TWI311589B

TWI311589B - Process for producing optically active propoxyaniline derivatives

Info

Publication number: TWI311589B
Application number: TW091104267A
Authority: TW
Inventors: Sato Kouji; Yagi Tsutomu; Kubota Kazuo; Imura Akihiro
Original assignee: Daiichi Seiyaku Co
Priority date: 2001-03-07
Filing date: 2002-03-07
Publication date: 2009-07-01
Also published as: JP4169332B2; ATE439333T1; CN1496409A; KR20040007459A; EP1367132A1; HK1063819A1; US20040077060A1; CN100465286C; US7217560B2; EP1367132A4; JPWO2002070726A1; CA2440411A1; NO20033880D0; DE60233307D1; WO2002070726A1; ES2329554T3; NO20033880L; EP1367132B1; KR100868619B1

Description

A7 B7 1311589 五、發明説明（1 ) 技術範疇本發明係關於一種在製造抗菌性化合物上有用之光學活性丙氧基苯胺衍生物及其之中間體之製造方法。背景技術已知S-(-)-9-氟-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌啡）-7-酮基-2,3-二氫-7H- p比咬并[l，2,3-de][l,4]苯并 p号畊-6-缓酸（8-(-)-9-fluoro-2,3 - dihydro-3-methyl -10-(4-methyl- l-piperazinyl)-7-oxo-7H-pyrido[l,2,3-de][ 1,4]benzoxazine-6-carboxy acid ， Levofloxacin，LVFX，特開昭62-252790號公報）為優異之合成抗菌劑。式（V)表示之化合物（以下以化合物（V)表示，以其他編號表示之化合物亦以同樣方式表示）：

(式中，X1及X2各獨立表示鹵素原子）可以做為該合成抗菌劑之製造中間體，已知其可用下述之製造法製造（特開平 1-250369號及特開平2-723號公報）。

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（2 ) FI> FX1 °; ’’"ΟΤΉΡ (D) 一） /'ΌΗ /"OH (V) 亦即，化合物（V)，藉由將市售之乳酸酯之羥基用四氫 p比喃基（tetrahydropyranyl)保護，然後將得到之化合物（A) 用氫化鋰鋁還原，得到化合物（B)，將該化合物（B)及化合物（C)用氫化鈉處理，得到化合物（D)，之後除去四氫吡喃基以及還原硝基而合成。但是，為化合物（A)之原料之乳酸酯之中，便宜且容易獲得者，光學純度為約97%，不適合做為要求99°/。以上高光學純度之左旋歐氟沙星（Levofloxacin)之原料。因此，亦曾開發不使用乳酸酯之其他化合物（B)製造方法（特開平2-265701)。又，還原時使用之氫化鋰鋁由於安全之顧慮難以大量取用。再者，在上述製造方法中，步驟數目比較多。更且，曾報告除去四氫吡喃基時伴隨消旋化 (S.Chladek, Chem. Ind. (London), 1719 (1964)) ° 因此，檢討使用將化合物（A)之四氫p比喃基改為爷基之化合物（(R)-2-苄氧基丙酸酯）。但是，（R)-2-苄氧基丙酸酯，從前只能獲得光學純度約為97%者。然而做為醫藥之左旋歐氟沙星（Levofloxacin)要求所謂99%以上之高光學純度，而在中間步驟又難以提高光學純度，所以約97%光學純度之（R)-2-苄氧基丙酸酯不適合做為左旋歐氟沙星之原料。 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1311589

因此期望開發解決此等課題之方法。及：：L之I的係提供一種光學活性丙氧基苯胺衍生物以 :可做為_之左旋歐敦沙星之便宜有效製造方法以及其之中間體之製造方法。再者’本發明提供-種有s旨不對稱水解能力之酵素，且 :由將有醋不對稱水解能力之微生物之菌體在高壓下碎然後用陰離子層析、疏水㈣，及陰離子層析接續純化而得到。發明之揭示本發明者深人檢討之結果發現藉由將為外消旋體之乳酸酯用具有酯不對稱水解能力之酵素等處理，一方面可以特隸水解光學異構體之㈣分，另—方面藉由㈣從該水解侍到之化合物做為中間體’可以用比先前技術便宜且短之步驟製造光學活性丙氧基苯胺衍生物。^發現藉由將醋不對稱水解反應生成之不要的光學異構體外消旋化，可以再循環回基質中。藉由此等認識發現可以高效率製造光學純度高之左旋歐氟沙星’本發明至此於焉完成。亦即，本發明係關於式（I-a)表示之光學活2化合物之製造方法：

Me

0-a) (式中R1及R2如下述）；其特徵為從式⑴表示之化合物 -6 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1311589 五、發明説明 A7 B7

OR*·

Me-^COjR1 (式中R1為碳數1至6之院基’ R2為羥基之保護基）用具有醋不對稱水解忐力之酵素，或者具有酯不對稱水解能力之微生物之培養液、該微生物菌體或該微生物菌體處理物處理後之反應液中單離採取。本發明係關於式（V)表示之化合物之製造方法：

叫 (V) Me ΌΗ (式中X1及X2如下述）；其特徵為從式⑴表示之化合物

⑴

Me CC^R1 (式中R1及R2與上述者相同）用具有酯不對稱水解能力之酵素，或者用具有酯不對稱水解能力之微生物之培養液、該微生物菌體或該微生物菌體處理物處理後之混合液中單= 採取’得到式（I_a)表示之光學活化合物： OR* (I-a)

Me CO〆

1311589 五、發明説明（5 (式中R及R與上述者相同）；將該化合物媒中，於一級醇類在力τ 1 )在非％系溶到綱表示之光學活性化合物·· “物處理’得

Me〆"^

CH,〇H («) (式中R2與上述者相同、.收αw 示之化 J)，將该化合物（π)與式（III) 合物用鹼處理： "NO, m X3 (式中X1，X2及X3各獨立表示虜素原子）之光學活性化合物： ;得到式（IV)表 X2，丫 'N〇2 (IV)

Me OR^ (式中，R，X及X2與上述者相同）；然後同時進行該化合物（iv)之硝基變換為胺基以及R2之脫離，而得到式化合物法：再者，本發明提供一種式（XII)表示之化合物之製造方 -8 - 本紙張趸度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公爱）

五、發明説明（6 !311589

(ΧΠ) (式中，X1如下述）；其特徵為從式⑴表示之化合物：

Me

(0 (式中R1為碳數1至6之烷基，以及R2為羥基之保護基）用具有酯不對稱水解能力之酵素，或者用具有酯不對稱水解能力之微生物之培養液、該微生物菌體或該微生物菌體處理物處理後之混合液中單離採取，得到式（I_a)表示之光學活化合物：

(I-a) (式中R1及R2與上述者相同）；將該化合物（I_a)在非醇系溶媒中，於一級醇類存在下’用硼氫化金屬化合物處理’，' 得到式（II)表示之化合物：

Me OR2

(Π) ch2oh (式中R2與上述者相同）；將該化合物（Π)與式（ΙΠ)表示之化合物用鹼處理： -9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(210X297公釐) 1311589 五、發明説明（7 ) A7 B7

