TWI769167B

TWI769167B - 皮膚外用的抗氧化組成物

Info

Publication number: TWI769167B
Application number: TW106121298A
Authority: TW
Inventors: 金炫廷; 宋旼庭; 李垠姃; 朴錄賢; 金知賢; 金志映
Original assignee: 南韓商愛茉莉太平洋股份有限公司
Priority date: 2016-06-27
Filing date: 2017-06-26
Publication date: 2022-07-01
Also published as: US20190142735A1; KR20180001378A; CN109414398B; CN109414398A; JP7012032B2; WO2018004212A1; KR102598485B1; US10952956B2; TW201800090A; JP2019518755A

Abstract

本發明是有關於一種皮膚外用的抗氧化組成物以及一種包括其的皮膚外用劑組成物與化妝品組成物，更詳細而言，有關於一種包括酵母醱酵物及α-酮戊二酸與煙鹼醯胺中的各單一成分或其等的混合物的皮膚外用的抗氧化組成物。本發明的皮膚外用的抗氧化組成物不僅抗氧化效果優異，而且效果的持久性較高，因此於使用至皮膚時，可獲得經提高的抗氧化效果，且對人體無有害性，因此可製備化妝品、醫藥品等各種製品。

Description

皮膚外用的抗氧化組成物

本發明是有關於一種具有經提高的抗氧化功效的皮膚外用的抗氧化組成物。

人的皮膚作為人體的首要保護膜，發揮保護體內的器官免受如溫度及濕度的變化、紫外線、污染物質的外部環境的刺激的功能。

隨著年齡的增長，人的皮膚因多種內部因素與外部因素而發生變化。即，於內部因素方面，調節新陳代謝的各種激素的分泌減少，免疫細胞的功能與細胞的活性下降，因此有機體所需的免疫蛋白質及構成有機體的蛋白質的生物合成減少。並且，於外部因素方面，因過度地暴露於紫外線、自由基及有害活性氧等的產生量增加而不僅皮膚的厚度減小、皺紋增加且彈力減小，而且引起皮膚血色亦變暗沉、經常產生皮膚問題、黃褐斑、雀斑及老年斑亦增加等各種變化。

最近，因各種有害環境產生的壓力及因太陽光產生的活性氧類(Reactive Oxygen Species，ROS)的增加而構成皮膚的物質的分解及改質加速。因此，皮膚基質受到破壞且變薄，從而不僅引起皮膚老化的各種症狀，而且成為促進有機體的老化或致癌等多種疾病的原因。

具體而言，因體內的酶類、還原代謝、化學藥品、污染物質及光化學反應等各種物理因素、化學因素及環境因素等而生成活性氧類。已知產生的活性氧類因破壞脂質、蛋白質、糖、脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid，DNA)等的細胞構成成分而引起細胞老化或包括癌在內的各種疾病。並且，包括作為因上述活性氧類引起的脂質過氧化的產物而生成的脂質過氧化物在內的多種體內過氧化物亦對細胞造成氧化破壞而引起各種功能障礙，因此亦成為各種疾病的原因。因此，大量地進行對抑制因活性氧類引起的氧化的抗氧化物質的開發及研究。

抗氧化物質廣泛地分佈於動植物界，已知有麩胱甘肽(glutathione，GSH)、膽紅素(bilirubin)、維生素C、維生素E、兒茶素、檞皮酮、類黃酮(β-胡蘿蔔素、番茄紅素、葉黃素、花青素、白藜蘆醇)、異黃酮(金雀異黃素、大豆異黃酮苷素)等非酶性抗氧化物質以及如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化酶(peroxidase)、硫氧化還原蛋白(thioredoxin，TRX)等的酶性抗氧化物質。

特別是，活性氧類與皮膚老化的相關性較大，故而曾進行藉由將抗氧化物質調配至皮膚外用劑而欲達成防止皮膚氧化及老化的效果的多種嘗試。

作為一例，於韓國公開專利第2016-0016382號中，揭示有於皮膚外用劑組成物中包括綠花白千層萃取物而可獲得抗氧化及抗菌作用。

並且，於韓國公開專利第2015-0087146號中，揭示有可利用包括水甘草鹼(tabersonine)的皮膚改善用組成物來表現出皮膚特性改善效果及抗氧化效果。

上述專利具有一定程度的皮膚抗氧化功效，但其效果並不充分。具體而言，於將天然抗氧化物質應用至皮膚時，無法期待實質上充分的效果，於使用合成抗氧化物質的情形時，抗氧化力優異，但考慮人體安全性(safety)、加工穩定性(stability)等而限制上述合成氧化物質的使用。因此，實情為更需開發一種既對人體皮膚無害，亦具有卓越的抗氧化效果的組成物。

