TWI295576B - Anti-depression pharmaceutical composition containing polygala extract - Google Patents

Description

1295576 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（1 ) 發明領域 本發明係關於一種從遠志幻製備一醫藥組成 物的方法，尤其有關一種抗憂鬱的醫藥組成物。 背景 細葉遠志（户· /MwTb仙奶7/义）及寬葉遠志（AWZuWa U爲傳統中國草藥，一般係以乾燥的全根或根皮（cortex) 入藥’其被記載有安神（鎭靜）、祛痰及消腫的功效。目前 對遠志的硏究顯示遠志的水萃取物可能經由抑制Hep G2細 胞的apoptosis來預防乙醇誘導的細胞毐性（Koo HN. Jeong HJ. Kim KR. Kim JC. Kim KS. Kang BK. Kim HM. Kim JJ. Inhibitory effect of interleukin-lalpha-induced apoptosis by Polygala tenuifolia in Hep G2 cells. Immunopharmacology & 叹〇 ;通過抑制 mtedeukin-1分泌而可能抑制腫瘤壞死因子-α的分泌；具有 對中樞神經系統的抗發炎活性（Kim HM. Lee EH. Na HJ.

Lee SB. Shin TY. Lyu YS. Kim NS. Nomura S. Effect of Poly gala tenuifolia root extract on the tumor necrosis factor-alpha secretion from mouse astrocytes. Journal of Ethnopharmacology· 61(3):201-8，1998 Jul)。盡志饱 euxanthone成分可能是神經藥理上活性化合物之一（Mak NK. Li WK. Zhang M. Wong RN. Tai LS. Yung KK. Leung HW. Effects of euxanthone on neuronal differentiation. Life ％抓）；遠志所含的皂苷有潛能被作 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1295576 A7 B7五、發明說明（2 ) 爲增加特異免疫反應的疫苗輔藥（Estrada A· Katselis GS. Laarveld B. Bari B. Isolation and evaluation of immunological adjuvant activities of saponins from Poly gala senega L. Comparative Immunology, Microbiology & Infections Diseases· 23(1):27·43, 2000 JadM：笮免疫佐貧 (Desbene S. Hanquet B. Shoyama Y. Wagner H. Lacaille-Dubois MA. Biologically active triterpene saponins from callus tissue of Poly gala amarelle. Journal of Natural 从·似ϋ 隊）；遠志的其它藥學活性亦 有被報導，但均無提及抗憂鬱的作用。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明要旨 本發明的一主要目的即在提供一種從遠志幻 製備一醫藥組成物的方法，尤其有關一種抗憂鬱的醫藥組 成物。 本發明以多種溶劑例如水、乙醇、醋酸乙酯及己烷從 遠志的乾燥全根及根皮製備出萃取物，對它們作抗憂鬱活 性評估’而篩選出具有顯著抗憂鬱活性的極性溶媒萃取 物’該極性溶媒爲水或一水與甲醇或乙醇的混合液。本發 明進一步對該極性溶媒萃取物進行分離，再對所獲得的分 離部份作抗憂鬱活性評估，而篩選出其中顯著抗憂鬱活性 的分離部份。同時，本發明亦發現一種從遠志製備出一無 毐且具有顯著藥學活性成分的方法。 本紙張尺度適用T關冢標準（CN〗)A4規格咖χ挪公爱）---—-— 訂 線 1295576 A7 ________ B7 五、發明說明（3 ) 發明之詳細說明 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明揭示一種抗憂鬱醫藥組成物，包含一抗憂鬱治 療有效量作爲有效成分的i)遠志幻的極性溶媒萃取 物，該極性溶媒爲水或一水與甲醇或乙醇的混合液；ii) 一 藉由以一有機溶劑萃取遠志（八7的一極性溶媒萃取 物，及分離該萃取所形成的有機相與水相部份而製備的水 相部份；iii) 一藉由將該極性溶媒萃取物或該水相部份導入 一逆相層析管柱，依序以水及一有機溶劑沖提該逆相層析 管柱所製備的有機溶劑沖提部份；或iv)該有機溶劑沖提部 份中分子質量小於3 0000道耳吞的部份；及與該有效成分共 同使用之醫藥容許載體或稀釋劑。 