⑽ (式中X1，X2及X3各獨立表示鹵素原子）；得到式（IV)表示之光學活性化合物：

Me’ OR (式中，R2，X1及X2與上述者相同）；然後同時進行該化合物（IV)之硝基變換為胺基以及R2之脫離，得到式（V)表示之化合物：

NH2 (V) (式中，X1及X2與上述者相同）；使該化合物（V)與式（VI)表示之化合物： /COOR3 Y—CH=C、 4 ㈣ COOR4 (式中，Y為碳數1〜6之烷氧基、鹵素原子或二（CkG烷基） 10- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（8 ) 胺基，以及R3及R4各獨立為碳數1〜6之烷基）反應，得到式 (VII)表示之化合物：

(式中，X1，X2，R3及R4與上述者相同）；使該化合物（VII) 與磺醯化合物反應，得到式（VIII)表示之化合物：

(VIII) (式中，R5為可有取代基之烷磺醯基或可具有取代基之芳磺醯基，以及X1，X2，R3及R4與上述者相同）；將該化合物（VIII)在鹼性條件下閉環，得到式（IX)表示之化合物： r3ooc ,coor4

(IX) (式中，x1，x2，r3及r4與上述者相同）；將該化合物（IX) 於硼化合物存在下或未存在下加熱，得到式（X)表示之化合物： -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1311589

"，R表不具有碳數1〜6之烷基或BZ2 (其中，Z為鹵素，、子、Cl_C6烷氧基或^·^7烷羰氧基）；以及X1及X2與上述者同）’使該化合物（乂）與4_曱基哌畊反應，得到式示之化合物：

(式中X及R與上述者相同）；繼而水解，得到式（X 示之化合物。再者’本發明提供一種具有醋不對稱水解能力之酵素，其藉由將具有自旨不對稱水解能力之微生物之g體在高壓下 :裂’然後用陰離子層#、疏水層析’及陰離子純化而得到。 Λ 實施本發明之最佳形態酵素生物

至I 本發明為將從化合物⑴用具有酯不對稱水解能力之或用具有酯不對稱水解能力之微生物之培養液、該微王，體或該微生物菌體處理物處理後之混合液中單離採取得到之化合物(I_a)用硼氫化金屬化合物處理，繼而將得之化合物⑴）與化合物（111)於鹼存在下處理，得到化人彩 -12- A7 B7 1311589 五、發明説明（1〇 ) (IV)，該化合物（IV)藉由還原反應可以單步驟衍生為具光學活性之丙氧基苯胺衍生物（V)，然後從該化合物（V)製造可做為抗菌劑之化合物（XII)。依照本發明，從化合物（I)轉變為化合物（XII)之反應流程圖如下文所示。

-13- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（11 ) 對於反應步驟中之取代基加以說明。 X1 ’ X2及X3各獨立為鹵素原子，鹵素原子以氟原子為較佳。 R1，R3及R4包含直鏈狀、分枝狀及環狀之任一者之烧基，以碳數1至ό為較佳’以曱基、乙基及異丁基為特佳。 R2為羥基之保護基。該保護基可為通常使用者。例如， (取代）烷氧羰基類、（取代）芳氧羰基類、（取代）醯基類、 (取代）烷基類、（取代）烯基類、（取代）芳烷基類、以及被烧基或务燒基（彼等可相同或相異）取代之曱石夕烧基類[在本說明書中’所謂「取代」意指「可有取代基」]。具體而言，為第三丁氧幾基、2,2,2_三氯乙氧羰基等（取代）炫氧羰基類；苄氧羰基、對甲.氧基苄氧羰基、對硝基芊氧艘基等 (取代）芳基氧羰基類；乙醯基、甲氧乙醯基、三氟乙醯基、氯乙醯基、特戊醯基、曱醯基及笨曱醯基等（取代）醯基類；第三級丁基、烤丙基（丙稀基）、苄基、對硝基爷基、對曱氧基苄基、三苯基甲基及苯乙基等（取代）炫基類、（取代）烯基類或（取代）芳烷基類；曱氧甲基、第三級丁氧曱基、四氫ρ比"南基、2,2,2-三氯乙氧曱基等喊類；三曱矽烷基、異丙基二曱基矽烷基、第三級丁基二甲基石夕烧基、三苄基矽烷基、第三級丁基二苯基矽烷基等取代曱石夕烷基類。以上之保護基之中’ R2較佳為可以在還原條件下除去者’具體而言，以（取代）芳烷基為較佳，以有节基構造之（取代）芳烷基為更佳，以苄基為特佳。 R為取代燒項酿基或（取代）芳項醯基，以碳數為1〜6之 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4规格(21〇χ 297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（12 ) 烷磺醯基或取代苯磺醯基為較佳。其中，以曱磺醯對-曱苯磺醯基為特佳。哭土及 R6為CVC6烷基或BZ2 (其中z為鹵素原子、c丨_C6烷或CrC7烷羰氧基），碳數丨〜6之烷氧基例如為曱氧基、乙^ 基、異丙氧基及第三丁氧基等。做為鹵素原子者:礼與上述X1，X2及X3相同者。Γ Γ、产#笛I ， ' 為有C2_C7烷紅虱基例如為乙醯急基、丙醯氧基及丁醯氧基等。其中R6以BF2為特佳。 Y為碳數1〜6之烷氧基、齒素原子或二(Ci C6 基，但以碳數卜6之烷氧基為較佳，以甲氧基及乙氧基I 特佳。土又，在上述步驟圖中，雖然只顯示單方異構體之掣去但化合物（I-a)之立體配置若使用相反者，可以同樣地i成另一方異構體。又，若利用化合物（1)，亦可以得到化: (V)之外消旋體' 13 以下’將詳述本發明之每一步驟。步驟（a) 步驟（a)為將化合物⑴藉由用具有醋不對稱水解能力之酵素，4者用具有醋不對稱水解能力之微生物之培養液，該微生物菌體，或該微生物菌體處理物處理而得到化合物 (I-a)之步驟。口首先，將化合物⑴懸浮於適當的緩衝液中，繼而加入酵素’微生物之培養液’該微生物菌體或該微生物菌體處理物並攪拌而處理。反應所用之酵素只要具有醋不對稱水解能力’將無特殊限^。做為酵素者，例如可為來自微生

