KR20160016382A - 항산화 및 항균 작용을 갖는 니아올리 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 니아올리를 포함하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 구체적l으로는 유기용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 발효법, 포제법 등의 다양한 추출방법을 이용하여 얻은 니아올리 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 피부 외용제 조성물에 포함된 유효성분인 니아올리 추출물은 피부 항산화 작용 항균 효과가 뛰어나므로 피부 노화 방지용 피부 외용제 및 항균 효과를 갖는 피부 외용제로서 우수한 효능을 가지고 있다.

Description

항산화 및 항균 작용을 갖는 니아올리 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물{Skin External Composition Comprising the Niaouli}

본 발명은 니아올리를 포함하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 유기용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 발효법, 포제법 등의 다양한 추출방법을 이용하여 얻은 니아올리 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 피부 노화를 설명하는 여러 가지 이론 중에서 체내외의 여러 가지 원인에 의해서 발생되는 자유라디칼에 의해서 피부가 노화된다는 자유라디칼 이론이 가장 타당성이 있는 이론으로 간주되고 있다. 자유라디칼은 화학적으로 반응성이 매우 큰 화학물질로서, 인체 내에서는 여러 가지 원인, 즉 자외선, 방사선, 매연, 담배연기, 스트레스 등의 외부적 요인과 체내의 미토콘드리아 및 백혈구의 대사과정에 의해서 생성되어 다단계 연쇄반응을 통하여 세포막의 구성성분인 지질의 과산화를 일으키게 된다.

피부 노화와 관련 있는 자유라디칼의 대부부은 활성 산소종(Reactive Oxygen Species, ROS)으로, 그 종류로는 수퍼옥사이드 라디칼(Super oxide radical), 과산화수소(H₂O₂), 하이드록시 라디칼(Hydroxy radical), 단일상태의 산소(Singlet oxygen) 등이 있다. 이들에 의해 일어나는 지질의 과산화는 라디칼, 과산화물, 알데하이드(aldehyde) 및 에폭사이드(epoxide)의 다양한 활성 산소종을 발생시키고, DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포 구조에 치명적인 손상을 입힌다.

따라서 지금까지 피부노화 억제를 위해 가장 많이 연구되고 있는 분야 중 하나가 항산화제에 관한 연구이다. 수퍼옥사이드 라디칼(O₂ ^-)과 하이드록시라디칼(OH)과 같은 라디칼과 과산화수소(H₂O₂)와 같은 비라디칼에 의해 피부가 산화적 스트레스를 받음으로써 세포가 손상되고 피부노화 현상이 촉진되는 것으로 알려졌다. 따라서 각종 산화물질에 대한 직접적인 항산화 효과뿐만 아니라 피부 각질세포로부터 TNF-a 및 IL-8의 분비 억제효과는 세포의 산화적 스트레스를 억제하고, 이후 각질세포로부터 분비되는 TNF-a 및 IL-8에 의한 랑게르한스세포, 섬유아세포(fibroblasts), 및 멜라노사이트(melanocytes) 등의 주위 피부세포에 2차 반응을 억제하여 피부노화를 근본적으로 예방하는 항산화제에 관한 연구가 지속적으로 이루어지고 있다.

이러한 활성산소에 의한 피부 손상을 막아주는 항산화제들은 수퍼옥사이드 디스뮤타아제(super oxide dismutase, SOD), 카탈라아제(catalase) 등의 효소와 토코페롤(tocopherol, vitamin E), beta-카로틴(carotene), 아스코르빈산(ascorbic acid, vitamin C) 및 글루타치온(glutathione)과 같은 지용성 및 수용성 항산화제 또는 라디칼 소거제들이 포함된다.