本發明所指的遠志包括（但不限於）爲細葉遠 志{P. tenuifolia ％葉遠志[P· sibirica L)，芳赛志 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (P. sibirica var. megalopha Franch.) ， 子金[Ρ· japonica Houtt.)，mm 逯志 iP· hybrida DC)，黃l 遠志{P. arillata Buch.-Ham ex D. Don)，華鹿遠志{P. glomerata Lour·、，ΑΊ 遠志（昃奶7/4)，小扁豆（A仏仏/7·卯Wi7)，黃花倒水 ΜΛΡ· fallax Hejnsl)，長毛遠志[P. wattersii Hance)，狹葉香 港袁志{P. hongkongensis var. stenophyllB)，束実寬志{Ρ· senega L.) ° 本發明的遠志的極性溶媒萃取物係使用遠志的根， 莖，葉或它們的組合加予製備。較佳的，遠志的根，及更 佳的，遠志的根皮被使用。 本發明的抗憂鬱醫藥組成物可包含υ至iv)中的任一種 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1295576 五、發明說明（4 ) 作爲該有效成分。 較佳的，i)的該遠志（尸的極性溶媒萃取物的製 備包含將遠志（幻與該極性溶媒的混合物於迴流下 煮沸0.5-10小時，以過濾方式分離該混合物而得到一液體 部份作爲該極性溶媒萃取物，或減壓濃縮該液體部份而獲 得一濃縮液體作爲該極性溶媒萃取物。 較佳的，ii)的該水相部份的製備包含使用醋酸乙酯或 丁醇進行該萃取。 較佳的，iii)的該有機溶劑沖提部份的製備包含將該極 性溶媒萃取物導入該逆相層析管柱。 較佳的，iii)的該有機溶劑沖提部份的製備包含將該水 相部份導入該逆相層析管柱。 較佳的，iii)的該有機溶劑沖提部份的製備包含使用乙 醇，或乙醇與水的混合液進行該有機溶劑的沖提。更佳的， 該沖提所使用的有機溶劑爲一含有10-95體積％乙醇的乙醇 與水的混合液。 較佳的，iv)的該分子質量小於3000。 較佳的，iv)的該分子質量小於3 0000道耳吞的部份的製 備包含將遠志與水的混合物於迴流下煮沸〇.5_ 1〇 小時，以過濾方式分離該混合物而得到一液體部份，將言亥 液體部份或將其減壓濃縮所獲得的一濃縮液體導Λ _ $丰目 層析管柱，進行該沖提及藉由一分子篩分離該有齊彳、冲 提部份。 本發明亦揭示一種醫藥組成物，包含依以下步驟爿斤^ -7- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) ------- ----1---.-------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1295576 Λ7 _____ B7 五、發明說明（5 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 備的有效成分：I)以水萃取遠志幻；II)將該水萃取 物導入一逆相層析管柱，依序以水及一有機溶劑沖提該逆 相層析管柱；及III)以一分子篩分離所獲得的有機溶劑沖提 部份以獲得的分子質量小於30000，較佳的，小於3000道耳 吞的部份。 較佳的，步驟I)包含將遠志與水的混合物於 迴流下煮沸0.5-10小時，以過濾方式分離該混合物而得到 一液體部份作爲該水萃取物，或將該液體部份減壓濃縮所 獲得的一濃縮液體作爲該水萃取物；及步驟II)的有機溶劑 包含乙醇或乙醇與水的一混合液。更佳的，該沖提所使用 的有機溶劑爲一含有1 0-95體積％乙醇的乙醇與水的混合 液。 適用於本發明方法的逆相層析管柱包括（但不限於）被 塡充有多孔性聚合物的樹脂，例如Diaion HP-20 (三菱公 司 Mitsubishi Co.)、Sephadex LH-20 (Pharmicia Co.)或 RP-18 (Nacalai tesque Co.)等逆相層析樹脂 本發明將藉以下實施例被進一步瞭解，該等實施例僅 爲說明之用而非用於限制本發明範圍。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實施例1 : 將乾的細葉遠志（A 沿奶7ΛΛ)的全根以1 g對10 ml水的比例置入於水中並於迴流下煮沸1小時。以350網目 的濾網過濾該混合物而獲得一水萃取液。減壓濃縮該水莘 取液，並冷凍乾燥所獲得濃縮液體，而獲得粉末狀產品。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1295576 A7 _ B7 五、發明說明（6 ) 此產品被標示爲w。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實施例2 : 重覆實施例1的步驟，但以乾的細葉遠志的根皮（cortex) 取代全根。