1311589 A7 _______B7 五、發明説明（13 ) 物、動物及植物之市售酵素製劑。本發明所用之酵素，以脂肪酶為較佳。脂肪酶可為被固定化者。又’做為微生物者例如為分支孢子菌（clad〇sp〇rium) 屬、腐化米黴菌（Absidia)屬、矮黴（Nannizzia)屬、麴菌 (Aspergiilus)屬、根黴（Rhiz〇pus)屬及白黴菌（Muc〇r)屬等黴菌；對孢子囊菌（Zygoascus)屬、念珠菌（Candida)屬及啤酒酵母菌（Saccharomyces)屬等酵母；或者芽孢桿菌（BaciUus) 屬、微桿菌（Microbacterium)屬、微球菌（Micr〇c〇ceus)屬、假單孢桿菌（Pseudomonas)屬、棒桿菌（c〇rynebacterium)屬及鏈黴菌（Streptomyces)屬等細菌。在此等微生物中以細菌為較佳，以芽孢桿菌屬或微桿菌屬為更佳，以蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus)或薰衣草狀微桿菌（Micr〇bacterium laeVanif0rmas)為最佳，以蠟狀芽孢桿菌Dsc〇〇〇7、蠟狀芽孢桿菌ATCC14579，或者薰衣草狀微桿菌IF〇14471為特佳。再者，做為此等微生物菌體處理物者，例如為微生物菌體碎裂物及彼等之純化品。在本發明中，從反應效率之觀點言之’以從此等微生物，尤其是細菌類菌體純化之酵素為較佳。此等純化之酵素，以將菌體在高壓下碎裂，然後用陰離子層析、疏水層析，及陰離子層析接續純化而得到者為特佳。又，酵素之純化程度’可為顯示期望活性之程度。又，此等純化酵素，可為如上述處理菌體而得者，亦可 -16- ;紙張尺纽财目S家料(CNS) A4規格(2lGX297公釐) 1311589 發明説明（14 為藉由重組dNA技術在大腸g等其他重組dna技術得到酵素，例如可採取下述者二由將上述之純化酵素逆向層析以進—步止— 胺基酸序列’根據該胺基酸序列繁探’缺定蛋白質之，段選殖-不對稱水解酵本=體: 幅’調製重組質胃’導入大腸菌等，以及 α養該大腸產等，可以得到目的酵素。 ==，將下述化合物⑴中之一光學異構分選擇性水解： 0R“ Me^^^CO^R1 OR2 (I) (式中，R1及R2與上述者同y生成化合物（i_b): OR人 co2n α-b) 與上述者同）；然後將未反應之化合物(I_a)從混合液中單離： OR2 1 a-a) mr co^1 (式中’ R1及R2與上述者相同）。亦即，在該混合液中加入乙酸乙S旨及氣仿等有機料錢拌。#由分液等處理，可以單離得到化合物（I_a)。又，處理利之酵素及菌體等，在化合物（I-a)萃取前’可以藉由過濾等除去。此等水解及單離之處理溫度，雖然範圍内，但以抑至帆為較佳。又，處理= -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐) 1311589 A7 B7 五、發明説明（15 ) 在4至9之範圍内，以在6至8之範圍内為較佳。處理時間可在1小時至7曰之範圍内，以在1小時至3〇小時之範圍内為較佳。處理液中化合物⑴之濃度，通常重量比在0.1%至 10%之範圍内，以在〇 5%至5%之範圍内為較佳。酵素、微生物之培養液、該微生物菌體及該微生物菌體處理物之使用篁雖無限定，但以乾燥重量計，相對於化合物（I)之重量比宜為0.05倍至〇·5倍。又’從反應混合物分離之化合物（I_b)，於酯化後可進行外消旋化反應。然後再付諸於酯不對稱水解反應而被再利用。步驟（b) 步驟（b)為將化合物（I_a)在非醇類溶媒中，於一級醇類存在下，用硼氫化金屬化合物處理而得到化合物（π)。做為硼氫化金屬化合物者，例如為硼氫化鈉' 硼氫化鐘、硼氫化鈣、硼氫化鉀、硼氫化鋅、硼氫化鎂及氰基硼風化鈉等。此等之中，以蝴氫化鈉為較佳。棚氮化金屬化合物之使用量，可為化合物（I_a)之丨至5倍莫耳，以約丨^至 2倍莫耳為較佳。做為溶媒者，例如為正己院、正戊燒、環己院及環戊烧等烴系溶媒；苯、曱苯及二甲苯等芳香族烴系溶媒；乙醚、異丙喊（IPE)、甲基第三丁基喊（mtbe)及四氫咬喃 (THF)、二曱氧基乙^，心二㈣等容媒；氯仿、二氣甲院及1,2-二氯乙燒（EDC)等齒化烴系溶媒。此外，例如可為水及乙酸乙醋等。此等溶媒可以單獨使用或將複數 -18-

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種組合使用。此等溶媒之中，以曱苯及糸》容媒為較佳。二曱苯等芳香族烴 -級醇類，雖無特殊限定，但以曱醇為較佳。—級醇類之使用量可為化合物（I_a)之3至15倍莫耳，以耳為較佳。倍莫反應溫度雖然隨使用之溶媒而異，但通常為_ 7 8。〇至溶媒之济點’以1(TC至溶媒之沸點為較佳。反應時間可^ 至24小時，以2至16小時為較佳。 ‘ 步驟（c) 步驟（0為藉由將化合物（11)在溶媒中，於鹼存在下處理而得到化合物（III)之步驟。 _關於溶媒’彳以使用各種溶媒’例如正己院及正戊烧等烴系溶媒；苯、曱苯及二曱苯等芳香族煙系溶媒；甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇(IPA)、正丁醇及第三級丁醇等醇系溶媒；乙域、異㈣（IPE)、甲基第三丁基喊（MTBE)、四氫吱喃（THF)、二曱氧基乙烧及认二化等⑽系溶媒；二曱基甲醢胺（DMF)及二曱基乙醯胺（DMAc)等酿胺系溶媒；氣仿、二氣甲烷及U2-二氣乙烷(EDC)等南化烴系溶媒。此外，例如可為水、乙冑、乙酸乙§|及丙酮等。此等溶媒可以單獨使用或將複數種組合使用。此等溶媒之中，以甲苯及二甲苯等芳香族烴系溶媒為較佳。反應溫度隨鹼之種類及使用之溶媒而異，但通常為_78t：至溶媒之沸點，以-1 〇它至溶媒之沸點為較佳。做為鹼者，可以使用有機鹼及無機鹼之任一種，舉例言 -19-

A7 B7 1311589 五、發明説明（17 ) 之，驗金屬或驗土類金屬，例如納、鉀、鐘、鎮及妈等之氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽及烷氧化物等；氫化鈉、氫化鉀及氫化鋰等金屬氫化物；正丁基鋰、甲基鋰、二異丙胺化鋰等烷基鋰試藥；三乙胺、N，N-二異丙基乙胺等三級胺類’此外，亦可以使用1，8-二氮雜雙環[5.4.0] 7-十一碳烯（DBU) ' 1，8-二氮雜雙環[4_3.0] 5-壬婦（DBN)、二甲基笨胺及N-甲基嗎〃林等雜環化合物。此等驗之中，以碳酸鉀等鹼金屬或鹼土類金屬之礙酸鹽，氫氧化鉀等鹼金屬或驗土類金屬之氫氧化物’或者第三丁氧化鈉及第三丁氧化卸等驗金屬烷氧化物為較佳。又’可以將碳酸鉀等鹼金屬或驗土類金屬之碳酸鹽與氫氧化鉀等鹼金屬或鹼土類金屬之氯氧化物組合使用。鹼之使用量通常為化合物（ΙΠ)之莫耳數之0.1至15倍莫耳，以約1至5倍莫耳為較佳。又，可以在促進反應用之四丁基銨溴化物、芊基三乙基銨氣化物等四級銨鹽，碘化鉀及碘化鈉等鹼金屬或鹼土類金屬之蛾化物及冠狀驗（crown ether)等存在下進行反應步驟（ch 步驟（d)為藉由還原反應同時進行化合物（IV)之硝基變換為胺基及R2之脫保護，以得到化合物（v)之步驟。、還原反應iff可藉由氫化法等進行1如^列舉存在下之接觸氫化法’财法可以使用之觸媒被 :用之金屬觸媒4等之中’以㈣、：：為較佳。 *化鈷關於溶媒，若為不會抑制反應者，將無特殊限制，做為 -20-