위에서 기술한 바와 같이, 자유라디칼형 산소 또는 활성 산소종은 피부 노화와 관련성이 크기 때문에 종래에는 피부 외용제에 수퍼옥사이드 디스뮤타아제, 비타민 E 유도체, 비타민 C 및 그 유도체, 플라보노이드(flavonoid) 등을 피부 외용제에 배합함으로써 피부 노화 방지 효과를 달성하려는 노력이 많이 있었으나, 피부 외용제에 상기 성분들을 배합하는 경우 안전성(safety), 안정성(stability) 등이 좋지 못하여 실질적인 효과를 기대하기 어려웠다.

사람의 피부는 다양한 미생물들이 존재한다. 이들 미생물들은 각종 피부 질환을 야기시킨다. 피부에는 화농을 일으키는 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)을 비롯하여 피부 상재균으로서는 스타필로코커스 에피데르미스(staphylococcus epidermis), 여드름균(Propionibacterium acnes) 등이 있으며, 이 균들은 피부 상에서 분비된 피지나 땀을 분해시켜 냄새를 발생시키며 이와 더불어 분해산물들은 피부에 자극을 주고 염증을 발생시킨다. 특히, 여드름균( Propionibacterium acnes)은 지방산 분해효소인 리파아제(Lipase)를 이용하여 피지를 분해시켜서 유리지방산을 생성시킨다. 이들 유리지방산은 피부에 자극을 줄 뿐만 아니라 여드름에서 볼 수 있는 붉은 발진인 구진, 농포, 결절 등의 염증성 병변을 유발시킨다.

따라서, 위에서 기술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 항산화 효과 및 항균 효과가 우수한 제품 및 원료 개발의 필요성이 계속하여 대두되고 있다.

본 발명은 니아올리를 포함하는 피부 외용제 조성물을 이용하여 항산화 효과, 항균 효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 니아올리 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 니아올리 추출물은 피부 항산화 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 니아올리 추출물은 피부 항균 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제 조성물은 피부 외용제 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0%(w/w)의 니아올리 추출물을 함유하는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 니아올리 추출물은 니아올리를 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용한 용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 발효법 및 포제법으로 이루어진 군에서 선택된 추출방법으로부터 얻어지는 것을 특징으로 한다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 니아올리 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 및 항균효과를 가지는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 피부 외용제 조성물에 포함된 유효성분인 니아올리 추출물은 피부 항산화 작용 항균 효과가 뛰어나므로 피부 노화 방지용 피부 외용제 및 항균 효과를 갖는 피부 외용제로서 우수한 효능을 가지고 있다.

도 1은 본 발명에 따른 니아올리 추출물을 사용한 경우 여드름균(P.acnes KCTC3314 균주)에 대하여 저해구역이 형성된 것을 나타낸다.

본 발명은 니아올리 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 외용제 조성물에서 유효성분으로 이용되는 니아올리(Niaouli)는 뉴칼레도니아에서는 가장 흔한 나무이지만, Grande Terre라고 불리는 본 섬의약 절반 정도의 면적을 덮고 있다. 남태평양 원주민인 뉴칼레도니아 말라네시안들 사이에서는 어린아이가 태어나면 그 아이의 건강을 지켜주고 잘 보호하기 위하여 니아올리 나무껍질로 몸을 싸주는 관습이 있었다. 이 나무껍질을 '니아올리 스킨'이라하고, 이것은 얇은 여러겹의 종이들이 겹겹이 층을 이루는 형태의 모양을 취하고 있다. 니아올리는 일 년에 두 번 하얀색의 풍성한 꽃을 피우고, 이 꽃은 달콤한 즙을 제공하기 때문에 각종 새들이 모여드는데 벌들이 아주 훌륭한 니아올리 꿀을 생산해 낸다. 나뭇잎은 사람 손의 5개 손가락 모양으로 5 가닥의 잎으로 구성되어 있는 특징이 있다. 뉴칼레도니아의 멜라네시안들은 사용하는 물을 정화시키는 일에, 상처를 치유하는 일 등에 니아올리 잎들을 매일 사용하곤 한다. 니아올리 잎의 뛰어난 성분 및 효능은 에센셜 오일로 추출되며 뉴칼레도이나에서는 150년 넘게 증류법으로 추출되어 사용되고 있다. 니아올리 사용에 대한 많은 전통적인 지식들은 이를 처음 접한 과학자들이 그 성분들을 연구하여 확인하였으며 오늘날에도 그 뛰어난 성분들이 연구되어지고 있으며 전통방식의 사용에 대한 타당성이 확인되고 있다. 니아올리는 사실상 소독제의 효능을 가지며, 프랑스 약전에 기재되어 있는 등, 그 효능을 인정받고 있다. 상당한 소독제로서의 능력 외에도 니아올리 에센셜 오일은 무독성의 특징이 있다. 이 에센셜 오일은 염증에 의해 야기되는 통증을 바로 제거해주어 상쾌한 느낌을 제공한다. 또한 손상된 피부의 충혈을 완화시켜주어 건강한 세포로 돌아가도록 도와준다.