所獲得的粉末狀產品被標示爲C。 實施例3 : 取實施例1中的水萃取液以等體積的丁醇進行分配 (partition)。分離該分配的有機相部份及水相部份。該有機 相部份及水相部份分別被減壓濃縮、冷凍乾燥而獲得粉末 狀產品，並分別被標示爲W-BP及W-BP_H2〇。 實施例4 : 重覆實施例3的步驟，但以醋酸乙酯取代丁醇進行萃 取。所獲得的有機相部份及水相部份的乾粉產品分別被標 示爲W-EP及W-EP-H2〇。 實施例5 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 取實施例2中的水萃取液以等體積的醋酸乙酯進行分 配（partition)。分離出該分配的水相部份，再以同體積的醋 酸乙酯進行分配。再分離出第二次分配的水相部份，再以 同體積的醋酸乙酯進行分配。分離第三次分配的有機相部 份及水相部份，它們分別被減壓濃縮、冷凍乾燥而獲得粉 末狀產品，並且分別被標示爲C-3EP及C-3EP-H2〇。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公1 ) 1295576 A7 — B7 五、發明說明（7 ) 實施例6 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 取實施例2中的水萃取液濃縮成浸膏（eXtract)，並且以1 克乾粉對20-120克樹脂的比例進行逆相色層層析。將浸膏 注入一塡充有Diaion HP-20樹脂的逆相色層層析管柱（樹脂 粒徑500 μ - 800 μ)，依序以樹脂體積3倍量的水及95%乙醇 水溶液進行沖提，收集水沖提部份及95%乙醇沖提部份。 該水沖提部份及95%乙醇沖提部份分別被減壓濃縮、冷凍 乾燥，而獲得被標示爲C-RC95-H2〇及C-RC95的粉末狀產 品。 實施例7 : 重覆實施例6的步驟，但以70%乙醇水溶液取代95%乙 醇水溶液進行沖提。所獲得的70%乙醇沖提部份的粉末狀 產品被標示爲C-RC70。 實施例8 : 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 重覆實施例6的步驟，但以50%乙醇水溶液取代95%乙 醇水溶液進行沖提。所獲得的50%乙醇沖提部份的粉末狀 產品被標示爲C-RC50。 實施例9 : 取實施例7中所製得的70%乙醇沖提部份濃縮20倍後， 以一分子質量分割在3000道耳吞的分子篩（商品代號 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7

五、發明說明（8 ) !295576 S1Y3 ’購自Millipore公司）進行分離，而獲得一滯留液部份 及一通過該分子篩的分子質量小於⑽⑻道耳吞的部份。該 为子質里小;3000道耳吞的部份被減壓濃縮、冷凍乾燥而 獲得粉末狀產品，並且被標示爲C_RC70-3000。 實施例10 : 重覆實施例9的步驟，但以一分子質量分割在道耳 吞的分子篩（商品代號S1Y1，購自Miiiipore公司）取代該分 子質量分割在3000道耳吞的分子篩。所獲得的分子質量小 於1000道耳吞的部份的粉末狀產品被標示爲c_RC70_丨〇〇〇。 實施例11 : 重覆實施例9的步驟，但以一分子質量分割在1〇〇〇〇道 耳吞的分子篩（商品代號SlYi〇，購自Millipore公司）取代該 分子質量分割在3000道耳吞的分子篩。所獲得的分子質量 小於10000道耳吞的部份的粉末狀產品被標示爲 C-RC70-10000 。 實施例12 : 重覆實施例9的步驟，但以一分子質量分割在30000道 耳吞的分子篩（商品代號S1Y30，購自Millipore公司）取代該 分子質量分割在3000道耳吞的分子篩。所獲得的分子質量 小於30000道耳吞的部份的粉末狀產品被標示爲 C-RC70-30000 〇 2凊先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) Φ 訂---------線一 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -11 - 1295576 A7 _ B7 五、發明說明（9 ) 抗憂鬱活性評估 遠志萃取物的抗憂鬱活性以tetrabenazine methane sulfonate (TBZ)所引起的體溫下降作用加以評估（Gylys J. et al·，Annals NY Acad. Sci·，107: 899，1963; Maryanoff B.E. et al.5 J. Med. Chem., 27: 1067, 1984; Katsuyama M. et al., Arch. Intern· Pharmacodyn. Thera. 283: 61，1986)。簡言之， 將體重22±2克的公或母鼷鼠分組，每組3隻，口服投予溶 媒（二次蒸餾水，10 ml/kg)或萃取物後一個小時，以腹腔注 射的方式給予TBZ (75mg/kg)，並於60、90及120分鐘後記錄 鼷鼠體溫下降的程度，萃取物對TBZ引起體溫下降作用的 抑制百分比以下列方式計算： 仰于丨听，'丨.