ES2329554T3 - Procesos para producir derivados de propoxianilina opticamente activos. - Google Patents
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Abstract
Un proceso para producir un compuesto ópticamente activo representado por la siguiente fórmula (I-a): **(Ver fórmula)** en la que R1 representa un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y R2 representa un grupo bencilo, que comprende: tratar un compuesto, que está representado por la siguiente fórmula (I): **(Ver fórmula)** en la que R1 y R2 tienen los mismos significados definidos anteriormente con (i) una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans o IFO 14471, (ii) un medio cultivado de dicho microorganismo definido en el punto (i), que contiene una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471, (iii) células de dicho organismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471 o (iv) un producto procesado de células de dicho microorganismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471; y aislar y recoger dicho compuesto ópticamente activo (I-a)
Description
Procesos para producir derivados de
propoxianilina ópticamente activos.
Esta invención se refiere a un proceso para
producir derivados de propoxianilina ópticamente activos útiles en
la producción de compuestos antimicrobianos y también a un proceso
para producir intermedios de los mismos.
El ácido
S-(-)-9-fluoro-3-metil-10-(4-metil-1-piperazinil)-7-oxo-2,3-dihidro-7H-pirido[1,2,3-de][1,4]benzoxazina-6-carboxílico
(levofloxacina, LVFX; documento JP 62-252790) se
conoce como un agente antibacteriano sintético excelente.
Hay un compuesto que se sabe que es útil como
intermedio para producir este agente antibacteriano sintético, que
se representa mediante la siguiente fórmula (V):
en la que cada X^{1} y X^{2}
representa independientemente un átomo de halógeno (en lo sucesivo
en este documento denominado "compuesto (V)"; marcas
simbólicas similares se aplicarán a otras fórmulas). Se sabe que
este compuesto puede producirse mediante el siguiente proceso
(documentos JP 1-250369 A y JP 2-723
A).
Es decir, el compuesto (V) puede sintetizarse
reduciendo el compuesto (A), preparado de antemano protegiendo el
grupo hidroxilo de un éster de ácido láctico disponible en el
mercado con un grupo tetrahidropiranilo, con hidruro de litio y
aluminio para obtener el compuesto (B), tratando el compuesto (B) y
el compuesto (C) en presencia de hidruro sódico para obtener el
compuesto (D), y después retirando el grupo tetrahidropiranilo,
seguido de reducción del grupo nitro.
Los ésteres de ácido láctico que sirven como
materia prima del compuesto (A) están disponibles en el mercado a
bajo coste, pero la pureza óptica de dichos ésteres está limitada al
97%ee como máximo, de manera que no son adecuados como materia
prima para el compuesto de levofloxacina requerida para satisfacer
una alta pureza de al menos el 99%ee.
Para la producción del compuesto (B), se ha
desarrollado también otro proceso sin usar ningún éster de ácido
láctico (documento JP 2-265701 A). Por otro lado,
una gran cantidad de hidruro de litio y aluminio es difícil de
manipular para reducción, debido a su problema de seguridad. El
proceso de producción mencionado anteriormente requiere también
relativamente muchas etapas. Adicionalmente, se ha informado de que
la racemización innecesaria podría estar provocada por la retirada
del grupo tetrahidropiranilo del compuesto (D) (S. Chladek, Chem.
Ind. (Londres), 1719 (1964)).
Debido a los problemas anteriores, se han
realizado hasta ahora diversas investigaciones usando un compuesto
(éster del ácido
(R)-2-benciloxipropiónico) cuya
estructura es parecida a la del compuesto (A) excepto que el grupo
tetrahidropiranilo se sustituye con un grupo bencilo. Sin embargo,
ha sido imposible obtener ningún compuesto distinto de aquellos que
tienen una mala pureza óptica limitada al 97%ee como máximo. Se
requiere que la levofloxacina como fármaco tenga una pureza óptica
mucho mayor de al menos el 99%ee, aunque es extremadamente difícil
mejorar la pureza óptica en etapas intermedias. Los ésteres del
ácido (R)-2-benciloxipropiónico con
un 97%ee o menor no pueden utilizarse como materiales de partida
para levofloxacina.
El documento JP 63-063 397 A
describe un método de producción de un derivado de ácido
alfa-hidroxicarboxílico ópticamente activo usando
una cepa bacteriana del género Corynebacterium con capacidad
para hidrolizar éster.
El documento JP 61-135 600 A
describe la resolución óptica del éster alquílico del ácido
2-(4-hidroxifenoxi)propiónico usando una
lipasa.
Por lo tanto, ha habido una demanda a largo
plazo para el desarrollo de un proceso que no esté afectado por
estos problemas.
Un objeto de la presente invención es
proporcionar un proceso económico y eficaz para la producción de un
derivado de propoxianilina ópticamente activo y levofloxacina útiles
como un agente antimicrobiano y también proporcionar procesos para
la producción de intermedios para el proceso anterior.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar una enzima que tenga capacidad para hidrolizar ésteres
asimétricos y que se obtiene alterando las células de un
microorganismo, que tiene capacidad para hidrolizar ésteres
asimétricos, a alta presión y después purificar las células
alteradas de esta manera sucesivamente por cromatografía de anión
fuerte, cromatografía hidrófoba y cromatografía de anión fuerte.
Como resultado de su estudio extensivo, los
presentes inventores han encontrado un método caracterizado por
tratar un derivado racémico de ácido láctico con una enzima que
tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, y después
hidrolizar específicamente el resto éster de un isómero que existe
como el par de este derivado racémico, y se ha encontrado también
que cuando el compuesto obtenido por esta hidrólisis se usa como un
intermedio, es posible producir un derivado de propoxianilina
ópticamente activo a menor coste, así como a través de menos etapas
que cualquier otro de los métodos. Aparte, los presentes inventores
han encontrado un método para reciclar un isómero óptico, que surge
como un subproducto no deseado en el transcurso de una reacción de
hidrolización de éster asimétrico, en un sustrato por racemización
de dicho isómero óptico. Basándose en estos hallazgos, los
presentes inventores han descubierto que un compuesto de
levofloxacina que tiene una alta pureza óptica puede producirse
eficazmente. De esta manera, se consiguió esta invención.
Específicamente, la presente invención
proporciona un proceso para producir un compuesto ópticamente activo
representado por la siguiente fórmula (I-a):
en la que R^{1} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y R^{2}
representa un grupo bencilo tal como un grupo protector de
hidroxilo que
comprende:
tratar un compuesto que está representado por la
siguiente fórmula (I):
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente, con una enzima que
tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, un medio
cultivado de microorganismo que tiene capacidad para hidrolizar
ésteres asimétricos, células del microorganismo o un producto
procesado de las células del microorganismo, como se define en la
reivindicación 1, para obtener una mezcla;
y
aislar y recoger el compuesto
(I-a) ópticamente activo de la mezcla.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención proporciona también un
proceso para producir un compuesto representado por la siguiente
fórmula (V):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que cada uno de X^{1} y
X^{2} representa independientemente un átomo de halógeno, que
comprende:
tratar un compuesto, que está representado por
la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente, con una enzima que
tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, un medio
cultivado de un microorganismo que tiene capacidad para hidrolizar
ésteres asimétricos, células del microorganismo o un producto
procesado de las células del microorganismo, como se define
adicionalmente en la reivindicación 4, para obtener una mezcla y
aislar, recoger y obtener a partir de la mezcla un compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula
(I-a):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
tratar el compuesto (I-a) con un
compuesto de borohidruro metálico en presencia de un alcohol
primario en un disolvente no alcohólico para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2} tiene el mismo
significado definido
anteriormente;
tratar el compuesto (II) y un compuesto, que
está representado por la siguiente fórmula (III):
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente, y X^{3}
representa independientemente un átomo de halógeno, en presencia de
una base para obtener un compuesto ópticamente activo representado
por la siguiente fórmula
(IV):
en la que R^{3}, X^{1} y
X^{2} tienen los mismos significados definidos anteriormente;
y
realizar la conversión de un grupo nitro a un
grupo amino y retirar R^{2} al mismo tiempo en el compuesto
(IV).