[先前技術文獻]

[專利文獻]

韓國公開專利第2016-0016382號(2016.02.15)，包括具有抗氧化及抗菌作用的綠花白千層萃取物的皮膚外用劑組成物

韓國公開專利第2015-0087146號(2015.07.29)，皮膚改善用組成物

因此，本發明者等人為了解決上述問題而多方面地進行研究，結果確認到如下情形：於在皮膚外用的抗氧化組成物中連同酵母醱酵物一併包括有助於恢復抗氧化物質的功能的化合物的情形時，抗氧化效果更優異。

因此，本發明的目的在於提供一種具有優異的抗氧化功效的皮膚外用的抗氧化組成物。

為了達成上述目的，本發明提供一種包括酵母醱酵物、及α-酮戊二酸或煙鹼醯胺中的至少一者以上的皮膚外用的抗氧化組成物。

上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：上述酵母醱酵物包括硫氧化還原蛋白。

此時，上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：上述酵母醱酵物為利用酵母菌屬酵母所製備者。

此時，上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，包括0.000001重量%至30重量%的上述酵母醱酵物。

上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，包括0.000001重量%至50重量%的上述α-酮戊二酸。

上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，包括0.000001重量%至 10重量%的上述煙鹼醯胺。

此時，上述皮膚外用的抗氧化組成物的特徵在於：上述α-酮戊二酸與煙鹼醯胺的混合物以5000：1至1：5000的重量比混合。

並且，本發明提供一種包括上述皮膚外用的抗氧化組成物的皮膚外用劑組成物。

而且，本發明提供一種包括上述皮膚外用的抗氧化組成物的化妝品組成物。

在本發明的皮膚外用的抗氧化組成物中，酵母醱酵物中所包括的抗氧化物質消除活性氧類而表現出抗氧化效果，藉由具有高還原力的化合物而恢復氧化的抗氧化物質的活性，藉此可提高包括上述抗氧化物質的皮膚外用的抗氧化組成物的抗氧化效果的持久性。

因此，於製品化成皮膚外用劑、化妝品而使用至皮膚時，可將抗氧化功效最大化而防止因氧化引起的皮膚老化，改善皮膚狀態。

以下，更詳細地對本發明進行說明。

於本說明書中，“抗氧化效果或抗氧化功效”是指抑制因自由基(free radical)或活性氧類引起的細胞氧化，上述自由基是隨著因細胞內代謝或紫外線等的影響產生的氧化壓力而反應性較高，包括去除自由基或活性氧類來減少因其產生的細胞損傷。

本發明提供一種具有優異的抗氧化功效的皮膚外用的抗氧化組成物。

活性氧類是於正常細胞內的活性作用過程中生成，對細胞成長與生存而言非常重要。氧化壓力是因活性氧類的生成與去除上述活性氧類的抗氧化反應間的不均衡而與DNA、蛋白質或脂質(lipid)發生反應來使其受損的現象，已知其為老化或癌、糖尿病、動脈硬化症等各種慢性疾病的核心原因。此種氧化壓力對利用氧來生存的生物而言無法避免，但最近因放射線、臭氧、重金屬、微塵、紫外線、香煙等污染物、病毒、細菌感染而引起的炎症等自外部流入的有害刺激導致體內的氧化壓力急遽地增加。因此，有機體具備以氧化還原應答為基礎的各種抗氧化系統作為對活性氧類的防禦機制，其中典型的是硫氧化還原蛋白系統。

硫氧化還原蛋白(thioredoxin，TRX)作為分子量為10,000至13,000的低分子蛋白質，是於核糖核苷酸還原酶還原核糖核苷酸時供與氫離子的輔酶。硫氧化還原蛋白具有稱為-半胱胺酸-甘胺酸-脯胺酸-半胱胺酸-(-Cys-Gly-Pro-Cys-)的活性部位，因此為存在於2個半胱胺酸殘基之間形成雙硫(S-S)鍵的氧化型與形成二硫醇(-SH-SH)鍵的還原型的細胞內的氧化．還原控制因子。此種硫氧化還原蛋白於細胞內還原消除活性氧類，但此時硫氧化還原蛋白被氧化，故而無法再執行抗氧化功能，且難以於體內自行生產，因此需要供給新的硫氧化還原蛋白。