1311589 A7 B7 五、發明説明經系者，例如為正己&、正戊院、苯、甲苯及做為醇系者，例如為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇(ι '正-丁醇及第三級丁醇等。做為醚系者，例如為 ”丙喊（IPE)、甲基第三丁基趟（MTBE)、四氫吱。南（τ 、 -曱氧基乙烷及M_二噚烷等。做為醯胺系者，例如為二 =曱醯胺（DMF)及二曱基乙醯胺（DMAc)等。做為_化煙 '、者，例如為氣仿、二氣曱烷及12_二氣乙烷（EDc)等。此外’例如可為水H乙酸乙醋及丙_等。可=單獨使用，或將複數種組合使用。此等溶媒之中，以曱=、乙醇、丙醇及異丙醇（IPA)等醇系溶媒甲笨及二曱苯等芳香族烴系溶媒，或者此等與水之混合溶媒為: 佳。做為氫源者’除氫氣之外’可以使用曱酸銨。曱酸銨之量可為化合物（IV)之莫耳數之1至15倍莫耳，以約2至5倍莫耳為較佳。、反應溫度隨鹼之種類及使用之溶媒而異，但通常為_78它至溶媒之沸點，以室溫至80t為較佳’反應時間可為丨至 24小時，以在2至16小時之範圍内為較佳。步驟（e) 步驟（e)為將化合物（V)與式（VI)之亞曱基丙二酸酯化合物反應’已得到化合物（VII)之步驟。 σ 所用之亞甲基丙二酸酯化合物（VI)例如為乙氧基亞曱基丙一酸二乙酯及甲氧基亞甲基丙二酸二甲醋等。該反應，舉例言之，藉由使用相對於化合物（V)，較佳 -21 -

1311589 A7 B7 - _ 五、發明説明（19 ) 等莫耳以上之亞甲基丙二酸酯化合物（νι)，在無溶媒中將兩者加熱至約100〜18(TC並攪拌，或者在適當的溶媒中加熱回流而實施。此時之溶媒，若對於反應無不良之影響，將無特殊限疋’例如苯、甲苯、二甲苯'正己烷、環己烷及正戊烷等系溶媒；曱醇、乙醇'丙醇類及丁醇類等低碳醇類；乙喊、四氫咬喃、二噚烷及1，2_二甲氧基乙烷等醚類；N，N_ —甲基甲醯胺、N，N-二曱基乙醯胺&N_甲基_2_吡咯啶酮等酿胺類；二曱基亞颯及環丁颯等非質子性極性溶媒等。在使用溶媒之場合，反應可在溶媒之沸點以下之溫度實施。步驟（f) 步驟（f)為將化合物（VII)與磺醯化合物反應，得到化合物（VIII)之步驟。所用之磺醯化合物例如為對甲苯磺醯氯、甲磺醯氣及氯曱烷磺醯氣等。 ' 反應較佳在鹼存在下進行，關於該鹼，可以例示三乙胺、三丁胺及N，N-二異丙基乙胺等三級烷胺類；N，N_二曱基苯胺及N，N-二乙基苯胺等二烷基苯胺類；吡啶、N，N_二曱胺基吡啶及N-曱基嗎啉等雜環胺類；以及j，8_二氮雜環[5.4.0]十一烯。 a ” 使用溶媒之場合’期望為非質子系之溶媒，例如可為乙喊、四氫咬喃、二，号院u，2_二甲氧基乙烧等鱗類二甲基甲醯胺及Ν,Ν-m醯胺及N_曱基_2”比咯咬嗣 -22- i紙張尺度適用中國画家標準(CNS) A4規格 1311589

等酿胺類；二氣甲&、氣仿及h2.二氯乙烧等。反應溫度以約0〜100°c為較佳。、步驟（g)為將化合物（VIII)在鹼性條件下閉環，得到化合物（IX)之步驟。口所用之鹼可為無機鹼與有機鹼之任一者，無機鹼例如為氫氧化m氧化鈉及氫氧化鉀等金屬氫氧化物；碳酸鋰、碳酸鈉及碳酸鉀等金屬碳酸鹽；碳酸氫鈉及碳酸氫鉀等金屬碳酸氫鹽類。有機鹼例如為三乙胺、三丁胺、N N_ 二異丙基乙胺等三級烷胺類；N，N.二曱基苯胺及n，n_二’乙基苯胺等二烷基苯胺類；吡啶、N，N_二甲胺基吡啶及…甲基嗎啉等雜環胺類；曱氧化鈉、乙氧化鈉、異丙氧化鈉及第二丁氧化鉀等鹼金屬烷氧化物；此外，亦可為丨8_ _氮雜雙環[5.4.0]十一烯及沁苄基三曱基銨氫氧化物等。反應溶媒例如為曱醇、乙醇、丙醇類及丁醇類等低碳醇類；G喊、四氫呋喃、二嘮烷、I2·二甲氧基乙烷、2-甲氧基乙基喊及乙二醇·乙醚等醚類；N，N_:曱基甲酿胺、 N，N-二曱基乙醯胺、Ν·曱基_2_吡咯啶酮等醯胺類；二曱基亞砜及環丁砜等非質子性極性溶媒等。反應可在室溫至150°C之範圍内實施。又，該在該閉環反應中，加入碘化鉀、碘化鈉及冠蜓等做為反應促進劑將有效，該反應促進劑之加入量為丙^ 苯化合物之1/20當量或以上。氧基步驟（h) -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS> A4规格(210X 297公釐) 1311589 A7 B7 五、發明説明（21 ) 步驟（h)為將化合物（IX)在硼化合物存在下或不存在下加熱’得到化合物（X)之步驟。反應若在删化合物不存在下進行，則可以得到式（X) 中，R為C^-C6烷基之化合物。另一方面，反應若在硼化合物存在下進行，可以得到式（χ)中R6為BZ2之化合物。硼化合物，具體而言，例如為三氟化硼.四氫呋喃錯合物、三氟化硼.乙醚錯合物。於硼化合物不存在下之反應，較佳在聚磷酸等溶媒中，於100°c〜200t加熱而進行。於硼化合物存在下之反應，較佳在無水乙酸及無水丙酸等溶媒中，加入三氟化硼四氫呋喃錯合物或三氟化硼.乙醚錯合物等，於15〇。〇〜2〇〇1 加熱而進行。步驟Π) 步驟⑴為化合物（X)與4_甲基哌畊反應，得到化合物（χι) 之步驟又，在式（X)中R5為CVC：6跪基之場合，較佳在驗性或酸性條件下水解生成羧酸後，與4_甲基哌_反應。反應較佳在鹼存在下進行。該鹼可為無機鹼，亦可為有機，，做為無機鹼者，例如為鹼金屬或鹼土金屬之碳酸鹽及碳酸氫鹽等。做為有機鹼者，例如為三烷胺或含氮雜環化合物。具體而言，為三乙胺、三丁胺及乙基二異丙基胺等亦可為4_甲基嗎啉及二甲胺基吡啶等；再者，亦可以使用過量之4-甲基喊，井並兼用驗。在該反應中，可以使用一甲基亞楓做為溶媒。步驟m -24 -

