CN107137434B - 一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用 - Google Patents

一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，所述药物组合物包括曼地亚红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体，其中所述曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为0.1‑99.9％。本发明的药物组合物具有特定的抗柯萨奇病毒的作用，其制备工艺简单，药效显著，为抗柯萨奇病毒感染的临床治疗提供了更多选择，具有广阔的应用前景。

Description

一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中 的应用
技术领域
本发明属于中药学技术领域，涉及一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用。
背景技术
柯萨奇病毒(Coxsackievirus)是一种肠病毒(enterovirus)，是一类常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒，感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。其中柯萨奇病毒B型感染会引起特征性传染性胸肋痛(epide-micpleurodynia)即所谓Bornholm's病，可合并脑膜脑炎、心肌炎、发烧、Guillain-Ba-rré综合征、肝炎、溶血性贫血和肺炎。
曼地亚红豆杉(Taxus madia)原产于美国、加拿大，是一种天然杂交品种。在我国大部分地区可以栽种。生长快，高度年生长实测40～90cm，最高可60～70cm，是国内红豆杉(中国红豆杉、云南红豆杉等)的300～700％生长量。3～4年生生物量积累为600～800/株·年，5年生时产鲜原料1.5kg以上，可用于提炼紫杉醇。
曼地亚红豆杉叶中除含紫杉醇等小分子活性物质外，还发现曼地亚红豆杉叶中含有的活性黄酮成分，目前尚未有叶中黄酮抗柯萨奇病毒的报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种药物组合物及其制备方法和在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，所述药物组合物具有抗柯萨奇病毒的作用，对细胞的毒副作用小，具有广泛的应用前景。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包括曼地亚红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体，其中，所述曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为0.1-99.9％，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.8％、1％、2％、5％、8％、10％、13％、15％、18％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、98％、99％或99.9％。
优选地，所述曼地亚红豆杉叶提取物含有黄酮类成分，不含有紫杉烷类成分。
本发明中，曼地亚红豆杉叶提取物化学成分众多，主要富含黄酮类成分，几乎无紫杉烷类成分，有着传统中药复方配伍使用的效果，作为一种天然药，相比于单一的药物，毒副作用小。首次发现本发明所述曼地亚红豆杉提取物具有抗柯萨奇病毒的作用。
优选地，所述曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为1-90％，优选为20-85％，进一步优选为40-80％。
优选地，所述曼地亚红豆杉叶提取物为醇提取物和/或中药浸膏。
优选地，所述药学上可接受的载体为甘露醇、山梨醇、山梨酸、山梨酸钾、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠、一价碱金属的碳酸盐、一价碱金属的醋酸盐、一价碱金属的磷酸盐、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、植物油、磷脂、聚乙二醇磷脂、聚乙二醇磷脂衍生物、油酸、油酸盐、抗氧化剂、或离子络合剂中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述植物油为大豆油、中链油、橄榄油、茶油、棕榈油、当归油、沙棘油、莪术油、川芎油、薏米仁油、红花油、花椒油或大蒜油中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂或人工合成磷脂中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述聚乙二醇磷脂为聚乙二醇-脑磷脂、聚乙二醇-胆固醇、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯、聚乙二醇-脂肪酸酯、聚乙二醇-脂肪胺或聚乙二醇-脂肪醇中的任意一种或至少两种的混合物。
优选地，所述抗氧化剂为维生素E。
优选地，所述药物组合物的剂型为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂或贴剂中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述曼地亚红豆杉叶提取物的提取方法为醇提、层析、真空提取、超临界流体萃取法、超声提取法、酶法提取、微波提取法、荷电提取法或半仿生提取法中的任意一种或至少两种的组合，优选为醇提与层析组合。