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención proporciona también un
proceso para producir un compuesto representado por la siguiente
fórmula (XII):
en la que X^{1} tiene el mismo
significado definido anteriormente, que
comprende:
tratar un compuesto, que está representado por
la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente, con una enzima que
tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, un medio
cultivado de un microorganismo que tiene capacidad para hidrolizar
ésteres asimétricos, células del microorganismo o un producto
procesado de las células del microorganismo, como se define
adicionalmente en la reivindicación 9, para obtener una mezcla y
aislar, recoger y obtener a partir de la mezcla un compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula
(I-a):
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
tratar el compuesto (I-a) con un
compuesto de borohidruro metálico en presencia de un alcohol
primario en un disolvente no alcohólico para obtener un compuesto
ópticamente activo representada por la siguiente fórmula (II):
en la que R^{2} tiene el mismo
significado definido
anteriormente;
tratar el compuesto (II) y un compuesto, que
está representado por la siguiente fórmula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1} y X^{2} y
X^{3} tienen los mismos significados definidos anteriormente, con
una base para obtener un compuesto ópticamente activo representado
por la siguiente fórmula
(IV):
en la que R^{2}, X^{1} y
X^{2} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
\vskip1.000000\baselineskip
Realizar la conversión de un grupo nitro en un
grupo amino y retirar R^{2} al mismo tiempo en el compuesto (IV)
para obtener un compuesto representado por la siguiente fórmula
(V):
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar el compuesto (V) con un
compuesto, que está representado por la siguiente fórmula (VI):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que Y representa un grupo
alcoxi que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un átomo de halógeno o
un grupo di(alquil
C_{1}-C_{6})amino y cada uno de R^{3} y
R^{4} representa independientemente un grupo alquilo que tiene de
1 a 6 átomos de carbono, para obtener un compuesto representado por
la siguiente fórmula
(VII):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1}, X^{2}, R^{3}
y R^{4} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar el compuesto (VII) con un
compuesto de sulfonilo para obtener un compuesto representado por
la siguiente fórmula (VIII):
\vskip1.000000\baselineskip
en la R^{5} representa un grupo
alquilsulfonilo sustituido o no sustituido o un grupo arilsulfonilo
o no sustituido, y X^{1}, X^{2}, R^{3} y R^{4} tienen los
mismos significados definidos
anteriormente;
someter el compuesto (VIII) a una reacción de
cierre de anillo en condiciones básicas para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (IX):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1}, X^{2}, R^{3}
y R^{4} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
calentar el compuesto (IX) en presencia o
ausencia de un compuesto de boro para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (X):
en la que R^{6} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono o BZ_{2} en la
que Z representa un átomo de halógeno, un grupo alcoxi
C_{1}-C_{6} o un grupo alquil
C_{2}-C_{7} carboniloxi, y X^{1} y X^{2}
tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar el compuesto (X) con
4-metilpiperazina para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (XI):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1} y R^{6} tienen
los mismos significados definidos anteriormente;
e
hidrolizar el compuesto (XI).
La presente invención proporciona también una
enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos y
que se obtiene alterando las células de un microorganismo, que tiene
capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos como se define en la
reivindicación 15, a alta presión y después purificando las células
alteradas de esta manera sucesivamente por cromatografía de anión
fuerte, cromatografía hidrófoba y cromatografía de anión fuerte.
\vskip1.000000\baselineskip
De acuerdo con la presente invención, el
compuesto (I) se trata con una enzima que tiene capacidad para
hidrolizar ésteres asimétricos, un medio cultivado de un
microorganismo que tiene capacidad para hidrolizar ésteres
asimétricos, células del microorganismo o un producto procesado de
las células del microorganismo, como se define en la reivindicación
1, para obtener una mezcla. A partir de la mezcla, el compuesto
(I-a) se aísla y se recoge. Este compuesto
(I-a) se trata después con un compuesto de
borohidruro metálico para obtener el compuesto (II). El compuesto
(II) y el compuesto (III) se tratan en presencia de una base para
obtener un compuesto (IV). Mediante una reacción de reducción, este
compuesto (IV) se convierte en el derivado de propoxianilina
ópticamente activo en una sola etapa. A partir del compuesto (IV),
se produce después el compuesto (XII) útil como agente
antibacteriano.
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Se muestra a continuación un diagrama de proceso
de reacción a partir del compuesto (I) hasta el compuesto (XII)
según la presente invención.
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\vskip1.000000\baselineskip
Se hará una descripción de los sustituyentes en
el esquema de reacción.
Cada uno de X^{1}, X^{2} y X^{3}
representa independientemente un átomo de halógeno. Como el átomo de
halógeno, se prefiere un átomo de flúor.
Cada uno de R^{1}, R^{3} y R^{4}
representa independientemente un grupo alquilo que puede ser lineal,
ramificado o cíclico. Su número de carbonos puede ser
preferiblemente de 1 a 6. Se prefiere en particularmente metilo,
etilo e isobutilo.
R^{2} representa un grupo protector de
hidroxilo. Los grupos alcoxicarbonilo (sustituidos) ilustrativos
son, grupos aralquiloxicarbonilo (sustituidos), grupos acilo
(sustituidos), grupos alquilo (sustituidos), grupos alquenilo
(sustituidos), grupos aralquilo (sustituidos) y grupos sililo
sustituidos con uno o más grupos alquilo y/o aralquilo (que pueden
ser iguales o diferentes) (Debe observarse que el término
"(sustituido)", como se usa en este documento, se refiere a
que un compuesto puede contener uno o más sustituyentes). Los
ejemplos específicos puede incluir grupos alcoxicarbonilo
(sustituidos) tales como
terc-butoxi-carbonilo y
2,2,2-tricloroetoxicarbonilo; grupos
aralquiloxicarbonilo (sustituidos) tales como benciloxicarbonilo,
parametoxibenciloxicarbonilo y paranitrobenciloxicarbonilo; grupos
acilo (sustituidos) tales como acetilo, metoxiacetilo,
trifluoroacetilo, cloroacetilo, pivaloílo, formilo y benzoílo;
grupos aralquilo (sustituidos) tales como
terc-butilo, alilo (propenilo), bencilo,
paranitrobencilo, parametoxibencilo, trifenilmetilo y fenetilo;
grupos alquenilo (sustituidos) y grupos aralquilo (sustituidos);
grupos éter tales como metoximetilo,
terc-butoximetilo, tetrahidropiranilo y
2,2,2-tricloroetoximetilo; y grupos sililo
(sustituidos) tales como trimetilsililo, isopropildimetilsililo,
terc-butildimetilsililo, tribencilsililo y
terc-butildifenilsililo. Entre los grupos
protectores ejemplificados anteriores, se prefiere como R^{2} un
grupo aralquilo (sustituido), siendo el más preferido un grupo
aralquilo (sustituido) con la estructura de bencilo. En la presente
invención, R^{2} es un grupo bencilo.
R^{5} representa un grupo alquilsulfonilo
(sustituido) o un grupo arilsulfonilo (sustituido), prefiriéndose
un alquilsulfonilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono o un grupo
bencenosulfonilo (sustituido). Entre estos, se prefieren
particularmente metanosulfonilo y
p-toluenosulfonilo.
R^{6} representa un grupo alquilo
C_{1}-C_{6} o un BZ_{2} en la que Z representa
un átomo de halógeno, un grupo alcoxi
C_{1}-C_{6} o un grupo alquilcarboniloxi
C_{2}-C_{7}. Los ejemplos del grupo alcoxi que
tiene de 1 a 6 átomos de carbono pueden incluir metoxi, etoxi,
isopropoxi y terc-butoxi. Los ejemplos del átomo
de halógeno pueden incluir aquellos ejemplificados anteriormente en
relación con X^{1}, X^{2} y X^{3}. Los ejemplos del grupo
alquil C_{2}-C_{7} carboniloxi pueden incluir
acetiloxi, propioniloxi y butililoxi. De estos, se prefiere
particularmente BF_{2} como R^{6}.
Y representa un grupo alcoxi que tiene de 1 a 6
átomos de carbono, un átomo de halógeno o un grupo di(alquil
C_{1}-C_{6})amino. Se prefieren los
grupos alcoxi que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, prefiriéndose
particularmente metoxi y etoxi.
En el diagrama de proceso de reacción descrito
anteriormente, se muestra el proceso de producción de uno solo de
los isómeros. El otro isómero puede sintetizarse también igualmente
con la condición de que se use un compuesto similar al compuesto
(I-a) excepto que su configuración es la inversa.
Adicionalmente, el uso del compuesto (I) hace posible obtener el
compuesto (V) en su forma racémica.
La presente invención se describirá en lo
sucesivo en este documento etapa a etapa en detalle.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
(a)
La etapa (a) es una etapa en la que el compuesto
(I) se trata con una enzima que tiene capacidad para hidrolizar
ésteres asimétricos, un medio cultivado de un microorganismo que
tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, células del
microorganismo o un producto procesado de las células del
microorganismo, como se define adicionalmente en la reivindicación
1, para obtener el compuesto (I-a).
En primer lugar, el compuesto (I) se suspende en
un tampón apropiado, seguido de la adicción de la enzima, el medio
cultivado de los microorganismos, las células del microorganismo o
el producto procesado de las células de los microorganismos. La
mezcla resultante se agita para realizar el tratamiento. No se
impone una limitación particular sobre la enzima empleada en la
reacción, siempre y cuando tenga capacidad para hidrolizar ésteres
asimétricos. Son ilustrativas de la enzima preparaciones de enzima
comerciales derivadas de microorganismos, animales o plantas.
