯示RegIII/胰腺炎相關蛋白(PAP或PancrePAP)之劑量相依的增加。
圖8顯示高解析度顯微CT，其展現於以高脂飲食之8個月大的Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠之主動脈弓及頭肱動脈中之動脈粥樣硬化斑塊負荷。
圖9顯示Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠對膳食挑戰敏感及顯示由顯微CT測得實質上增加的動脈粥樣硬化程度(A)，然血清LDL水平僅溫和地增加(B)。
圖10顯示Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠對急性低度發炎刺激之反應，顯示血清MCP-1(A)及IL-6(B)大於wt C57小鼠中之觀測值之增加及係伴隨由血流介導之膨脹及硝酸甘油之輸注評估之血管功能損失(C)。
圖11顯示血脂異常(A)及較大斑塊負荷(B)及不穩定性(C)之慢性 內毒素暴露結果。
圖12顯示相較於對照組(A)，經IL-22-Fc處理之組中空腹血糖減低，及由葡萄糖耐受試驗(B、C)可見，經IL-22-Fc處理，葡萄糖清除率改善。
圖13顯示在經IL-22-Fc處理之後發生總膽固醇之減低。於Ldlr-/-Apobec 1-/-小鼠中，總膽固醇在空腹及飽食情況中均升高，及於處理期結束時測得，在IL-22-Fc組中相較於對照組減低(A)。血漿三酸甘油酯水平亦於IL-22-Fc處理後減低，其中在飽食狀態中，顯著減低(B)。
圖14顯示於Ldlr-/-Apobec 1-/-小鼠中所觀測到的高血脂於IL-22-Fc處理後減低。LDL在空腹及飽食狀態(A)均減低，HDL增加(B)，及LDL/HDL比在空腹及飽食中均減低(C)。vLDL於飽食情況下減低(D)。在提供兩次劑量給小鼠5天後，描繪HDL(E)、LDL(F)及LDL/HDL比(G)之結果。
圖15顯示於IL-22-Fc處理後血漿LPS水平減低。
圖16顯示於IL-22-Fc處理後經改良的以血管反應性量測之內皮功能。
圖17描繪使用造影增強顯微CT於經切下之主動脈弓升及降主動脈(A)、頭肱動脈(B)及主動脈瓣膜(C)之死後樣本上進行之斑塊負荷之定量分析。
圖18顯示於IL-22-Fc處理後之體重(A)及食物攝入(B)。
圖19描繪糖尿病性小鼠模型治療方案之示意圖。
圖20A至C顯示db/db小鼠中之體重及血清葡萄糖水平，證實IL-22-Fc顯著減低肥胖小鼠中之葡萄糖。
圖21顯示基於葡萄糖耐受試驗(GTT)，IL-22Fc處理改善葡萄糖耐受及胰島素敏感性。p<0.05。
圖22A至B顯示基於胰島素耐受試驗(ITT)，如藉由mg/dL葡萄糖 水平(A)及葡萄糖%減低(B)測得IL-22Fc處理改善胰島素敏感性。
圖23顯示IL-22Fc增加胰島中之胰島素表現。(A)綠色示出胰高血糖素，紅色示出胰島素。由紅色線環繞之圓形區域示出胰島區域。條形圖，50μm。(B)平均胰島素染色強度。(C)平均胰高血糖素染色強度。(D)餵食HFD之小鼠中之飽食胰島素濃度。(E)餵食HFD之小鼠中之空腹胰島素濃度。(F)IL-22 Fc可逆轉餵食HFD之小鼠中之胰島素不敏感。**P<0.01，***P<0.001。誤差棒，平均標準偏差。
圖24A至B描繪經IL-22-Fc處理之動物中胰島素信號強度之定量分析。
圖25A至B顯示相較於對照組經IL-22-Fc處理之動物中胰島素陽性面積增加。
圖26顯示展現IL-22-Fc處理組(B)相較於對照組(A)其肝門靜脈周圍脂肪變性減低之組織學切片。
圖27A至B顯示IL-22R於HFD誘導之葡萄糖耐受中之評估。(A)經過葡萄糖ip注射後隨時間之葡萄糖水平(mg/dL)。(B)總曲線下面積(AUC)之計算。
圖28顯示IL-22受體KO小鼠相較於同窩小鼠(littermate)對照組之質量。
圖29A至D利用50μg IL-22Fc或50μg抗-豬草(n=6/組)處理Ldlr-/-、Apobec 1-/-(dko)小鼠持續48小時。在經IL-22Fc處理之小鼠中，血清LPS減低50%(p=0.0052)及血清LDL/HDL減低30%(p=0.049)。
圖30顯示編碼天然人類IL-22之cDNA之核苷酸序列(SEQ ID NO：70)。
圖31顯示衍生自圖30中所顯示編碼序列之胺基酸序列(SEQ ID NO：71)。
圖32A顯示小鼠IL-22-小鼠-IgG2a融合蛋白質之胺基酸序列(SEQ ID NO：73)。圖32B顯示編碼小鼠IL-22-小鼠IgG2a融合蛋白質之核苷酸序列(SEQ ID NO：72)。
圖33顯示缺乏經由IL-22R之信號傳導會導致延遲之傷口癒合。IL-22R KO小鼠傷口在癒合中相較於WT同窩小鼠對照小鼠顯著延遲(在第10天，p=0.0018，及在第12天，p=0.005)。
圖34A至C代表個別小鼠(n=10)在第10天、第12天及第15天時之傷口間隙。顯示IL-22R KO小鼠及WT在第14天時傷口之代表性光影像(D)。
圖35繪示對照WT小鼠(BKS)及糖尿病性db/db小鼠間傷口癒合的比較。(A)db/db小鼠中之傷口癒合在整個研究期間顯著地延遲及甚至在第28天仍不完全癒合。(B)中之條形圖顯示野生型或db/db小鼠於傷口切除後天數之成倍數變化之IL-22表現水平。
圖36為針對於總計3個組(n=7)db/db小鼠中測試IL-22-Fc之研究設計之概視圖。抗-豬草用於對照Fc蛋白質及抗-FGFRI抗體用作葡萄糖調節之陽性對照。
圖37顯示經處理之小鼠相較於對照從第4天到第27天之IL-22 Fc標準化之飽食葡萄糖水平。使用Onetouch®葡萄糖計記錄葡萄糖水平。
圖38圖示IL-22-Fc相較於2種對照組抗體：抗-豬草及抗-FGFR1之對照性傷口間隙測量值，各數據點代表7隻小鼠/組之平均值。
圖39A至D顯示第15天、第19天、第21天、及第27天之個別傷口間隙測量值。顯示第27天代表性小鼠之照片(E)。
圖40為針對於測試db/db小鼠中IL-22-Fc之局部相對全身性給藥相較於對照抗體處理；總計3個組(n=7)之研究設計之概視圖。
圖41A至B圖示IL-22-Fc局部相對全身性給藥與對照組Fc局部處理之比較性傷口間隙測量值。使用抗-豬草抗體作為Fc對照抗體。各 數據點代表7隻小鼠/組之平均值。
圖42以照片顯示自代表性小鼠手術移除之傷口組織，顯示第22天時IL-22-Fc(B)及對照抗體(A)之俯視圖及背視圖。
圖43A顯示產生IL-22R KO小鼠之策略。圖43B顯示IL-22R KO及WT小鼠結腸中IL-22Ra1 mRNA表現之RT-PCR結果。圖43C顯示單劑量注射IL-22 Fc或對照IgG後第2天IL-22R KO及WT小鼠結腸中之Reg3b mRNA表現之RT-PCR結果。***P<0.001。誤差棒，平均標準偏差。
圖44顯示證實肥胖小鼠展現缺陷IL-22反應之結果。(A至D)在第7天藉由流式細胞儀分析經OVA/CFA免疫之db/db(A至B)、DIO(C至D)及對照小鼠之引流淋巴結中之淋巴細胞的IL-22表現。(A、C)中FACS圖上之數值為CD4+ T細胞中IL-22+細胞之百分率。(E至F)對db/db、瘦對照組、HFD及飼料飲食飽食正常小鼠注射鞭毛蛋白或PBS。於2h後收穫血清。對db/db及瘦對照組(E)、及HFD及飼料飲食飽食小鼠(F)之IL-22進行ELISA。顯示的資料代表三種(A至B)或兩種(C至F)獨立實驗。於所有實驗中，N=4。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖45顯示瘦素信號缺乏小鼠中IL-17及IL-22產生之缺陷。(A至B)在第7天於經OVA/CFA免疫之db/db及ob/ob小鼠CD4+細胞中分析呈百分比之IL-17A及IL-22表現。(C)自於IL-22產生條件下在存在或不存在重組小鼠瘦素(1μg/ml)下刺激之經純化初始WT CD4+ T細胞之培養上清液進行IL-22 ELISA。(D)自利用IL-23於存在或不存在重組小鼠瘦素(1μg/ml)下刺激之Rag2 KO脾細胞之培養上清液進行IL-22 ELISA。(E)鞭毛蛋白刺激後第2小時ob/ob或瘦對照組之血清IL-22的ELISA。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖46顯示證實db/db(ob/ob)小鼠易受檸檬酸桿菌感染係與缺陷IL- 22產生相關聯及藉由外源IL-22-Fc補救之結果。(A)檸檬酸桿菌感染後WT、db/db及ob/ob小鼠(n=5)結腸中之IL-22 mRNA表現。檸檬酸桿菌感染之db/db及瘦對照小鼠(n=10)之(B)體重及(C)存活率。(D至E)瘦對照(D)及db/db(E)小鼠在第10天之結腸組織，示出上皮增生、腸上皮細胞脫落進入腸腔中、細菌菌落(箭頭)及黏膜下水腫(豎直棒)。水平棒，200μm。(F)藉由結腸組織測定之臨床得分值(n=5)。(G至H)db/db及瘦對照小鼠(n=5)在第10天於肝臟(G)及脾臟(H)中之細菌負荷。(I)在第10天瘦對照組及db/db小鼠(n=5)中抗-檸檬酸桿菌IgG之ELISA。(J).受感染後經IL-22-Fc或對照IgG處理之瘦對照組或db/db小鼠(n=10)之存活率。顯示的資料代表三個獨立實驗。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖47顯示證實糖尿病性病症藉由IL-22-Fc治療減低之結果。(A至D)每週利用IL-22-Fc處理餵食HFD之小鼠兩次(n=10)。(A)在第20天(飽食)及在第21天(16小時的空腹)之血糖。(B)在第30天之體重。(C)在第21天之葡萄糖耐受試驗。(D)在第28天之胰島素耐受試驗。顯示的資料代表兩個獨立實驗。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖48顯示證實IL-22係預防餵食HFD之小鼠之糖尿病性病症之結果。(A)體重、(B)血糖、(C)在第23天之葡萄糖耐受試驗、(D)在第23天於空腹16h後之血糖、及(E)在第25天之腹部脂肪墊。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖49顯示證實IL-22經由多種機制調節代謝症候群之結果。(A-C)db/db小鼠(n=8)之兩個組係隨意餵食食物及每週藉由對照IgG或IL-22-Fc處理兩次。一個db/db小鼠組(n=8)係餵食匹配經IL-22-Fc處理之組之食物攝入之受限制食物，及藉由對照IgG治療。經隨意餵食之小鼠之頭八天的累積食物攝入顯示於(A)中，血糖顯示於(B)中，及在第 25天之葡萄糖耐受試驗顯示於(C)中。(D至E)顯示經IL-22-Fc或對照IgG處理之db/db(D)及HFD(E)小鼠在第0天及第2天之PYY水平。在第2天於第2次處理之前及在第5天收集血清，及分析PYY。(F)顯示經IL-22-Fc或對照IgG處理3週之db/db小鼠之血清LPS。(G至I)IL-22R KO(n=9)及WT小鼠(n=6)係於6週齡開始餵食HFD。體重之結果顯示於(G)中，在第3個月關於HFD之葡萄糖耐受試驗之結果顯示於(H)中及在第4個月關於HFD之胰島素耐受試驗之結果顯示於(I)中。顯示的資料代表兩種(A至C)或三種(D至I)獨立實驗。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。
圖50顯示配對飼養受限食物攝入之結果。三個db/db小鼠組係如圖49A進行餵食及處理。測量累積食物攝入。
圖51顯示證實IL-22改善肝臟功能及減低脂肪墊之結果。(A)db/db小鼠如圖20A經IL-22 Fc或對照IgG處理。在第一個月測量肝臟酵素。(B至C)餵食HFD之小鼠如圖47A經IL-22 Fc或對照IgG處理。在第一個月測量肝臟酵素(B)及腹部脂肪墊(C)。**P<0.01，***P<0.001，誤差棒，標準平均偏差。(D至H)小鼠係餵食HFD長達10週，且接著每週兩次地利用IL-22 Fc或對照處理6週。(D)白色脂肪組織之脂質代謝基因表現。(E)血清三酸甘油酯、甘油及游離脂肪酸。(F)肝臟三酸甘油酯。(G)肝臟膽固醇。(H)白色脂肪組織三酸甘油酯。(I至J)db/db小鼠經IL-22 Fc或對照IgG處理4週。(I)肝臟三酸甘油酯。(J)白色脂肪組織三酸甘油酯。*P<0.05。誤差棒，標準平均偏差。
圖52顯示證實IL-22增加β細胞之胰島素分泌之結果。db/db小鼠如圖20A經IL-22 Fc處理，在第30天收穫胰臟及針對於胰島素及胰高血糖素進行染色。(A)總胰臟區域中胰島區域之百分比。(B)總胰島區域中β細胞區域之百分比。(C)總胰島區域中α細胞區域之百分比。
圖53 IL-22 KO小鼠不發展出利用HFD之葡萄糖耐受不良。IL-22 KO小鼠係在6週齡開始餵食HFD。在HFD後第3個月進行葡萄糖耐受試驗。誤差棒，標準平均偏差。
圖54顯示證實ob/ob小鼠易受檸檬酸桿菌感染之結果：受檸檬酸桿菌感染之ob/ob及瘦小鼠(n=10)之(A)體重及(B)存活率；(C至D)瘦對照組(C)及ob/ob小鼠(D)在第8天之結腸組織，示出上皮增生、腸上皮細胞脫落進入腸腔中、細菌菌落(箭頭)及黏膜下水腫(豎直棒)(水平棒，200μm)；(E)藉由結腸組織(n=5)確定之臨床得分值；及(F至G)ob/ob及瘦對照組小鼠(n=5)在第8天於肝臟(F)及脾臟(G)中之細菌負荷。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。誤差棒，標準平均偏差。
圖55顯示經IL-22 Fc、IL-20 Fc或IL-24 Fc處理之db/db小鼠在就(A)體重、(B)血清葡萄糖及(C)在處理的第20天之葡萄糖耐受試驗方面之結果。
圖56A與B顯示經VEGF或IL-22 Fc處理之db/db小鼠中傷口癒合療效間比較的結果。
圖57A至E顯示再構成表皮中藉由IL-22 Fc之細胞因子或趨化細胞因子誘導。
圖58顯示使用夾板固定之傷口模型於受或不受金黃色葡萄球菌(S.aureus)感染之野生型小鼠及db/db小鼠中傷口閉合間比較的結果。
圖59A與B顯示夾板固定之受感染傷口模型中VEGF及IL-22 Fc間傷口癒合療效比較的結果。
圖60顯示夾板固定之受感染傷口模型中不同濃度下VEGF及IL-22 Fc間傷口癒合療效比較的結果。
圖61顯示夾板固定之受感染傷口模型中不同濃度下之VEGF、PDGF及IL-22 Fc間傷口癒合療效比較的結果。
圖62顯示呈溶液形式及呈凝膠調配物形式之IL-22 Fc於夾板固定之傷口模型中加速傷口癒合。
本文引述之所有公開案、專利案及專利申請案係針對所有目的以引用的方式明確併入本文中。
於一個態樣中，本發明係關於IL-22蛋白質或IL-22 Fc融合蛋白質、包含其之組合物、及使用其之方法。特定言之，本發明係關於IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22多肽於預防及治療IBD、動脈粥樣硬化、表徵係動脈粥樣硬化斑塊形成之心血管疾病及病況、代謝症候群、輕度且急性之內毒素血症及敗血症、急性腎損傷、急性胰腺炎、中度急性胰腺炎、及與胰島素相關之疾病中之使用。此外，本發明係關於使用IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22多肽於預防及治療糖尿病性足部潰瘍、於加速傷口癒合及特定言之糖尿病性傷口癒合。
於一個態樣中，咸信此乃是顯示IL-22多肽可治療心血管疾病本身之第一揭示內容。本文中之資料支持IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質可減低動脈粥樣硬化斑塊之生長、降低動脈粥樣硬化斑塊破裂之頻率及減低內毒素血症之觀點。本發明特別適用於治療需要改變達成其如可由醫生或臨床醫師確定之HDL/LDL脂質譜之罹患代謝症候群、輕度或急性內毒素血症、敗血症及諸如抗胰島素(不響應於胰島素)之與胰島素相關之疾病之個體。本申請案顯示指示IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質可於罹患代謝症候群之該等個體中增加高密度脂蛋白(HDL)及減少低密度脂蛋白(LDL)之資料。在不受理論約束下該資料亦指示為內毒素症及動脈粥樣硬化背後之驅動子之腸衍生之LPS。經mIL-22 Fc融合蛋白質處理之小鼠具有經降低之高血脂病、經改良之葡萄糖耐受與再生血管功能及該等改變之頂點在於動脈粥樣硬化斑塊之減小。IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質可減緩心血管疾病之進展。
此外，糖尿病為對動物中碳水化合物、脂肪及蛋白質代謝造成影響之慢性疾病。糖尿病為成人之失明、腎衰竭、及下肢截肢之首要 病因及為心血管疾病及中風之主要風險因子。I型糖尿病(或胰島素依賴型糖尿病(「IDDM」)或幼年發作型糖尿病)包含所有糖尿病病例之約10%。該病之特徵係由胰臟之β細胞之胰島素分泌功能之進行性損失。起因在胰臟疾病之非特發性、或「續發」糖尿病亦具有此特徵。I型糖尿病係與以下臨床徵兆或症狀相關聯，例如，持續增加之血漿葡萄糖濃度或高血糖症；多尿；過度飲水及/或過度攝食；慢性微血管併發症，諸如視網膜病、腎病及神經病變；及大血管併發症，諸如，會導致失明之高血脂病及高血壓、末期腎臟疾病、截肢及心肌梗塞。
II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病或NIDDM，亦稱為II型糖尿病)為與葡萄糖代謝及受損胰島素敏感性之失調相關之代謝疾病(或代謝症候群)。II型糖尿病通常在成年期發展出及與身體不具有使用或製造足量胰島素之能力相關聯。除了在靶組織中所觀察到胰島素抗性之外，罹患II型糖尿病之患者具有相對胰島素缺陷，換言之，就給定的血漿葡萄糖濃度而言，患者具有較胰島素濃度預測值低的胰島素濃度。II型糖尿病之特徵係以下臨床徵兆或症狀，例如，持續增加之血漿葡萄糖濃度或高血糖症；多尿；過度飲水及/或過度攝食；慢性微血管併發症，諸如視網膜病、腎病及神經病變；及大血管併發症，諸如，會導致失明之高血脂病及高血壓、末期腎臟疾病、截肢及心肌梗塞。
I．定義
除非另外定義，否則用於本文之所有技術術語、表示法及其他科學術語意欲具有熟習本發明所涉及技術者通常明瞭之含義。於一些情況中，具有通常明瞭之含義的術語係為清楚起見及/或基於快速參考而定義於本文中，且本文中該等定義之包含不應必需被理解為表示超出本技術中通常所明瞭之實質的差異。
於本申請案中，除非另作敘述，否則所採用的技術可參見任何若干熟知參考文獻，諸如：Molecular Cloning：A Laboratory Manual(Sambrook等人，1989，冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press))、PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications(Innis等人，1990。Academic Press，加州聖地亞哥)、及Harlow與Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual ch.14(冷泉港實驗室出版社，紐約冷泉港)。
適宜地，涉及市售套組及試劑之使用之程序一般係依照製造商所界定方案及/或參數進行，除非另外注明。在因此描述本發明方法及用途之前，咸應明瞭本發明不受限於所述特定方法論、方案、細胞系、動物物種或屬、構造、及試劑，因為此等當然可改變。咸應明瞭用於本文中之術語僅為達成描述特定實施例之目的，而非意圖限制將僅受限於隨附申請專利範圍之本發明之範疇。
如本文所用，單數形式「一個」、「一種」及「該」包括複數個指示物，除非本文清楚地另作指明。例如，所提及之「一種單離的肽」意指一或多種單離的肽。
於本說明書及申請專利範圍中，術語「包括(comprise)」、或變化形式諸如「包括(comprises)」或「包括(comprising)」將理解為意指包括所述的整數或整數之群然不排除任何其他整數或整數之群。
術語「IL-22 Fc融合蛋白質」或「IL-22融合蛋白質」或「IL-22 Ig融合蛋白質」如本文所用意指IL-22蛋白質或多肽直接或間接鍵聯至IgG Fc區之融合蛋白質。於某些較佳實施例中，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質包括鍵聯至人類IgG Fc區之人類IL-22蛋白質或多肽。於某些實施例中，人類IL-22蛋白質包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。然而，應明瞭本發明亦包含諸如插入、缺失、取代之微小序列改變，尤其係IL-22或Fc之不影響IL-22或IL-22 Fc融合蛋白質之功能及/或活性 之守恆性胺基酸取代。本發明之IL-22 Fc融合蛋白質可結合IL-22受體，此可致使IL-22受體下游信號傳導。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質可結合IL-22受體，且/或可致使IL-22受體下游信號傳導。IL-22 Fc融合蛋白質之功能及/或活性可藉由相關技術中已知的方法檢定，包括(但不限於)ELISA、配體-受體結合檢定及Stat3螢光素酶檢定。於某些實施例中，本發明提供一種結合IL-22受體之IL-22 Fc融合蛋白質，該結合可致使IL-22受體下游信號傳導，該IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對選自由SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12及SEQ ID NO：14組成之群之胺基酸序列至少95%序列一致性之胺基酸序列，及其中該Fc區係未經糖基化。於某些特定實施例中，IL-22融合蛋白質之Fc區不具有效應子活性(例如，不結合FcγIIIR)或展現實質上低於全(例如，野生型)IgG抗體之效應子活性。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區不觸發諸如抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)之細胞毒性。除非另作指明，否則本申請案中「IL-22融合蛋白質」、「IL-22 Fc融合」、「IL-22 Ig融合蛋白質」、「IL-22 Fc融合蛋白質」或「IL-22 Fc」可互換使用。
術語「IL-22」或「IL-22多肽」或「IL-22蛋白質」如本文所用廣義地意指源自於任何哺乳動物(包括靈長類動物(例如，人類)及齲齒動物(例如，小鼠及大鼠))之任何天然IL-22，除非另外指出。該術語包含「全長」初始IL-22及IL-22之起因於在細胞中處理之任何形式。例如，本發明包含包含N-端前導序列之全長IL-22及成熟形式IL-22二者。前導序列(或信號肽)可為內源性IL-22前導序列或另一哺乳動物分泌蛋白之外源性前導序列。於某些實施例中，前導序列可衍生自真核或原核分泌蛋白。該術語亦包含IL-22之自然生成之變體，例如，接合變體或對偶基因變體。示例性人類IL-22之胺基酸序列以SEQ ID NO：4(成熟形式，不具有信號肽)顯示。於某些實施例中，具有內源性 前導序列之全長IL-22蛋白質之胺基酸序列以SEQ ID NO：71提供；而於其他實施例中，具有外源性前導序列之成熟IL-22蛋白質之胺基酸序列以SEQ ID NO：2提供。本發明亦包含微小的序列變化，尤其係IL-22之不影響IL-22的功能及/或活性(例如，與IL-22受體之結合)之守恆性胺基酸取代。圖1顯示源自於若干示例性哺乳動物物種之成熟IL-22之胺基酸序列比對。星號指示跨物種之極有可能對IL-22之功能及/或活性具重要性之高度守恆性胺基酸殘基。因此，於某些實施例中，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質包含包含具有相對SEQ ID NO：4至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性之胺基酸序列之IL-22多肽。於某些其他實施例中，IL-22蛋白質具有相對SEQ ID NO：71 95%或更大之序列一致性、相對SEQ ID NO：71 96%或更大之序列一致性、相對SEQ ID NO：71 97%或更大之序列一致性；相對SEQ ID NO：71 98%或更大之序列一致性；相對SEQ ID NO：71 99%或更大之序列一致性。本文所述之IL-22多肽可自多種來源單離得，諸如，自人類組織或自另一種來源單離得，或係藉由重組或合成方法製得。
術語「IL-22受體」或「IL-22R」係指由IL-22R1及IL-10R2或其自然生成之對偶基因變體組成之異型二聚物。請參見Ouyang等人，2011，Annu.Rev.Immunol.29：159-63。IL-10R2廣泛性地由許多種細胞類型表現，及IL-22R1僅於諸如上皮細胞、肝細胞及膠質細胞之先天細胞中表現。IL-22R1亦稱為IL-22Ra1或IL-22Rα1。IL-22R1可經與其他多肽配對以形成針對例如IL-20或IL-24之其他IL-10家族成員的異二聚受體。請參見(例如)Ouyang等人，2011(前述)。
「天然序列IL-22多肽」或「天然序列IL-22R多肽」係指包含與對應的天然IL-22或IL-22R多肽相同的胺基酸序列之多肽。該等天然序列IL-22或IL-22R多肽可從自然界單離得或可藉由重組或合成方法製得。該等術語具體地包含特異性IL-22或IL-22R多肽之自然生成之 截短或分泌形式(例如，缺乏其相關信號肽之IL-22)、自然生成之變體形式(例如，係或接合形式)、及多肽之自然生成之對偶基因變體。於本發明之各種實施例中，揭示於本文中之天然序列IL-22或IL-22R多肽為成熟或全長天然序列多肽。一種示例性全長天然人類IL-22顯示於圖30(DNA，SEQ IDNO：70)及圖31(蛋白質，SEQ ID NO：71)中。起始及終止密碼子以粗體字型顯示及在圖30中加下劃線。然而，揭示於附圖中之IL-22及IL-22R多肽序列展示始於本文中表示為胺基酸位置1之甲硫胺酸殘基，可設想及可能地，可使用圖中位於胺基酸位置1上游或下游之其他甲硫胺酸殘基作為IL-22或IL-22R多肽之起始胺基酸殘基。
「IL-22變體」、「IL-22R變體」、「IL-22變體多肽」、或「IL-22R變體多肽」意指如上文定義之具有相對全長天然序列IL-22或IL-22R多肽序列至少約80%胺基酸序列一致性之活性IL-22或IL-22R多肽。通常，IL-22或IL-22R多肽變體將具有相對全長或成熟天然序列IL-22或IL-22R多肽序列至少約80%胺基酸序列一致性、或者至少約81%胺基酸序列一致性、或者至少約82%胺基酸序列一致性、或者至少約83%胺基酸序列一致性、或者至少約84%胺基酸序列一致性、或者至少約85%胺基酸序列一致性、或者至少約86%胺基酸序列一致性、或者至少約87%胺基酸序列一致性、或者至少約88%胺基酸序列一致性、或者至少約89%胺基酸序列一致性、或者至少約90%胺基酸序列一致性、或者至少約91%胺基酸序列一致性、或者至少約92%胺基酸序列一致性、或者至少約93%胺基酸序列一致性、或者至少約94%胺基酸序列一致性、或者至少約95%胺基酸序列一致性、或者至少約96%胺基酸序列一致性、或者至少約97%胺基酸序列一致性、或者至少約98%胺基酸序列一致性、及或者至少約99%胺基酸序列一致性。
術語「Fc區」、「Fc域」或「Fc」係指免疫球蛋白重鏈之包含恆 定區之至少一部分之C-端非抗原結合區。該術語包括天然Fc區及變體Fc區。於某些實施例中，人類IgG重鏈Fc區自重鏈之Cys226延伸至羧基-端。然而，Fc區之C-端離胺酸(Lys447)可或可不存在，而不會影響Fc區之結構或穩定性。除非另外於本文中指明，否則IgG或Fc區中胺基酸殘基之編號係依照針對於抗體之EU編號系統，亦稱之為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，馬里蘭州貝塞斯達，1991中所述。
於某些實施例中，Fc區係指包含鉸鏈區(始於Cys226)、IgG CH2域及CH3域之免疫球蛋白IgG重鏈恆定區。術語「鉸鏈區」或「鉸鏈序列」如本文所用係指位於連接子及CH2域之間之胺基酸序列。於某些實施例中，鉸鏈區包含胺基酸序列CPPCP(SEQ ID NO：31)。於某些實施例中，針對於IL-22 IgG4 Fc融合蛋白質之鉸鏈區包含為在天然IgGI鉸鏈區中發現之序列之CPPCP序列(SEQ ID NO：31)，以利於二聚合。於某些其他實施例中，Fc區始於鉸鏈區及延伸至IgG重鏈之C-端。於某些特定實施例中，Fc區包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之Fc區。於某些特定實施例中，Fc區包含IgG4之CH2及CH3域。於某些其他特定實施例中，Fc區包含IgG1之CH2及CH3域。如實例部分中所述，申請人出人意料地發現IL-22 IgG4 Fc融合蛋白質展現甚至較IL-22 IgG1 Fc融合蛋白質優異之藥物動力學性質。
於某些實施例中，IgG CH2域始於Ala 231。於某些其他實施例中，CH3域始於Gly 341。應明瞭人類IgG之C-端Lys殘基可視情況係不存在。亦應明瞭本發明之範疇包含不影響Fc之所欲結構及/或穩定性之Fc區之守恆性胺基酸取代。
於某些實施例中，IL-22係經連接子鍵聯至Fc區。於某些特定實施例中，該連接子為將IL-22之C-端連接至本文所述Fc區之肽。於某 些實施例中，天然IgG序列係存於連接子及/或鉸鏈區中以最小化且/或避免免疫原性之風險。於其他實施例中，微小序列改變可引入至天然序列以利於加工製造。本發明之範疇亦包含展現高活性(如(例如)藉由螢光素酶檢定測得)之包含外源性連接子或鉸鏈序列之IL-22 Fc融合構造。於某些實施例中，該連接子包含為8至20個胺基酸、8至16個、8至15個、8至14個、8至13個、8至12個、8至11個、8至10個、8至9個、10至11個、10至12個、10至13個、10至14個、10至15個、10至16個、11至16個；8、9、10、11、12、13、14、15或16個胺基酸長之胺基酸序列。於某些其他實施例中，該連接子包含胺基酸序列DKTHT(SEQ ID NO：32)。
於某些特定實施例中，連接子不包含序列Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：45)、Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：46)或Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：47)。
於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含經連接子鍵聯至Fc區之IL 22多肽。術語「鍵聯至」或「融合至」係指形成於兩個部分之間之共價鍵，例如，肽鍵。
術語「無岩藻糖基化作用」、「無岩藻糖基化」、「岩藻糖基化作用」、或「岩藻糖基化」係指不存在核心-岩藻糖或自連接至Fc之CH2域之N-聚糖移除核心-岩藻糖。
申請人出人意料地發現IL-22 IgG1 Fc融合蛋白質不同於包含Fc之其他Fc融合蛋白質或抗體，其展現連接至Fc區之N-聚糖中高程度(例如，30%)之無岩藻糖基化。連接至Fc之CH2域之N-聚糖係異質性。產生於CHO細胞中之抗體或Fc融合蛋白質係以岩藻糖基轉移酶活性方式岩藻糖基化。請參見Shoji-Hosaka等人，J.Biochem.2006，140：777-83。通常，可在人類血清中檢測到小百分率之自然生成之無岩藻糖基化IgG。Fc之N-糖基化對於與FcγR之結合具重要性；及N-聚糖之無岩 藻糖基化增強Fc結合至FcγRIIIa之能力。經增強之FcγRIIIa結合可增加抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)，此在其中期望細胞毒性之某些抗體治療應用中可能有利。請參見Shoji-Hosaka等人(前述)。然而，此種經增強之效應子功能在Fc介導之細胞毒性諸如在IL-22 Fc融合之情況中係所不期望時可能有害。
已知IgG4 Fc可展現較IgGI Fc低之效應子活性。申請人出人意料地發現IL-22 IgG4 Fc融合蛋白質亦顯示Fc區中高程度之無岩藻糖基化。連接至IgG4之Fc之高水平無岩藻糖基化N-聚糖可增加所不期望的效應子活性。
因此，於一個態樣中，本發明提供一種其中Fc區或CH2域係未經糖基化之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，CH2域中之N-糖基化位點係經突變以防止發生糖基化。
於某些其他實施例中，Fc區之CH2域中之糖基化可藉由改變糖基化一致位點，即，位置297之處之其後為任何胺基酸殘基(就人類IgG而言，Ser)及Thr(參見圖3)之Asn省去。糖基化位點可藉由胺基酸插入、缺失及/或取代改變。例如，一或多個胺基酸殘基可經插入介於Asn及Ser之間或介於Ser及Thr之間以改變初始糖基化位點，其中該等插入不再生N-糖基化位點。於某些特定實施例中，人類IgG Fc之CH2域中之N297殘基(例如，Fc中之N-糖基化位點，參見圖3)係經變異以消除糖基化位點。於某些特定實施例中，N297殘基係經改變為Gly、Ala、Gln、Asp或Glu。於一些特定實施例中，N297殘基係經改變為Gly或Ala。於其他特定實施例中，N297殘基係經改變為Gly。於某些其他實施例中，T299殘基可經另一個胺基酸(例如Ala、Val或Gly)取代。於某些特定實施例中，獲得無糖基化Fc之該等突變不影響IL-22 Fc融合蛋白質之結構及/或穩定性。
於一個相關態樣中，本發明提供一種治療有需要之患者之包括 UC及CD之IBD之方法、抑制腸中細菌感染之方法、及增進腸中上皮完整性、上皮增生、分化及/或遷移之方法、及治療代謝疾病或代謝症候群、II型糖尿病、動脈粥樣硬化及糖尿病性傷口癒合之方法，該等方法包括投與患者包含IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物，其中該Fc區係未經糖基化。
於另一個態樣中，本發明提供一種包含於Fc區中具有低程度無岩藻糖基化或不具有無岩藻糖基化之IL-22 Fc融合蛋白質之組合物。明確言之，本發明提供一種包含在Fc區中具有不大於10%，較佳不大於5%，更佳不大於2%及最佳小於1%之總無岩藻糖基化程度之IL-22 Fc融合蛋白質之組合物。於另一個態樣中，本發明提供治療有需要之患者之包括UC及CD之IBD之方法、抑制腸中細菌感染之方法、及增進腸中上皮完整性、上皮增生、分化及/或遷移之方法、及治療代謝疾病、II型糖尿病、II型糖尿病合併肥胖症、移植物抗宿主疾病(GVHD)、動脈粥樣硬化、心血管疾病、代謝症候群、(急性輕度)內毒素血症、敗血症、急性冠心病、高血壓、血脂異常、肥胖症、高血糖症、脂質代謝疾病、肝炎、急性肝炎、腎衰竭、急性腎衰竭、急性腎臟損傷、腎移植物衰竭、胰腺炎、急性胰腺炎、肝纖維化及肺纖維化、傷口、受感染傷口、加速傷口癒合(包括糖尿病性傷口癒合)之方法，該等方法包括投與患者包含在Fc區中具有不大於10%，較佳不大於5%，更佳不大於2%及最佳小於1%之無岩藻糖基化程度之IL-22 Fc融合蛋白質之醫藥組合物。
術語「無岩藻糖基化%」係指IL-22 Fe融合蛋白質之組合物中Fc區之無岩藻糖基化程度。無岩藻糖基化%可藉由質譜法(MS)測量及經表示為無岩藻糖基化聚糖物質(於一個Fc域(-1)及經組合之兩個Fc域(-2)上不具有岩藻糖之物質)相對整個IL-22 Fc融合蛋白質群體之百分比。例如，無岩藻糖基化%可經計算為藉由MS分析諸如藉由如圖2及 下文所顯示實例中所描述之Agilent 6520B TOF質譜分析器測得之於-1岩藻糖峰值及-2岩藻糖峰值下方之組合面積相對所有聚糖物質之總面積之百分比。無岩藻糖基化之程度可藉由相關技術中已知的任何其他適宜方法測得，包括(但不限於)HPLC-晶片Cube MS(Agilent)及反相-HPLC。IL-22 Fc組合物之無岩藻糖基化%可用作用於確定組合物是否將極易觸發不適於所欲目的之不可接受的ADCC水平之指示。因此，於某些特定實施例中，該組合物包含具有不大於10%，較佳不大於5%，更佳不大於3%及最佳不大於1%之無岩藻糖基化程度之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，該組合物包含具有不大於10%、不大於9%、不大於8%、不大於7%、不大於6%、不大於5%、不大於4%、不大於3%、不大於2%、或不大於1%之無岩藻糖基化程度之IL-22 Fc融合蛋白質。
於某些實施例中，IL-22 Fc組合物之所欲無岩藻糖基化程度可藉由相關技術中已知的方法，包括(但不限於)藉由純化達成。例如，組合物中之岩藻糖基化物質可藉由具有與岩藻糖結合部分偶聯的樹脂(諸如，對岩藻糖(特別是存於1至6個鍵中之岩藻糖)具特異性之抗體或凝集素)之親和層析富集。請參見(例如)Kobayashi等人，2012,J.Biol.Chem.287：33973-82。於某些其他實施例中，岩藻羰基化物質可使用抗岩藻糖特異性抗體在親和管柱中富集並與無岩藻糖基化物質分離。或者或另外，無岩藻糖基化物質可基於針對FcγRIIIa之差別性結合親和力使用親和層析與岩藻糖基化物質分離。
於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含CH2域中N297殘基係經突變之Fc區。於某些實施例中，N297殘基係經改變為Gly或Ala，較佳係改變為Gly。於某些其他實施例中，N297殘基係缺失。於某些實施例中，包含在N297處具有胺基酸取代之Fc之IL-22 Fc融合蛋白質係經無糖基化或係未經糖基化。術語「無糖基化」如本文所用 係指蛋白質或所述的未經糖基化之蛋白質之一部分。例如，具有無糖基化Fc區之IL-22 Fc融合蛋白質可藉由誘變Fc區之CH2域中N297殘基製得。
於其他實施例中，連接至野生型N297殘基之N-聚糖以酶促方式，例如藉由脫去糖基化移除。適宜之糖酵解酵素包括(但不限於)肽-N-糖苷酶(PNGase)。
術語「二聚IL-22 Fc融合蛋白質」係指各單體包含IL-22 Fc融合蛋白質之二聚物。術語「單體IL-22 Fc融合蛋白質」係指其中一種單體包含IL-22 Fc融合蛋白質(IL-22 Fc臂)之二聚物，而另一種單體包含不具有IL-22多肽之Fc區(Fc臂)。因此，二聚IL-22 Fc融合蛋白質針對於IL-22R結合而言為二價，而單體IL-22 Fc融合蛋白質針對於IL-22R結合而言為單價。可藉由相關技術中已知的方法，包括(但不限於)藉由結進孔技術之異二聚合促進單體IL-22 Fc融合蛋白質之異二聚合。結進孔技術之結構及組合方法可參見(例如)以其全文引用方式併入本文中之US 5,821,333、US 7,642,228、US 2011/0287009及PCT/US 2012/059810。藉由藉由在一個Fc之CH3域中改由大胺基酸殘基替代小胺基酸殘基引入「結」(或隆凸)、及在另一Fc之CH3域中藉由改由較小胺基酸殘基替代一或多個大胺基酸殘基引入「孔」(或凹穴)，開發出該技術。於某些實施例中，IL-22 Fc融合臂包含結，及僅Fc臂包含孔。
用於形成結之較佳殘基一般為自然生成之胺基酸殘基及較佳係選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。最佳為色胺酸及酪胺酸。於一個實施例中，用於形成結之起始殘基具有小側鏈體積，諸如丙胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸。CH3域中用於形成結之示例性胺基酸取代包括(但不限於)T366W、T366Y或F405W取代。
用於形成孔之較佳殘基通常為自然生成之胺基酸殘基及較佳係選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)。於一個實施例中，用於形成孔之具有大側鏈體積，諸如酪胺酸、精胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。CH3域中用於形成孔之示例性胺基酸取代包括(但不限於)T366S、L368A、F405A、Y407A、Y407T及Y407V取代。於某些實施例中，結包括T366W取代，及孔包括T366S/L368A/Y407V取代。於某些特定實施例中，單體IL-22 Fc融合蛋白質之Fc區包含IgGI Fc區。於某些特定實施例中，單體IL-22 IgG1 Fc融合包含IL-22 Fc結臂及Fc孔臂。於某些實施例中，IL-22 Fc結臂包含T366W取代(SEQ ID NO：61)，及Fc孔臂包含T366S、L368A及Y407V(SEQ ID NO：62)。於某些其他實施例中，兩個臂之Fc區進一步包含N297G或N297A突變。於某些實施例中，單體IL-22 Fc融合蛋白質係在大腸桿菌細胞中表現。應明瞭本申請案亦涵蓋及包含相關技術中已知可促進異二聚合之針對於Fc區之其他改變。
術語「傷口」係指損傷，特別是皮膚或另一外表層被撕裂、刺傷、割傷、或以其他方式破損者。
術語「潰瘍」為通常特徵係形成膿、組織死亡之皮膚或黏膜受損之部位，及常常伴隨著發炎反應。
術語「腸(intestine/gut)」如本文所用廣泛地包含小腸及大腸。
術語「加速傷口癒合」或「傷口癒合之加速」係指癒合速率之增加，例如，直到完全傷口閉合發生的時間縮短或直到傷口面積減少%發生的時間縮短。
「糖尿病性傷口」為與糖尿病相關聯之傷口。
「糖尿病性潰瘍」為與糖尿病相關聯之潰瘍。
「慢性傷口」係指不癒合之傷口。請參見(例如)Lazarus等人，Definitions and guidelines for assessment of wounds and evaluation of healing，Arch.Dermatol.130：489-93(1994)。慢性傷口包括(但不限於)例如動脈潰瘍、糖尿病性潰瘍、壓力潰瘍或褥瘡、靜脈潰瘍等等。急性傷口可發展成慢性傷口。急性傷口包括(但不限於)因例如熱損傷(例如，燒傷)、創傷、手術、廣泛性皮膚癌之切除、深部真菌及細菌感染、血管炎、硬皮病、天皰疹、中毒性表皮壞死鬆解症等等引起之傷口。請參見(例如)Buford Wound Healing and Pressure Sores，HealingWell.com，在2001年10月24日公開。因此，於某些實施例中，慢性傷口為受感染傷口。「正常傷口」係指經歷正常傷口癒合修復之傷口。
用於本文目的之「受體人類架構」為包含如下文定義衍生自人類免疫球蛋白架構或人類一致架構之輕鏈可變域(VL)架構或重鏈可變域(VH)架構之胺基酸序列之架構。「衍生自」人類免疫球蛋白架構或人類一致架構之受體人類架構可包含其相同的胺基酸序列，或其可包含胺基酸序列改變。於一些實施例中，胺基酸改變處的數量為10處或更少、9處或更少、8處或更少、7處或更少、6處或更少、5處或更少、4處或更少、3處或更少、或2處或更少。於一些實施例中，VL受體人類架構之序列與VL人類免疫球蛋白架構序列或人類一致架構序列相同。
「親和力」係指分子之單一結合位點(例如，配體或抗體)及其結合搭配物(例如，受體或抗原)間非共價性相互作用總體的強度。除非另作指明，如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對成員(例如，IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22受體)間1：1相互作用之內因性結合親和力。分子X針對於其搭配物Y之親和力可大致上以解離常數(Kd)來表示。可藉由包括述於本文中之其等方法之相關技術中已知的常用方法測定親和力。於隨後描述用於測定結合親和力之具體示例性及示例性實施例。
術語「抗體」於本文中以最寬廣意義使用及包含各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、及抗體片段，只要其展現所欲抗原結合活性。
「抗體片段」係指除了完整抗體以外之包含完整抗體之與完整抗體所結合之抗原結合之部分的分子。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
作為參照抗體之「結合相同抗原決定基之抗體」係指在競爭性分析中阻斷參照抗體與其抗原之結合達50%或更大之抗體，及反之，參照抗體在競爭性分析中阻斷抗體與其抗原之結合50%或更大。本文中提供一種示例性競爭性分析。
術語「嵌合」抗體係指其中重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自特定來源或物種而重鏈及/或輕鏈之其餘部分衍生自不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指為其重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。抗體存在五種主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，及其中若干種可進一步細分為子類別(同型物)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及IgA2。對應於免疫球蛋白之不同類別之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ、及μ。