因此，於本發明中，提出一種為了確保皮膚外用的抗氧化組成物的持久的抗氧化效果而連同具有抗氧化效果的酵母醱酵物一併包括生成還原抗氧化物質所需的煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate hydrate，NADPH)的化合物的皮膚外用的抗氧化組成物。

具體而言，本發明的皮膚外用的抗氧化組成物包括酵母醱酵物與α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid)或煙鹼醯胺(niacinamide)中的至少一者以上的混合物。

本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的酵母醱酵物是於原料中添加酵母而經由醱酵過程獲得的產物，包括硫氧化還原蛋白。

上述酵母醱酵物是於原料中利用酵母菌(Saccharomyces)屬酵母來醱酵所得的醱酵物，可藉由在本技術領域內通常執行的方法而直接製備、或購買市售製品而使用。此時，上述原料並無特別限制，例如可包括大米、糯米、糙米、黑米、米糠、大麥、小麥、黑麥、燕麥、粟、高粱、玉米、蕎麥、薏苡、黍、馬鈴薯、甘薯、木薯、山藥(薯蕷)、樹薯等。

於本發明中，使用Pharma Food International有限公司製備的酵母菌醱酵物(Saccharomyces Ferment)作為酵母醱酵物。上述酵母菌醱酵物可為以如下方式製備者：對醱酵未加工清酒與酵母菌(Saccharomyces)屬酵母的混合物後獲得的醱酵物進行過濾。

上述酵母菌(Saccharomyces)屬酵母可為釀酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)、卡爾酵母(Saccharomyces Carlsbergensis)、巴斯德酵母(Saccharomyces pastorianus)等。

上述硫氧化還原蛋白是由酵母分解原料中的有機物而生成，發揮如下重要的作用：還原因各種氧化壓力而過多地生成的活性氧類來抑制因此引起的氧化。特別是，自原核生物進化至真核生物一直保存有存在於上述硫氧化還原蛋白的活性部位的一對半胱胺酸殘基，因此其為地球上的所有生物共有的蛋白質，故而即便為於體外生產者，對人體的有害性亦非常小。

以1g的酵母醱酵物為基準，上述硫氧化還原蛋白的含量可為0.001g至0.005g，較佳為0.0015g至0.003g。若上述硫氧化還原蛋白的含量未滿上述範圍，則難以獲得硫氧化還原蛋白的抗氧化效果，相反地，於超過上述範圍的情形時，於精製時需要較多的時間與費用，故而存在最終獲得的製品的經濟性下降的問題。

以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，可使用0.000001重量%至30重量%、較佳為0.000001重量%至10重量%的上述酵母醱酵物。於上述酵母醱酵物的含量未滿上述範圍的情形時，抗氧化功效微弱，相反地，於超過上述範圍的情形時，會於應用至皮膚時產生安全性問題或於加工時產生穩定性問題。

本發明的皮膚外用的抗氧化組成物連同上述酵母醱酵物一併包括α-酮戊二酸與煙鹼醯胺中的各單一成分或其等的混合物。上述α-酮戊二酸或煙鹼醯胺發揮用以還原因於體內進行抗氧化作用而氧化的硫氧化還原蛋白的NADPH的供給源的作用。

上述α-酮戊二酸是作為體內能量代謝的三羧酸(Tricarboxylic Acid，TCA)循環的中間代謝產物，於三磷酸腺苷(ATP)生成過程中阻礙ATP合成酶(ATP synthase)而減少作為中間物的煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD⁺)的消耗。由此，剩餘的NAD⁺形成NADPH且具有還原力，從而可再利用硫氧化還原蛋白。

上述α-酮戊二酸可直接合成或利用市售的製品，並不限制於此。

以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，可使用0.000001重量%至50重量%、較佳為0.00001重量%至30重量%的上述α-酮戊二酸。於上述α-酮戊二酸的含量未滿上述範圍的情形時，其效果甚微，相反地，於超過上述範圍的情形時，會對人體引起副作用，難以實現均勻的溶解，因此會無法調配至劑型中。

上述煙鹼醯胺為煙醯胺或亦已知為吡啶-3-羧酸的維生素B3的生理活性醯胺，不僅具有抗氧化效果，而且作為NADPH 的前驅物而發揮於體內轉化成NADPH來有助於還原硫氧化還原蛋白的作用。