Como la enzima para usar en la presente
invención se prefiere lipasa. La lipasa puede estar en una forma
inmovilizada.
Los microorganismos son bacterias
Bacillus y bacterias Microbacterium seleccionadas
entre Bacillus cereus (ATCC 14579) y Microbacterium
laevaniformans (IFO 14471).
Es ilustrativo del producto procesado de las
células del microorganismo, por otro lado, una mezcla de células
microbianas alteradas y los productos purificados de las mismas.
La presente invención, se prefiere el uso de
estos microorganismos, especialmente enzimas purificadas a partir
de células de bacterias desde el punto de vista de la eficacia de
reacción. Se prefieren particularmente como tales enzimas
purificadas y aquellas obtenidas alterando células a alta presión y
realizando la purificación sucesivamente por cromatografía de anión
fuerte, cromatografía hidrófoba y cromatografía de anión fuerte.
Estas enzimas purificadas pueden ser también
aquellas obtenidas tratando las células como se ha descrito
anteriormente y pueden ser también aquellas producidas en otros
hospedadores tales como Escherichia coli por tecnología de
ADN recombinante. Para obtener una enzima por tecnología de ADN
recombinante, puede mencionarse el siguiente procedimiento a modo
de ejemplo. En primer lugar, la enzima purificada descrita
anteriormente se purifica adicionalmente por cromatografía en fase
inversa y se determina la secuencia de aminoácidos de su proteína.
Basándose en la secuencia de aminoácidos, se prepara una sonda, y a
partir de los fragmentos de ADN de las células, se clona un ADN que
codifica el centro activo de una hidrolasa asimétrica. El ADN se
amplifica después por PCR para preparar un plásmido recombinante.
Este plásmido recombinante se introduce en Escherichia coli
o similares. El Escherichia coli o similares se cultivan para
obtener la enzima diana.
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Mediante el tratamiento descrito anteriormente,
puede aislarse de la mezcla uno de los isómeros ópticos del
siguiente compuesto (I):
\vskip1.000000\baselineskip
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en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente que se hidroliza
selectivamente para formar el siguiente compuesto
(I-b):
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\newpage
en la que R^{2} tiene el mismo
significado definido anteriormente y el siguiente compuesto no
reaccionado
(I-a):
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente. Se describe
específicamente el compuesto (I-a), que puede
aislarse y recogerse añadiendo un disolvente orgánico tal como
acetato de etilo o cloroformo a la mezcla y después realizando un
tratamiento tal como agitación y separación. Cabe destacar que la
enzima, las células o similares empleados en el tratamiento pueden
retirarse preferiblemente por filtración o similar antes de la
extracción del compuesto
(I-a).
La temperatura de tratamiento de cada una de
estas etapas de hidrólisis y aislamientos generalmente puede estar
en un intervalo de 5ºC a 60ºC, prefiriéndose un intervalo de 20ºC a
40ºC. El pH de cada solución de tratamiento puede estar en un
intervalo de 4 a 9, prefiriéndose un intervalo de 6 a 8. Cada tiempo
de tratamiento puede estar en un intervalo de 1 hora a 7 días,
prefiriéndose un intervalo de 1 hora a 30 horas. Cada tratamiento
se realiza generalmente mientras que se controla la concentración
del compuesto (I) en la solución del tratamiento generalmente
dentro de un intervalo del 0,1% al 10% preferiblemente dentro de un
intervalo 0,5 al 5% del peso. No se impone una limitación
particular sobre la cantidad de la enzima, el medio cultivado del
microorganismo, las células del microorganismo o el producto
procesado de las células del microorganismo a usar, aunque es
adecuado usar la enzima, el medio cultivado del microorganismo, las
células del microorganismo o el producto procesado de las células
del microorganismo o una proporción en peso de 0,05 veces a 0,5
veces en términos de peso seco respecto al compuesto (I).
Por otro lado, el compuesto
(I-b) separado de la mezcla de reacción puede
reciclarse sometiéndolo a una reacción de hidrolización de ésteres
con asimétricos posterior a su racemización después de su
esterificación.
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Etapa
(b)
La etapa (b) es una etapa en la que el compuesto
(I-a) se trata con un compuesto de borohidruro
metálico en presencia de un alcohol en un disolvente no alcohólico
para obtener el compuesto (II).
Son ilustrativos del compuesto de borohidruro
metálico, borohidruro sódico, borohidruro de litio, borohidruro de
calcio, borohidruro potásico, borohidruro de cinc, borohidruro de
magnesio y cianoborohidruro sódico. De estos, se prefiere el
borohidruro sódico. La cantidad de compuesto de borohidruro metálico
a usar puede estar en un intervalo de 1 a 5 veces molares,
preferiblemente de 1,1 a 2 veces molares tanto como el compuesto
(I-a).
Son ilustrativos del disolvente disolventes de
tipo hidrocarburo tales como n-hexano,
n-pentano, ciclohexano y ciclopentano; disolventes
de hidrocarburo aromático tales como benceno, tolueno y xileno;
disolventes de éter tales como éter dietílico, éter diisopropílico
(IPE), metil terc-butil éter (MTBE),
tetrahidrofurano (THF), dimetoxietano y
1,4-dioxano; y disolventes de hidrocarburo
halogenados tales como cloroformo, cloruro de metileno y
1,2-dicloroetano (EDC). Además, pueden mencionarse
también agua, ésteres de ácido acético y similares. Estos
disolventes pueden usarse en solitario o en combinación. Entre estos
disolventes, se prefieren disolventes de hidrocarburo aromático
tales como tolueno y xileno.
No se impone una limitación particular sobre el
alcohol primario, aunque se prefiere metanol. La cantidad de
alcohol primario a usar puede estar en un intervalo de 3 a 15 veces
molares, preferiblemente de 4 a 8 veces molares o así respecto al
compuesto (I-a).
La temperatura de reacción puede diferir
dependiendo del disolvente a usar, aunque puede variar de -78ºC a
la temperatura de ebullición del disolvente, preferiblemente de 10ºC
a la temperatura de ebullición del disolvente. El tiempo de
reacción puede estar en un intervalo de 1 a 24 horas,
preferiblemente de 2 a 16 horas.
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Etapa
(c)
La etapa (c) es una etapa en la que el compuesto
(III) se obtiene tratando el compuesto (II) en presencia de una
base en un disolvente.
Pueden usarse diversos disolventes como el
disolvente. Son ilustrativos del disolvente disolventes de
hidrocarburo tales como n-hexano y
n-pentano; disolventes de hidrocarburo aromático
tales como benceno, tolueno y xileno; disolventes alcohólicos tales
como metanol, etanol, propanol, isopropanol (IPA),
n-butanol y terc-butanol;
disolventes de éter tales como éter dietílico, éter diisopropílico
(IPE), metil terc-butil éter (MTBE),
tetrahidrofurano (THF), dimetoxietano y
1,4-dioxano; disolventes de amida tales como
N,N-dimetilformamida (DMF) y
N,N-dimetilacetamida (DMAc); y disolventes de
hidrocarburo halogenado tales como cloroformo, cloruro de metileno y
1,2-dicloroetano (EDC). Además, pueden mencionarse
también agua, acetonitrilo, ésteres de ácido acético, acetona y
similares. Estos disolventes pueden usarse en solitario o en
combinación. Entre estos disolventes, se prefieren los disolventes
de hidrocarburo aromático tales como tolueno y xileno.
La temperatura a dar reacción puede diferir
dependiendo de la base y el disolvente a usar, que puede variar de
-78ºC a la temperatura de ebullición del disolvente, preferiblemente
de -10ºC a la temperatura de ebullición del disolvente.
La base puede ser orgánica o inorgánica. Los
ejemplos utilizables de la base pueden incluir los hidróxidos,
carbonatos, hidrogenocarbonatos, alcóxidos y similares de metales
alcalinos o metales alcalinotérreos, por ejemplo, sodio, potasio,
litio, magnesio y calcio; hidruros metálicos tales como hidruro
sódico, hidruro potásico e hidruro de litio; reactivos de
alquillitio tales como n-butillitio, metillitio y
diisopropilamiduro de litio; aminas terciarias tales como
trietilamina y N,N-diisopropiletilamina; y
adicionalmente, compuestos heterocíclicos tales como
1,8-diazobiciclo[5,4,0]undec-7-eno
(DBU), 1,8-diazobiciclo
[4,3,0]non-5-eno (DBN),
dimetilanilina y N-metilmorfolina. Para acelerar la
reacción, la reacción en algunos casos puede realizarse en presencia
de una sal de amonio cuaternaria tal como bromuro de
tetrabutilamonio o cloruro de benciltrietilamonio; un yoduro de
metal alcalino o de metal alcalinotérreo, tal como yoduro potásico o
yoduro sódico o un éter corona. De estas bases, se prefieren
carbonatos de metal alcalino o metal alcalinotérreo tales como
carbonato potásico; hidróxidos de metal alcalino o de metal
alcalinotérreo, tales como hidróxido potásico y alcóxidos de metal
alcalino tales como terc-butoxi sodio y
terc-butoxi potasio. Adicionalmente, un carbonato de
metal alcalino o de metal alcalinotérreo, tal como carbonato
potásico y un hidróxido de metal alcalino o metal alcalinotérreo,
tal como hidróxido potásico, pueden usarse también en combinación.