術語「細胞毒性劑」如本文所用係指抑制或阻礙細胞功能且/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療藥劑或藥物(例如，甲胺喋呤、阿黴素、長生花屬生物鹼(長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、 柔紅黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酵素及其片段，諸如溶核酵素；抗生素；毒素，諸如小分子毒素或植物或動物細菌、真菌之酵素活性毒素，包括其片段及/或變體；及揭示於下文之各種抗腫瘤或抗癌藥劑。
「效應子功能」或「效應子活性」係指隨抗體同型物改變之歸因於抗體之Fc區之其等生物活性。抗體效應子功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體-依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質不展現任何效應子功能或任何可檢測效應子功能。於某些其他實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質展現實質上減低之效應子功能，例如，減低約50%、60%、70%、80%、或90%之效應子功能。
例如醫藥調配物之藥劑之「有效量」或「治療有效量」係指可在給藥並持續所需時段的時間下有效達成所欲治療或預防結果之量。
例如，就心血管疾病或病況而言，IL-22多肽、融合蛋白質或激動劑之治療有效量可減低動脈粥樣硬化斑塊形成之程度；減小動脈粥樣硬化斑塊之尺寸；抑制(亦即，減慢達成某種程度及較佳阻停)動脈粥樣硬化斑塊；抑制(亦即，減緩達成某種程度及較佳阻停)動脈粥樣硬化斑塊之栓塞或破裂；及/或在某種程度上舒解一或多種與該疾病或病況相關聯之症狀。
所謂「減低或抑制」意指導致總體下降較佳20%或更大，更佳50%或更大及最佳75%、85%、90%、95%、或更大之能力。減低或抑制可表示所治療疾病之症狀、動脈粥樣硬化斑塊之存在或尺寸、或動脈粥樣硬化斑塊之個數。
「次最佳量」係指小於通常用於特定治療之治療劑最佳量之量。當同時或依序地提供個體兩種治療劑時，相較於單獨地提供各種 治療劑之治療，各種治療劑可以次最佳量提供。例如，於某些實施例中，需要IBD治療之個體係以次最佳量投與包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質及地塞米松之醫藥組合物。
「架構」或「FR」係指除了超變區(HVR)殘基之外之可變域殘基。可變域之FR大致上係由四個FR域組成：FR1、FR2、FR3、及FR4。因此，HVR及FR序列一般係呈以下序列出現在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」、及「全抗體」在本文中可互換使用以指具有實質上與天然抗體結構類似之結構或具有包含如本文定義之Fc區之重鏈之抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞系」、及「宿主細胞培養」可互換使用及係指已引入外源核酸之細胞(包括該等細胞之子代)。宿主細胞包括「轉形體」及「轉形細胞」，包括原代轉形細胞及衍生自其之子代(不考慮繼代的數量)。該轉形細胞包括經瞬時或穩定轉形之細胞。子代之核酸水平可不完全與親本細胞相同，但可包含突變。本文中包括具有與如所篩選或所選擇在原始轉形細胞中相同的功能或生物活性之突變子代。於某些實施例中，宿主細胞係經外源核酸瞬時轉染。於某些其他實施例中，宿主細胞係經外源核酸穩定轉染。
「人類抗體」為具有對應於由人類或人類細胞所產生或衍生自利用人類抗體譜系之非人類來源之抗體之胺基酸序列之胺基酸序列或其他人類抗體-編碼序列者。人類抗體之該定義明確不包含包含非人類抗原結合殘基之人源化抗體。
「人類一致架構」為代表最常產生於人類免疫球蛋白VL或VH架構序列之選擇中之胺基酸殘基的架構。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之子群組。一般而言，該序列子群組為如述於Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242，馬里蘭州貝塞斯達(1991)，第1至3卷中之子群組。於一個實施例中，VL之子群組為如述於Kabat等人(前述)中之子群組κ I。於一個實施例中，VH之子群組為如述於Kabat等人(前述)中之子群組III。
「人源化」抗體係指包含源自非人類HVR之胺基酸殘基及源自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。於某些實施例中，人源化抗體將包含實質上所有該至少一個、及通常兩個其中所有或實質上所有HVR(例如，CDR)對應於非人類抗體之其等、及所有或實質上所有該等FR對應於人類抗體之其等之可變域。人源化抗體可視需要包含衍生自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人源化形式」係指已經過人性化之抗體。
術語「超變區」或「HVR」如本文中所用係指序列上超變(「互補決定區」或「CDR」)且/或形成結構上界定之迴路(「超變迴路」)且/或包含抗原接觸區(「抗原接觸物」)之抗體可變域之各個區。一般而言，抗體包含六個HVR：三個在VH中(H1、H2、H3)，而三個在VL中(L1、L2、L3)。本文中之示例性HVR包括：(a)超變迴路發生在胺基酸殘基26至32(L1)、50至52(L2)、91至96(L3)、26至32(H1)、53至55(H2)、及96至101(H3)之處(Chothia與Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；(b)CDR發生在胺基酸殘基24至34(L1)、50至56(L2)、89至97(L3)、31至35b(H1)、50至65(H2)、及95至102(H3)之處(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，馬里蘭州貝塞斯達(1991))；(c)抗原接觸物發生在胺基酸殘基27c至36(L1)、46至55(L2)、89至96(L3)、30至35b(H1)、47至58(H2)、及93至101(H3)之處 (MacCallum等人，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)、及/或(c)之組合，包含HVR胺基酸殘基46至56(L2)、47至56(L2)、48至56(L2)、49至56(L2)、26至35(H1)、26至35b(H1)、49至65(H2)、93至102(H3)、及94至102(H3)。
除非另作指明，否則可變域中之HVR殘基及其他殘基(例如，FR殘基)在本文中係依照Kabat等人(前述)編號。
「免疫偶聯物」為與一或多個異種分子共軛之抗體或抗體之片段，包括(但不限於)細胞毒性劑。
「個體」、「受試者」或「患者」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家養動物(例如，牛、羊、貓、狗、及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物(諸如猴))、兔、及齲齒動物(例如，小鼠及大鼠)。於某些實施例中，該個體、受試者或患者為人類。
「單離的」IL-22融合蛋白質為已自重組產生融合蛋白質之宿主細胞環境分離得者。於一些實施例中，IL-22融合蛋白質係經純化達成大於95%或99%純度，如藉由例如電泳(例如，SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析法(例如，離子交換或反相HPLC)測得。
「單離的」核酸係指已自其自然環境之組分分離出的核酸分子。單離的核酸包括包含於通常包含核酸分子之細胞中之核酸分子，但該核酸分子係以染色體外方式存在或係存於與其天然染色體位置不同的染色體位置之處。
「單離的編碼IL-22 Fc融合蛋白質之核酸」係指一或多個編碼IL-22 Fc融合蛋白質之核酸分子，包括於單一載體或個別載體中之該(等)核酸分子，該(等)核酸分子係經瞬時轉染或經穩定轉染為宿主細胞及該(等)核酸分子存於宿主細胞中之一或多個位置之處。
術語「控制序列」係指特定宿主生物體中表現可以操作方式鍵聯之編碼序列時所需的DNA序列。適用於原核生物之控制序列(例如) 包括啟動子、視需要選用之操縱子序列、及核糖體結合位點。已知真核細胞係利用啟動子、聚腺苷酸化信號、及增強子。
核酸在將其放置與另一核酸序列成功能性關係時係「以操作方式鍵聯」。例如，用於前序列或分泌前導之DNA係以操作方式鍵聯至用於多肽之DNA，假若其係經表現為參與多肽之分泌之前蛋白質；啟動子或增強子係以操作方式鍵聯至編碼序列，假若其影響序列之轉錄；或核糖體結合位點係以操作方式鍵聯至編碼序列，假若其係經定位以利於轉譯。一般而言，「以操作方式鍵聯」意指鍵聯之DNA序列相連，及就分泌前導而言，相連且處在讀碼階段。然而，增強子無須相連。鍵聯係藉由方便的限制位點之處之結紮達成。假若該等位點不存在，則依照習知的實務來使用合成寡核苷酸適配子或連接子。
術語「單株抗體」如本文所用係指獲自實質上均質抗體群體之抗體，亦即，包含該群體之該等個別抗體相同且/或與相同的抗原決定基結合，但不包括(例如)包含自然生成之突變或產生於單株抗體製劑之製備期間之可能變體抗體，該等變體一般係以少量存在。與通常包括導向不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之各單株抗體係導向抗原上之單一決定子。因此，修飾詞「單株」指示獲自實質上均質抗體群組之抗體之特徵，及不應解釋為需要藉由任何特定方法製造抗體。例如，意欲根據本發明使用之該等單株抗體可藉由多種技術進行製造，包括(但不限於)融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法、及利用包含所有或部分人類免疫球蛋白位點之轉基因動物之方法，本文中描述該等方法及其他的用於製造單株抗體之示例性方法。
「裸抗體」係指非與異種部分(例如，細胞毒性部分)或放射性標記共軛之抗體。該裸抗體可存於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之自然生成之免疫球蛋白分 子。例如，天然IgG抗體為由經二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈組成之約150,000道耳頓之異源四聚醣蛋白。從N-至C-端，各重鏈具有亦稱為可變重鏈域或重鏈可變域之可變區(VH)，接在其後面的是三個恆定域(CH1、CH2、及CH3)。類似地，從N-至C-端，各輕鏈具有亦稱為可變輕域或輕鏈可變域之可變區(VL)，接在其後面的是恆定輕(CL)域。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸類於稱為卡帕型(κ)及蘭姆達型(λ)之兩種類型之一。
「天然序列Fc區」包含與Fc區本身存在的胺基酸序列相同的胺基酸序列。天然序列人類Fc區包括(但不限於)天然序列人類IgGI Fc區(非-A及A異型物)；天然序列人類IgG2 Fc區；天然序列人類IgG3 Fc區；及天然序列人類IgG4 Fc區、及其自然生成之變體。
「變體Fc區」包含由於至少一處胺基酸改變，較佳一或多處胺基酸取代而不同於天然序列Fc區之胺基酸序列之胺基酸序列。較佳地，變體Fc區相較於天然序列Fc區或親本多肽之Fc區在天然序列Fc區或親本多肽之Fc區中具有至少一處胺基酸取代，例如約一至約十處胺基酸取代，及較佳約一至約五處胺基酸取代。本文中變體Fc區將較佳具有相對天然序列Fc區且/或相對親本多肽之Fc區至少約80%同源性，及最佳相對其至少約90%同源性，更佳相對其至少約95%同源性。於某些實施例中，變體Fc區係未經糖基化。
術語「發炎性腸病」或IBD於本文中在最寬廣意義上使用及包括所有的其病理涉及包括小腸及結腸之腸中復發性發炎之疾病及病理病況。常見的IBD包括潰瘍性結腸炎及克羅恩病。IBD不受限於UC及CD。該疾病之表現症狀包括(但不限於)發炎及腸中上皮完整性之減低。
術語「心血管疾病」或「心血管病症」於本文中在最寬廣意義上使用及包括所有的其病理涉及血管異常之疾病及病理病況，諸如 (例如)動脈粥樣硬化斑塊形成(包括穩定或不穩定/易損斑塊)、動脈粥樣硬化、動脈硬化、小動脈硬化、及提高的全身性脂多糖(LPS)暴露。該術語另外包括自抑制動脈粥樣硬化斑塊之形成獲益之疾病及病理病況。心血管疾病包括(但不限於)冠狀動脈動脈動脈粥樣硬化、冠狀微血管疾病、中風、頸動脈疾病、外周動脈疾病、缺血、冠狀動脈疾病(CAD)、急性冠狀症候群(ACS)、冠心病(CHD)、與CAD及CHD相關之病況、腦血管疾病、外周血管疾病、動脈瘤、血管炎、靜脈栓塞、糖尿病，及代謝症候群、慢性腎病、於缺血再灌注、心肺繞道後之遠端組織損傷。該群組中明確地包含與其發生、發展、或進展可藉由抑制動脈粥樣硬化斑塊形成控制者相關聯之所有心血管疾病。
術語「心血管病況」於本文中在最寬廣意義上使用及包括所有的其病理涉及動脈粥樣硬化斑塊形成(包括穩定或不穩定/易損斑塊)、動脈粥樣硬化、動脈硬化、小動脈硬化、及提高的全身性脂多糖(LPS)暴露之心血管病況及疾病。該群組中明確地包含所有的與動脈粥樣硬化斑塊形成相關聯之心血管病況及疾病，其發生、發展、或進展可藉由抑制動脈粥樣硬化斑塊形成控制。該術語明確地包括自抑制動脈粥樣硬化斑塊之形成獲益之疾病及病理病況。心血管病況包括(但不限於)冠狀動脈動脈粥樣硬化、冠狀微血管疾病、中風、頸動脈疾病、外周動脈疾病、缺血、冠狀動脈疾病(CAD)、冠心病(CHD)、與CAD及CHD相關聯之病況、與腦血管疾病相關聯之腦血管疾病及病況、與外周血管疾病相關聯之外周血管疾病及病況、動脈瘤、血管炎、靜脈栓塞、糖尿病、及代謝症候群、慢性腎病、於缺血再灌注、及心肺繞道後之遠端組織損傷。「與腦血管疾病相關聯之病況」如本文所用包括(例如)暫時性腦缺血(TIA)及中風。「與外周血管疾病相關聯之病況」如本文所用包括(例如)跛行。該群組明確地包含與其發生、發展、或進展可藉由抑制動脈粥樣硬化斑塊形成控制者相關聯之 所有心血管疾病及病況。
動脈粥樣硬化斑塊形成可因對表徵係源自腸微生物相之全身性脂多糖(LPS)水平之增加及腸黏膜屏障中功能完整性之損失之代謝內毒素血症之先天免疫反應之結果而發生。對內毒素血症之先天免疫反應會導致造成斑塊形成之低度慢性發炎。
術語「代謝症候群」於本文中在最寬廣意義上使用。代謝症候群包括成年個體中包含以下五種特徵中至少三種之若干種代謝風險因子之共同發生：腹部肥胖，其可為(例如)男性中大於或等於90cm及女性中大於或等於80cm之腰圍；可為(例如)大於或等於150mg/dL之增加的血清三酸甘油酯、或針對於增加的三酸甘油酯之藥物治療；可為(例如)在男性中低於40mg/dL及在女性中低於50mg/dL之減低的血清HDL膽固醇水平、或針對於低HDL膽固醇之藥物治療；可為(例如)大於130mmHg之收縮壓及大於85mmHg之舒張壓之高血壓、或針對於高血壓之藥物治療；及可為(例如)大於或等於100mg/dL之增加的空腹血漿葡萄糖、針對於增加的葡萄糖、或先前已經確診之2型糖尿病之藥物治療。亦可參見Meigs，the Metabolic Syndrome(Insulin Resistance Syndrome or Syndrome X)，http：//www.uptodate.com/contents/the-metabolic-syndrome-insulin-resistance-syndrome-or-syndrome-x，其揭示內容因此係以引用的方式併入本文中。
對於16歲以上兒童，可使用以上針對於成人之標準。對於10至16歲之兒童，代謝症候群包括個體中包含以下五種特徵中至少三種之若干種代謝風險因子之共同發生：腹部肥胖，其可為(例如)大於90個百分點之腰圍；可為(例如)大於或等於110mg/dL超過95個百分點之增加的血清三酸甘油酯、或針對於增加的三酸甘油酯之藥物治療；可為(例如)低於40mg/dL不到5個百分點之減低的血清HDL膽固醇水平、 或針對於低HDL膽固醇之藥物治療；可為(例如)大於130mmHg之收縮壓及大於85mmHg之舒張壓超過90個百分點之高血壓、或針對於高血壓之藥物治療；及可為(例如)大於或等於100mg/dL、葡萄糖耐受不良之增加的空腹血漿葡萄糖、針對於增加的葡萄糖、或先前已經確診之2型糖尿病之藥物治療。
一般而言，共同發生於代謝症候群中之該等風險因子包括肥胖(諸如腹部肥胖)、高血糖症、血脂異常、胰島素抗性、及/或高血壓。所有該等風險因子會促進動脈粥樣硬化心血管疾病、糖尿病、或二者之發展。代謝症候群亦可表現出慢性脂肪組織發炎之特徵。
可認為代謝症候群是促發炎、血栓前狀態，及可與C-反應性蛋白質、IL-6、LPS、及纖維蛋白溶酶原活化抑制劑1中一或多者之增加的濃度相關聯；該等標記物可與後來發展出動脈粥樣硬化心血管疾病、糖尿病、或二者之增加的風險相關聯。
代謝症候群可與包括以下中之一或多者之若干種與肥胖相關之疾病相關聯：合併脂肪變性、纖維化、及硬化之脂肪肝病、肝細胞及肝內膽管癌、慢性腎病、多囊性卵巢症候群、包括阻塞型睡眠窒息症之睡眠呼吸障礙、及高尿酸血症及痛風。
術語「與胰島素相關之疾病」包含表徵係葡萄糖耐受不良之疾病或病況。於一個實施例中，該與胰島素相關之疾病為糖尿病，包括(但不限於)I型(胰島素依賴型糖尿病或IDDM)、II型(非胰島素依賴型糖尿病或NIDDM)糖尿病、妊娠性糖尿病、及將獲益於可刺激胰島素分泌之藥物之任何其他疾病。於另一個實施例中，該與胰島素相關之疾病之特徵係胰島素抗性。
術語「敗血症」在其最寬廣意義上使用及可包含因嚴重感染引起之全身性發炎狀態。敗血症可能因免疫系統對血液、泌尿道、肺、皮膚、或其他組織中重度感染(最常見係細菌，然亦可係真菌、病 毒、及寄生菌)反應而引起。
術語「急性內毒素血症」在其最寬廣意義上使用及可包含增加的血漿細菌脂多糖(LPS)之病況。急性內毒素血症反過來會導致敗血症。全身性循環中增加的LPS將誘發低度慢性發炎，從而活化內源性保護宿主反應以提高血漿脂質，以致在慢性病況中造成飲食誘導性肥胖、胰島素抗性及動脈粥樣硬化、及最終CVD事件。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指嘗試改變所治療個體之自然病程之臨床干預，及可針對於預防性投藥或在臨床病理病程期間進行。治療之期望效應包括(但不限於)防止疾病之出現或復發，緩解症狀，消除疾病之任何直接或間接病理結果，預防轉移，減低疾病進展之速率，改善或減輕疾病狀態，及緩解或改善預後。。
例如，就IBD而言，「治療」可係指發展出IBD之可能性之減低、發展出IBD之速率之減低及疾病之嚴重度之減低。作為另一個實例，就動脈粥樣硬化斑塊形成而言，「治療」可係指發展出動脈粥樣硬化斑塊沉積之可能性之減低、發展出沉積之速率之減低、現有的沉積之數目或尺寸之減低、或斑塊穩定性之增加。需要治療之其等包括已經患有該疾病之其等以及意欲預防該疾病之其等。治療之期望的效應包括(但不限於)預防疾病之發生或復發，緩解症狀，消除疾病之任何直接或間接病理結果，預防疾病，減低疾病進展之速率，改善或減輕疾病狀態，及導致緩解或經改良之預後。於一些實施例中，本發明之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係用於延遲疾病之發展或減慢疾病之進展。
於某些實施例中，在預防或治療心血管病況上下文中之「有需要之個體」係指確診患有心血管疾病或心血管病症(CVD)或代謝症候群或展現一或多種與CVD或代謝症候群相關聯之病況之個體、過去曾 確診患有或展現一或多種與CVD或代謝症候群相關聯之病況之個體、或被認為已於未來因遺傳性或環境因素而處在發展出CVD或代謝症候群或一或多種與CVD或代謝症候群相關聯之病況風險之個體。因此，於某些實施例中，有需要之個體可為展現CVD或代謝症候群或與CVD或代謝症候群相關聯之病況之個體或已在過去展現CVD或代謝症候群或與CVD或代謝症候群相關聯之病況或已被認為未來處在發展出CVD或代謝症候群或與CVD或代謝症候群相關聯之病況風險之個體。
於心血管疾病或病況之治療中，治療劑可直接改變免疫反應之分量之反應強度，或使得疾病更容易藉由例如抗生素、抗真菌劑、抗發炎藥劑、化學治療劑等等之其他治療劑治療。於動脈疾病之治療中，治療可(例如)阻礙或減慢疾病之進展。因此，動脈疾病之治療明確地包括阻礙、抑制、或減慢病況之發展、或從病況之一種狀態至另一種較晚期狀態、或成為較嚴重相關病況之進展。
疾病或病況之「病理」包括破壞個體健康之所有症候群。就心血管疾病或病況而言，此包括(但不限於)動脈粥樣硬化斑塊形成(包括穩定或不穩定/易損斑塊)、動脈粥樣硬化、動脈硬化、小動脈硬化、及增加的全身性脂多糖(LPS)暴露。
「緩解(alleviation)」、「緩解(alleviating)」或其等效物係指治療性治療及預防性(prophylactic/preventative)措施，其中目標係改良、阻礙、減慢(減少)、減低或抑制疾病或病況，例如，動脈粥樣硬化斑塊之形式。需要治療之其等包括已經患有疾病或病況之其等以及容易患有疾病或病況之其等或意欲預防疾病或病況之其等。
「慢性」投藥係指一或多種藥劑與短期模式相反地以連續模式投與，以維持初始治療效應達一段延長的時間。
「斷續性」投藥為在無中斷下非連續地完成反之實際上係循環之治療。
使用術語「包裝插頁」以指習慣上包含於治療產品之市售包裝中之使用說明，其包含關於適應症、用法、劑量、投藥、組合治療、禁忌及/或關於該等治療產品之使用之警語之資訊。
相對於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」係定義為候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基相同之胺基酸殘基的百分比，在比對該等序列及引入空位(若需要)之後以達成最大序列一致性百分比，及不將任何守恆性取代視為序列一致性之部分。基於確定胺基酸序列一致性百分比目的之比對可以在本技藝技術內之多種方法達成，例如，使用公開可用電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技藝者可測得用於比對序列之適宜參數，包括於所比較序列之全長上達成最大比對所需之任何演算法。然而，為達成本文之目的，利用序列比較電腦程式ALIGN-2獲得胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由Genentech,Inc.創造，及原始碼由在美國版權局(U.S.Copyright Office)(華盛頓，20559)中之使用者文件申請，於該處ALIGN-2序列比較電腦程式以美國版權註冊號TXU510087註冊。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.，加州南聖弗朗西斯科公開取得，或可藉由原始碼編譯。ALIGN-2程式應在包括數位UNIX V4.0D之UNIX操作系統上經編譯供使用。藉由ALIGN-2程式設定所有序列比較參數且不改變。
在將ALIGN-2用於胺基酸序列比較之情況中，可如下計算得所給胺基酸序列A相對、與、或對比所給胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(此可替代地寫為具有或包含相對、與、或對比所給胺基酸序列B之特定胺基酸序列一致性%之所給胺基酸序列A)：100乘以分率X/Y
其中X為依照序列比對程式ALIGN-2在A及B之程式比對中以相同匹配得分之胺基酸殘基的個數，及其中Y為B中胺基酸殘基的總數。 應瞭解其中胺基酸序列A之長度與胺基酸序列B之長度不相等，A相對B之胺基酸序列一致性%將不等於B相對A之胺基酸序列一致性%。除非另作明確敘述，否則用於本文中之所有%胺基酸序列一致性值係如上一段落中所述使用ALIGN-2電腦程式獲得。作為使用該方法計算得胺基酸序列一致性%之其他實例，下方展現如何計算得命名為「比較蛋白質」或「參照蛋白質」之胺基酸序列相對胺基酸序列命名為「IL-22」之胺基酸序列一致性%，其中「IL-22」表示所述IL-22多肽之胺基酸序列，「比較蛋白質」表示所述「IL-22」多肽所比較的多肽之胺基酸序列，及「X」、「Y」及「Z」各自表示不同的胺基酸殘基。
作為使用該方法計算得胺基酸序列一致性%之實例，表1及2顯示如何計算得命名為「比較蛋白質」之胺基酸序列相對命名為「IL-22」之胺基酸序列之胺基酸序列一致性%，其中「IL-22」表示所述IL-22多肽之胺基酸序列，「比較蛋白質」表示所述「IL-22」多肽所比較的多肽之胺基酸序列，及「X」、「Y」及「Z」各自表示不同的胺基酸殘基。
IL-22 XXXXXXXXXXXXXXX (長度=15個胺基酸)
參照蛋白質 XXXXXYYYYYYY (長度=12個胺基酸)
胺基酸序列一致性%=(兩個多肽序列間相同匹配胺基酸殘基之個數)除以(IL-22多肽之胺基酸殘基之總數)=5除以15=33.3%
IL-22 XXXXXXXXXX (長度=10個胺基酸)
參照蛋白質 XXXXXYYYYYYZZYZ (長度=15個胺基酸)
胺基酸序列一致性%=(兩個多肽序列間相同匹配胺基酸殘基之個數)除以(IL-22多肽之胺基酸殘基之總數)=5除以10=50%
熟習此項技術者可輕易地確定雜交反應之「嚴苛性」，及一般為取決於探針長度、洗滌溫度、及鹽濃度之經驗計算。一般而言，較長的探針需求較高溫度達成適當退火，而較短的探針需求較低的溫度。雜交一般係取決於變性DNA可在當互補股存在於低於其熔化溫度之環境時再退火之能力。探針及可雜交序列之間之所期望同源程度越高，可使用的相對溫度越高。結果，其依循較高的相對溫度將容易使得反應條件更為嚴苛，而較低的溫度較不易作成此。關於其他詳細內容及雜交反應之嚴苛性之解釋，請參見Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，Wiley Interscience Publishers，(1995)。
「嚴苛條件」或「高嚴苛條件」如本文中定義可依下述之其等進行識別：(1)洗滌採用低離子強度及高溫度，例如，0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉，於5OC下；(2)於雜交期間使用變性劑，諸如甲醯胺，例如，50%(v/v)甲醯胺與具有750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉之0.1%牛血清白蛋白/0.1%菲科爾(Ficoll)/0.1%聚乙烯吡咯啶酮/50mM磷酸鈉緩衝液，pH6.5，於42℃下；或(3)在溶液中之過夜雜交，於42℃下，使用50%甲醯胺、5×SSC(0.75M NaCl、0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5×丹哈德溶液(Denhardt's solution)、經過音波處理之鮭魚精子DNA(50μg/ml)、0.1% SDS、及10%聚葡萄糖硫酸鹽，利用於42℃在0.2×SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)中之10分鐘的洗滌，接著，利用55℃下由包含EDTA之0.1×SSC組成之10分鐘的高嚴苛洗滌。
「中等嚴苛條件」可依Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual.紐約：冷泉港實驗室出版社，1989所述進行識別，及包括洗滌溶液及相比上述其等不嚴苛之雜交條件(例如，溫度、離子強度、及%SDS)之使用。中等嚴苛條件之一個實例為37℃下在包含：20%甲醯胺、5×SSC(150mM NaCl、15mM檸檬酸三鈉)、 50mM磷酸鈉(pH 7.6)、5×丹哈德溶液、10%聚葡萄糖硫酸鹽、及20mg/ml變性剪切鮭魚精子DNA之溶液中培養過夜，接著於約37至50℃下在1×SSC中洗滌過濾器。熟習此項技術者當知曉如何調整溫度、離子強度等等，若需要，則調適諸如探針長度及類似之因素。
術語「激動劑」在最寬廣意義上使用及包括部分或完全模擬IL-22多肽之生物活性之任何分子。「激動劑」亦包含刺激編碼多肽之mRNA之轉錄或轉譯之分子。
適宜之激動劑分子包括(例如)激動劑抗體或抗體片段；天然多肽；天然多肽之片段或胺基酸序列變化形式；肽；反義體寡核苷酸；小有機分子；及編碼多肽激動劑或抗體之核酸。所提及之「一種」激動劑包含單一激動劑或兩種或更多種不同激動劑之組合。
術語「IL-22激動劑」在最寬廣意義上使用，及包括模擬天然序列IL-22多肽之定性生物活性(如上文定義)之任何分子。IL-22激動劑明確地包括IL-22-Fc或IL-22 Ig多肽(免疫黏著素)，然亦包括模擬至少一種IL-22生物活性之小分子。較佳地，該生物活性為IL-22受體之結合、與IL-22BP之相互作用、先天免疫反應路徑之促進，或就心血管疾病或病況而言，以影響動脈粥樣硬化斑塊之形成，尤其係抑制動脈粥樣硬化斑塊形成之形成。可藉由熟習此項技術者已知的任何適宜造影方法來評估斑塊形成之抑制。
IL-22R1與其他蛋白質配對以形成異型二聚物作為受體，而成為特定IL-10家族成員。請參見Quyang等人，2011(前述)。因此，於某些實施例中，IL-22激動劑可包括IL-22受體激動劑，包括與IL-22 R1結合並觸發IL-22 R1之下游信號傳導之細胞因子(或融合蛋白質或其激動劑)。於某些實施例中，IL-22激動劑包括IL-22R1激動劑，包括(但不限於)抗-IL-22R1激動劑抗體；IL-20激動劑，包括(但不限於)IL-20多肽或IL-20 Fc融合蛋白質；及IL-24激動劑，包括(但不限於)IL-24多 肽或IL-24融合蛋白質。於某些其他實施例中，IL-22R1激動劑包括IL-19激動劑，包括(但不限於)IL-19多肽或IL-19 Fc融合蛋白質；及IL-26激動劑，包括(但不限於)IL-26多肽或IL-26 Fc融合蛋白質。本文中提供用於IL-19(GenBank寄存編號AAG16755.1，SEQ ID NO：77)、IL-20(GenBank寄存編號AAH69311.1，SEQ ID NO：78)、IL-24(GenBank寄存編號AAH09681.1，SEQ ID NO：79)及IL-26(GenBank寄存編號NP_060872.1，SEQ ID NO：80)之示例性序列。於某些實施例中，IL-19多肽包含SEQ ID NO：77之胺基酸序列或不具有信號肽之成熟蛋白質。於某些其他實施例中，IL-20多肽包含SEQ ID NO：78之胺基酸序列或不具有信號肽之成熟蛋白質。又於其他實施例中，IL-24多肽包含SEQ ID NO：79之胺基酸序列或不具有信號肽之成熟蛋白質。於某些其他實施例中，IL-26多肽包含SEQ ID NO：80之胺基酸序列或不具有信號肽之成熟蛋白質。
「小分子」在本文中定義成具有低於約600、較佳低於約1000道耳頓之分子量。
「激動劑抗體」如本文所用為部分或完全模擬IL-22多肽之生物活性之抗體。
術語「醫藥調配物」或「醫藥組合物」係指呈此種使得包含於其中之活性成分之生物活性具有效性之形式、及不含其他的對將投與該調配物之個體具有不可接受毒性之組分之製劑。
「醫藥上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除了活性成分之外對個體無毒之組分。醫藥上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、稀釋劑、穩定劑、或防腐劑。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈之涉及抗體與抗原結合之域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)一般具有類似的結構，其中各個域包含四個守恆性架構區(FR)及三個 超變區(HVR)。(參見(例如)Kindt等人，Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91頁(2007)。)單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。另外，可分別使用VH或VL域從與抗原結合之抗體單離得與特定抗原結合之抗體，以篩選出互補VL或VH域庫。請參見(例如)Portolano等人，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352：624-628(1991)。
術語「載體」如本文所用係指可繁殖其所連接的另一核酸之核酸分子。該術語包括呈自複製核酸結構之載體及併入已引入其之宿主細胞的基因組中之載體。某些載體可引導其以操作方式所連接的核酸之表現。該等載體於本文中稱為「表現載體」。
II．組合物及方法
於一個態樣中，本發明係部分地基於包含可藉由增加IL-22活性或信號傳導改善IL-22相關疾病或病症之治療劑之組合物。於某些實施例中，提供與IL-22受體結合並活化IL-22受體之IL-22多肽及IL-22 Fc融合蛋白質。本發明之IL-22 Fc融合蛋白質係有用的，例如，用於診斷或治療諸如發炎性腸病之IL-22相關疾病，及用於加速傷口癒合。此外，亦提供用於治療其他的例如心血管病況、代謝症候群之IL-22相關疾病及用於加速糖尿病性傷口癒合之IL-22多肽及IL-22 Fc融合蛋白質。
A.示例性IL-2多肽
IL-22多肽如本文中所用包括包含包含SEQ ID NO：71之胺基酸序列之多肽(具有內源性IL-22前導序列之人類IL-22)(參見圖31)、或包含具有相對SEQ ID NO：71至少95%序列一致性之胺基酸序列之多肽。於某些實施例中，IL-22多肽包含包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列(不具有前導序列之人類IL-22)或包含具有至少95%序列一致性之胺基酸序列之多肽。於某些實施例中，IL-22多肽包含包含SEQ ID NO：4之胺基 酸序列。於某些實施例中，IL-22多肽不包含Fc融合。
天然IL-22分子及其核酸及多肽序列之製造可藉由熟習此項技術者已知的方法達成。例如，可藉由培養經包含IL-22核酸之載體轉形或轉染之細胞製得IL-22多肽。當然預期可使用本技術中熟知的替代方法以製造IL-22。例如，IL-22序列、或其部分可藉由直接肽合成利用固相技術製得(參見(例如)Stewart等人，1969，Solid-Phase Peptide Synthesis，W.H.Freeman Co.，加州聖弗朗西斯科(1969)；Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，1963，85：2149-2154)。可利用人工技術或藉由自動化進行活體外蛋白質合成。自動化合成可例如利用Applied Biosystems肽合成儀(加州福斯特市)使用製造商使用說明來達成。IL-22之各種不同部分可分開地經化學合成及合併使用化學或酵素方法以製得全長IL-22。
IL-22變體可藉由引入適宜之核苷酸改變至編碼天然序列IL-22多肽之DNA中、或藉由合成期望之IL-22多肽製得。熟習此項技術者當明瞭胺基酸改變會改變IL-22之轉譯後製程，諸如，改變糖基化位點之個數或位置或改變膜定準特性。
可(例如)利用例如述於美國專利案第5,364,934號中之針對於守恆性及非守恆性突變之任何技術及指示進行本文所述天然序列IL-22多肽中之改變。改變可為導致其胺基酸序列相較對應天然序列或變體IL-22改變之一或多個編碼天然序列或變體IL-22之密碼子之取代、缺失或插入。視情況，該改變係在天然序列IL-22多肽之一或多個域中至少一個胺基酸改由任何其他胺基酸取代。可藉由在IL-22之序列與已知具同源性之蛋白質分子之序列間作比較及減少具高同源性之區域中所作出的胺基酸序列改變的處數至最少，發現決定可插入、取代或缺失哪些胺基酸殘基而不會不利地影響所欲活性之原則。胺基酸取代可係一個胺基酸改由另一個具有類似結構及/或化學性質之胺基酸取 代，諸如，白胺酸改由絲胺酸取代，亦即，守恆性胺基酸取代之結果。插入或缺失可視需要在1至5個胺基酸範圍內。可藉由系統地進行序列中胺基酸之插入、缺失或取代及在述於下述實例中之活體外檢定中測試所得變體之活性來確定容許的變化。
於特定實施例中，所述的守恆性取代顯示於表1中之標題較佳之取代下方。假若該等取代導致生物活性改變，則引入表1中命名為示例性取代、或如下文提及胺基酸類別時進一步論述之較多實質的改變及將產物進行篩選。
可利用相關技術中已知的方法，諸如寡核苷酸介導(定點)突變、丙胺酸掃描、及PCR突變製得該等變體。可於cloned DNA上進行定點突變(Carter等人，1986，Nucl.Acids Res，13：4331；Zoller等人，1987，Nucl.Acids Res.，10：6487)、序列盒突變(Wells等人，1985，Gene，34：315)、限制性選擇突變(Wells等人，1986，Philos.Trans.R.Soc.London SerA，317：415)或其他已知的技術以製得IL-22變體DNA。
本文亦提供本發明IL-22多肽之片段。該等片段可在N-端或C-端處截短，或可(例如)相較於全長天然蛋白質缺乏內部殘基。某些片段缺乏對於本發明IL-22多肽之所欲生物活性而言為非必需的胺基酸殘基。因此，於某些實施例中，IL-22多肽之片段係具生物活性。於某些實施例中，全長IL-22之片段缺乏N-端信號肽序列。
天然序列及變體IL-22多肽之共價修飾包含於本發明之範疇中。共價修飾之一種類型包括使IL-22之標靶胺基酸殘基與可與所選擇側鏈或IL-22多肽之N-或C-端殘基反應之有機衍生劑反應。藉由雙官能試劑之衍生化係有用的，例如，用於交聯IL-22至(例如)用於純化抗-IL-22抗體之方法之非水溶性支撐基質或表面。常用的交聯劑包括(例如)1,1-雙(重氮-乙醯基)-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯 (例如，與4-疊氮基水楊酸之酯)、同雙官能醯亞胺酯(包括二琥珀醯亞胺酯，諸如3,3'-二硫雙(丙酸琥珀醯亞胺酯))、雙官能馬來醯亞胺(諸如雙-N-馬來醯亞胺基-1,8-辛烷)及諸如3-[(對-疊氮基苯基)二硫基]丙醯亞胺甲酯之試劑。
其他修飾包括麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基分別脫醯胺成對應麩胺醯基及天冬胺醯基之脫醯胺，脯胺酸及離胺酸之羥基化，絲胺醯基或蘇胺醯基之羥基之磷酸化，離胺酸、精胺酸、及組胺酸側鏈之α-胺基之甲基化(T.E.Creighton，1983，Proteins：Structure and Molecular Properties，W.H.Freeman & Co.，聖弗朗西斯科，第79至86i頁)，N-端胺之乙醯化，及任何C-端羧基之醯胺化。
包含於本發明範疇中之IL-22多肽之共價修飾的另一種類型包括改變多肽之天然糖基化圖。「改變天然糖基化圖」基於本文目的意圖意指缺失一或多個天然序列IL-22中存在之碳水化合物部分、及/或新增一或多個非存於天然序列IL-22中之糖基化位點、及/或改變連接至糖基化位點之糖殘基之比率及/或組成。
多肽之糖基化通常係N-鍵聯或O-鍵聯。N-鍵聯糖基化係指使碳水化合物部分連接至天冬醯胺酸殘基之側鏈。其中X為除脯胺酸外之任何胺基酸之三肽序列天冬醯胺酸-X-絲胺酸及天冬醯胺酸-X-蘇胺酸為用於碳水化合物部分連接至天冬醯胺酸側鏈之酵素連接之識別序列。O-鍵聯糖基化意指糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖、或木糖中之一者連接至羥基胺基酸(最通常係絲胺酸或蘇胺酸)之連接，然而，5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸亦可包含於O-鍵聯糖基化中。新增糖基化位點至IL-22多肽，可藉由改變胺基酸序列達成。該改變可(例如)藉由針對於天然序列IL-22新增一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基、或由一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基取代(用於N-鍵聯糖基化位點)、或新增用於O-鍵聯糖基化之識別序列進行。IL-22胺基酸序列可視需要藉由在DNA層 級之改變來改變，特定言之係藉由使編碼IL-22多肽之DNA於預選鹼基突變，以致獲得將轉譯成所欲胺基酸之密碼子。
增加IL-22多肽上之碳水化合物部分數之另一種方法係藉由使糖苷化學或酵素偶聯至多肽。已於相關技術，例如，於1987年9月11日公開之WO 87/05330、及Aplin與Wriston，CRC Crit.Rev.Biochem.，第259至306頁(1981)中描述該等方法。
存於IL-22多肽上之碳水化合物部分之移除可經化學或酵素地或藉由編碼充當糖基化標靶之胺基酸殘基之密碼子之突變取代來達成。化學去糖基化技術為相關技術所熟知並(例如)由Hakimuddin等人，Arch.Biochem.Biophys.，259：52(1987)及Edge等人，Anal.Biochem.，118：131(1981)作出描述。多肽上碳水化合物部分之酵素裂解可藉由使用如由Thotakura等人，Meth.Enzymol.，138：350(1987)所述的多種內切-及外切糖苷酶來達成。
IL-22之共價修飾的另一種類型包括例如以述於美國專利案號4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337中之方法將IL-22多肽與例如聚乙二醇、聚丙二醇、或聚環氧烷之多種非蛋白質聚合物中之一者鍵聯。天然序列及變體IL-22亦可以形成包含融合至另一異源多肽或胺基酸序列之IL-22(包括IL-22之片段)之嵌合分子之方式修飾。
於一個實施例中，該種嵌合分子包含IL-22與提供抗-標籤抗體可選擇性地結合之抗原決定基的標籤多肽之融合。抗原決定基標籤一般係置於IL-22多肽之胺基-或羧基-端。可使用抗標籤多肽之抗體檢測到該等IL-22多肽之抗原決定基標籤形式之存在。此外，抗原決定基標籤之提供使得IL-22多肽可輕易地使用抗-標籤抗體或另一種與抗原決定基標籤結合之親和基質藉由親和純化來純化。相關技術中熟知各種標籤多肽及其各別抗體。實例包括聚-組胺酸(聚-his)或聚-組胺酸-甘 胺酸(聚-his-gly)標籤；flu HA標籤多肽及其抗體12CA5(Field等人，1988，Mol.Cell.Biol.，8：2159-2165)；c-myc標籤及至其之8F9、3C7、6E10、G4、及9E10抗體(Evan等人，1985，Molecular and Cellular Biology，5：3610-3616)；及單純皰疹病毒糖蛋白D(gD)標籤及其抗體(Paborsky等人，1990，Protein Engineering，3(6)：547-553)。其他標籤多肽包括旗標-肽(Hopp等人，1988，BioTechnology，6：1204-1210)；KT3抗原決定基肽(Martin等人，1992，Science，255：192-194)；正交-微管蛋白抗原決定基肽(Skinner等人，1991，J.Biol.Chem.，266：15163-15166)；及T7基因10蛋白質抗原決定基肽標籤(Lutz-Freyermuth等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：6393-6397)。
於另一個實施例中，嵌合分子可包含IL-22多肽或其片段與免疫球蛋白或免疫球蛋白之特定區之融合。就嵌合分子之二價形式而言，該種融合可係融合至IgG分子之Fc區。該等融合多肽為異源蛋白質(「黏著素」)之結合特異性結合免疫球蛋白恆定域之效應子功能之抗體類分子，及通常稱之為免疫黏著素。結構上言之，免疫黏著素包含IL-22、或其變體之胺基酸序列、及免疫球蛋白恆定域序列之融合。免疫黏著素分子之黏著部分通常為包含至少受體或配體之結合位點之鄰接胺基酸序列。免疫黏著素中之免疫球蛋白恆定域序列可自任何免疫球蛋白，諸如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4子類型、IgA(包括IgA1及IgA2)、IgE、IgD或IgM獲得。於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質展現改良之效應子活性。
IL-22多肽、或其片段可(例如)稠合至免疫球蛋白重鏈恆定區序列以製得IL-22-Ig融合蛋白質(例如，IL-22 Fc融合蛋白質)。IL-22多肽可為人類或鼠科IL-22。該免疫球蛋白重鏈恆定區序列可為人類或鼠科免疫球蛋白重鏈恆定區序列。
B.示例性IL-22 Fc融合蛋白質
於一個態樣中，本發明提供單離的IL-22融合蛋白質。於某些實施例中，IL-22融合蛋白質與IL-22受體結合並誘導IL-22受體活性或信號傳導且/或為IL-22受體活性之激動劑。
