TWI732786B - 含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的抗老化皮膚外用劑組合物 - Google Patents
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Abstract
本發明提供含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的抗老化皮膚外用劑組合物。更具體地,提供混合含有矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠而顯示出膠原分解酶抑制效果的皮膚外用劑組合物。當使用本發明的皮膚外用劑組合物時,具有有效去除對皮膚有害的自由基等優異的抗氧化效果,並且使膠原分解酶的表達及活性受到抑制,從而具有強化皮膚彈性及改善皮膚皺紋等優異的抗老化效果。
Description
本發明提供含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的抗老化皮膚外用劑組合物。更具體地,提供混合含有矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠而顯示出膠原分解酶抑制效果的皮膚外用劑組合物。
皮膚作為人體的第一道防護膜,對體內的器官進行保護,使其免受溫度及濕度變化和紫外線、公害物質等外部環境的刺激,並且對體溫調節等維持活體恒常性也起到重要的作用。但是,從外部受到的過度的物理性刺激、化學性刺激及壓力、營養缺乏等會降低皮膚的正常功能,並且會促進彈性損失、角質化、產生皺紋等皮膚老化現象。
為了防止這種現象,並維持更健康有彈性的皮膚,人們正在透過製備含有從各種植物、微生物等中獲得的生理活性物質的化妝品來維持皮膚的固有功能,並使皮膚細胞得到活化,從而有效地抑制皮膚老化而做出努力。但是,習知的化妝品原料大部分具有功效不足或引發皮膚副作用等多種問題。
矢車菊素葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)為花青素的一種,又被稱為矢車菊甙(chrysanthemin),其結構為,矢車菊素透過糖苷鍵連接至葡萄糖的3號碳上。矢車菊素葡萄糖苷為在漿果類的水果或穀類等中的含量較多而呈現出顏色的色素,已知其具有抗氧化效果,並且,近期的研究結果中報導,其能夠有效預防癌或心臟病(Cooke et al.,International journal of cancer 119.9(2006):
2213-2220;Serraino et al.,Life sciences 73.9(2003):1097-1114)。但是,目前為止,對於矢車菊素葡萄糖苷是否具有透過抑制膠原分解酶的作用而維持皮膚彈性且改善皮膚皺紋的抗老化作用,則不得而知。
另外,納豆膠(natto gum)是用叫作枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的革蘭氏陽性菌來發酵大豆(soybean)時獲得的高黏性物質。最近,正陸續推出含有納豆膠的化妝品,其中所述納豆膠起到增稠劑的作用的同時,還具有優異的保濕效果。但是,如同矢車菊素葡萄糖苷,對於納豆膠是否具有透過抑制膠原分解酶的作用而維持皮膚彈性且改善皮膚皺紋的抗老化作用,或者納豆膠是否能夠提高矢車菊素葡萄糖苷的抗氧化效果或抗老化效果,則不得而知。
本發明人為了找到能夠使皮膚的老化防止效果最大化的天然物質而盡最大努力的結果,發現了混合含有矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的皮膚外用劑組合物能夠抑制自由基生成,並能夠有效地抑制膠原分解酶的表達,因此抗氧化效果及抗老化效果非常優異,從而完成了本發明。
習知技術文獻
非專利文獻
1. Cooke et al., International journal of cancer(國際癌症期刊)119.9 (2006): 2213-2220
2. Serraino et al., Life sciences(生命科學)73.9 (2003): 1097-1114
本發明的目的在於,提供皮膚外用劑組合物,其特徵在於,所述組合物含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分,從而抑制皮膚內自由基(free radical)的生成,並抑制膠原分解酶的表達,從而顯示出抗老化效果。
為了實現上述目的,本發明提供抗老化皮膚外用劑組合物,其特
徵在於,其含有矢車菊素葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)及納豆膠作為有效成分。