优选地，所述曼地亚红豆杉叶提取物的提取方法包括以下步骤：取曼地亚红豆杉叶进行粗粉碎，加醇煎煮，冷却至室温，减压回收至干；对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以水洗脱去除糖类成分，再以乙醇洗脱；利用聚酰胺柱对乙醇洗脱浓缩物进行层析分离，分别以水、30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇的洗脱梯度进行洗脱。取90％乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
优选地，所述加醇煎煮时，曼地亚红豆杉叶与醇的重量比为1:(5-15)，例如可以是1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14或1:15，优选为1:(9-12)，使用过少的醇对曼地亚红豆杉叶进行提取，不利于有效成分的浸出，而过多的醇也并不能继续显著增加有效成分的浸出，反而可能使得其他成分的浸出量增多，从而影响提取物中各成分的配比关系，进而影响其作用效果。
优选地，所述煎煮的次数为2-5次，例如可以是2次、3次、4次或5次，优选为3次。
优选地，所述每次煎煮的时间为1-2h，例如可以是1h、1.3h、1.5h、1.8h或2h，优选为1h，煎煮时间太短会使得有效成分不能浸出，影响提取物的作用效果，而煎煮时间太长会破坏有效成分，也会影响各成分的配比关系，从而影响提取物中各成分之间的君臣佐使的配合关系，进而影响到抗柯萨奇病毒的效果。
优选地，所述加醇煎煮中醇为甲醇、甲醇水溶液、乙醇或乙醇水溶液中的任意一种或至少两种的混合物，优选甲醇、乙醇、80％甲醇水溶液或70％乙醇水溶液，进一步优选为70％乙醇水溶液；
优选地，所述每个洗脱梯度的洗脱体积为3-7倍柱体积，例如可以是3倍柱体积、3.5倍柱体积、4倍柱体积、4.5倍柱体积、5倍柱体积、5.5倍柱体积、6倍柱体积、6.5倍柱体积或7倍柱体积，优选为5倍柱体积。
优选地，所述真空干燥的温度为20-80℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、25℃、26℃、28℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃或80℃，优选为30-60℃，进一步优选为50℃。
第二方面，本发明提供了如第一方面所述的药物组合物的制备方法，所述制备方法为：将曼地亚红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体进行混合，使得所述曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为0.1-99.9％，得到所述药物组合物。
在本发明中，可以将所述药物组合物经过本领域已知的制剂工艺制备得到相应的剂型。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明利用曼地亚红豆杉叶提取物与药学上可接受的载体配合得到药物组合物，具有特定的抗柯萨奇病毒的作用。
(2)本发明提取的曼地亚红豆杉叶提取物相比于曼地亚红豆杉其他部位的提取物具有特定的抗柯萨奇病毒的作用，经过特定的提取工艺，使得提取物中有效成分以及其他辅助成分具有较佳的配合关系，使得各成分之间很好地发挥君臣佐使的配合关系，从而达到良好的抗柯萨奇病毒的效果。
(3)本发明的药物制备工艺简单，药效显著，为抗柯萨奇病毒感染的临床治疗提供了更多选择，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
在本实施例中，通过以下方法来制备药物组合物：
(1)曼地亚红豆杉提取物的提取
取曼地亚红豆杉叶粗粉500g，每次加10倍量70％乙醇煎煮，每次1h，煎煮3次。煎煮后，冷却至室温，减压回收至干。对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以5倍柱体积水洗脱去除糖类成分，再以5倍柱体积乙醇洗脱。乙醇洗脱浓缩物再以聚酰胺进行柱层析分离，分别以水、30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇进行洗脱，每个梯度的洗脱体积为5倍柱体积。取90％乙醇洗脱液，减压浓缩，50℃真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
(2)将提取得到的曼地亚红豆杉叶提取物与聚乙二醇混合，使得曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为60％，后制作成胶囊剂药物，得到所述药物组合物。
实施例2
在本实施例中，通过以下方法来制备药物组合物：
(1)曼地亚红豆杉提取物的提取
取曼地亚红豆杉叶粗粉500g，每次加15倍量80％甲醇煎煮，每次1h，煎煮3次，煎煮后，冷却至室温，减压回收至干。对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以5倍柱体积水洗脱去除糖类成分，再以5倍柱体积乙醇洗脱。乙醇洗脱浓缩物再以聚酰胺进行柱层析分离，分别以水、30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇进行洗脱，每个梯度的洗脱体积为7倍柱体积。取90％乙醇洗脱液，减压浓缩，50℃真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
(2)将提取得到的曼地亚红豆杉叶提取物与山梨醇混合，使得曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为80％，而后制作成胶囊剂药物，得到所述药物组合物。
实施例3
在本实施例中，通过以下方法来制备药物组合物：
(1)曼地亚红豆杉提取物的提取
取曼地亚红豆杉叶粗粉500g，每次加5倍量70％乙醇煎煮，每次2h，煎煮2次，煎煮后，冷却至室温，减压回收至干。对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以5倍柱体积水洗脱去除糖类成分，再以5倍柱体积乙醇洗脱。乙醇洗脱浓缩物再以聚酰胺进行柱层析分离，分别以水、30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇进行洗脱，每个梯度的洗脱体积为3倍柱体积。取90％乙醇洗脱液，减压浓缩，50℃真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