於另一個態樣中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：4之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列一致性之多肽。於其他實施例中，包含具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列一致性之多肽之IL-22 Fc融合蛋白質相對參照序列包含取代(例如，守恆性取代)、插入、或缺失，但包含該序列之IL-22 Fc融合蛋白質保留與IL-22受體結合之能力。於某些實施例中，SEQ ID NO：8、10、12、14、24或26中總計1至10個胺基酸經過取代、插入及/或缺失。於某些實施例中，取代、插入、或缺失發生在IL22外區域中(亦即，發生在Fc中)。於某些特定實施例中，缺失Fc之C-端Lys殘基。於某些其他實施例中，同時缺失Fc之C-端Gly及Lys殘基。
於某些實施例中，提供具有一或多處胺基酸取代之IL-22 Fc融合蛋白質變體。守恆性取代顯示於表1中之標題「較佳之取代」下方。更多實質的改變提供於表1中之標題「示例性取代」下方，及如下文在提及胺基酸側鏈類別時作進一步論述。胺基酸取代可引入IL-22 Fc融合蛋白質中及產物基於所欲活性例如經保留/改良之IL-22受體結合、經減低之免疫原性、或經改良之IL-22受體信號傳導進行篩選。
表1
Figure 103109979-A0202-12-0066-1
可根據常見側鏈性質將胺基酸分組：(1)疏水性：正亮胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)對鏈定向產生影響之胺基酸：Gly、Pro；(6)芳香性：Trp、Tyr、Phe。
非守恆性取代將必需針對於一種該等類別之成員交換而成為另一種類別。
一種用於識別蛋白質之可靶向突變誘發之殘基或區之有用的方 法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如由Cunningham與Wells(1989)Science，244：1081-1085所述。於該方法中，靶殘基(例如，帶電荷的殘基，諸如arg、asp、his、lys、及glu)之殘基或基團經識別及經中性或帶負電荷的胺基酸(例如，丙胺酸或聚丙胺酸)置換以確定蛋白質與其結合搭配物之相互作用是否受到影響。其他取代可引入展現對初始的取代功能性敏感之胺基酸位置之處。或者或另外，蛋白質複合物(例如，細胞因子-受體複合物)之晶體結構可用於識別蛋白質與其結合搭配物之間之接觸點。該等接觸殘基及鄰近殘基可經標靶或消除用作用於取代之候選。變體可經篩選以確定其是否包含所欲性質。
胺基酸序列插入包括長度範圍自一個殘基至包含一百個或更多個殘基之多肽之胺基-及/或羧基-端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內部插入。
a)糖基化變體
於某些實施例中，提供於本文中之Fc融合蛋白質係經改變以增加或減低融合蛋白質(特別是融合蛋白質之Fc部分)糖基化的程度。至蛋白質之糖基化位點之新增或缺失可方便地藉由改變胺基酸序列以致建立或移除一或多個糖基化位點來達成。
在融合蛋白質包含Fc區之情況下，可改變與其結合之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含大致上經N-鍵連接至Fc區之CH2域之Asn297的分支鏈、雙觸寡糖。請參見：例如，Wright等人TIBTECH 15：26-32(1997)。寡糖可包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙醯葡萄糖胺(GlcNAc)、半乳糖、及唾液酸、以及在雙觸寡糖結構之「莖」中與GlcNAc連接之岩藻糖。於一些實施例中，可在抗體或抗體之Fc區中進行寡糖之修飾以創建具有特定的經改良性質之Fc變體。
可藉由相對於如(例如)WO 2008/077546中所述藉由MALDI-TOF 質譜法測得之與Asn297或N297連接之所有糖基結構(例如，複合、雜交及高甘露糖結構)之總和計算得Asn297處糖鏈中岩藻糖的平均含量，來確定該與Fc區之CH2域連接之岩藻糖含量。Asn297係指位於Fc區中位置297(Fc區殘基之EU編號)附近之天冬醯胺酸殘基；然而，Asn297亦可位於位置297上游或下游±3個胺基酸附近，換言之，係位於位置294及300之間，此歸因於抗體中微小序列差異所致。該等岩藻糖基化變體可具有經改良之ADCC功能。請參見：例如，美國專利公開案號US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。與「去岩藻糖基化」或「岩藻糖-缺乏」抗體變體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614(2004)。可產生出去岩藻糖基化抗體之細胞系之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利申請案號US 2003/0157108 A1，Presta,L；及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其係在實例11)、及基因剔除細胞系(諸如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因FUT8剔除CHO細胞)(請參見：例如，Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.，94(4)：680-688(2006)；及W02003/085107)。
抗體變體進一步提供有(例如)於其中與抗體之Fc區連接之雙觸寡糖藉由GlcNAc二分之二分寡糖。該等抗體變體可具有經減低之岩藻糖基化及/或經改良之ADCC功能。該等抗體變體之實例述於(例 如)WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美國專利案第6,602,684號(Umana等人)；及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在與Fc區連接之寡糖中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變體。該等抗體變體可具有經改良之CDC功能。該等抗體變體述於(例如)WO 1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
b)Fc區變體
於某些實施例中，一或多種胺基酸修飾可引入本文所提供Fc融合蛋白質之Fc區中，藉此獲得Fc區變體。Fc區變體可包含在一或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如，取代)之人類Fc區序列(例如，人類IgGI、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
於某些實施例中，本發明包含具有部分但非全部效應子功能之Fc變體，此使其成為用於抗體或包含Fc區之融合蛋白質在活體內之半衰期具重要性之應用中之理想候選，然部分效應子功能(諸如補體及ADCC)係不必要或有害。可進行活體外及/或活體內細胞毒性試驗以證實CDC及/或ADCC活性之減低/缺乏。例如，可進行Fc受體(FcR)結合試驗以確保抗體或Fc缺乏FcγR結合(因此極有可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)，僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。於造血細胞上之FcR表現概述於Ravetch與Kinet，Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)第464頁的表3中。評估所述分子之ADCC活性之活體外試驗的非限制性實例述於美國專利案第5,500,362號(請參見：例如，Hellstrom,I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；5,821,337(請參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))中。或者，可利用非放射性檢定方法(請參見：例如，就 流式細胞儀而言之ACTITM非放射性細胞毒性檢定(CellTechnology,Inc.，加州福尼亞山景城)；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性檢定(Promega，威斯康辛州麥迪遜))。用於該等檢定之有用的效應子細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，所述分子之ADCC活性可例如在諸如Clynes等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)中所揭示之該動物模型之動物模型中進行活體內評估。亦可進行C1q結合檢定以證實抗體或Fc無法與C1q結合且因此缺乏CDC活性。參見：例如，WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC檢定(參見：例如，Gazzano-Santoro等人，J Immunol Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.與M.J.Glennie，Blood 103，2738-2743(2004))。亦可利用相關技術中已知的方法進行FcRn結合及活體內清除率/半衰期之測定(參見：例如，Petkova,S.B.等人，Int'l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。
具有減低之效應子功能之抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329(美國專利案第6,737,056號)中一或多者之取代之其等。該等Fc突變體包括在兩個或更多個該等胺基酸位置265、269、270、297及327具有取代之Fc突變體，包括所謂的具有殘基265及297取代成丙胺酸之取代之「DANA」Fc突變體(美國專利案第7,332,581號)。
描述具有增進或消除之與FcR之結合力之某些抗體或Fc變體。(請參見：例如，美國專利案第6,737,056號；WO 2004/056312、及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。
於某些實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質包含具有一或多處減低ADCC之胺基酸取代(例如，在Fc區之位置297(殘基之EU編號)之可移除N-糖基化位點然仍保留FcRn結合活性之取代)之Fc變體。
於一些實施例中，例如如美國專利案第6,194,551號、WO 99/51642、及Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所述在Fc區中進行改變以獲致消除之C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。
具有延長之半衰期及增進之促使母體IgG轉移至胎兒之結合至新生兒Fc受體(FcRn)之結合力(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994))的抗體述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。該等抗體包含其中具有一或多處可增進Fc區結合至FcRn之結合之取代之Fc區。該等Fc變體包括彼等在一或多個以下Fc區殘基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434具有取代(例如，Fc區殘基434之取代)者(美國專利案第7,371,826號)。
關於Fc區變體之其他實例，亦可參見Duncan與Winter，Nature 322：738-40(1988)；美國專利案第5,648,260號；美國專利案第5,624,821號；及WO 94/29351。
c)經半胱胺酸工程改造之變體
某些實施例中，可能期望建立經半胱胺酸工程之Fc融合蛋白質，其中抗體之Fc區之一或多個殘基係經半胱胺酸殘基取代。於特定的實施例中，殘基之取代發生在Fc之可及位點。藉由以半胱胺酸取代該等殘基，反應性硫醇基因而定位於Fc之可及位點及可用於將Fc與諸如藥物部分或連接子-藥物部分之其他部分結合，以建立免疫偶聯物，如本文之進一步論述。例如，重鏈Fc區之S400(EU編號)可改由半胱胺酸取代。請參見(例如)美國專利案第7,521,541號。
C．重組方法及組合物
可藉由常規重組方法，例如，培養經包含編碼IL-22多肽、其片 段或變體之核酸之載體、或包含該載體之融合蛋白質轉形或轉染之細胞，製得IL-22多肽。亦提供包含任何該載體之宿主細胞。舉例言之，宿主細胞可為CHO細胞、大腸桿菌、或酵母。進一步提供一種製造任何本文所述多肽之方法及該方法包括在適於表現所欲多肽之條件下培養宿主細胞及自細胞培養物回收所欲多肽。
宿主細胞係經本文針對於IL-22多肽生成所述之表現或選殖載體轉染或轉形及培養於經適宜改質達成誘導啟動子、選擇轉形體、或擴增編碼所欲序列之基因之習知營養培養基中。可由熟習此項技術者在不需過度實驗下來選擇諸如培養基、溫度、pH及類似之培養條件。一般而言，用於最大化細胞培養之生產率之原理、方案、及實際技術可參見Mammalian Cell Biotechnology：A Practical Approach，M.Butler編輯(IRL Press，1991)及Sambrook等人(前述)。
熟習此項技術者已知轉染之方法，例如，藉由CaPO4及電穿孔。取決於使用的宿主細胞，利用適宜之標準技術對該等細胞進行轉形。如Sambrook等人(前述)中所述之利用氯化鈣之鈣處理、或電穿孔一般係用於原核生物或其他的包含實質的細胞壁屏障之細胞。藉由農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)之感染係用於特定植物細胞之轉形，如由Shaw等人，Gene，23：315(1983)及1989年6月29日公開之WO 89/05859所述。對於不具有該等細胞壁之哺乳動物細胞，可利用Graham與van der Eb，Virology，52：456-457(1978)之磷酸鈣沉澱方法。哺乳動物細胞宿主系統轉形之一般態樣已述於美國專利案第4,399,216號中。通常依照Van Solingen等人，J.Bact，130：946(1977)及Hsiao等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，76：3829(1979)之方法進行形成酵母之轉形。然而，亦可利用其他的(諸如)藉由細胞核微量注射、電穿孔、細菌原生質體與完整細胞之融合、或聚陽離子(例如，聚凝膠、聚鳥胺酸)將DNA引入至細胞中之方法。關於哺乳動物細胞轉形之各種不同技術， 請參見Keown等人，Methods in Enzymology，185：527-537(1990)及Mansour等人，Nature，336：348-352(1988)。
可從培養基或宿主細胞溶胞物回收本發明之重組表現多肽。以下程序為適宜純化程序之示例：藉由於離子交換柱上分餾；乙醇沉澱；反相HPLC；於矽膠或諸如DEAE之陽離子交換樹脂上之層析；聚焦層析；SDS-PAGE；硫酸銨沉澱；使用(例如)Sephadex G-75之凝膠過濾；移去諸如IgG之污染物之蛋白質A瓊脂糖凝膠管柱；及可結合本發明多肽之抗原決定基標籤形式之金屬螯合管柱。可採用蛋白質純化之多種方法及該等方法均為相關技術已知並述於(例如)Deutscher，Methods in Enzymology，182(1990)；Scopes，Protein Purification：Principles and Practice，Springer-Verlag，紐約(1982)中。所選擇的該(等)純化步驟將(例如)取決於所採用的生成方法及所製得的特定多肽之性質。
可採用相關技術中熟知的替代方法來製得本發明之多肽。例如，可藉由直接肽合成利用固相技術(參見：例如，Stewart等人，1969，Solid-Phase Peptide Synthesis，W.H.Freeman Co.，加州聖弗朗西斯科；Merrifield，J.1963,Am.Chem.Soc.，85：2149-2154)製得編碼多肽或其部分之序列。利用人工技術或藉由自動化進行活體外蛋白質合成。自動化合成可例如利用Applied Biosystems肽合成儀(加州福斯特市)使用製造商使用說明來達成。本發明之多肽或其一部分之各種不同部分可分開地經化學合成及合併使用化學或酵素方法以製得全長多肽或其部分。
於其他實施例中，本發明提供包含任何本文所述之融合至異源多肽或胺基酸序列之多肽之嵌合分子。該等嵌合分子之實例包括(但不限於)任何本文所述之融合至抗原決定基標籤序列或免疫球蛋白之Fc區之多肽。
用於選殖或表現本文載體中DNA之適宜宿主細胞包括原核生物、酵母、或高等真核生物細胞。適宜之原核生物包括(但不限於)真細菌，諸如革蘭氏陰性(Gram-negative)或革蘭氏陽性(Gram-positive)生物體，例如，腸桿菌科(諸如大腸桿菌)。可公開地取得多種大腸桿菌菌株，諸如，大腸桿菌K12菌株MM294(ATCC 31,446)；大腸桿菌X1776(ATCC 31,537)；大腸桿菌菌株W3110(ATCC 27,325)及K5 772(ATCC 53,635)。
除了原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為用於IL-22-編碼載體之適宜選殖或表現宿主。釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)為常用的低等真核宿主微生物。
用於糖基化-IL-22之表現之適宜宿主細胞衍生自多細胞生物體。無脊椎動物細胞之實例包括諸如果蠅(Drosophila)S2及草地貪夜蛾(Spodoptera)Sf9之昆蟲細胞、及植物細胞。有用哺乳動物宿主細胞系之實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)及COS細胞。較具體的實例包括經SV40(COS-7，ATCC CRL 1651)轉形之猴腎CV1細胞；人胚腎細胞(經次選殖可生長於懸浮培養基中之293或293細胞，Graham等人，J.Gen Virol.，36：59(1977))；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR(CHO，Urlaub與Chasin，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：4216(1980))；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell)(TM4，Mather,Biol.Reprod.，23：243-251(1980))；人肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝細胞(Hep G2，HB 8065)；及小鼠乳腺腫瘤細胞(MMT 060562，ATCC CCL51)。據認為適宜宿主細胞之選擇係屬於本技術之技術範疇。
可將編碼IL-22之核酸(例如，cDNA或基因組DNA)插入至用於選殖(DNA之擴增)或表現之複製載體中。可公開取得多種載體。載體可例如呈質體、黏質體、病毒顆粒、或噬菌體之形式。適宜之核酸序列可藉由多種不同程序插入至載體中。一般而言，利用相關技術中已知 的技術將DNA插入至適宜之限制性核酸酶內切位點中。載體組分一般包括(但不限於)單一序列、複製之來源、一或多個標記基因、增強子要素、啟動子、及轉錄終止序列中之一或多者。包含一或多種該等組分之適宜載體之構造係利用熟習此項技術者已知的標準結紮技術。
IL-22多肽不僅可直接、而且可呈與可為信號序列或在成熟蛋白質或多肽之N-端具有特異性裂解位點之其他多肽之異源多肽之融合多肽形式、及呈IL-22 Fc融合蛋白質形式重組製得。一般而言，信號序列可為載體之組分，或其可為插入至載體中之IL-22 DNA之一部分。信號序列可為選自(例如)鹼性磷酸酶、親黴素(1pp)、或熱穩定腸毒素II前導之群之原核信號序列。就酵母分泌而言，信號序列可為(例如)酵母轉化酶前導、α因子前導(包括酵母菌屬及刻魯維拉菌屬(Kluyveromyces)--前導因子，刻魯維拉菌屬述於美國專利案第5,010,182號中)、或酸性磷酸酶前導、白色念珠菌(C.albicans)葡糖澱粉酶前導(1990年4月4日公開之EP 362,179)、或述於1990年11月15日公開之WO 90/13646中之信號。於哺乳動物細胞表現中，(諸如)衍生自相同或相關種類之分泌多肽之信號序列以及病毒分泌前導之哺乳動物信號序列可用於引導蛋白質之分泌。
表現及選殖載體均包含可使得載體在一或多種所選擇宿主細包中複製之核酸序列。對於許多種細菌、酵母、及病毒而言，熟知該等序列。自質體pBR322複製之來源適用於大多數革蘭氏陰性細菌，2：質體來源適用於酵母，及各種病毒來源(SV40、多瘤病毒、腺病毒、VSV或BPV)適用於哺乳動物細胞中載體之選殖。
表現及選殖載體將通常包含亦稱為篩選標記之篩選基因。典型篩選基因係編碼可作成下述之蛋白質：(a)賦予抗生素或其他毒素(例如胺苄青黴素(ampicillin)、新黴素、甲胺喋呤、或四環素)抗性，(b)彌補營養缺陷，或(c)提供無法自複合培養基取得之關鍵營養素，例 如，對於桿菌，該基因係編碼D-丙胺酸消旋酶。
用於哺乳動物細胞之適宜篩選標記的一個實例為可鑑別出有能力吸收IL-22核酸之細胞者(諸如DHFR或胸苷激酶)。在使用野生型DHFR情況下之一種適宜宿主細胞為如由Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77：4216(1980)所述製得及繁殖之缺乏DHFR活性之CHO細胞系。用於酵母之一種適宜篩選基因為存於酵母質體YRp7中之trp1基因[請參見：例如，Stinchcomb等人，Nature，282：39(1979)；Kingsman等人，Gene，7：141(1979)；Tschemper等人，Gene，10：157(1980)]。trp1基因提供作為缺乏生長於色胺酸中之能力之酵母突變菌株(例如，ATCC編號44076或PEP4-1)之篩選標記[Jones，Genetics，85：12(1977)]。
表現及選殖載體通常包含可以操作方式鍵聯至IL-22核酸序列以引導mRNA合成之啟動子。熟知可被多種可能宿主細胞識別之啟動子。適於與原核宿主併用之啟動子包括正交-內醯胺酶及乳糖啟動子系統[請參見：例如，Chang等人，Nature，275：615(1978)；Goeddel等人，Nature，281：544(1979)]、鹼性磷酸酶色胺酸(trp)啟動子系統[請參見：例如，Goeddel，Nucleic Acids Res.，8：4057(1980)；EP 36,776]、及雜交啟動子，諸如tac啟動子[請參見：例如，deBoer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，80：21-25(1983)]。用於細菌系統中之啟動子亦將包含可以操作方式鍵聯至編碼IL-22之DNA之夏因-達爾加諾(Shine-Dalgarno)(S.D.)序列。
與酵母宿主併用之適宜啟動子之實例包括用於3-磷酸甘油酸激酶之啟動子[請參見：例如，Hitzeman等人，J.Biol.Chem，255：2073(1980)]或其他糖酵解酵素[請參見：例如，Hess等人，J.Adv.Enzyme Reg.，7：149(1968)；Holland，Biochemistry，17：4900(1978)]，諸如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、己糖激酶、丙 酮酸脫羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸異構酶、3-磷酸甘油酸變位酶、丙酮酸激酶、丙糖磷酸異構酶、磷酸葡萄糖異構酶、及葡萄糖激酶。
為其他優點係經由生長條件來控制轉錄之可誘導啟動子之其他酵母啟動子為用於醇脫氫酶2、異細胞色素C、酸性磷酸酶、與氮代謝相關聯之降解酶、金屬硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、及造成麥芽糖及半乳糖之使用結果之酶之啟動子領域。用於酵母表現中之適宜載體及啟動子進一步述於EP 73,657中。
哺乳動物宿主細胞中藉由載體之IL-22轉錄係(例如)藉由獲自諸如多瘤病毒、禽痘病毒(1989年7月5日公開之UK 2,211,504)、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭瘤病毒、禽類肉瘤病毒、巨大細胞病毒、逆轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿病毒40(SV40)之病毒之基因組之啟動子、藉由異源哺乳動物啟動子(例如，肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子)、及藉由熱衝擊啟動子控制，其限制條件為該等啟動子與宿主細胞系統相容。
藉由高等真核生物之編碼IL-22多肽之DNA之轉錄可藉由插入增強子序列至載體中增進。增強子為DNA之通常約10至300bp之作用於啟動子以增進其轉錄之順式作用要素。現已從哺乳動物基因(球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白、及胰島素)知曉許多增強子序列。然而，通常會使用衍生自真核細胞病毒之增強子。實例包括於複製起始點後側(100至270bp)上之SV40增強子、巨大細胞病毒早期啟動子增強子、於複製起始點後側上之多瘤病毒增強子、及腺病毒增強子。增強子可在IL-22編碼序列之位置5'或3'剪接至載體中，但較佳係位於啟動子之位點5'。
用於真核宿主細胞(酵母、真菌、昆蟲、植物、動物、人類、或來自其他多細胞生物體之有核細胞)中之表現載體亦可包含終止轉錄 及穩定mRNA所需要的序列。該等序列通常可自真核或病毒DNA或cDNA之未轉譯區5'及有時3'取得。該等區包含經在編碼IL-22之mRNA之未轉譯部分中轉錄為聚腺苷酸化片段之核苷酸片段。
適合在重組脊椎動物細胞培養中合成IL-22之再其他方法、載體、及宿主細胞述於Gething等人，Nature，293：620-625(1981)；Mantei等人，Nature，281：4046(1979)；EP 117,060；及EP 117,058中。
可於樣本中直接地(例如)藉由習知的南方墨點法、北方墨點法定量mRNA之轉錄[請參見：例如，Thomas,Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：5201-5205(1980)]、墨點分析法(DNA分析法)、或使用經適宜標記探針基於本文所提供序列在原位雜交來測量基因擴增及/或表現。或者，可使用可識別包括DNA雙重體、RNA雙重體、及DNA-RNA雜交雙重體或DNA-蛋白質雙重體之特異性雙重體之抗體。該等抗體因而可被標記及可在雙重體結合至表面之情況下進行檢定，以致在形成雙重體於表面上後，可檢測到結合至雙重體之抗體之存在。
或者，可藉由諸如細胞或組織切片之免疫組織化學染色及細胞培養或體液之檢定之免疫學方法直接地定量基因產物之表現來測量基因表現。適用於免疫組織化學染色及/或樣本體液之檢定之抗體可係單株或多株，及可於任何哺乳動物中製得。簡便地，該等抗體可基於本文所提供DNA序列製造成抗天然序列IL-22多肽或抗合成肽、或抗融合至IL-22 DNA且編碼特異性抗體抗原決定基之外源序列。
可從培養基或宿主細胞溶胞物回收IL-22之形式。假若與膜結合，則可使用適宜洗滌液(例如，Triton-X 100)或藉由酵素裂解從膜將其釋放。用於IL-22之表現中之細胞可藉由諸如冷凍-融溶循環、音波處理、機械裂解、或細胞溶解劑之各種物理或化學方法裂解。
可能期望自重組細胞蛋白質或多肽純化IL-22。以下程序為適宜 純化程序之示例：藉由於離子交換柱上分餾；乙醇沉澱；反相HPLC；於矽膠或諸如DEAE之陽離子交換樹脂上層析；聚焦層析；SDS-PAGE；硫酸銨沉澱；使用(例如)Sephadex G-75之凝膠過濾；移去諸如IgG之污染物之蛋白質A瓊脂糖凝膠管柱；及可結合IL-22多肽之抗原決定基標籤形式之金屬螯合管柱。可採用蛋白質純化之多種方法及該等方法均為相關技術已知並述於(例如)Deutscher，Methods in Enzymology，182(1990)；Scopes，Protein Purification：Principles and Practice，Springer-Verlag，紐約(1982)中。所選擇的該(等)純化步驟將(例如)取決於所採用的生成方法及所製得的特定IL-22之性質。上述一般方法亦可應用於IL-2 Fc融合蛋白質之製造。
類似地，IL-22 Fc融合蛋白質可利用重組方法及組合物如(例如)Molecular Cloning：A Laboratory Manual(Sambrook等人，1989，冷泉港實驗室出版社)及PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications(Innis等人1990.Academic Press，加州聖地亞哥)中所述製得。於一個實施例中，提供編碼本文所述IL-22 Fc融合蛋白質之單離核酸。於另一個實施例中，提供一或多種包含該核酸之載體(例如，表現載體)。於另一個實施例中，提供包含該核酸之宿主細胞。於該種實施例中，宿主細胞包括包含編碼構成IL-22 Fc融合蛋白質之胺基酸序列之核酸之載體(例如，已經由其轉形)。於某些實施例中，該載體為表現載體。於一個實施例中，宿主細胞為真核，例如，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。於一個實施例中，提供一種製造IL-22 Fc融合蛋白質之方法，其中該方法包括在適於表現Fc融合蛋白質之條件下培養包含編碼如上所提供IL-22 Fc融合蛋白質之核酸之宿主細胞，及視需要自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收Fc融合蛋白質。
對於IL-22 Fc融合蛋白質之重組製造，單離出編碼例如如本文中 所述Fc融合蛋白質之核酸並插入至一或多種用於進一步在宿主細胞中選殖及/或表現之載體中。可輕易地單離得該核酸及利用習知的程序(例如，藉由使用可特異性地結合至編碼融合蛋白質之基因之寡核苷酸探針)定序化。於某些實施例中，當在製造IL-22 Fc融合蛋白質時，可將編碼IL-22多肽或其片段之核酸拼接至編碼免疫球蛋白恆定域序列之核酸之恆定域指定位置之處以在IL-22的C-端獲得Fc融合；然而，N-端融合亦可行。
作為IL-22 Fc融合蛋白質之構造的一個實例，編碼IL-22之DNA藉由限制性酶在或接近該編碼IL-22之DNA的3'端之處及於在或接近編碼成熟多肽(其中包含使用不同前導)之N-端之DNA或在或接近IL-22全長蛋白質(其中利用天然信號)之N-端編碼區之點裂解。接著可輕易地將該DNA片段插入至編碼免疫球蛋白輕或重鏈恆定區之DNA中，及若需要，則藉由缺失突變來定製。較佳地，當在融合蛋白質欲用於人類活體內治療時，其為人類免疫球蛋白。
於一些實施例中，IL-22-免疫球蛋白嵌合體係經組合呈單體、異型-或同型-多聚物、或呈二聚物或四聚物。一般而言，該等經組合之免疫球蛋白將具有已知的如由隨後圖式表示之單位結構。基礎四鏈結構單元為其中存在IgG、IgD、及IgE之形式。較高分子量免疫球蛋白中重複著四鏈單元；IgM一般係呈由二硫鍵固持在一起之基礎四鏈單元之五聚物形式存在。IgA球蛋白(及有時稱為IgG球蛋白)亦可呈多聚體形式存於血清中。就多聚物而言，各四鏈單元可相同或相異。亦可參見Capon等人，美國專利案第5,116,964號，該案係以其全文引用方式併入本文中。
於本文圖式中，「A」意指包含可與其配體或受體(諸如IL-22 R)結合之結合位點之結合搭配物(諸如IL-22)之至少一部分；X為另一種試劑，其可為另一種功能性結合搭配物(與A相同或相異)、如上文定 義之多重子單元(鏈)多肽(例如，整合素)、免疫球蛋白超家族成員之一部分(諸如可變區或似可變區域，包括天然或嵌合免疫球蛋白可變區)、諸如假單胞菌外毒素或蓖麻毒素之毒素、或通常與恆定域不相關聯之多肽治療劑；及VL、VH、CL及CH代表免疫球蛋白之輕或重鏈可變或恆定域。應瞭解該等圖式僅係一般組合免疫球蛋白結構之示例，並不包含所有可能性。例如，當明瞭任何該等構造中宜可存在若干不同的「A」或「X」。
Figure 103109979-A0202-12-0081-2
Figure 103109979-A0202-12-0082-3
當明瞭該等圖式僅係示例性，及多聚物之鏈據認為係以與天然免疫球蛋白之相同方式經二硫鍵鍵結。根據本發明，雜交免疫球蛋白可輕易地自經適宜之核酸轉形之哺乳動物細胞分泌。該等分泌形式包括其中結合搭配物抗原決定基存於重鏈二聚物、輕鏈單體或二聚物中之其等、及其中結合搭配物抗原決定基與一或多個輕或重鏈融合存在之重及輕鏈異型四聚物，包括其中多達及包括所有四種可變區類似物係經取代之異型四聚物。在存在似輕-重鏈非結合搭配物可變之域之情況下，則可提供異功能抗體。
可變結構之鏈或基礎單元可用於單體及異型-及同型多聚物與本發明之免疫球蛋白之組合。該等基礎單元之具體實例以圖式示於下方並指出其等效物(基於以下簡化式子之目的)。
Figure 103109979-A0202-12-0083-4
依照本發明製得之各種示例性組合新穎免疫球蛋白示意性地以圖式示於下方。除了以上定義之符號之外，n為整數，及Y指示共價交聯部分。
Figure 103109979-A0202-12-0084-5
A、X、V或C可經共價交聯部分(Y)修飾成為(A-Y)n、(X-Y)n等等。
結合搭配物A(諸如IL-22)亦可為(例如)具有任意表示為Aα及Aβ之鏈之多鏈分子。該等鏈之單元位於針對上述單鏈「A」指明的位點。多個鏈中之一者係與一個免疫球蛋白鏈融合(其餘鏈係以一般方式與融合鏈共價或非共價地結合)，或當配體結合搭配物包含兩個鏈時，一個鏈分開地與免疫球蛋白輕鏈及其他鏈融合成免疫球蛋白重鏈。
具有下方圖示結構之基礎單元為彼等用於建立單體、及異型-及同型-多聚物(特別是具有多鏈配體結合搭配物之二聚物及三聚物)者之實例：
Figure 103109979-A0202-12-0085-6
具有用於上述單位結構中之兩-鏈配體結合搭配物(「Aα及Aβ」)之各種示例性新穎組合抗體示意性地以圖式示於下方。
Figure 103109979-A0202-12-0086-7
上表中所顯示之結構僅顯示主要特徵，例如，其既不顯示免疫球蛋白之接合(J)或其他域，亦不顯示二硫鍵。為簡短起見而省略此等。然而，在基於結合活性而需要該等域之情況下，其等應經構造成存於結合搭配物或免疫球蛋白分子中其佔據的尋常位置，視情況而定。
編碼免疫球蛋白輕或重鏈恆定區之DNA為已知或可輕易地自cDNA庫獲得或係經合成。請參見(例如)Adams等人，Biochemistry 19：2711-2719(1980)；Gough等人，Biochemistry 19：2702-2710(1980)；Dolby等人；P.N.A.S.USA，77：6027-6031(1980)；Rice等人P.N.A.S USA 79：7862-7865(1982)；Falkner等人；Nature 298：286-288(1982)；及Morrison等人；Ann.Rev.Immunol.2：239-256(1984)。本文中提供編碼具有內源前導序列之人類IL-22之DNA序列(SEQ ID NO：70)。為已知或可輕易自cDNA庫獲得之編碼其他所欲 結合搭配物之DNA序列適用於實施本發明。
編碼本發明IL-22 Fc融合蛋白質之DNA係經轉染至宿主細胞中以達成表現。假若需要多聚物，則藉由編碼將構成多聚物之各個鏈之DNA轉形宿主細胞，該宿主細胞最佳係經選擇成可以所期望方式組合多聚物之該等鏈。假若宿主細胞在轉染之前產生出免疫球蛋白，則僅需要利用融合至輕或重鏈之結合搭配物來轉染以製得異種抗體。具有一或多個帶有結合搭配物域之臂及一或多個帶有搭配可變區之臂之上述免疫球蛋白獲致針對於結合搭配物配體及針對於抗原或治療性部分之雙重特異性。多股共轉形細胞係併與上述重組方法使用，以製得具有多重特異性之多肽，諸如，上文論述之異源四聚免疫球蛋白。
雖然本發明之免疫黏著素中不需要存在免疫球蛋白輕鏈，但免疫球蛋白輕鏈可與IL-22-免疫球蛋白重鏈融合多肽共價結合地存在。於此情況中，編碼免疫球蛋白輕鏈之DNA通常係與編碼IL-22-免疫球蛋白重鏈融合蛋白質之DNA共表現。於分泌後，雜交重鏈及輕鏈將共價地結合，可提供包含兩個二硫-鍵聯免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之似免疫球蛋白結構。適於製造該等結構之方法(例如)揭示於1989年3月28日發證之美國專利案第4,816,567號中。用於標靶蛋白質編碼載體之選殖或表現之適宜宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。例如，IL-22融合蛋白質可產生於細菌中，尤其在糖基化及Fc效應子功能係非所需或有害之情況下。關於細菌中多肽之表現，請參見：例如，美國專利案號5,648,237、5,789,199、及5,840,523。(亦可參見Charlton，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press，新澤西州特圖瓦，2003)，第245-254頁，描述大腸桿菌中抗體片段之表現)。於表現後，Fc融合蛋白質可自細菌細胞漿液單離於可溶性部分中及可進一步進行純化。如實例部分中所列舉，其他純化方法包括但不限於使用蛋白質A管柱之純化。
除了原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適宜的選殖或表現宿主，包括其糖基化路徑已經過「人源化」而致製得具有部分或完全人糖基化圖之抗體之之真菌及酵母菌株。請參見Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)、及Li等人，Nat.Biotech.24：210-215(2006)。
用於糖基化蛋白質之表現之適宜宿主細胞亦衍生自多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。許多桿狀病毒菌株已經過鑑定可與昆蟲細胞結合使用，尤其係用於草地貪夜蛾細胞之轉染。
亦可使用植物細胞培養作為宿主。請參見：例如，美國專利案號5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978、及6,417,429(描述用於在轉基因植物中產生出抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
亦可使用脊椎動物細胞作為宿主。例如，適合生長於懸浮液中之哺乳動物細胞系可係有用。有用哺乳動物宿主細胞系之其他實例為經SV40(COS-7)轉形之猴腎CV1細胞系；人胚腎細胞系(如(例如)Graham等人，J.Gen Virol.36：59(1977)中之293或293細胞)；乳倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(如(例如)Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980)中所述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK；布法羅大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；如(例如)Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)中所述之TRI細胞；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他有用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞系，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適用於抗體生成之某些哺乳動物宿主細胞系之評論，請參見：例如， Yazaki與Wu，Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編輯，Humana Press，新澤西州特圖瓦)，第255-268頁(2003)。
D．IL-22激動劑
於一個態樣中，本發明提供用於方法實施例之IL-22激動劑。IL-22激動劑具有如本文定義之IL-22生物活性。於一個實施例中，IL-22激動劑為抗體。於某些實施例中，抗-IL-22抗體為促使IL-22與IL-22R相互作用之激動抗體。於一個特定的實施例中，IL-22激動劑為可與IL-22BP結合而阻礙或抑制IL-22BP與IL-22結合及因此誘導或增強IL-22活性(例如，結合至IL-22R)之抗體。於另一個實施例中，IL-22激動劑為與IL-22結合之寡肽。寡肽可利用已知寡肽合成方法論經化學合成或可利用重組技術製得並純化。該等寡肽之長度通常為至少約5個胺基酸、或者至少約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100個胺基酸。可在不需過度實驗下利用熟知技術鑑別出該等寡肽。於此點上，應注意相關技術中熟知用於基於可與多肽標靶特異結合之寡肽而篩選寡肽庫之技術(請參見：例如，美國專利案號5,556,762、5,750,373、4,708,871、4,833,092、5,223,409、5,403,484、5,571,689、5,663,143；PCT公開案號WO 84/03506及WO84/03564；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，81：3998-4002(1984)；Geysen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：178-182(1985)；Geysen等人，in Synthetic Peptides as Antigens，130-149(1986)；Geysen等人，J.Immunol.Meth.，102：259- 274(1987)；Schoofs等人，J.Immunol.，140：611-616(1988)、Cwirla,S.E.等人(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87：6378；Lowman,H.B.等人(1991)Biochemistry，30：10832；Clackson,T.等人(1991)Nature，352：624；Marks，J.D.等人(1991)，J.Mol.Biol.，222：581；Kang,A.S.等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：8363、及Smith，G.P.(1991)Current Opin.Biotechnol.，2：668)。
又於另一個實施例中，本發明之IL-22激動劑為除了本文所述寡肽或抗體以外之與IL-22結合之有機分子。有機分子可為(例如)小分子。與IL-22結合之有機分子可利用已知的方法論(請參見：例如，PCT公開案號WO00/00823及WO00/39585)識別出並經化學合成。該等有機分子通常為小於約2000道耳頓大小、或者小於約1500、750、500、250或200道耳頓大小，其中該等可與本發明之IL-22結合之有機分子可在不需過度實驗下利用熟知技術鑑別出。於此點上，應注意相關技術中熟知用於基於可與多肽標靶結合之分子而篩選有機分子庫之技術(請參見：例如，PCT公開案號WO00/00823及WO00/39585)。於一個特定的實施例中，IL-22激動劑為可與IL-22BP結合而阻礙或抑制IL-22BP與IL-22結合及因此誘導或增強IL-22活性(例如，結合至IL-22R)之有機分子。又於另一個實施例中，提供IL-22之激動劑。示例性激動劑包括(但不限於)天然IL-22或IL-22R；IL-22或IL-22R之保留天然多肽之至少一種活性之片段、變體、或改造形式；可與IL-22R結合及活化IL-22R之試劑；及誘導IL-22或IL-22R或編碼IL-22或IL-22R之核酸之過度表現之試劑。
E．檢定法
提供於本文中之IL-22 Fc融合蛋白質可藉由本技術中已知的各種分析法來識別、篩選、或表徵其物理/化學性質及/或生物活性。
1.結合檢定及其他檢定