La cantidad de la base a usar puede estar en un intervalo del 0,1
a15 veces molares, preferiblemente de 1 a 5 veces molares
aproximadamente respecto al número molar del compuesto (III).
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Etapa
(d)
La etapa (d) es una etapa en la que el compuesto
(V) se obtiene realizando la conversión de un grupo nitro en un
grupo amino y la retirada de R^{2} al mismo tiempo en el compuesto
(IV) mediante una reacción de reducción.
La reacción de reducción puede efectuarse por
hidrogenación convencional. Por ejemplo, puede mencionarse la
hidrogenación catalítica en presencia de un catalizador. Son
ilustrativos de un catalizador que puede utilizarse en este proceso
los catalizadores que se emplean habitualmente. Entre dichos
catalizadores metálicos, se prefieren paladio sobre carbono, níquel
Raney y cobalto Raney.
No se impone una limitación particular sobre el
disolvente siempre y cuando no inhiba la reacción. Los ejemplos del
disolvente pueden incluir disolventes de hidrocarburo tales como
n-hexano, n-pentano, benceno,
tolueno y xileno; y disolventes alcohólicos tales como metanol,
etanol, propanol, isopropanol (IPA), n-butanol y
terc-butanol. Son disolventes de éter ilustrativos
éter dietílico, éter diisopropílico (IPE), metil
terc-butil éter (MTBE), tetrahidrofurano (THF),
dimetoxietano y 1,4-dioxano. Son disolventes de
amida ilustrativos N,N-dimetilformamida (DMF) y
N,N-dimetilacetamida (DMAc). Son disolventes
hidrogenados ilustrativos cloroformo, cloruro de metileno y
1,2-dicloroetano (EDC). Además, pueden mencionarse
también agua, acetonitrilo, ésteres de ácido acético, acetona y
similares. Estos disolventes pueden usarse en solitario o en
combinación. Entre estos disolventes, se prefieren disolventes
alcohólicos tales como metanol, etanol, propanol e isopropanol
(IPA); disolventes de hidrocarburo aromático tales como tolueno y
xileno; y disolventes mixtos de estos disolventes y agua.
Como una fuente de hidrógeno, puede usarse
también formiato de amonio en lugar de hidrógeno gaseoso. La
cantidad de formiato de amonio puede estar en un intervalo de 1 a
15 veces molares, preferiblemente 2 a 5 veces molares o así
respecto al número molar del compuesto (IV).
La temperatura de reacción puede diferir
dependiendo de la base y el disolvente a usar, aunque puede variar
de -78ºC a la temperatura de ebullición del disolvente,
preferiblemente de temperatura ambiente a 80ºC. El tiempo de
reacción puede estar en un intervalo de 1 a 24 horas,
preferiblemente en un intervalo de 2 a 16 horas.
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Etapa
(e)
La etapa (e) es una etapa en la que el compuesto
(VII) se obtiene haciendo reaccionar el compuesto (V) con el
compuesto de metilenmalonato de fórmula (VI).
Los ejemplos utilizables del compuesto de
metilenmalonato (VI) pueden incluir dietil etoximetilenmalonato y
dimetil metoximetilenmalonato.
Esta reacción puede realizarse, por ejemplo,
usando el compuesto de metilenmalonato (VI) preferiblemente en una
cantidad equimolar o mayor respecto al compuesto (V) y después
calentando de 100 a 180ºC o así con agitación de una manera sin
disolventes o calentándolo a reflujo en un disolvente apropiado.
No se impone una limitación particular sobre el
disolvente tras realizar la reacción anterior, siempre y cuando sea
inerte para la reacción. Son ilustrativos del disolvente
hidrocarburos tales como benceno, tolueno, xileno,
n-hexano, ciclohexano y n-pentano;
los disolventes alcohólicos inferiores tales como metanol, etanol,
propanoles y butanoles; éteres tales como éter dietílico,
tetrahidrofurano, dioxano y 1,2-dimetoxietano;
amidas tales como N,N-dimetilformamida,
N,N-dimetilacetamida y
N-metil-2-pirrolidona;
y disolventes polares apróticos tales como dimetilsulfóxido y
sulfolano. Cuando se usa un disolvente, la reacción puede realizarse
a una temperatura que no es mayor que el punto de ebullición del
disolvente.
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Etapa
(f)
La etapa (f) es una etapa en la que el compuesto
(VIII) se obtiene haciendo reaccionar un compuesto de sulfonilo con
el compuesto (VII).
Los ejemplos utilizables del compuesto de
sulfonilo pueden incluir cloruro de
p-toluenosulfonilo, cloruro de metanosulfonilo y
cloruro de clorometanosulfonilo.
La reacción puede realizarse preferiblemente en
presencia de una base. Son ilustrativas de la base aminas
terciarias tales como trietilamina, tributilamina y
N,N-diisopropiletilamina; dialquilanilinas tales
como N,N-dimetilanilina y
N,N-dietilanilina; aminas heterocíclicas tales como
piridina, N,N-dimetilaminopiridina y
N-metilmorfolina; y 1,8-diazobiciclo
[5,4,0]undeceno.
Cuando se usa un disolvente, se desea un
disolvente aprótico. Son ilustrativos del disolvente aprótico éteres
tales como éter dietílico, tetrahidrofurano, dioxano y
1,2-dimetoxietano; amidas tales como
N,N-dimetilformamida,
N,N-dimetilacetamida y
N-metil-2-pirrolidona;
e hidrocarburos clorados tales como diclorometano, cloroformo y
1,2-dicloroetano. La temperatura de reacción puede
ser preferiblemente de 0 a 100ºC o similar.
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Etapa
(g)
La etapa (g) es una etapa en la que el compuesto
(IX) se obtiene sometiendo el compuesto (VIII) a una reacción de
cierre de anillo en condiciones básicas.
Una base que puede utilizarse en la reacción de
cierre de anillo puede ser una base inorgánica o una base orgánica.
Los ejemplos de la base inorgánica pueden incluir hidróxidos
metálicos tales como hidróxido de litio, hidróxido sódico e
hidróxido potásico; carbonatos metálicos tales como carbonato de
litio, carbonato sódico y carbonato potásico; e hidrogenocarbonatos
metálicos tales como hidrogenocarbonato sódico e hidrogenocarbonato
potásico. Los ejemplos de la base orgánica, por otro lado, pueden
incluir alquilaminas terciarias tales como trietilamina,
tributilamina y N,N-diisopropiletilamina;
dialquilanilinas tales como N,N-dimetilanilina y
N,N-dietilanilina; aminas heterocíclicas tales como
piridina, N,N-dimetilaminopiridina y
N-metilmorfolina; alcóxidos metálicos tales como
metóxido sódico, etóxido sódico, isopropóxido sódico y
terc-butóxido potásico y, adicionalmente,
1,8-diazobiciclo[5,4,0]undeceno e
hidróxido N-benciltrimetilamonio.
Son ilustrativos de un disolvente de reacción
alcoholes inferiores tales como metanol, etanol, propanoles y
butanoles; éteres tales como éter dietílico, tetrahidrofurano,
dioxano 1,2-dimetoxietano, éter
2-metoxietílico y éter dietílico de etilenglicol;
amidas tales como N,N-dimetilformamida,
N,N-dimetilacetamida y
N-metil-2-pirrolidona;
y disolventes polares apróticos tales como dimetilsulfóxido y
sulfolano.
La reacción puede realizarse en una temperatura
en un intervalo de temperatura ambiente a 150ºC.
Es eficaz para la reacción de cierre del anillo
añadir, como un promotor de la reacción, yoduro potásico, yoduro
sódico, un éter corona o similares en una cantidad de 1/20
equivalentes o mayor respecto al compuesto de propoxibenceno.
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Etapa
(h)
La etapa (h) es una etapa en la que el compuesto
(X) se obtiene calentando el compuesto (IX) en presencia o ausencia
de un compuesto de boro.
Cuando la reacción se realiza en ausencia del
compuesto de boro, se obtiene un compuesto de fórmula (X) en la que
R^{6} es un grupo alquilo C_{1}-C_{6}. Cuando
la reacción se realiza en presencia del compuesto de boro, se
obtiene un compuesto de fórmula (X) en la que R^{6} es BZ_{2}.