較佳地,本發明提供皮膚彈性改善用皮膚外用劑組合物,其特徵在於,其含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分。
較佳地,本發明提供皮膚皺紋改善用皮膚外用劑組合物,其特徵在於,其含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分。
較佳地,本發明提供在皮膚外用劑組合物(具體為化妝品組合物或藥物組合物)的製備中,矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為皮膚彈性改善劑的應用。
較佳地,本發明提供在皮膚外用劑組合物(具體為化妝品組合物或藥物組合物)的製備中,矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為皮膚皺紋改善劑的應用。
當使用本發明的皮膚外用劑組合物時,具有有效去除對皮膚有害的自由基等優異的抗氧化效果,並且使膠原分解酶(collagenase)的表達及活性受到抑制,從而具有強化皮膚彈性及改善皮膚皺紋等優異的抗老化效果。
最佳實施方式
在未以其它方式定義的情況下,本說明書中使用的所有技術術語及科學術語的意思與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解的意思是相
同的。一般而言,本說明書中使用的命名法為本技術領域中熟知且通常使用的方法。
在本發明的實施例中,混合相同量的矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠,並測定DPPH氧化抑制功效的結果,可以確認與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷或納豆膠時相比,或者與混合使用作為花青素的另一種色素的飛燕草素葡萄糖苷(delphinidin-3-O-glucoside)和納豆膠時相比,顯示出顯著優異的抗氧化效果。此外,混合相同量或接近相同量的矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠,並測定膠原分解酶抑制效果的結果,可以確認與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷或納豆膠時相比,或者與混合使用飛燕草素葡萄糖苷和納豆膠時相比,顯示出顯著優異的抗老化效果。
因此,在一觀點中,本發明提供含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的抗老化皮膚外用劑組合物。
此外,在另一觀點中,本發明提供含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的皮膚彈性改善用或皮膚皺紋改善用皮膚外用劑組合物。
本發明的矢車菊素葡萄糖苷的結構如下述化學式1所示,就所述矢車菊素葡萄糖苷而言,可以利用該技術領域的常規方法,從富含矢車菊素葡萄糖苷的植物中直接萃取並使用,也可以購買並使用萃取後經過精製的矢車菊素葡萄糖苷。
本發明中,所述納豆膠的特徵為,其是將活化的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)或地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)接種於大豆並經過發酵而生成的。納豆膠為在大豆上接種枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌並在一定溫度下發酵時在大豆表面生成的具有黏性的物質,可以對其進行精製,並使其結晶化後,以粉末的形態用於本發明的組合物中。就為了用於納豆膠的生成而進行發酵的豆的種類而言,最佳為大豆,但並不限定於此。
當使用混合納豆膠和矢車菊素葡萄糖苷的組合物時,納豆膠中含有的聚-γ-谷氨酸的負電荷與矢車菊素葡萄糖苷的正電荷會相互作用而使矢車菊素葡萄糖苷的結構穩定化,從而進一步提高矢車菊素葡萄糖苷的抗氧化及抗老化效果。
本發明中,所述含有矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠作為有效成分的皮膚外用劑組合物的特徵為,其是透過抑制膠原分解酶的表達而顯示出抗老化效果,尤其顯示出改善皮膚皺紋及改善皮膚彈性的效果,其中所述膠原分解酶會分解皮膚組織的膠原而減少皮膚彈性。此外,本發明中,「膠原分解酶」和「膠原酶(collagenase)」為相同的意思。
此外,本發明中,所述矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的特徵為,其混合重量比範圍可以為約1:1~1:10,佳為約1:1~1:9,更佳為約1:1~1:7,