上述煙鹼醯胺可購入市售者或使用直接合成所得者，並不限制於此。

以整體皮膚外用的抗氧化組成物100重量%為基準，可使用0.000001重量%至10重量%、較佳為0.000001重量%至5重量%的上述煙鹼醯胺。若上述煙鹼醯胺的含量未滿上述範圍，則無法獲得因使用上述煙鹼醯胺而獲得的效果，相反地，於超過上述範圍的情形時，對皮膚產生刺激的可能性較高，亦會對劑型的穩定化產生較大的影響。

如上所述，可單獨使用上述α-酮戊二酸與煙鹼醯胺中的一者或混合而使用，α-酮戊二酸與煙鹼醯胺的混合物的重量比可為5000：1至1：5000，較佳為1000：1至1：1000，更佳為200：1至1：200，最佳為50：1至1：50。若上述重量比脫離上述範圍，則改善效果不足或會產生副作用。

包括上述組成的皮膚外用的抗氧化組成物於應用至皮膚時，不僅具有優異的抗氧化效果，而且持久地保持上述效果，因此可防止因氧化引起的皮膚老化，改善皮膚特性。

本發明的皮膚外用的抗氧化組成物除上述組成以外，可包括通常利用的成分，例如包括保持成分、保濕劑、軟化劑、界面活性劑、有機顏料及無機顏料、有機粉體，紫外線吸收劑、防腐劑，氣泡去除劑、增黏劑、殺菌劑、抗氧化劑、植物萃取物、pH值調整劑、酒精、色素、香料、血行促進劑、冷感劑、止汗(antihidrotic)劑等。

於將上述皮膚外用的抗氧化組成物用作皮膚外用劑組成物的情形時，可含有於皮膚科學領域中可容許的載體、介質或基劑而劑型化。可更含有如脂肪物質、有機溶劑、溶解劑、濃縮劑、凝膠化劑、軟化劑、抗氧化劑、懸浮劑、穩定劑、發泡劑(foaming agent)、芳香劑、界面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、螯合劑、保存劑、維生素、阻斷劑、潤濕劑、必須的油、染料、顏料、親水性活性劑、親油性活性劑、脂質小泡或通常使用於皮膚用外用劑的任意其他成分的於皮膚科學領域中通常使用的助劑。並且，能夠以於皮膚科學領域中通常使用的量導入上述成分。

上述皮膚外用劑組成物可為選自由軟膏、糊劑、乳液、面霜、凝膠、溶液、懸浮液、乳濁液、貼片或噴霧所組成的族群中的劑型，但並不限制於此。

於上述皮膚外用劑組成物中，本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的有效量可根據上述皮膚外用劑組成物的構成、劑型的種類、使用者的年齡、體重、健康狀態、性別、投予時間、投予路徑及投予方法等而不同。作為一例，以整體皮膚外用劑組成物100重量%為基準，可包括0.0001重量%至10重量%、較佳為0.0001重量%至1重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物。若包括未滿0.0001重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物，則無法期待充分的抗氧化效果，於包括超過10重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的情形時，會產生搔癢、蕁麻疹、過敏等副作用。

並且，本發明提供一種包括上述皮膚外用的抗氧化組成物的化妝品組成物。

於將上述皮膚外用的抗氧化組成物用作化妝品組成物的情形時，可包括化妝品學領域中可容許的載體、介質或基劑而劑型化。可更含有如脂肪物質、有機溶劑、溶解劑、濃縮劑、凝膠化劑、軟化劑、抗氧化劑、懸浮劑、穩定劑、發泡劑(foaming agent)、芳香劑、界面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、螯合劑、保存劑、維生素、阻斷劑、潤濕劑、必須的油、染料、顏料、親水性活性劑、親油性活性劑、脂質小泡或通常使用於化妝品的任意其他成分的於化妝品學領域中通常使用的助劑。並且，能夠以於化妝品學領域中通常使用的量導入上述成分。

上述化妝品組成物可製備成通常的乳化劑型及溶解劑型的形態。作為乳化劑型的化妝品，有營養化妝水、面霜、精華等，作為溶解劑型的化妝品，有柔軟化妝水。具體而言，上述化妝品組成物可為選自由軟膏、潤膚乳、面霜、凝膠、溶液、懸浮液、乳濁液、貼片或噴霧所組成的族群中的劑型，但並不限制於此。更詳細而言，可劑型化成柔軟化妝水、營養化妝水、乳液、精華、面霜、凝膠、剝撕式面膜、貼片、面膜、液體噴霧等皮膚護理製品、妝前底霜、粉底、粉、睫毛膏、口紅等彩妝製品、潔面油、潔面霜、潔面乳、潔面水、眼唇卸妝液等卸妝製品、香皂、潔面泡沫、沐浴露等清潔製品等。