본 발명의 니아올리 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여(예컨대, 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 또는 1,3-부틸렌 글리콜을 가하여) 제조될 수 있다.

바람직한 실시예에 의하면, 본 발명의 니아올리 추출물의 제조 방법은 다음과 같다. 먼저 니아올리 잎을 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄 한 후, 여기에 건조 중량의 1∼10배의 물, 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 또는 1,3-부틸렌 글리콜 등을 가한다. 그 후 냉각 콘덴서가 장치되어 유효성분이 증발되는 것을 방지한 상태에서 40∼100℃에서 3∼20시간 가열하여 추출하거나, 4∼40℃에서 1∼15일간 추출하고 회전 감압 증발기로 완전히 건조시켜 제조한다. 이때 1,3-부틸렌 글리콜의 경우에는 회전 감압 증발기를 이용하여 건조시키기 어려우므로 직접 위의 조건에서 추출한 후 건조 감량이 1%(w/v)되게 조정하여 본 발명의 피부 외용제에 이용한다.

한편, 본 발명의 니아올리 추출물은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 초음파 추출법에 의한 추출물도 포함한다.

이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것이다. 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.

지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계 추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 피부 외용제 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 니아올리 추출물은 통상적인 정제 과정 및/또는 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 니아올리 추출물에 포함된다고 해석된다. 또한, 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 군중에서 선택되는 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7 일간 발효시켜 얻어지는 발효물도 본 발명의 니아올리 추출물에 포함된다고 해석된다.

또한, 본 발명의 니아올리 추출물은 포제법을 이용하여 얻어낸 추출물도 포함한다. 포제란, 한방이론에 근거하여 약재를 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약 기술이다. 주로 찌거나, 삶거나, 불에 볶거나, 불에 굽거나 달구는 공정 또는 이들이 혼합된 공정의 방법을 말한다. 본 발명에서는 니아올리를 쪄서 건조시킨 후 사용하였으며 이를 이용하여 추출물을 제조하였다.

본 발명의 니아올리 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 보다 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 니아올리 추출물은 항산화 효과가 우수하여 피부 항노화 효과가 우수하다.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 니아올리 추출물의 함량은 피부 외용제 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001∼30.0중량%, 바람직하게는 0.001∼20.0중량%이다. 이때 니아올리 추출물의 총 중량이 0.0001중량% 미만일 때에는 그 효과가 나타나기 어렵고, 30.0중량%를 초과할 때에는 피부에 자극을 유발할 가능성이 높으며 제형의 안정화에도 큰 영향을 미칠 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 피부 외용제 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

의약품에 적용할 경우에는 본 발명에 따른 니아올리 추출물을 유효성분으로 하여 사용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

경구투여율을 위한 제제로서는 정제, 환제, 과랍제, 연, 경 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 필렛제 등을 들 수 있다. 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁액, 유제, 좌제 등을 들 수가 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존제, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용화하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 니아올리 추출물의 제조

껍질이 제거된 건조된 니아올리 100g을 분말화한 후 메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 그 후 물 및 에탄올의 비율을 7:3으로 조정한 70% 에탄올 1,000 ㎖를 가하여 실온에서 4일 동안 침출하였다. 이를 여과하고 여액을 진공 농축하여 건조 추출물을 얻었으며, 추출 수율은 34.8g/100g이었다. 상기 건조 추출물을 10% (w/v) 농도가 되도록 30% 1,3-부틸렌 글리콜 용액 및 정제수를 이용하여 용해하고 여과한 후 본 발명의 실험에 적용하였다.