更佳為約1:1~1:5,進一步較佳為約1:1~1:3,更進一步較佳為約3:2~2:3,更加進一步較佳為約5:4~4:5,最佳為以1:1的重量比進行混合。當以所述範圍的重量比混合時,適合使矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠分別具有的膠原分解酶表達抑制效果最大化,並且能夠滿足組合物的穩定性。
此外,本發明中,所述矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的特徵為,相對於組合物總重量,所述矢車菊素葡萄糖苷的含量為0.01~5重量%,相對於組合物總重量,所述納豆膠的含量為0.01~5重量%。當所述兩種有效成分的總和小於0.02重量%時,膠原分解酶表達抑制效果甚微,當該總和超過10重量%時,存在使組合物的黏性過度增加的問題。
將本發明的皮膚外用劑組合物劑型化為化妝品的形態時,可劑型化為柔膚化妝水、收斂化妝水、營養化妝水、眼霜、營養霜、按摩霜、潔面膏、潔面泡沫、潔面水、粉、精華液或面膜等形態,該劑型不受特別限定。此外,本發明的組合物可以包含脂肪物質、有機溶劑、增溶劑、濃縮劑、膠凝劑、軟化劑、抗氧化劑、懸浮劑、穩定劑、發泡劑(foaming agent)、芳香劑、表面活性劑、水、離子型或非離子型乳化劑、填充劑、金屬離子掩蔽劑、螯合劑、保存劑、維生素、阻斷劑、潤濕劑、精油、染料、顏料、親水性或親油性活性劑、脂質小囊或如在化妝品中通常使用的任意的其它成分等在化妝品學或皮膚科學領域中通常使用的輔助劑。所述輔助劑是以在化妝品學或皮膚科學領域中通常使用的量導入。此外,為了提高改善皮膚的效果,本發明的組合物可以含有皮膚吸收促進物質。
就本發明的皮膚外用劑組合物而言,除了上述物質以外,在不影響主要效果的範圍內,較佳可以包含對主要效果帶來提升效果的其它成分。此
外,本發明的皮膚外用劑組合物可以進一步包含保濕劑、潤膚劑、紫外線吸收劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、pH調節劑、有機及無機顏料、香料、冷卻劑或止汗劑。就所述成分的混合量而言,在不影響本發明的目的及效果的範圍內,本發明所屬技術領域中具有通常知識者可以容易地選定,相對於組合物總重量,該混合量可以為0.01~5重量%,具體可以為0.01~3重量%。
具體實施方式
以下,透過實施例更詳細地說明本發明。這些實施例僅是為了例示本發明,本發明的範圍並不限定於這些實施例,這對本發明所屬技術領域中具有通常知識者來說是顯而易見的。因此,本發明的實質性範圍是由本發明的權利要求和它們的等價物所定義。
參考例1
為了試驗本發明組合物的功效而使用的矢車菊素葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)是購自西格瑪(sigma)公司。
參考例2
作為本發明組合物的比較例,使用了購自西格瑪公司的作為花青素的一種的飛燕草素葡萄糖苷(delphinidin-3-O-glucoside)。
參考例3
如下述方法製備並使用用於試驗本發明組合物的功效的納豆膠。
(1)加熱滅菌程序:
將大豆浸泡在水中10~15小時左右,並用離子水(一次蒸餾水)充分清洗後,在高壓滅菌器(autoclave)中,在100~121℃的範圍下進行加熱滅菌約
2小時。
(2)培養程序:
將經過滅菌的大豆冷卻至40℃,並相對於總大豆品質,接種5~10%的活化的枯草芽孢桿菌接種液後,在35~40℃下培養約36小時。接種液是使用了將枯草芽孢桿菌以107~8細胞(Cell)/ml的濃度接種於8g/l的營養液體培養基(Neutrient Broth)中的接種液。
(3)萃取及精製程序
在完成培養的大豆培養液中添加適量的離子水,並充分攪拌,使得大豆表面的黏韌性物質溶解於離子水後,進行過濾,從而獲得透明的萃取液。
(4)結晶化程序
在透明的萃取液中添加適量的甲醇、乙醇、丙酮等溶劑,從而減少對水的溶解度,由此獲得白色沉澱物。然後,對獲得的沉澱物中包含的溶劑進行蒸發乾燥,從而獲得納豆膠粉末。
實施例1至3及比較例1至3的製備
以下述表1中示出的重量比,分別將所述參考例1中的矢車菊素葡萄糖苷和參考例3中製備的納豆膠進行混合,並使總重量均相同,從而製備實施例1至3。
此外,作為對所述實施例1至3的比較例,以下述表1中示出的重量比,分別將參考例2中的飛燕草素葡萄糖苷和參考例3中製備的納豆膠進行混合,並使總重量與實施例1至3均相同,從而製備比較例1至3。
試驗例1-抗氧化能力實驗