1311589 A7 ________B7 五、發明説明（"""22) ~~ ' ~ 步驟⑴為將化合物（XI)水解，得到化合物（χπ)之步驟。該水解反應’例如藉由在鹼存在下，於質子性溶媒中加熱而進行。例如可以例示在醇溶媒中，於三烷胺存在下加熱之條件，具體而言，在乙醇中，於三乙胺存在下加熱攪拌。 …、式（XII)中’ X1為氟原子之化合物為左旋歐氟沙星 (Levofloxacin) 0 實施例以下，雖列舉實施例及參考例更具體地說明本發明，但本發明非限定於此。又得到之化合物之光學純度（％ )係用HPLC或GC測定。得到之化合物之絕對配置，藉由與其他途徑合成之已知絕對配置之樣品比較而決定。實施例1 . 氣丙酸乙酷將2-苄氧丙酸乙酯（3〇〇 mg)懸浮於〇 1 μ磷酸緩衝液 (pH 6.5)(30 ml)中，加入精製級之脂肪酶（生化學工業公司製’ ό mg)並於30°C攪拌24小時。在反應液中加入乙酸乙酯，藉由經矽藻土過濾除去變性蛋白質，再用1 N氫氧化鈉水溶液調整至pH 7.0後’分液萃取。將有機層用5%碳酸氫納水溶液洗淨’然後用無水硫酸鈉乾燥。藉由餾去溶媒’件到油狀之標題化合物（1 〇2 mg，約9 8.8 % )。 ^-NMR (CDC13) δ: 1.30 (3Η, t, J = 6.8 Hz), 1.44 (3H, d, J = 6.8 Hz), 4.05 (1H, q, J = 6.8 Hz), 4.22 (1H, q, J = 6.8 Hz), 4.23 (1H, q, J = 6.8 Hz), 4.45 (1H, d, J = 11.7 Hz), 4.67 (1H, -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1311589 A7 Γ________ Β7 五、發明説明（ ~— d, J = 11.7 Hz), 7.23-7.42 (5H, m) 實施例2 : 基」-丙^ 於40°C，將硼氫化鈉（21 8 mg)懸浮於〇 8 ml甲笨中，在該溶液中，加入在實施例i中得到之（R)_2_苄氧丙酸乙酯 (lOOmg，98.8%)之甲苯溶液（〇8ml)。在反應溶液中，: 入MeOH (0.15 ml)，並於該溫攪拌3小時。在反應液中加入水’用曱苯萃取。將有機層用水及飽和氯化銨水溶液洗淨後，用無水硫酸鎮乾燥。餾去溶媒後，將得到之殘餘物付諸於矽凝膠管柱層析，得到為油狀物質之標題化合物（79 mg，約 99% )。 H-NMR (CDC13) δ: 1.17 (3Η, d, J = 6.3 Hz), 2.20 (1H, bs), 3.43-3.72 (3H, m), 4.48 (1H, d, J = 11.7 Hz), 4.64 (1H, d, J = 11.7 Hz), 7.22-7.44 (5H, m) 參考例1

將黨衣草狀微桿菌（Microbacterium laevaniformas) IFO 14471之種菌接種於普通肉湯培養基1〇〇 ml (坂口燒瓶）中，並於3 0 °C振盪培養一夜。藉離心集菌後，凍結乾燥，得到IFO 1447 1之凍結乾燥菌。貫施例3 : (R)-2-爷氣某丙酸乙酉旨將2-节氧基丙酸乙酯2.0 g (9.6 mmol)懸浮於〇 1 Μ磷酸鹽緩衝液（pH 7.0) 100 ml中，加入在參考例1中調製之IF〇 14471之凍結乾燥菌1〇〇 mg並於30°C攪拌。由於伴隨著反應之進行（藉由生成羧酸）pH值會降低，所以加入1 N氫氧化鈉使系統内之pH值保持在6_8與7.2之間。反應14小時 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） A7 B7 1311589 五、發明説明（24 ) 後，加入乙酸乙酯100 ml並暫時擾拌後，經由石夕藻土過濾除去菌體。分液後，再用乙酸乙酯100 m丨進行萃取後，收集乙酸乙酯層，用5%碳酸氫鈉水溶液洗淨2次，以完全除去羧酸。將有機層乾燥後，藉由餾去溶媒得到0.93 g標題化合物（46.5%，99.9%ee)。h-NMR與實施例1一致。實施例4 : (RV2-芊氧基丙酸乙酷將2-苄氧基丙酸乙酯2.0 g (9.6 mmol)懸浮於0.1 Μ磷酸鹽缓衝液（pH 7.0) 100 ml中，加入以與參考例1同樣之方法調製之ATCC 14579之凍結乾燥菌100 mg並於3(TC攪拌。由於伴隨著反應之進行（藉由生成緩酸）pH值會降低，所以加入 1 N氫氧化鈉使系統内之pH值保持在6.8與7.2之間。反應16 小時後，加入乙酸乙酯100 ml並暫時攪拌後，經由矽藻土過濾除去菌體。分液後，再用乙酸乙酯100 ml進行萃取後’收集乙酸乙酯層，用5%碳酸氫鈉水溶液洗淨2次，以完全除去羧酸。將有機層乾燥後，藉由餾去溶媒得到標題化合物 0.88 g (44.0%，99.9% ee)。W-NMR與實施例 1 一致。實施例5 : 2-苄氧基丙酸乙酯（外消旋化步驟、收集於實施例3中用乙酸乙酯萃取操作之時之全部水層並用10%鹽酸調整至pH 2後，用乙酸乙酯1〇〇 ml萃取2次。將有機層乾燥後，餾去溶媒，得到（S)-苄氧基丙酸0.83 g (48_0% ’ 96%ee)。將其中之 0.8 g (4·4 mmol)溶於乙醇 1〇 ml，加入濃硫酸〇·〇 1 mi並加熱回流。8小時後，將餘去溶媒得到之殘餘物用乙酸乙酯2〇 ml萃取。用5%碳酸氫鈉水溶液（10 ml)及水（1〇 ml)洗淨後，將有機層乾燥，然後餾去 _ -27- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（25 ) 溶媒’得到（S)-苄氧基丙酸乙酯。將其溶於曱苯i〇 mi中，於冰冷攪拌下’加入乙氧化鈉〇·33 g (1.1當量）並於室溫攪拌14小時。使用利用光學活性管柱之氣相層析確認外消旋化反應終了。之後，將反應液滴入丨〇%檸檬酸水溶液（i 〇 ml)中，將有機層用1 〇 mi水洗淨及乾燥後，藉由餾去溶媒’得到0.74 g標題化合物。】h-NMR與實施例I 一致。該外消旋體可以做為實施例1〜4中之酯不對稱水解之原料。比較例1 . 氣某丙酸乙醋_ 於30C將卞乳基演（9_86g)及60%氫化鈉（2,11 g)溶於二曱基甲醯胺（DMF)及四氫呋喃（THF)之混合溶液（50 m卜體積比3: 2)中。在該溶液中加入（R)_乳酸曱酯（5 〇 g，99〇/。 ee)。在該溫度授拌3 〇分鐘。繼而在室溫授拌3 〇分鐘，然後於50C攪拌30分鐘。在反應液中加入水及異丙醚，將有機層用水洗淨後’用無水硫酸鎂乾燥，餾去溶媒後，將得到之殘餘物付諸於矽凝膠管柱層析，得到為黃色油狀物質之標題化合物（8.87 g，92.1% ee)。 'H-NMR (CDC13) δ: 1.44 (3Η, d, J = 6.8 Hz), 3.75 (3H, s), 4.07 (1H, q, J = 6.9 Hz)5 4.45 (1H, d, J = H.7 Hz), 4.69 (1H, 山 J = 11.7 Hz), 7.22-7.37 (5H，m) 實施例6 : 二氟-2-(2-芊惫，雨氧早、於冰冷下，將氫氧化鉀（5.40 g)及碳酸鉀（3.33 g)懸浮於曱笨180 ml中。在該溶液中，加入以與實施例2同樣之方式得到之（R)-2-芊氧基-1-丙醇（4_〇 g)及2,3,4-三氟硝基笨 (4.13 g)之曱苯溶液（4〇 ml) ’然後在該溫度攪拌丨小時。在 -28 - A7