실시예 2. 초임계 유체 추출법을 이용한 니아올리 추출물의 제조

니아올리를 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 시료 1그램을 초임계 추출용기(Supercritical fluid extractor, Jasco, Japan)에 넣고 액체크로마토그래피 펌프 (Supercritical fluid chromatograph, Jasco, Japan)를 이용하여 순수한 이산화탄소를 온도 60℃ 및 압력300 기압 조건에서 초임계 상태로 만들어 흘려보내면서 매 4분씩 40분까지 추출물을 10㎖ 용량의 유리 시험관에 받았다. 상기 추출액을 회전감압 증발기로 건조하여, 건조중량 43 ㎎/g을 얻었다. 건조된 니아올리 추출 파우더를 50% 1,3-부틸렌글리콜에 용해하여 사용하였다.

실험예 1: 니아올리 추출물의 항산화 효과

본 실험예 1은 실시예 1 및 실시예 2의 니아올리 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질(니아올리 추출물)에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 517nm에서 항산화 효과를 측정하였다. 수학식 1로 계산한 결과를 표 1에 나타내었다.

[수학식1]

간단한 측정방법으로서

① 니아올리 추출물을 에탄올 100%, 에탄올 70%, 정제수에 각각 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5%, 1%, 10% 농도로 각각 희석하여 샘플을 준비한다.

② 대조군으로 α-tocopherol 200uM, 400uM을 준비한다.

③ 각각의 샘플 용액을 0.2mM DPPH 용액과 1:1로 섞어준다.

④ 96well에 100ul씩 넣고 암실에서 30분 반응시킨다

⑤ 30분 후 ELISA기기로 517nm에서 흡광도를 측정한다

표 1은 상기한 항산화 효과 측정 결과를 도시한 것이다. 표 1의 (a)는 실시예1의 니아올리 추출물을 에탄올 70%에 희석한 경우, 표 1의 (b)는 실시예 1의 니아올리 추출물을 증류수에 희석한 경우, 표 1의 (c)는 실시예 2의 니아올리 추출물을 에탄올 70%에 희석한 경우의 결과를 도시한 것이고, (d)는 실시예 2의 니아올리 추출물을 증류수에 희석한 경우이다. 표 1을 보면, 4 가지 경우 모두에서 100 ㎍/㎖에서 니아올리 추출물(실시예 1 및 실시예 2)이 항산화 효과를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 대조군은 Vitamin E(토코페롤)를 사용하였다.

구분		5 ㎍/㎖	50 ㎍/㎖	100 ㎍/㎖	1000 ㎍/㎖
니아올리추출물	(a) 에탄올 70%	2.68	8.69	52.80	68.65
	(b) 증류수	3.12	7.45	48.64	69.65
	(c) 에탄올 70%	2.50	8.50	61.20	75.08
	(d) 증류수	2.80	8.40	62.50	74.68
토코페롤		47.95	78.91	78.87	75.78

실험예 2: 여드름균에 대한 항균효과

본 발명의 실시예 1에서 수득한 니아올리 추출물의 항균 활성을 측정하기 위하여 바실러스 스브틸리스(Bacillus subtilis KCTC 1914), 에스케리키아 콜리(Escherichia coli KCTC 1924), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus KCTC 1916, KCTC 1928, EML 5757779) 및 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonsa aeruginosa KCTC 2513) 등의 세균과 칸디다 알비칸스(Candida albicans ; ATCC10231) 및 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger ; ATCC16404) 등의 곰팡이를 대상으로 페이퍼 디스크(paper disk)법으로 가시화 실험을 수행하였다.