為了確認作為矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的混合物的實施例1至3的抗氧化效果,透過作為有機自由基的DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼基;1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)的還原所引起的吸光度的變化,將實施例1至3的DPPH氧化抑制功效與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷、單獨使用納豆膠,以及混合飛燕草素葡萄糖苷和納豆膠的比較例1至3進行比較。
分別以10,000ppm的相同濃度製備矢車菊素葡萄糖苷(參考例1)、納豆膠(參考例3)、實施例1至3、比較例1至3,以及作為合成抗氧化劑的水溶性維生素E(trolox)(陽性對照組)後進行稀釋,使得最終反應濃度為500ppm、250ppm、125ppm、62.5ppm、31.25ppm、15.63ppm後,分別取10μl並加入到190μl的100μM(在乙醇中)DPPH溶液中,從而制得反應液,在37℃下反應30分鐘後,在540nm下測定吸光度。分析結果示於下述表2中,IC50表示因添加的試樣而使吸光度減少50%時的試樣濃度。
如上述表2中所示,當單獨使用納豆膠時,幾乎沒有抗氧化效果。但是,以1:1的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例1顯示出與水溶性維生素E相似標準的IC50值,從而可以知道與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷時相比,其顯示出顯著提高的抗氧化效果。此外,雖然以1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例2和以1:9的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例3並沒有如以1:1的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例1顯示出優異的抗氧化效果,但是與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷時相比,其效果顯著優異。此外,實施例1至3與用相同量的飛燕草素葡萄糖苷來代替矢車菊素葡萄糖苷並與納豆膠進行混合的比較例1至3相比,其抗氧化效果更優異。因此,可以確認本發明的組合物具有優異的抗氧化效果。
試驗例2-抗老化能力實驗
為了確認作為矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的混合物的實施例1至3的抗老化效果,將實施例1至3的膠原酶(collagenase)生成抑制能力與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷、單獨使用納豆膠、混合飛燕草素葡萄糖苷和納豆膠的比
較例1至3,以及生育酚或表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)進行比較並測定。已知生育酚或EGCG為使皮膚的表皮細胞再生而具有防止皮膚老化功能的物質。
在裝有含2.5重量%的胎牛血清的達爾伯克改良伊格爾培養基(DMEM,Dulbecco's Modified Eagle's Media)的96-孔平板培養器(96-well microtiter plate)中,以5,000細胞/孔(well)的方式加入人成纖維細胞(Cascade生物製劑公司)(波特蘭,俄勒岡州,美國),並培養至長到90%左右。之後,在無血清DMEM培養基中培養24小時後,分別取10μg的溶解在無血清DMEM培養基中的矢車菊素葡萄糖苷(參考例1)、納豆膠(參考例3)、實施例1至3、比較例1至3,用50ppm的相同濃度進行處理24小時,並分別用50μM濃度的生育酚及EGCG(西格瑪奧德里奇(Sigma Aldrich)公司)進行處理24小時,然後取得細胞培養液。
利用膠原酶測定儀器(美國Amersham Pharmacia公司)來測定取得的細胞培養液的膠原酶生成程度。首先,將取得的細胞培養液放入到均勻塗布有膠原酶一抗的96-孔平板(96-well plate)中,並在恒溫槽(36℃)中實施抗原-抗體反應3小時。
3小時後,將結合有發色團的膠原二抗放入到96-孔平板中,再次反應15分鐘。15分鐘後,加入誘發顯色的物質,在室溫下進行顯色反應15分鐘,然後再次加入1M的硫酸終止反應(顯色)時,反應液的顏色會呈黃色,確認了根據反應的進行程度,會顯示出不同程度的黃色。