Los ejemplos específicos del compuesto de boro pueden incluir el
complejo trifluoruro de boro-tetrahidrofurano y el
complejo de trifluoruro de boro-éter dietílico.
La reacción en ausencia del compuesto de boro
puede realizarse preferiblemente calentando el compuesto (IX) a de
100ºC a 200ºC en un disolvente tal como ácido polifosfórico. La
reacción en presencia del compuesto de boro, por otro lado, puede
realizarse preferiblemente en un disolvente tal como anhídrido
acético o anhídrido propiónico añadiendo un agente quelante tal
como el complejo de trifluoruro de
boro-tetrahidrofurano y el complejo de trifluoruro
de boro-éter dietílico y calentando el compuesto (IX) a de 150ºC a
200ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa
(i)
La etapa (i) es una etapa en la que el compuesto
(XI) se obtiene haciendo reaccionar el compuesto (X) con
4-metil-piperazina. Cuando R^{6}
en la fórmula (X) es un grupo alquilo
C_{1}-C_{6}, se prefiere hacer reaccionar
4-metilpiperazina después de hidrolizar el compuesto
(X) en su ácido carboxílico correspondiente en condiciones ácidas o
bási-
cas.
cas.
La reacción puede realizarse preferiblemente en
presencia de una base. Esta base puede ser una base inorgánica o
una base orgánica. Son ilustrativos de la base inorgánica los
carbonatos e hidrogenocarbonatos de metales alcalinos y metales
alcalinotérreos. Son ilustrativos de la base orgánica
trialquilaminas y compuestos heterocíclicos que contienen
nitrógeno. Específicamente, pueden usarse trietilamina,
tributilamina, etildiisopropilamina,
4-metilmorfolina,
dimetilamino-piridina,
4-metilpiperazina o similares en una cantidad en
exceso de manera que sirva también como disolvente de reacción.
Esta reacción puede realizarse usando un disolvente, por ejemplo
dimetilsulfóxido.
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Etapa
(j)
La etapa (j) es una etapa en la que el compuesto
(XII) se obtiene hidrolizando el compuesto (XI).
Esta reacción de hidrolización puede realizarse,
por ejemplo, calentando el compuesto (XI) en presencia de una base
en un disolvente aprótico. Por ejemplo, puede mencionarse el
calentar en presencia de una trialquilamina en un disolvente
alcohólico como condiciones ilustrativas. Específicamente, la
reacción de hidrolización puede efectuarse simplemente calentando
el compuesto (XI) con agitación en presencia de trietilamina en
etanol.
Un compuesto de fórmula (XII) en la que X^{1}
es un átomo de flúor es levofloxacina.
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La presente invención se describirá en lo
sucesivo en este documento más específicamente basándose en los
Ejemplos y Ejemplos Comparativos. Sin embargo, debe tenerse en
cuenta que la presente invención no está limitada de ninguna manera
a los Ejemplos.
La pureza óptica (%ee) de cada compuesto
obtenido se determinó sometiéndolo a HPLC o GC. La configuración
absoluta de cada compuesto obtenido se determinó comparándolo con
una muestra correspondiente de una configuración absoluta conocida
sintetizada de una manera diferente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
(Referencia)
Se suspendió
2-benciloxipropionato de etilo (300 mg) en tampón
fosfato 0,1 M (pH 6,5) (30 ml). Se añadió "Lipase Fine Grade"
(nombre comercial, producto de SEIKAGAKU CORPORATION, Rhizopus
delemer; 6 mg), seguido de agitación a 30ºC durante 24 horas.
Se añadió acetato de etilo a la mezcla de reacción, las proteínas
desnaturalizadas se retiraron por filtración a través de celite. La
mezcla se ajustó a pH 7,0 con una solución acuosa 1 N de hidróxido
sódico, seguido de extracción. La fase orgánica se lavó con una
solución acuosa al 5% de hidrogenocarbonato sódico, y después se
secó sobre sulfato sódico anhidro. El disolvente se retiró por
destilación dando el compuesto del título en forma de un aceite
(102 mg, 98,8%ee).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,30 (3H, t,
J = 6,8 Hz), 1,44 (3H, d, J = 6,8 Hz), 4,05 (1H, c, J = 6,8 Hz),
4,22 (1H, c, J = 6,8 Hz), 4,23 (1H, c, J = 6,8 Hz), 4,45 (1H, d, J =
11,7 Hz), 4,67 (1H, d, J = 11,7 Hz) 7,23-7,42 (5H,
m)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
A 40ºC, se suspendió borohidruro sódico (21,8
mg) en tolueno (0,8 ml), y a la solución resultante, se le añadió
una solución del 2-benciloxipropionato de
(R)-etilo (100 mg, 98,8%ee), que se había obtenido
en el Ejemplo 1, en tolueno (0,8 ml). Se añadió MeOH (0,15 ml) a la
mezcla de reacción, seguido de agitación a la misma temperatura
durante 3 horas. Se añadió agua a la mezcla de reacción, y la mezcla
resultante se extrajo con tolueno. La fase orgánica se lavó con
agua y una solución saturada acuosa de cloruro de amonio, y después
se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de que el
disolvente se retirara por destilación, el residuo obtenido de esta
manera se sometió a cromatografía sobre una columna de gel de sílice
dando el compuesto del título en forma de un aceite (79 mg,
99%ee).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,17 (3H, d,
J = 6,3 Hz), 2,20 (1H, s a), 3,43-3,72 (3H, m), 4,48
(1 H, d, J = 11,7 Hz), 4,64 (1H, d, J=11,7 Hz),
7,22-7,44 (5H, m)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Referencial
1
Se inoculó Microbacterium laevaniformans
(IFO 14471) a un caldo nutriente (100 ml, en un matraz Sakaguchi),
y se cultivó durante una noche a 30ºC con agitación. Las células se
recogieron por centrifugación, y después se liofilizaron para
obtener células liofilizadas de IFO 14471.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Se suspendió
2-benciloxipropionato de etilo (2,0 g, 9,6 mmol) en
tampón fosfato 0,1 M (pH 7,0) (100 ml). Se añadieron las células
liofilizadas (100 mg) de IFO 14471 preparadas como se ha descrito en
el Ejemplo Referencial 1, seguido de agitación a 30ºC. Como el pH
cae progresivamente (como resultado de la formación del ácido
carboxílico) según transcurre la reacción, se añadió hidróxido
sódico 1 N para mantener el pH en el sistema entre 6,8 y 7,2.
Después de reaccionar durante 14 horas, se añadió acetato de etilo
(100 ml). Después de agitar durante un rato, las células se
retiraron por filtración a través de celite. Después se permitió que
se separara en fases, realizándose una extracción adicional con
acetato de etilo (100 ml). La fase de acetato de etilo se recogió,
y después se lavó dos veces con una solución acuosa al 5% de
hidrogenocarbonato sódico para retirar completamente el ácido
carboxílico. La fase orgánica se secó, y el disolvente se retiró por
destilación dando el compuesto del título [0,93 g (46,5%),
99,9%ee]. Los datos del espectro de ^{1}H RMN del compuesto eran
conformes con los del compuesto en el Ejem-
plo 1.
plo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Se suspendió
2-benciloxipropionato de etilo (2,0 g, 9,6 mmol) en
tampón fosfato 0,1 M (pH 7,0) (100 ml). Se añadieron células
liofilizadas (100 mg) de ATCC 14579 preparadas de una manera similar
a la del Ejemplo Referencial 1, seguido de agitación a 30ºC. Como
el pH cae progresivamente (como resultado de la formación del ácido
carboxílico) a medida que transcurre la reacción, se añadió
hidróxido sódico 1 N para mantener el pH en el sistema entre 6,8 y
7,2. Después de reaccionar durante 16 horas, se añadió acetato de
etilo (100 ml). Después de agitar un rato, las células se retiraron
por filtración a través de celite. Después se permitió que se
separara en fases, realizándose una extracción adicional con
acetato de etilo (100 ml). La fase de acetato de etilo se recogió,
y después se lavó dos veces con una solución acuosa al 5% de
hidrogenocarbonato sódico para retirar completamente el ácido
carboxílico. La fase orgánica se secó, y el disolvente se retiró por
destilación dando el compuesto del título [0,88 g (44,0%),
99,9%ee]. Los datos del espectro ^{1}H-RMN del
compuesto eran conformes con los del compuesto en el Ejem-
plo 1.
plo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
La fase acuosa en el momento de la extracción
con acetato de etilo en el Ejemplo 3 se recogió en su totalidad, y
después se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico al 10%. La fase
acuosa se extrajo después dos veces con acetato de etilo (100 ml).