상기 추출된 니아올리 추출물을 50% 에탄올에 녹인 후 50㎍씩 페이퍼 디스크(Whatman NO.1, 8㎜ diameter)에 점적한 후, 건조시켰다. 이후 상기 균주가 0.1㎖ 도말된 한천 플레이트 위에 올려놓고 24시간 동안 완전히 건조하였다. 이후, 저해구역(inhibitory zone)의 크기를 측정하여 항균 활성을 확인하였으며 그 결과를 표 2에 나타내었다.

실험제품	균주 저해 구역(inhibitory zone)의 크기(mm)
	E.coli	P. aeruginosa	B.subtilis	S.aureus	A.niger	C.albicans
실시예 1	22	20	24	26	24	21
실시예 2	25	24	25	28	23	25

상기 실험을 통하여 니아올리 추출물의 항균 활성을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명의 니아올리 추출물이 다양한 균주에 대하여 우수한 항균 활성을 가짐을 알 수 있었다. 또한, 도 1은 본 발명에 따른 니아올리 추출물(실시예 1)을 사용한 경우 여드름균(P.acnes KCTC3314 균주)에 대하여 저해구역이 형성된 것을 나타내는 도면이며, 이를 통해 니아올리 에센셜 오일의 항균효과를 확인할 수 있다.

제형예 1: 니아올리 추출물을 함유하는 피부외용제의 제조

니아올리 추출물을 포함하는 제형예 1 및 비교제형예 1을 표 3에 나타내었다.

	원료	제형예 1	비교제형예 1
1	스테아릴알콜	8.00	8.00
	스테아린산	2.00	2.00
	스테아린산 콜레스테롤	2.00	2.00
	스쿠알란	4.00	4.00
	2-옥틸도데실알콜	6.00	6.00
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜 에스테르	3.00	3.00
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2.00	2.00
2	부틸렌글리콜	5.00	5.00
3	니아올리 추출물 (실시예 1)	3.00	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02
	메틸파라벤	0.20	0.20
4	정제수	To 100	To 100

실험예 3 : 니아올리 추출물의 피부 1차 자극 시험( Human Patch test )

본 발명의 니아올리 추출물을 함유하는 조성물의 피부 안전성을 알아보기 위하여, 건강한 성인 남, 여 30여명을 대상으로 등의 5 X 20 ㎝ 부위에 제형예 1 및 비교제형예 1을 약 0.1g씩 24시간 도포한다. 이를 제거하고 1시간 및 24시간이 경과한 다음, 하기의 판정 기준에 의하여 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였고, 자극율(%)은 다음 수학식 2에 따라 계산하였다. 실험결과는 하기의 표 4에 나타내었다.

판정기준

- : 홍반이나 특이한 현상 없음

+/- : 주위보다 약간 붉어짐

+ : 주위보다 현저히 붉어짐

++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음

[수학식 2]

시료	판정결과				자극율(%)
	++	+	+/-	-
제형예 1	-	-	-	30	0
비교제형예 1	-	-	-	30	0

상기 표 3의 피부 1차 자극성 실험 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 니아올리 추출물을 함유하는 조성물(제형예 1)에서는 특이한 피부 자극이 발생하지 않았다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

1. 니아올리 추출물을 함유하는 피부 노화 방지용 피부 외용제 조성물.
2. 제1항이 있어서, 상기 니아올리 추출물은 피부 항산화 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 니아올리 추출물은 피부 항균 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 피부 외용제 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0%(w/w)의 니아올리 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 니아올리 추출물은 니아올리를 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 부틸 아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용한 용매 추출법, 초음파 추출법, 초임계 추출법, 발효법 및 포제법으로 이루어진 군에서 선택된 추출방법으로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물.

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