利用分光光度計在405nm下測定呈黃色的96-孔平板的吸光度,並透過下述數學式1計算膠原酶的合成程度。此時,將從未處理組中取得的細胞培養液的反應吸光度作為對照組。即,將非處理組中的膠原酶表達程度作為
100,與此作為對比,求出用試驗物質處理的組中的膠原酶表達程度,並將其結果示於下述表3中。
數學式1膠原酶表達程度(%)=用物質進行處理的細胞組的吸光度/對照組的吸光度×100
如上述表3中所示,當單獨使用納豆膠時,膠原酶的表達幾乎不會受到抑制。但是,以1:1的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例1與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷時相比,在試管內(in vitro)更有效地抑制了膠原酶的表達,並且比已知為抗老化物質的生育酚和EGCG具有更優異的膠原酶表達抑制能力。此外,雖然以1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例2和以1:9的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例3並沒有如以1:1的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷和納豆膠的實施例1顯示出優異的膠原酶表達抑制效果,但是與單獨使用矢車菊素葡萄糖苷時相比,其效果顯著優異。進而,實施例1至3與用相同量的飛燕草素葡萄糖苷來代替矢車菊素葡萄糖苷並與納豆膠進行混合的比較例1至3相比,其膠原酶表達抑制效果更優異。因此,可以確認本發明組合物的由膠原酶表達抑制所帶來的抗老化效果優異,尤其是改善皮膚彈性及改善皮膚皺紋的效果優異。
以上對本發明內容的特定部分進行了詳細說明,本發明所屬技術領域中具有通常知識者應知曉,這些具體技術只是較佳的實施方式,本發明的範圍並不限定於此。因此,本發明的實質性範圍應由本發明的權利要求和它們的等價物所定義。
此外,下面對包含本發明組合物的皮膚外用劑組合物的劑型例進行更加詳細的說明,但應知曉,本發明的範圍並不限定於此。
劑型例1-營養化妝水
根據下述表4中記載的組成,採用通常的方法來製備營養化妝水(單位:重量%)。
劑型例2-營養霜
根據下述表5中記載的組成,採用通常的方法來製備營養霜(單位:
重量%)。
劑型例3-按摩霜
根據下述表6中記載的組成,採用通常的方法來製備按摩霜(單位:重量%)。
劑型例4-面膜
根據下述表7中記載的組成,採用通常的方法來製備面膜(單位:重量%)。
劑型例5-皮膚外用劑中的軟膏
根據下述表8中記載的組成,採用通常的方法來製備軟膏(單位:重量%)。
Claims (10)
- 一種抗老化皮膚外用劑組合物,其含有以1:1至1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的混合物作為有效成分。
- 一種皮膚彈性改善用皮膚外用劑組合物,其含有以1:1至1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的混合物作為有效成分。
- 一種皮膚皺紋改善用皮膚外用劑組合物,其含有以1:1至1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的混合物作為有效成分。
- 如請求項1-3中任一項所述之皮膚外用劑組合物,其中該納豆膠是將活化的枯草芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌接種於大豆並經過發酵而生成的。
- 如請求項1所述之皮膚外用劑組合物,其中該組合物是透過抑制膠原分解酶的表達來顯示出抗老化效果。
- 如請求項1-3中任一項所述之皮膚外用劑組合物,其中該矢車菊素葡萄糖苷和該納豆膠是以1:1的重量比進行混合。
- 如請求項1-3中任一項所述之皮膚外用劑組合物,其中相對於該組合物總重量,該矢車菊素葡萄糖苷的含量為0.01~5重量%,相對於該組合物總重量,該納豆膠的含量為0.01~5重量%。
- 如請求項1-3中任一項所述的皮膚外用劑組合物,其中將該皮膚外用劑組合物劑型化為化妝品形態,且以選自柔膚化妝水、收斂化妝水、營養化妝水、眼霜、營養霜、按摩霜、潔面膏、潔面泡沫、潔面水、粉、精華液及面膜中的任一種形態來進行劑型化。
- 一種以1:1至1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的混合物的用途,用於改善皮膚彈性。
- 一種以1:1至1:3的重量比混合矢車菊素葡萄糖苷及納豆膠的混合物的用途,用於改善皮膚皺紋。
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