於一個態樣中，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質係基於其受體結合活性(例如)藉由諸如ELISA、西方墨點分析、Scatchard之細胞表面結合、表面電漿共振之已知的方法進行測試。於另一個態樣中，競爭性分析可用於識別與IL-22 Fc融合蛋白質競爭結合至IL-22受體之抗體。於另一個態樣中，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質可用於檢測存於生物學樣本中之IL-22受體或IL22-結合蛋白質(可溶性受體)之存在或含量。於另一個態樣中，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質可用於檢測存於生物學樣本中之IL-22受體之存在或含量。於某些實施例中，該生物學樣本係先經非特異性同型對照組抗體阻斷以使任何Fc受體於樣本中飽和。
2.活性檢定
於一個態樣中，提供用於鑑定IL-22 Fc融合蛋白質之生物活性之檢定法。IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質之生物活性可包括(例如)與IL-22受體之結合、IL-22信號傳導之刺激、及STAT3、RegIII及/或PancrePAP表現之誘導。此外，就心血管疾病或病況而言，生物活性可包括影響動脈粥樣硬化斑塊之形成，特定言之係抑制動脈粥樣硬化斑塊形成之形成。可藉由熟習此項技術者已知的任何適宜造影方法來評估斑塊形成之抑制。
F.偶聯物
本發明亦提供包含與一或多種用於檢測、調配、半衰期延長、減低免疫原性或組織穿透性之試劑偶聯的本文所述IL-22 Fc融合蛋白質之偶聯物。示例性偶聯包括但不限於聚乙二醇化及附接至放射性同位素。
於另一個實施例中，偶聯物包含與放射性原子偶聯形成放射性偶聯物之本文所述IL-22 Fc融合蛋白質。可取得多種放射性同位素以用於製造放射性偶聯物。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、 Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。在放射性偶聯物係用於檢測之情況下，其可包含用於閃爍掃描示蹤研究之放射性原子(例如，tc99m或I123)、或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記(再諸如碘-123、碘-131，銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵)。
G.用於檢測之方法及組合物
於某些實施例中，提供於本文中之任何IL-22 Fc融合適用於檢測生物樣本中IL-22受體之存在。於某些實施例中，該方法進一步包括藉由非特異性同型對照組抗體阻斷樣本中任何Fc受體之步驟。術語「檢測」如本文中所用包含定量或定性檢測。於某些實施例中，生物樣本包含細胞或組織(諸如上皮組織)。
於一個實施例中，提供用於檢測方法中之IL-22 Fc融合蛋白質。於另一個態樣中，提供一種檢測生物樣本中IL-22受體之存在的方法。於某些實施例中，該方法包括使生物樣本與本文所述IL-22 Fc融合蛋白質在允許IL-22 Fc融合蛋白質與IL-22受體結合之條件下接觸，及檢測複合物是否形成於IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22受體之間。於某些實施例中，該方法進一步包括藉由非特異性同型對照組抗體阻斷樣本中任何Fc受體之步驟。該方法可為活體外或活體內方法。於一個實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質係用於篩選符合藉由IL-22 Fc融合蛋白質治療之個體，例如，在IL-22受體為用於篩選患者之生物標誌之情況下。
於某些實施例中，提供經標記之IL-22 Fc融合蛋白質。標記包括(但不限於)可直接檢測到的標記或部分(諸如螢光、發色活性、電子-緻密、化學發光、及放射性標記)、以及可例如藉由酵素反應或分子相互作用間接檢測到的部分(諸如酵素或配體)。示例性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H、及131I、螢光團(諸如稀土螯合 物或螢光素及其衍生物)、玫瑰紅及其衍生物、1-二甲胺基萘-5-磺醯基(dansyl)、繖形酮(umbelliferone)、螢光素酶類(例如，螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶)(美國專利案第4,737,456號)、蟲螢光素、2,3-二氫吩嗪二酮、辣根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、糖類氧化酶(例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶、及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)、與利用過氧化氫以氧化諸如HRP、乳過氧化酶、或微過氧化酶之染料前驅物之酵素偶聯的雜環氧化酶(諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基、及類似。
H.醫藥調配物
基於IL-22之組合物(於某些實施例中，其包含IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22多肽或激動劑)於本文中將以符合優良醫藥實務之方式進行調配、定劑量及投與。本文中之考慮因素包括所治療之特定疾病、所治療之特定哺乳動物、個別受試者之臨床病況、疾病之病因、遞送藥物之部位、投藥方法、投藥排程、及醫療專業者已知的其他因素。於一個實施例中，該組合物可用於延長易罹患或確診患有疾病或條件疾病之人類個體之持續存活時間。持續存活時間係經定義為從第一次投與藥物到死亡所經過的時間。
醫藥調配物係利用相關技術中已知的標準方法藉由將具有所欲純度之活性成分與一或多種可選醫藥上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編輯(1980)及Remington's Pharmaceutical Sciences第20版，A.FGennaro編輯，2000，Lippincott，Williams & Wilkins，費城(Pa))混合呈凍乾調配物或水溶液形式製得。醫藥上可接受之載劑一般而言在所使用的劑量及濃度下對接受者無毒，及包括(但不限於)：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑 (諸如氯化十八烷基二甲基苄基銨；氯化六甲雙銨；氯化苄二甲羥銨；氯化苄乙氧銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸乙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、二醣、及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；鹽形成抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子表面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之示例性醫藥上可接受之載劑進一步包括填隙藥物分散劑，諸如，可溶性中性-活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如，人可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白(諸如rHuPH20(HYLENEX®，Baxter International,Inc.))。某些示例性sHASEGP及包括rHuPH20之使用方法述於美國專利公開案號2005/0260186及2006/0104968中。於一個態樣中，將sHASEGP與一或多種其他葡糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
視情況，然較佳地，該調配物包含醫藥上可接受之鹽，較佳係氯化鈉，且較佳係以大約生理濃度。
視情況，本發明之調配物可包含醫藥上可接受之防腐劑。於一些實施例中，防腐劑濃度係在0.1至2.0%(通常係體積/體積)範圍內。適宜之防腐劑包括彼等為醫藥技術所熟知者。苄醇、苯酚、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、氯化苄二甲羥銨及對羥基苯甲酸丙酯為較佳的防腐劑。視情況，本發明之調配物可以0.005至0.02%之濃度包含醫藥上可接受之表面活性劑。
本文中之調配物亦可包含多於一種的為治療的特定適應症所需求之活性化合物，較佳係彼等不會不利地相互影響之具有互補活性 者。該等分子宜以可有效用於所欲目的之量呈組合形式存在。
示例性凍乾調配物述於美國專利案第6,267,958號中。水性調配物包括述於美國專利案第6,171,586號及WO2006/044908中之其等；水性調配物包含組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文中之調配物亦可包含多於一種的為治療的特定適應症所需之活性成分，較佳係彼等不會不利地相互影響之具有互補活性者。例如，可能期望進一步提供類固醇、TNF拮抗劑或其他抗-發炎治療劑。該等活性成分宜以可有效用於所欲目的之量呈組合形式存在。
活性成分可陷留在例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合製得之分別例如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊之微膠囊中、陷留在膠態藥物遞送系統(例如，脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米顆粒及奈米膠囊)中或陷留在粗乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編輯(1980)中。
可製備持續釋放型製劑。持續釋放型製劑之適宜實例包括包含IL-22 Fc融合蛋白質之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質係呈例如膜、或微膠囊之成形物件之形式。持續釋放型基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸腳、或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利案第3,773,919號)、L-麩胺酸及γ-乙基-L-麩胺酸之共聚物、不可降解乙烯乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)組成之可注射微球體))、及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯乙酸乙烯酯及乳酸-乙醇酸之聚合物可達成在100天期間釋放分子，然某些水凝膠係在較短的時間期內釋放蛋白質。當在囊封抗體留存於體內達一段很長的時間之情況下，其可能會因暴露於37℃下之水分而變形或凝結，從而導致損失生物活性及可能改變免疫原 性。理性策略可經設計成穩定化隨所涉及機制改變。例如，假若據發現聚結機制係經硫基-二硫鍵互換形成分子間S-S鍵，則可藉由修飾硫氫基、藉由酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適宜之添加劑、及顯影特定聚合物基質組合物達成穩定化。
用於局部投藥之醫藥組合物可經調配(例如)呈局部用凝膠形式。請參見：例如，US 4,717,717、US 5,130,298、US 5,427,778、US 5,457,093、US 5,705,485、US 6,331,309及WO2006/138,468。於某些實施例中，該組合物可在纖維素衍生物的存在下進行調配。於某些其他實施例中，局部用調配物可於投與前利用足量緩衝劑或稀釋劑從凍乾調配物復原。於某些實施例中，IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係經調配成可局部投與具有上皮傷口癒合缺陷之個體。於某些特定實施例中，上皮傷口癒合發生在皮膚中。於某些其他特定實施例中，個體為具有傷口癒合缺陷之人。於某些其他實施例中，包含本發明IL-22 Fc融合蛋白質之局部用調配物可用於增進內或外手術切口後的傷口癒合。
於本發明之一個實施例中，用於加速、促進或促進傷口癒合之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係呈(例如)在預填充的針筒或容器中之局部用凝膠之調配物形式，或選擇性地，可在緊接於局部投與患者之前將本發明之化合物與凝膠基質混合。於某些實施例中，亦可經局部同時或依序地投與另一種治療劑。亦可視需要使用其他投藥途徑，例如，藉由任何適宜方式投與，包括(但不限於)非經腸、皮下、腹膜內、肺內、腦脊髓內、關節內、滑膜內、鞘內、口服、及鼻內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內、或皮下投與。
通常，對於傷口癒合，IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係經調配達成特定部位遞送。當經局部施用時，宜將IL-22多肽或IL-22 Fc融合與諸如載劑及/或佐劑之其他成分組合。對該等其他成分之性質沒有 限制，但其等必須係醫藥上可接受之且對於其所欲投藥而言有效，及不可劣化組合物活性成分之活性。適宜載劑之實例包括軟膏、霜劑、凝膠、噴霧、或包含或不包含經純化膠原蛋白之懸浮液。該等組合物亦可視需要呈液體或半液體形式含浸於滅菌敷料、穿皮貼布、塑料、及繃帶中。亦可使用經氧化之再生纖維素/膠原蛋白基質，例如，PROMOGRAN基質傷口敷料或PROMOGRAN PRISMA基質。
可製備持續釋放型製劑。持續釋放型製劑之適宜實例包括包含本發明多肽之固體疏水性聚合物之半滲透基質，該等基質係呈例如膜、或微膠囊之成形物件之形式。持續釋放型基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)、或聚(乙烯醇))、聚乳酸交酯(美國專利案第3,773,919號)、L-麩胺酸與γ-乙基-L-麩胺酸之共聚物、不可降解乙烯乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林組成之可注射微球體))、聚-乳酸-共乙醇酸(PLGA)聚合物、及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯乙酸乙烯酯與乳酸-乙醇酸之聚合物可達成在100天期間釋放分子，然某些水凝膠係在較短的時間期內釋放蛋白質。當在囊封多肽留存於體內達一段很長的時間之情況下，其可能會因暴露於37℃下之水分而變形或凝結，從而導致損失生物活性及可能改變免疫原性。理性策略可經設計成穩定化隨所涉及機制改變。例如，假若據發現聚結機制係經硫基-二硫鍵互換形成分子間S-S鍵，則可藉由修飾硫氫基、藉由酸性溶液凍乾、控制水分含量、使用適宜之添加劑、及顯影特定聚合物基質組合物達成穩定化。
對於凝膠組合物之獲得，可將經調配呈液體組合物之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質與有效量之水溶性多醣或合成聚合物混合以形成凝膠(例如，膠凝劑)，與諸如聚乙二醇混合以形成經局部施用之具適宜黏度之調配物。可使用的多醣或膠凝劑包括：例如，纖維素衍生 物(諸如醚化纖維素衍生物，包括烷基纖維素、羥烷基纖維素、及烷基羥烷基纖維素，例如，甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、及羥丙基纖維素)；羧甲基纖維素鈉；POE-POP嵌段聚合物；各種等級之泊洛沙姆(poloxamer)USP；透明質酸；諸如卡波(carbopol)940之聚丙烯酸；澱粉及分餾澱粉；瓊脂；海藻酸及藻酸鹽；阿拉伯膠；普魯藍(pullulan)；瓊脂糖；角叉菜膠；聚葡萄糖；糊精；果聚醣；菊糖；甘露聚糖；聚木糖；阿拉伯聚糖；甲殼素；糖原；葡聚糖；及合成生物聚合物；以及諸如黃原膠；瓜爾膠；刺槐豆膠(locust bean gum)；阿拉伯膠；黃蓍膠；及刺梧桐樹膠之膠；及其衍生物、組合物及混合物。於本發明之一個實施例中，本文中之膠凝劑為例如對生物系統惰性、無毒性、可簡單製造、及/或不過於流動或黏滯者，及不會使固持於其中之IL-22多肽或IL-22 Fc融合變得不穩定。
於本發明之某些實施例中，多醣為醚化纖維素衍生物，於另一個實施例中，為明確定義、純化、並列於USP中者，例如，甲基纖維素及羥烷基纖維素衍生物，諸如羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、及羥丙基甲基纖維素(均稱為纖維素質)。於一些實施例中，多醣為羥乙基甲基纖維素或羥丙基甲基纖維素。
適用於膠凝之聚乙二醇通常為低及高分子量聚乙二醇之達成適當黏度之混合物。例如，分子量400至600之聚乙二醇與分子量1500之聚乙二醇之混合物在以適當比例混合獲得糊劑時可有效地達成該目的。
術語「水溶性」在施用至多醣及聚乙二醇時意圖包括膠態溶液及分散液。一般而言，藉由醚基之取代程度來確定纖維素衍生物之溶解度，及本文中有用的穩定用衍生物應在纖維素鏈中每個脫水葡萄糖單元具有足夠量的該等醚基以使該等衍生物具水溶性。一般而言，每 個脫水葡萄糖單元至少0.35個醚基之醚取代程度係足夠的。另外，纖維素衍生物可呈鹼金屬鹽(例如，Li、Na、K、或Cs鹽)之形式。
於某些實施例中，甲基纖維素係呈凝膠形式使用，例如，其包含凝膠之約1至5%、或約1%、約2%、約3%、約4%或約5%及IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係以每1ml凝膠約50至2000μg、100至2000μg、或100至1000μg的量存在。於某些實施例中，經局部投與用於傷口癒合之IL-2多肽或IL-22 Fc融合蛋白質之有效量可為約25μg至約500μg、約50μg至約300μg、約100μg至約250μg、約50μg至約250μg、約50μg至約150μg、約75μg、約100μg、約125μg、約150μg、約175μg、約200μg、約225μg、約250μg、約300μg、或約350μg/1cm2傷口面積。
欲用於活體內投與之調配物一般係無菌。無菌可例如藉由通過無菌過濾膜之過濾輕易地達成。
本發明提供針對基於IL-22之治療劑之劑量。例如，取決於疾病之類型及嚴重度，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1至20mg/kg)多肽係無論(例如)藉由一或多次個別投藥、或藉由連續輸注之候選用於投與個體之初始劑量。一種典型的日劑量之範圍可在約1μg/kg至100mg/kg或更大，取決於上述因素。就數天或更長時間期內之重複投藥而言，取決於病況，會持續治療直到疾病症狀之所欲抑制發生。然而，其他劑量療法可係有用的。可輕易地藉由習知技術及分析監測該療法之進展。
對於疾病之預防或治療，本發明之多肽(當在單獨或以與一或多種其他額外治療劑組合使用時)之適宜劑量將取決於意欲治療之疾病之類型、多肽之類型、疾病之嚴重度及過程、是否投與多肽來達成預防或治療目的、上一次治療、個體的臨床病史及對多肽之回應、及主治醫師的判斷。多肽適宜以一次地或分一連串治療投與給個體。取決 於疾病之類型及嚴重度，約1μg/kg至20mg/kg(例如0.1mg/kg至15mg/kg)多肽可係無論(例如)藉由一或多次個別投藥、或藉由連續輸注之候選用於投與個體之初始劑量。一種典型的日劑量之範圍可在約1μg/kg至100mg/kg或更大，取決於上述因素。就數天或更長時間期內之重複投藥而言，取決於病況，一般將會持續治療直到疾病症狀之所預期抑制發生。多肽之一種示例性劑量將在自約0.05mg/kg至約20mg/kg範圍內。因此，可投與個體約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg、10mg/kg、12mg/kg、15mg/kg、或20mg/kg(或其任何組合)之一或多種劑量。於某些實施例中，可投與個體約0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg、5.0mg/kg、6.0mg/kg、7.0mg/kg、8.0mg/kg、9.0mg/kg、10mg/kg、12mg/kg、15mg/kg、或20mg/kg(或其任何組合)。該等劑量可斷續性地(例如，每週、每隔兩週、或每隔三週)投與(例如，以致個體接受多肽之約兩種至約二十種，或例如約六種劑量)。可投與初始較高負載劑量，接著係一或多種較低劑量。一種示例性投藥療法包括投與約4mg/kg之初始負載劑量，接著係維持每週約2mg/kg抗體之劑量。然而，其他劑量療法可係有用的。可輕易地藉由習知技術及分析監測該療法之進展。
用於預防或治療心血管疾病或病況、代謝症候群、急性內毒素血症或敗血症、或糖尿病之本發明之化合物通常係經靜脈內注射投與。
亦可使用其他投藥方法，包括(但不限於)經局部、非經腸，諸如靜脈內、皮下、腹膜內、肺內、鼻內、眼、眼內、玻璃體內、病竈內、腦脊髓內、關節內、滑膜內、鞘內、口服、或經吸入投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內、或皮下投與。此外，依照已知的方法，諸如，以快速注射地靜脈內投與或藉由在一段時間期內連續地輸注，將本文所述之化合物投與人類個體。
I．治療方法及組合物
提供於本文中之任何IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22多肽或IL-22激動劑可用於治療方法中。
a)發炎性腸病
於一個態樣中，提供用為藥物之IL-22 Fc融合蛋白質。於其他態樣中，提供用於治療包括UC及CD之IBD之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，提供用於治療方法中之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，本發明提供用於治療患有UC或CD之個體的方法中之IL-22 Fc融合蛋白質，該方法包括投與個體有效量之IL-22 Fc融合蛋白質。於該種實施例中，該方法進一步包括投與個體有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。於其他實施例中，本發明提供用於增進上皮增生、分化及/或遷移中之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些特定的實施例中，上皮組織為腸上皮組織。於某些實施例中，本發明提供用於增進個體中上皮增生、分化及/或遷移的方法中之IL-22 Fc融合蛋白質，該方法包括投與個體有效量之IL-22 Fc融合蛋白質以增進上皮增生、分化及/或遷移。又於其他實施例中，本發明提供用於治療糖尿病(尤其係II型糖尿病)、糖尿病性傷口癒合、代謝症候群及動脈粥樣硬化中之IL-22 Fc融合蛋白質。於某些實施例中，本發明提供用於治療個體中糖尿病(尤其係II型糖尿病)、糖尿病性傷口癒合、代謝症候群及動脈粥樣硬化的方法中之IL-22 Fc融合蛋白質，該方法包括投與個體有效量之IL-22 Fc融合蛋白質。請參見均於2013年3月15日申請之Genentech申請案檔案號PR5586(申請案序號61/800795，標題為「Using an IL-22 polypeptide for wound healing」)及PR5590(申請案序號61/801144，標題為「Methods of treating cardiovascular conditions and metabolic syndrome using an IL-22 polypeptide」)。兩申請案之揭示內容係以其全文引用方式併入本文中。根據任何上述實施例之「個 體(individual/subject)」或「患者」較佳為人。
於另一個態樣中，本發明提供一種以IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質於製造或製備藥物之用途。於一個實施例中，該藥物係用於治療IBD及傷口癒合。於另一個實施例中，該藥物係用於治療IBD及傷口癒合之方法中，該方法包括投與患有IBD之個體有效量之藥物。於該種實施例中，該方法進一步包括投與個體有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。於另一個實施例中，該藥物係用於抑制腸上皮細胞中之發炎反應。於另一個實施例中，該藥物係用於增進個體中上皮增生、分化及/或遷移的方法中，該方法包括投與個體有效量之藥物以增進上皮增生、分化及/或遷移。根據任何上述實施例之「個體」可為人。
於另一個態樣中，本發明提供一種用於治療包括UC及CD之IBD之方法。於一個實施例中，該方法包括投與患有IBD之個體有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質。於該種實施例中，該方法進一步包括投與個體有效量之至少一種如下所述之其他治療劑。根據任何上述實施例之「個體」可為人。
於另一個態樣中，本發明提供一種用於增進個體中上皮增生、分化及/或遷移之方法。於一個實施例中，該方法包括投與個體有效量之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質以增進上皮增生、分化及/或遷移。於一個實施例中，「個體」為人。
b)其他治療適應症
本發明提供用於心血管疾病及病況、代謝症候群、急性內毒素血症及敗血症、及糖尿病之基於IL-22之治療劑。對於預防、治療或減輕特定疾病或病況之嚴重度，適宜劑量之本發明化合物將取決於如上定義之意欲治療之疾病或病況之類型、疾病或病況之嚴重度及疾病或病況之疾病或病況之過程、是否投與藥劑來達成預防或治療目的、 上一次治療、個體的臨床病史及對化合物之回應、及主治醫師的判斷。該化合物適宜以一次地或分一連串治療投與給個體。較佳地，期望確定劑量-反應曲線及先在活體外、且接著於人中進行測試之前在有用的動物模型中之本發明醫藥組合物。
於一個態樣中，本發明提供治療心血管疾病或病症、代謝症候群、急性內毒素血症及敗血症、及胰島素相關病症之方法。於一個實施例中，該方法包括投與有需要之個體治療有效量之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、或IL-22激動劑。於另一個態樣中，本發明提供用於延遲或減慢心血管疾病或病症、代謝症候群、及與胰島素相關之疾病之進展的方法。於一個實施例中，該方法包括投與確診患有該疾病、病況、或病症之個體有效量之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、或IL-22激動劑。於另一個態樣中，本發明提供用於預防心血管疾病或病症、及與胰島素相關之疾病之標誌的方法。於一個實施例中，該方法包括投與處在罹患疾病、病況、或病症風險之個體有效量之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、或IL-22激動劑，其中該IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質、或IL-22激動劑可有效對抗疾病、病況、或病症之標誌之發展。
心血管疾病及病況
於一個態樣中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑提供針對於個體中心血管疾病或病況之臨床及/或組織學及/或生化學及/或病理標誌(包括症狀及徵兆二者)之發展、或進展之預防(preventative/prophylactic)效應。於一個實施例中，該疾病或病況為動脈粥樣硬化。於一個實施例中，標誌包括動脈粥樣硬化斑塊形成及/或血管發炎。於另一個實施例中，該個體處在心血管疾病風險。一般而言，處在風險之個體在過去就已患有如本文定義之心血管疾病或病況，或將具有心血管疾病或病況之遺傳傾向性。
可藉由通常用於評估心血管疾病之各種評估測量治療心血管疾病或病況之療效。例如，可評估心血管健康。可藉由但不限於例如以下來評估心血管健康：血液測試(例如，總膽固醇、LDL-C、HDL-C、三酸甘油酯、C-反應性蛋白質、纖維蛋白原、高半胱胺酸、空腹胰島素、鐵蛋白、脂蛋白、LPS)、血壓、聽診、心電圖、心臟壓力測試、心臟成像(例如，冠狀導管檢查、超音波心圖、血管內超音波、正子放射斷層攝影、電腦斷層血管攝影、及磁共振成像)。
代謝症候群
於一個態樣中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑提供針對於個體中代謝症候群(或代謝病症或疾病)之臨床及/或組織學及/或生化學及/或病理標誌(包括症狀及徵兆二者)之發展、或進展之治療、預防效應。於一或多個實施例中，該個體處在代謝症候群之風險。
可藉由通常用於評估代謝症候群之各種評估測量治療代謝症候群之療效。例如，可測定肥胖。作為另一實例，可測定高血糖症、血脂異常、胰島素抗性、慢性脂肪組織發炎、及/或高血壓。可測量C-反應性蛋白質、IL-6、LPS、及纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑1中一或多者之水平之減低。可藉由相關技術中熟知的任何方法來進行該等測量。
與胰島素相關之疾病
就與胰島素相關之疾病而言，術語「治療」係指針對於該疾病之治療性治療及預防性措施二者，其中目標係預防或減慢(減少)標靶病理性病況或疾病。彼等需要該治療者包括已經患有與胰島素相關之疾病之其等及易罹患該種疾病之其等或欲於其中預防該疾病之其等。
於一個態樣中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑提供針對於個體中與胰島素相關之疾病之臨床及/或組織學及/或生化 學及/或病理標誌(包括症狀及徵兆二者)之發展、或進展之預防效應。於一個實施例中，該疾病為I型糖尿病、II型糖尿病、或妊娠糖尿病。於一個實施例中，病理或病理性標誌包括以下中之一或多者：由胰臟(例如，胰島細胞)產生出很少胰島素或不產生、胰島素抗性、及高血糖症。於另一個實施例中，該個體處在與胰島素相關之疾病風險。一般而言，處在風險之個體具有罹患與胰島素相關之疾病之遺傳傾向性，已暴露於觸發胰島細胞之自體免疫破壞之病毒(例如，Epstein-Barr病毒、柯薩奇病毒(coxsackievirus)、腮腺炎病毒或巨大細胞病毒)，為肥胖，為前期糖尿病(高於正常血糖水平)，或患有妊娠糖尿病。
可藉由通常用於評估該等疾病之各種評估來測定治療與胰島素相關之疾病之療效。例如，可藉由以下中之一或多者評估I型及II型糖尿病二者：糖化血紅蛋白測試(A1C)、定期血糖測試、及空腹血糖測試。亦可藉由測試血液中自體抗體及/或尿液中酮來評估I型。亦可藉由測試口服葡萄糖耐受來評估II型。
急性內毒素血症及敗血症
於一個態樣中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑提供針對於個體中急性內毒素血症、敗血症、或二者之臨床及/或組織學及/或生化學及/或病理標誌(包括症狀及徵兆二者)之發展、或進展之治療性、預防性效應。於一或多個實施例中，個體至少處在急性內毒素血症、敗血症、或二者之風險。
可藉由通常用於評估急性內毒素血症、敗血症、或二者之各種評估來測定治療急性內毒素血症、敗血症、或二者之療效。例如，可測量LPS或發炎性標誌之水平之減低。該等測量可藉由相關技術中熟知的任何方法進行。
傷口癒合
有多種方法可以測量傷口癒合。經常會拍攝影像以計算線性尺寸、周長及面積。NIH具有可從影像測量傷口面積之自由程式，影像J。可基於周邊朝向中心之遷移從初始癒合速率外推得最終癒合預後。此係使用許多數學方程式進行，其中最常見為修正的Gilman方程式。除了目測檢查之外，亦可藉由光譜分析方法或MRI幫助傷口癒合之測量。請參見：例如，Dargaville等人，Biosensors Bioelectronics，2013,41：30-42，Tan等人，2007，British J.Radiol.80：939-48。假若癒合緩慢/不適，則可取傷口邊緣之活檢體以排除或確定感染及惡性。於某些實施例中，可藉由IL-22-治療組及對照組傷口中傷口閉合間的比較來評估傷口癒合之加速或增進。於某些實施例中，傷口癒合之加速或增進相較於對照組加快或改善至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
於某些態樣中，本發明提供用於促進/加速/增進傷口於傷口中存在或不存在活動性感染、微生物污染或定植下癒合之方法。IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可用於治療受感染傷口或促進/加速/增進受感染傷口癒合。於某些實施例中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可用於在存在感染下治療傷口、或促進/加速/促進傷口癒合。於某些實施例中，IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可用於在存在微生物污染或定植與受感染風險下治療傷口或促進/加速/促進傷口癒合。於其他實施例中，需要傷口癒合治療之患者可為糖尿病性患者。因此，於某些實施例中，傷口為糖尿病性傷口，例如，糖尿病性足部潰瘍。於一些其他實施例中，傷口為受感染糖尿病性傷口，例如，受感染糖尿病性足部潰瘍。
於另一個態樣中，本發明提供例如用於任何上述治療方法中之包含提供於本文中之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑之醫藥調配物。於一個實施例中，醫藥調配物包含提供於本文中之 IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑及醫藥上可接受之載劑。於另一個實施例中，醫藥調配物包含提供於本文中之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑及至少一種例如如下文所述之其他治療劑。
本發明之IL-22 Fc融合蛋白質可單獨地或以與其他藥劑組合之方式用於治療。例如，本發明之IL-22多肽、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可與至少一種其他治療劑共同投與。於某些實施例中，一種其他治療劑為減低發炎反應之免疫抑制劑，包括但不限於甲胺蝶呤、TNF抑制劑、TNF拮抗劑、美沙拉嗪(mesalazine)、類固醇、地塞米松、及硫唑嘌呤、及其組合。減低發炎反應之適宜的其他治療劑包括但不限於5-胺基水楊酸(5-ASA)、巰基嘌呤(亦稱為6-巰基嘌呤或6-MP)或其組合。於某些實施例中，IL22多肽或IL-22 Fc融合可與一或多種可減低發炎反應(例如，5-ASA、6-MP、或TNF拮抗劑)之其他治療劑共同投與以治療IBD。於某些其他實施例中，IL22多肽或IL-22 Fc融合可於諸如伊曲珠單抗(etrolizumab)之整合素拮抗劑共同投與以治療IBD。於一個實施例中，IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質係與IL-22激動劑組合使用。
為了加速慢性傷口癒合(諸如)以治療糖尿病性足部潰瘍，IL-22多肽或其片段或變體、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑之投與可與一或多種其他傷口癒合藥劑組合地進行。適宜之其他傷口癒合藥劑包括但不限於生長因子(例如，EGF、FGF、IGF、PDGF、TGF、及VEGF)、神經生長因子(NGF)、血管生成因子(例如，HGF、TNF-α、血管生成素、IL-8、血管生成素1及2、Tie-2、整合素α5、基質金屬蛋白酶、氧化氮、COX-2)、血小板衍生生長因子(PDGF)家族之成員(例如，PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、及PDGF-D)、胰島素生長因子(IGF)家族之成員(例如，IGF-I、IGF-II)、轉變生長因子(TGF)家族之 成員(例如，TGF-α TGF-β)及合成代謝性氧(真空治療)。於某些實施例中，IL-22多肽或IL-22 Fc融合可與一或多種本文所述之其他傷口癒合藥劑及/或一或多種適用於局部投與之抗細菌劑或抗生素共同投與。請參見WO2006/138468，該案係以其全文引用方式併入本文中。於該等實施例中，抗生素可為硫抗生素，包括但不限於磺胺嘧啶銀(即使立復(silvadeen))。共同投與的一或多種其他藥劑可同時地、替代性地或依序地與IL-22多肽、IL-22融合蛋白質或IL22激動劑一起投與。
於其他示例性實施例中，假若標的係預防或治療心血管疾病或病況或代謝症候群，則投與IL-22多肽或其片段或變體、IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可結合或補充投與膽固醇減低藥劑，諸如斯他汀(statins)(例如，洛伐他汀(lovastatin)、羅舒伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、及辛伐他汀(simvastatin))、膽汁酸結合樹脂(考來替泊(colestipol)、考來烯胺蔗糖(cholestyramine sucrose)、及考來維侖(colesevelam))、愛西提米(ezetimibe)、或愛西提米-辛伐他汀組合物；抗-血小板藥劑，諸如環氧化酶抑制劑(阿斯匹靈(aspirin))、腺苷二磷酸(ADP)受體抑制劑(氯吡咯雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)、替格瑞洛(ticagrelor)、噻氯匹定(ticlopidine))、磷酸二酯酶抑制劑(西洛他唑(cilostazol))、醣蛋白IIB/IIIA抑制劑(阿昔單抗(abciximab)、埃替非巴肽(eptifibatide)、替羅非班(tirofiban))、腺苷再吸收抑制劑(雙嘧達莫(dipyridamole))、血栓素抑制劑(血栓素合成酶抑制劑、血栓素受體拮抗劑、特魯曲班(terutroban))；β阻斷劑，諸如烯丙洛爾(alprenolol)、布新洛爾(bucindolol)、卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、拉貝洛爾(labetalol)、納多洛爾(nadolol)、氧烯洛爾(oxprenolol)、噴布洛爾(penbutolol)、吲哚洛爾(pindolol)、普萘洛爾(propranolol)、索他洛爾(sotalol)、噻嗎洛爾(timolol)、杜仲皮 (eucommia bark)、阿西布特洛(acebutolol)、阿替洛爾(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、比索洛爾(bisoprolol)、塞利洛爾(celiprolol)、艾司洛爾(esmolol)、美托洛爾(metoprolol)、奈比洛爾(nebivolol)、布他沙明(butaxamine)、ICI-118,551、及SR 59230A；血管收縮素-轉化酶(ACE)抑制劑，諸如卡托普利(captopril)、佐芬普利(zofenopril)、含二羧酸鹽藥劑(依那普利(enalapril)、雷米普利(ramipril)、喹那普利(quinapril)、培哚普利(perindopril)、賴諾普利(lisinopril)、貝那普利(benazepril)、咪達普利(imidapril)、佐芬普利)、含膦酸鹽藥劑(福辛普利(fosinopril))、酪激肽(casokinins)、乳激肽(lactokinins)、乳三肽(lactotripeptides)(Val-Pro-Pro、及由益生菌瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)產生或衍生自酪蛋白之Ile-Pro-Pro)；鈣通道阻斷劑，諸如二氫吡啶(例如，氨氯地平(amlodipine)、阿雷地平(aranidipine)、阿折地平(azelnidipine)、巴尼地平(barnidipine)、貝尼地平(benidipine)、西尼地平(cilnidipine)、氯維地平(clevidipine)、依拉地平(isradipine)、依福地平(efonidipine)、菲洛地平(felodipine)、拉西地平(lacidipine)、樂卡地平(lercanidipine)、馬尼地平(manidipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼伐地平(nilvadipine)、尼莫地平(nimodipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、及普拉地平(pranidipine))、苯基烷基胺(例如，維拉帕米(verapamil))、苯并噻氮呯(例如，地爾硫(diltiazem))、米貝拉地爾(mibefradil)、苄普地爾(bepridil)、氟司必林(fluspirilene)、及芬地林(fendiline)；諸如高效能利尿劑(ceiling loop diuretics)(例如，呋塞米(furosemide)、依他尼酸(ethacrynic acid)、托拉塞米(torsemide)及布美他尼(bumetanide))之利尿劑、噻嗪(例如，氫氯噻嗪酸(hydrochlorothiazide acid))、碳酸酐酶抑制劑(例如，乙醯唑胺及醋甲唑胺(methazolamide))、留鉀性利尿劑(例如，醛固酮拮抗劑：螺內 酯、及上皮鈉通道阻斷劑：阿米洛利(amiloride)及氨苯蝶啶(triamterene))、及留鈣性利尿劑、及上述中任何者之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
對於與胰島素相關之疾病或代謝症候群，投與IL-22多肽或其片段或變體或IL-22 Fc融合蛋白質或IL-22激動劑可結合或補充投與不同治療劑。就I型糖尿病(胰島素依賴性糖尿病或IDDM)而言，將述於本文中之IL-22多肽、Fc融合蛋白質或激動劑係結合常規型胰島素替代療法(包括快速作用及長期作用之胰島素)、免疫抑制治療、胰島移植及幹細胞療法中之一或多者。於一個實施例中，常規型胰島素替代療法包括但不限於常規型胰島素(例如，Humulin R、Novolin R)、魚精蛋白鋅胰島素(insulin isophane)(例如，Humulin N、Novolin N)、賴脯胰島素(例如，Humalog)、天冬醯胺胰島素(例如，NovoLog)、甘精胰島素(例如，Lantus)及地特胰島素(insulin detemir)(例如，Levemir)。於其他實施例中，胰島素替代療法進一步包括普蘭林肽(pramlintide)(Symlin)。
就II型糖尿病(非胰島素依賴性糖尿病或NIDDM)或代謝症候群而言，可將述於本文中之IL-22多肽、Fc融合蛋白質及激動劑與胰島素替代療法(如上所述)：減低肝臟生成葡萄糖之藥劑、刺激生成胰腺及釋放胰島素之藥劑、阻斷酵素分解碳水化合物或增加胰島素敏感性之藥劑組合。於一個實施例中，減低產生葡萄糖之藥劑為二甲雙胍(metformin)(例如，Glucophage、Glumetza)。於另一個實施例中，刺激產生胰腺及釋放胰島素之藥劑為格列吡嗪(glipizide)(例如，Glucotrol、Glucotrol XL)、甘布若(glyburide)(例如，DiaBeta、Glynase)及格列美脲(glimepiride)(例如，Amaryl)。於一個其他實施例中，阻斷酵素分解碳水化合物或增加胰島素敏感性之藥劑為吡格列酮(pioglitazone)(例如，Actos)。於另一個實施例中，可將IL-22多肽、 Fc融合蛋白質及激動劑與一種以下二甲雙胍之替代：西他列汀(sitagliptin)(例如，Januvia)、沙西列汀(saxagliptin)(例如，Onglyza)、瑞格列奈(repaglinide)(例如，Prandin)及那替格列(nateglinide)(例如，Starlix)、艾塞那肽(Exenatide)(例如，Byetta)及利拉魯肽(liraglutide)(例如，Victoza)組合。於另一個實施例中，可將IL-22多肽、Fc融合蛋白質及激動劑與口服低血糖藥例如磺醯脲組合。
就妊娠糖尿病或代謝症候群而言，將述於本文中之IL-22多肽、Fc融合及激動劑與口服血糖控制藥療組合。於一個實施例中，該藥療為甘布若。