於將上述抗氧化組成物製品化成化妝品的情形時，有效成分短時間停留於皮膚的如卸妝劑、清潔劑的清洗(wash-off)型化妝品可包括濃度相對較高的上述抗氧化組成物。相反地，於有效成分長時間停留於皮膚的化妝水、乳液、面霜、精華等吸收(leave-on)型化妝品的情形時，可包括濃度低於清洗型化妝品的上述抗氧化組成物。作為一例，以整體化妝品組成物100重量%為基準，可包括0.0001重量%至10重量%、較佳為0.0001重量%至1重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物。若包括未滿0.0001重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物，則無法期待充分的抗氧化效果，於包括超過10重量%的本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的情形時，會產生搔癢、蕁麻疹、過敏等副作用。

於本發明中，在劑型為軟膏、糊劑、面霜或凝膠的情形時，可利用動物性油、植物性油、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、矽酮、膨潤土、氧化矽、滑石或氧化鋅等作為載體成分。

於本發明中，在劑型為粉或噴霧的情形時，可利用乳糖、滑石、氧化矽、氫氧化鋁、矽酸鈣或聚醯胺粉作為載體成分，特別是於噴霧的情形時，可更包括如氯氟烴、丙烷/丁烷或二甲醚的推進劑。

於本發明中，在劑型為溶液或乳濁液的情形時，利用溶劑、增溶劑或乳濁劑作為載體成分，例如有水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、甘油、卡波姆、苄醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪族酯、辛酸/癸酸三甘油酯、氫化聚癸烯、鯨蠟硬脂基葡糖苷、山梨醇酐硬脂酸酯、聚乙二醇、鯨蠟硬脂醇等。

於本發明中，在劑型為懸浮液的情形時，可利用如水、乙醇或丙二醇的液態的稀釋劑、如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨醇酐酯的懸浮劑、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂或黃蓍膠等作為載體成分。

於本發明中，在劑型為潔面劑的情形時，可分為含有界面活性劑的潔面劑劑型、或不含有界面活性劑的潔面劑劑型，可於塗佈至皮膚後擦拭、撕除或用水清洗。上述含有界面活性劑的潔面劑可利用脂肪族醇硫酸酯、脂肪族醇醚硫酸酯、磺基琥珀酸單酯、羥乙基磺酸酯、咪唑鎓衍生物、甲基牛磺酸酯、肌胺酸酯、脂肪酸醯胺醚硫酸酯、烷基醯胺甜菜鹼、脂肪族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇醯胺、植物性油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等作為載體成分。並且，上述含有界面活性劑的潔面劑劑型為潔面泡沫、潔面水、潔面巾及剝撕式潔面面膜，上述不含有界面活性劑的潔面劑劑型為潔面霜、潔面乳、潔面水及潔面凝膠，並不限定於此。

於本發明中，在劑型為香皂、沐浴露的情形時，可於塗佈至皮膚後擦拭、撕除或用水清洗。作為具體例，上述香皂可為液體香皂、粉末香皂、固體香皂及精油香皂。

以下，藉由實施例而更詳細地對本發明進行說明。這些實施例僅用以更具體地說明本發明，於本技術領域內具有常識者應明白，根據本發明的主旨，本發明的範圍並不限制於這些實施例。

實驗例1：抗氧化酶相關基因的表現評估

為了瞭解作為參與細胞內抗氧化的酶的SOD2及紅細胞衍生核因子2-相關因子2(Nuclear factor erythroid 2-Related Factor 2，NRF2)的基因表現改善效果，藉由反轉錄聚合酶連鎖反應(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)而測定信使核糖核酸(messenger Ribonucleic Acid，mRNA)的表現量。

上述SOD2(superoxide dismutase 2)是一種於人體內生成的抗氧化酶，藉由歧化(dismutation)反應而將作為活性氧類的超氧化物陰離子(superoxide anion，O₂ ^-．)製成過氧化氫，最終分解成水與氧而消除活性氧類。並且，若施加氧化壓力，則上述NRF2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2)結合至存在於抗氧化酶及解毒酶的基因上部的抗氧化反應元(antioxidant response element，ARE)而促進細胞內抗氧化防禦系統的活性，根據上述兩種酶的基因表現量而評估細胞內抗氧化效果。