Después de combinar y secar las fases orgánicas, el disolvente se
retiró por destilación para obtener ácido
(S)-benciloxipropiónico [0,83 g (48,0%), 96%ee]. Se
disolvió una alícuota (0,8 g, 4,4 mmol) del ácido
(S)-benciloxipropiónico en etanol (10 ml), seguido
de la adición de ácido sulfúrico concentrado (0,01 ml). La mezcla
preparada de esta manera se calentó después a reflujo. Ocho horas
después, el disolvente se retiró por destilación, y el residuo se
extrajo con acetato de etilo (20 ml). El extracto se lavó con una
solución acuosa al 5% de hidrogenocarbonato sódico (10 ml) y agua
(10 ml), la fase orgánica se secó, y el disolvente se retiró por
destilación para obtener benciloxipropionato de
(S)-etilo. Se disolvió en tolueno (10 ml), y se
añadió etóxido sódico (0,33 g, 1,1 equiv.) con agitación enfriando
con hielo, seguido de agitación a temperatura ambiente durante 14
horas. Se confirmó que la racemización se había completado por
cromatografía de gases usando una columna ópticamente activa.
Posteriormente, la mezcla de reacción se añadió gota a gota en una
solución acuosa al 10% de ácido cítrico (10 ml). Después de lavar la
fase orgánica con agua (10 ml) y después de secarla, el disolvente
se retiró por destilación dando el compuesto del título (0,74 g).
Los datos del espectroH RMN del compuesto eran conformes con los
del compuesto en el Ejemplo 1. Este racemato puede usarse como un
suministro para dicha hidrólisis de éster asimétrico como en los
Ejemplos
1 a 4.
1 a 4.
\newpage
Ejemplo Comparativo
1
A -30ºC, bromuro de bencilo (9,86 g) e hidruro
sódico al 60% (2,11 g) se disolvieron en una solución mixta de
dimetil formamida (DMF) y tetrahidrofurano (THF) (50 ml, proporción
en volumen 3:2). Se añadió (R)-Metil lactato (5,0
g, 99%ee) a la solución. A la misma temperatura, la mezcla
resultante se agitó durante 30 minutos. Posteriormente, la mezcla
se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y además a 50ºC
durante 30 minutos. Se añadieron agua y éter diisopropílico a la
mezcla de reacción, y la fase orgánica se lavó con agua y después
se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Después de que el
disolvente se retirara por destilación, el residuo resultante se
sometió a cromatografía sobre una columna de gel de sílice dando el
compuesto del título en forma de un aceite de color amarillo (8,87
g, 92,1%ee).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,44 (3H, d,
J = 6,8 Hz), 3,75 (3H, s), 4,07 (1H, c, J = 6,9 Hz), 4,45 (1H, d, J
= 11,7 Hz). 4,69 (1H, d, J = 11,7 Hz), 7,22-7,37
(5H, m)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Enfriando con hielo, hidróxido potásico (5,40 g)
y carbonato potásico (3,33 g) se suspendieron en tolueno (180 ml).
A la suspensión resultante, se le añadió una solución de
(R)-2-benciloxi-1-propanol
(4,0 g), que se había obtenido como en el Ejemplo 2, y
2,3,4-trifluoronitrobenceno (4,13 g) en tolueno (40
ml), seguido de agitación a la misma temperatura durante 1 hora. Se
añadió agua a la mezcla de reacción, seguido de extracción con
tolueno. La fase orgánica se lavó con agua y después se secó sobre
sulfato de magnesio anhidro. Después de que el disolvente se
retirara por destilación, el residuo resultante se sometió a
cromatografía sobre una columna de gel de sílice dando el compuesto
del título en forma de un aceite de color amarillo (7,55 g). ^{1}H
RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,29 (3H, d, J = 6,4 Hz),
3,93-4,03 (2H, m), 4,53-4,65 (2H,
m), 6,90-6,99 (1H, m), 7,23-7,35
(5H, m), 7,60-7,66 (1H, m)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Enfriando con hielo, se suspendió
terc-butóxido sódico (63,6 mg) en tolueno (0,5 ml).
A la suspensión resultante, se añadió
(R)-2-benciloxi-1-propanol
(100 mg) que se había obtenido como en el Ejemplo 2. La suspensión
obtenida de esta manera se añadió después, enfriándola con hielo, a
una solución de 2,3,4-trifluoronitrobenceno (103,5
mg) en tolueno (0,5 ml), seguido de agitación durante 1 hora. Se
añadió agua a la mezcla de reacción, seguido de la extracción con
tolueno. La fase orgánica se lavó con agua y después se secó sobre
sulfato de magnesio anhidro. Después de que el disolvente se
retirara por destilación, el residuo resultante se sometió a
cromatografía sobre una columna de gel de sílice dando el compuesto
del título en forma de un aceite de color amarillo (161,2 mg). Los
datos del espectro ^{1}H RMN del compuesto eran conformes con los
del compuesto en el Ejemplo 6.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
A temperatura ambiente,
(R)-3,4-difluoro-2-(2-benciloxipropoxi)nitrobenceno
(1,0 g) que se había obtenido como en el Ejemplo 6 se disolvió en
etanol (10 ml). Se añadió Pd al 7,5%-C (1,0 g), seguido de agitación
durante 6 horas en una atmósfera de hidrógeno. Después de que el
Pd-C se retirara por filtración, el filtrado
obtenido de esta manera se concentró a presión reducida, y el
residuo resultante se sometió a cromatografía sobre una columna de
gel de sílice dando el compuesto del título en forma de un aceite
(600 mg, 99,0%ee). ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta: 1,23 (3H, d,
J = 6,3 Hz), 3,81-4,89 (1H, m),
4,06-4,17 (2H, m), 6,37-6,44 (1H,
m), 6,77-6,87 (1H, m)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
A temperatura ambiente, el
(R)-3,4-difluoro-2-(2-benciloxipropoxi)nitrobenceno
(0,3 g) que se había obtenido como en el Ejemplo 6 se disolvió en
tolueno (3 ml). Se añadió Pd al 10%-C (90 mg), seguido de agitación
a 80ºC durante 4 horas en una atmósfera de hidrógeno. Después de
que el Pd-C se retirara por filtración, el filtrado
obtenido de esta manera se concentró a presión reducida, y el
residuo resultante se sometió a cromatografía sobre una columna de
gel de sílice dando el compuesto del título en forma de un aceite
(181,0 mg, 99,0%ee). Los datos del espectro ^{1}H RMN del
compuesto eran conformes con los del compuesto en el Ejemplo 8.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
10
A 100ºC,
(R)-3,4-difluoro-2-(2
-hidroxipropoxi)-anilina (1,02 g), que se había
obtenido como en el Ejemplo 8, y etoximetilenmalonato de dietilo
(1,14 g) se agitaron durante 1 hora sin disolvente. Mientras se
retiraba el etanol producido a una presión ligeramente reducida, la
mezcla se agitó durante 30 minutos más. La mezcla de reacción se
dejó enfriar, y después se concentró a presión reducida. El residuo
resultante se sometió a cromatografía sobre una columna de gel de
sílice dando el compuesto del título en forma de cristales blancos
(1,83 g, 99,0%ee). Punto de fusión: 52-55ºC
^{1}H RMN (270 MHz, CDCl_{3}) \delta:
1,22-1,46 (m, 9H), 3,55 (d, 1H, J = 4,5 Hz),
3,88-4,43 (m, 7H), 6,75-7,08 (m,
2H), 8,48 (d, 1 H, J = 14,5 Hz)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
11
2,3-Difluoro-6-(2,2-dietoxicarboniletenil)amino-[(R)-2-hidroxipropoxi]benceno
(3,00 g), que se había obtenido como en el Ejemplo 10, se disolvió
en 1,2-dicloroetano (30 ml). Se añadió trietilamina
(0,98 g) con agitación enfriando con hielo, y a la misma
temperatura, se añadió cloruro de metanosulfonilo (1,01 g) también
con agitación. La mezcla obtenida de esta manera se agitó a
temperatura ambiente durante 2 horas, y el material insoluble se
retiró por filtración. El filtrado se diluyó con
1,2-dicloroetano. La solución resultante se lavó con
agua y después se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. Se añadió
gel de sílice (1,5 g) a la fase orgánica secada, y después de
agitar durante 30 minutos, el material insoluble se retiró por
filtración. El disolvente se retiró por destilación a presión
reducida, y el residuo se cris-
talizó en éter diisopropílico. Los cristales se recogieron después por filtración dando el compuesto del título (3,27 g).
talizó en éter diisopropílico. Los cristales se recogieron después por filtración dando el compuesto del título (3,27 g).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta:
1,22-1,47 (6H, m), 1, 58 (3H, d, J = 7 Hz), 1, 50
(3H, d, J = 7Hz), 3,13 (3H, s), 3,98-4,60 (6H, m),
4,95-5,35 (1H, m), 6,79-7,14 (2H, m,
8,41 (1H, d, J = 13,5 Hz)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
12
El
2,3-difluoro-6-(2,2-dietoxicarboniletenil)-amino-[(R)-2-metanosulfoniloxipropoxi]benceno
(3,00 g), que se había obtenido en el Ejemplo 11, se disolvió en
DMF anhidra (15 ml), seguido de la adición de carbonato potásico
(0,92 g). La mezcla resultante se agitó a 80ºC durante 2 horas. El
disolvente se retiró por destilación, el residuo se extrajo con
acetato de etilo, y el extracto se lavó con agua y después se secó
sobre sulfato de magnesio anhidro. El disolvente se retiró por
destilación a presión reducida, y el residuo resultante se sometió
a cromatografía sobre una columna de gel de sílice dando el
compuesto del título (2,14 g).