組合療法可提供「協同」及證實「協作」，亦即，在使用的活性成分併在一起之情況下所獲得之效應大於藉由分開地使用該等化合物獲得之總體效應。在活性成分：(1)係經共調配及以經組合之單位劑型調配物形式同時地投與或遞送；(2)係藉由交替或連續方式呈個別調配物形式遞送；或(3)係藉由一些其他方案之情況下，可達成協作效應。在以交替療法遞送之情況下，可在化合物依序地例如藉由個別針筒中之不同注射投與或遞送情況下達成協同效應。一般而言，於交替療法期間，各種活性成分之有效劑量係依序(亦即，按照序列地)投與，而在組合療法中，兩種或更多種活性成分之有效劑量係併在一起投與。
上述之該等組合療法包含組合投藥(其中兩種或更多種治療劑包含於相同或不同調配物中)、及分開投藥，於該情況中，本發明之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質之投與可在投與一或多種其他治療劑之前、同時、及/或之後發生。於一個實施例中，IL-22 Fc融合蛋白質之投與及另一種治療劑之投與彼此在約一個月、或約一週、兩週或三週、或約一天、兩天、三天、四天、五天、或六天內發生。
本發明之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質(及任何其他治療劑)可 藉由包括非經腸、肺內、局部及鼻內之任何適宜方式投與，及若需要用於局部治療、則可藉由病竈內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內、或皮下投與。給藥可藉由任何適宜途徑，例如，藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，部分地取決於投藥為短期或長期。本文包括包括(但不限於)在不同時間點之單次或多次投藥、快速注射投藥、及脈輸注之各種給藥時程。
本發明之IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質將以符合優良醫藥實務之方式調配、劑量加入、及投與。本文中之考慮因素包括所治療之特定疾病、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病況、疾病之病因、遞送藥劑之部位、投藥方法、投藥期程、及醫藥專業者已知的其他因素。IL-22多肽或IL-22 Fc融合蛋白質不必需(然可視需要)與一或多種目前用於預防或治療所述疾病之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量係取決於存於調配物中之融合蛋白質的量、疾病或治療之類型、及上文所述之其他因素。其等一般以相同劑量及藉由本文所述投藥途徑、或本文所述劑量之約1至99%、或以任何劑量及藉由經驗上/臨床上判定為適宜之任何途徑使用。
對於疾病之預防或治療而言，本發明之IL-22 Fc融合蛋白質之適宜劑量(在單獨地或以與一或多種其他額外治療劑組合方式使用之情況下)將取決於所治療之疾病之類型、Fc區之類型、疾病之嚴重度及病程、是否投與融合蛋白質來達成預防或治療目的、上一次治療、患者的臨床病史及對IL-22 Fc融合蛋白質之回應、及主治醫師的判斷。IL-22 Fc融合蛋白質適宜以一次地或在一連串治療期間投與患者。取決於疾病之類型及嚴重度，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg至10mg/kg)或約0.1μg/kg至1.5mg/kg(例如，0.01mg/kg至1mg/kg)IL-22 Fc融合蛋白質可係無論(例如)藉由一或多次個別投與、或藉由連續輸注之候選用於投與患者之初始劑量。一種典型的日劑量之範圍可在約 1μg/kg至100mg/kg或更大，取決於上述因素。就數天或更長時間期內之重複投藥而言，取決於病況，一般將會持續治療直到疾病症狀之所預期抑制發生。IL-22 Fc融合蛋白質之一種示例性劑量將在自約0.05mg/kg至約10mg/kg範圍內。某些其他劑量包括約0.01mg/kg至約10mg/kg、約0.02mg/kg至約10mg/kg、及約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍。因此，可投與患者約0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.03mg/kg、0.04mg/kg、0.05mg/kg、0.06mg/kg、0.07mg/kg、0.08mg/kg、0.09mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、3.0mg/kg、4.0mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)中之一或多種劑量。對於局部傷口癒合，可投與患者約0.001mg/cm2至約10mg/cm2傷口面積、約0.05mg/cm2至約5mg/cm2傷口面積、約0.01mg/cm2至約1mg/cm2傷口面積、約0.05mg/cm2至約0.5mg/cm2傷口面積、約0.01mg/cm2至約0.5mg/cm2傷口面積、約0.05mg/cm2至約0.2mg/cm2傷口面積、或約0.1mg/cm2至約0.5mg/cm2傷口面積(或其任何組合)中之一或多種劑量。於某些實施例中，可投與患者約0.01mg/cm2、0.02mg/cm2、0.03mg/cm2、0.04mg/cm2、0.05mg/cm2、0.06mg/cm2、0.07mg/cm2、0.08mg/cm2、0.09mg/cm2、0.1mg/cm2、0.15mg/cm2、0.2mg/cm2、0.25mg/cm2、0.3mg/cm2、0.4mg/cm2、或0.5mg/cm2傷口面積中之一或多種劑量。該等劑量可斷續性地(例如，每週或每隔三週)投與(例如，以致患者接受IL-22 Fc融合蛋白質約兩種至約二十種，或例如約六種劑量)。可投與初始較高負載劑量，接著係一或多種較低劑量。然而，其他劑量療法可係有用的。可輕易地藉由習知技術及分析監測該療法之進展。類似之劑量範圍可應用於IL-22多肽。
應明瞭任何上述調配物或治療方法可改用本發明之偶聯物替代 IL-22 Fc融合蛋白質或除了IL-22 Fc融合蛋白質之外亦可使用本發明之偶聯物來進行。
J.製品
於本發明之另一個態樣中，提供一種包含適用於治療、預防及/或診斷上述疾病之物質的製品。該製品包括容器及於該容器上或與該容器相關聯之標籤或包裝插頁。適宜之容器包括(例如)瓶、小瓶、針筒、IV溶液袋等等。容器可由諸如玻璃或塑料之多種材料形成。容器係保持可有效用於治療、預防及/或診斷病況之單獨或與另一種組合物組合之組合物及可具有無菌接入端口(例如，容器可為具有皮下注射針可刺穿之塞之靜脈內注射溶液袋或小瓶)。組合中之至少一種活性劑為本發明之IL-22 Fc融合蛋白質。標籤或包裝插頁指明組合物係用於治療所選擇的病況。除此之外，製品可包括(a)其中裝納組合物之第一容器，其中該組合物包含本發明之IL-22 Fc融合蛋白質；及(b)其中裝納組合物之第二容器，其中該組合物包含另一種細胞毒性劑或另含治療劑。本發明該實施例中之製品可進一步包括指明組合物可用於治療特定病況之包裝插頁。或者或另外，製品可進一步包括含有諸如抑菌注射用水(BWFI)、經磷酸鹽緩衝之鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及葡萄糖溶液之醫藥上可接受之緩衝液的第二(或第三)容器。其可進一步包括從商業及使用者觀點上期望之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭、及針筒。其可進一步包括從商業及使用者觀點上期望之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭、及針筒。
應明瞭任何上述製品可改為包含本發明之偶聯物替代IL-22 Fc融合蛋白質或除了IL-22 Fc融合蛋白質之外亦可包含本發明之偶聯物。
K.篩選檢定及動物模型
如實例部分中所例示，可以多種基於細胞之分析法及IBD、心血 管疾病或病況及代謝症候群之動物模型來評估IL-22、IL-22 Fc融合蛋白質及IL-22激動劑。
重組(轉基因)動物模型可藉由利用獲得轉基因動物之標準技術引入所述基因之編碼部分至所述動物之基因組中進行改造。可充作用於轉基因操縱之標靶之動物包括但不限於小鼠、大鼠、兔、天竺鼠、羊、山羊、豬、及非人靈長類動物(例如，佛猴、黑猩猩及其他猴)。相關技術中已知的可引入轉基因至該等動物中之技術包括原核酸(pronucleic)微量注射(Hoppe與Wanger，美國專利案第4,873,191號)；轉移至胚系中之逆轉錄介導之基因轉移(例如，Van der Putten等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82，6148-615[1985])；胚幹細胞中之基因靶向(Thompson等人，Cell 56，313-321[1989])；胚胎之電穿孔(Lo,Mol.Cell.Biol.3,1803-1814[1983])；精子介導之基因轉移(Lavitrano等人，Cell 57,717-73[1989])。關於評論，請參見：例如，美國專利案第4,736,866號。
就本發明之目的而言，轉基因動物包括彼等僅在其細胞之一部分中帶有轉基因者(「鑲嵌動物」)。轉基因可呈單一轉基因、或呈例如頭-頭或頭-尾串接之多聯體(concatamer)整合。亦可藉由遵循(例如)Lasko等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89，623-636(1992)之技術，選擇性地引入轉基因形成特定的細胞類型。
可藉由標準技術監測轉基因動物中轉基因之表現。例如，可利用南方墨點分析法或PCR擴增來驗證轉基因之整合。可接著利用諸如原位雜交、北方墨點分析法、PCR、或免疫細胞化學法之技術來分析mRNA之表現程度。
可進一步例如藉由組織學檢查及/或成像或超音分析以確定動脈粥樣硬化斑塊負荷及血管功能(參見下述實例)來檢查動物之適當病理(諸如心血管疾病病理)之徵兆。亦可進行阻斷實驗，其中藉由IL-22、 IL-22 Fc融合蛋白質或候選激動劑處理轉基因動物以確定對動脈粥樣硬化斑塊形成造成影響之程度，包括尺寸、數量、及斑塊形成之程度。於該等實驗中，投與動物與本發明之多肽結合之阻斷抗體及監測所述之生物效應。
或者，因編碼IL-22多肽之內源基因及改變之編碼引入至動物胚細胞中之相同多肽之基因組DNA之間之同源重組，而導致「基因剔除」動物可經構造成具有編碼IL-22之缺陷或改變基因。例如，可使用編碼IL-22之cDNA依照確認的技術來選殖編碼IL-22之基因組DNA。編碼IL-22之基因組DNA之一部分可經缺失或改由另一基因(諸如，編碼可用於監測整合之可選擇標記物之基因)替換。通常，未經改變之側DNA(在5'及3'端)之數千個鹼基包含於載體中[參見(例如)Thomas與Capecchi，Cell，51：503(1987)，描述同源重組載體]。將載體引入至胚干細胞系中(例如，藉由電穿孔)及選擇引入之DNA已經與內源DNA同源重組之細胞[參見(例如)Li等人，Cell，69：915(1992)]。接著將所選擇之細胞注射至動物(例如，小鼠或大鼠)之胚胞中以形成聚集嵌合體[請參見(例如)Bradley，Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells：A Practical Approach，E.J.Robertson編輯(IRL，Oxford，1987)，第113-152頁]。可接著將嵌合胚胎植入適宜之假懷孕磁性foster動物中及胚胎足月發育以建立「基因剔除」動物。可藉由標準技術鑑別出其胚細胞中承載同源重組DNA之子代及用於培育該動物之所有細胞包含同源重組DNA之動物。基因剔除動物可基於(例如)其防禦某些病理病況之能力及基於其因缺乏IL-22多肽所致之病理病況之發展進行特徵分析。
因此，可進一步在鼠科IL-22基因剔除小鼠中研究IL-22或其可能激動劑之生物活性。
前述書面論述被認為足使熟習此項技術者可實施本發明。僅基 於示例性目的而提供以下實例，而非意圖以任何方式限制本發明之範疇。實際上，熟習此項技術者從前述論述當可明瞭本發明之除本文所顯示及所描述之其等以外之各種修改，及落在隨附申請專利範圍之範疇內。
實例
隨後為本發明之方法及組合物之實例。應明瞭考慮到提供於上文之一般描述，則可實施各種其他實施例，而該等實例並非意圖限制申請專利範圍之範疇。
實例1 IL-22 Fc融合蛋白質之選殖、表現及純化
一般分子選殖及蛋白質純化技術可應用於下述實驗中。
i．選殖
從人結腸cDNA庫(Genentech)選殖全長人類IL-22。基於本實驗利用重疊PCR技術使用以下引物，而產生表現人類IgGI或IgG4 IL-22Fc融合蛋白質之構造：Ih-22 Fc融合IgG1正向引物：TTGAATTCCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTGGAGTACATTCAGCGCCCATCAGCTCCCACTGCAGGC(SEQ ID NO：52),IL-22 Fc融合IgG1反向引物AGGTCGACTCATTTACCCGGAGACAGGGAGAGG(SEQ ID NO：53)、IL-22 Fc融合IgG4正向引物：TTGAATTCCACCATGGGATGGTCATGTATCATCCTTTTTCTAGTAGCAACTGCAACTGGAGTACATTCAGCGCCCATCAGCTCCCACTGCAGGC(SEQ ID NO：54),IL-22 Fc融合IgG4反向引物：AGGTCGACTTATTTACCCAGAGACAGGGAGAGG(SEQ ID NO：55)。PCR產物係經選殖至表現載體pRK5.sm(Genentech)中。在細胞中裂解前導序列(或信號肽)及成熟IL-22 Fc融合不包含前導序列。藉由包含連接子序列之引物選殖帶有人工連接子之純系。進一步藉由突變PCR使用以下引物引入N297G突變：IgG1 N297G正向引物：GCG GGA GGA GCA GTA CGG AAG CAC GTA CCG TGT GG(SEQ ID NO：56)、IgG1 N297G反向引物：CCA CAC GGT ACG TGC TTC CGT ACT GCT CCT CCC GC(SEQ ID NO：57)、IgG4 N297G正向引物：ACA AAG CCG CGG GAG GAG CAG TTC GGA AGC ACG TAC CGT GTG GTC AGC GTC(SEQ ID NO：58)、及IgG4 N297G反向引物：GAC GCT GAC CAC ACG GTA CGT GCT TCC GAA CTG CTC CTC CCG CGG CTT TGT(SEQ ID NO：59)。所有IL-22Fc構造之序列係由DNA定序化獲得證實。
ii．細胞培養
CHO細胞在設定於37℃及5% CO2之培養箱中藉由每週裂解培養物2次達成0.3×106個細胞/ml，生長於懸浮液中。
iii．IL-22 Fc融合蛋白質至CHO細胞中之之轉染及蛋白質表現
以1.23×106個細胞/ml將CHO細胞接種於720mL培養基中。轉染複合物(1.6mL PEI+800μg DNA含於80mL無血清培養基中)在添加至該等細胞之前先培養10min。於33℃、5% CO2下培養該培養物24小時。在進一步培養14天之後，藉由離心收穫培養之上清液。使用MabSelect Sure(GE Healthcare)蛋白質A親和管柱純化瞬時CHO處理之培養基(上述上清液)。中和低pH下之洗脫物至pH5.0及進一步藉由凝膠過濾管柱(GE Healthcare)純化。峰值洗脫物組併在一起，進行調配及無菌過濾。由如下文論述之質譜法來分析融合蛋白質之Fc區之糖基化狀態。
iv．表現IL-22 Fc融合蛋白質之穩定純系之建立
藉由轉染使用Lipofectamine 2000 CD(Invitrogen)將編碼IL-22 Fc融合蛋白質之質體引入CHO細胞中。於轉染之後，將該等細胞離心及再接種於無血清選擇性培養基中。基於IL-22 Fc之分泌來選擇分離物。接著將如藉由ELISA識別具有最高效價之純系組併在一起及擴大 規模用於生產。
v．IL-22 Fc融合蛋白質於大腸桿菌中之表現
使大腸桿菌發酵進料均質化及經過處理達成0.4% w/w PEI pH 6.7接著進行離心。使用MabSelect Sure(GE Healthcare)蛋白質A親和管柱純化離心濾液(centrate)。中和低pH下之洗脫物至pH 5.0及進一步藉由離子交換層析純化。將該等部分組併在一起，進行調配及無菌過濾。
實例2 IL-22 Fc融合蛋白質在Fc區中展現高百分比之無岩藻糖基化
於本研究中，研究IL-22 Fc融合蛋白質之Fc部分之糖基化狀態。於37℃下藉由胰蛋白酶(1：25胰蛋白酶：IL-22 Fc，w/w)消化源自於瞬時轉染之細胞之經純化IL-22 Fc融合蛋白質樣本達2h。利用三氟乙酸酸化該等樣本達到0.1%之最終濃度及注射至經在水中之0.05% TFA平衡之受熱C18管柱(PLRP-S，1000A 8μm，Agilent)上。藉由線性乙腈梯度(5至60%)歷時20min時間分離得消化產物。將管柱直接連接至Agilent 6520B TOF質譜分析儀之電噴霧孔口及在陽離子模式中確定洗脫餾分塊。由於該等融合構造之Fc部分於該等消化條件下穩定於胰蛋白酶中，故可進行各種IL-22融合之碳水化合物狀態間之直接比較。
如圖2中所顯示，IL-22 IgG1及IgG4 Fc融合蛋白質均顯示異常高的無岩藻糖基化程度。就典型單株IgG1抗體之糖基化Fc而言之預期塊將為圖2組A之標記為53296、53458及53620Da之其等。通常，各Fc臂上之核心碳水化合物物質分別係由以下碳水化合物組合物：4份N-乙醯基葡萄糖胺、3份甘露糖及1份岩藻糖糖物質(如於組A中標記為53296之峰值上)組成。一或兩種半乳糖糖之添加將產生出分別標記為53458及53620Da之峰值(組A)。檢測到可忽略不計量的包含在一個Fc臂(「-1岩藻糖」)上缺失岩藻糖之糖部分之分子。
令人意外地，CH2域經過糖基化之不同構造之人類IL-22 IgG1 Fc 融合蛋白質均展現高無岩藻糖基化程度，包括在一個Fc臂(「-1岩藻糖」)及兩個Fc臂(「-2岩藻糖」)上缺失岩藻糖之糖部分。參見圖2，組B至D。該等無岩藻糖基化分子包含所觀察到總物質之高至30%。無岩藻糖基化可增加IL-22 IgGI Fc融合之非所欲效應子活性。
已知IgG4具有相較IgG1低的效應子功能。出人意料地，質譜分析之結果亦顯示人類IL-22 IgG4 Fc融合蛋白質之經胰蛋白酶消化之Fc區中之「-1岩藻糖」及「-2岩藻糖」糖基化物質。該等無岩藻糖基化分子包含所觀察到總物質之大於50%。(圖2組E)。無岩藻糖基化抗體具有增加甚多的ADCC或CDC細胞毒性活性，係為該等IL-22 Fc融合蛋白質非所需之性質。
隨後，一種包含IgG1 Fc及另一種包含IgG4 Fc之兩種其他IL-22 Fc分子係經構造成Fc中通常將進行糖基化(N297)之殘基經突變成甘胺酸(N297G)因而可防止正常核心糖之黏附。顯示該等分子在其Fc部分上完全缺乏任何糖及基於其胺基酸序列，兩種分子均具有其Fc分子量預期值(圖2，組F及G)。
總言之，人類IL-22 Fc融合蛋白質(IgG1或IgG4 Fc融合)之Fc區顯示高無岩藻糖基化程度，此會導致增加之ADCC或CDC活性，係用作IL-22治療劑時所不需要之性質。因此，於其他研究中對非糖基化變體進行測試。
實例3 IL-22 IgG1及IgG4 Fc融合蛋白質活體外活性檢定
IL-22接合IL-22受體複合物及活化Jak-Stat信號傳導路徑。STAT3活化乃是IL-22介導之信號傳導路徑中之主要事件。於本實驗中，利用螢光素酶受體分析來測量IL-22 Fc功能蛋白質之活體外活性。HEK293細胞係經改造成可過度表現人類IL-22受體複合物IL22R1及IL10R2。在第1天，將1×105個293細胞接種於含0.4ml杜貝卡氏改良依格培養基(Dulbecco's modified Eagle Medium)(DMEM)+10%胎牛血清 (FBS)之24孔盤中。在第2天，藉由STAT3-驅動螢光素酶受體及海腎(Renilla)螢光素酶對照組使用Lipofectamine 2000(Invitrogen)於0.1ml降低血清培養基(具有減低至少50%之降低血清之Gibco Poti-MEM)中轉染該等細胞。STAT3螢光素酶受體構造包括包含sis誘導元素(SIE)及螢火蟲螢光素酶受體基因之串接重複之STAT3-反應性螢光素酶受體構造。在第3天，由瞬時或穩定CHO純系中任一者產生之IL-22 Fc融合蛋白質經0.5ml培養基滴定為不同濃度，及添加於經轉染細胞頂部。在第4天，移去培養基及利用100μl被動裂解緩衝液(由雙重螢光素酶受體1000分析系統供應)裂解該等細胞。二十微升細胞溶胞物傳送至96孔盤中及藉由雙重螢光素酶受體1000分析系統於照度計(Promega)上進行分析。基於劑量相依活性以GraphPad Prism軟體(La Jolla，CA)計算得EC50。不同IL-22 Fc融合構造之EC50值顯示於下表2中。
表2
Figure 103109979-A0202-12-0122-8
大數目之IL-22 Fc融合蛋白質係經具不同長度及序列之連接子構造以研究各設計之活性、穩定劑及產率。具有天然IgG序列之連接子較適合減低免疫原性之潛在風險至最低；然而，本發明係關於及包含具有顯示良好活體外活性之外源序列之連接子。
在STAT3螢光素酶分析法中對包含DKTHT連接子(SEQ ID NO：32)之IL-22 IgGI Fc融合蛋白質進行測試。參見表2。為提高融合蛋白質之EC50，使連接子長度從5個增加至10個包含天然IgG1序列EPKSCDKTHT(SEQ ID NO：33)之胺基酸。然而，所得IL-22 Fc融合蛋白質展現減低之活體外活性。參見表2。令人意外地，連接子長度之甚至增加一個胺基酸VEPKSCDKTHT(SEQ ID NO：34)之增加可增加IL-22融合蛋白質之活性。連接子長度之進一步的增加導致活性之進一步的增加。參見表2。
於個別實驗中，EPKSCDKTHT中之Cys係經改變為Ser以消除二硫鍵形成之可能性。如表2中所顯示，具有連接子EPKSSDKTHT(SEQ ID NO：40)之IL-22 Fc融合顯示相較於具有Cys殘基之親本連接子序列增加之活性。較長之連接子序列併入上游序列(至IgG1之CH1域中)進一步增加活性。具有N297G突變之構造相較於野生型對應物展現近似的EC50值。選擇IL-22 IgG1(N297G)Fc融合蛋白質(SQE ID NO：12)及IL-22 IgG4(N297G)Fc融合蛋白質(SEQ ID NO：8)以用於進一步研究。
藉由穩定純系表現之人類IL-22 IgG1(N297G)Fc融合蛋白質(SQE ID NO：12)或IL-22 IgG4(N297G)Fc融合蛋白質(SEQ ID NO：8)之活體外活性係以相同的分析法進行測試。圖4中之資料顯示代表性結果。IL-22 IgGI及IgG4 Fc融合蛋白質二者均以劑量相依方式誘導STAT3活性。IL-22 Fc融合蛋白質二者顯示相似的效價。藉由經瞬時轉染之細胞表現之IL-22 Fc融合蛋白質顯示相似的結果(資料未顯示)。作為對 照組，產生於CHO細胞中之天然IL-22蛋白質係以相同分析法進行測試，及展現較IL-22 Fc融合蛋白質高兩至三倍的效價。
總言之，IgGI及IgG4 IL-22 Fc融合蛋白質二者展現經STAT3螢光素酶分析證實之活體外活性。此外，證實具有具不同長度及序列之連接子之IL-22 Fc融合蛋白質可活化IL-22R介導之螢光素酶活性。
實例4 IL-22 Fc融合蛋白質可減低小鼠中DSS誘導性結腸炎之症狀
聚葡萄糖硫酸鈉(DSS)誘導性結腸炎為通常為人所接受之小鼠結腸炎模型。含DSS水之口服投與快速地損傷結腸上皮細胞及導致實質的體重減輕及表徵係病理學家免疫組織化學(IHC)染色或組織學臨床得分之結腸上皮結構破壞。於概念研究之該證據中，測試IL-22 Fc融合蛋白質對DSS誘導性結腸炎之效應。
於C57BL/6小鼠中，自第0天開始連續五天地利用包含3.5% DSS之飲用水誘發結腸炎。為人類IL-22 Fc融合蛋白質之替代之小鼠IL-22 IgG2a Fc(SEQ ID NO：60)係在第-1、第1、第4、及第6天透過腹膜內途徑於5mg/Kg下投與。每天測量動物的體重。在第8天，殺死所有動物及透過IHC染色及手冊組織學得分來研究結腸組織學。
如圖5中所顯示，DSS誘導性結腸炎係與顯著體重減輕(圖5A)、結腸上皮損傷及結腸發炎(圖5B)及高組織學得分值(圖5C)相關聯。IL-22Fc治療顯著防止體重減輕，恢復上皮完整性，消除發炎及減低組織學得分值。參見圖5。IL-22 Fc之療效超過地塞米松之療效，地塞米松為引起本研究中顯著體重減輕之護理之類固醇標準(SOC)。
實例5 IL-22 Fc融合蛋白質藥物動力學研究
由機構的動物護理及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)(IACUC)核可進行於馬來猴中之試驗安全性及PKPD研究。該研究係在查爾斯河實驗室(Charles River Laboratories)(CRL)臨 床前服務(Reno，NV)下進行。將來自CRL庫之總計15隻雄性馬來猴(4至5kg)隨機分為五個組(n=3/組)。組1中之動物在第1及第8天靜脈內(i.v.)投與對照組媒劑。組2及組3中之動物在第1及第8天分別以0.15及1.5mg/kg一次i.v.全劑量注射地投與IL22-Fc IgG1。組4及組5中之動物在第1及第8天分別以0.15及1.5mg/kg一次i.v.全劑量注射地投與IL22-Fc IgG4。基於PK及PD分析而在不同時間點採集血清樣本直至第43天及藉由ELISA評估IL22-Fc之濃度。
對於馬來猴血清中人類IL-22-Fc之分析，將小鼠抗人類IL-22 mAb(Genentech)用作用於ELISA分析中之捕獲抗體。重組IL-22 Fc融合蛋白質用於建立標準曲線。於利用在檢定緩衝液中稀釋至500ng/mL之與HRP偶聯之抗人類-Fcγ-泛鼠科mAb(Genentech)之1小時的培養期間檢測到與盤結合之IL-22-Fc。於最終洗滌之後，添加四甲基聯苯胺過氧化物酶受質(Moss,Inc.，馬里蘭州帕薩迪納)，顯色15分鐘，及利用1M磷酸終止該反應。使用微盤讀取器於450nm在620nm參照下讀取該等盤。藉由IL-22 Fc融合標準曲線之四參數擬合計算得IL-22 Fc融合之濃度。
對於PK資料計算，將研究第1天換算成PK第0天以指明劑量投藥之開始。生命中給藥天數後的所有時間點係經計算為研究天數減去1。使用2區室分析，WinNonlin®，5.2.1版(Pharsight；加州福尼亞州山景城)分析各動物之血清濃度資料。
IL22-Fc之血漿濃度顯示以短的分佈期及長的末端消除期在i.v.給藥(0.15mg/kg及1.5mg/kg)後呈二級指數式衰減。參見圖6。IL-22 Fc從中心區室線性消除之兩區室模型較佳地描述兩種劑量之藥物動力學特性，顯示在該等劑量範圍下可忽略不計的標靶介導處置。
藉由兩區室分析估計之最大血清濃度(C最大)及面積下血清濃度時間曲線(AUC)大致上係線性及成劑量比例。參見表3。成劑量比例動 力學顯示於所測試劑量下之IL-22R飽和。如圖6中所顯示，IL-22 IgG4 Fc融合出人意料地顯示相較IgG1 Fc融合慢2-倍的CL及相較IgG1 Fc融合高2-倍以上的暴露量。在不受特定機制限制下，IgG1融合之較快速清除率(CL)可係歸因於IgG1融合構造之較低穩定性所致，此乃因IL-22 IgG1 Fc融合之快2-倍以上的CL看來主要是由較大體積之分佈所驅動。4至5天的β半衰期在IgG1及IgG4融合之間係類似的。
Figure 103109979-A0202-12-0126-9
實例6 評估馬來猴中IL-22Fc之活體內活性
馬來猴(Macaca fascicularis)經靜脈內投與所示同型IgG1或IgG4於0.15mg/kg或1.5mg/kg之劑量下之IL-22 Fc融合。IL-22與IL-22受體之結合觸發包括血清澱粉樣A(SAA)、RegIII/胰腺炎相關蛋白質(PAP，亦稱為PancrePAP)、及脂多糖結合蛋白質(LPS-BP)之若干基因之表現。於本研究中，藉由測量SAA、PancrePAP、及LPS-BP之表現分析IL-22 Fc融合蛋白質活體內活性。在給藥前及後時程期獲得血清樣本，如圖所示。使用自Life Diagnostics(West Chester，PA)獲得之市售酶聯免疫吸收檢定(ELISA)套組(目錄號#3400-2)在血清中量化猴SAA之循環程度。使用由Dynabio(法國馬賽)製造之市售ELISA套組(目錄PancrePAP)在血清中量化RegIII/PAP之循環程度。
藉由利用經過驗證之ELISA來測定血清樣本中之脂蛋白結合蛋白質(LBP)水平。將生物素標記之脂蛋白(Enzo Life Sciences，紐約法明岱爾)塗佈於經鏈黴親和素塗佈之微量滴定盤(Thermos；Rockland,IL)上。重組人類LBP(R&D Systems,Inc.，明尼亞波利斯(Minneapolis)(MN))用作用於分析法中之標準品。利用抗-LBP小鼠單株抗體(Thermo，Rockland，IL)檢測結合之LBP分析物。檢測係使用與辣根過氧化物酶(HRP)偶聯的F(ab')2片段山羊抗小鼠IgG，Fc(Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA)。於添加3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)受質(Kirkegaard & Perry Laboratories，Gaithersburg，MD)後觀察色度信號。藉由添加1M磷酸終止反應及於450nm下使用650nm作為參照在分析盤讀取器(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上測量吸光度。所有ELISA樣本係依照製造商規格完成及以二重複之單次稀釋或以單重複之四個連續稀釋製得及從標準曲線獲得濃度內插值。記錄各樣本之平均值。
如圖7中所顯示，藉由IL-22Fc在活體內誘導SAA、LPS-BP、及RegIII/PAP血清蛋白質水平。於非人靈長類動物在活體內觀察到劑量相依性反應，表明IL-22R接合及顯示藉由IL-22Fc之飽和。於大多數情況中，在第二次給藥後24小時未觀察到血清蛋白質水平之增加，顯示血清SAA、LPS-BP、及RegIII/PAP蛋白質已達到最大水平。所有這三種蛋白質之血清水平在35天的恢復期間緩慢地減低，在大多數動物中，會恢復至基線。例外是IgG4高劑量組中之RegIII/PAP水平，其看起來在整個42天的過程中保持較高。此反映IL-22 IgG4 Fc融合蛋白質相較IL-22 IgG1 Fc融合蛋白質提高之PK及增加之AUC暴露量。
實例7-易於致動脈粥樣硬化之小鼠(Ldlr-/-Apobec1-/-)之IL-22治療
最新研究已顯示IL-22於宿主防禦致病原微生物中之作用。其對 黏膜組織穩衡作用及免疫性之有益效果讓吾等推斷得IL-22治療可緩解內毒素血症及其之包括致動脈粥樣硬化之血脂異常、全身性發炎之病理結果，最終減慢動脈粥樣硬化疾病及相關疾病(包括糖尿病)之進展。
為測試這種假說，藉由IL-22-Fc構造處理易於致動脈粥樣硬化之小鼠(Ldlr-/-Apobec 1-/-)。該等小鼠缺乏LDL受體及僅合成apoB100。該模型的獨特之處在於其係概括與人家族性高膽固醇血症相關聯之諸多病理生理學。明確言之，基於飼料飲食，該等小鼠發展出提高之LDL膽固醇(係具有類似於人類之膽固醇分佈之脂質性質)、及進行性斑塊形成。此外，Ldlr-/-Apobec-/-小鼠具有造成其包括胰島素抗性、全身性發炎、進行性斑塊負荷、及內皮細胞功能障礙之心血管疾病結果之可測量風險因子。在此吾等證實藉由IL-22-Fc融合蛋白質治療3個月可顯著地改良該等動物之心血管健康及減低動脈粥樣硬化進展。
材料及方法
小鼠IL-22-Fc構造 。用於本文中之IL-22-Fc構造及多肽通常為如圖32A中所顯示之小鼠IL-22-小鼠-Fc融合蛋白質(SEQ ID NO：73)(及如圖32B中所顯示之編碼其之DNA序列，SEQ ID NO：72)。藉由質體DNA之瞬時轉染，於CHO細胞中產生出蛋白質。融合蛋白質係藉由使細胞上清液行進於蛋白質A管柱之上接著進行離子交換層析以消除聚結物而純化。藉由將10mg/kg單劑量之IL-22-Fc注入C57B6小鼠中接著以特定時間間隔從小鼠獲得血清地估計血清半衰期。藉由夾層式ELISA使用抗IL-22 mAbs確定IL-22-Fc之血清濃度。對於使用Lrlr-/-Apobec1-/-雙基因KO(double KO)小鼠進行活體內研究而言，使用小鼠IL-22-Fc構造。雖然提出小鼠序列及已用於實例中，但預期於不同實施例中可改用人類序列替代小鼠序列。
小鼠研究 。在Genentech培育施設中培育Ldlr-/-Apobec1-/-雙基因 KO小鼠及WT C57BL/6小鼠係購自Jackson Laboratory。於無病原體動物施設中在21℃於標準12h照明/12h黑暗週期可隨意取得飼料：標準嚙齒動物飼料(Labdiet 5010，12.7%熱量來自脂肪)或高脂高碳水化合物水平飲食(Harlan Teklad TD.03584，58.4%熱量來自脂肪)及水下飼養該等小鼠。C57BLKS/J背景環境中之db/db小鼠為雌性及用於該研究中之其他小鼠均為雄性。小鼠IL-22-Fc或對照組IgG抗體係在6個月大的時候開始以50μg/週透過腹膜內(ip)途徑投與持續三個月(每週給藥總計12次)。
動脈粥樣硬化負荷之分析 。利用高解析度x射線微電腦化斷層攝影術以量化動脈粥樣硬化病灶體積及動脈粥樣硬化斑塊組成。動物係藉由吸入二氧化碳接著經左心室輸注10毫升磷酸鹽緩衝鹽水接著輸注10毫升10%中性緩衝福馬林被安樂死。將主動脈切下並浸入10%中性緩衝福馬林中維持至少24小時及傳送至含20%碘基x射線造影劑，Isovue 370(Bracco Diagnostics Inc.，新澤西州普林斯頓)之10%中性緩衝福馬林溶液維持至少12小時。於吸墨紙乾燥之後，主動脈係經輸注及浸入為低x射線強度背景造影介質之大豆油(Sigma-Aldrich，聖路易斯密蘇里州聖路易斯)中。使用μCT40(Sanco Medical，瑞士巴瑟爾斯多夫)以45kV之影像採集能、160μA之電流、300毫秒之整合時間(取三次平均值)及12微米之影像解析度地獲得微電腦化斷層攝影影像。利用Analyze(AnalyzeDirectInc.，堪薩斯來內克薩)藉由利用半自動化形態過濾分析所得影像及使用者係界定區域以確定物體體積及物體組成。
血管功能之評估 。藉由超音檢查股骨動脈之血流介導之血管擴張及硝酸甘油介導之血管擴張來確定血管功能。藉由2%異氟烷麻醉動物，及維持在37℃，以進行20分鐘的超音檢查。Nair用於自後肢之腹面移除毛髮及允許使用具有55百萬赫茲成像探針之 Vevo770(VisualSonics，加拿大多倫多)來超音成像。對於血流介導之血管擴張而言，採集股骨動脈之基線影像，接著使用橡皮筋作為暫時性海鞘(tunicate)以閉塞股骨動脈血流4分鐘。接著鬆開橡皮筋以再流股骨動脈及連續四分鐘每分鐘採集影像及使用製造商提供的軟體工具分析股骨動脈最大直徑。對於硝酸甘油介導之血管擴張而言，採集股骨動脈之基線影像接著經腹膜內注射投與20微克硝酸甘油(Baxter，迪爾菲爾德，IL)及連續四分鐘每分鐘採集影像及使用製造商提供的軟件工具分析股骨動脈最大直徑。
總膽固醇、三酸甘油酯及脂蛋白測定 。依製造商使用說明，利用Cholestech LDX分析系統(Inverness Medical，新澤西州普林斯頓)，使用新製血清樣本以測定總膽固醇、三酸甘油酯、及脂蛋白分佈。
血清脂多糖測定 。融化冷凍血清樣本及以無內毒素水稀釋100倍及在熱水浴中於90℃下培養10分鐘。接著依製造商使用說明使該等樣本行進於Endosafe-PTS系統(Charles River Laboratories，威爾明頓MA)上。
GTT：葡萄糖耐受試驗 。在給藥期結束時於空腹過夜(14h)後以1g/kg i.p.葡萄糖注射進行葡萄糖耐受試驗(GTT)。使用One Touch Ultra葡萄糖計測定葡萄糖水平。於研究中藉由個別地在4天適應期接著一週時間的測量期間將小鼠關在籠中以計算食物消耗。
血清細胞因子濃度之測定 。使用Luminex 23多色板(BioRad)由自動化方法來測得血清細胞因子濃度。部分結果獨立地藉由個別ELISA套組(R&D)獲得證實。藉由利用酵素反應測定總膽固醇及游離脂肪酸(FFA)(Roche)。
結果：
Ldlr-/-Apobecl-/-小鼠係準確地模擬致動脈粥樣硬化性脂蛋白代謝紊亂(dyslipedia)及對發炎挑戰敏感 。Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠模型展 現脂蛋白水平及人類中動脈粥樣硬化疾病之大量動脈粥樣硬化病灶特徵(Powell-Braxton等人(1998).Nat Med 4(8)：934-8)。Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠主動脈弓之顯微CT分析顯示動脈粥樣硬化疾病之徵兆，此可利用自動化影像處理技術基於所製得的包含上行主動脈、主動脈弓、下行主動脈及一部分頭肱動脈之樣本測得。該技術亦證實反映包括脂核、破裂斑塊區域之動脈粥樣硬化負荷之嚴重度及進展之局部變化之高異質程度及鈣化(圖8)。CT信號之異質性反映該等病灶之根本病理係與人類疾病之複雜斑塊病理一致的。為表徵該模型及證實其對飲食誘導性動脈粥樣硬化生成之敏感性，藉由高脂飲食或添加果糖至其飲用水(8% w/v)2個月中任何一種方式處理小鼠之群組。相較於基於標準飼料飲食之小鼠，Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠展現對該等膳食改變之敏感性，血清LDL僅適當地增加，而總動脈粥樣硬化負荷顯著增加(圖9)。此證實動脈粥樣硬化負荷之增加極有可能係歸因於發炎而非歸因於LDL之增加所致。此外，LPS挑戰(0.025mg/Kg)之急性低度發炎刺激導致Ldlr-/-Apobec1-/-對比wt對照組中促發炎標誌之顯著增加(圖10)。Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠亦暴露於長期LPS給藥(750ng，ip)持續8週及基於血清脂質譜及斑塊負荷進行評估。如圖11中所顯示，長期內毒素暴露導致血脂異常及較大的斑塊不穩定性。
於藉由IL-22-Fc處理之後，在Ldlr-/-Apobec1-/-小鼠中可觀察致動脈粥樣硬化性血脂異常及代謝症候群之症狀改善。該等小鼠基於飼料飲食發展出代謝症候群之特徵，包括胰島素抗性。就IL-22-Fc治療而言，空腹血糖相較於對照組減低及治療組中葡萄糖耐受相較於對照組改良(圖12)。因此，葡萄糖穩衡作用之提高係伴隨葡萄糖耐受(GTT)之標準化及空腹血糖之提高(圖12)。一如飽食TG水平(圖13B)，空腹及飽食高膽固醇血症均減輕(圖13A)及脂質譜提高(圖14)。血漿LPS水平於IL-22-Fc治療後減低(圖15)。除了血脂異常及胰島素敏化之減低 之外，觀察到藉由血管反應性測得之內皮功能之改善(圖16)。與血脂異常改善一致，斑塊體積之CT分析顯示主動脈弓中及頭肱動脈及主動脈瓣膜中總動脈粥樣硬化負荷之減低(圖17A至C)。脂質譜及胰島素抗性之改善並非係歸因於熱量攝入之減低，此乃因在7天時間期內測得食物攝入增加，不管發生於3個月的治療期間之體重之適當但統計上顯著之減低(圖18)。在3個月的治療方案期間對照組之體重不變而IL-22-Fc治療組顯示在研究開始及結束期間體重之顯著減低(圖18A)。在治療研究過程中於7天時間期內測得之平均日食物攝入在IL-22-Fc治療組中相較於對照組增加(圖18B)。
實例8-外周動脈疾病模型
藉由IL-22-Fc刺激IL-22調劑路徑以減慢動脈粥樣硬化進展係針對於患有心血管疾病及包括糖尿病及慢性腎病之相關疾病之個體之療法之有潛力的新穎形式。因為心血管疾病通常不受限於個體脈管系統之一個區域，故診斷為患有冠狀動脈疾病或處在罹患冠狀動脈疾病風險之個體亦被認為處在發展出或患有CVD之其他形式(諸如腦血管疾病、主動脈腸骨疾病、及外周動脈疾病)之風險。上文所述之相同方法可用於驗證IL-22用作使用小鼠外周動脈疾病模型之標靶。如上所述製造IL-22-Fc構造並評估。亦可使用所有的必需對照組。評估IL-22激動劑/拮抗劑及結果將驗證IL-22路徑用作用於藥物發現及開發之標靶。
使用基於股骨動脈接合以建立缺血性損傷之外周動脈疾病(PAD)模型。IL-22-Fc構造之療效係類似於上述程序(Couffinhal等人，Am.J.Pathol.152：1667(1998)；Takeshita等人，Lab.Invst.75：487(1996)；Isner等人，Human Gene Therapy7：959(1996))進行評估。為測試IL-22-Fc之調節該種外周動脈疾病之能力，採用以下實驗方案：a)使用嚙齒動物(如於上述方法中)，股骨動脈之一側係經拼接以對後肢肌肉 產生缺血性損傷(其他不受損傷之後肢機能作為對照組)；b)IL-22-Fc多肽(或其片段)係每週至少3×地經靜脈內及/或經肌肉內(在受損傷之肢體之處)於劑量範圍下遞送至該動物持續2至3週；及c)於接合後1、2、及3週之後收集缺血性肌肉組織以分析生物標誌及組織學。一般而言，用於評估之(上述)參數包括確定關於缺血之組織之活度及血管化，而較具體的評估參數可包括(例如)測量皮膚血流、皮膚溫度、及VIII因子免疫組織化學、及/或內皮鹼性磷酸酶反應。利用任何技術已知原位雜交技術來研究於缺血期間之多肽表現。亦在對側後肢之正常肌肉之另一側進行活組織檢查以用於用作對照組之分析。
或者，使用其他小鼠模型(Pownall等人US 2011/0118173 A1)。有若干種小鼠動脈粥樣硬化模型可用於測試抗粥樣硬化保護作用。該等小鼠動脈粥樣硬化模型包括apo A-I KO、apo E KO、胱硫醚β-合成酶及脂蛋白元E、及apo A-I/SR-BI雙基因KO。將藉由IL-22-Fc經注射、口服給藥、或活體外處理來處理動脈粥樣硬化之該等小鼠模型。經IL-22-Fc處理後血液膽固醇水平之測量可證實總血漿膽固醇立刻增加及neo HDL水平增加及於隨後呈現包含在數小時的適宜時間期內從外周組織提取之膽固醇之HDL之成熟形式。
實例9-重組IL-22 Fc於糖尿病性小鼠模型中之效應
於查看IL-22-Fc在代謝症候群中之效應之初始研究中，吾等注意到IL-22R KO小鼠更容易罹患飲食誘導性肥胖及胰島素抗性。於後續的實驗中，吾等觀察到經重組IL-22-Fc處理後之身體脂之肪損失。有鑑於該等資料，吾等選擇測試重組IL-22-Fc於糖尿病性小鼠模型中之作用。於本研究中評估諸如飽食及空腹葡萄糖、體重及葡萄糖及胰島素耐受之療效終點。
以重組IL-22-Fc或抗豬草抗體作為同型IgG對照處理小鼠(10隻動物/組)，每週給藥2次，持續3週(圖19)：
組1：db/db小鼠(BKS.Cg-Dock7(m)+/+Lepr(db)/J FAT)：抗-豬草抗體(50μg)
組2：db/db小鼠：重組IL-22-Fc(50μg)
組3：飲食誘導性肥胖(DIO)小鼠：抗-豬草抗體(50μg)
組4：飲食誘導性肥胖(DIO)小鼠：重組IL-22-Fc(50μg)
12週齡雌db/db購自Jackson Laboratory及用於本實驗中。於該研究之前先使小鼠在到來後適應(每日處理)7至10天及單獨關在籠中直到開始實驗。在天數-5至天數-1期間，透過尾巴刻痕採集血液(3至5μl)以進行每日基線葡萄糖測量。在第0天，藉由i.p.注射(150μl)(含於PBS中)，接著每週給藥兩次持續3週，投與蛋白質。再次透過尾巴刻痕採集血液(3至5μl)以進行第2、第4、第8、第10、第14、第18及第21天的葡萄糖測量。對於pK之測量，於麻醉下在第2、第7、第13及第20天透過眼窩採血採集30μl血液。
每週兩次地藉由腹膜內途徑投與重組IL-22-Fc或同型IgG對照組抗體持續三週。每隔2天測量體重及飽食葡萄糖直到第23天的研究結束及葡萄糖測量係透過尾巴刻痕進行及使用葡萄糖計測得(圖20A至B)。為了獲得飽食及空腹葡萄糖水平，在第10天，在清晨進行飽食葡萄糖測量及使兩個組之小鼠空腹4小時(h)繼而使用葡萄糖計進行葡萄糖測量(圖20C)。IL-22-Fc暴露導致db/db小鼠中之顯著葡萄糖減低效應。
於50μg/劑量下每週兩次以IL-22-Fc或IgG對照物處理2週後進行葡萄糖耐受試驗(GTT)。使該等小鼠空腹過夜(14h)。在清晨測量空腹葡萄糖水平及充作基線。測量體重及透過尾巴刻痕採集血液(3至5μl)以進行葡萄糖測量。1.5mg/Kg體重之葡萄糖溶液係經腹膜內投與及每隔30min進行葡萄糖測量。顯示於圖中之葡萄糖值係基於30、120、180及220min。在第20天空腹過夜後，於第21天再次進行GTT。每 天稱小鼠體重。所有該等組在第23天被安樂死及採集組織以進行組織學分析。IL-22-Fc之處理證實葡萄糖耐受及胰島素敏感性顯著改善(圖21)。
於50μg/劑量下每週兩次以IL-22-Fc或IgG對照物處理小鼠的第20天後進行胰島素耐受試驗(ITT)。使該等小鼠空腹4h及獲得基線葡萄糖水平。經腹膜內投與1mU/Kg體重及每隔30min透過尾巴刻痕監測血糖水平。為了計算得葡萄糖減低%，將4h空腹後的基線葡萄糖水平與100%標準化。證實IL-22-Fc處理可顯著改善胰島素敏感性，藉由胰島素耐受試驗測得(圖22A至B)。