本實驗例1中所使用的細胞為皮膚角質細胞(keratinocytes(NHK))，對在Lonza公司(Lonza,Inc.Walkersville，MD，USA)購得的正常人類角質細胞(Human epidermal neonatal keratinocyte cells)進行繼代培養，之後於37℃、5%CO₂的條件下的CO₂培養基(CO₂ incubator)中進行培養。細胞培養遵循Lonza公司(Lonza,Inc.Walkersville，MD，USA)的指南。於500ml的角質細胞基礎培養基(Keratinocyte Basal Medium，KBM)-Gold培養基中添加角質細胞生長培養基(Keratinocyte Growth Medium，KGM)-Gold SingleQuot套組而使用。

按照下述表1中所記載的濃度對皮膚角質細胞培養液處理酵母醱酵物、α-酮戊二酸、煙鹼醯胺，之後培養24小時。於去除培養液後，利用Trizol(Trizol reagent，Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)分離細胞內的整體RNA(總RNA)。使用凱傑公司的RNA套組(Qiagen RNeasy kit，Qiagen，Valencia，CA)再一次對分離的RNA進行精製，之後利用安捷倫公司的生物分析器(BioAnalyzer)2100型號機器(Agilent 2100 BioAnalyzer，Agilent Technologies，Santa Clara，CA，USA)確認RNA的品質(quality)。利用英傑公司的反轉錄套組(Superscript Reverse Transcriptase(RT)II kit，Invitrogen，Carlsbad，CA)自以上所分離的RNA合成互補脫氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid，cDNA)，藉由即時反轉錄聚合酶連鎖反應(real time-reverse transcription polymerase chain reaction，Q-RT-PCR)方法而利用水解探針(taqman probe)(SOD2、NRF2、RPLPO)擴增為PCR反應溶液。

於在1.0%的瓊脂糖凝膠(agarose gel)中對最終的PCR產物進行電泳後，利用賽博綠(Cyber Green)進行染色而於320nm的紫外線(ultraviolet，UV)下進行測定。實施上述過程而求出與抗氧化酶相關的基因的表現率，將其結果示於下述表2。

如上述表2所示，可確認到與不進行任何處理的對照組及僅利用酵母醱酵物進行處理的比較例1相比，本發明的實施例明顯地增加抗氧化酶基因的表現，併用α-酮戊二酸與煙鹼醯胺進行處理的實施例3表現出高於分別單獨使用α-酮戊二酸與煙鹼醯胺的實施例1、實施例2的表現率，從而可確認到藉由併用α-酮戊二酸與煙鹼醯胺實現的上升效果。

製備實施例1.皮膚外用劑的製備

1.軟膏

根據下述表3的組成而藉由通常的方法製備包括本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的軟膏。

2.凝膠

根據下述表4的組成而藉由通常的方法製備包括本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的凝膠。

製備實施例2.化妝品的製備

1.營養面霜

根據下述表5的組成而藉由通常的方法製備包括本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的營養面霜。

2.營養化妝水

根據下述表6的組成而藉由通常的方法製備包括本發明的皮膚外用的抗氧化組成物的營養化妝水。

[產業上的可利用性]

本發明的皮膚外用的抗氧化組成物表現出優異的抗氧化效果，因此可製備化妝品、醫藥品等各種製品。

Claims

一種皮膚外用的抗氧化組成物，其包括：酵母菌屬酵母醱酵物；α-酮戊二酸；以及煙鹼醯胺，其中所述酵母菌屬酵母醱酵物包括硫氧化還原蛋白，其中所述酵母菌屬酵母醱酵物藉由醱酵未加工清酒與酵母菌屬酵母的混合物製備，其中所述酵母菌屬酵母包括釀酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)，其中以整體的所述皮膚外用的抗氧化組成物的100重量%為基準，包括0.000001重量%至30重量%的所述α-酮戊二酸，其中以整體的所述皮膚外用的抗氧化組成物的100重量%為基準，包括0.000001重量%至5重量%的所述煙鹼醯胺，其中所述α-酮戊二酸與所述煙鹼醯胺的混合物以1：1的重量比混合。
如申請專利範圍第1項所述的皮膚外用的抗氧化組成物，其中以整體的所述皮膚外用的抗氧化組成物的100重量%為基準，包括0.000001重量%至30重量%的所述酵母菌屬酵母醱酵物。
如申請專利範圍第1項所述的皮膚外用的抗氧化組成物，其為選自由軟膏、糊劑、乳液、面霜、凝膠、溶液、懸浮液、乳濁液、貼片或噴霧所組成的族群中的劑型。