1311589 五、發明説明反應液 1个于# u胛胥機層用後，用無水硫酸鎂乾燥。餾去溶媒後，將得到所水洗淨諸於矽凝膠管柱層析，得到為黃色油狀物 ^餘物付 (7.55g)。《標碭化合物 lH-NMR (CDCI3) δ: 1.29 (3Η, d, J ^ 6.4 Hz), 3.93.4 〇3 〇 m), 4.53-4.65 (2H，m)，6.90·6.99 (1H，m)，7 23 7 “ (Μ 7.60-7.66 (1H, m) ( H，m)，實施例7 · (κ)·3ν4-二氣二！^-芊氣而氧華斧^ 於冰冷下’將第二丁氧化納（63 6 mg)懸浮於甲笨（〇 5以中。在該溶液中，加入以與實施例2同樣之方式得到ml) (R)-2-苄氧基-1-丙醇（loo mg)。繼而，於冰冷下，在續= 液中加入2,3,4-三氟硝基苯（1〇3 5 mg)之曱苯溶液⑺$加），並攪拌1小時。在反應液中加入水，用甲苯萃取。將有機層用水洗淨後，用無水硫酸鎂乾燥。餾去溶媒後，將得到之殘餘物付諸於矽膠管柱層析，得到為黃色油狀物質之標題化合物（161.2 mg)。又，光譜數據與在實施例6中得到^ 一致0 實施例8 : (E)-3,4-二顯羥墓丙氧其、苹脸於室溫，將實施例6得到之（r)_3,4_二氟_2-(2-芊氧丙氧基）硝基苯（1.0 g)溶於乙醇（10如）中，加入7 5〇/〇 pd_c 〇〇 g)，於氫氣空氣下，攪拌6小時。濾去pd_c後，將得到之遽液減壓濃縮’將得到之殘餘物付諸於矽凝膠管柱層析，得到為油狀物質之標題化合物（600 mg，99.0% ee)。 H-NMR (CDCI3) δ: 1.23 (3Η, d, 6.3 Hz), 3.81-4.89 (1H, -29- 1311589 五、發明説明（27 ) ^ 4.06-4.17 (2H, m), 6.37-6.44 (1H, m), 6.77-6.87 (1H, m) 實施例9 : 於室溫，將實施例6得到之（r)_3,4_二氟_2_(2_爷氧丙氧基）硝基苯（0.3 g)溶於甲苯（3 ml)中，加入1〇% pdC (9〇叫），於m：及氫氣空氣下，攪拌4小3寺。滤去^後，將，到之渡液減壓濃縮，然後將得到之殘餘物付諸於梦凝膠官柱層析’得到為油狀物質之標題化合物(i8i 〇 mg， 99·0% ee)。光譜數據與在實施例8中得到者一致。實^例1〇 : 基乙烯篡、胗美丛羥羞丙氳某1苯 #於1 〇〇 c，將以與實施例8同樣之方式得到之（尺)_3,4_二氟-2-(2羥基丙氧基）苯胺（1〇2 g)及乙氧基亞曱基丙二酸二乙酯（1.14 g)在無溶媒下攪拌丨小時。然後在微減壓下一面除去產生之乙醇，一面攪拌3〇分鐘。將反應混合物放冷後於減壓下濃縮，將得到之殘餘物付諸於矽凝膠管枉層析，得到為白色結晶之標題化合物（1 83g，99〇%ee)。