IL-22R高度表現於胰臟中(尤其在腺泡細胞中)，然而，其於β胰島細胞中之表現情況仍不明。研究源自經IL-22 Fc或對照組蛋白質處理之db/db小鼠之胰臟中之胰島素信號。亦進行糖尿病性小鼠之組織學評估以評估胰島細胞中之胰島素表現及經IL-22-Fc處理之動物中之肝門脈周圍脂肪變性程度。於如前面報告之福馬林固定石蠟嵌入胰臟組織(Wu等人2011，Science translational medicine 3，113ral26,doi：10.1126/scitranslmed.3002669)上使用兔抗-胰高血糖素(Cell Signaling Technologies #2760)與與Alexa Fluor 555偶聯的山羊抗-兔二級抗體、或天竺鼠抗-胰島素(DAKO A0564)與與Alexa Fluor 647偶聯的山羊抗-天竺鼠二級抗體進行胰島素及胰高血糖素之免疫組織化學分析。藉由將胰島素正面積除以胰島面積減去核面積計算得每單位胰島面積之胰島素面積百分比。
IL-22-Fc似乎可增加db/db小鼠胰島中之胰島素表現(圖23A)及定量分析顯示胰島素信號強度(圖23B及圖24)及經IL-22-Fc處理之動物中之胰島素正面積(圖25)同時顯著增加，而IL-22 Fc並不增加胰高血糖素信號強度(圖23C)。胰島素正面積顯示以IL-22-Fc處理相較於以赫塞汀(Herceptin)對照物處理2.16倍之增加(95%置信區間，從1.25增加至 3.72)。胰島之個數及面積不受IL-22 Fc處理影響。然而，經IL-22 Fc處理之胰臟之每個胰島的β細胞面積及胰島素染色強度明顯增加(圖23及52)。
肥胖小鼠之胰臟β細胞顯示去顆粒及退化之徵兆(資料未顯示)。相較於未經處理之肥胖小鼠在經IL22處理之肥胖小鼠之β細胞中觀察到統計上顯著較高之胰島素染色(圖23A、B)。這種增加可能係歸因於儲存於IL22治療組中之胰島素之增加。儘管在經IL22處理之肥胖小鼠中看到較高胰臟胰島素水平，但在任一種飽食或空腹情況中該等小鼠中之血清胰島素水平實際上相較於未經IL22處理之肥胖小鼠減低(圖23D、E)。然而，經IL22處理之肥胖小鼠相較於未經處理之肥胖小鼠藉由以更類似基於飼料飲食之野生型小鼠之方式釋放胰島素回應地於葡萄糖(圖23F)。因此，IL22潛在性地藉由增進粒化及增進肥胖小鼠中胰島素釋放之控制機制地增進肥胖小鼠中之葡萄糖穩衡作用。
接著，研究IL-22 Fc對胰島素穩衡作用之效應。每週兩次地藉由IL-22 Fc處理餵食HFD之小鼠持續8週。結果顯示(圖23D及E)圖23F中呈現之資料顯示葡萄糖注射後第0或30min時小鼠中之胰島素水平。是經IL-22 Fc處理之餵食HFD之小鼠而不是對照組HFD小鼠藉由類似基於飼料飲食(標準飲食)之野生型小鼠增加血清胰島素水平地回應於葡萄糖注射。請參見圖23F。因此，IL-22增進肥胖小鼠中之葡萄糖穩衡作用及增進回應於葡萄糖之胰島素分泌。
作為比較，吾等研究IL-22受體KO小鼠及其對飲食誘導性肥胖(DIO)之感受性及胰島素抗性。於圖43及下文中描述IL-22 R KO小鼠。IL-22受體KO小鼠及同窩小鼠對照組小鼠自7週齡餵食60%高脂飲食持續10週。為評估高脂飲食(HFD)誘導性葡萄糖耐受，使小鼠空腹過夜及在第二天清晨進行葡萄糖耐受試驗。就本實驗而言，七週齡IL-22 R KO小鼠及同窩小鼠年齡匹配對照組動物(WT：充作野生型)餵食 60% HFD持續10週。小鼠經腹膜內注射1.5mg/kg體重之葡萄糖及每隔30min監測血糖水平持續2h。計算得個別小鼠之總曲線下面積並以圖形表示。資料顯示IL-22R KO小鼠中基於總曲線下面積之葡萄糖水平明顯較高(圖27A至B)，表明IL-22受體在HFD誘導性葡萄糖耐受發揮作用。IL-22受體KO小鼠相較於同窩小鼠WT對照組小鼠事實上於餵食HFD後沒有增加較多體重(圖28)。
實例10-易於致動脈粥樣硬化之小鼠(Ldlr-/-Apobec1-/-)之IL-22處理導致血清LPS及血清LDL/HDL之減低
九個月大的Ldlr-/-、Apobec1-/-(dko)小鼠係經腹膜內注射50μg融合蛋白質IL-22Fc或50μg抗豬草對照組抗體(n=6/組)。於48小時後，該等動物被安樂死及收穫血清。利用Cholestech LDX分析法來分析脂質譜，及利用鱟變形細胞溶解物分析法來分析內毒素。相較於抗-豬草Fc對照組抗體，就IL-22-Fc而言，血清LPS減低50%(p=0.0052)及血清LDL/HDL減低30%(p=0.049)(圖29)。
總言之，經IL-22 Fc融合蛋白質處理之小鼠具有脂質譜之快速正變化及循環內毒素之減低。
實例11 IL-22Fc藉由全身性或局部投與中任何一種方式加速鼠科糖尿病性傷口癒合模型中之傷口閉合
方案
IL-22-Fc構造通常為如圖32A至B中所顯示之小鼠IL-22-小鼠-IgG2a融合蛋白質(SEQ ID NO：72及73)。
用於本研究中之小鼠：在Genentech動物施設中培育IL-22R KO小鼠及同窩對照組野生型(WT)小鼠。於圖43及下文中描述IL-22R KO小鼠。使用9週齡糖尿病性雌小鼠BKS.Cg-Dock7(m)+/+Lepr(db)/J胖(db/db)及BKS.Cg-Dock7(m)+/-Lepr(db)/J瘦(對照組BKS)。本研究中基於體重及飽食葡萄糖水平使該等小鼠隨機分組。
傷口癒合方案嚴格言之係依照IACUC嚙齒動物存活手術指示。在整個程序中使用滅菌技術(包括滅菌手套、口罩、袍子、及覆蓋巾)。於誘導麻醉手術面之後，針對動物背的背部(從肩胛區至腰部)剃毛，在滅菌水之沖洗之後利用去毛器洗劑(毛髮或等效物)移去毛渣，及藉由碘伏(betadine)刷接著進行酒精沖洗備用。將該動物放置成腹部側躺接著使用6mm沖頭以標記皮膚之意欲移去的區域(滅菌標記物在沖頭尖端上，接著觸及皮膚)。在中線左右1cm處製造一個6mm直徑全厚度皮膚傷口。藉由骨膜起子及小剪刀移除皮下軟骨膜。
於此之後，將0.5mm厚的聚矽氧框架(10至12mm內徑)放置成圍繞圓形傷口(強力膠(superglue))。接著，將2cm2之TegadermTM(3M，St.Paul，MN)或Opsite®(Smith & Nephew,Inc.，St.Petersburg，FL)黏著劑置於該傷口及框架之上及讓該動物麻醉恢復。
每隔一日移去Opsite®敷料，檢視傷口，經局部施用治療(20μL測試物質或鹽水)，及施覆新敷料。藉由從第0天至研究結束測定傷口直徑計算得傷口間隙。
於一些研究中，遵循尾巴刻痕及使用市售Onetouch®葡萄糖計(lifeScan,Inc.，Milpitas，CA)記錄飽食葡萄糖水平。
結果
IL-22R-/-小鼠展現在真皮傷口癒合反應中之缺陷
在IL-22R KO(缺乏IL-22及其家族成員IL-20及IL-24之信號傳導)中研究IL-22信號傳導於真皮傷口癒合反應中之作用。圖33顯示IL-22RKO小鼠(n=10)及IL-22RWT對照組小鼠(n=10)在14天時間期內之傷口間隙曲線。第0天產生6mm直徑的傷口及從第4天開始每隔2天測量該間隙。IL-22R KO小鼠之傷口間隙顯示在低8天至第14天閉合相較於WT同窩小鼠對照組顯著延遲。於研究結束時(第14天)，100% WT小鼠傷口閉合，相比之下，在IL-22RKO小鼠中只有30%的小鼠 (p=0.005)。認為IL-22RKO與WT對照組小鼠之間之傷口間隙之差異統計上具顯著性，P
Figure 103109979-A0202-12-0139-316
0.05。
肥胖糖尿病性小鼠中之傷口癒合缺陷
臨床前研究中使用瘦素受體KO糖尿病性小鼠(BKS.Cg-Dock7(m)+/+Lepr(db)/J FAT)(db/db)及WT對照組瘦小鼠來模擬糖尿病性病況中之真皮傷口癒合反應。小鼠背部建立圓形傷口(6mm)及從第4天開始每隔2天記錄傷口間隙閉合。圖34顯示從第0天至第27天測得之傷口間隙閉合(以mm表示)。於研究期間，糖尿病性肥胖db/db小鼠傷口相較於瘦小鼠而言展現傷口閉合統計上顯著地延遲(P
Figure 103109979-A0202-12-0139-317
0.0001)。到第14天，100% WT小鼠傷口閉合，而所有db/db小鼠傷口即使在第27天亦不閉合(圖35A)。IL-22表現已被誘導，此點可藉由於傷口切除數天後野生型小鼠中之RNA水平測得，但不在db/db小鼠中測得。參見圖35B。
IL-22Fc加速糖尿病性傷口癒合模型中之傷口閉合
由於IL-22R-/-小鼠展現傷口閉合缺陷，而假設IL-22可影響傷口閉合。圖36顯示研究設計之示意圖。9週齡雌肥胖db/db小鼠用於模型化糖尿病性傷口癒合。除了IL-22Fc(鼠科)之外，使用抗-豬草抗體作為Fc對照組蛋白質及使用抗-FGFR1抗體作為陽性對照組。由於抗-FGFR1抗體已證實在該臨床前模型中與血糖水平標準化，故意其係用作對照組抗體。圖36顯示研究設計之示意圖。治療組為下述：
˙抗-豬草抗體(經腹膜內(i.p.)50μg/劑量，8次劑量)
˙IL-22Fc(經腹膜內(i.p.)50μg/劑量，8次劑量)
˙抗-FGFR1抗體(經腹膜內(ip)0.5mg/kg，在第0天及第14天)。
IL-22Fc及抗FGFR1相較於抗-豬草治療在糖尿病性小鼠中均展現減低葡萄糖水平之統計顯著性(P
Figure 103109979-A0202-12-0139-318
0.001)效應(圖37)。資料(圖38)顯示IL-22 Fc之全身性投與相較於對照組抗豬草抗體治療在傷口閉合速率 中具有顯著效應。傷口間隙差異從第16天開始具顯著性(P
Figure 103109979-A0202-12-0140-319
0.05)及經IL-22Fc處理之小鼠中之傷口到第27天完全閉合。經Fc對照組抗體與抗FGFR1治療之小鼠即使在第27天亦不能完全閉合傷口。圖39顯示個別小鼠在第19、第21及第27天時之傷口間隙測量值，其中經IL-22 Fc處理之組間傷口間隙差異相較於其他2個組統計上極具顯著性(P
Figure 103109979-A0202-12-0140-320
0.001)。
IL-22 Fc局部治療相對全身性治療間的比較
圖40顯示研究設計之示意圖。於本研究中，吾等在2種治療模式--局部治療相對全身性治療間作比較。該等組為下述：
˙抗-豬草抗體(局部50μg/劑量，8次劑量)
˙IL-22Fc(局部50μg/劑量，8次劑量)
˙IL-22Fc(腹膜內(i.p.)50μg/劑量，8次劑量)。
附圖41中之圖顯示IL-22-Fc局部投藥以及IL-22-Fc全身性投藥相較於對照組抗體治療均加速傷口閉合。傷口間隙測量值從第16天至第22天統計上明顯(P
Figure 103109979-A0202-12-0140-321
0.001)具差異性。就傷口閉合速率而言在IL-22 Fc局部及全身性治療組之間未觀察到顯著差異。亦可參見圖42。
實例12 肥胖小鼠展現減低之IL-22誘導
於隨後之實驗中，在肥胖小鼠中研究IL-22於免疫反應中之調節作用。IL-22之主要白血球來源為先天淋巴細胞(ILC)及T輔助子組，特別是Th17及Th22細胞。研究CD4+ T細胞之於瘦素受體缺乏db/db小鼠中抗原挑戰後之IL-22生成。
方案
OVA及鞭毛蛋白之活體內治療 。為活體內活化CD4 T細胞，乳化於弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant)(CFA)中之100μg OVA經皮下注射於動物之下背，及在第7天收穫腹股溝淋巴結。為活化TLR5，經靜脈內注射3μg超純鞭毛蛋白(InvivoGen)，及於第2h收穫血清樣 本。
小鼠 。瘦素受體缺乏小鼠(db/db；BKS.Cg-Dock7m+/+Leprdb/J或B6.BKS(D)-Leprdb/J)、瘦素缺乏小鼠(ob/ob；B6.Cg-Lepob/J)、及其各自的瘦對照組小鼠、以及高脂飲食小鼠(C57BL/6J 60%DIO)及飼料飲食對照組小鼠購自Jackson Laboratory。IL-22缺乏小鼠(Zheng等人，2007，Nature 445，648-651)及IL-22Rα1缺乏小鼠(於圖43及下文中所述)由Lexicon Pharmaceuticals提供及藉由C57BL/6染色多於10次回交。在指明之情況下，小鼠在4至6週齡開始餵食已調整熱量之飲食(HFD，包含60%脂肪，Harlan)。就代謝研究而言，使用12至18週齡小鼠，而5至6週齡小鼠用於檸檬酸桿菌感染研究。由Genentech機構動物護理及使用委員會核可所有動物實驗。
初始CD4 T細胞純化及分化 。分選初始CD4 T細胞及如上述進行刺激(Rutz等人，2011，Nature Immunol.12：1238-45)，及基於各子組類似於上述方法地於特定條件下進行培養。Id。就IL-22誘導而言，使用抗-IL-4(10μg/ml)、抗-IFN-γ(10μg/ml)、及重組IL-6(20ng/ml)；在指明之情況下，添加重組小鼠瘦素(1μg/ml，R&D systems)。
細胞內染色及IL-22 ELISA。 自引流淋巴結純化之淋巴細胞基於IL-22及IL-17A如上述(Zheng等人，前述)使用藻紅素(PE)-抗-IL-22(1H8PWSR，eBioscience)及螢光素異硫氰酸(FITC)-抗-IL-17A(17B7，eBiosceince)進行染色。如上述(Zheng等人，前述)使用單株抗-IL-22抗體(20E5及14B7，Genentech)進行IL-22 ELISA。
RNA單離及即時PCR 。收穫並處理結腸，及藉由RNeasy mini plus套組(Qiagen)單離得mRNA。利用即時PCR分析如上所述(Ota等人2011，Nature immuuol.12,941-948)評估I122、I122ral、及Reg3b mRNA水平。結果與對照組管家基因Rpl19(編碼核糖體蛋白質L19)之該等結果標準化及以2△CT表示。已在前面報告用於I122及Reg3b之引 物及探針序列。Id。就I122ral而言，使用5'-AGG TCC ATT CAG ATG CTG GT-3'(SEQ ID NO：74)、5'-TAG GTG TGG TTG ACG TGG AG-3(SEQ ID NO：75)及5'-FAM-CCA CCC CAC ACT CAC ACC GG-TAMRA-3'(SEQ ID NO：76)。
統計分析。利用雙尾非成對學生t檢驗進行所有統計分析。P值小於0.05被認為統計上具顯著性。
結果
於利用在弗氏完全佐劑(CFA)中之卵白蛋白(OVA)免疫小鼠之後，在活體外藉由細胞內細胞因子染色檢測表現CD4 T細胞之IL-22。db/db小鼠中IL-22+ T細胞顯著減少(圖44A至B)。與上述報告一致，db/db小鼠中IL-17+ CD4 T細胞亦顯著減少(圖45A)。在瘦素缺乏ob/ob小鼠中亦觀察到類似的結果(圖45B)。瘦素可調節諸如Th1細胞及Treg細胞之Th細胞。然而，未觀察到瘦素直接影響自活體外分化Th22細胞產生出IL-22(圖45C)。除此之外，在免疫化DIO(飲食誘導性肥胖、或餵食HFD)C57BL/6中亦觀察到產生IL-22之T細胞類似地減少(圖44C及D)，表明肥胖但不缺乏瘦素傳導信號可解釋CD4+ T細胞中IL-22生成之減低。藉由鞭毛蛋白活化TLR5路徑可刺激自ILC產生出IL-22。
於db/db小鼠(圖44E)、ob/ob小鼠(圖45E)、及DIO小鼠(圖44F)中，血清IL-22水平在鞭毛蛋白活體內挑戰後明顯低於WT小鼠之血清IL-22水平。與源自於T細胞之結果一致，瘦素本身不增進自ILC活體外產生IL-22(圖45D)。總之，該等資料顯示肥胖小鼠中藉由ILC及T細胞二者進行IL-22誘導存在一般缺陷。
實例13 瘦素缺乏小鼠中黏膜防禦受到損害及藉由IL-22 Fc融合蛋白質恢復
由ILC及T細胞產生之IL-22為宿主防禦結腸中檸檬酸桿菌感染時所需的。分析受檸檬酸桿菌感染之db/db及ob/ob小鼠之結腸中之IL-22 誘導。將檸檬酸桿菌培養過夜及該等小鼠經口與2×109CFU細菌如所述(Zheng等人2008，Nature medicine 14，282-289,doi：10.1038/nm1720)培養。可如下分析細菌負荷：收穫受感染小鼠之脾臟及肝臟，稱重，及在具有gentleMACS之C-管(Miltenyi Biotec)中於0.1% NP40/PBS中均質化。將連續稀釋之均質物接種於MacConkey瓊脂(Remel)上，及檸檬酸桿菌菌落於37℃培養過夜之後經過識別為粉色菌落。在指明之情況下，該等小鼠每週3次地經肌肉內注射IL-22-Fc(150μg/劑量)或相等量的小鼠同型對照物。如前面所報告(Ota等人2011，Nature immunology 12,941-948，doi：10.1038/ni.2089)進行受檸檬酸桿菌感染之小鼠之結腸之組織學分析，及針對於上皮改變(增生、呈現發泡狀、腸上皮細胞剝落)、發炎、及黏膜增厚評分。基於自0至5之標度(0=正常結腸及5=重度疾病)，確定四個解剖區域-近端、中間及遠端結腸及直腸之臨床得分值。針對於各動物加總區域得分值以獲得最終結腸疾病嚴重度得分值。
上述結果確證於第4天在db/db及ob/ob小鼠結腸中之IL-22之峰值誘導亦顯著減低，但不完全消除(圖46A)。在經口與檸檬酸桿菌培養後之db/db小鼠中，未出現明顯的體重減輕(圖46B)。令人意外地，受感染之db/db小鼠在細菌接種後的10天期間開始死亡，及在重複實驗中約60%至100% db/db小鼠在感染的第二週死亡(圖46C)。db/db小鼠結腸切片之組織學分析顯示經增加之發炎性細胞浸潤及嚴重上皮損傷，包括在黏膜表面之處之上皮脫落(圖46D至F)。此外，該等小鼠顯示斑塊狀黏膜下水腫及通常與局部壞死相關聯之多病灶細菌菌落。在db/db小鼠之肝臟及脾臟二者中亦檢測到明顯增加的細菌負荷(圖46G至H)。在ob/ob小鼠中亦觀察到類似的黏膜防禦缺陷(圖54)。令人意外地，db/db小鼠在控制檸檬酸桿菌感染中具有該種顯著缺陷；尤其假若藉由檸檬酸桿菌感染之IL-22誘導在該等小鼠中僅部分地缺乏(參見 圖46A)。
已報告瘦素缺乏小鼠亦具有在B細胞功能之缺陷，及抗檸檬酸桿菌抗體為最終在感染後期從宿主消除細菌時所需的。經如此研究該等小鼠中抗-檸檬酸桿菌抗體之產生。在感染後的第10天藉由自下顎下靜脈放血收穫血清樣本。ELISA板塗覆有熱減活檸檬酸桿菌或山羊抗小鼠Ig捕獲抗體。用洗滌緩衝液(0.05%吐溫(Tween)20含於PBS中)洗滌該經塗覆之板，藉由阻斷緩衝液(0.5% BSA，15ppm Proclin含於PBS中)阻斷2h，及在添加經無菌稀釋之標準小鼠單株IgG(SouthernBiotech)、或血清樣本之前進行洗滌。於室溫下2h的培養之後，洗滌該板及藉由與辣根過氧化物酶(HRP)(SouthernBiotech)偶聯的山羊抗-小鼠IgG檢測Ig，在檢定稀釋劑(0.5% BSA、0.05%吐溫20、15ppm Proclin，含於PBS中)中稀釋1/4,000，及於室溫下培養2h。於洗滌之後，將TMB過氧化物酶底物(Sigma-Aldrich)添加至各細胞。於650nm下在分析盤讀取器(Molecular Devices)中讀取吸光度。
存活db/db小鼠中在感染後的第14天抗-檸檬酸桿菌IgG抗體之效價顯著減低(圖46I)。然而，僅僅抗-檸檬酸桿菌IgG產生量之減少亦不應導致所觀察到早期死亡率，此乃因完全缺乏B細胞及抗體產生之Rag2缺乏小鼠在感染之後可存活遠遠較長的時間(Zheng等人2008，Nature medicine 14，282-289)。因此，db/db小鼠中宿主防禦檸檬酸桿菌之失敗極有可能係由於適應性抗體反應及IL-22藉由ILC之誘導二者之缺陷所致。接著，進行實驗以研究db/db小鼠中IL-22是否可在投與外源IL-22-Fc之檸檬酸桿菌感染期間恢復黏膜免疫性。如圖46J中所顯示，雖然大多數對照組經IgG處理db/db小鼠死亡，但接近所有的經IL-22 Fc處理之db/db小鼠在感染中存活(圖46J)，支持db/db小鼠中IL-22 Fc可在治療上恢復黏膜免疫缺陷。
實例14 IL-22減低肥胖小鼠及餵食高脂飲食之正常小鼠中之葡萄 糖水平
如以上實例9所述，IL-22 Fc減低已經發展出高血糖症之db/db小鼠中之葡萄糖水平(圖20A)。該治療效益持續於投與IL-22-Fc之過程。於治療3週之後，該等小鼠中之葡萄糖水平下降低於200mg/dl，接近WT小鼠中之正常葡萄糖水平，而經對照組蛋白質處理之db/db小時持續其高葡萄糖水平。經IL-22 Fc處理之小鼠中葡萄糖之減低小鼠空腹時更為明顯(圖20C)。IL-22 Fc處理亦會導致相較於對照組處理體重減輕或體重增重延遲之趨勢。然而，在本研究結束時，兩個組之間之體重差異未達到該等小鼠中之統計顯著性(圖20B)。該等資料確證IL-22 Fc之處理導致葡萄糖耐受試驗及胰島素耐受試驗中明顯改良之葡萄糖耐受及胰島素敏感性(分別為圖21及圖22)。
為證實外源IL-22在調節代謝疾病中之一般有益功能，投與已餵食HFD至少8週之C57BL/6小鼠IL-22 Fc持續4週以誘導葡萄糖耐受。就葡萄糖耐受試驗(GTT)而言，使小鼠空腹過夜，及於1.5mg/kg下注射i.p.葡萄糖溶液。就胰島素耐受試驗(ITT)而言，該等小鼠係於1.0個單位/kg下注射i.p.胰島素溶液。在注射之前及之後測量血糖。藉由Contour(Bayer)測量血糖。
與源自於db/db小鼠之結果一致，IL-22 Fc處理尤其在空腹之後顯著減低血清葡萄糖水平(圖47A)。在研究結束時於經IL-22 Fc處理之組中亦出現體重減輕(或體重增重延遲)(圖47B)。此外，餵食HFD之C57BL/6小鼠中IL-22 Fc減低葡萄糖耐受不良及胰島素抗性(圖47C及D)。當小鼠於開始餵食HFD時同時投與IL-22 Fc之情況下，獲得類似的結果(圖48)。總之，該資料證實IL-22 Fc係標準化血清葡萄糖濃度、及緩解肥胖小鼠中之葡萄糖耐受不良及胰島素抗性之有潛力治療。
實例15 IL-22 Fc減低肥胖及餵食HFD之小鼠之食物攝入及增加其之PYY之表現
食物攝入之減少可逆轉糖尿病性小鼠中之高血糖症及胰島素抗性。實際上，經IL-22 Fc處理之db/db小鼠相較於對照組顯示食物攝入顯著地減少(圖49A)。進行配對飼養實驗以確保IL-22 Fc及對照物處理小鼠中相同的食物攝入(圖50)。於研究期間每天測量隨意餵食組之食物攝入。供應給配對飼養組之食物無法滿足隨意餵食組前一天的食物攝入。相應地，配對飼養組之處理及測量晚於隨意餵食組一天進行。
甚至於該條件下，儘管在後來的時間點，IL-22 Fc亦顯著減低血清葡萄糖(圖49B)，及逆轉db/db小鼠中之葡萄糖耐受(圖49C)，顯示藉由IL-22調節食物攝入並非係其於代謝疾病中之治療效應之唯一機制。在餵食HFD之小鼠中觀察到類似的結果(資料未顯示)。為進一步明瞭IL-22如何調節食物攝入及代謝，研究已知可抑制食物攝入之腸激素(PYY)之表現。
小鼠在第0及第2天經i.p.注射50μg IL-22-Fc。在第4天，使該等小鼠空腹過夜及在第5天再餵食1h。在治療前的第2天及餵食後的第5天採集血液樣本。於採集後立刻將所有血清樣本與蛋白酶抑制劑(Sigma)、DPPIV抑制劑(Millipore)及Pefabloc(Roche)混合。利用PYY ELISA套組(Abnova)遵循製造商使用說明測量PYY。結果顯示IL-22 Fc治療顯著增加db/db及餵食HFD之小鼠之血清中之PYY濃度(圖49D及E)。為證實IL22對食物攝入之效應係透過促進PYY產生來介導，研究經PYY抑制劑BIIE0246處理之小鼠中之食物攝入。基於標準飲食之C57BL/6小鼠係不經處理或在第2及第4天藉由IL-22 Fc處理。於空腹過夜之後，測量於4小時的餵食期間之食物攝入。結果顯示經IL-22 Fc處理之小鼠中食物攝入之減少係藉由BIIE0246逆轉(資料未顯示)，表明IL-22 Fc對經減少之食物攝入之效應係透過誘導PYY來介導。
實例16 IL-22 Fc減低肥胖小鼠之血清LPS及肝臟ALT及AST及增加其之脂質代謝
由於IL-22受體表現於調節代謝之包括肝臟及胰臟之許多器官中，故IL-22在代謝疾病中之治療效應極有可能係藉由多種機制介導。代謝內毒素血症造成發炎狀態及胰島素抗性結果及腸微生物相之調節促進葡萄糖耐受。藉由鱟變形細胞溶解物檢定套組QCL-1000(Lonza)遵循製造商使用說明測量血清內毒素。藉由Cholestech LDX(Alere)測量ALT及AST。顯示於圖49F中之結果顯示IL-22 Fc處理導致db/db小鼠血清中之LPS水平顯著減低。
IL-22可壓制脂肪合成中所涉及之基因及改良肝臟脂肪變性。接著研究血清ALT及AST水平。藉由Contour(Bayer)測量血糖。藉由Cholestech LDX(Alere)測量ALT及AST。如圖51A及B中所顯示，IL-22 Fc處理可減低db/db(圖51A)及餵食HFD(圖51B)小鼠之血清中之ALT及AST水平。腹部脂肪亦隨著餵食HFD之小鼠之IL-22 Fc處理顯著降低(圖51C)。此外，負責脂質代謝之基因在原代脂肪細胞中藉由IL-22誘導(圖51D)。接著，研究肝臟及脂肪組織中IL-22對三酸甘油酯及膽固醇之效應。結果顯示IL-22 Fc可減低餵食HFD之小鼠中之三酸甘油酯、膽固醇、及游離脂肪酸(FFA)(圖51E)、以及肝臟三酸甘油酯(圖51F)、肝臟膽固醇(圖51G)及白色脂肪組織三酸甘油酯(圖51H)。類似地，IL-22可減低db/db小鼠之肝臟及白色脂肪組織中之三酸甘油酯(圖51I及圖51J)。其他實驗顯示肥胖小鼠中經過IL-22 Fc處理相較於未經過處理可減少發炎性細胞因子(諸如TNFα及IL-1β)(資料未顯示)。肝臟切片之H&E染色顯示藉由IL-22 Fc融合蛋白質處理之肝門靜脈周圍脂肪變性之減低(圖26)。
IL-22通過IL-22R1及IL-10R2鏈傳導信號。IL-22R1亦可與IL-20R2鏈配對及為IL-20及IL-24所用。已顯示所有該等配體誘導極類似的皮膚表皮之下游生物效應(Sa等人，2007，J lmmunol 178，2229-2240)。因此，檢視IL-22及IL-22R1同時缺乏之小鼠以避免其他細胞因子於 HFD誘導性糖尿病中之冗餘可能性。IL-22R剔除基因小鼠之建立示於43 A中。KO小鼠中IL-22R1之缺失藉由IL-22R KO小鼠中缺乏IL-22R1 mRNA、及IL-22R KO小鼠中缺乏回應於IL-22 Fc之RegIIIb mRNA表現獲得證實。參見圖43B及C。此外，投與IL-22R KO小鼠IL-22-Fc並不誘發pStat3(資料未顯示)。
未觀察到IL-22缺乏小鼠之葡萄糖耐受及體重與WT同窩小鼠對照物之葡萄糖耐受及體重之間之差異(圖53)。然而，當藉由高脂飲食處理IL-22R1缺乏小鼠三個月時，該等小鼠發展出明顯較顯著的葡萄糖耐受及增重較多體重(圖49G、H及I)，支持IL-22R路徑於控制代謝中之關鍵作用。研究IL-20及IL-24冗餘在減低代謝症候群中之可能性。於本實驗中，藉由IL-20 Fc、IL-22 Fc或IL-24 Fc處理db/db小鼠。結果顯示db/db小鼠中僅IL-22 Fc減低血清葡萄糖水平(圖55B)及在GTT試驗中於第20天增進葡萄糖耐受(圖55C)，而藉由IL-20 Fc或IL-24 Fc處理db/db小鼠不如此。體重之減輕統計上並不顯著。其他實驗證實儘管IL-20 Fc及IL-24在原代脂肪細胞中誘導pStat3，但該等細胞因子在已不對胰島素敏感之db/db小鼠之肝組織中無法誘導pStat3(資料未顯示)。IL-22R KO小鼠中IL-22 Fc之處理對葡萄糖耐受試驗不產生效應，證實IL-22 Fc之效應係經由IL-22R信號傳導得以發揮(資料未顯示)。
本文提出的研究指出IL-22在調節代謝過程中之關鍵作用。IL-22R1缺乏小鼠易發展出代謝症候群。外源IL-22不僅可在臨床前糖尿病性模型中恢復黏膜免疫缺陷，而且可有助於標準化葡萄糖及脂質代謝。IL-22因此可提供治療人類代謝疾病之新穎治療方法。
實例17 VGEF及IL-22於促進db/db小鼠中傷口癒合之間的比較
於本實驗中，分析IL-22於促進或促進傷口癒合之效應並與VEGF者進行比較。11週齡雌BKS.Cg-Dock7m+/+Leprdb/J db/db小鼠購自 Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME。所有實驗動物研究在獲Genentech實驗室動物研究之機構的動物護理及使用委員會批准下進行。於異氟烷麻醉下，對背部皮膚剃毛，接著施用脫毛膏以移去殘留的毛渣。於皮膚經過清潔及藉由聚維酮-碘接著酒精擦拭片(alcohol swab)準備好之後，使用可棄式6mm活組織檢查沖頭(Miltex,Inc.)在各小鼠之背部皮膚上建立圓形全深度傷口。在治療之前及之後用Tegaderm膜敷蓋傷口。
圖56中之結果顯示VEGF似乎達成比IL-22更快速的表皮閉合；然而，當檢視皮膚之真皮側時，經VEGF處理之傷口甚至在第21天仍保持開放(圖56B)。亦分析VEGF及IL-22 Fc在促進傷口部位處血管生成中之能力。於本實驗中，於第0天在db/db小鼠中切下兩個6mm傷口。在第2、第4、第6、第8、第10及第12天，在鹽水中之對照組抗豬草抗體或IL-22 Fc(50μg)或VEGF(20μg)任何一者經局部投與傷口。在第6及第12天，從各個組拿出三隻小鼠用於組織學及免疫組織化學分析及BrdU染色。在第16天，拿出一隻小鼠用於BrdU染色。在第18、第20及第22天，各個時間點地從各個組拿出一隻小鼠用於免疫組織化學分析及CD31全部組織染色。結果顯示係VEGF及IL22-Fc二者但非對照組抗豬草抗體促進傷口部位處之血管形成，此係藉由CD31組織免疫染色分析(資料未顯示)。
接著，分析IL-22及其他IL-10家族成員之再構成表皮中細胞因子及趨化細胞因子表現之誘導。再構成表皮為維持在購自MatTek之EPI-100-NMM介質中之EpiDerm RHE組織模型。參見Sa等人2007，J.Immunol.178：2229-2240。結果顯示IL-22顯著地誘導再構成人表皮中IL-8、CXCL-1、MIP 3a、DMC、及MCP-1之表現，然而亦觀察到藉由IL-19、IL-20或IL-24之誘導(圖57)。有鑑於IL-22於本文所述傷口癒合上之效應，IL-19、IL-20、及IL-24亦可發揮加速傷口癒合之作用。
實例18 IL-22在db/db小鼠夾板固定之傷口模型中提供於治療受感染傷口中較VEGF及PDGF優異之療效
於小鼠傷口癒合模型中，收縮構成小鼠中大部分傷口閉合，此乃因小鼠皮膚係可移動。為與人類傷口癒合過程更為接近，使矽環膠黏至皮膚及以縫合在傷口周圍進行固定以防止局部皮膚收縮，建立小鼠夾板固定之傷口模型(參見圖59B中之代表性影像)。參見(例如)Zhao等人，2012，Wound Rep.Reg.20：342-352及Brubaker等人，2013，J.Immunol.,190：1746-57。於該模型中，傷口通過粒化及再上皮化過程癒合，類似於人類傷口癒合過程。為夾板固定之該傷口，將瘋狂瞬間膠(Krazy glue)(Elmer's Products,Inc.)塗覆至滅菌聚矽氧夾板(Grace Bio-Labs,Inc.)之一側及小心地以膠側向下將該夾板置於傷口周圍以致該傷口位於該夾板之中心。膠黏結至皮膚成相接觸及充作用於整個研究過程之夾板。該夾板進一步以四根間歇式6.0單絲尼龍線縫合針(Ethicon,Inc.)固定至皮膚。在用Tegaderm透明膜敷蓋該傷口之前，拍攝傷口之數位影像。此外，於開放傷口上之微生物感染會延遲傷口癒合，及慢性傷口，諸如，在糖尿病性患者中所觀察到的慢性傷口，通常為受感染傷口。
使用夾板固定之傷口模型，在db/db小鼠中研究IL-22 Fc針對於受感染傷口之效應。如上所述在野生型或db/db小鼠中切除的傷口在傷口切除後兩天期間經局部與0.5×106CFU、1×106CFU(斑塊形成單位)或2×106CFU金黃色葡萄球菌培養。如圖58中所顯示，db/db小鼠展現相較於野生型小鼠延遲之傷口癒合，及該等小鼠中傷口癒合當在該傷口受細菌感染時相較於對照組進一步延遲。
於個別的實驗中，夾板固定之受感染傷口模型中利用其他藥劑在IL-22的傷口癒合效應之間作比較。於傷口切除後兩天期間，以1×106CFU含於30μl鹽水中之美西西林(methicillin)抗性金黃色葡萄球 菌菌株USA300 NRS 384(NARSA)係經培養至傷口表面上及再次用Tegaderm膜敷蓋。此後，於金黃色葡萄球菌感染後第48小時開始每週3次地利用在30μl鹽水中之30μg IL22-Fc或VEGF(Lot#110308，Genentech)或PDGF(Lot#0507CY420，PeproTech,Inc.)進行局部處理。在處理之前及在處理之後直到傷口閉合之前每週兩次地記錄傷口之數位影像。利用ImageJ(於NIH下開發的基於Java之影像處理程式)從傷口影像計算得傷口閉合之百分率。
如圖59中所顯示，當在與人傷口癒合更為接近之夾板固定之傷口模型中施用相等量的化合物至受感染傷口之情況下，IL-22 Fc較VEGF更為快速地促進傷口癒合。接著，於受感染傷口上進行不同劑量之VEGF及IL-22 Fc之測試。於本實驗中，在血糖>300mg/dl之db/db小鼠中建立一個6mm直徑夾板固定之切除傷口。於各傷口處，培養1×106CFU金黃色葡萄球菌USA 300。每週三次地經局部投與在鹽水中之VEGF或IL-22 Fc之各種不同劑量直到傷口閉合。鹽水用為對照組。於傷口閉合時，殺死小鼠及樣本進行組織學、免疫組織化學、及PCR分析及CFU計數。圖60中之結果顯示IL-22 Fc在30μg的量下展現較60μg VEGF佳的受感染傷口癒合療效。因此，在非夾板固定之傷口模型中所觀察到的VEGF之較快速表面閉合極有可能係歸因於小鼠皮膚收縮及IL-22 Fc於促進角質細胞增生之效應及再上皮化可能因小鼠皮膚收縮而被掩蔽。
類似的結果顯示於圖61中，其中證實IL-22 Fc在施加相等量(30μg)的各種化合物至傷口之情況下具有較VEGF及PDGF優異之療效。在第15天看到經IL-22 Fc處理之受感染夾板固定之傷口之完全傷口閉合。然而，於經VEGF-或PDGF處理之小鼠中，與未經處理之未受感染的傷口一樣，未看到受感染夾板固定之傷口之完全傷口閉合直到第25天。未看到對照組(即，未經處理之受感染傷口)之傷口閉合直到第 29天。在不受特定機制限制下，IL-22 Fc在促進傷口癒合中優於VEGF或PDGF之優異性可係歸因於其於再上皮化、促進角質細胞增生、誘導新血管生成、誘導蛋白酶以利於組織再塑與修復及抗微生物活性之效應。
接著，測試IL-22 Fc是否可呈膠調配物形式投與以達成傷口癒合。用於本實驗中之示例性膠調配物包含pH 7.1之具有0.5mg/g甲硫胺酸之10mM磷酸鈉及具有或不具有1mg/g IL-22 Fc之3%羥丙基甲基纖維素(HPMC E4M高級，來自Dow Chemicals)。在經局部施用至夾板固定之傷口之前將膠溶液與IL-22 Fc溶液混合。包含IL-22 Fc之調配物亦包含由初始蛋白質調配物帶來的少量蔗糖(<20mM)及P20(<0.002%)。顯示於圖62中之結果顯示溶液及膠調配物二者中之IL-22 Fc在未受感染的夾板固定之傷口中均促進傷口癒合。
本說明書被認為足可讓熟習此項技術者來實施本發明。雖然已基於清楚明瞭之目的而以示例及實例方式相當詳細地陳述前述發明，但說明及實例不應被理解為限制本發明之範疇。實際上，熟習此項技術者從前述說明當可明瞭本發明之除了本文所顯示及所描述之其等以外之改變且係落於隨附申請專利範圍之範疇內。
<110> 美商建南德克公司等人
<120> IL-22多肽及IL-22 FC融合蛋白質及其使用方法
<130> P5580R1-WO
<140> 待讓與
<141> 同此
<150> US 61/800148
<151> 2013-03-15
<150> US 61/800795
<151> 2013-03-15
<150> US 61/801144
<151> 2013-03-15
<150> US 61/821062
<151> 2013-05-08
<150> US 61/860176
<151> 2013-07-30
<160> 80
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 495
<212> DNA
<213> 現代人
<220>
<223> 人類IL-22
<400> 1
Figure 103109979-A0202-12-0153-10
Figure 103109979-A0202-12-0154-11
<210> 2
<211> 165
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> 人類IL-22
<400> 2
Figure 103109979-A0202-12-0154-12
<210> 3
<211> 438
<212> DNA
<213> 現代人
<220>
<223> IL-22 DNA(成熟)
<400> 3
Figure 103109979-A0202-12-0155-13
<210> 4
<211> 146
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> IL-22(成熟)
<400> 4
Figure 103109979-A0202-12-0155-14
Figure 103109979-A0202-12-0156-15
<210> 5
<211> 57
<212> DNA
<213> 現代人
<220>
<223> IL-22前導序列
<400> 5
Figure 103109979-A0202-12-0156-16
<210> 6
<211> 19
<212> PRT
<213> 現代人
<220>
<223> IL-22前導序列
<400> 6
Figure 103109979-A0202-12-0156-17
<210> 7
<211> 1128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(減去C-端Lys)N297G
<400> 7
Figure 103109979-A0202-12-0157-18
<210> 8
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(減去C-端Lys)N297G
<400> 8
Figure 103109979-A0202-12-0158-19
Figure 103109979-A0202-12-0159-20
<210> 9
<211> 1128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(減去C-端Lys)N297A
<400> 9
Figure 103109979-A0202-12-0160-21
<210> 10
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(減去C-端Lys)N297A
<400> 10
Figure 103109979-A0202-12-0161-22
Figure 103109979-A0202-12-0162-23
<210> 11
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(減去C-端Lys)N297G
<400> 11
Figure 103109979-A0202-12-0163-24
<210> 12
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(減去C-端Lys)N297G
<400> 12
Figure 103109979-A0202-12-0163-25
Figure 103109979-A0202-12-0164-26
Figure 103109979-A0202-12-0165-27
<210> 13
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(減去C-端Lys)N297A
<400> 13
Figure 103109979-A0202-12-0165-28
Figure 103109979-A0202-12-0166-29
<210> 14
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(減去C-端Lys)N297A
<400> 14
Figure 103109979-A0202-12-0166-30
Figure 103109979-A0202-12-0167-31
Figure 103109979-A0202-12-0168-32
<210> 15
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(全)N297G
<400> 15
Figure 103109979-A0202-12-0168-33
Figure 103109979-A0202-12-0169-34
<210> 16
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(全)N297G
<400> 16
Figure 103109979-A0202-12-0169-35
Figure 103109979-A0202-12-0170-36
Figure 103109979-A0202-12-0171-37
<210> 17
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(全)N297A
<400> 17
Figure 103109979-A0202-12-0171-38
Figure 103109979-A0202-12-0172-39
<210> 18
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(全)N297A
<400> 18
Figure 103109979-A0202-12-0172-40
Figure 103109979-A0202-12-0173-41
Figure 103109979-A0202-12-0174-42
<210> 19
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(全)N297G
<400> 19
Figure 103109979-A0202-12-0174-43
Figure 103109979-A0202-12-0175-44
<210> 20
<211> 378
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(全)N297G
<400> 20
Figure 103109979-A0202-12-0175-45
Figure 103109979-A0202-12-0176-46
Figure 103109979-A0202-12-0177-47
<210> 21
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(全)N297A
<400> 21
Figure 103109979-A0202-12-0177-48
Figure 103109979-A0202-12-0178-49
<210> 22
<211> 378
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(全)N297A
<400> 22
Figure 103109979-A0202-12-0178-50
Figure 103109979-A0202-12-0179-51
Figure 103109979-A0202-12-0180-52
<210> 23
<211> 1128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(wt N297，減去Lys)
<400> 23
Figure 103109979-A0202-12-0180-53
Figure 103109979-A0202-12-0181-54
<210> 24
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(wt N297，減去Lys)
<400> 24
Figure 103109979-A0202-12-0181-55
Figure 103109979-A0202-12-0182-56
Figure 103109979-A0202-12-0183-57
<210> 25
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(wt N297，減去Lys)
<400> 25
Figure 103109979-A0202-12-0183-58
Figure 103109979-A0202-12-0184-59
<210> 26
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(wt N297，減去Lys)