^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta:
1,22-1,42 (9H, m), 3,90-4,44 (7H,
m), 6,74-6,88 (2H, m), 7,78 (1H, s)
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
13
El
(7,8-difluoro-3-metil-3,4-dihidro-2H-[1,4]benzoxazin-4-il)metilenmalonato
de (S)-dietilo (2 g), que se había obtenido en el
Ejemplo 12, y anhídrido acético (2 ml) se mezclaron, y a 140ºC, se
añadió complejo de trifluoruro de boro al 47%-tetrahidrofurano
(0-8 ml). A la misma temperatura, la mezcla
resultante se calentó con agitación durante 1 hora. Después de
retirar por destilación los productos de bajo punto de ebullición
producidos, la mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura
ambiente. Se añadió acetona (10 ml) a la mezcla de reacción,
seguido de agitación durante 30 minutos a la misma temperatura. Los
cristales precipitados se recogieron y se lavaron con acetona dando
el compuesto del título (1,55 g).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
14
El complejo quelato de ácido
(3S)-9,10-difluoro-3-metil-7-oxo-2,3-dihidro-7H-pirido[1,2,3-de][1,4]benzoxazina-6-carboxílico-difluoruro
de boro (310 mg), que se había obtenido en el Ejemplo 13, se
disolvió en dimetilsulfóxido (6 ml), seguido de la adición de
trietilamina (0,32 ml) y N-metilpiperazina (0,13
ml). La mezcla obtenida de esta manera se agitó a temperatura
ambiente durante 17 horas, y después se evaporó a sequedad a presión
reducida. Después de lavar el residuo con éter dietílico, el
residuo se disolvió en etanol al 95% (20 ml) que contenía
trietilamina (0,5 ml). La solución obtenida de esta manera se
calentó a reflujo durante 8 horas. La mezcla de reacción se dejó
enfriar, y después se evaporó a sequedad a presión reducida. El
residuo se disolvió en ácido clorhídrico diluido (5%). Después de
la adición de cloroformo, se permitió que la mezcla resultante se
separara en fases. La fase acuosa se ajustó a pH 11 con hidróxido
sódico (1 mol/l), y después a pH 7,4 con ácido clorhídrico (1
mol/l). La mezcla preparada de esta manera se extrajo con cloroformo
(50 ml x 3). Los extractos se combinaron y se secaron sobre sulfato
sódico, y el cloroformo se retiró por destilación. El polvo
resultante se recristalizó en etanol-éter dietílico dando el
compuesto del título en forma de agujas finas transparentes (120
mg).
Punto de fusión: 225-227ºC.
Análisis elemental para
C_{18}H_{20}EN_{3}O_{4}\cdot1/2H_{2}O:
| Calculado: | C, 58,37; | H, 5,72; | N, 11,35 | |
| Encontrado: | C, 58,17; | H, 5,58; | N, 11,27 |
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
15
Células ATCC 14579, que se habían obtenido
realizando agitación del cultivo en un matraz Sakaguchi (cantidad
de medio de cultivo: 1200 ml) se suspendieron en tampón fosfato 20
mM (80 ml) (Ph 7,0; que contenía EDTA 1 mM y DTT), y mediante una
prensa francesa, se aplicó una presión de 103,4 MPa (15.000 psi)
para alterar las células.
Las células alteradas se centrifugaron mediante
un separador centrífugo (10.000 G, 30 minutos) para obtener un
extracto celular (85,0 ml) (actividad total: 123 unidades, actividad
especifica: 0,032 unidades/mg).
\vskip1.000000\baselineskip
El extracto celular se fraccionó en las
condiciones de purificación de cromatografía de intercambio de
aniones descritas a continuación. Se midieron fracciones
individuales para actividad hidrolítica contra
2-benciloxipropionato de etilo para obtener
fracciones activas (206 ml) (actividad total: 88 unidades, actividad
especifica: 0,058 unidades/mg, rendimiento de actividad: 72%).
\vskip1.000000\baselineskip
Soporte: "Source Q" (nombre comercial,
producto de Pharmacia Biotech, Inc.) 400 ml
Columna: 50 mm de diámetro por 200 mm de
altura
Fase móvil:
- Solución A: tampón fosfato 20 mM (pH 7,0, que contenía EDTA 1 mM y DTT) 900 ml
- Solución B: solución A + NaCl 1,0 M, 900 ml
Elución en gradiente lineal A\rightarrowB
- Detección: 280 nm; temperatura: 4ºC. Se recogieron fracciones de 15 minutos, cada una seguida de hidrólisis contra 2-benciloxipropionato de etilo.
\vskip1.000000\baselineskip
A las fracciones activas (206 ml) recogidas por
la cromatografía de intercambio de aniones, se le añadió sulfato
amónico (54,4 g, equivalente a 2,0 M) en pequeñas porciones. Después
de agitar durante 30 minutos, el precipitado resultante se retiró
por centrifugación (10.000 G, 30 minutos). El sobrenadante obtenido
de esta manera se fraccionó en las condiciones de purificación
cromatográfica hidrófoba descritas más adelante. Las fracciones
individuales se midieron para actividad hidrolítica frente a
2-benciloxipropionato de etilo, y se evaluaron las
fracciones activas (251-308 min). Aquellas
fracciones activas fraccionadas se desalaron y se concentraron por
ultrafiltracción para obtener una fracción central activa (1,0 ml)
(actividad total: 16,8 unidades, actividad especifica: 3,23
unidades/mg, rendimiento de actividad: 19%).
\vskip1.000000\baselineskip
Soporte: "Resource ETH" (nombre comercial,
producto de Pharmacia Biotech, Inc.) 100 ml
Columna: 45 mm de diámetro por 60 mm de
altura
Fase móvil:
- Solución A: tampón fosfato 20 mM (pH 7,0, que contenía EDTA 1 mM y DTT) 600 ml
- Solución B: solución A + sulfato amónico 2,0 M, 600 ml
Elución en gradiente lineal B\rightarrowA
- Detección: 280 nm; temperatura: 4ºC. Se recogieron fracciones de 7 minutos, seguida cada una de hidrólisis frente a 2- benciloxipropionato de etilo.
\vskip1.000000\baselineskip
La fracción activa (1,0 ml) que se había
recogido mediante la cromatografía hidrófoba, se fraccionó por
cromatografía de intercambio de aniones en "Mono Q". Las
fracciones individuales se midieron para actividad hidrolítica
frente a 2-benciloxipropionato de etilo y se
evaluaron las fracciones activas (23-25 minutos).
Aquellas fracciones activas fraccionadas se desalaron y se
concentraron por ultrafiltración para obtener una fracción central
activa (1,0 ml) (actividad total: 5,9 unidades, actividad
especifica: 4,54 unidades/mg, rendimiento de actividad: 35%). Se
encontró que esta proteína activa tenía un peso molecular de
aproximadamente 38.000 (SDS PAGE) o aproximadamente 40.000
(filtración en gel).
\vskip1.000000\baselineskip
Columna: columna de intercambio de aniones
("Mono Q") 1 ml
Fase móvil:
- Solución A: tampón fosfato 20 mM (pH 7,0)
- Solución B: solución A+NaCl 1,0 M
Elución en gradiente lineal A\rightarrowB
- Caudal: 1,0 ml/min
- Detección: 280 nm
- Temperatura: temperatura ambiente
Se recogieron fracciones de 1 minuto, seguida
cada una de ellas de hidrólisis frente a
2-benciloxipropionato de etilo.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Usando la enzima purificada procedente del
microorganismo obtenida como se ha descrito anteriormente, se
realizó una reacción de hidrolización de éster asimétrico como en
los ejemplos 1, 2, 3 y 4. Se obtuvo eficazmente
(R)-2-benciloxipropionato de etilo
del 99%ee o mayor de pureza óptica.