熔點：52-55°C H-NMR (270 MHz, CDC13) δ: 1.22-1.46 (m, 9Η), 3.55 (d, 1H, J - 4.5 Hz)} 3.88-4.43 (m, 7H), 6.75-7.08 (m, 2H), 8.48 (d, 1H, J = 14.5 Hz) Λ施例11 . 氧羰篡Λ烯某）胺某 2-(甲磺醯氡某丙基）氩1笑將以與實施例10同樣之方式得到之2,3_二氟_6_(2,2_二乙氧羰基乙烯基）胺基-[(R)_2-(羥基丙基）氧]苯3·00 g溶於it -30- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) !311589 五、發明説明（28 二氯乙烷30 m】，於冰冷攪拌於同溫度，錢拌下加入？ ’加^三乙胺㈣g，然後時並遽去不溶物。將漶液用】、2氣广呂。於室_2小用無水硫酸鎂乾燥。在乾燥之有：：：：稀釋及水洗後’ 攪拌30分鐘後，滹去 s中加入1·5 g矽凝膠，丙基驗中結晶後；取，減麼餾去溶媒，殘餘物從異 1.50 (3H，d，卜 7 Hz)，3 】’ m，M8 (3H，d，卜 7 Hz)，八 (3H，s)，3.98-4 firwAu 、 5.35(1H，m),6.79_7.14(2H，m)，84i(iHd6〇(6H，m)，4.95_ 實施例 12·· _ 急，,.5Hz) -S, -_2H.n 4- ?井-4-基）亞甲甚呙-___ 裝將實施例11得到之2,3-二氟冬(2,2_ 基-[(R)-2-(甲確醒氧基丙基）氧]笨3H)胺溶媒，將殘餘物用乙酸乙料取，將萃取“水沖洗= 無水硫酸難燥。減㈣去溶媒，將得到之殘 ^ 矽凝膠管柱層析。得到2.14g之標題化合物。仃诸於 'H-NMR (CDC13) δ: 1.22-1.42 (9Η, m), 3.90-4.44 (7H 6.74-6.88 (2H, m), 7.78 (1H, s) ，m)，實施例 13 : 咬并「1，2,3-心〗丨1，41苯并哼畊-^ 將實施例12得到之（S)-(7,8-二氟-3-甲基_3,4_: ^ [M]苯并噚畊·4_基)亞曱基丙二酸二乙酯(2 g)與無：乙: (2 ml)混合，並於14〇。〇加入47%三氟化领.四氣卩夫。南_ -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1311589 A7 B7 五、發明説明（29 ) 物 (0 8 ml)，並在該溫度加熱攪拌i小時。將生成之低沸點物餾去後，將反應液冷卻至室溫。在反應混合物中加入丙_ (10 ml)並在該溫度攪拌3〇分鐘。收集析出之結晶及用丙軻洗淨’得到標題化合物1.5 5 g。實施例 14 : Q~sH-)-9-氟0_(4_ 甲篡-卜哌畊基二氫_7]»-|?比0^並11^1_-(161「1,41茉#哼畊-6-羧酸（；^ 旋歐氟沙荩）將實施例13得到之（3S)-9，l〇-二氟_3_甲基_7_氧基_2,3_二氫-7H-吡啶并[l，2,3-de][l，4]苯并噚畊羧酸硼二氟化物錯合體（310 mg)溶於二甲基亞砜（6爪丨），加入三乙胺（〇32如) 及N-甲基哌畊（0.13 ml)，於室溫攪拌17小時後，減壓乾固。將殘留物用乙醚洗淨後，溶於含三乙胺（〇 5 ml)之95% 乙醇（20 ml)並加熱回流8小時。冷後減壓乾固，將得到之殘留物溶於稀鹽酸(5〇/0)中’與氣仿一起振搖及分層，將水層用氫氧化鈉（1莫耳/公升）調至pH u，繼而用鹽酸（ι莫耳/ 公升）調至pH 7.4。將其用氣仿（5〇mlx 3)萃取，用硫酸納乾燥後餾去氣仿，將得到之粉末從乙醇_乙醚中再結晶，知到為透明微針晶之標題化合物12〇 mg。熔點：225〜227°C (分解）元素分析：C18H2〇FN3〇4 · 1/2H20 計算值：C，58.37 ; H，5.72 ; N，11.35 實測值：C，58.17 ; H，5.58 ; N，11.27 實施例15 -32-

1311589 A7 I-------------^__— 五、發明説明（3D ) " ' -- (1) 菌體碎裂（法式壓榨機）將ATCC 14579之坂口培養菌體（培養基量1200 ml)懸浮於2〇福磷酸緩衝液80 ml (pH 7 〇，含丨mM咖八，DTT) 中’用法式壓榨機施以15麵psi之壓力，將菌體碎裂。 g將碎裂之菌體藉由用離心機(10,000 G，30分鐘)離心，得到菌體萃取液85.0 ml (總活性123單位’比活性〇〇32 位/毫克）。 (2) 陰離子層析將菌體萃取液用下述陰離子層析純化條件溶析。對於各溶析份測定2-节氧丙酸乙醋之水解活性，得到活性溶析份 206 ml (總活性88單位，比活性〇〇58單位/毫克活性產率 72%) 〇陰離子層析純化條件載體：Source Q (Pharmacia Biotech) 400 ml

管枉：50 mm x 200 mmH 移動相：A液：20 mM磷酸緩衝液pH 7_0 (含1 mM EDTA， DTT) 900 m卜 B液：A液 + 1.0 M NaCl 900 ml A— B線性梯度檢出：280 nm，溫度：4t：每15分鐘取溶析份，並實施2-芊氧基丙酸乙酯之水解。 (3)疏水層析在陰離子交換管柱活性溶析份206 ml中，以少量逐次添加54.4 g (相當於2.0 M)硫酸銨，攪拌3〇分鐘後，生成之沉 -33- ^紙張尺度適财關家料(CNS) A4規格(210X297公釐) ~~— 1311589 A7 ------- -B7 五、發明説^ [)— " --- 澱藉由離以1G，_G，3Gmin)除去。將得到之上清液在下切水層析純化條件下進行分溶，對於各溶析份測定2_节乳丙酸乙醋之水解活性，發現活性溶析份（251_则㈣將分取之活性溶析份用限外過濾脫鹽濃縮，得到活性本體溶析份1.0 ml (總活性16.8單位，比活性3 23單位/毫克，活性產率19%)。疏水層析純化條件載體· Resource ETH (Pharmacia Biotech) 1〇〇 ml

管柱：45 mm x 60 mmH 移動相· A液.20 mM碟酸缓衝液pH 7.0 (含i mM EDTA， DTT) 600 ml 〇 B液：A液+ 2.0 M硫酸銨600 ml A— B線性梯度檢出：280 nm ,，溫度：4°c 每7分鐘取溶析份’並實施2-苄氧基丙酸乙酯之水解。 (4)陰離子層析（Mono Q) 將疏水層析活性溶析份1 .〇 ml用下述陰離子層析（M〇n〇 Q) 溶析。發現活性溶析份（23-25 min)。將分取之活性溶析份用限外過濾脫鹽濃縮，得到活性本體溶析份1·〇 ml (總活性5.9單位，比活性4.54單位/毫克，活性產率35%)。該活性體之分子量為約38,000 (SDS PAGE)及约40,000(凝膠過濾、）。陰離子層析（Mono Q)純化條件官柱：陰離子交換管枉 Mono Q 1 ml (Pharmacia Biotech); -34- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A7 B7 1311589 五、發明説明（32 ) 移動相：A液：20 mM磷酸缓衝液（pH 7.0); B液：A液 + 1.0 M NaCl ; 流速：1.0 ml/min ; 檢出：280 nm，溫度：室溫每1分鐘取溶析份，並實施2-芊氧基丙酸乙酯之水解。表ATCC 14579單離純化結果萃取液 3893 123 0.032 100 陰離子層析 1508 88 0.058 72 疏水層析 5.2 16.8 3.23 14 Mono Q 1.3 5.9 4.54 4.8 蛋白量總活性比活性活性產率 (mg) (單位） (單位/毫克） (%) 使用所得來自微生物之純化酵素，以與實施例1，2，3 及4同樣之方法，進行酯不對稱水解反應時，可效率良好地得到光學純度為約99%以上之（R)-2-苄氧基丙酸乙酯。產業上之利用性依照本發明之方法，可用便宜且短之步驟得到光學純度高之光學活性丙氧基苯胺衍生物（V)，藉此利於在工業上獲得可作為抗菌劑之高光學純度左旋歐氟沙星（1 e v 〇 fl ο X a c i η)。 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐)