<400> 26
Figure 103109979-A0202-12-0184-60
Figure 103109979-A0202-12-0185-61
Figure 103109979-A0202-12-0186-62
<210> 27
<211> 1131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(N297 wt)
<400> 27
Figure 103109979-A0202-12-0186-63
Figure 103109979-A0202-12-0187-64
<210> 28
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG4(N297 wt)
<400> 28
Figure 103109979-A0202-12-0187-67
Figure 103109979-A0202-12-0188-66
Figure 103109979-A0202-12-0189-68
<210> 29
<211> 1134
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多核苷酸
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(N297 wt)
<400> 29
Figure 103109979-A0202-12-0189-69
Figure 103109979-A0202-12-0190-71
<210> 30
<211> 378
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 Fc融合IgG1(N297 wt)
<400> 30
Figure 103109979-A0202-12-0190-72
Figure 103109979-A0202-12-0191-73
Figure 103109979-A0202-12-0192-74
<210> 31
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成絞鏈肽
<400> 31
Figure 103109979-A0202-12-0192-75
<210> 32
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 32
Figure 103109979-A0202-12-0192-76
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 33
Figure 103109979-A0202-12-0192-77
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 34
Figure 103109979-A0202-12-0193-78
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 35
Figure 103109979-A0202-12-0193-79
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 36
Figure 103109979-A0202-12-0193-80
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 37
Figure 103109979-A0202-12-0193-81
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 38
Figure 103109979-A0202-12-0194-82
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 39
Figure 103109979-A0202-12-0194-83
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 40
Figure 103109979-A0202-12-0194-84
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 41
Figure 103109979-A0202-12-0194-85
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子(IgG3)肽
<400> 42
Figure 103109979-A0202-12-0195-86
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 43
Figure 103109979-A0202-12-0195-87
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 44
Figure 103109979-A0202-12-0195-88
<210> 45
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 45
Figure 103109979-A0202-12-0195-89
<210> 46
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 46
Figure 103109979-A0202-12-0196-90
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 47
Figure 103109979-A0202-12-0196-91
<210> 48
<211> 146
<212> PRT
<213> 普通黑猩猩
<400> 48
Figure 103109979-A0202-12-0196-92
Figure 103109979-A0202-12-0197-93
<210> 49
<211> 146
<212> PRT
<213> 蘇門達臘猩猩
<400> 49
Figure 103109979-A0202-12-0197-94
Figure 103109979-A0202-12-0198-95
<210> 50
<211> 146
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 50
Figure 103109979-A0202-12-0198-96
<210> 51
<211> 146
<212> PRT
<213> 家犬
<400> 51
Figure 103109979-A0202-12-0199-97
<210> 52
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IL-22 Fc融合蛋白質IgG1正向引物
<400> 52
Figure 103109979-A0202-12-0199-98
<210> 53
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IL-22 Fc融合蛋白質IgG1反向引物
<400> 53
Figure 103109979-A0202-12-0200-99
<210> 54
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IL-22 Fc融合蛋白質IgG4正向引物
<400> 54
Figure 103109979-A0202-12-0200-100
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IL-22 Fc融合蛋白質IgG4反向引物
<400> 55
Figure 103109979-A0202-12-0200-101
<210> 56
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IgG1 N297G正向引物
<400> 56
Figure 103109979-A0202-12-0200-102
<210> 57
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IgG1 N297G反向引物
<400> 57
Figure 103109979-A0202-12-0201-103
<210> 58
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IgG4 N297G正向引物
<400> 58
Figure 103109979-A0202-12-0201-104
<210> 59
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成IgG4 N297G反向引物
<400> 59
Figure 103109979-A0202-12-0201-105
<210> 60
<211> 411
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL22-Fc融合IgG2a
<400> 60
Figure 103109979-A0202-12-0201-106
Figure 103109979-A0202-12-0202-107
Figure 103109979-A0202-12-0203-108
<210> 61
<211> 372
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> IL-22 IgG1融合結(T336W)減去Lys
<400> 61
Figure 103109979-A0202-12-0204-109
Figure 103109979-A0202-12-0205-110
<210> 62
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<220>
<223> 單體Fc孔
<400> 62
Figure 103109979-A0202-12-0206-111
Figure 103109979-A0202-12-0207-112
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 63
Figure 103109979-A0202-12-0207-113
<210> 64
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 64
Figure 103109979-A0202-12-0207-114
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 65
Figure 103109979-A0202-12-0207-115
<210> 66
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 66
Figure 103109979-A0202-12-0208-116
<210> 67
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 67
Figure 103109979-A0202-12-0208-117
<210> 68
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 68
Figure 103109979-A0202-12-0208-118
<210> 69
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成連接子肽
<400> 69
Figure 103109979-A0202-12-0208-119
<210> 70
<211> 1152
<212> DNA
<213> 現代人
<220>
<221> CDS
<222> (58)..(597)
<400> 70
Figure 103109979-A0202-12-0209-120
Figure 103109979-A0202-12-0210-121
<210> 71
<211> 179
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 71
Figure 103109979-A0202-12-0210-122
Figure 103109979-A0202-12-0211-123
<210> 72
<211> 1236
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 72
Figure 103109979-A0202-12-0211-124
Figure 103109979-A0202-12-0212-125
<210> 73
<211> 411
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 73
Figure 103109979-A0202-12-0212-126
Figure 103109979-A0202-12-0213-127
Figure 103109979-A0202-12-0214-128
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成引物
<400> 74
Figure 103109979-A0202-12-0214-129
<210> 75
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成引物
<400> 75
Figure 103109979-A0202-12-0214-130
<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成引物
<400> 76
Figure 103109979-A0202-12-0214-131
<210> 77
<211> 177
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 77
Figure 103109979-A0202-12-0215-132
<210> 78
<211> 176
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 78
Figure 103109979-A0202-12-0216-133
<210> 79
<211> 207
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 79
Figure 103109979-A0202-12-0217-134
<210> 80
<211> 171
<212> PRT
<213> 現代人
<400> 80
Figure 103109979-A0202-12-0218-135

Claims (104)

  1. 一種結合介白素-22(IL-22)受體之IL-22 Fc融合蛋白質，該IL-22 Fc融合蛋白質包含經連接子鍵聯至IgG 4 Fc區之IL-22多肽，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含具有相對SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少98%序列一致性之胺基酸序列，其中該Fc區係未經糖基化，且其中：(a)該Fc區之EU編號297位置之胺基酸殘基係Gly、Ala、Gln、Asp或Glu；或(b)該Fc區之EU編號299位置之胺基酸殘基係Ala、Gly或Val。
  2. 如請求項1之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該胺基酸序列具有相對SEQ ID NO：8之胺基酸序列至少99%之序列一致性。
  3. 如請求項1或2之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22 Fc融合蛋白質係藉由包括培養可在適於表現該IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現該IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞之步驟的方法製得。
  4. 如請求項3之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該方法進一步包括自細胞培養物或細胞培養基獲得IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。
  5. 如請求項3之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該宿主細胞為CHO細胞。
  6. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  7. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  8. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  9. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其係由SEQ ID NO：8之胺基酸序列所構成。
  10. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其係由SEQ ID NO：10之胺基酸序列所構成。
  11. 一種IL-22 Fc融合蛋白質，其係由SEQ ID NO：16之胺基酸序列所構成。
  12. 如請求項6至11中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22 Fc融合蛋白質係藉由包括培養可在適於表現該IL-22 Fc融合蛋白質之條件下表現該IL-22 Fc融合蛋白質之宿主細胞之步驟的方法製得。
  13. 如請求項12之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該方法進一步包括自細胞培養物或細胞培養基獲得該IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。
  14. 如請求項12之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該宿主細胞為CHO細胞。
  15. 如請求項1、2及6至11中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22融合蛋白質為二聚IL-22 Fc融合蛋白質。
  16. 如請求項1、2及6至11中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22融合蛋白質為單體IL-22 Fc融合蛋白質。
  17. 如請求項1或2之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22多肽包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
  18. 如請求項1或2之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22多肽為人類IL-22多肽。
  19. 如請求項6至11中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22 Fc融合蛋白質結合至IL-22受體。
  20. 如請求項19之IL-22 Fc融合蛋白質，其中該IL-22受體係人類IL-22受體。
  21. 一種單離的核酸，其編碼如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質。
  22. 如請求項21之單離的核酸，其中該核酸編碼包含SEQ ID NO：8胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。
  23. 如請求項21之單離的核酸，其中該核酸編碼包含SEQ ID NO：10胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。
  24. 如請求項21之單離的核酸，其中該核酸編碼包含SEQ ID NO：16胺基酸序列之IL-22 Fc融合蛋白質。
  25. 如請求項21或22之單離的核酸，其包含SEQ ID NO：7之多核苷酸序列。
  26. 如請求項21或23之單離的核酸，其包含SEQ ID NO：9之多核苷酸序列。
  27. 如請求項21或24之單離的核酸，其包含SEQ ID NO：15之多核苷酸序列。
  28. 一種包含如請求項21至27中任一項之核酸之載體。
  29. 一種包含如請求項28之載體之宿主細胞。
  30. 如請求項29之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞或真核細胞。
  31. 如請求項30之宿主細胞，其中該宿主細胞為大腸桿菌細胞或CHO細胞。
  32. 如請求項31之宿主細胞，其中該宿主細胞為CHO細胞。
  33. 一種製造IL-22 Fc融合蛋白質之方法，該方法包括在適於表現該IL-22 Fc融合蛋白質之條件下培養如請求項29至32中任一項之宿主細胞之步驟。
  34. 如請求項33之方法，該方法進一步包括自細胞培養物或培養基獲得該IL-22 Fc融合蛋白質之步驟。
  35. 如請求項33或34之方法，其中該宿主細胞為大腸桿菌細胞。
  36. 如請求項33或34之方法，其中該宿主細胞為CHO細胞。
  37. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質及至少一種醫藥上可接受之載劑。
  38. 如請求項37之醫藥組合物，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  39. 如請求項37之醫藥組合物，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  40. 如請求項37之醫藥組合物，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  41. 如請求項37至40中任一項之醫藥組合物，其中該IL-22 Fc融合蛋白質係於CHO細胞中產生。
  42. 如請求項37至40中任一項之醫藥組合物，其進一步包含另一種治療劑。
  43. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質及至少一種醫藥上可接受之載劑，其中該醫藥上可接受之載劑為膠凝劑。
  44. 如請求項43之醫藥組合物，其中該膠凝劑為多醣。
  45. 如請求項43或44之醫藥組合物，其中該膠凝劑為纖維素質。
  46. 如請求項43或44之醫藥組合物，其中該膠凝劑為甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、POE-POP嵌段聚合物、藻酸鹽、透明質酸、聚丙烯酸、羥乙基甲基纖維素或羥丙基甲基纖維素。
  47. 如請求項46之醫藥組合物，其中該膠凝劑為羥丙基甲基纖維素。
  48. 如請求項43或44之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係用於局部投藥。
  49. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療有此需要之個體的發炎性腸病(IBD)。
  50. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療IBD，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  51. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療IBD，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  52. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療IBD，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  53. 如請求項49至52中任一項之用途，其中該IBD為潰瘍性結腸炎。
  54. 如請求項49至52中任一項之用途，其中該IBD為克羅恩病(Crohn's disease)。
  55. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於抑制有需要之個體的腸中微生物感染、於微生物感染期間保存腸中杯狀細胞、或促進腸中之上皮細胞完整性、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合。
  56. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於抑制有需要之個體的腸中微生物感染、於微生物感染期間保存腸中杯狀細胞、或促進腸中之上皮細胞完整性、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合；其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  57. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於抑制有需要之個體的腸中微生物感染、於微生物感染期間保存腸中杯狀細胞、或促進腸中之上皮細胞完整性、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合；其中該IL- 22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  58. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於抑制有需要之個體的腸中微生物感染、於微生物感染期間保存腸中杯狀細胞、或促進腸中之上皮細胞完整性、上皮細胞增生、上皮細胞分化、上皮細胞遷移或上皮傷口癒合；其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  59. 如請求項55至58中任一項之用途，其中該上皮細胞為腸道上皮細胞。
  60. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療有需要之個體之急性腎損傷或急性胰腺炎。
  61. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療有需要之個體之急性腎損傷或急性胰腺炎，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  62. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療有需要之個體之急性腎損傷或急性胰腺炎，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  63. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療有需要之個體之急性腎損傷或急性胰腺炎，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  64. 如請求項49至52、55至58及60至63中任一項之用途，其中該個體擬共同投與至少一種其他治療劑。
  65. 如請求項49至52、55至58及60至63中任一項之用途，其中該藥物擬經靜脈內、經皮下或經腹膜內投與。
  66. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物 係用於在有需要之個體中加速或增進個體之傷口癒合。
  67. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於加速或增進個體之傷口癒合，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  68. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於加速或增進個體之傷口癒合，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  69. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於加速或增進個體之傷口癒合，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  70. 如請求項66至69中任一項之用途，其中該傷口為慢性傷口或感染傷口。
  71. 如請求項70之用途，其中該個體為糖尿病性。
  72. 如請求項71之用途，其中該糖尿病性個體患有II型糖尿病。
  73. 如請求項70之用途，其中該傷口為糖尿病性足部潰瘍。
  74. 如請求項70之用途，其中投與該藥物直到呈現完全傷口閉合。
  75. 如請求項70之用途，其中該個體擬共同投與至少一種用於加速或促進傷口癒合之其他治療劑。
  76. 如請求項70之用途，其中該藥物擬經靜脈內、經皮下、經腹膜內或局部投與。
  77. 如請求項76之用途，其中該藥物係經局部投與。
  78. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療心血管病況，該病況包括動脈粥樣硬化斑塊形成之病理。
  79. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用 於治療心血管病況，該病況包括動脈粥樣硬化斑塊形成之病理，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  80. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療心血管病況，該病況包括動脈粥樣硬化斑塊形成之病理，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  81. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療心血管病況，該病況包括動脈粥樣硬化斑塊形成之病理，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  82. 如請求項78至81中任一項之用途，其中該心血管病況係選自由冠狀動脈疾病、冠狀微血管疾病、中風、頸動脈疾病、外周動脈疾病、及慢性腎疾病組成之群。
  83. 如請求項82之用途，其中該藥物減慢動脈粥樣硬化斑塊形成之進展。
  84. 如請求項78至81中任一項之用途，其中該個體已經過確診處在發展出心血管病況之風險。
  85. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療代謝症候群。
  86. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療代謝症候群，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  87. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療代謝症候群，其中該IL-22 Fc融合蛋白 質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  88. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於在有需要之個體中治療代謝症候群，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  89. 如請求項85至88中任一項之用途，其進一步包括減低一或多種與代謝症候群相關聯之風險因子，包括腹部肥胖、高血糖症、血脂異常、及高血壓中之一或多者。
  90. 如請求項89之用途，其進一步包括減低個體中之細菌脂多醣(LPS)水平。
  91. 如請求項89之用途，其中該個體需要HDL/LDL脂質譜之改變。
  92. 如請求項78至81及85至88中任一項之用途，其中該個體擬共同投與至少一種其他治療劑。
  93. 如請求項78至81及85至88中任一項之用途，其中該醫藥組合物擬經靜脈內、經皮下或經腹膜內投與。
  94. 一種如請求項37至42中任一項之醫藥組合物或如請求項1至20中任一項之IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療急性內毒素血症、敗血症、或二者。
  95. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療急性內毒素血症、敗血症、或二者，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。
  96. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療急性內毒素血症、敗血症、或二者，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
  97. 一種IL-22 Fc融合蛋白質用於製造藥物之用途，其中該藥物係用於治療急性內毒素血症、敗血症、或二者，其中該IL-22 Fc融合蛋白質包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列。
  98. 如請求項94至97中任一項之用途，其中該個體需要HDL/LDL脂質譜之改變。
  99. 如請求項98之用途，其中該個體擬共同投與至少一種用於治療急性內毒素血症、敗血症、或二者之其他治療劑。
  100. 如請求項98之用途，其中該藥物擬經靜脈內、經皮下或經腹膜內投與。
  101. 如請求項49至52、55至58、60至63、66至69、78至81、85至88及94至97中任一項之用途，其中該藥物擬經靜脈內投與。
  102. 如請求項49至52、55至58、60至63、66至69、78至81、85至88及94至97中任一項之用途，其中藥物擬經皮下投與。
  103. 如請求項49至52、55至58、60至63、66至69、78至81、85至88及94至97中任一項之用途，其中該個體為病患。
  104. 如請求項49至52、55至58、60至63、66至69、78至81、85至88及94至97中任一項之用途，其中該個體為人類。
TW103109979A 2013-03-15 2014-03-17 IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法 TWI772250B (zh)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361800795P 2013-03-15 2013-03-15
US201361801144P 2013-03-15 2013-03-15
US201361800148P 2013-03-15 2013-03-15
US61/801,144 2013-03-15
US61/800,795 2013-03-15
US61/800,148 2013-03-15
US201361821062P 2013-05-08 2013-05-08
US61/821,062 2013-05-08
US201361860176P 2013-07-30 2013-07-30
US61/860,176 2013-07-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201524995A TW201524995A (zh) 2015-07-01
TWI772250B true TWI772250B (zh) 2022-08-01

Family

ID=50942310

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110128033A TW202214675A (zh) 2013-03-15 2014-03-17 IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法
TW103109979A TWI772250B (zh) 2013-03-15 2014-03-17 IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110128033A TW202214675A (zh) 2013-03-15 2014-03-17 IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法

Country Status (29)

Country Link
US (12) US10160793B2 (zh)
EP (2) EP2970422B1 (zh)
JP (3) JP6456356B2 (zh)
KR (1) KR102426481B1 (zh)
CN (1) CN105143252A (zh)
AU (3) AU2014233494B2 (zh)
BR (1) BR112015023140A8 (zh)
CA (1) CA2903587C (zh)
CL (1) CL2015002654A1 (zh)
DK (1) DK2970422T3 (zh)
EA (1) EA035645B1 (zh)
ES (1) ES2676023T3 (zh)
HK (1) HK1218424A1 (zh)
HR (1) HRP20181090T1 (zh)
HU (1) HUE039291T2 (zh)
LT (1) LT2970422T (zh)
MX (2) MX368005B (zh)
PE (2) PE20211272A1 (zh)
PH (2) PH12015502125A1 (zh)
PL (1) PL2970422T3 (zh)
PT (1) PT2970422T (zh)
RS (1) RS57393B1 (zh)
SG (2) SG10201808523RA (zh)
SI (1) SI2970422T1 (zh)
TR (1) TR201809571T4 (zh)
TW (2) TW202214675A (zh)
UA (1) UA118843C2 (zh)
WO (1) WO2014145016A2 (zh)
ZA (1) ZA201506297B (zh)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101361968B (zh) 2007-08-06 2011-08-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用
JP6254146B2 (ja) 2012-03-27 2017-12-27 エヌジーエム バイオファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 代謝障害を治療するための組成物および方法
JP6272907B2 (ja) 2013-01-30 2018-01-31 エヌジーエム バイオファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 代謝障害の処置における組成物及び使用方法
US9161966B2 (en) 2013-01-30 2015-10-20 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. GDF15 mutein polypeptides
US9546203B2 (en) 2013-03-14 2017-01-17 Amgen Inc. Aglycosylated Fc-containing polypeptides with cysteine substitutions
SI2970422T1 (en) 2013-03-15 2018-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag IL-22 polypeptides and IL-22-Fc fusion proteins and procedures for use
CN112386680A (zh) * 2013-11-07 2021-02-23 纪念斯隆–凯特林癌病中心 在胃肠道移植物抗宿主病的治疗中使用il-22的方法
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
CN104623639A (zh) * 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素22二聚体在制备治疗胰腺炎药物中的应用
EP3174894B1 (en) 2014-07-30 2021-06-23 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
AP2017009828A0 (en) 2014-10-31 2017-03-31 Ngm Biopharmaceuticals Inc Compositions and methods of use for treating metabolic disorders
US11566082B2 (en) 2014-11-17 2023-01-31 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
WO2016108130A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Sun Pharmaceutical Industries Limited Topical pharmaceutical compositions comprising nebivolol for the treatment of diabetic wounds
MX2017012966A (es) 2015-04-10 2018-06-06 Amgen Inc Muteinas de interleuquina 2 para la expansion de celulas t regulatorias.
CN106317225A (zh) * 2015-06-28 2017-01-11 复旦大学 具有靶向性长效白细胞介素22融合蛋白及其制备方法和用途
CR20180087A (es) * 2015-07-16 2018-05-14 Philogen Spa Inmunoconjugados de il22
EP4137158A1 (en) 2015-08-07 2023-02-22 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
EP3167892A1 (en) 2015-11-10 2017-05-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for preventing or treating imflammatory bowel diseases
US10174119B2 (en) 2016-03-31 2019-01-08 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Binding proteins and methods of use thereof
EP3442562B1 (en) * 2016-04-15 2022-09-21 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd An il-22 dimer for use in treating necrotizing enterocolitis
WO2017191817A1 (ja) * 2016-05-02 2017-11-09 味の素株式会社 アジド基含有Ｆｃタンパク質
ES2909833T3 (es) 2016-05-11 2022-05-10 Cytiva Bioprocess R & D Ab Método de limpieza y/o desinfección de una matriz de separación