De acuerdo con el proceso de la presente
invención, puede obtenerse un derivado de propoxianilina (V)
ópticamente activo que tiene una alta pureza óptica con una pocas
etapas, a menor coste. De esta manera, esta invención proporciona
un método industrialmente ventajoso para producir un compuesto de
levofloxacina que tiene una alta calidad de pureza óptica y, de
esta manera, es útil como agente antimicrobiano.
Claims (18)
1. Un proceso para producir un compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula
(I-a):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y R^{2}
representa un grupo bencilo, que
comprende:
tratar un compuesto, que está representado por
la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente
con
- (i)
- una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans o IFO 14471,
- (ii)
- un medio cultivado de dicho microorganismo definido en el punto (i), que contiene una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471,
- (iii)
- células de dicho organismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471 o
- (iv)
- un producto procesado de células de dicho microorganismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471;
y aislar y recoger dicho compuesto ópticamente
activo (I-a)
2. Un proceso de acuerdo con la reivindicación
1, en el que dicha enzima en una lipasa.
3. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1
ó 2, en el que dicha enzima puede obtenerse alterando células de
dicho microorganismo, que tiene capacidad para hidrolizar ésteres
asimétricos, a alta presión y después purificando las células
alteradas de esta manera por cromatografía de anión fuerte,
cromatografía hidrófoba y cromatografía de anión fuerte.
4. Un proceso para producir un compuesto
representado por la siguiente fórmula (V):
en la que cada uno de X^{1} y
X^{2} representa independientemente un átomo de halógeno, que
comprende: tratar un compuesto, que está representado por la
siguiente fórmula
(I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y R^{2}
representa un grupo bencilo,
con
- (i)
- una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans o IFO 14471,
- (ii)
- un medio cultivado de dicho microorganismo definido en el punto (i), que contiene una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471,
- (iii)
- células de dicho organismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471 o
- (iv)
- un producto procesado de células de dicho microorganismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471;
y aislar, recoger y obtener un compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula
(I-a):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
tratar dicho compuesto (I-a) con
un compuesto de borohidruro metálico en presencia de un alcohol
primario en un disolvente no alcohólico para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2} tiene el mismo
significado definido
anteriormente;
tratar dicho compuesto (II) y un compuesto que
se representa mediante la siguiente fórmula (III):
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos anteriormente, y X^{3}
representa independientemente un átomo de halógeno, en presencia de
una base para obtener un compuesto ópticamente activo representado
por la siguiente fórmula
(IV):
en la que R^{2}, X^{1} y
X^{2} tienen los mismos significados definidos anteriormente;
y
realizar la conversión de un grupo nitro en un
grupo amino y retirar R^{2} al mismo tiempo en dicho compuesto
(IV).
\vskip1.000000\baselineskip
5. Un proceso de acuerdo con la reivindicación
4, en el que dicha conversión de dicho grupo nitro en dicho grupo
amino y dicha retirada de R^{2} en dicho compuesto ópticamente
activo, que está representado por la siguiente fórmula (IV):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que cada uno de X^{1} y
X^{2} representa independientemente un átomo de halógeno y R^{2}
representa un grupo bencilo, se realizan al mismo tiempo en
condiciones reductoras para obtener un compuesto representado por
la siguiente fórmula
(V):
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente.
\vskip1.000000\baselineskip
6. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4
ó 5, en el que dicho disolvente no alcohólico es un hidrocarburo
aromático.
7. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 4 a 6, en el que dicho alcohol primario es
metanol.
8. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 4 a 7, en el que dicho compuesto de borohidruro
metálico es borohidruro sódico.
9. Un proceso para producir un compuesto
representado por la siguiente fórmula (XII)
en la que X^{1} representa un
átomo de halógeno, que
comprende:
tratar un compuesto, que está representado por
la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono y R^{2}
representa un grupo bencilo,
con
- (i)
- una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans o IFO 14471,
- (ii)
- un medio cultivado de dicho microorganismo definido en el punto (i), que contiene una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471,
- (iii)
- células de dicho organismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471 o
- (iv)
- un producto procesado de células de dicho microorganismo definido en el punto (i) que contienen una enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo derivarse dicha enzima de un microorganismo seleccionado entre Bacillus cereus ATCC 14579 y Microbacterium laevaniformans IFO 14471;
y aislar, recoger y obtener dicho compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula
(I-a):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{1} y R^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
tratar dicho compuesto (I-a) con
un compuesto de borohidruro metálico en presencia de un alcohol
primario en un disolvente no alcohólico para obtener un compuesto
ópticamente activo representado por la siguiente fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2} tiene el mismo
significado definido
anteriormente;
tratar dicho compuesto (II) y un compuesto, que
se representa mediante la siguiente fórmula (III)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1} tiene el mismo
significado definido anteriormente y cada uno de X^{2} y X^{3}
representa independientemente un átomo de halógeno, con una base
para obtener un compuesto ópticamente activo representada por la
siguiente fórmula
(IV):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{2}, X^{1} y
X^{2} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
realizar la conversión de un grupo nitro en un
grupo amino y la retirada de R^{2} al mismo tiempo en dicho
compuesto (IV) para obtener un compuesto representado por la
siguiente fórmula (V):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar dicho compuesto (V) con un
compuesto, que está representado por la siguiente fórmula (VI):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la que Y representa un grupo
alcoxi que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un átomo de halógeno o
un grupo di(alquil
C_{1}-C_{6})amino y cada uno de R^{3} y
R^{4} representa independientemente un grupo alquilo que tiene de
1 a 6 átomos de carbono, para obtener un compuesto representado por
la siguiente fórmula
(VII):
en la que X^{1}, X^{2}, R^{3}
y R^{4} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar dicho compuesto (VII) con un
compuesto de sulfonilo para obtener un compuesto representado por
la siguiente fórmula (VIII):
en la que R^{5} representa un
grupo alquil sulfonilo sustituido o no sustituido o un grupo
arilsulfonilo sustituido o no sustituido y X^{1}, X^{2},
R^{3} y R^{4} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
someter dicho compuesto (VIII) a una reacción de
cierre del anillo en condiciones básicas para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (IX):
en la que X^{1}, X^{2}, R^{3}
y R^{4} tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
calentar dicho compuesto (IX) en presencia o
ausencia de un compuesto de boro para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula (X):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que R^{6} representa un
grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono o BZ_{2} en la
que Z representa un átomo de halógeno, un grupo alcoxi
C_{1}-C_{6} o un grupo alquil
C_{2}-C_{7} carboniloxi y X^{1} y X^{2}
tienen los mismos significados definidos
anteriormente;
hacer reaccionar dicho compuesto (X) con
4-metilpiperazina para obtener para obtener un
compuesto representado por la siguiente fórmula (XI):
en la que X^{1}y R^{6} tienen
los mismos valores definidos anteriormente;
e
hidrolizar dicho compuesto (XI).
10. Un proceso de acuerdo con la reivindicación
9, en el que dicha conversión de dicho grupo nitro a dicho grupo
amino y dicha retirada de R^{2} en dicho compuesto ópticamente
activo, que está representada por la siguiente fórmula (IV):
en la que cada de X^{1} y X^{2}
representa independientemente un átomo de halógeno y R^{2}
representa un grupo protector de hidroxilo, se realicen al mismo
tiempo en condiciones reductoras para obtener un compuesto
representado por la siguiente fórmula
(V):
en la que X^{1} y X^{2} tienen
los mismos valores definidos
anteriormente.
11. Un proceso de acuerdo con la reivindicación
9 ó 10, en el que dicho disolvente no alcohólico es un hidrocarburo
aromático.
12. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 9 a 11, en el que dicho alcohol primario es
metanol.
13. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 9 a 12, en el que dicho compuesto de
borohidruro metálico es borohidruro sódico.
14. Un proceso de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 9 a 13, en el que X^{1} es un átomo de
flúor.
15. Una enzima que tiene capacidad para
hidrolizar ésteres asimétricos y que puede obtenerse alterando
células de Bacillus cereus ATCC 14579 o Microbacterium
laevaniformans IFO 14471 a alta presión y después purificando
la enzima a partir de las células alteradas de esta manera
sucesivamente por cromatografía de anión fuerte, cromatografía
hidrófoba y cromatografía de anión fuerte.
16. Uso de Bacillus cereus ATCC 14579 o
Microbacterium laevaniformans IFO 14471 para purificar una
enzima que tiene capacidad para hidrolizar ésteres a partir de dicha
cepa.
17. Uso de Bacillus cereus ATCC 14579 o
Microbacterium laevaniformans IFO 14471 para hidrolizar
ésteres asimétricos.
18. Uso de una enzima que tiene capacidad para
hidrolizar ésteres asimétricos, pudiendo obtenerse dicha enzima a
partir de Bacillus cereus ATCC 14579 o Microbacterium
laevaniformans IFO 14471 para hidrolizar ésteres
asimétricos.
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