丨[(溶媒組體溫下降度數)-(萃取物組體溫下降度數)]、,議。/ 獅· - (激某組體溫下降函-x 100/0 (請先閱讀背面之注音？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1295576 A7 ____ B7 五、發明說明（1〇 ) 實施例1 -4的抗憂鬱活性評估結果 劑量1 2 抑制百分比（％) 樣品 (g/kg) 於60分- 90-120分鐘 W 4 b) W 2 85-68-84 _ W 1 55-68-82 _. W 0.5 50-54-62 __ W 0.25 18-14-28 __ W-BP 1 61-63-54 W-BP 0.5 82-70-70 _ W-BP-H20 1 100-98-100 __ W-BP-H20 0.5 100-76-65 __ W-BP-H20 0.25 40-24-32 __ W-EP 1 0-0-0 _^ W-EP-H20 0.5 100-83-73 _ W-EP-H20 0.25 28-32-27 _ S先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 13 1 劑量：鼷鼠每公斤被投予的乾燥粉末產品克數 2 部份鼷鼠死亡 1295576 A7 B7 五、發明說明（η ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實施例5-12的抗憂鬱活性評估結果 麵昙a) 樣品 劑量a) (g/kg) 抑制百分比（％) 於60分- 90-120分鐘 C 4 _ _b) C 2 79-86-99 C 1 100-82-81 C 0.5 24-40-23 C-3EP 4 9-21-16 C-3EP 1 0-0-0 C-3EP-H20 4 100-91-93 C-3EP-H20 1 100-84-97 C-3EP-H20 0.5 77-52-54 C-3EP-H20 0.25 26-23-29 C-3EP-H20 0.1 14-13-37 C-RC95-H20 4 46-60-59 C-RC95-H20 2 0-5-21 C-RC95 4 b) C-RC95 1 100-100-100 C-RC95 0.5 100-100-93 C-RC95 0.25 72-71-78 C-RC70 2 . —b) C-RC70 0.5 100-100-96 C-RC50 4 100-100-95 C-RC50 1 53-47-46 C-RC50 0.5 33-16-29 C-RC50 0.25 16-0-0 C-RC70-3000 2 92-92-100 C-RC70-3000 1 100-100-91 C-RC70-3000 0.5 77-64-49 C-RC70-1000 1 100-94-83 C-RC70-1000 0.5 62-74-71 C-RC70-1000 0.25 37-33-47 C-RC70-10000 4 100-100-100 C-RC70-10000 1 76-77-65 C-RC70-10000 0.5 57-67-66 C-RC70-10000 0.25 18-27-28 C-RC70-30000 1 100-100-100 C-RC70-30000 0.5 100-100-81 C-RC70-30000 0.25 62-41-39 •14- --------------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） A7 B7 1295576 五、發明說明（12 ) a) 劑量：鼷鼠每公斤被投予的乾燥粉末產品克數 b) 部份鼷鼠死亡 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 ----1---.-------------訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1295576公告本 (2008年1月修正) 申請專利範圍： 1 · 一種抗憂鬱醫藥組成物，包含一抗憂鬱治療有效量作為 有效成分的i)遠志的極性溶媒萃取物，該極性溶 媒為水或水與甲醇或乙醇的一混合液；H) 一藉由以一有機 溶劑萃取遠志的一極性溶媒萃取物，及分離該 萃取所形成的有機相與水相部份而製備的水相部份；iu) 一藉由將該極性溶媒萃取物或該水相部份導入一逆相層 析官柱，依序以水及一有機溶劑沖提該逆相層析管柱所製 備的有機浴劑沖提部份；或iv)該有機溶劑沖提部份中的分 子貝里小於30000道耳吞的部份；及與該有效成分共同使 =之醫藥容許載體或稀釋劑，其中該遠志⑷為細 葉遠忘（P· tenuifolia 葉遠怎（p sibirica L、。 