US11708390B2 (en) 2016-05-11 2023-07-25 Cytiva Bioprocess R&D Ab Method of storing a separation matrix
US10703774B2 (en) 2016-09-30 2020-07-07 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US10730908B2 (en) 2016-05-11 2020-08-04 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US10654887B2 (en) 2016-05-11 2020-05-19 Ge Healthcare Bio-Process R&D Ab Separation matrix
WO2017194597A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation matrix
US10889615B2 (en) 2016-05-11 2021-01-12 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
CN108239151B (zh) * 2016-12-23 2020-07-03 海门晟斯生物制药有限公司 重组单链人FVIII-Fc融合蛋白及其应用
US11266745B2 (en) 2017-02-08 2022-03-08 Imaginab, Inc. Extension sequences for diabodies
BR112019017853A2 (pt) * 2017-02-28 2021-04-27 Vib Vzw Meios e métodos para liberação oral de proteína
CN108948207B (zh) * 2017-05-22 2020-11-13 杭州博虎生物科技有限公司 一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白及其编码基因与应用
CR20200327A (es) * 2018-01-26 2020-11-05 Genentech Inc Proteínas de fusión fc il-22 y métodos de uso
ES2932861T3 (es) 2018-01-26 2023-01-27 Hoffmann La Roche Composiciones de IL-22 Fc y procedimientos de uso
EP3755364A1 (en) * 2018-02-21 2020-12-30 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins
US11541105B2 (en) 2018-06-01 2023-01-03 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for disrupting biofilm formation and maintenance
KR20210019464A (ko) 2018-06-05 2021-02-22 바이오아트라, 인코퍼레이티드 항 il-22 항체, 항체 단편, 이의 면역접합체 및 이의 용도
CN108918571B (zh) * 2018-06-15 2021-02-02 山西大学 代谢标志物在制备肾病综合征病变进程诊断鉴别试剂中的应用
EA202190481A1 (ru) * 2018-08-10 2021-05-24 ДИАПИН ТЕРАПЬЮТИКС, ЭлЭлСи Трипептиды и лечение метаболических, сердечно-сосудистых и воспалительных заболеваний
SG11202103313RA (en) 2018-09-06 2021-04-29 Cidara Therapeutics Inc Compositions and methods for the treatment of viral infections
CN113286808A (zh) * 2018-10-23 2021-08-20 蜻蜓疗法股份有限公司 异二聚体Fc融合蛋白
CN113347997A (zh) 2018-11-07 2021-09-03 应用分子运输公司 用于经口递送异源有效载荷的Cholix衍生的携带体
ES2911075T3 (es) 2018-11-07 2022-05-17 Applied Molecular Transport Inc Constructos de administración para transcitosis y métodos relacionados
US20220010019A1 (en) * 2018-11-27 2022-01-13 The General Hospital Corporation Targeting intraepithelial lymphocytes for treatment of metabolic syndrome
CN114206373A (zh) * 2019-07-26 2022-03-18 豪夫迈·罗氏有限公司 用于以IL-22 Fc融合蛋白预防或治疗移植物抗宿主病(GVHD)的给药
CN114599665A (zh) 2019-08-16 2022-06-07 应用分子转运公司 组合物、制剂及白细胞介素产生和纯化
TW202122117A (zh) 2019-09-06 2021-06-16 美商席達拉醫療有限公司 用於治療病毒感染之組合物及方法
WO2021062012A1 (en) * 2019-09-25 2021-04-01 Emory University Use of klk10 and engineered derivatizations thereof
CN112618698B (zh) * 2019-10-08 2021-10-08 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白的注射制剂
EP3819307A1 (en) 2019-11-07 2021-05-12 CytoKi Pharma ApS Therapeutic derivatives of interleukin-22
EP4107185A1 (en) 2020-03-23 2022-12-28 Genentech, Inc. Biomarkers for predicting response to il-6 antagonist in covid-19 pneumonia
WO2021207662A1 (en) * 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
AU2021322239A1 (en) 2020-08-07 2023-02-23 Genentech, Inc. Flt3 ligand fusion proteins and methods of use
CN112007146A (zh) * 2020-09-03 2020-12-01 上海市儿童医院 Il-22在治疗和/或预防脓毒症诱发的肝脏损伤的药物中的用途
EP4213877A1 (en) 2020-09-17 2023-07-26 Genentech, Inc. Results of empacta: a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter study to evaluate the efficacy and safety of tocilizumab in hospitalized patients with covid-19 pneumonia
BR112023009875A2 (pt) 2020-11-23 2024-02-06 Genentech Inc Métodos para tratar um indivíduo com uma infecção por sars-cov-2, para reduzir a ligação de sars-cov-2 a uma célula, para diminuir a infecção por sars-cov-2 e para identificar um modulador, métodos de profilaxia, moduladores isolados, usos e antagonistas
WO2022192419A2 (en) 2021-03-09 2022-09-15 Massachusetts Institute Of Technology Methods of treating inflammatory bowel disease (ibd) with anti- tnf-blockade

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1898262A (zh) * 2003-12-30 2007-01-17 默克专利有限公司 Il－7融合蛋白
WO2011087986A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-21 Amgen Inc. Il-22-fc and hepcidin activity

Family Cites Families (148)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
ZA811368B (en) 1980-03-24 1982-04-28 Genentech Inc Bacterial polypedtide expression employing tryptophan promoter-operator
US4873191A (en) 1981-06-12 1989-10-10 Ohio University Genetic transformation of zygotes
NZ201705A (en) 1981-08-31 1986-03-14 Genentech Inc Recombinant dna method for production of hepatitis b surface antigen in yeast
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
AU2353384A (en) 1983-01-19 1984-07-26 Genentech Inc. Amplification in eukaryotic host cells
US4713339A (en) 1983-01-19 1987-12-15 Genentech, Inc. Polycistronic expression vector construction
WO1984003506A1 (en) 1983-03-08 1984-09-13 Commw Serum Lab Commission Antigenically active amino acid sequences
US4708871A (en) 1983-03-08 1987-11-24 Commonwealth Serum Laboratories Commission Antigenically active amino acid sequences
NZ207394A (en) 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4736866A (en) 1984-06-22 1988-04-12 President And Fellows Of Harvard College Transgenic non-human mammals
NZ215865A (en) 1985-04-22 1988-10-28 Commw Serum Lab Commission Method of determining the active site of a receptor-binding analogue
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
JPS63502716A (ja) 1986-03-07 1988-10-13 マサチューセッツ・インステチュート・オブ・テクノロジー 糖タンパク安定性の強化方法
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4717717A (en) 1986-11-05 1988-01-05 Ethicon, Inc. Stabilized compositions containing epidermal growth factor
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5010182A (en) 1987-07-28 1991-04-23 Chiron Corporation DNA constructs containing a Kluyveromyces alpha factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides
US5705485A (en) 1987-09-18 1998-01-06 Ethicon, Inc. Gel formulations containing growth factors
US5457093A (en) 1987-09-18 1995-10-10 Ethicon, Inc. Gel formulations containing growth factors
NZ226171A (en) 1987-09-18 1990-06-26 Ethicon Inc Gel formulation containing polypeptide growth factor
GB8724885D0 (en) 1987-10-23 1987-11-25 Binns M M Fowlpox virus promotors
JPH04501201A (ja) 1987-12-21 1992-03-05 ジ・アップジョン・カンパニー 発芽植物種子類のアグロバクテリウム媒介形質転換
US5571689A (en) 1988-06-16 1996-11-05 Washington University Method of N-acylating peptide and proteins with diheteroatom substituted analogs of myristic acid
AU4005289A (en) 1988-08-25 1990-03-01 Smithkline Beecham Corporation Recombinant saccharomyces
US5663143A (en) 1988-09-02 1997-09-02 Dyax Corp. Engineered human-derived kunitz domains that inhibit human neutrophil elastase
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
US5130298A (en) 1989-05-16 1992-07-14 Ethicon, Inc. Stabilized compositions containing epidermal growth factor
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
JP3523252B2 (ja) 1990-11-21 2004-04-26 ホウテン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 等モル多種オリゴマー混合物、特にオリゴペプチド混合物の合成
EP0564531B1 (en) 1990-12-03 1998-03-25 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
US5206161A (en) 1991-02-01 1993-04-27 Genentech, Inc. Human plasma carboxypeptidase B
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
WO2000073454A1 (en) 1999-06-02 2000-12-07 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP2001527412A (ja) 1997-05-14 2001-12-25 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ，インコーポレイテッド 抗菌ペプチド
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
WO2002016611A2 (en) 2000-08-24 2002-02-28 Genentech, Inc. Interleukin-22 polypeptides, nucleic acids encoding the same and methods for the treatment of pancreatic disorders
WO1999017786A1 (en) 1997-10-08 1999-04-15 Theragem, Inc. Mammalian-derived peptides for the treatment of microbial infection
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
EP1068241B1 (en) 1998-04-02 2007-10-10 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
EP2180007B2 (en) 1998-04-20 2017-08-30 Roche Glycart AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
AU4208799A (en) 1998-05-29 1999-12-13 Human Genome Sciences, Inc. Interleukins-21 and 22
US20010023070A1 (en) 1998-05-29 2001-09-20 Reinhard Ebner Interleukins-21 and 22
US6335155B1 (en) 1998-06-26 2002-01-01 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapidly identifying small organic molecule ligands for binding to biological target molecules
DK1107791T3 (da) 1998-09-04 2007-09-03 Scios Inc Hydrogelpræparater til controlled release-administration af vækstfaktorer
US6927044B2 (en) 1998-09-25 2005-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 receptor based cytokine traps
JP3769189B2 (ja) 1998-10-26 2006-04-19 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ Ｔ細胞誘導性因子（ｔｉｆ）をコードする単離された核酸分子、コードされたタンパク質およびその使用
JP2002533726A (ja) 1998-12-28 2002-10-08 サネシス ファーマシューティカルス インコーポレイテッド 結合のための小有機分子リガンドの同定
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HU230769B1 (hu) 1999-01-15 2018-03-28 Genentech Inc. Módosított effektor-funkciójú polipeptid-változatok
EP2264166B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
ATE377077T1 (de) 1999-04-28 2007-11-15 Genetics Inst Llc Humane gil-19/ae289 proteine und dafür kodierende polynukleotide
US6939545B2 (en) 1999-04-28 2005-09-06 Genetics Institute, Llc Composition and method for treating inflammatory disorders
AU5047600A (en) 1999-05-27 2000-12-18 Schering Corporation Mammalian interleukin-10 homologs: il-d110 and il-d210
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
BR0014480A (pt) 1999-10-04 2002-06-11 Medicago Inc Método para regular a transcrição de genes estranhos
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
US7226591B2 (en) 2000-05-22 2007-06-05 Genentech, Inc. Interleukin-22 polypeptides, nucleic acids encoding the same and methods for the treatment of pancreatic disorders
US20030170823A1 (en) 1999-12-23 2003-09-11 Presnell Scott R. Novel cytokine ZCYTO18
ATE459716T1 (de) 1999-12-23 2010-03-15 Zymogenetics Inc Zytokin zcyt018
GB0024442D0 (en) 2000-10-05 2000-11-22 Isis Innovation Genetic factors affecting the outcome of viral infections
CN102311986B (zh) 2000-10-06 2015-08-19 协和发酵麒麟株式会社 产生抗体组合物的细胞
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7638604B2 (en) 2001-02-23 2009-12-29 Genetics Institute, Llc Monoclonal antibodies against interleukin-22
NZ527396A (en) 2001-02-23 2007-12-21 Genetics Inst Llc Antibodies and fragments thereof for the binding of IL-22 and use therefore for treating inflammatory disorders
US20030099608A1 (en) 2001-03-27 2003-05-29 Presnell Scott R. Human cytokine receptor
NZ581474A (en) 2001-08-03 2011-04-29 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
CA2461665A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
MXPA04003798A (es) 2001-10-25 2004-07-30 Genentech Inc Composiciones de glicoproteina.
FR2833011B1 (fr) 2001-12-04 2004-10-29 Univ Claude Bernard Lyon Nouvelle proteine a activite inhibitrice de l'il-6
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
IL164181A0 (en) 2002-03-22 2005-12-18 Zymogenetics Inc Anti-il-tif antibodies and methods of using in inflammation
ES2362419T3 (es) 2002-04-09 2011-07-05 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa.
JPWO2003084569A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物含有医薬
WO2003085118A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede de production de composition anticorps
CA2481925A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
AU2003236022A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells with modified genome
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
US20030235561A1 (en) 2002-06-25 2003-12-25 Cell Based Delivery Inc. Vascularized organized tissues and uses thereof
CA2490280A1 (en) 2002-07-01 2004-01-08 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to reg iv
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
BRPI0316779B8 (pt) 2002-12-16 2023-02-28 Genentech Inc Anticorpo anti-cd20 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seus usos, composição, artigo manufaturado e formulação líquida
WO2004058307A1 (en) 2002-12-18 2004-07-15 Wyeth Methods for screening, treating and diagnosing inflammatory bowel disease and compositions thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
CA2766627C (en) 2003-05-02 2019-12-03 Xencor, Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
AU2004252169A1 (en) 2003-06-23 2005-01-06 Genetics Institute, Llc Antibodies against interleukin-22 and uses therefor
EP3100611B1 (en) 2003-08-01 2018-09-12 Stratatech Corporation Human skin equivalents expressing exogenous polypeptides
AU2004279742A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Fused protein composition
US20070134759A1 (en) 2003-10-09 2007-06-14 Harue Nishiya Process for producing antibody composition by using rna inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
AU2004287205A1 (en) 2003-11-05 2005-05-19 Immunoclin Ltd Biomarkers of resistance to HIV-infections in humans and biological applications thereof
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
PL1737891T3 (pl) 2004-04-13 2013-08-30 Hoffmann La Roche Przeciwciała przeciw selektynie p
US20050277593A1 (en) 2004-05-24 2005-12-15 Washington University Therapeutic uses of Reg protein
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CN100515491C (zh) 2005-01-04 2009-07-22 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22的医药用途
JP2008546707A (ja) 2005-06-17 2008-12-25 ジェネンテック・インコーポレーテッド 創傷治癒
RU2302460C1 (ru) 2005-11-02 2007-07-10 Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук (СО РАН) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pBi101-IL18, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ ИНТЕРЛЕЙКИНА-18 ЧЕЛОВЕКА В ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЯХ
EP1962584A2 (en) 2005-11-21 2008-09-03 Genentech, Inc. Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto
KR101453570B1 (ko) 2005-12-02 2014-10-22 제넨테크, 인크. Ｉｌ-22 및 ｉｌ-22ｒ에 결합하는 항체를 포함하는,사이토카인 신호 전달과 관련된 질환 및 장애 치료용조성물 및 치료 방법
TWI417301B (zh) 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
WO2007149814A1 (en) 2006-06-19 2007-12-27 Wyeth Methods of modulating il-22 and il-17
WO2008023689A1 (fr) * 2006-08-21 2008-02-28 National University Corporation Kobe University Procédé de production d'une protéine de fusion
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
WO2008112543A2 (en) 2007-03-09 2008-09-18 Wyeth Rat, rabbit, and cynomolgus monkey il-21 and il-22 nucleotide and polypeptide sequences
CN101361968B (zh) 2007-08-06 2011-08-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用
US20110118173A1 (en) 2007-08-22 2011-05-19 Pownall Henry J Method of delipidation of hdl using serum opacity factor to prevent, inhibit, and/or reverse atherosclerosis
CN101225110B (zh) 2007-10-23 2010-10-20 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 人白细胞介素-22突变体及其构建方法和应用
PT2514436T (pt) 2007-11-07 2018-03-21 Genentech Inc Il-22 para utilização no tratamento de distúrbios microbianos
CA2718634A1 (en) 2008-03-21 2009-09-24 Wyeth Llc Antibodies against interleukin-10-like cytokines and uses therefor
EP2318529B1 (en) * 2008-08-04 2017-10-18 Five Prime Therapeutics, Inc. Fgfr extracellular domain acidic region muteins
AU2010203446B2 (en) 2009-01-12 2015-12-17 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Prevention and/or treatment of multiple organ dysfunction syndrome with interleukin-22
JP2012515556A (ja) * 2009-01-23 2012-07-12 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド 低下したエフェクタ機能を有する安定化Ｆｃポリペプチドおよび使用方法
WO2010124018A1 (en) 2009-04-21 2010-10-28 Amgen Inc. FRAGMENTATION RESISTANT IgG1 Fc-CONJUGATES
JP5523771B2 (ja) 2009-09-02 2014-06-18 三菱農機株式会社 移植機
GB0916124D0 (en) 2009-09-15 2009-10-28 Univ Cardiff Method and kit for the classification and prognosis of wounds
CN102946906B (zh) 2010-04-23 2015-07-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 生产异源多聚体蛋白质
CN102380091A (zh) 2010-08-31 2012-03-21 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素-22在治疗病毒性肝炎中的应用
EP2668207A4 (en) 2011-01-24 2015-06-10 Univ Singapore LIPOARABINOMANNANE ANTIGEN-BINDING PROTEINS HAVING A MANNOSIS FROM PATHOGENIC MYCOBACTERIAS
CN107266577B (zh) 2011-10-11 2022-09-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 双特异性抗体的改进的组装
CN103182072B (zh) 2011-12-27 2017-05-03 健能隆医药技术（上海）有限公司 白介素‑22在治疗和预防神经损伤疾病或神经退行性疾病中的用途
JP5668708B2 (ja) 2012-02-14 2015-02-12 住友電気工業株式会社 光プローブ
US9546203B2 (en) * 2013-03-14 2017-01-17 Amgen Inc. Aglycosylated Fc-containing polypeptides with cysteine substitutions
SI2970422T1 (en) 2013-03-15 2018-07-31 F. Hoffmann-La Roche Ag IL-22 polypeptides and IL-22-Fc fusion proteins and procedures for use

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1898262A (zh) * 2003-12-30 2007-01-17 默克专利有限公司 Il－7融合蛋白
WO2011087986A1 (en) * 2010-01-13 2011-07-21 Amgen Inc. Il-22-fc and hepcidin activity

Also Published As

Publication number Publication date
NZ751499A (en) 2021-07-30
LT2970422T (lt) 2018-06-25
PT2970422T (pt) 2018-07-06
BR112015023140A8 (pt) 2018-01-23
US20190177390A1 (en) 2019-06-13
WO2014145016A3 (en) 2015-03-05
NZ711095A (en) 2021-06-25
ZA201506297B (en) 2018-11-28
JP2019030308A (ja) 2019-02-28
US20140314711A1 (en) 2014-10-23
PL2970422T3 (pl) 2018-09-28
US20170008942A1 (en) 2017-01-12
MX368005B (es) 2019-09-13
PE20151673A1 (es) 2015-11-27
PE20211272A1 (es) 2021-07-19
EP3385277A1 (en) 2018-10-10
US20230063741A1 (en) 2023-03-02
US20190177387A1 (en) 2019-06-13
US10087227B2 (en) 2018-10-02
AU2020205284A1 (en) 2020-08-06
JP6456356B2 (ja) 2019-01-23
US11332507B2 (en) 2022-05-17
US20170088596A1 (en) 2017-03-30
US11136365B2 (en) 2021-10-05
EP2970422A2 (en) 2016-01-20
JP2016522795A (ja) 2016-08-04
CN105143252A (zh) 2015-12-09
EA035645B1 (ru) 2020-07-21
BR112015023140A2 (pt) 2017-11-21
US20180362608A1 (en) 2018-12-20
HUE039291T2 (hu) 2018-12-28
SG11201507429TA (en) 2015-10-29
US11130791B2 (en) 2021-09-28
US10160793B2 (en) 2018-12-25
JP7245021B2 (ja) 2023-03-23
US11155591B2 (en) 2021-10-26
AU2014233494A1 (en) 2015-09-03
US20190233491A1 (en) 2019-08-01
TW202214675A (zh) 2022-04-16
WO2014145016A2 (en) 2014-09-18
MX2019010846A (es) 2019-10-30
US20190177386A1 (en) 2019-06-13
US20190177388A1 (en) 2019-06-13
AU2018223004A1 (en) 2018-09-20
US10584155B2 (en) 2020-03-10
UA118843C2 (uk) 2019-03-25
EP2970422B1 (en) 2018-04-18
CA2903587C (en) 2021-09-28
HRP20181090T1 (hr) 2018-09-07
TR201809571T4 (tr) 2018-07-23
HK1218424A1 (zh) 2017-02-17
US10544198B2 (en) 2020-01-28
JP2022046520A (ja) 2022-03-23
ES2676023T3 (es) 2018-07-16
EA201591515A1 (ru) 2016-03-31
US9815880B2 (en) 2017-11-14
CA2903587A1 (en) 2014-09-18
AU2018223004B2 (en) 2020-04-16
RS57393B1 (sr) 2018-09-28
PH12020550205A1 (en) 2021-09-01
CL2015002654A1 (es) 2016-07-15
US20190177389A1 (en) 2019-06-13
SG10201808523RA (en) 2018-11-29
PH12015502125B1 (en) 2016-01-25
PH12015502125A1 (en) 2016-01-25
AU2014233494B2 (en) 2018-10-04
KR102426481B1 (ko) 2022-07-27
KR20150128944A (ko) 2015-11-18
US20170320926A1 (en) 2017-11-09
SI2970422T1 (en) 2018-07-31
TW201524995A (zh) 2015-07-01
DK2970422T3 (en) 2018-07-16
MX2015011146A (es) 2016-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI772250B (zh) IL-22多肽及IL-22Fc融合蛋白質及其使用方法
TWI835773B (zh) 組合物及使用方法
NZ751498A (en) Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
NZ751498B2 (en) Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
NZ711095B2 (en) Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
NZ751499B2 (en) Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
TW201938794A (zh) 組合物及使用方法