(2)将提取得到的曼地亚红豆杉叶提取物与甘露醇混合，使得曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为90％，而后制作成胶囊剂药物，得到所述药物组合物。
实施例4
在本实施例中，通过以下方法来制备药物组合物：
(1)曼地亚红豆杉提取物的提取
取曼地亚红豆杉叶粗粉500g，每次加8倍量70％乙醇煎煮，每次1h，煎煮3次，煎煮后，冷却至室温，减压回收至干。对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以5倍柱体积水洗脱去除糖类成分，再以5倍柱体积乙醇洗脱。乙醇洗脱浓缩物再以聚酰胺进行柱层析分离，分别以水、30％乙醇、60％乙醇、90％乙醇进行洗脱，每个梯度的洗脱体积为6倍柱体积。取90％乙醇洗脱液，减压浓缩，50℃真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
(2)将提取得到的曼地亚红豆杉叶提取物与聚乙二醇磷脂混合，使得曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为40％，而后制作成胶囊剂药物，得到所述药物组合物。
实施例5
在本实施例中对本发明的药物组合物的抗柯萨奇病毒活性进行验证，方法如下：
将供试柯萨奇B3病毒的宿主细胞接种于96孔板后培养24h，生长为单层，测试前吸弃培养液。曼地亚红豆杉叶提取物样品用细胞维持液稀释为不同浓度，在各孔分别加入50uL，每个样品重复4孔，随即将50uL病毒悬液(TCID50＝100)分别加入相应的培养孔。每块孔板同时设细胞对照组(加入100μL细胞维持液)、病毒对照组(加入细胞维持液和病毒悬液各50uL)和阳性药物对照组(加入利巴韦林溶液和病毒悬液各50uL)。轻摇混匀后置于CO2培养箱中37℃培养36～72h，每天观察由病毒引起的细胞病变效应(CPE)。当病毒对照组CPE为100％时，记录各孔产生CPE的情况。根据显微镜下各浓度样品处理后受病毒感染的细胞出现CPE的程度，估算曼地亚红豆杉叶提取物对病毒的半数抑制浓度IC50。病毒对照组CPE为100％时记为“++++”，细胞对照组无CPE记为“-”，当细胞CPE为“++”时所对应的样品浓度即为该样品对这种病毒的半数抑制浓度IC50，如果两个相邻稀释度样品处理的细胞CPE分别为“+++”和“+”，则IC50值记为两个相邻浓度范围。
对实施例1制备得到的药物组合物进行如上测试，结果如表1所示，由结果可以看出，实施例1制备得到的药物组合物对柯萨奇病毒的IC50值为50μg/mL，表明曼地亚红豆杉叶提取物具有较强的抗柯萨奇病毒活性。
表1
Figure BDA0001329364850000091
同样对实施例2-4制备得到的药物组合物的抗柯萨奇病毒活性进行了如上验证，得到对柯萨奇病毒的IC50值为50μg/mL。
综上所述，本发明的红豆杉叶提取物作为一种天然药物，具有较强的抗柯萨奇病毒活性，为抗柯萨奇病毒感染的临床治疗提供了更多选择，具有广阔的应用前景。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的药物组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (12)

1.一种药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物包括曼地亚红豆杉叶提取物和药学上可接受的载体，其中所述曼地亚红豆杉叶提取物的重量百分比为40-80%，所述曼地亚红豆杉叶提取物含有黄酮类成分，不含有紫杉烷类成分；
所述曼地亚红豆杉叶提取物的提取方法为醇提和层析的组合，具体包括如下步骤：
取曼地亚红豆杉叶进行粗粉碎，采用80%甲醇水溶液进行煎煮，冷却至室温，减压回收至干；对提取物粗品以大孔树脂柱层析，先以水洗脱去除糖类成分，再以乙醇洗脱；利用聚酰胺柱对乙醇洗脱浓缩物进行层析分离，分别以水、30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇的洗脱梯度进行洗脱，取90%乙醇洗脱液，减压浓缩，真空干燥，即得所述曼地亚红豆杉叶提取物。
2.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述煎煮时，曼地亚红豆杉叶与醇的重量比为1:(5-15)。
3.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述煎煮时，曼地亚红豆杉叶与醇的重量比为1:(9-12)。
4.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述煎煮的次数为2-5次。
5.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述煎煮的次数为3次。
6.根据权利要求4所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述每次煎煮的时间为1-2 h。
7.根据权利要求4所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述每次煎煮的时间为1h。
8.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述每个洗脱梯度的洗脱体积为3-7倍柱体积。
9.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述每个洗脱梯度的洗脱体积为5倍柱体积。
10.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为20-80℃。
11.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为30-60℃。
12.根据权利要求1所述的药物组合物在制备抗柯萨奇病毒药物中的应用，其特征在于，所述真空干燥的温度为50℃。
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