申明專利範圍第1項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該遠 〜（p〇!ygaIa)為細葉遠志tenui^〇Ua mud y0 3 ·士如申凊專利範圍第i項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該遠 心係指遠志的根，莖，葉或它們的組合。 士士申明專利範圍第3項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該遠 心係指遠志的根。 5.如申請專利 士 第4項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該遠 心係指遠志的根皮。 16 1295576 (2008年1月修正) 6·如申请專利範圍第丨項的抗憂鬱醫藥組成物，其包含〇 该遠志（Po/jga/a)的極性溶媒萃取物。 7.如申请專利範圍第1項的抗憂鬱醫藥組成物，其包含⑴ 该水相部份。 ^如申請專利範圍第丨項的抗憂營醫藥組成物，其包含⑴） 該有機溶劑沖提部份。 9·如申請專利範圍第丨項的抗憂鬱醫藥組成物，其包含iv) 該分子質量小於30000道耳吞的部份。 1 〇·如申請專利範圍第6項的抗憂著醫藥組成物，其中i)該遠 志（户〇炒抑/幻的極性溶媒萃取物的製備包含將遠志 (〜與水的混合物於迴流下煮沸on 〇小時，以過濾 方式分離該混合物而得到一液體部份作為該極性溶媒萃 取物，或減壓濃縮該液體部份而獲得一濃縮液體作為該極 性溶媒萃取物。 1 1·如申請專利範圍第7項的抗憂鬱醫藥組成物，其中ii)該 X相σ卩伤的‘備包含將返志（户〇μ)與水的混合物於迴 流下煮沸0.5-10小時，以過濾方式分離該混合物而得到一 液體部份作為該極性溶媒萃取物，或減壓濃縮該液體部份 而獲彳于一濃縮液體作為該極性溶媒萃取物。 17 1295576 (2008年1月修正) 12·如申請專利範圍第丨丨項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該萃 取所使用的有機溶劑為醋酸乙酯或丁醇。 13·如申請專利範圍第8項的抗憂鬱醫藥組成物，其甲該 有機洛劑沖提部份的製備包含將遠志與水的混 合物於迴流下煮沸〇·5_1〇小時，以過濾方式分離該混合物 而得到液體部份作為該極性溶媒萃取物，或減壓濃縮該 液體邛伤而獲得一濃縮液體作為該極性溶媒萃取物，及將 该極性溶媒萃取物導入該逆相層析管柱。 14·如申請專利範圍第8項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該 有機/合劑沖提部份的製備包含將遠志（户0炒W/α)與水的混 口物於週流下煮彿0·5_ 1〇小時，以過濾方式分離該混合物 而传到一液體部份作為該極性溶媒萃取物，或減壓濃縮該 ’夜體部份而獲得一濃縮液體作為該極性溶媒萃取物，以ii) 中所使用的有機溶劑萃取該極性溶媒萃取物，分離該萃取 所形成的有機相與水相部份，及將該水相部份導入該逆相 層析管柱。 1 5 士 1 ^上主 W專利範圍第1 4項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該萃 取所使用的有機溶劑為醋酸乙酯或丁醇。 申明專利範圍第丨3項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該沖 勺有故 >谷劑為乙醇，或乙醇與水的混合液。 18 1295576 μυυδ午1月修正: 申明專利fe圍第14項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該沖 提所使用的有機溶劑為乙醇，或乙醇與水的混合液。 如申。月專利乾圍第i 5項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該沖 提所使用的有機溶劑為乙醇，或乙醇與水的混合液。 士申口月專利I巳圍第16、17或18項的抗憂鬱醫藥組成物， ’、中孩冲提所使用的有機溶劑為一含有1〇_乃體積％乙醇 的乙醇與水的混合液。 2^·如申請專利範圍第9項的抗憂”藥組成物，其包含^ »亥刀子貝里小於3〇〇〇〇道耳吞的部份中的小於⑼道耳吞 的部份。 21·如申明專利範圍第9項的抗憂鬱醫藥組成物，其中丨力該 分子質量小於30000道耳吞的部份的製備包含將遠志 與水的混合物於迴流下煮沸〇·5_ι〇小時，以過濾 方式分離该混合物而得到一液體部份作為一極性溶媒萃 取物，或減壓濃縮該液體部份而獲得一濃縮液體作為一極 性溶媒萃取物，及將該極性溶媒萃取物導入一逆相層析管 才主。 如申明專利範圍第21項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該沖 提所使用的有機溶劑為乙醇或乙醇與水的一混合液。 19 1295576 (2008年1月修正) 23.如申請專利範圍第22項的抗憂鬱醫藥組成物，其中該沖 提所使用的有機溶劑為一含有10-95體積％乙醇的乙醇與 水的混合液。

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