Claims

Α8 Β8 C8 131 158S 091104267號專利申請案中文申請專利範圍替年取申請專利範圍 1. 一種式（I-a)表示之光學活性化合物之製造方法 (I-a) Me CO，R (式中R1及R2如下述），其特徵在於其係自對式（I)表示之化合物·· OR2 T (I) Me’^CO〆 (式中R1為碳數1至6之烷基，以及R2為羥基之保護基）以蠟狀芽孢桿菌 ATCC14579 (Bacillus cereus ATCC14579)或薰衣草狀微桿菌 IF014471 (Microbacterium laevaniformas IF014471)之培養液、該微生物菌體、該微生物菌體處理物、或自該微生物單離而得之具酯水解能力之酵素處理後之混合物中，單離採取得到式（I-a)表示之化合物。 2. 如申請專利範圍第1項之製造方法，其中R2為可具有取代基之芳炫基。 3. 如申請專利範圍第1項之製造方法，其中R2為苄基。 4. 如申請專利範圍第1項之製造方法，其中R1為乙基。 5. —種式（V)表示之化合物之製造方法：

(V) (式中X1及X2如下述），其特徵在於其係自對式（I)表示之化合物： 77042-980223.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1311589 歆 C8 D8 六、申請專利範圍 OR2 Ϊ 0) (式中R1為碳數1至6之烷基，以及R2為羥基之保護基）以蠟狀芽孢桿菌 ATCC14579 (Bacillus cereus ATCC14579)或薰衣草狀微桿菌 IF014471 (Microbacterium laevaniformas IF014471)之培養液、該微生物菌體、該微生物菌體處理物、或自該微生物單離而得之具酯水解能力之酵素處理後之混合液中，單離採取以得到式（I-a)表示之光學活性化合物： OR2 I (I-a) (式中R1及R2與上述者相同），將該化合物（I-a)在非醇系溶媒中，於一級醇類存在下，用硼氫化金屬化合物處理，得到式 (II)表示之化合物： OR2 Λ ⑼ Me’ CH^H (式中R2與上述者相同），將該化合物（II)與式（III)表示之化合物：

(式中X1、X2及X3各獨立表示鹵素原子）於驗存在下處理，得到式（IV)表示之化合物： 77042-980223.doc - 2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1311589 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍

N〇2 (IV) (式中，R2、X1及X2與上述者相同），然後同時進行該化合物 (IV)之硝基變換為胺基以及R2之脫離，而得到式（V)表示之化合物。 6.如申請專利範圍第5項之製造方法，其中係將式（IV)表示之化合物：

(式中X1及X2各獨立表示鹵素原子，以及R2表示羥基之保護基) 之硝基變換為胺基以及R2之脫離同時在還原條件下進行，得到式（V)表示之化合物：

(式中X1及X2與上述者相同）。 7. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中該非醇系溶媒為芳香族烴。 8. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中該一級醇類為曱醇。本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A BCD 1311589 申請專利範園 9. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中該硼氫化金屬化合物為棚氫化納。 10. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中R2為可具有取代基之芳院基。 11. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中R2為苄基。 12. —種式（XII)表示之化合物之製造方法：

COOH H3C· 其特徵在於其係自對式（I)表示之化合物 OR' (I) (式中R1為碳數1至6之烷基，以及R2為羥基之保護基）以蠟狀芽孢桿菌 ATCC14579 (Bacillus cereus ATCC14579)或薰衣草狀微桿菌 IF014471 (Microbacterium laevaniformas IF014471)之培養液、該微生物菌體、該微生物菌體處理物、或自該微生物單離而得之具酯水解能力之酵素處理後之混合液中，單離採取以得到式（I-a)表示之光學活性化合物： Me CO〆 (I-a) (式中R1及R2與上述者相同），將該化合物在非醇系溶媒中，於一級醇類存在下，用硼氫化金屬化合物處理，得到式（II)表示之化合物： -4- 77042-980223.doc 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐) 8 8 8 8 A BCD 1311589 申請專利範圍 Me

CH2OH (Π) (式中R2與上述者相同），將該化合物（II)與式（III)表示之化合物： X- X2'

N〇2 (ΠΙ) (式中X1、X2及X3各獨立表示鹵素原子）於驗存在下處理，得到式（IV)表示之化合物：

(式中，R2、X1及X2與上述者相同），然後同時進行該化合物 (IV)之硝基變換為胺基以及R2之脫離，得到式（V)表示之化合物：

(V) (式中，X1及X2與上述者相同），使該化合物（V)與式（VI)表示之化合物： 77042-980223.doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1311589 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

OOOR* COOR4 (VI) (式中，Y為碳數1〜6之烷氧基、鹵素原子或二（¢^-(36烷基）胺基，以及R3及R4各獨立為碳數1〜6之烷基）反應，得到式（VII) 表示之化合物：

(式中，X1、X2、R3及R4與上述者相同），使該化合物（VII)與磺醯化合物反應，得到式（VIII)表示之化合物：

(式中，R5為可有取代基之烷磺醯基或可具有取代基之芳磺醯基，以及X1、X2、R3及R4與上述者相同），將該化合物（VIII) 在鹼性條件下閉環，得到式（IX)表示之化合物：

(式中，X1、X2、R3及R4與上述者相同），將該化合物（IX)於硼化合物存在下或未存在下加熱，得到式（X)表示之化合物： 77042-980223.doc -6- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 8 8 8 8 A BCD 1311589 六、申請專利範園

(式中，R6表示具有碳數1~6之烷基或BZ2 (其中，Z為鹵素原子、烷氧基或(：2-(：7烷羰氧基），以及X1及X2與上述者同），使該化合物（X)與4-曱基六氫吡畊反應，得到式（XI)表示之化合物：

(式中，X1及R6與上述者相同），繼而進行水解以得到上述式 (XII)表示之化合物。 13.如申請專利範圍第12項之製造方法，其特徵為將式（IV)表示之化合物：

(式中X1及X2各獨立表示鹵素原子，以及R2表示羥基之保護基) 之硝基變換為胺基以及R2之脫離同時在還原條件下進行，得到式（V)表示之化合物： 77042-980223.doc - 7 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐) I311589

申請專利範園 Αδ Β8 C8 D8

(式中x1及x2與上述者相同）。 14·如申請專利ϋ圍第12項之製造方法，其中該非醇系溶媒為芳香族烴。 15.如申請專利範圍第12項之製造方法，其中該一級醇類為甲酵。 16·如申請專利範圍第12項之製造方法，其中該硼氫化金屬化合物為蝴氮化納 17.如申請專利範圍第12項之製造方法，其中R2為可具有取代基之芳烷基。如申請專利範圍第12項之製造方法，其中R2為节基。如申請專利範圍第12項之製造方法’其中χ1為氟原子。 77042-980223. doc 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公羡)